染色方法总结
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00
AgNOR染色法:
1、试剂配制：
（1）AgNOR染色液：
甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。
乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。
（2）AgNOR工作液
取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。
2、步骤：
（1）切片脱蜡至水
（2）双蒸水洗2次
（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次
（5）脱水,透明,封固
3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。
B
鞭毛染色法:
１．试剂配制：
甲液：丹宁酸５克
氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克
福尔马林（１５％）２．０毫升
氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升
乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克
蒸馏水１００毫升
制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。
２．染色方法：
（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。
（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。
（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。
（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
３．注意事项：
（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。
（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。
（３）防止水及培养物沾有氯化物。
（４）切忌用接种环涂抹培养物。
（５）载玻片一定要洗净。先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。
β－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。
β－半乳糖苷酶的活性可以用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉淀。
X-gal可以做为组织染色剂，可以在所有表达β－半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。
应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。
C
CAE染色步骤
1、试剂配制：
（1）A液：萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中。（2）4％副品红液：取盐酸副品红(EM级)1g，溶于蒸馏水20ml内，再加入10m1／L的HCl 5m1，稍加温以增加溶解度，过滤、贮室温下。于使用前，取等量副品红液与新鲜的4％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化物试纸测试，瞬间试纸应变为蓝色才合格，如果不变色，应加入更多的亚硝酸盐。
（3）B液：o．1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml，加入新配制的副品红液3滴，用1moI／L HCl使PH值调至6．3。
2、染色步骤：
（1）将A.、B二液混合，过滤，加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.
（2）切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)
（3）流水冲洗。
（4）苏木素复染。
（5）空气干燥后封固。
G
Grimelius硝酸银反应法（嗜银反应）:
1、试剂配制：
硝酸银液: 1%硝酸银水溶液 3毫升蒸馏水 87毫升
0.2M醋酸缓冲液(PH5.6) 10毫升
还原液: 对苯二酚 1克亚硫酸钠 5克蒸馏水 100毫升
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水
（2）60℃硝酸银液内3小时
（3）用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗
（4）入45℃的还原液处理1分钟
（5）蒸馏水洗
（6）5%硫代硫酸钠处理1 分钟(可不做)
（7）水洗,脱水,透明,封固
3、结果：嗜银颗粒呈棕黑色。正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。
H
