甲型H1N1流感病毒-病毒特征

甲型H1N1流感病毒-病毒特征
甲型H1N1流感病毒-病毒特征

甲型H1N1流感病毒-病毒特征

甲型H1N1流感病毒是A型流感病毒,携带有 H1N1亚型猪流感病毒毒株,包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片断,同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。医学测试显示,目前主流抗病毒药物对这种毒株有效。美国疾控机构的照片显示甲型H1N1流感病毒呈阴性反应。

甲型H1N1流感病毒-感染症状

甲型H1N1流感症状与感冒类似,患者会出现发烧、咳嗽、疲劳、食欲不振等。有报道说,美国2009年疫情中发现病例的主要表现为突然发热、咳嗽、肌肉痛和疲倦,其中一些患者还出现腹泻和呕吐症状;墨西哥发现病例还出现眼睛发红、头痛和流涕等症状。发病人群多为青壮年,而不是季节性流感的易感人群——老人和儿童,这与人禽流感非常相似。

甲型H1N1流感病毒-病毒预防

在预防方面,没必要扎堆去接种人流感疫苗,因为预防季节性流感疫苗对预防猪流感并无效果。正确的做法是养成良好的个人卫生习惯,充足睡眠、勤于锻炼、减少压力、足够营养;勤洗手,尤其是接触过公共物品后要先洗手再触摸自己的眼睛、鼻子和嘴巴;打喷嚏和咳嗽的时候应该用纸巾捂住口鼻;室内保持通风等。 1、减少到公共人群密集场所的机会;

2、保证饮食以及充足睡眠、勤于锻炼、勤洗手、室内保持通风等,养成良好的个人卫生习惯。

3、在烹饪特别是洗涤生猪肉、家禽(特别是水禽时)应特别注意。特别是有皮肤破损的情况。建议尽量减少接触机会;

4、可以考虑戴口罩,降低风媒传播的可能性;

5、定期服用板蓝根(可以考虑有一定规律性),大青叶、薄荷叶、金银花作茶饮。

6、特别注意类似临床表现,引起重视。特别是突发高热、结膜潮红、咳嗽、流脓涕等症状。

甲型H1N1流感病毒-感染治疗

据悉,"达菲"在感染后48小时内服用有一定疗效; 2、据悉,一般对病毒治疗,如:病毒灵,有一定疗效; 3、抗生素应对上呼吸道感染以及并发症; 4、解热镇痛药,如扑热息痛,对症治疗; 5、良好的休息,多喝水; 6、出现症状及时就诊正规医院为要。

新病毒可以抵抗一种便宜和广泛使用的流感药物金刚烷胺(amantadine),但无法抵抗两种较新的抗病毒药物达菲

比禽流感更厉害的甲型H1N1流感

“如果是两种不同亚型流感病毒感染猪体内同一个细胞的话,在病毒复制的时候,病毒的8个基因片断可能发生一些交换,理论上就可以产生一个新病毒,有的新病毒不具有致病性,而有的新病毒致病性就比较强,一旦这种致病性强的新病毒再传染给人,就很可能导致人的发病甚至死亡。”童光志分析,“流感病毒历经多年的流行、重组,现在去分析猪、人流感病毒的8个基因片断就会发现,大部分流感病毒都是基因重组或重排的病毒。这次的甲型H1N1流感也是多元重组的病毒。”

“但是,一般而言,在猪体内发生这些病毒基因片断重组的可能性是最大的,而在人、禽体内发生这种重组的可能性会比较小,这也是人们怀疑猪是传染源的原因”,他说。

比禽流感更厉害的甲型H1N1流感

“甲型H1N1流感病毒毒株的形成经过了20多年的发酵,并且在猪体内进行进化,现在人口多,人口流动频繁,如果一旦发生一个流感事件,就可以在整个人类之间可以相互传播,不分人种”,崔尚金指出,“今次甲型H1N1流感比禽流感病毒危害要大,因为这个病毒是人传人的,而一般的禽流感病毒想传到人是比较困难的”。

崔尚金解释,此次甲型H1N1流感病毒能否引起大流行,是由多个条件决定的,包括:此次流感病毒毒力的强弱;人体内是否具备对病毒的抗体;此外,与气候、自然条件以及环境污染程度、当地医疗条件,都有一定关联。

至于此次新型病毒的毒力问题,“有可能病毒经过人体传播,毒力越传越强,就跟原来的SARS一样,可能引起大爆发;但病毒也有可能越传越弱,慢慢就没有了”,崔尚金说。

4月29日,世卫组织在日内瓦宣布,将全球流感大流行警告级别从4级提高到5级。世卫组织的流感大流行警告共分为6个级别,第5级意味着同一类型流感病毒已经在同一地区至少两个国家人际间传播,并造成持续性疫情。

WHO的连续性动作,依然被部分科学家指责为是有所滞后的保守性操作。

在童光志看来,这次的墨西哥甲型H1N1流感病毒比较可怕,因为它在短时间内,就产生了极高的人际传播速度,即便2003年的SARS也没有像这次的甲型H1N1流感这样,“拥有这样厉害的传染速度”,并且,“猪流感人际传播的危险性比禽流感要大得多”。

童光志指出,从2004年中国内地爆发禽流感以来,“禽—人”间的感染仅仅是非常个别的情形,高致病性禽流感病毒H5N1传染到人是很困难的,而在这次的甲型H1N1流感中,病毒已经可以在人际间有效地传染,具备强大的致病力,也远非普通流感可以比拟。

“病毒很聪明,它总在变,我们不知道它将怎么变异,以前基本上每10年左右都有一次相对大的流感流行,这次也算是一个大流行”,在童光志看来,甲型H1N1流感疫情蔓延的情势也说明,现在全球人口增多,全球一体化加强,国际间人流、物流频繁,流感已经没有国界了,已不是一个简单的疾病问题,“有时候是防不胜防的,一种传染病在短时间内就会蔓延,造成世界性的公共卫生事件,风险也在大大增加”。

4月27日,中国疾病预防控制中心(中国CDC)召开的会议上,对于当前疫情形势的分析是:疫情蔓延迅速,毒株为重配病毒,已成为全球关注的公共卫生紧急事件;人群可能普遍对该病毒缺乏免疫力;由于这次甲型H1N1病毒与人群中流行的H1N1病毒在受体特异性和连接肽一样,该病毒相对H5N1而言,更具有发生人感染和传播的生物基础。

但是,令中国CDC迄今难以讲清楚的是:以前的这种甲型H1N1流感病毒没有造成流行;并且,本次同一病毒在美国和墨西哥引起的病例临床表现不同,原因仍然不清。

WHO无法给予完满解释,还包括:此次甲型H1N1流感疫情中,轻型病例和无症状感染者可能难以被发现,该病在人类中感染的真实情况如何,尚不清楚;其次,猪流感不是世界动物卫生组织(OIE)规定报告的动物疫病,因此全球动物感染情况的分布,还不清楚;目前,根据WHO推荐生产的季节性流感疫苗中并未包括猪流感病毒,而现在的季节性流感疫苗是否能为美国和墨西哥正在发生的猪流感病毒感染提供交叉保护,也不清楚。

甲型H1N1流感治愈的可能性很高

截至北京时间5月5日零时,全球甲型H1N1流感死亡人数依然为26人,其中,墨西哥25人,美国1人,确诊增至1085例,现有21个国家和地区涉及。

“墨西哥死亡者较多,与当地气候、卫生条件都有关,并不一定是病毒到了美国就变得温和了,很可能是美国卫生条件好,治疗及时,所以目前仅有1例死亡病例”,崔尚金说。

目前爆发于墨西哥城的甲型H1N1流感,对青壮年的威胁更大。为什么越是体质好、免疫功能旺盛的人,反而容易被甲型H1N1流感夺命?

