长效多肽药物的研究

长效多肽药物研究进展

王秀贞

1,2

　吴　军

　孟宪军

(1军事医学科学院生物工程研究所　北京　100071 2沈阳农业大学食品科学院　沈阳　110161)

摘要　重组蛋白药物在体内存留时间的长短,极大地影响到药物的使用剂量和治疗效果。防止

多肽在体内迅速降解、延长半衰期成为蛋白质工程药物改造的重要课题之一。经过许多学者多年来的不懈研究,不少长效多肽药物已经上市,还有一些正在进行临床研究。综述了几种多肽药物常用的长效改造方法如化学修饰、基因融合、点突变以及药物制剂释放系统的改造。关键词　多肽药物　半衰期收稿日期:2003203221　修回日期:20032082223通讯作者,电子信箱:wqmxjr @s https://www.360docs.net/doc/2913364596.html,

生物技术的发展极大地促进了多肽、蛋白药物的研制开发,目前已有40种以上重要的治疗药物上市,720多种生物技术药物正进行Ⅰ～Ⅲ期临床试验或接受FDA 审评,其中200种以上的药物进入最后的批准阶段(Ⅲ期临床与FDA 评估)。多肽因子、蛋白药物主要通过降解、排泄、以及受体介导的内吞等作用在体内被清除。其中分子量小于20kDa 的多肽因子在代谢过程中易由肾小球滤过;通过肾小管时多肽因子又被其中的蛋白酶部分降解并从尿中排出,因而半衰期短。为维持一定的疗效需要大剂量反复用药,长期的频繁注射不仅增加了病人的痛苦而且易引发一系列副反应。近几年各国学者主要从化学修饰、基因融合、点突变以及制剂改造等方面着手进行长效多肽药物的研究。

1　化学修饰

化学修饰是延长蛋白药物半衰期的一个有效途径,其中应用最为广泛的修饰剂是单甲氧基聚乙烯二醇(methoxypoly ethylene glycol ,mPEG ),其次是多糖类如葡聚糖、聚蔗糖、淀粉等;同源蛋白质、人工合成多肽类如白蛋白、聚丙氨酸等;长链脂肪酸类以及聚烯属烃基化合物、聚酸酐等[1]

。PEG 是惰性、两亲、不带电荷的柔性聚合物,分子量随聚合程度而变化(1～50kDa ),有线性和支链两种构型,其中线性单甲氧基聚乙烯醇(mPEG )已经FDA 批准作为许多药物的安全载体。mPEG 通过共价键与蛋

白质连接,对蛋白表面氨基进行修饰以有效地改变多肽、蛋白药物在体内的分布和药物学特性。目前mPEG 修饰已应用于40多种不同蛋白的修饰如猪血清白蛋白(BS A )、粒细胞集落刺激因子(G 2CSF )、白介素22(I L 22)等。PEG 修饰后血浆半衰期一般可延长几倍至几十倍甚至是上百倍(表1),但大部分蛋白的免疫原性也有所降低,而蛋白的生物活性也有不同程度降低。这可能是由于PEG 大分子在蛋白分子周围形成一层外壳阻碍了免疫细胞与蛋白的接触保护了蛋白,掩盖了蛋白酶识别位点避免蛋白酶降解的发生,但同时也使蛋白的活性位点受到影响。中国药科大学田泓等[2]

用聚乙二醇修饰干扰素α2的研究表明活性损失与修饰率有关,修饰率保持在30%以内时生物活性保持较好M otoo

Y amasaki 等[3]

在PEG 修饰重组人粒细胞集落刺激因子(rhG 2CSF )中发现修饰位点的多少(即1分子rhG 2CSF 与几分子PEG 结合)对半衰期的延长方面并无多大影响,但修饰位点少活性损失就相对少一些;为保持蛋白的生物活性,采取位点特异性修饰即将蛋白功能结构域中易与PEG 结合的氨基酸残基换成功能相似不干扰蛋白与PEG 结合的氨基酸

残基如赖氨酸替换成精氨酸[4]

。PEG 修饰应用十分广泛,它对酶、多肽、受体、抗体片断等均能实现偶联以延长半衰期,抗体药物是继疫苗之后的第二大生物技术药物产业,但是异体抗体容易产生免疫识别而被清除,经PEG 修饰后就可得到明显改善[5]

,从而为抗体更广泛地应用于疾病的治疗提供了基础。随着研究的不断深入,不少PEG 修饰蛋白药物已经上市或者进入临床(表2)。

第23卷第10期

中　国　生　物　工　程　杂　志

CHI NA BI OTECH NO LOGY

2003年10月

表1　蛋白药物经PEG修饰后半衰期的变化

　蛋白药物

半衰期

(PEG修饰前)

半衰期

(PEG修饰后)

超氧化物歧化酶5m in412h

尿激酶原5128m in6918h

粒细胞集落刺激因子115h12h

精氨酸酶110h12h

干扰素2a3～8h65h

白介素26211m in206m in

白介素2244m in256m in

链激酶4m in20m in

多糖和白蛋白作为化学修饰剂也有成功范例,用于治疗血栓的葡聚糖—链激酶已在俄罗斯面市;白蛋白已作为多种蛋白药物的载体[6],白蛋白2S OD 半衰期由5min提高到6h;白蛋白2G H半衰期由5min提高2～3h,Aimme G uider Paige等将rhG2CSF 通过异双功能试剂聚乙二醇与白蛋白共价偶联,使G2CSF的体内清除速度降低约6倍。也有将蛋白药物与抗体偶联来延长药物半衰期的报道[7]。但是化学修饰是完全随机的,带来的产物不均一性及药物活性的降低似乎是不可避免的,为此有人提出采用酶法进行位点特异性修饰。对于修饰剂的活化方法、修饰位点、修饰率、修饰反应时间等都需要深入研究。

表2　部分PEG修饰药物研究进展状况

蛋白药物研究进展所属公司商标Π商品名粒细胞集落刺激因子上市Amgen S DΠ01

α干扰素2b上市Schering Plough PEG2Intron α干扰素2a上市H offman2La R oche Pegasys 超氧化物歧化酶临床Pharmacia

尿酸酶临床Pharmacia

蜂毒临床Pharmacia

人生长激素拮抗剂临床Pharmacia

白介素22Ⅲ期临床Pharmacia

重组链激酶Ⅱ期临床Diosynth RTP Inc

天冬酰胺酶美国和俄罗斯上市Enz on ONCASPAR 腺苷脱胺酶上市Enz on ADAGE N

2　基因融合

通过基因融合技术增加多肽和蛋白药物分子量或改变与受体的亲和性等原理延长药物半衰期。人血清白蛋白(HS A)是现有天然载体蛋白之一,并且是血液中含量最高的单一蛋白(达40gΠL),是人体血浆的主要成分,在体内有维持血液渗透压,运输营养和其它重要生物物质的作用,具有无免疫原性,人体相容性好,分子量大(约为66kDa),半衰期长(达两周)等稳定剂和多肽运载蛋白的必需性质,它已成功地在哺乳动物细胞和酵母中实现高效表达。日本G reen Cross公司酵母表达的HS A已完成Ⅲ期临床实验和规模化生产的准备,临床实验证明酵母表达的HS A与天然的HS A在效果和安全性方面完全一致[8]。1990年英国delta公司首先将白蛋白用于基因融合提高多肽、蛋白药物的半衰期, 1997年申请了HS A与人生长激素(HG S)的融合蛋白的专利。美国Y eh等将C D4与HS A融合表达, HS A2C D4融合蛋白在小鼠体,内半衰期较C D4延长140倍,使其半衰期与HS A相似[9]。2001年美国HG S公司研制的HS A与α2干扰素、人生长激素、I L2 2的融合蛋白分别进入临床试验,其中人生长激素临床前数据表明其体内清除速率较融合前降低了50倍[10]。用于治疗血小板凝集的73个氨基酸的毒液肽Barbourin与白蛋白融合后清除率较Barbourin明显降低且活性保持较好[11],水蛭素融合白蛋白后不仅延长了药效,且增强了其生物学活性[12]。