HID染色法1、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水
（2）放入预热的1当量盐酸中10分钟
（3）蒸馏水洗
（4）Schiff液中染10分钟
（5）自来水洗15分钟至细胞核红色（如2～5步不做，可在染好爱先蓝后染核固红2分钟）
（6）蒸馏水洗
（7）高铁二胺液 18～24 小时
（8）爱先蓝液(pH2.5)染10～20分钟
（9）蒸馏水洗
（10）脱水,透明,封固
2、结果: 硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液（唾酸粘液）物质蓝色。硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅出现唾酸粘液，此法多用于确定肠化的分型。
HP（硝酸银法）
1、试剂配制：
（1）醋酸缓冲贮备液，PH3.6
0.2N醋酸缓冲液，PH3.6 10 ml
蒸馏水 240 ml
以下各液均用此液配制
（2）1 %硝酸银液
硝酸银 1 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml
（3）2 %硝酸银液
硝酸银 0.2 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml
（4）5 %明胶液
明胶 5 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml
先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅
拌。
（5）3 %对苯二酚液
对苯二酚 0.3 g
醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml
（6）明胶对苯二酚液
3 %对苯二酚液 1 ml
5 %明胶液 15 ml
（7）显影液
明胶对苯二酚液 16 ml
2 %硝酸银液
3 ml
在操作到第4步完成前5分钟充分混合，置于56℃水浴箱中保温待用。
2、操作方法：
（1）组织脱蜡至蒸馏水
（2）醋酸缓冲贮备液洗2次
（3）入1 %硝酸银液中，56℃，1小时
（4）切片不水洗，直接放入预热的显影液中56℃，肉眼呈黄棕色为止。（5）倾去显影液，于56℃的水中浸洗2分钟
（6）水洗
（7）脱水，透明，封固。
3、结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。
Highman甲醇刚果红染色法（类淀粉染色）
1、试剂配制：
甲醇刚果红染液: 刚果红 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml
碱性乙醇分化液: 氢氧化钾 0.2 g 80%乙醇 100 ml
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至水
（2）甲醇刚果红染液染10～20分钟
（3）用碱性乙醇分化液分化数秒
（4）水洗
（5）苏木素复染2分钟
（6）水洗
（7）脱水,透明,封固
3、结果：淀粉样物呈桔红色。
4、类淀粉染色的应用：
确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织，后者在刚果红法染色后呈淡桔色，常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。
L
六胺银染色法1、试剂配制：
六胺银液配制：
3%六次甲基四胺水溶液 5 ml
2.5%硝酸银水溶液 0.5 ml
摇晃，变清，再加2.5%四硼酸钠1.5~2 ml加蒸馏水至30~40 ml
2、步骤：
（1）切片脱蜡至水，蒸馏水洗
（2）0.5%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗
（3）六胺银液60℃，1-2小时，（或六胺银液80-90℃，半小时左右）蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）
（4）0.2% 氯化金调色数秒
（5）丽春红淡染
（6）水速洗
（7）烘干，透明，封片。
3、结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。
M
Mallory 三色法1、步骤
（1）切片脱蜡至水
（2）0.5%酸性复红水溶液1 min
（3）蒸馏水洗
（4）入下液1-2min
苯胺蓝0.5g，桔黄G 2g，磷目酸或磷钨酸 1g，蒸馏水100ml。
（5）蒸馏水洗
（6）95%乙醇分色
（7）脱水，透明，封片。
2、结果：胶原纤维蓝色，红细胞桔黄色，核红色。
M allory磷钨酸～苏木素染色法（PTAH）
1、试剂配制：
苏木素 0.1 g 磷钨酸 2.0 g 蒸馏水 100 ml
先将苏木素加热溶于20毫升蒸馏水,再将磷钨酸溶于80毫升蒸馏水。等苏木素冷却后，加入磷钨酸溶液，混合，放置数星期后，才可使用。如急用，可加入0.2 g高锰酸钾,加速其成熟。
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）放入0.25%高锰酸钾水溶液5分钟。
（3）蒸馏水洗。
（4）2.5%草酸漂白5分钟。
（5）蒸馏水洗多次。
（6）置于磷钨酸苏木素溶液12～24小时。
（7）95%酒精快速分化，滤纸吸去剩余酒精，置60℃温箱中烘干。（8）二甲苯透明，封固。