“一个是因为这些青壮年没有抗体;另外,通常活动量越大的人,肺活量就越大,免疫反应越强,容易促进病毒和集体的反应过程,增进病毒的繁殖量,而病毒感染肌体呼吸道需要达到一定的量,才能在体内进行繁殖”,崔尚金说。

“青壮年得病往往是因为其免疫力反应较强,使得肺部产生了炎性实变反应,出现呼吸衰竭等情况,从这个角度而言,甲型H1N1流感病毒的致病性与致病机理,跟SARS、禽流感感染人的情况有些类似”,童光志分析。

但是,人类对于甲型H1N1流感并非束手无策。“今次甲型H1N1流感发生后,在48小时内是能够用药物控制的,因为它毕竟还是一种流感病毒,因此尽早用药,是能够将它杀灭的”,崔尚金信心十足。

童光志指出,人类史上的历次流感大流行,死亡人数是在逐渐减少的,这缘于公共卫生条件的改善以及人类对病毒认识的增强,“过去一个传染病流行可能会死很多人,但现在整个卫生、防疫机制都比以前发达,情况只会越来越好。一个病毒,我们对它不了解,它肆虐起来很厉害;但现在我们对它有一定了解,并且全球的技术、人员都在投入防治工作,我想,甲型H1N1流感不会造成大面积的死亡”。

在他看来,面对甲型H1N1流感,公众不必恐慌,“从目前情况看,这次甲型H1N1流感中毕竟是感染者较多、死亡者较少,它治愈的可能性是很高的。所以如果一旦发现有发烧等症状,就及时治疗,还是能治好的。平时我们讲的流感都是上呼吸道感染,出现流鼻涕、咳嗽症状等,但这次甲型H1N1流感病毒较强,病程可能长一些,严重的还会导致下呼吸道感染甚至肺部感染”。

流感病毒在细胞之外是不能繁殖的,强酸、强碱以及消毒剂都能够杀灭它,“像在上海现在20多摄氏度的气温下,这种甲型H1N1流感病毒在空气中不会存活到48小时”,童光志说。

除了谆谆告诫公众“猪流感病毒加热至70摄氏度即被杀死,而猪肉和其他肉类的烹饪温度一般都可以达到这个温度”之外,WHO还公布了两类抗季节性流感病毒药物,用于有效预防与治疗该流感,一类是烷胺类(金刚烷胺和金刚乙胺),一类是流感病毒神经氨酸酶抑制剂(奥司他韦和扎那米韦)。

达菲(Tamiflu),也被病毒学家和医生们认为是有效地应对甲型H1N1流感的药物。

在童光志看来,现在需要重视的是这次墨西哥甲型H1N1流感病毒在人群之间的传播,并且严密监控这种病毒,防止病毒进入中国,并且加强对中国猪群的猪流感监控。

SARS之后,中国得到诸多宝贵教训。“2003年的SARS以后,我国各部门都已经制定好了应急预案,我国对传染病的预报也比较透明;并且,当时SARS是在我们没有任何准备的情况下爆发的,我们不清楚这种冠状病毒。而这次墨西哥甲型H1N1流感我们反应很及时,很快就启动了公共卫生应急机制”,童光志说,这次墨西哥甲型H1N1流感对于中国公共卫生应急机制也是一个挑战,必要的药物储备也是必需的。

如果控制得力,会最大限度地减少病毒传播的空间与范围,但一些防控隐患依然存在。“我们现在采取的措施都是预防性的,而有些情况是不好预防的,比如,流感病毒一般具有1

到3天的潜伏期,有时更长,现在这么多人口,流动频繁,你不可能挨个去查,临床症状即将出现之前也会排毒,这时就在不易觉察的情况下传给别人”,童光志说。

值得欣慰的是,如果该甲型H1N1流感病毒爆发,科学家已经不难检测出该病毒的基因组序列,这对于甲型H1N1流感疫苗研究具有积极意义。

流感病毒变异得非常快,一定时间以后,病毒的变化就使得原来的流感疫苗失效。“就本次甲型H1N1流感而言,究竟是哪个地方发生变异,从而导致病毒的致病性增强?目前还没有研究。但是禽流感疫苗研究对猪流感疫苗研究是有帮助的,因为疫苗研究方法差不多,我们可以利用禽流感疫苗研究的平台”,童光志说。

他介绍,针对H1N1和H3N2的灭活疫苗已在研制中,但尚未申报新兽药证书;所以,在此次流感疫苗尚未研制出来以前,“采取严格有效的监控和隔离措施”,应当是中国目前最为有效的防治甲型H1N1流感疫情的策略。

尚未注射猪流感疫苗的中国猪群

猪容易感染禽类或人类的流感病毒,但是,禽类并不容易感染人类或猪的流感病毒,这也让猪成为研究流感病毒的科学家严密监测的目标。

中国养猪的数量与规模,也是全球之最。猪流感与人流感、禽流感一样,又是一种最常见的反复发作的病毒性传染病,广泛流行于猪群中。并且,猪群所表现的临床症状与病理变化,与当时人群中流行的流感有许多相似之处,因此倍受流行病科学家关注。

崔尚金列举了猪流感的一系列危害:猪流感能直接引起患猪的死亡,并使患猪生产性能下降,肉料比降低,直接影响猪群健康状态和质量,对养猪业危害很大;并且,猪流感病毒具有最大限度感染人的能力,直接影响到畜产品安全,对人类健康有潜在的威胁。

现在,这种忧虑正在被应验。

追溯过往,由H1N1亚型猪流感病毒引发的流感,已有近百年的历史。早在1918年,在美国就有关注这种H1N1亚型病毒流感的首次报道。当时,人群中正流行20世纪最具灾难性的大流感,全球约20亿人染病,当年,大约4000万至5000万人死于“西班牙流感”。20世纪人流感的3次大流行都与猪流感病毒密切相关。

而在1976年1月,美国新泽西州佛迪狄克斯5名新兵因感染猪源H1N1病毒、1人死于肺炎的事件,则是猪流感人畜共患病史上的里程碑;此后,至少有12人因感染猪流感病毒而死亡。

科学家的大量研究已经表明,猪在“禽-猪-人”的种间传播链中,充当禽、人、猪流感病毒重组和复制的“混合器”,扮演着流感病毒“中间宿主”及“多重宿主”的作用。通过对猪群的病原分子流行病学研究,可以监测流感病毒的变异及跨种间传染的发生。

“很显然, H1N1亚型猪流感病毒已在猪群中存在,但这次新型的H1N1病毒在猪群中是否存在尚属未知(加拿大猪群中分离到的新型H1N1病毒证明是从患病人传染的),这说明,我们对猪流感的监控力度还不够。虽然此次疫情目前还没有蔓延到中国国内,但为了避免类似悲剧的发生,我们需要加强对中国猪群的猪流感监控,为人类流感大流行进行预警”,童光志说。

目前,对于猪流感比较重视的发达国家早已开展了对于疫苗的研究,猪流感全病毒灭活疫苗在欧美多个国家已实现商品化供应,“而目前,我国还没有开展猪流感的免疫”,崔尚金提醒。

“猪流感对养猪生产将是一个非常大的潜在危害,但是,即便是猪场的工作人员或兽医,以往也常常不把猪流感当回事,这是因为猪流感往往表现为猪的发热症状,并不严重,也许,过上三五天,猪看上去病又好了”,崔尚金告诉记者,鉴于猪可能成为人流感病毒与禽流感病毒双向传播的中介与“混合器”,更使得猪流感的防控在当下具备深远的公共卫生意义。