利用抗体Fc段所特有的生物学功能与某些多肽或蛋白融合可增加该蛋白的血浆半衰期,一般采用引入重链稳定区(Cγ2或Cγ4)构建融合蛋白,例如I L210是一种抗炎症因子,制备重组I L210ΠIgG2Fc融合蛋白能明显延长I L210的半衰期[13]。Cham ow等[14]制备了C D4ΠIgG,包括C D4的V1,V2结构域,人Ig重链铰链区及Fc段,已进入Ⅰ期临床试验。酵母表达的抗体单链Fv段(scFv)与抗体Fc (人IgG1片断)融合蛋白以二聚体形式在培养上清中,scFv段分子量由原来的25kDa增至106kDa,小

42中　国　生　物　工　程　杂　志第23卷

鼠体内试验表明血浆半衰期由315h延长至93h[15]。据报道scFv片断具有抗蛋白酶降解的作用,与L2天冬酰胺酶融合后L2天冬酰胺酶半衰期由2h延长至9h[16]。I L22,G M2CSF,T NF,C D4, T NFR等与抗体片断融合后半衰期都有不同程度的增加,其中T NFR与IgG1(Cγ1)融合蛋白已经美国和欧洲批准上市。

除了利用蛋白载体基因融合外有些细胞因子之间融合也可以实现药效的延长,促血小板生成素(T po)富糖基化的C端在体内可能有稳定分子、延长半衰期以提高分子效率的作用,汪治清等[17]构建了红细胞生成素(E po)2T po融合蛋白,初步试验结果显示E po半衰期由8h增至12h。中国专利01104265用基因工程方法生产增强其生物活性的红细胞生长因子二联体Π三联体融合蛋白,不仅延长了蛋白体内半衰期而且增强了生物功效,减少用药次数,有望提高红细胞刺激因子的临床实用价值。

融合蛋白基因稳定性高,可调控表达且制备简单,产物均一,对蛋白、多肽药物活性影响小等,是目前研究长效多肽、蛋白药物的良好途径。

3　点突变技术

利用寡核苷酸引物、PCR介导的定点突变及盒式突变等方法使蛋白药物中影响活性或稳定性的氨基酸发生突变可以有效提高蛋白稳定性,增加药物半衰期。例如白介素22是一条133个氨基酸组成的多肽链,其中呈游离状态的Cys2125易形成错误的二硫键配对或形成分子之间的二聚体影响活性和稳定性,将Cys2125用Ser或Ala取代后生物活性比正常高1倍,体内半衰期由数分钟提高到112h[18]。重组组织型纤溶酶源激活剂(rtPA)能高效特异地溶解血栓,目前两种新型tPA(K22tPA、T NK2tPA)已被欧洲和美国批准上市。K22tPA保留了tPA123及176～527位氨基酸的肽段,缺失K1区、E区和F区使之成为单链多肽,无糖基侧链,半衰期延长4～5倍;T NK2tPA突变体是将tPA103位Thr变成Asn;117位Asn变成G ln;Lys2962His2972 Arg2982Arg299替换成4个Ala,该突变体血清清除速率降低4倍左右,已获得美国FDA批准进入市场。自然界中亦存在天然突变体,使其具有更高的生物学活性和更长的血浆半衰期,如载脂蛋白AI (apoAI)的米兰突变体(AI M),即apoAI的Arg173突变为Cys173,两个AI M单体通过Cys173之间的二硫键形成同源二聚体,血浆半衰期得到进一步延长。

4　长效制剂

对于半衰期短的多肽、蛋白药物也可以采取改变剂型或包埋的形式延缓其在体内的释放来延长药物作用时间。许多学者在这方面进行了深入的研究和开发,并取得了一定的成果。

411　埋植剂和缓释注射剂

国外已有不少将胰岛素、肝素、神经生长因子等生物药物作为模型药物在动物体内外研究的报道。将药物灌入埋植剂空腔内,通过手术植入人体皮下,药物通过开口处缓慢释放,药物释完后再经手术取出,对于需长期用药的患者来说无疑具有特别重要的意义。但是这种非生物降解骨架材料必须经手术途径植入和取出,对局部组织有刺激与不适感。因此国内外学者大力研究可生物降解聚合物骨架材料和可注射型缓释剂。可生物降解聚合物包括天然聚合物如明胶、葡聚糖、壳聚糖等和合成聚合物如聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸2羟乙酸(P LG A)、聚乙内酯等。聚合物在体内降解为乳酸、羟乙酸,羟乙酸进一步降解为水和二氧化碳,除具有良好的生物相容性、无免疫原性、安全性高外,合成聚合物还可以通过改变两单体比例及聚合条件调节聚合物在体内的降解速度,从而达到延长药效的目的。Z enica公司研制成功商品名为Z oladex的可注射埋植剂,是将多肽药物戈舍瑞林(g oserelin)与P LG A在熔融状态混匀后经一多孔装置挤出,挤出物直径1mm,经切割成一定长度的条状物,单剂量316mg,灭菌后直接密封于一次性注射器待用。该制剂可直接注射于皮下或肌肉,基质材料在体内可逐渐降解。聚原酸酯(POE)在上世纪60年代初次合成,因其性能良好得到了迅速发展,已经过FDA审批阶段,半固态聚原酸酯作为药物载体的突出优点是固体药物和聚合物可直接通过机械方法混合均匀,不用加热亦无需溶剂协助,减少了因加入其他附加剂可能引起的副作用,保护了药物活性[19],通过表面溶蚀可以达到恒速释放,容易控制药物释放速度。

可降解埋植剂骨架材料的酸性降解产物(乳酸、羟乙酸)在埋植剂内部蓄积,多肽、蛋白质的稳定性可能会受影响,故近来研究的重点转向注射微

第10期王秀贞等:长效多肽药物研究进展

球。采用生物可降解聚合物为骨架材料包裹多肽、蛋白质药物制成可注射微球制剂,使其在体内达到缓释的目的是目前各国学者大力研究的新领域。在诸多多肽缓释制剂中黄体素释放激素(LHRH)类似物微球的研究最为成功。此外,也有不少用微囊化手段使胰岛素、神经生长因子、内皮生长因子等缓释的研究报道。

微囊化技术制备多肽、蛋白质药物可注射微球是生物技术药物推广应用十分重要的方向,可注射微球注射剂具有可靠的缓释效果,可延长药效,减少用药次数。另外缓释剂型要根据药物稳定性和理化特性设计,还要考虑人体生理规律选择剂型和释药模式,此外其载体特性要求高,制备工艺复杂,生产成本相对较高。

412　非注射剂型

针对不同的作用目的,采用不同的给药途径不仅可以提高药物生物利用度还可以减少副作用的发生。多肽和蛋白药物在常规给药途径如口服时会遇到很多问题如胃肠道的酶解,肝脏的首过效应消除等,因此多肽和蛋白药物的传统给药途径是皮下注射和静脉注射,但是由于半衰期短,给病人带来不便等原因促使许多学者努力寻找其他更有效的给药途径包括“屏护”口服给药和电转运经皮释放。如胰岛素除注射外开发了肺部吸入、口服或口腔黏膜吸收等剂型。但无论是剂型改变还是包埋植入或注射均不是从本质上改变药物的动力学特性而是通过缓慢释放延长药效,提高生物利用度。

5结　语

生物技术药物的发展已进入蛋白质药物新时期,通过蛋白质工程手段可以提高重组蛋白的活性,改善制品的稳定性,提高生物利用度,延长在体内的半衰期等。水溶性大分子对蛋白质的化学修饰,不仅能明显延长蛋白质的循环半衰期,还能有效降低或解除其免疫原性。化学修饰与基因工程、蛋白质工程相结合将会有更好的应用前景。如G oods on等[20]用定点突变技术获得Thr3→Cys32I L2 2,并通过巯基用PEG进行修饰,结果延长了生物体内半衰期,增加产物稳定性。通过在融合蛋白TG Fα2PE38中插入含有可修饰的一段肽段,同时突变去掉融合蛋白功能部位可修饰位点,然后进行PEG修饰,所得到的融合蛋白体内存留时间延长了10倍,提高了体内抗肿瘤活性[21]。随着各种技术手段的不断提高,相信未来多肽、蛋白药物具有不可估量的应用前景。

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The Advance of R eserch of Long E ffect Peptides Medine

Wang X iuzhen 1

　Wu Jun 2

　Meng X ianjun

(1F ood Science Department of Shenyang Agriculture University Shengyang 110161)(2Institute of Biotechnology Academy of M ilitary M edical Science Beijing 100071)

Abstract The time of recombinant peptides medine remain in vivo effect the dosage and therapeutic effect extremely.S o ,it become one of im portant tasks that to reconstitute these drugs for prevention of rapid degradation and short half 2life.A fter many years unremitting efforts ,a lot of long effect peptides medicine have been on the market or on clinical trial.T o reach this g oal ,the following ways such as chemical m odification ,gene fusion ,point mutaion and delivery systems rev olution are reviewed.