3、结果：纤维胶质，肌胶质，神经胶纤维，纤维素，横纹肌等均染成蓝色。胶原，网状纤维和骨基质着黄色或砖红色。在工作中常用于观察横纹以证实肿瘤细胞是否有横纹肌分化特征。
Masson 三色染色法、
1、试剂配制：
丽春红酸性品红液：丽春红 0.7 g 酸性品红 0.3 g
蒸馏水 99ml 冰醋酸 1 ml
苯胺蓝液: 苯胺蓝 2 g 蒸馏水 98 ml 醋酸 2 ml
亮绿液：亮绿 0.2g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 0.2 ml
苦味酸酒精液:苦味酸在95%酒精中的饱和液 20 ml,加95%酒精10 ml 2、染色步骤：
（1）切片脱蜡至蒸馏水
（2）苏木素染5～10分钟
（3）盐酸酒精分化
（4）流水蓝化，蒸馏水洗(苏木素可不染)
（5）丽春红酸性品红液中染5～8分钟
（6）蒸馏水洗
（7）1% 磷钼酸中染1～3分钟
（8）不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟 (如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)
（9）水速洗，置60℃温箱中烘干，二甲苯透明,封固
3、结果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素红色。
4、注意：
（1）此法广泛用于胶原纤维和平滑肌的鉴别，也为肾组织活检，观察肾小球病变的重要染色法，常用于观察缺血病变的心肌。用于观察肾小球病变时，一定要用2um以下半薄切片。
（2）细胞核染色后分化很重要，观察控制着色程度。而HE染色则是最常用的一种常规染色方法，但无法区别胶原纤维和肌肉。
N
粘液染色
（一）PAS染色法
与染糖元的方法相同。
（二）AB(pH2.5)染色法
1、试剂配制：
爱先蓝8GX 1 g 蒸馏水 97 ml 冰醋酸 3 ml
核固红液: 核固红 0.1g 硫酸铝 5g 麝香草酚 50mg 蒸馏水 97ml
2、染色步骤:
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）爱先蓝液染10～20分钟
（3）蒸馏水洗
（4）核复染(核固红5分钟)，水洗
（5）脱水,透明,封固。
唾液酸及弱硫酸化粘液及一般粘液呈蓝色。常用于确定胞浆内空泡的性质，特别是当细胞呈现印戒样特征时。
J
甲基绿派洛宁法（改良Cook，1974）
1、试剂配制：
（1）2%甲基绿水溶液：
甲基绿（methyl green）1g
蒸馏水加至50ml
用三氯甲烷抽提，方法详后。
（2）5%派洛宁水溶液：
派洛宁G（pyronine G）1g
蒸馏水加至20ml
（3）0.2M醋酸盐缓冲液（pH 4.8）
0.2M醋酸液41ml
0.2M醋酸钠液59ml
（4）甲基绿派洛宁染液：
2%甲基绿水溶液（经抽提） 5ml
5%派洛宁水溶液 1ml
蒸馏水 12ml
0.2M醋酸盐缓冲液（pH 4.8） 18ml
甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末，属三苯甲烷染料，这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一种化合物。由于甲基化作用，甲基绿就比甲基绿后，所引进的甲基连接得并不牢固，容易从甲基绿中脱失。另一方面，在甲基化过程中，还有一部分结晶紫并没有生成甲基绿，因此，也有人认为甲中，常有少量的甲基紫或结晶紫成份。但是，也有人认为甲基紫乃是甲基绿的衰败产物，甲基绿在储存过程中，会不断产生甲基紫。因此，在配制试剂时，必须先将甲基绿所含的甲基紫或结晶紫抽提出来，才能使细胞核内的脱氧核糖核酸染成绿色。抽提方法是取2%甲基绿水溶液20ml倾入洁净分液漏斗，加入三氯甲烷20ml充分摇荡混合，使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞，慢慢把如此反复更换三氯甲烷，直到三氯甲烷无紫红色为止，即可得到得纯的甲基绿溶液。
2、操作步骤：
（1）新鲜组织固定于Carnoy氏液（4℃）3~6小时，经95%酒精和无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
（2）切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水。
（3）置入甲基绿派洛宁染液于室温染30~60分钟。
（4）取出切片，不经水洗，用滤纸吸干多余染液。
（5）用丙酮迅速分化。
（6）转入丙酮二甲苯（1:1）稍洗。
（7）二甲苯透明2~3次。
（8）中性树胶封固。结果：存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色，胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。
3、对照方法：
（1）取另一连续切片用核糖核酸酶（rihonuclease）1mg/1ml于37℃温箱内消化3小时，蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。
（2）切片在10%高氯酸（prechloric acid）于4℃处理12~18小时，水洗后用1%碳酸钠液中和2分钟，流水冲洗5分钟，再用蒸馏水洗后置入甲基绿派洛宁染液内染色。经上述方法之一处理后的切片就为阴性。