在童光志看来,通常而言,猪流感病毒感染的临床表现与季节性流感相似,“猪流感大多发生在天气骤变的晚秋和早春以及寒冷的冬季,危害较轻,如果对猪群普遍注射疫苗,通常被认为,意义不是太大。虽然猪流感可以感染猪群,引发一些轻微的临床症状,但很少引起猪的死亡,这也是中国国内尚未推广猪流感疫苗的一个重要原因”。

其他缘由还包括,此前中国的猪群猪流感发病率并不高,所以迄今为止,中国尚未对猪群实行普遍接种猪流感疫苗。

童光志认为,鉴于猪流感疫苗重要的人类公共卫生学意义,研制并使用猪流感疫苗还是很有必要的,开展人用H1N1亚型猪流感疫苗的基础研究,为阻止禽、猪流感向人群传播提供了主动免疫的技术支撑。“猪流感病毒H1N1、H3N2亚型在我国猪群中普遍存在,而且H9N2 和H5N1禽流感病毒也曾感染过猪,这已是不争的事实,我们应该以科学的态度正视这一事实的存在,不盲目夸大,也不能置之不理”。

不过,中国也并非对猪流感疫苗没有准备。一些科学家对此保持审慎的乐观态度,他们认为,中国已经收集了多种猪流感病毒株,这就为疫苗生产做好了技术储备。

中国国内的H1N1亚型猪流感病毒(SIV)分离株,根据基因片段的起源可以划分为古典、禽源和人源H1N1亚型。这个流感病毒的家族谱系,已经日渐清晰。

就中国而言,早在1991年,郭元吉等首次从我国猪体内分离到了20株古典H1N1亚型猪流感病毒,接下来其他学者也陆续分离到了古典H1N1亚型猪流感病毒,暗含了古典H1N1亚型猪流感病毒在我国猪群中的广泛存在。

1993年,管轶等首次从我国猪体内分离到了11株禽源H1N1亚型猪流感病毒,进化树分析进一步表明,这些毒株形成了一个独立的分支,并非起源于欧洲谱系的H1N1亚型猪流感病毒。

2007年,在浙江省猪群中曾分离到了禽源H1N1亚型猪流感病毒,进化树分析表明,这些毒株起源于欧洲谱系的H1N1亚型猪流感病毒;另外,在我国猪群中也曾分离到了人源的H1N1亚型猪流感病毒。

值得一提的是,关于猪流感的检测与诊断,一直是中国猪流感防控的难题所在。在崔尚金看来,快速、准确的猪流感诊断方法,是防控猪流感疫情的重要前提与手段。

“目前的诊断技术虽然可以鉴定流感病毒的亚型,但费时较长,不能满足大规模猪流感病毒监测的需求,缺乏特异性强、快速、准确、方便的诊断技术和产品”,崔尚金认为,中国政府应该支持尽快开展猪流感快速诊断技术的研究,并在全国开展猪流感的监测工作,加快猪流感疫苗的开发和利用,以减少重大经济损失的发生,并保障中国养猪业的健康发展。

作为“混合器”的猪与它的福利

目前依然存疑的是:如何确定此次甲型H1N1流感病毒的最终来源?元凶究竟是谁?

“我个人认为,海鸟或野禽携带的流感病毒可能就会感染猪,海鸟可能携带的流感病毒具备各种基因,包括H1、H3、H5、H6型等,目前野禽发病的情况很多,猪则扮演了‘中间宿主’的角色。但今次在北美、墨西哥首先发生的甲型H1N1流感也不是一蹴而就的,因为在上世纪90年代,北美就已经发现了猪体内的流感病毒具备禽、人流感病毒的基因片断,到现在,这些流感病毒在猪体内的混合、杂交,历经近20年,出现了一个新型流感病毒,也很正常”,崔尚金解析。

历史上的H1N1流感病毒传播途径或可为借鉴。1918年,美国的猪流感以及1980年欧洲的猪流感,其病毒株H1N1就来源于鸭,这证实了,禽流感病毒是可以感染猪的。

具体而言,1980年,欧洲爆发猪流感,病毒的抗原性和遗传学特性与传统的猪流感病毒H1N1有明显区别,却类似于鸭体内的H1N1亚型病毒,这说明禽流感病毒已经传染给猪。

科学家认为,在猪这种中介载体中,如果禽流感病毒与人流感病毒结合并发生基因变异,产生一种可以在人群中传播的新型流感病毒,危险性将非常大。

1968年香港的人流感病毒株H3N2,可以在猪体内分离到,这进一步说明:猪既能接受禽流感的感染,又能接受人流感的感染,猪是禽流感和人流感病毒共同的易感宿主。

“因为猪可以作为人和禽流感病毒的储存宿主,这些病毒在猪身上并不发病,也不表现临床症状。因此猪作为病毒‘混合器’引起人之间流行的几率,要远远大于猪引起的流行”,崔尚金指出。

而近年来,科学家们对哺乳动物(人、猪等)源的禽流感病毒基因序列分析比较,发现其核苷酸序列同源性很高,禽类流感病毒的血细胞凝集素(H)基因可以发生相互转移,这证实了禽(鸭)源和猪源禽流感病毒可以相互传播。

由于猪担当着禽流感病毒和人流感病毒“混合器”角色,所以,对于猪流感与人流感的发生、流行、变异,一直是流感科学家们关注的焦点所在。但是,由于A型人类流感长期以来只有H1、H2、H3型,所以通常认为猪中也只有上述三个H亚型,而没有对猪源性的禽流感开展系统深入的研究。

在崔尚金看来,预防新的人流感爆发的关键点可能在于猪群的控制,切断流感病毒沿“禽—猪—人”这一链条循环传播的路径,做好人、猪、禽的相互隔离与猪群监测工作。

众多标的指向了中国的猪群,目前,它们生存在怎样的环境之下?

做猪群血清学调查时,崔尚金跑过中国不少大大小小的猪场。一个变化是:在过去,猪要养上四五年才能出栏,但现在,在这个集约化生长盛行的年代,一切基于成本考虑,不少猪场中的猪,在现代化的快速饲养方式下,往往生长期加速,也许仅仅6个月就出栏了。

“你见过一些猪场的小猪吗?”这位病毒科学家询问记者,“它们从生下来那天开始就挤在一起,就这么站着,一天到晚地吃饲料、长肉,就这么大一点的地方,晚上连躺下睡觉

的空当都没有,猪的生存条件恶劣,当然抵抗力就下降了!”他伸出双手,比划着书桌那么长的一段距离,神情恳切。

“如果人类要重视自身安全,就也要重视并提高动物的生物安全水平以及它们的福利,我们要给动物提供干净的水与食物,我们要对它们要更关心一些。我相信的是,养重于防,防终于治,饲养是最重要的过程,比如,人的体质、心情好了,很少生病;猪的体质、生存环境好了,免疫力也增强了,患病的几率也大大减少了”,崔尚金强调,抗击猪流感主要还是在于“养”的水平,“这是比给猪群打疫苗更有效的方法,而加强对动物疾病的监管,最终受益的是人类”。

要真正阻击可能的流感病毒大突变引发的人间惨剧,只能寄希望于科学家更早一步发掘出足以应对这种冷酷杀手的秘笈,并加强防范。我们需要认识到的是,一些来自于自然界、动物界的灾难并非空穴来风,也许正蕴涵了某种警示。除了防患于未然之外,我们人类,是否也应该在此刻,做出一些反省?