K ey w ords Peptides medicine Half 2life

中国科协2003学术年会?生物技术前沿与产业化

研讨会在沈阳举行

中国科协2003学术年会于2003年9月13～16日在沈阳举行,中国生物工程学会承办了年会的第15分会场“生物技术前沿与产业化”研讨会,来自全国的近百名代表参加了本次研讨会。

中国生物工程学会副理事长、医药生物技术专业委员会主任马清钧教授担任分会场主席并主持会议。在医药生物技术领域,中国医学科学院血液研究所所长韩忠朝教授就“干细胞与再生医学“的研究开发与应用作了大会专题报告,辽宁省肿瘤研究所李文欣研究员介绍了Her 22单克隆抗体在乳腺癌诊断中的应用性研究工作,第四军医大学卫克文先生作了“变形链球菌葡糖结合蛋白B 基因防龋疫苗的构建及其在哺乳动物细胞中的表达”的报告。

在海洋生物技术领域,中国科学院海洋研究所王广策研究员作了“海洋生物活性蛋白的规模分离及应用”的报告。在农业生物技术方面,吉林农业大学生物技术学院李海燕副教授作了“水杨酸诱导山葡萄Class Ⅲ几丁质酶基因VCH 3启动子在转基因烟草维管组织中的表达”的报告,汕头大学生物系庄东红副教授作了“根癌农杆菌介导的花生遗传转化影响因素的研究”的报告。

在工业生物技术领域,长春工业大学生物工程学院副院长薛冬桦教授介绍了生物合成麦角甾醇的工作,中国化工学会生物化工专业委员会副秘书长戎志梅高级工程师介绍了新世纪蓬勃发展的我国生物化工产业。在组织工程领域,航天医学工程研究所提供了两篇报告,它们分别是李莹辉副研究员的“模拟微重力条件下新生大鼠心肌细胞三维培养体系的构建”和熊江辉助研的“基因芯片数据分析的新方法与基因调控网络推理”。

在生物技术产业化方面,上海科技情报研究所王萍高级工程师详细介绍了她们的最新研究成果“国外生物技术发展政

策研究及我国政策建议”

(将陆续在本刊发表),辽宁大学药物研究所徐利锋教授介绍了他们在基因工程药物产业化方面的一些探讨,辽宁卫星药业集团则提出了较为具体的生物技术产业化的对策。

这次研讨会内容涉及生物技术的诸多方面,进入大会发言的学术报告均是学会从众多来稿中精选出的具有较高的学术水平和交流价值,同时对辽宁省和沈阳市发展生物技术及实现产业化的问题论述得也较为深入,与会代表普遍反映收获较大,也希望中国生物工程学会在明年的中国科协学术年会上能组织更多更好的学术报告。

(张宏翔)

2第10期

王秀贞等:长效多肽药物研究进展

国际多肽药物的发展现状及其前景展望

国际多肽药物的发展现状及其前景展望一、多肽药物发展现状 1、多肽疫苗多肽疫苗与核酸疫苗一样是目前疫苗研究领域内较受重视的研究方面之一。尤其是对病毒多肽疫苗进行了大量研究。目前对人类危害极大的两种病毒性疾病艾滋病和丙型肝炎均无理想的疫苗，核酸疫苗和多肽疫苗的研究结果令人鼓舞。1999年美国NIH公布了两种HIV-I病毒多肽疫苗,对人体进行的Ⅰ期临床试验结果，证实两种多肽能刺激机体产生特异性抗体和特异性细胞免疫，并有较好的安全性。我国清华大学也证实HIV-I膜蛋白内一段多肽有很强的免疫原性。丙肝病毒多肽疫苗也显示有良好的发展前景，国外学者从丙肝病毒(HCV)外膜蛋白E2内筛选出一般多肽,它可刺激机体产生保护性抗体。其它病毒(如甲肝、麻疹、辛德毕斯病毒等)的多肽疫苗及抗肿瘤，避孕等多肽疫苗的研究也取得了较大进展。例如，美国学者NaZ等从噬菌体肽库内筛选出一个12氨基酸小肽，它能特异性地与人卵子结合，阻止精子与卵子的结合，可用于避孕疫苗。 2、抗肿瘤多肽肿瘤的发生是多种原因作用的结果，但最终都要涉及及癌基因的表达调控。不同的肿瘤产生时所需要的酶等调控因子不同，选择特异性小肽作小肿瘤发生时所需的调控因子等，封闭其活性位点，可防止肿瘤发生。现在已发现很多肿瘤相关基因及肿瘤产生调控因子，筛选与这些靶点特异结合的多肽，已成为寻找抗癌药物的新热点。美国学者发现了一个小肽(6个氨基酸)，它在体内能显著抑制腺癌的生长，包括肺、胃及在大肠腺癌为治疗这一死亡率很高的恶性肿瘤开辟了一条新路。瑞士科学家发现另外一个小肽(8个氨基酸)，它能进入肿瘤细胞，激活抗癌基因P53，诱导肿瘤细胞的凋亡。 3、抗病毒多肽病毒感染后一般要经历吸附(宿主细胞)、穿入、脱壳、核酸复制，转录翻译，包装等多个阶段。阻止任一过程均可防止病毒复制。最有效的抗病毒药物应该是作用在病毒吸附及核酸复制两个阶段，因此筛选抗病毒药物主要集中在病毒复制的这两个阶段。病毒通过与宿主细胞上的特异受体结合吸附细胞，依赖其自身的特异蛋白酶进行蛋白加工及核酸复制。因此可从肽库内筛选与宿主细胞受体结合的多肽或能与病毒蛋白酶等活性位点结合的多肽，用于抗病毒的治疗。 HCV非结构蛋白3区(NS3)是一个与病毒复制密切相关的蛋白酶，其活性位点已被确定，并且加拿大、意大利等国家均从肽库内筛选到一个6肽(DDIVPC)能显著抑制该酶活性。同样已从肽库内筛选到能与HIV复制必需的逆转录酶结合的小肽，及能与HIV外膜蛋白结合防止病毒进入细胞的小肽。这些部分小肽已进入临床试验。 4、多肽导向药物已知很多毒素(如绿脓杆菌外毒素)，细胞因子(如白细胞介素系列)等有较强的肿瘤细胞毒性，但在人类长期或大量使用量时也可损伤正常细胞。将能和肿瘤细胞特异结合的多肽与这些活性因子进行融合，则可将这些活性因子特异性地集中在肿瘤部位,可大大降低毒素、细胞因子的使用浓度，降低其副作用。比如，在很多肿瘤细胞表面存在表皮生长因子的受体，其数量较正常细胞上的数目高几十倍，甚至上百倍，将毒素或抗肿瘤细胞因子与表皮生长因子融合，可将这些活性因子特异地聚集到肿瘤细胞，国内外已有几家将表皮生长因子与绿脓