4、注意事项：
（1）组织不宜用甲醛固定，应选用Garnoy氏固定液，因为酒精和醋酸能较好地保存核蛋白。
（2）Garnoy氏液固定标本的时间不宜太长，超过一天则染色效果不理想。
（3）要注意试剂的质量，特别是派洛宁，常常不同批号的染料，染色的效果不同。甲基绿和派洛宁二者的比例要恰当。
（4）染色液的pH应为4.8左右，如pH过低，甲基绿染色效果差；pH
偏高，则派洛宁染色效果不良。
（5）丙酮分化时间要很好掌握，时间不宜太长。
（6）配妥的甲基绿派洛宁染液用后放冰箱保存，约可使用数周。
染色原理：对此法的染色原理，目前了解得还不够清楚，一般可从下面两方面理解。1、电离作用：脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。在一定的条件下，可以电离而带电荷，因此都有一定的等电点。甲基绿和派洛宁在水中电离后，都产生带阳电荷的离子。甲基绿电离后，在五价氮处产生二个正电荷，碱性较强。派洛宁电离后仅产生一个正电荷，碱性较甲基绿弱，在染色时二者进行竞争，碱性较强的甲基绿就与胞核（等电点pH3.8~4.2）进行极性吸着而结合，碱性较弱的派洛宁与胞质（等电点pH4.6~5.2）吸附结合。2、聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA有亲和力，派洛宁对聚合低的RNA有亲和力。因此，思虑在绿选染DNA，而派洛宁选染RNA。应用：PNA主要存在于胞质及核仁内，它主导细胞的蛋白质合成。在细胞增生，胞质蛋白质合成亢进时，核仁和胞质的PNA增加。因此，恶性瘤细胞核仁巨大，胞质嗜碱。浆细胞和免疫母细胞胞质合成免疫球蛋白，胰腺上皮合成胰蛋白酶。因此，这些细胞胞质有很强的嗜碱性。胞质嗜碱，是蛋白质合成增强的标志。
S
脂肪（苏旦Ⅲ）法
1、试剂配制：
苏旦Ⅲ 0.1～0.2 70% 酒精 100 ml
将苏旦Ⅲ置于70%酒精中,加热饱和,在未冷前过滤,静置一夜。
2、染色步骤：
（1）冰冻切片（8～10微米）。
（2）70%酒精固定1分钟。
（3）放入苏旦Ⅲ酒精溶液中20～30分钟。
（4）70%酒精洗去多余的染料。
（5）水洗。
（6）苏木素复染2～5分钟。
（7）1%盐酸酒精分化。
（8）水洗，蓝化,甘油封固。
3、结果：脂肪桔黄或红色。一般用于确定胞浆内空泡究竟是糖原，水变性还是脂滴。
P
高碘酸-六胺银-马休黄染色法(PASM-M)
1、试剂配制：
六胺银原液： 3 %六甲基四胺水溶液(乌洛托品) 20 毫升，5 %硝酸银水溶液 10 毫升。
六胺银工作液：六胺银原液30毫升，双蒸水 20毫升，5 %硼砂(四硼酸钠)2毫升。
核固红液：核固红0.1 克，5 %硫酸铝100毫升加热溶解，贮存饱和液待用。
马休黄液：马体黄 0.5 克，无水酒精 98 毫升，磷酸 0.2 克。
2、操作方法：
（1）常规脱蜡至水
（2）0.5%氧化20分钟
（3）蒸馏水洗3次
（4）浸入六胺银工作液中2小时左右(恒温58℃)
（5）蒸馏水洗3次
（6）0.2%氯化金1-2分钟
（7）蒸馏水洗2次
（8）核固红染色10-15分钟
（9）马休黄染色1分钟
（10）放入温箱烤干，二甲苯透明，中性树胶封固
3、结果：肾小球毛细血管基膜呈黑色，背景和红细胞呈黄色，细胞
核呈红色。
4、注意： 1、六胺银工作液现配现用，只能用一次。
2、第3步做完后可入5 %三氧化铬(铬酸)水溶液氧化40 分
钟，再用1 %亚硫酸钠除铬，背景可能效果更佳。
3、马休黄主要是染红细胞。用无水酒精中脱水，黄色的背景就脱掉，可直接放入
温箱或电吹风吹干，封片。
R
瑞氏－姬姆萨染色方法
1、试剂配制：
原料:A:瑞氏染粉0.8--1克；吉姆萨染粉0.5克
B:甘油33ml
C：甲醇500ml
配法：将A放入研钵中，加入少量B研磨，再加入少量B磨，再加入少量B磨……倒出，将未溶部分，继续加入B磨……>全溶，加入C，或中间加入C 亦可。
2、染色步骤：
滴数滴入玻片盖满标本，30秒，再加入双蒸水或PBS2-3倍染1-3分中，倾去染液，水洗……封片。
T
Trypan blue （台盘兰）排斥实验：
细胞悬液0.1ml加入0.4% Trypan blue生理盐水溶液0.1ml,混匀后滴在血球记数板上。存活率=不着色细胞数/细胞总数X100%
TTC方法：
TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应，生成红色的甲月赞，用来表示细胞的活力。配制多为2％，染色要避光，37度条件下，它是评价脑缺血损伤常用的指标。
V
Van Gieson法1、试剂配制：
饱和苦味酸水溶液（约1.22%） 150 ml
1%酸性品红 10 ml
两种溶液用前混合在一起。
2、染色步骤：
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）苏木素深染。（10～15分钟）
（3）Van Gieson中染半分钟。
（4）蒸馏水洗。
（5）置60℃温箱中烘干。
（6）二甲苯透明，封固。
3、结果：胶原纤维红色，肌纤维、胞浆、红细胞黄色。
4、建议：用稀释的Van Gieson液进行染色，不用95%的酒精分化，结果色泽鲜艳，而且着色均匀。
细菌的常用染色技术