9.流感病毒的快速检测方法

流感病毒的快速检测方法 一、RT-PCR快速诊断方法 (一)生物安全要求 (二)病毒核酸提取 (三)RT-PCR (四)PCR 产物纯化 (五)流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 (一)原理 (二)标本处理 (三)间接免疫荧光法 (四)结果判断 三、实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)快速诊断检测 (一)基本原理 (二)实验试剂 (三)实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法,与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法,即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应(PCR)。 流感病毒的基因组是负链RNA,在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA,即为cDNA。逆转录酶(RT)就是用于合成cDNA的多聚酶,因此,扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物,四种脱氧核苷酸(dNTPs),RNA模板,逆转录酶及Taq DNA 多聚酶;首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA,然后再进行聚合酶链反应经25~30个循环,使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求:生物安全二级实验室,防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行,核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。

甲型H1N1流感病毒-病毒特征

甲型H1N1流感病毒-病毒特征 甲型H1N1流感病毒是A型流感病毒,携带有 H1N1亚型猪流感病毒毒株,包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片断,同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。医学测试显示,目前主流抗病毒药物对这种毒株有效。美国疾控机构的照片显示甲型H1N1流感病毒呈阴性反应。 甲型H1N1流感病毒-感染症状 甲型H1N1流感症状与感冒类似,患者会出现发烧、咳嗽、疲劳、食欲不振等。有报道说,美国2009年疫情中发现病例的主要表现为突然发热、咳嗽、肌肉痛和疲倦,其中一些患者还出现腹泻和呕吐症状;墨西哥发现病例还出现眼睛发红、头痛和流涕等症状。发病人群多为青壮年,而不是季节性流感的易感人群——老人和儿童,这与人禽流感非常相似。 甲型H1N1流感病毒-病毒预防 在预防方面,没必要扎堆去接种人流感疫苗,因为预防季节性流感疫苗对预防猪流感并无效果。正确的做法是养成良好的个人卫生习惯,充足睡眠、勤于锻炼、减少压力、足够营养;勤洗手,尤其是接触过公共物品后要先洗手再触摸自己的眼睛、鼻子和嘴巴;打喷嚏和咳嗽的时候应该用纸巾捂住口鼻;室内保持通风等。 1、减少到公共人群密集场所的机会; 2、保证饮食以及充足睡眠、勤于锻炼、勤洗手、室内保持通风等,养成良好的个人卫生习惯。 3、在烹饪特别是洗涤生猪肉、家禽(特别是水禽时)应特别注意。特别是有皮肤破损的情况。建议尽量减少接触机会; 4、可以考虑戴口罩,降低风媒传播的可能性; 5、定期服用板蓝根(可以考虑有一定规律性),大青叶、薄荷叶、金银花作茶饮。 6、特别注意类似临床表现,引起重视。特别是突发高热、结膜潮红、咳嗽、流脓涕等症状。 甲型H1N1流感病毒-感染治疗 据悉,"达菲"在感染后48小时内服用有一定疗效; 2、据悉,一般对病毒治疗,如:病毒灵,有一定疗效; 3、抗生素应对上呼吸道感染以及并发症; 4、解热镇痛药,如扑热息痛,对症治疗; 5、良好的休息,多喝水; 6、出现症状及时就诊正规医院为要。 新病毒可以抵抗一种便宜和广泛使用的流感药物金刚烷胺(amantadine),但无法抵抗两种较新的抗病毒药物达菲 比禽流感更厉害的甲型H1N1流感

流感病毒的实验室检测方法及进展

·190·星堕墅墅盘查!!!!生篁!!鲞釜i塑!里!』曼!!丛!!至!坠:!!塑!!!!:!!:堕!:! 流感病毒的实验室检测方法及进展 李月越陈杭薇李兵 【摘要】流行性感冒(流感)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,其在人群中蔓延快,且具有高发病率及致死率的特点。流感的诊断不仅要根据临床症状和体征,其确诊还有赖于实验室检查。流感病毒的检测技术大致分为4个方面,即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。 【关键词】流感病毒;检测方法 Lab帅torialmethods狮dp哪哪艄0fd咖tiIlgiIIflu眦avin麟Uy访y獬,CHEN协咒g-讹i,UBi恕g.&加仃批,zfo,尺Ps加m£o删M毒d觑九8,&巧i挖gCDm凇挖d&咒8m£Hospi£nZo,PLA,&巧锄g100700,吼i御 (乃rr已s户D行矗i729口“腩or:(HE小,H口ng一议,Pi 【AbstI’act】Influenzavirusescauseanacuterespiratorydiseasethatspreadsepidemicallyinthehumanpopulation.CharacterofInfluenzaishighmorbidityandmortality.DiagnosisofinfluenzadependsonnotonlyclinicialsymptomsandsingsbutalsolaboratoriaIdetections.Viralcultureandisolation,serodiagnosis,immumolo—gicalassayandmolecularbioIogicaldiagnosisarefourmethodsthatcommonlyusededforinfluenzavirusdetection.Laboratorialmethodsandprogressesofdetectinginfluenzavirusesaresummarizedinthef01lowingtext. 【Keywords】Influenzaviruses;Detectionmethod 流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的急 性呼吸道传染病,传染性强,蔓延快,其抗原易变异, 对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人 群有较高的发病率及致死率,危害很大。流感病毒 分为甲、乙、丙三型,其中变异大的、危害重的主要是 甲型和乙型流感病毒,尤以甲型为主,常可引起较大 范围的流行[1]。 流感的诊断不仅要根据临床症状和体征,还需 要实验室检测来证实。病毒诊断技术大致分为4个 方面,即病毒分离、血清学诊断、现代免疫学诊断及 分子生物学诊断瞳]。现分别进行介绍。 l病毒分离培养 病毒分离培养是诊断流感最可靠的方法之一。 因流感病毒能够在鸡胚中良好生长,所以早期多用 鸡胚分离流感病毒,一般用9日龄至11日龄的鸡胚 通过羊膜腔或尿囊腔接种分离病毒,接种后24~96h 收集鸡胚尿囊液,24h内死亡的鸡胚弃掉,用鸡的 红细胞检测尿囊液或细胞培养液的血凝活性来证实 病毒的增殖和存在,如初次分离不到病毒,可盲传2 代再进行检测;但近年来,随着分子生物学技术的发 展,发现通过鸡胚所分离到的流感病毒,其抗原性与 原始标本有所不同,而通过马一达犬1肾细胞(MDCK) 作者单位;100700北京军区总院呼吸内科 通讯作者:陈杭薇.综述. 分离病毒的抗原性与原始标本相似,另外由于 MDcK细胞对“o”相毒株的敏感性比鸡胚高很多, 故MDCK细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一 种宿主系统,现亦得到较为广泛的应用;MDCK分 离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产,因此 病毒分离现同时采用鸡胚及MDCK细胞两套系 统口]。但无论是以上哪种方法对标本中病毒采集、 运输及保存条件要求均较高,病毒样品如能在48h 分离,可在4℃保存,如果样品要存放较长时间必须 低温冻存(一70℃);且要求标本中的病毒含量高, 必须达到鸡胚或MDCK培养法所需要的病毒含量, 分离培养较为复杂、耗时且不稳定,也不能在普通实 验室进行,要确诊需要较长时间,故对流感早期诊断 及临床指导意义不大。 Shih等H3将一种新的实验室培养技术——离 心培养技术(shellvialculture,SVC)应用于流感病 毒的培养,其与传统培养方法没有本质的区别,不同 点为在标本接种后进行长时间的低速离心,使标本 中含病毒的颗粒在外力作用下被压挤吸附于培养细 胞,从而大大缩短了培养时间并提高了敏感性。在 国内倪安平等口]亦采用SVC技术快速诊断流感病 毒,结果显示该技术能在24h内获得流感病毒培养 结果,可以快速确诊流感患者。 郭元吉等[63建立了一种流感快速诊断方法,具 体为:采集标本经成片MDCK细胞扩增,使细胞表万方数据

甲型H1N1流感病毒的综述

文献综述 题目甲型H1N1流感病毒的综述学生姓名王月红 专业班级生物科学 10级一班 学号 201014010124 院系化学与生物学院 完成时间 2013年12月18日