多肽类抗肿瘤药物研究进展

多肽类抗肿瘤药物研究进展【摘要】目前，恶性肿瘤已严重威胁人类的健康，传统的手术、化疗、放疗等治疗手段不仅选择性低，毒副作用大，且易产生耐药性。而多肽具有良好的靶向性，且分子量小、来源广泛，具有低毒性、易于穿透肿瘤细胞且不产生耐药性的优点。抗肿瘤活性肽可特异性结合并作用于肿瘤组织，与肿瘤生长转移相关的信号转导分子相互作用，从而抑制肿瘤生长或促进肿瘤细胞发生凋亡。本文将从抗肿瘤多肽药物的来源、作用机制及发展现状进行概述。【关键词】多肽来源抗肿瘤作用机制恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康和生命的疾病，仅次于心血管疾病，每年死于癌症的患者约占总死亡人数的1/4，且中国占相当庞大的病例数。药物治疗是当今治疗肿瘤的主要手段之一，但目前的抗肿瘤药物不良反应较大。对此，寻找新型高效低毒的抗肿瘤药物一直是国内外医药研发的热点。随着免疫和分子生物学的发展，以及生物技术与多肽合成技术的成熟，人们发现多肽类药物不仅毒性低、活性高、易于吸收，还可以通过提高机体免疫功能抑制肿瘤的生长和转移，增强抗肿瘤作用，而且其广泛存在于动物、植物、微生物体内，因此，越来越多的多肽药物被开发并应用于临床。抗肿瘤多肽的来源天然来源的抗肿瘤活性肽天然活性多肽是存在于动物、植物和微生物等生物体内的一类生物活性肽，可经过特殊提取分离工艺直接得到。近年来，对某些多肽经修饰加工后发现其具有显著的抗肿瘤作用，它们可针对肿瘤细胞发生、发展的不同环节，特异性杀伤、抑制肿瘤细胞，显示出极好的应用前景。 1.1微生物源抗肿瘤多肽微生物源抗肿瘤多肽主要是指广泛存在于生物体内的一种小分子多肤，它们是非核糖体合成的抗菌肽，如多黏菌素(polymyxin)、杆菌肽(bacitracin)、短杆菌肽(gramicidin)等，主要是由细菌产生，并经结构修饰而获得，这类微生物产生的抗菌多肽的研究近年来取得了较大的进展。细菌抗菌肽又称细菌素，是最常见的一类抗菌肽，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均可分泌。细菌中已发现杆菌肽、短杆菌肽S、多黏菌素E和乳链菌肽(Nisin) 4种类型抗菌肽，能特异性杀死竞争菌，而对宿主自身无害。例如[1]，枯草芽孢杆菌可以产生多种抗微生物物质，如表面活性素(surfactin)，该物质具有抗病毒、抗肿瘤、抗支原体、抗真菌活性和一定程度的抗细菌活性。除此之外，人们还发现某些抗菌肽对部分病毒、真菌和癌细胞等有杀灭作用，甚至能提高免疫力、加速伤口愈合。 1.2动物源抗肿瘤多肽动物源多肽主要是指从哺乳动物、两栖动物、昆虫中分离提取出来的抗肿瘤多肽。如，有些哺乳动物来源的抗肿瘤多肽对淋巴瘤细胞有较强的抗肿瘤活性且免疫原性低；此外，还有Berge [2]等通过体内实验验证来源于牛科动物乳铁蛋白Lfcin B的9肽LTX-302 ( WKKWDipKKWK )的抗肿瘤效果，结果表明其对淋巴瘤细胞A20具有抗肿瘤活性，IC50为16 μmol·L￣1 。多数研究表明，从天蚕中分离出的天蚕素Cecropins具有较强的抗肿瘤活性。Cecropin A和Cecropin B对膀胱癌细胞有选择性细胞毒作用，以剂量依赖的方式抑制膀胱癌细胞增殖，对所有膀胱癌细胞系的IC50为73.29~220.05 μmol·L￣1，它们的作用机制可能是破坏靶细胞膜导致不可逆的细胞溶解和细胞破坏[3]。 1.3植物源抗肿瘤多肽

合成多肽药物药学研究技术指导原则.doc

指导原则编号：合成多肽药物药学研究技术指导原则二00七年九月【H 】G P H 11 - 1

目录一、前言二、合成多肽药物药学研究的基本考虑三、合成多肽药物药学研究的主要内容（一）制备工艺研究（二）结构确证研究（三）制剂处方工艺研究（四）质量研究与质量标准（五）稳定性研究四、名词解释五、参考文献六、著者

合成多肽药物药学研究技术指导原则一、前言多肽类化合物是一类重要的生物活性分子。20世纪70年代生物技术在生命科学领域的应用，使多肽等生物技术药物的研究进展迅速；与此同时，随着多肽固相合成技术及高效液相色谱（HPLC）纯化、分析技术等的发展，合成多肽药物的开发也成为药物研究中的一个活跃领域。采用化学合成方法制备多肽，可以对天然多肽的结构进行修饰，从而增加多肽与受体的亲和力、选择性，增强对酶降解的抵抗力或改善药代动力学特性，甚至由受体的激动剂变为拮抗剂；此外，新技术的发展，例如以多肽固相合成和组合化学为基础的组合肽库合成技术，使得在短时间内获得大量的多肽化合物成为可能，药物筛选的效率不断提高。因此，将会有越来越多的采用化学合成方法制备的多肽类化合物成为治疗用药物。合成多肽药物是指采用化学合成方法制备的多肽类药物。这类药物的药学研究同样遵循国家食品药品监督管理局已经发布的相关技术指导原则的一般性要求。但是，由于多肽主要由氨基酸（包括天然氨基酸和非天然氨基酸）构成，这使得多肽类药物在制备方法、结构确证、质量研究等方面又有与一般药物不同的独特问题。本指导原则就是在已有的相关指导原则基础上，对合成多肽药物药学研究方面所涉及的特殊问题进行分析，结合国内对多肽药物研究和评价的实践经验，提出多肽药物药学各项研究的一般性要求。当然，具体品种研究

多肽类药物研究及应用进展

多肽类药物研究及应用进展内容摘要：多肽是一类在氨基酸构成及其连接方式上与蛋白质相同,但在某些性质方面又有别于蛋白质的物质,如其空间结构较简单、免疫原性较低或无免疫原性、生理活性强等。但多肽类物质自身固有的特点，如口服利用率较低、酶降解性高以及半衰期极短等，使其作为药物开发应用受到诸多的局限。而导致多肽类药物不稳定的一个重要原因就是多肽特殊的分子结构。本文重点从分子结构改造方面对多肽类药物的研究进展做一综述。关键词：多肽药物结构改造化学修饰基因工程环肽多肽作为药物，具有生理活性强、免疫原性低、疗效高等诸多优点，随着生物技术的不断发展，其在人类疾病治疗中的地位也日趋重要，目前已成为国际药学界研究的热点之一。但多肽类物质自身固有的特点，如口服利用率较低、酶降解性高以及半衰期极短等，使其作为药物开发应用受到诸多的局限。而导致多肽类药物不稳定的一个重要原因就是多肽特殊的分子结构，其中多肽主链氨基酸的降解和侧链氨基酸残基的结构变化是多肽结构不稳定的主要原因，因此从多肽类药物本身的分子结构进行改造，是改变其理化性质和药代动力学性质的根本。本文拟重点从分子结构改造方面对多肽类药物的研究进展做一综述。 1 化学修饰化学修饰不仅是多肽类药物定向改造、提高稳定性的有力工具，也是研究多肽结构与功能的一种重要手段。对多肽的主链基团和侧链基团都可以进行化学修饰。主链基团修饰包括氨基酸肽链的延长、切除及氨基酸定位突变等；侧链基团修饰主要集中于氨基、巯基和羧基上。修饰剂主要有葡聚糖、多聚唾液酸、聚乙二醇、四硝基乙烷等。根据修饰剂与多肽之间反应的性质，修饰反应可分为糖基化反应、酯化反应、酰化反应、取代反应、磷酸化反应、烷基化反应、氧化还原反应等。由于烷基化反应和氧化还原反应对多肽的活性影响较大，实际应用较少，而磷酸化反应对多肽稳定性的影响意义不大。现主要对前 4 种修饰反应进行重点介绍。 1.1 糖基化反应糖基化是指多肽的氨基和单糖还原端的羰基在温和的条件下经过一系列变化成为较稳定的糖肽的过程，是一种较为理想的稳定多肽类药物的方式，糖链的存在及其结构的可变性、复杂性和多样性直接影响着糖肽在组织中的降解和在体内的寿命[1]，也使得糖肽成为药学研究的新热点。脑内的亮氨酸脑啡肽可特异性地与阿片受体结合，在机体内起着调控痛觉感受并调节心血管与胃肠功能的作用，但半衰期短。 1.2 酯化反应酯化是指多肽的羧基和醇羟基形成较稳定的酯类化合物的反应。聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是常用的酯化反应试剂，是一种线性、亲水、灵活而不带电的高分子聚合物。通常选择相对分子质量大于10 000 的PEG 在温和的条件下对多肽进行修饰，选择合适的修饰类型、修饰程度以及修饰位点有利于改善多肽类药物的活性并提高其稳定性。目前已有不少经PEG 修饰的多肽类药物如PEG-IL-2[2]、PEG-水蛭素[3]等已进入临床试验阶段。 1.3 酰化反应