细菌的常用染色技术 简单染色法：利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。例如番红。 1．涂片：用灼烧灭菌冷却后的接种环挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜。 2．干燥：可自然晾干，或将涂片置于火焰高处微热烘干，但不能直接在火焰上烘烤。 3．固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过迅速通过火焰2-3次（用手指触涂片反面，以不烫手为宜）。 4．染色：加适量(以盖满菌膜为度)结晶紫染色液(或石炭酸复红液)，染l～2min。5．水洗：用自来冲洗至流下的水中无染色液的颜色时为止。 6．干燥 7．镜检 复染色：利用用两种以上染料对细菌进行染色。例如革兰氏染色法。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，需要碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。 碱性染料初染液的象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine ）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95%的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，而且将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液为番红。 1.载玻片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，在火焰上加热以杀死菌种并使其粘附固定。 2.草酸铵结晶紫染1分钟。 3.自来水冲洗，去掉浮色。 4.用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。 5.用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色30秒，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。 6.用番红染液或者沙黄复染30秒，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。
细胞染色方法总结
Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！ 染色步骤 PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！ annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。 JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。 JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1～5mg/ml)，储存于-20℃，用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液，漂洗细胞后直接加入染色液，10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦 下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主，当红光信号增强时，红绿相叠，以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测，收集红/绿信号强度，计算其强度比。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
结缔组织染色法 1.1 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞 图表A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则
1.2. Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图吕纤维肉瘤 Masson法：胶丿京纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈黄色。3. 3X 10 图表B 1.2 Mssson三色法 图表C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌
1.3.显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞 图14 子宫组织 Weigert间苯二酚法*胶原纤维呈红色，血管壁弹力纤维呈蓝黑色，肌肉呈黄色° 3, 3X10 图表D 4.Weigert间苯二酚法
、胶原纤维染色法 2.2. Van Gieson (V.G)苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图5 卵巢组织 Van Gieson苏木嘉法^胶原纤维呈红色円血簣壁肌层呈黄色，细胞核是照色。3. 3X 1CI 图表E 2?胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞myocardial infarction :心肌梗塞后2个月，van Gieson染色,坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法（参照上图） 红色：胶原纤维 绿色：细胞核 黄色：其他天狼星红苦味酸染色法：（偏光显微镜）I型：强双折光性，呈黄色或红色纤维n型：弱双折光，呈多种色彩疏网状分布川型：弱双折光，呈绿色的细纤维w型：弱双折光的基膜，呈淡黄色