甲型H1N1流感病毒的综述 摘要:2010年全世界爆发了一场影响空前的流感,甲型H1N1流行性性感冒病毒从美国,墨西哥传出,席卷了整个人类社会,回顾以往大规模流感爆发事件。西班牙流感,亚洲流感,禽流感等给全世界人们带来了恐慌,甚至死亡,科学在进步,社会的医疗水平在提高,但流感病毒无时无刻在进行着变异,因此我们需要深入了解这种可怕病毒的分子机构、功能组成、复制方式、致病机制,并对其预防免疫,使人类在此面对流感变异病毒是能够及时治疗。本文讨论的是甲型H1N1流感病毒。主要通过4个方面来讲述:1、什么是甲型H1N1流感病毒以及对流感病毒的研究。2 、甲型H1N1流感病毒致宿主细胞氧化与凋亡。3、宿主细胞蛋白对H1N1病毒复制的影响。4、病毒蛋白对宿主细胞间的关联。 关键词:甲型H1N1流感病毒;氧化损伤;凋亡;致病机制 引言:流行性感冒病毒,简称流感病毒,是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒,在分类学上,流感病毒属于正黏液病毒科,它会造成急性上呼吸道感染,并借由空气迅速的传播,在世界各地常会有周期性的大流行。病毒最早是在1933年由英国人威尔逊·史密斯(Wilson Smith)发现的,他称为H1N1。H代表血凝素;N代表神经氨酸酶。数字代表不同类型。 在2009春爆发的严重危及人类健康。甲型H1N1病毒[1]属于正粘病毒科(0rthomyxoviridae),甲型流感病毒属(Influenza virus A),其遗传物质为RNA。典型病毒颗粒呈球状,直径为80 nm~120 nm,有囊膜。囊膜上有许多放射状排列的突起糖蛋白,分别是血凝素HA [2]、神经氨酸酶NA 和M2蛋白[3]。病毒颗粒内为核衣壳, 呈螺旋状对称, 直径为10nm。甲型H1N1病毒为单股负链RNA病毒,基因组约为13.6 kb,由大小不等的8 个独立片段组成。尽管不同亚型之间可以组成很多种流感病毒血清型,但是可造成人感染猪流感病毒的血清型主要有H1N1、H1N2 [4]和H3N2 5-6]。甲型H1N1流感病毒是A 型流感病毒,携带有H1N1亚型猪流感病毒毒株,包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片段,同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。医学测试显示,目前主流抗病毒药物对这种毒株有效。美国疾控机构的照片显示甲型H1N1流感病毒呈阴性反应。 流感是由流感病毒引起的人畜禽共患的感染性疾病。流感病毒传染性强,传播速度快,在人类历史上曾引发多次大流行,夺去了大量人的生命。流感是人类最大的瘟疫。流感危害养殖业的发展,造成养禽业毁灭性灾害。加强流感病毒基础理论研究,从分子水平上寻求防治流感的有效措施,研制长效、稳定、无毒副反应的新型流感疫苗,建立简便、特异、敏感的诊断技术及有效的抗病毒药物,已成为各国科技工作者孜孜以求的崇高事业。 一、对流感病毒的研究 1、流感病毒的基因结构及其编码的蛋白 流感病毒属正黏病毒科。呈多形性,有球形、杆状和丝状。甲型和乙型流感病毒的基因组由8条独立片段组成。每一条RNA基因都以核糖核蛋白复合体形式存在。每个片段两端都有相对保守的非编码序列,每个片段至少有一个开放式读码框架(ORF)。基因片段5端前的13个核苷酸高度保守,其序列为:3’-GGAACAAAGAUGAppp-5’,3’端也有12个高度保守的核苷酸,序列为:

甲型流感病毒抗原检测试剂使用说明(胶体金)-Alere BinaxNOW

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)使用说明书 【产品名称】 通用名称:甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 英文名称:Alere BinaxNOW? Influenza A&B Card 【包装规格】 22人份/盒。 【预期用途】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)是一种体外免疫层析试验,用于定性检测鼻咽拭子样本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原,可快速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。 试验简介 流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染,它属于传染病范畴,可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感1.甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒流行性要强,造成的病情也更严重,并且大多数严重的流感也都是由它引起的,而乙型流感则相对比较缓和。 针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感做出快速诊断不但可减少病人住院的天数,减少抗菌素的使用,而且可减少病人的住院费用1。 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)提供了一种用鼻咽拭子标本对甲型和乙型流感进行简便快速诊断的方法,使用方便,结果快速,在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。 甲型流感病毒有许多亚型,有些亚型可在鸟类中发现3。1997年首次报道人类甲型禽流感(H5N1,主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型),此后,在人群中出现了H5N1病例,使人们对H5N1关注起来,H5N1的变异使得它更易在人群间传播4,由于备案的禽流感感染病人比例很低,快速试验在该类病人治疗中利用度尚不得知。 【检验原理】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)使用的是薄膜免疫层析技术,它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上,形成三条独特的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书型铰链状的纸板中。 拭子标本需要进行预处理:用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来,将标本加到检测条顶端,闭合检测卡,15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。在有效试验中,蓝色对照线变为粉红色。 【主要组成成分】 提供的材料

甲型流感病毒血凝素抗体说明书

甲型流感病毒血凝素抗体说明书 抗体名:甲型流感病毒血凝素抗体 抗体英文名:H1N1 Hemagglutinin 2 Antibody 应用范围:WB: 1:100-500 E: 1:500-1000 IP: 1:20-100 IHC: 1:100-500 IF: 1:100-500 产品用途:科研实验,用于免疫组化实验,WB实验,相应的标记抗体有HRP标记抗体,FITC标记,BIO等。产品用途:科研实验,用于免疫组化实验,WB实验,相应的标记抗体有HRP标记抗体,FITC标记,BIO等。 免疫原:Peptide derived from Influenza A Virus Hemagglutinin C-terminus. 标记物:无标记(PLlabs可供应生物素、酶、荧光素标记的抗体) 适应物种:Influenza A virus H1N1 靶点:H1N1 Hemagglutinin 2 浓度:1mg/ml 宿主:Rabbit 克隆性:多克隆 保存条件:保存于-20℃ 形态:液态 亚型:Rabbit Polyclonal IgG 规格:0.1ml Background: Influenza A virus is a major public health threat. Novel influenza virus strains caused by genetic drift and viral recombination emerge periodically to which humans have little or no

immunity, resulting in devastating pandemics. Influenza A can exist in a variety of animals; however it is in birds that all subtypes can be found. These subtypes are classified based on the combination of the virus coat glycoproteins hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) subtypes. During 1997, an H5N1 avian influenza virus was determined to be the cause of death in 6 of 18 infected patients in Hong Kong. There was some evidence of human to human spread of this virus, but it is thought that the transmission efficiency was fairly low. HA interacts with cell surface proteins containing oligosaccharides with terminal sialyl residues. 甲型流感病毒血凝素抗体的制备: 目的建立针对甲型流感病毒血凝素的通用抗体. 方法通过对流感病毒数据库中血凝素基因的分析,寻找保守的序列并合成多肽.将多肽耦联在载体匙孔血监蛋白(KLH)上,多次皮下免疫家兔,制备高效价抗体. 结果序列分析发现血凝素第二亚单位(HA2)上氨基端14个氨基酸极端保守,耦联多肽经4次免疫后效价达到1:80000,以免疫印迹方法证明此通用抗体能与流感病毒H1~H13亚型的血凝素蛋白特异反应. 结论通过寻找保守蛋白并耦联在合适载体上,免疫家兔获得了针对甲型流感病毒血凝素抗原的通用抗体. 甲型流感病毒血凝素抗体抗体的多样性:

9.流感病毒的快速检测方法

一、RT-PCR快速诊断方法 (一)生物安全要求 (二)病毒核酸提取 (三)RT-PCR (四)PCR 产物纯化 (五)流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 (一)原理 (二)标本处理 (三)间接免疫荧光法 (四)结果判断 三、实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)快速诊断检测 (一)基本原理 (二)实验试剂 (三)实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法,与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法,即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应(PCR)。 流感病毒的基因组是负链RNA,在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA,即为cDNA。逆转录酶(RT)就是用于合成cDNA的多聚酶,因此,扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物,四种脱氧核苷酸(dNTPs),RNA模板,逆转录酶及Taq DNA 多聚酶;首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA,然后再进行聚合酶链反应经25~30个循环,使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求:生物安全二级实验室,防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行,核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。 (二)病毒核酸提取 1.实验材料及仪器

甲型流感病毒

甲型流感病毒 甲型流感病毒的是一种常见的流感病毒,它主要是容易发生变异同时主要的亚型的被称为一些禽流感,所以在日常生活中的也是一种急性的传染病,而且的感染后的症状的主要是表现一些高烧一些咳嗽,伴有一些肺炎和一些小功能障碍,所以日常生活中的一定要及时的进行治疗和预防。 主要是依靠病毒蛋白在人体中病毒的侵入人体。一定要及时的进行防治和预防,在日常生活中的一定要注意保持个人的卫生养成良好的卫生习惯,要经常的通风减少保持室内的清的空气。 流感病毒分为甲、乙、丙三型,甲型流感病毒最容易发生变异,流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的。流感甲型病毒的表面抗原会经常发生细小变异,这种变异被称为“飘变”(drift),形象地说,“飘变”就是病毒通过细小的变化伪装自己,从而达到躲避人体免疫系统识别的目的。甲型病毒“飘变”的结果是每年引发流感的毒株都有可能不同,人们每年都需要重新接种流感疫苗进行预防。“移变”(shift)指的是流

感甲型病毒发生突变,导致一种新的病毒“亚型”出现。因为人体内几乎没有抵御这种新生病毒的抗体,所以“移变”的结果往往会导致流感的全球性大爆发。 作用原理流感病毒通常依靠病毒蛋白某部分同人体中特定蛋白的结合来侵入人体,因为通过这样的结合,流感病毒能够抑制人体本身对病毒感染的自然防御体系,为病毒有效地在人体内复制铺平道路。 流感病毒分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒根据H和N抗原不同,又分为许多亚型,H可分为15个亚型(H1~H15),N有9个亚型(N1~N9)。其中仅H1N1、H2N2、H3N2主要感染人类,其它许多亚型的自然宿主是多种禽类和动物。其中对禽类危害最大的为H5、H7和H9亚型毒株。一般情况下,禽流感病毒不会感染鸟类和猪以外的动物。但1997年香港首次报道发生18例H5N1人禽流感感染病例,其中6例死亡,引起全球广泛关注。1997年以后,世界上又先后几次发生了禽流感病毒感染人的事件。具有高致病性的H5N1、H7N7、H9N2、等禽流感病毒,一旦发生变异而具有人与人的传播能力,会导致人间禽流感流行,预示着禽流感病毒对人类已具有很大的潜在威胁。

甲型流感病毒抗原检测试剂使用说明-Alere

【产品名称】 通用名称:甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法) 英文名称:Alere BinaxNOW? Influenza A&B Card 【包装规格】 22人份/盒。 【预期用途】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)是一种体外免疫层析试验,用于定性检测鼻咽拭子样本中的甲、乙型流感病毒核蛋白抗原,可快速地对甲、乙型流感病毒感染做出辅助鉴别诊断。 试验简介 流感是发生在呼吸道的具有高度传染性的急性病毒感染,它属于传染病范畴,可通过咳嗽或打喷嚏时排出的带有活病毒的气溶胶而在人与人之间传播。每年的秋季和冬季都可爆发流感1.甲型流感病毒的流行性比乙型流感病毒流行性要强,造成的病情也更严重,并且大多数严重的流感也都是由它引起的,而乙型流感则相对比较缓和。 针对甲、乙型流感的快速诊断试验对获取有效的抗病毒治疗是很有意义的。对流感做出快速诊断不但可减少病人住院的天数,减少抗菌素的使用,而且可减少病人的住院费用1。 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)提供了一种用鼻咽拭子标本对甲型和乙型流感进行简便快速诊断的方法,使用方便,结果快速,在急诊检验中提供的信息可帮助医生选择治疗方案并做出是否需要收住院的决定。 甲型流感病毒有许多亚型,有些亚型可在鸟类中发现3。1997年首次报道人类甲型禽流感(H5N1,主要发生于鸟类的一种流感病毒亚型),此后,在人群中出现了H5N1病例,使人们对H5N1关注起来,H5N1的变异使得它更易在人群间传播4,由于备案的禽流感感染病人比例很低,快速试验在该类病人治疗中利用度尚不得知。 【检验原理】 甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金法)使用的是薄膜免疫层析技术,它利用具有高度敏感性的单克隆抗体来检测鼻咽拭子标本中的甲型和乙型流感病毒的核蛋白抗原这些单克隆抗体连同一种对照抗体分别被固定到膜支持物上,形成三条独特的线。膜支持物跟其他试剂/垫结合在一起构成检测条。检测条位于一个称作检测卡的书型铰链状的纸板中。 拭子标本需要进行预处理:用洗脱液、盐水或转移介质等将标本从拭子中洗脱出来,将标本加到检测条顶端,闭合检测卡,15分钟时根据是否出现紫红色样品线来报告结果。在有效试验中,蓝色对照线变为粉红色。 【主要组成成分】 提供的材料 1.检测卡:22人份。包含对甲型流感病毒核蛋白抗原具有高度特异性的单克隆抗体、结合

流感病毒的快速检测方法样本

流感病毒的快速检测方法一、.................................................................. RT-PCR快速诊断方法 ( 一) 生物安全要求 ( 二) 病毒核酸提取 ( 三) RT-PCR ( 四) PCR 产物纯化 ( 五) 流感病毒RT-PCR检测引物二、........................................................ 免疫荧光方法检测流感病毒 ( 一) 原理 ( 二) 标本处理 ( 三) 间接免疫荧光法 ( 四) 结果判断 三、................. 实时荧光定量PCR( Real-Time PCR) 快速诊断检测 ( 一) 基本原理 ( 二) 实验试剂 ( 三) 实验步骤四、............................................................................. 快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法, 与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常见于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、

Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法, 即使基因组含量很低或死病毒也能够检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应( PCR) 。 流感病毒的基因组是负链RNA, 在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA, 即为cDNA。逆转录酶( RT) 就是用于合成cDNA的多聚酶, 因此, 扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物, 四种脱氧核苷酸( dNTPs) , RNA模板, 逆转录酶及Taq DNA 多聚酶; 首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA, 然后再进行聚合酶链反应经25~30个循环, 使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求: 生物安全二级实验室, 防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时能够在生物安全二级实验室里进行, 核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。(二)病毒核酸提取