合成多肽药物有关物质研究的几点考虑

发布日期20071127 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价标题合成多肽药物有关物质研究的几点考虑作者审评五部部门正文内容审评五部有关物质研究是合成多肽药物药学研究的一项重要内容，由于合成多肽本身结构、合成工艺以及稳定性方面的特殊性，这类药物的有关物质研究较为复杂、存在一定的难度。国家食品药品监督管理局颁布的《合成多肽药物药学研究技术指导原则》已经就该类产品的有关物质研究提出了原则性的要求，本文主要是根据审评中遇到的一些共性问题就合成多肽药物有关物质研究需重点关注的几个问题做进一步的说明。（一）合成多肽药物有关物质的特点和研究的难点。合成多肽的有关物质主要为源于合成过程带来的工艺杂质和由于多肽不稳定而产生的降解产物、聚合物等。工艺杂质尽管目前合成多肽的纯化工艺已经有了很大进步，但工

艺杂质仍是合成多肽有关物质的重要来源，这主要是由于合成多肽的一些工艺杂质（如缺失肽、断裂肽、氧化肽、二硫键交换的产物等）与药物本身的性质可能非常近似，从而给纯化造成了一定的难度。而且，不同的多肽合成方法也在很大程度上决定了终产品中杂质的性质，例如液相合成和固相合成所引入的工艺杂质就会明显不同，固相合成中Boc合成法与Fmoc合成法所产生的杂质也会有所差异，甚至不同的保护/脱保护策略都会带来不同的工艺杂质。因此，在进行合成多肽的有关物质研究时，研究者必须结合自身的工艺特点对可能由此引入的杂质有充分认识，从而才能够建立有针对性的有关物质研究方法。同时，这也意味着，对于仿制产品而言不能盲目照搬国家标准、已上市产品的有关物质检查方法，必须充分考虑到产品本身的工艺特点。降解产物及聚合物多肽的化学稳定性和物理稳定性一般较差，因此降解产物、聚合物等是合成多肽有关物质研究的主要对象之一。影响合成多肽稳定性的因素包括脱酰胺、氧化、水解、二硫键错配、消旋、β-消除、聚集等，研究显示合成多肽中最常见的降解产物是脱酰胺产物、氧化产物、水解产物。在组成多肽的各种氨基酸中，天冬酰胺、谷胺酰胺易于发生脱酰胺反应（尤其是在pH值升高和高温条件下）；甲硫氨酸、半胱氨酸、组氨酸、色氨酸、酪氨酸最易氧化，对光照也较为敏感；天冬氨酸参与形成的肽链较易断裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly肽键。由于一个多肽分子中通常

多肽类药物制剂研究现状_方宏清

多肽类药物制剂研究现状方宏清 (军事医学科学院生物工程研究所　北京　100071) 摘　要　多肽类药物制剂研究面临的主要问题是多肽的稳定性不好、体内半衰期短和生物膜透过性差。本文综述了多肽类药物不稳定的原因;提高多肽稳定性的方法;多肽类药物制剂货架时间的确定;多肽类药物的分析手段;多肽类药物的控释研究;多肽的非注射途径给药研究。最后还提出了多肽类药物制剂研究的展望。关键词　多肽　药物制剂　稳定性　控制释放　非注射途径给药随着生物技术的发展,多肽作为药物在临床上的应用越来越广泛,相应的制剂学研究也日益受到重视。与传统的小分子有机药物相比,多肽具有稳定性差,体内半衰期短和不易通过生物膜等特点。本文从稳定性、缓释系统、非注射途径给药三方面对多肽类药物制剂的研究概况进行介绍。 1　多肽的稳定性研究 1.1　引起多肽不稳定的原因[1～3] (1)脱酰胺反应　在脱酰胺反应中, Asn/Gln残基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脱酰胺反应与环境条件和多肽的结构有关。提高pH值、升高温度都将有利于脱酰胺反应的进行。在-Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解,位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。 (2)氧化　多肽溶液易氧化的主要原因有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中, Met、Cys和H is、Trp、Ty r等最易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。 (3)水解　多肽中的肽键易水解断裂。由Asp参与形成的肽键比其它肽键更易断裂,尤其是Asp-Pro和Asp-Gly肽键。 (4)形成错误的二硫键　二硫键之间或二硫键与巯基之间发生交换可形成错误的二硫键,导致三级结构改变和活性丧失。 (5)消旋　除Gly外,所有氨基酸残基的α碳原子都是手性的,易在碱催化下发生消旋反应。其中Asp残基最易发生消旋反应。 (6)β-消除　β-消除是指氨基酸残基中β碳原子上基团的消除。Cys、Ser、Th r、Phe、Ty r等残基都可通过β-消除降解。在碱性p H 下易发生β-消除,温度和金属离子对其也有影响。 (7)变性、吸附、聚集或沉淀　变性一般都与三级结构以及二级结构的破坏有关。在变性状态,多肽往往更易发生化学反应,活性难以恢复。在多肽变性过程中,首先形成中间体。通常中间体的溶解度低,易于聚集,形成聚集体,进而形成肉眼可见的沉淀。蛋白质的表面吸附是其贮存、使用过程中遇到的另一个令人头痛的问题,如r IL-2在进行灌注时会吸附在管道表面,造成活性损失[4]。 1.2　提高多肽稳定性的途径[1,3] (1)定点突变　通过基因工程手段替换引起多肽不稳定的残基或引入能增加多肽稳 16 药　学　进　展 1998年　22卷　第1期军事医学科学院青年科研基金资助项目

合成多肽药物药学研究技术指导原则

附件三合成多肽药物药学研究技术指导原则

二、合成多肽药物药学研究的基本考虑合成多肽药物药学研究的主要内容、研究思路、研究方法及一般性的技术要求与其他类型的化学药物基本一致。但是，由于多肽药物的特点，在进行药学研究时还应注意考虑以下问题。 1、关于多肽（原料药）合成工艺选择的考虑多肽的化学合成是有机合成的一个非常特殊的分支，目前主要有液相合成和固相合成两种方法。液相合成是经典的多肽合成方法，一般采用逐步合成或片段缩合方法。逐步合成法通常从链的C'末端氨基酸开始，向不断增加的氨基酸组分中反复添加单个α-氨基保护的氨基酸。片段缩合一般先将目标序列合理分割为片段，再逐步合成各个片段，最后按序列要求将各个片段进行缩合。液相合成的优点是每步中间产物都可以纯化、可以获得中间产物的理化常数、可以随意进行非氨基酸修饰、可以避免氨基酸缺失，缺点是较为费时、费力等。固相合成是将目标肽的第一个氨基酸的羧基以共价键的形式与固相载体(树脂)相连,再以这一氨基酸的氨基为合成起点,使其与相邻氨基酸（氨基保护）的羧基发生酰化反应,形成肽键。然后让包含有这两个氨基酸的树脂肽的氨基脱保护后与下一个氨基酸的羧基反应,不断重复这一过程,直至目标肽形成为止。其优点是简化了每步反应的后处理操作，避免因手工操作和物料转移而产生的损失，产率较高且能够实现自动化等；其缺点是每步中间产物不可以纯化，必须采用较大的氨基酸过量投料，粗品纯度不如液相合成物，必需通过可靠的分离手段进行纯化等。液相合成和固相合成各有优缺点，应根据合成的实际需要选择适合的工艺。一般而言，液相合成法较适于合成短肽；固相合成法