医学微生物学复习要点、重点难点总结
医学微生物学复习要点 第1章绪论细菌的形态与结构 名词解释 微生物：是一类肉眼不能直接看见，必须借助光学或电子显微镜放大几百或几万倍才能观察到的微小生物的总称。 医学微生物学：是研究与人类疾病有关的病原微生物的基本生物学特性、致病性、免疫性、微生物学检查及特异性防治原则的一门学科。 中介体：是细菌细胞膜向内凹陷，折叠、卷曲成的囊状结构，扩大膜功能，又称拟线粒体。多见于革兰阳性菌。 质粒：是染色体外的遗传物质，为双股环状闭合DNA，控制着细菌的某些特定的遗传性状。 异染颗粒：用美兰染色此颗粒着色较深呈紫色，故名。用于鉴别细菌。 荚膜：某些细菌在其细胞壁外包绕的一层粘液性物质。 鞭毛：细菌菌体上附有细长呈波浪弯曲的丝状物。鞭毛染色后光镜可见。菌毛：菌体表面较鞭毛更短、更细、而直硬的丝状物。电镜可见。 芽胞：某些细菌在一定的环境条件下，胞质脱水浓缩，在菌体内形成一个圆形或椭圆形的小体。 简答题 1.简述微生物的种类。 细胞类型特点种类 非细胞型微生物无典型细胞结构、在 活细胞内增殖 病毒 原细胞型微生物仅有原始细胞的核、 缺乏完整细胞器 细菌、放线菌、衣原 体、支原体、立克次 体 真核细胞型微生物有完整上的核、有完 整的细胞器 真菌 2.简述细菌的大小与形态。 大小：测量单位为微米（μm） 1μm = 1/1000mm 球菌：直径1μm 杆菌：长2~3μm 宽0.3~0.5μm 螺形菌：2~3μm 或3~6μm 形态：球形、杆形、螺形，分为球菌、杆菌、螺形菌。3.分析G+菌、G-菌细胞壁结构与组成特点及其医学意义。细菌细胞壁构造比较 G+菌G-菌 粘肽组成 聚糖骨架 四肽侧链 五肽交联桥 同左 同左 无 特点三维立体框架结构，强 度高 二维单层平面网络，强度 差 含量多，50层少，1~2层 其他成分磷壁酸外膜：脂蛋白、脂质双层、 脂多糖 医学意义： 1、染色性：G染色紫色（G+）红色（G-） 2、抗原性：G+：磷壁酸G-：特异性多糖（O抗原/菌体抗原） 3、致病性：G+：外毒素、磷壁酸G-：内毒素（脂多糖） 4、治疗：G+：青霉素、溶菌酶有效G-：青霉素、溶菌酶无效 4.简述L型菌的特性。 1、法国Lister研究院首先发现命名。 2、高度多形性，不易着色，革兰阴性。 3、高渗低琼脂血清培养基2-7天荷包蛋样、颗粒、丝状菌落。 4、具致病性，常在应用某些抗生素（青霉素、头孢）治疗中发生，且易复发。 5、临床症状明显但常规细菌培养（-），予以考虑L型菌感染 5.分析溶菌酶、青霉素、链霉素、红霉素的杀菌机制。 溶菌酶：裂解 -1,4糖苷键，破坏聚糖骨架。 青霉素：竞争转肽酶，抑制四肽侧链和五肽交联桥的连接。 以上两者主要是抑制G+菌。 链霉素：与细菌核糖体的30S亚基结合，干扰蛋白质合成。 红霉素：与细菌核糖体的50S亚基结合，干扰蛋白质合成。 6.为什么G-菌的L型菌比G+菌的L型菌更能抵抗低渗环境？ G+菌细胞壁缺陷形成的原生质体，由于菌体内渗透压很高，可达20—25个大气压，故在普通培养基中很容易胀裂死亡，必须保存在高渗环境中。G-菌细胞壁中肽聚糖含量较少，菌体内的渗透压(5—6个大气压)亦比G+菌低，细胞壁缺陷形成的原生质球在低渗环境中仍有一定的抵抗力。 7.叙述细菌的特殊结构及其医学意义。 荚膜：a、抗吞噬作用——为重要毒力因子 b、黏附作用——形成生物膜 c、抗有害物质的损伤作用 鞭毛：a、细菌的运动器官 b、鉴别细菌（有无鞭毛、数目、位置） c、抗原性——H抗原，细菌分型 d、与致病性有关（粘附、运动趋向性） 菌毛：普通菌毛：粘附结构，可与宿主细胞表面受体特异性结合，与细菌的致病性密切相关。 性菌毛：a、传递遗传物质，为遗传物质的传递通道。 b、作为噬菌体的受体 芽胞：a、鉴别细菌（有无芽胞、位置、大小、形状） b、灭菌指标（指导灭菌，以杀灭芽胞为标准） 8.分析细菌芽胞抵抗力强的原因。 1、含水量少（约40%）—繁殖体则占80% 2、含大量的DPA（吡啶二羧酸） 3、多层致密膜结构 第2章细菌的生理 名词解释 热原质：热原质（致热源），是细菌合成的一种注入人体或动物体内能引起发热反应的物质。产生热致源的细菌大都为格兰阴性菌，热原质即其细胞壁的脂多糖。 菌落：单个细菌分裂繁殖成肉眼可见的细菌集团。分为三型： 1.光滑型菌落 2.粗糙型菌落
细胞染色方法
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)的配制 贮存液：70%酒精溶解，浓度100 μg/ml，配好后用锡纸包起来，避光，可在4摄氏度下长期保存。 使用浓度：贮存液用1xPBS稀释1000倍，最终浓度100 ng/ml。 10x PBS的配制 80 g NaCl 2 g KCl g 无水Na2HPO4 2 g 无水KH2PO4 加水到1000ml 贮存液可根据需要用蒸馏水稀释 荧光封片液 mol/L碳酸盐缓冲液与甘油等体积混合， 染色与观察： 制好的玻片上滴加几滴DAPI染液，染色10分钟，流水冲去染液，滤纸吸除多余水分，加一滴荧光封片液，置于荧光显微镜下观察，激发波长360-400nm.