流感病毒检验

流感病毒检验 发表时间:2009-08-10T09:20:24.920Z 来源:《中外健康文摘》2009年第20期供稿作者:谭耀武 (黑龙江省宝清县八五三农场疾控中心黑龙江宝清 [导读] 流行性感冒病毒(influenza virus)简称流感病毒 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2009)20-0277-01 流行性感冒病毒(influenza virus)简称流感病毒。流感病毒属正粘病毒科,可分为甲(A)、乙(B)、丙(C)3型。甲、乙、丙不仅反映了病毒被发现的前后顺序,更重要的是反映了对人危害程度的顺序,甲型常以流行的形式出现,可造成世界性的大流行,乙型常以局部流行的形式出现,丙型主要是侵犯婴幼儿。 1 样本采集 1.1采样液 Hank平衡盐、细胞培养液、牛肉浸液(小牛肉浸膏l0g、牛血清白蛋白2g,加蒸馏水至400ml、庆大霉素40mg、多粘菌素 B 0. 8mg,过滤除菌)等均可作采样液。 1.2采集鼻咽腔拭子标本(1)咽拭子:用棉签擦拭双侧扁桃体及咽后壁,将棉签头部浸人2~3ml采样液中。(2)鼻咽抽取物:用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液。先将收集器头部插人鼻腔、接通负压,旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液,并用采样液刷洗收集器3次。(3)含漱液:用8~10以采样液漱口。 1.3收集血清标本血清标本应包括急性期和恢复期双份血清。急性期应在发病7天内采集,恢复期则在发病后2~4周采集。血液标本以2500r/min离心l5min,收集血清,弃血凝块。 1.4标本运送病毒分离标本采集后应立即低温保存,应尽快送至实验室。24~48h内样品可置4℃保存,如48h内未能进行接种,应置-70℃或以下保存。血清标本可在4汇存放一周,在-20℃长期保存。 1.5标本处理咽拭子标本,收集管于混合器充分震荡,用无菌镊子取出棉拭子并在管壁上反复挤压棉拭子后弃拭子,标本加入双抗(青霉素、链霉素)终浓度为l000IU/ml,混匀置4℃2h方可接种或低温保存;含漱液标本,混匀后自然沉淀,取上清液3ml,加双抗;鼻咽抽取物标本,取无菌毛细吸管将洗液反复吹打,把粘液打散,而后按上述方法进行处理;器官组织标本,先用无菌的乳钵磨碎,用生理盐水配成20%悬液,2000r/min离心l0min,取上清液3ml按上述方法进行抗菌处理。 2 检验方法 2.1材料和方法 2.1.1器材孵卵箱(38℃、33~35℃:各一个)、照卵器、卵盘、注射器、消毒剂、镊子、无菌生理盐水、毛细吸管、试管、液体石蜡和封口胶等。 2.1.2方法当今国内外常用狗肾传代细胞(MDCK)。将已长成单层的细胞管弃生长液,用含有l00IU/ml双抗HanK's液洗2遍,用0.2~0.4ml处理过的标本液接种于细胞管,每份标本接种4管,置35T吸附1~2h后弃标本液,加入病毒培养液,其量为生长液的2倍。如标本液清亮和进行病毒传代时,可不必吸附,直接加入。置33~35℃孵育7d。从第3d开始观察细胞病变(CPE),如细胞出现颗粒增多、变圆、脱落达+++~++++时进行收获。如果7d还不出现CPE,可收集病毒培养液做血细胞凝集试验,在做试验前将细胞管冻融1~2次,以提高病毒滴度。阳性者可测定其血凝滴度并鉴定之,阴性者混合4管细胞液盲传2代,仍为阴性则弃去。 2.3病毒鉴定新分离的病毒可用血细胞凝集抑制试验、补体结合试验和中和试验等方法进行鉴定。最常用和简单的方法是血细胞凝集抑制试验,必要时采用补体结合试验。 2.4快速诊断流感病毒的主要感染部位是呼吸道上皮细胞,在病人呼吸道标本的脱落细胞中含有流感病毒抗原,通过直接检查脱落上皮细胞内抗原即可诊断。标本最好采用负压抽吸法收集呼吸道分泌物。 2.5血清学诊断病毒分离是诊断流感最常用的方法之一,如因各方面因素未分离出病毒,血清学亦可作为一种代替手段,但必须收集急性期和恢复期双份血清,如恢复期血清特异性抗体较急性期增高4倍或以上,即可诊断。本章介绍两种常用的方法:血凝抑制试验和中和试验。

常用流感病毒实验室检测方法的比较

常用流感病毒实验室检测方法的比较 摘要目的通过对四种常用流感病毒检测方法的比较,确定适用于常规监测及疫情暴发时的检测方法。方法用四种方法对随机抽取的50份样品进行检测,对结果进行对比分析。结果胶体金法虽简单快速,但漏检率较高(20.00%);RT-PCR法灵敏快捷,准确度高(34.00%);细胞培养法费用适中,检出率较高(14.00%);鸡胚培养法检出率最低(2.00%)。结论胶体金法适合疫情现场检测,RT-PCR法适合实验室内快速检测,组织培养法适合常规监测,鸡胚培养法适合流感疫苗生产。 关键词组织培养;鸡胚培养;病毒分离;RT-PCR;流感病毒 现在实验室对流感病毒的检测手段有很多种,在本科室常用的方法有胶体金法、细胞培养法、鸡胚培养法、RT-PCR法四种。为实际工作中找到最适合的检测方法,更及时准确的提供检测结果,对实验室常用的四种流感病毒检测方法进行比较。现报告如下。 1 资料与方法 1. 1 检测样品2014年1~4月份本院对就诊的流感样病例(发热,体温≥38℃,伴咳嗽或咽痛之一者,未服用过抗病毒药物[1])采集的鼻咽拭子,随机抽取50份。流感病毒采样管由北京友康恒业科技有限公司购买。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 胶体金法美国QUIDEL公司,QuickVue Influenza A+B Test,按照试剂盒说明书操作。 1. 2. 2 细胞培养法MDCK细胞由辽宁省疾病预防控制中心提供。样品前处理:将采样管漩涡震荡10 s,反复挤压拭子头后弃去拭子,加入青霉素、链霉素、制霉菌素,4℃静置2 h。细胞传代及病毒接种按照郭元吉等所著的《流行性感冒病毒及其实验技术》操作[2]。样品接种MDCK细胞培养出的第一代病毒培养液用1%豚鼠血红血球进行微量血凝实验(haemagglutination assay,HA),HA≥1:8的第一代病毒培养液用血凝抑制法(hemagglutination inhibition,HI)进行流感病毒分型鉴定(鉴定试剂盒由国家流感中心提供)。HA<1:8的第一代病毒培养液再次接种MDCK细胞增毒,增毒后HA≥1:8的第二代病毒培养液用HI法进行流感病毒分型鉴定,HA<1:8的第二代病毒培养液用RT-PCR法进行流感病毒分型鉴定。第一代病毒培养液HA为阴性的再次接种MDCK细胞,盲传一代后仍为阴性的报告未检出流感病毒。 1. 2. 3 鸡胚培养法9~11日龄无特定病原菌(specific pathogen free,SPF)鸡胚蛋由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司购买。双腔接种法按照郭元吉等所著的《流行性感冒病毒及其实验技术》操作[2]。样品前处理、增毒、盲传、

甲型流感病毒分亚型的依据是什么

甲型流感病毒分亚型的依据是什么: 流行性感冒,简称流感,是由流行性感冒病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒传染性强,特别是甲型流感病毒易发生变异,可引起世界范围的大流行。临床表现以上呼吸道感染症状轻,而发热与全身中毒症状较重为特点。流感病毒属正粘病毒,含单股RNA。根据其内部及外部抗原结构不同,分为甲乙丙三型。流感病毒颗粒的外膜为脂质双层结构,由两型表面糖蛋白覆盖,分为血凝素和神经氨酸酶,以N和H代表,根据病毒外膜可能结构H可分为15个亚型,N有九个亚型,其中甲型流感病毒的H5N1、H7N7、H9N2为禽甲型流感病毒,具有高致病性。 甲型流感病毒: 甲型流感病毒(Influenza A virus)为常见流感病毒,甲型流感病毒最容易发生变异,甲型流感病毒的亚型则被人们称为“禽流感”,禽流感(Bird Flu)是由禽流感病毒引起的一种急性传染病,病毒基因变异后能够感染人类,感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等,多数伴有严重的肺炎,严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡,病死率很高。此病可通过消化道、呼吸道、皮肤损伤和眼结膜等多种途径传播,人员和车辆往来是传播本病的重要因素。 甲型流感对人类致病性高,曾多次引起世界性大流行。甲型流感病毒中至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有:甲型H1N1、H5N1、H7N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2和H10N8。其中H1、H5、H7亚型为高致病性,H1N1、H5N1、H7N9尤为值