多肽、蛋白质类药物缓释剂型的研究进展天烽

多肽、蛋白质类药物缓释剂型的研究进展作者：文章来源：点击数：3201 更新时间：2004-7-13 随着生物技术的高速发展，多肽、蛋白质类药物不断涌现。目前已有35种重要治疗药物上市，生物技术与生物制药企业的发展也日益全球化。生物技术药物研究的重点是应用重组技术开发可应用于临床的多肽、蛋白、酶、激素、疫苗、细胞生长因子及单克隆抗体等。据＇s 报道，目前已有723种生物技术药物正在接受审评(包括Ⅰ～Ⅲ期临床及评估)，700种药物处于早期研究阶段(研究与临床前)，还有200种以上药物已进入最后批准阶段(Ⅲ期临床与评估)［1］。生物技术药物的基本剂型是冻干剂。常规制剂尽管其疗效早为临床所证实，但由于半衰期短，需要长期频繁注射给药，从患者的心理与经济负担角度看，这些都是难以接受的问题。为此，各国学者主要从两方面着手研究开发方便合理的给药途径和新制剂：①埋植剂和缓释注射剂。 ②非注射剂型，如呼吸道吸入、直肠给药、鼻腔、口服和透皮给药等［2］。缓释生物技术药物的注射制剂，是很有应用前景的新剂型，有一些品种如能缓释1至3个月的黄体生成素释放激素()类似物微球注射剂已经上市［3］，本文着重介绍这类制剂。 1多肽、蛋白质药物缓释制剂的主要类型多肽、蛋白质药物缓释制剂的研究与开发，从发展过程及剂型看，主要分埋植剂和微球注射剂两类。 1.1埋植剂() 1.1.1细棒型埋植剂［4］埋植剂外形为一空心微型细棒，一头封闭，另一头开口，棒材为聚四氟乙烯等非生物降解聚合物。腔内灌入药物与硅胶(,聚二甲基硅氧烷)混合物。埋植剂埋入人体皮下，药物通过硅胶基质开口处缓慢释放。美国内科医生手册()上收载了商品名为?的埋植剂，药物为左旋-18乙基炔诺酮，用于计划生育。该制剂每根直径 2.4 ，长34 ，医生通过手术将6根细棒状物埋植在患者上臂内侧，药物可在体内按零级模式释药达5年，药物释完后再经手术取出。 1.1.2微型渗透泵埋植剂美国公司20世纪70年代开发了外形像胶囊的埋植剂，该制剂埋植于皮下或其它部分，体液可渗透过外壳，溶解夹层电解层，使体积膨胀的夹层压向塑性内腔，促使药物溶液从开口定速释放。有不少生物大分子药物，如胰岛素、肝素、神经生长因子等作为模型药物的动物体内外研究报道［5］。埋植剂对需要长期用药的慢性患者的治疗具有积极的意义，但它存在以下缺陷：①必须经手术途径植入。②制剂骨架材料为非生物降解聚合物，释药结束后还需经手术取出。③制剂在局部组织有刺激与不适感。 1.1.3可注射的埋植剂可生物降解聚合物作为埋植型或注射型缓释制剂骨架是近20年来国内外学者大力研究的方向，这类聚合物包括两大类：①天然聚合物，如明胶、葡聚糖、白蛋白、甲壳素等。②合成聚合物，如聚乳酸、聚丙交酯、聚乳酸-羟乙酸()、聚丙交酯乙交酯()、聚己内酯、聚羟丁酸等。近年合成聚合物尤为人们重视，于20世纪70年代起即用作外科缝线及体内埋植材料，如人工关节、护板、螺栓等。聚合物在体内可逐渐

长效多肽药物的研究

长效多肽药物研究进展王秀贞 1,2 　吴　军 13 　孟宪军 2 (1军事医学科学院生物工程研究所　北京　100071 2沈阳农业大学食品科学院　沈阳　110161) 摘要　重组蛋白药物在体内存留时间的长短,极大地影响到药物的使用剂量和治疗效果。防止多肽在体内迅速降解、延长半衰期成为蛋白质工程药物改造的重要课题之一。经过许多学者多年来的不懈研究,不少长效多肽药物已经上市,还有一些正在进行临床研究。综述了几种多肽药物常用的长效改造方法如化学修饰、基因融合、点突变以及药物制剂释放系统的改造。关键词　多肽药物　半衰期收稿日期:2003203221　修回日期:20032082223通讯作者,电子信箱:wqmxjr @s https://www.360docs.net/doc/2913364596.html, 生物技术的发展极大地促进了多肽、蛋白药物的研制开发,目前已有40种以上重要的治疗药物上市,720多种生物技术药物正进行Ⅰ～Ⅲ期临床试验或接受FDA 审评,其中200种以上的药物进入最后的批准阶段(Ⅲ期临床与FDA 评估)。多肽因子、蛋白药物主要通过降解、排泄、以及受体介导的内吞等作用在体内被清除。其中分子量小于20kDa 的多肽因子在代谢过程中易由肾小球滤过;通过肾小管时多肽因子又被其中的蛋白酶部分降解并从尿中排出,因而半衰期短。为维持一定的疗效需要大剂量反复用药,长期的频繁注射不仅增加了病人的痛苦而且易引发一系列副反应。近几年各国学者主要从化学修饰、基因融合、点突变以及制剂改造等方面着手进行长效多肽药物的研究。 1　化学修饰化学修饰是延长蛋白药物半衰期的一个有效途径,其中应用最为广泛的修饰剂是单甲氧基聚乙烯二醇(methoxypoly ethylene glycol ,mPEG ),其次是多糖类如葡聚糖、聚蔗糖、淀粉等;同源蛋白质、人工合成多肽类如白蛋白、聚丙氨酸等;长链脂肪酸类以及聚烯属烃基化合物、聚酸酐等[1] 。PEG 是惰性、两亲、不带电荷的柔性聚合物,分子量随聚合程度而变化(1～50kDa ),有线性和支链两种构型,其中线性单甲氧基聚乙烯醇(mPEG )已经FDA 批准作为许多药物的安全载体。mPEG 通过共价键与蛋白质连接,对蛋白表面氨基进行修饰以有效地改变多肽、蛋白药物在体内的分布和药物学特性。目前mPEG 修饰已应用于40多种不同蛋白的修饰如猪血清白蛋白(BS A )、粒细胞集落刺激因子(G 2CSF )、白介素22(I L 22)等。PEG 修饰后血浆半衰期一般可延长几倍至几十倍甚至是上百倍(表1),但大部分蛋白的免疫原性也有所降低,而蛋白的生物活性也有不同程度降低。这可能是由于PEG 大分子在蛋白分子周围形成一层外壳阻碍了免疫细胞与蛋白的接触保护了蛋白,掩盖了蛋白酶识别位点避免蛋白酶降解的发生,但同时也使蛋白的活性位点受到影响。中国药科大学田泓等[2] 用聚乙二醇修饰干扰素α2的研究表明活性损失与修饰率有关,修饰率保持在30%以内时生物活性保持较好M otoo Y amasaki 等[3] 在PEG 修饰重组人粒细胞集落刺激因子(rhG 2CSF )中发现修饰位点的多少(即1分子rhG 2CSF 与几分子PEG 结合)对半衰期的延长方面并无多大影响,但修饰位点少活性损失就相对少一些;为保持蛋白的生物活性,采取位点特异性修饰即将蛋白功能结构域中易与PEG 结合的氨基酸残基换成功能相似不干扰蛋白与PEG 结合的氨基酸残基如赖氨酸替换成精氨酸[4] 。PEG 修饰应用十分广泛,它对酶、多肽、受体、抗体片断等均能实现偶联以延长半衰期,抗体药物是继疫苗之后的第二大生物技术药物产业,但是异体抗体容易产生免疫识别而被清除,经PEG 修饰后就可得到明显改善[5] ,从而为抗体更广泛地应用于疾病的治疗提供了基础。随着研究的不断深入,不少PEG 修饰蛋白药物已经上市或者进入临床(表2)。第23卷第10期中　国　生　物　工　程　杂　志 CHI NA BI OTECH NO LOGY 2003年10月

多肽类药物的开发、应用及发展前景

多肽类药物的开发、应用及发展前景摘要: 本文从多肽类药物的简介与分类,和对多肽类药物开发的技术研究和给药途径,以及对多肽类药物的研究前景等方面,对多肽类药物有了综合性的认识。阐述了多肽类药物在国内和国际上的巨大前景以及对研究现代疾病的预防和治疗发挥着至关重要的作用。关键字：多肽类药物研发技术与方向给药途径前景与展望 Polypeptide drugs development, application and development prospects Abstract: This article from the introduction and classification of polypeptide drugs, and for peptide drug delivery system for research and development of technology, and the study of peptide drugs prospects, etc., for a comprehensive understanding of peptide drugs. Polypeptide drugs in the huge prospects as well as to the research on domestic and international modern disease plays an important role in the prevention and treatment keyword：polypeptide drugs research and development Technology and the direction Delivery way prospects and look ahead 一、多肽的简介：多肽是α－氨基酸以肽链连接在一起而形成的化合物，它也是水解的中间产物。由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二肽，同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。它们的分子量低于10，000Da（Dalton道尔顿），能透过半透膜，不被三氯乙酸及硫酸铵所沉淀。[1] 百度百科“多肽”。也可把由2~10个氨基酸组成的肽称为寡肽（小分子肽）；10~50个氨基酸组成的肽称为多肽；由50个以上的氨基酸组成的肽就称为。[2]《生物化学教程》高等教育出版社王镜岩等主编分子式：[3]《多肽药物研究于开发》人民卫生出版社厉保秋主编二、多肽类药物的特点多肽类药物是指用于预防、治疗和诊断的多肽类物质生物药物[4]《蛋白药物的制备与展望》张政朴等编著许多活性多肽都是由无性的前体，经过酶的加工剪切转化而来的，它们中间许多有共同的来源，相似的结构，甚至还保留着若干彼此所特有的生物活性。研究活性多肽结构与功能的关系及活性之间结构的异同与其活性的关系，将有助于设计和研制新的活性多肽药物。国内外一些临床上确有疗效的组织提取剂，其有效成分有的还不十分清楚，从活性肽或细胞生长调节因子的角度去研究他们的物质基础和作用机制，预计可获得一定成效。三、多肽类药物的分类

合成多肽药物药学研究技术指导原则

指导原则编号：【H 】G P H 11 - 1 合成多肽药物药学研究技术指导原则二00七年九月

蛋白多肽类药物药代动力学分析方法研究进展

蛋白多肽类药物药代动力学分析方法研究进展作者：张琪王广基摘要通过查阅近期国内外有关文献10余篇，综述了现代分析方法在蛋白多肽类药物代谢动力学研究中的应用，重点介绍了生物检定法、同位素标记法、免疫学、色谱等方法的原理、特点、及发展状况。关键词蛋白质；多肽；药物动力学；生物检定法；同位素标记法；免疫学；色谱文章编号：1005-8915(2000)02-0126-03 The Progress of the Analysis Method of Protein Polypeptide Drug Pharmac okinetics Zhang Qi Wang Guangji (Center of Pharmacokinetics, China Pharmaceutical University,Nanjing 210009) Abstract A review of application of modern analysis methods in studying the pha rmacokinetics of protein polypeptide drug is presented with 16 references. The paper emphasizes the principle, characteristic, and progress of bioassay, radioi odination, immunoassay, and chromatography. Key Words Protein, Polypeptide, Pharmacokinetics, Bioassay, Rad ioiodination, Immunoassay, Chromatography 在国家确定的发展高新技术计划中，生物技术产品一直作为优先开发的领域之一。蛋白多肽类药物在实现产品的产业化过程中，受到诸多因素的制约，其中药物动力学的研究面临着更高的要求。其主要原因是蛋白多肽类药物的结构特殊、用药量很小、生物体内有大量相似物质的干扰，这一切都使得该类药的分析方法不同于传统药物，大大增加了检测的难度。本文就目前进行该类药药物代谢动力学过程中所使用或发展中的几种分析方法做一概述。 1蛋白多肽类药物的分析方法 1.1生物检定法由于蛋白多肽类药物多为有生物活性的物质,且生物活性不仅取决于药物的一级结构，

多肽类药物

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多肽类药物多肽和蛋白质类生物药物按药物的结构分类可分为:氨基酸及其衍生物类药物、多肽和蛋白质类药物、酶和辅酶类药物、核酸及其降解物和衍生物类药物、糖类药物、脂类药物、细胞生长因子和生物制品类药物。结构分析多肽的定性至少应包括氨基酸分析、序列分析及质谱分析。纯肽的氨基酸分析可提供该多肽的氨基酸组成和数量。序列分析则提供氨基酸残基的精确排列顺序。基于多种技术的质谱，如快原子轰击、电喷雾、激光解吸, 经常用于提供多肽的相对分子量及其序列信息。肽谱是蛋白质或多肽通过酶解得到的肽片段经分离和分析所得到的“指纹图谱”。当多肽含有２０个以上的氨基酸残基时, 肽谱分析对多肽结构研究和特性鉴别具有重要意义。 2. １氨基酸分析用于氨基酸分析的水解方法主要是酸水解, 同时辅以碱水解。酸水解中使用最广泛的是盐酸（一般浓度为6ｍo l?L )。多肽于110 ℃真空或充氮的安瓿瓶内水解10~ 24 h, 然后除去盐酸。水解过程中氨基酸遭破坏的程度与保温时间有线性关系，因此该氨基酸在多肽中的真实含量可通过以不同的保温时间对相应时间的样品中该氨基酸的含量作图，用外推法求出。高氨基酸分析仪的使用使氨基酸的分析越来越准确, 如W aｔers 公司的氨基酸分析系统的检出限已达100 fmｏl。 2. 2 序列分析氨基酸测序主要为化学法, 酶法也有一定的意义。化学法以Edman 降解法最为经典, 它对所有氨基酸残基具有普适性和近乎定量的高产率, 是近50年N 2端顺序分析技术的基础。

2020年多肽类药物及高端制剂研发中心项目可行性研究报告

2020年多肽类药物及高端制剂研发中心项目可行性研究报告 2020年6月

目录一、项目概况 (3) 二、项目建设的必要性 (3) 1、大力推进多肽类药物及高端制剂的研发和商业化进程，符合国家相关产业政策 (3) 2、加大研发创新力度是公司提升市场竞争力、增强可持续发展能力的根本途径 (4) 三、项目建设的可行性 (5) 1、公司打造了覆盖全产业链的技术创新平台，并建立了先进的研发管理体系和技术创新体制 (5) 2、公司组建了一支行业领先的研发团队，主要核心技术人员拥有强大的研发实力、深厚的研发积累和丰富的国内外制药公司研发经验 (6) 四、项目主要研发内容与方向 (6) 1、多肽原料药工艺研究 (7) 2、质量研究 (7) 3、高端制剂研发 (7) 4、多肽类创新药研发 (7) 五、项目投资概算 (8) 六、项目建设进度计划 (8) 七、项目环保情况 (9)

一、项目概况项目拟在公司生产基地新建一座三层建筑物，并购置国内外先进的研发设备及仪器，配套建设满足研发所需要的相关设施，作为公司多肽类药物及高端制剂的研发中心。二、项目建设的必要性 1、大力推进多肽类药物及高端制剂的研发和商业化进程，符合国家相关产业政策目前，我国医药行业大而不强，“多小散乱差”的局面仍然存在，药品质量差异较大，高质量药品市场主要被国外原研药占领，部分原研药价格虚高，广大人民群众对高质量仿制药的需求与现行药品可及性和可负担性相比还有一定差距。加快药品的高质量仿制具有降低医疗支出，提高药品可及性，提升医疗服务水平等重要经济和社会效益，为此，国家制订了一系列的产业政策支持和鼓励仿制药行业发展。2016年11月，国务院发布《“十三五”国家战略性新兴产业发展规划》，提出：支持生物类似药规模化发展，开展专利到期药物大品种研发和生产。2018年，国务院办公厅发布了《关于改革完善仿制药供应保障及使用政策的意见》（国办发[2018]20号），提出：促进仿制药研发，提升仿制药质量疗效，提高药品供应保障能力，更好地满足临床用药及公共卫生安全需求，并提出及时将仿制药纳入采购目录，将与原研药质量和疗效一致的仿制药纳入与原研药可相互替代药品目录等相