得关注。 截至2010年3月31日,全国31个省份累计报告甲型H1N1流感确诊病例12.7余万例,其中境内感染12.6万例,境外输入1228例;死亡病例800例。

甲型流感病毒感染中的炎症反应

综 述 甲型流感病毒感染中的炎症反应 马骁,刘政 (天津医科大学附属石油医院呼吸科,河北廊坊065000) 关键词:甲型流感病毒;甲型H 1N1流感;呼吸;炎症 中图分类号:R373 文献标识码:A 文章编号:1005 4529(2011)02 0418 03收稿日期:2010 10 15; 修回日期:2010 11 10通讯作者:刘政,E ma il:keaiduo68@https://www.360docs.net/doc/28887452.html, 近来,一种新的甲型H1N 1流感病毒肆虐全球,尤其是其合并重症肺炎和呼吸衰竭,严重威胁人们的生命,探讨其发病机制,对临床治疗将有所提示。本综述将就甲型流感病毒感染在人体内的复制、感染后的炎症反应、先天性免疫、适应性免疫和合并细菌感染等方面做一综述。1 流感概述 流感病毒分为甲(A )、乙(B)和丙(C)3种类型,其中临床上最为关注的是甲型流感病毒。甲型流感病毒对人上呼吸道细胞具有较强的感染性,能导致偶发甲型流感病例、甲型流感暴发性流行或大流行。甲型流感的临床症状表现为发热、咳嗽、头痛、咽痛和肌肉酸痛等,还往往伴有乏力、食欲消退或呕吐,一般有自限性,但也有病情进一步恶化的可能;儿童还可能伴发中耳炎、结膜炎甚至严重的上呼吸道并发症。有心血管系统疾病、慢性支气管炎、阻塞性肺疾病或哮喘等基础性疾病的甲型流感患者更容易继发细菌感染[1]。 疫苗接种和抗病毒治疗是预防控制甲型流感的有效手段[2]。接种包含灭活甲型流感(H 1N 1和H 3N 2)病毒和丙型流感病毒的传统疫苗保护率可以达到50%~90%。减毒活疫苗的保护率还要稍高一些。预防性地使用抗病毒药物如金刚烷胺也具有良好的效果。唾液酸类似物(sialic acid ana log s)、扎那米韦和奥司他韦也是有效地防治甲型流感的药物。当然也应该看到,尽管人类已经具有了一些防控甲型流感的经验,但甲型流感仍然威胁着人类的健康,特别是近来肆虐全球的甲型H1N1流感给人类再次敲响了警钟[3]。因此研究甲型流感的发病机制,分析甲型流感病毒感染引发的炎症反应,探索更加有效的甲型流感预防控制手段仍然具有重要的意义。 2 甲型流感病毒及其复制 流感病毒属正黏液病毒科,由3层构成:内层为病毒核衣壳,含核蛋白(NP )、P 蛋白和RN A;中层为病毒囊膜,由一层类脂体和一层膜蛋白(M P)构成;外层为两种不同糖蛋白构成的辐射状突起,即血凝素(hemag g lutinin,H )和神经氨酸酶(neur aminidase,N )。根据N P 抗原性,将流感病毒分为甲、乙、丙型。按H 和N 抗原不同,同型病毒又分若干亚型,比如甲型流感病毒的H 可分为15个亚型(H1~H 15),N 有9个亚型(N 1~N 9),其中仅H 1N 1、H 2N2和H 3N2主要感染人类,其他许多亚型的自然宿主是一些禽类和其他动物。 流感病毒在上呼吸道黏膜上皮细胞中最容易复制。病毒侵入体内后依靠血凝素吸附于宿主细胞表面,经过吞饮进入胞浆;进入胞浆之后病毒包膜与细胞膜融合释放出双链RN A;双链RN A 在胞浆、内质网或高尔基体编码组成病毒的多种蛋白;在细胞核内,病毒的遗传物质不断复制并与核蛋白、RN A 多聚酶等组建病毒核心;最终病毒核心与其他蛋白结合,经过出芽释放到细胞之外形成新的病毒。甲型流感病毒在上皮细胞中的复制会破坏宿主细胞中的pre RN A ,干扰蛋白翻译,导致细胞死亡或凋亡。当然,细胞也会产生保护性反应来限制病毒的破坏作用。细胞中不同的转录因子系统会被激活,多种趋化因子(chemokine)和细胞因子(cy to kine)释放,炎症细胞大量聚集,抗病毒系统被激活。同时,抗原呈递细胞开始发挥作用,凋亡的信号通路被活化。 研究发现2009年流行的甲型H 1N1流感病毒与季节性甲型H 1N 1流感病毒、1918年流行的甲型H1N 1流感病毒有较大差别,它包含有禽流感、猪流感和人流感3种流感病毒的基因片断,并且非常容易感染树突状细胞和巨噬细胞并高效地复制,使这些细胞在24h 内凋亡或坏死[4,5]。3 甲型流感病毒感染后的细胞反应 3.1 产生趋化因子 趋化因子是一类结构和功能相似的分泌性小分子细胞因子,分子量多在8~12kd 。它通过与特异性受体结合改变嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等多种细胞的形态和运动方式,促使它们向炎症部位聚集。趋化因子与受体的作用具有多样性,具有广泛的生物活性。 甲型流感病毒感染的上皮细胞会产生R AN T ES (regu lated upon activat ion norma l T cell ex pr essed and secreted)、M CP 1(mo no cyte chemotactic pro tein 1)和I L 8(inter leukin 8),而单核巨噬细胞则会产生M IP 1 (macr ophag e inflam mato ry pr otein 1 )、M IP 1 、RA NT ES 、M CP 1、M CP 3 和IP 10(interfero n inducible protein 10),但很少产生IL 8[6,7]。一些甲型流感病毒感染者的鼻咽部分泌物中也会检测到M IP 1 / 、M CP 1和IL 8。这些趋化因子的作用主要是促使血液中的单核细胞向炎症部位的浸润和聚集。感染呼吸

流感病毒的快速检测方法样本

流感病毒的快速检测方法—......................................................................... R T-PCR丿快速诊断方法 (-)生物安全要求 (-)病毒核酸提取 (三)RT-PCR (四)PCR产物纯化 (五)流感病毒RT-PCR检测引物 二 ............................. 免疫荧光方法检测流感病毒 (-)原理 (-)标本处理 (三)间接免疫荧光法 (四)结果判断 三 ......... 实时荧光定量PCR( Real-Time PCR)快速诊断检测 (-)基本原理 (二)实验试剂 (三)实验步骤 四 ....................................... 快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法,与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常见于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快

速诊断包括直接和间接免疫荧光法.ELISA、RT-PCR. Real-Time PCR 快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR. Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法,即使基因组含量很低或死病毒也能够检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应(PCR) o 流感病毒的基因组杲负链RNA,在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA互补的DNA,即为cDNA o逆转录酶(RT)就是用于合成cDNA的多聚酶,因此,扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR O RT-PCR需要一对型别特异引物,四种脱氧核昔酸(dNTPs), RNA 模板,逆转录酶及Taq DNA多聚酶;首先由逆转录酶将病毒的RNA 逆转录合成cDNA,然后再进行聚合酶链反应经25一30个循环,使DNA产物达到倍增的效果。 (一)生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求:生物安全二级实验室,防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时能够在生物安全二级实验室里进行,核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。

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