(完整版)表皮生长因子类药物近期研究概况及展望

表皮生长因子类药物近期研究概况及展望 1 表皮生长因子作用及特点表皮生长因子系列主要包括表皮生长因子（EGF）、胰岛素生长因子（IGF-1）、碱性纤维原细胞生长因子（bFGF）、酸性纤维原细胞生长因子（aFGF）。其有滋润皮肤，消除皱纹，修复创伤，预防色斑等作用，另外对于人体骨骼系统、血液、呼吸、分泌、生殖、免疫和神经系统均都有很好的调节作用。但表皮生长因子作为蛋白质多肽类药物，存在分子量大，难以透过皮肤角质层，稳定性差，半衰期短，对温度、PH等外界环境敏感等缺点。 2 表皮生长因子类国内外研究概况 2.1国内市售生长因子类产品概况目前，国内市售的生长因子及其衍生物剂型均为外用制剂，包括溶液剂、冻干粉、凝胶剂、滴眼液等。具体如下注射用鼠神经生长因子、冻干鼠表皮生长因子、重组人表皮生长因子衍生物滴眼液、重组人表皮生长因子凝胶、重组人表皮生长因子滴眼液、重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶、外用重组人碱性成纤维细胞生长因子、外用重组人表皮生长因子衍生物、外用重组人表皮生长因子、外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子、重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶、重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液、重组牛碱性成纤维细胞生长因子滴眼液、外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子(融合蛋白)、外用冻干重组人酸性成纤维细胞生长因子等。 2.2表皮生长因子传统剂型研制及应用概况由上海大江集团股份有限公司制药公司于2002年研制了外用冻干重组人表皮生长因子，并申报国家一类新药。2003年由上海信谊药业有限公司研制出了重组人表皮生长因子喷雾剂的制备方法。2009年由河北东方康星生物制药有限公司研制了外用冻干鼠皮生长因子。2009年由第四军医大学研制出了一种多肽、蛋白类药物口腔黏膜吸收剂型的组方及制备方法。有关生长因子溶液剂、乳膏剂、凝胶剂临床应用及其与其他药物连用治疗皮肤创伤等报道较多，暂不详述。中国人民解放军军事医学科学院陆兵选取重组人表皮生长因子为模型药物，研究了其稳定性，并将其分别制备成亲水性凝胶剂及W/O型乳膏剂，工艺简单，质量可靠，使用方便。此外重组人表皮生长因子滴眼液也有见报道。

多肽类药物个人见解

多肽类药物氨基酸是蛋白质的基本单位，两个以上的氨基酸缩合形成肽链(polypeptide chain)。蛋白质是机体内最重要的一类生物大分子，目前被广泛地作为药物用于疾病的治疗。但是，蛋白质类药物也有缺点，如分子量大、制备困难、存在抗原性、体内易降解等。令人惊喜的是，人们发现某些分子量较小的多肽同样具有类似蛋白质的活性，且功能更显著。随着对这类生物活性多肽的进一步研究，已为新药的研制和开发提供了一个新的途径。从生物学角度看，多肽和蛋白质的区别只是前者结构小一些，后者结构大一些。在人的生命活动中，蛋白质不断分解变化，蛋白质分解后形成多肽，多肽聚合又形成蛋白质。在人体中，多肽是涉及各种细胞功能的生物活性物质，几乎所有的细胞都能合成多肽，所有细胞又受多肽调节。生命科学之所以将目光投向多肽，原因恰恰在于多肽在人体内担当的这种独特的生理和生化反应的信使角色。蛋白质和多肽之间在分子量上并无明确的区分，习惯上将胰岛素(51个氨基酸组成，分子量5733)视为多肽和蛋白质的界限。也有人将分子量小于104(或2×104)的氨基酸链称为多肽。目前生物医学在人体中已发现了1000多种具有活性的多肽，仅脑中就存在近40种，它们在生物体内的浓度很低，血液中一般仅有10-12～10-9mol/L，但生理活性很强，在神经、内分泌、生殖、消化、生长等系统中发挥着不可或缺的生理调节作用。人们比较熟悉的有谷胱甘肽(3肽)、催产素(9肽)、加压素(9肽)、脑啡肽(5肽)、β-内啡肽(31肽)、P物质(10肽)等。作为药用的肽，通常是由几个到二十几个氨基酸组成的比较短的多肽。开发和发展内源性活性物质作为治疗疾病的药物具有重要的实用价值，因为它是最符合人体生物学调节规律的治疗手段，可以避免许多其他类型药物给人体带来的不良反应。目前，全世界已经应用于临床的多肽类药物约有几十种，包括人们熟知的胰岛素、胸腺肽、抗艾滋病新药T20以及肽类激素等。近几年蛋白质/多肽类药物市场的发展速度惊人，年增长率达24%，与增长率仅为9%的总体医药市场相比，该领域令人注目。鉴于多肽生物活性高，一些肽在人的生长发育、细胞分化、大脑活动、肿瘤病变、免疫防御、生殖控制、抗衰防老及分子进化等方面又具有极其特殊的功能，多肽类药物的研发自然成为近年生命科学的一大热门领域。 1. 多肽药物的优势多肽药物是近年来世界新药研究开发的热点，也是我国生物医药研究的重点方向之一。与传统药物相比，多肽药物具有以下明显的优势：

多肽药物研究进展_孙立春

多肽药物研究进展孙立春＊COY David H （美国杜兰大学医学院多肽药物研发中心 New Orleans, LA 70112-2699）摘要人体内存在各种各样的天然多肽，它们参与调控各种生理功能，在临床应用上具有非常重要的开发价值。目前全球药物市场上有60～70个多肽药物，更多的多肽药物处在各级临床试验、临床前试验和实验室研究阶段。很多多肽药物以G蛋白偶联受体为靶点。传统的化学合成也仍然是开发多肽药物最主要的手段。然而，我们在多肽药物开发方面仍面临各种挑战，不仅要解决传统问题如不稳定，易降解，难穿越细胞膜，而且也要进一步降低生产成本，完善大批量生产工艺技术。尤其是多肽药物的口服生物利用度问题，一直是我们面临的最大的挑战和决定市场的关键因素。随着在现代技术及其它方面不断取得进展，多肽药物将具有更加广阔的前景。在新一代受体靶向药物研究中，多肽更被作为一种有效的药物载体，通过细胞表面受体将药物传递到特定细胞，达到提高特异性，减少副作用的目的。关键词多肽 GPCR家族受体中图分类号：R97 文献标识码：C 文章编号：1006-1533(2014)05-0055-06 The development in peptide-based drugs SUN Lichun*, COY David H (Department of Medicine, Peptide Research Laboratories, Tulane Health Sciences Center, New Orleans, LA 70112-2699, USA) ABSTRACT Peptide drugs display such multiple and unique advantages as ready synthesis, quick optimization, fewer immune responses, less toxic side effects and rapid clearance. Significant progress has been made in this field. Currently, there are 60~70 peptide drugs in the global market, with many more under clinical and pre-clinical studies. Many of them are short, synthetic and long-acting peptides and mainly target G protein-coupled receptors (GPCRs). These peptide drugs are mainly applied in treating cancers, cardiovascular diseases and metabolic disorders. However, such disadvantages as easy degradation, poor oral bioavailability and poor permeability hamper the clinical applications of these peptide drugs and limit their commercial markets. Despite of these challenges, it is believed that there is a promising future in peptide-based drug development due to the advances in peptide-associated technologies. In particular, it is a potential and critical approach for using peptides as drug delivery vehicles. KEy wORDS peptide; GPCR; receptor 随着以小分子化学药物的开发越来越难，人们把注意力越来越多地投向其他方面如多肽药物、抗体药物和蛋白质药物。人体内存在着许多天然多肽，它们参与调控各种生理功能, 因而在临床应用上具有非常重要的开发价值。近年来，多肽药物的开发越来越受到重视，相关药物市场也不断扩大。 1 多肽药物的特点多肽一般是指一种所含氨基酸数量在50到100以内的小分子蛋白。与小分子化合物类相比，多肽为大分子，而与大分子蛋白或抗体相比，多肽仍是小分子。多肽易于合成改造和优化组合，能很快确定其药用价值。由于本身的特性，多肽从临床试验到FDA批准所需时间也比小分子药物时间短很多（大约平均为10年）。而多肽通过临床试验的机率比小分子化合物要高两倍[1-3]。多肽的特定优点使其在药物开发中表现出特定的优势和拥有临床应用价值。更具体而言，与小分子化合物相比，多肽半衰期一般很短，不稳定，在体内容易被快速降解，多肽制剂需要低温保存，但是，通过改造修饰或者与其他材料组成稳定的复合物，可提高稳定性。相对大分子蛋白或抗体类，多肽在常温下却更稳定，用量更少，单位活性也更 *通讯作者：孙立春。E-mail: lsun@https://www.360docs.net/doc/2913364596.html,