注意事项： DAPI可能具有致癌性，全部操作过程中必须带塑料或乳胶手套。 上：正常绍鸭成纤维细胞核，下：凋亡核 Lyso-Tracker Red是一种溶酶体(lysosome)红色荧光探针，可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。 Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND 99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。 Lyso-Tracker Red呈红色荧光，检测时的最大激发波长为577nm，最大发射波长为590nm。 按照1:20000的比例稀释，可以配制1000ml Lyso-Tracker Red工作液。 可用于家蚕脂肪体细胞autophage监测。见李胜文章。
各种染色技术总结
一、原理： 1、革兰氏染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 2、芽孢染色法的原理: 芽孢又叫内生孢子(endosopre)，是某些细菌生长到一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鉴定细菌的依据之一。 芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basic fuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可进入菌体，而且也可进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 3、荚膜染色法的原理:荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。所以通常用衬托染色法（负染）染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，
细胞固定、染色原理与方法
细胞固定、染色原理与方法 一、固定与固定液 (一)固定：将新鲜的活组织从生物体取下后，立即投入固定剂中，借助化学药品的作用，使细胞保持原有形态、结构的一种手段。 1.目的 (1)迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败，尽量保持生长状态结构。 (2)使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。 (3)使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定。 (4)使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。 (5)防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。 2.时期 (1)有丝分裂：有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织，根尖取材容易，操作和鉴定方便。 (2)减数分裂：选取适当大小的花蕾是观察花粉母细胞减数分裂的关键性的第一步。此时的植株形态及花蕾大小依植物的类别及品种有所不同。 小麦：在植株开始挑旗，旗叶与下一叶的叶耳间距为3-4cm，花药长度大致在1-2mm左右，黄绿色时取材最好。如花药为绿色时则为时过早，花药为黄色，则已过时。一般上午8-10点为取材最佳时间。 玉米：一般夏玉米在7月份取材，以上午7-8点为好。在玉米雌穗未抽出前的7-10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松软感觉，表明雄花序即将抽出。用刀在顶叶近喇叭口处纵向划一刀，切口长10-15cm，剥出雄花序，顶端花药长3-5mm，花药尚未变黄时取材。 蚕豆：从现蕾开始，上午10-11点可选取2-3mm大小的花蕾或一小段花序。蚕豆开花的次序是由下而上，由外而内。 3.固定时的注意事项 (1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。 (2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。 (3)固定的时间要合适： 与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。 经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。 (二)固定液固定液包括简单固定液和混合固定液两种。简单固定液就是用一种药品作为固定液，如乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞等。简单固定液只对细胞的某种成分固定效果较好，而不能将所有的成分都保存下来。混合固定液是指两种或两种以上的化学物质的混合液，如卡诺氏固定液等。 1.固定液的条件 (1)迅速渗入组织,杀死原生质。在杀死的短时期中,细胞形态不致有所变化。 (2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。 (3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。 (4)使细胞内的成分凝固或沉淀。 (5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。
病理学技术—特殊染色最最全总结
结缔组织染色法 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则 . Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表 B Mssson三色法 图表 C 三色染色胃癌组织中血管平滑肌 . 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞
二、胶原纤维染色法 . Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)
黄色：其他 三、网状纤维染色 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）
黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 Gomori氏银氨液配制法 图表 G Gomori氏银氨液配制法 四、弹性纤维染色 Gomori醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳 图表 H 醛复红染色法 五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 黄色：背景
六、肌肉组织染色 △横纹肌组织染色 Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH） 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维（有时） 紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌 图表 J .磷钨酸苏木素法 图表 K .磷钨酸苏木素染色液 △早期心肌病变组织染色 染色法（1974年）
组织染色总结
组织染色总结1.HE染色 原理：苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 应用：观察组织形态,或鉴别坏死/凋亡细胞。 2.Masson染色/ Van Gieson染色 原理：染色原理与阴离子染料分子的大小和组织的渗透有关，小分子量易穿透结构致密、渗透性低的组织；而大分子量则只能进入结构疏松、渗透性高的组织。 应用：区分胶原纤维和肌纤维。 3.EVG染色 原理：VERHOEFF’S VAN GIESON染色，简称EVG染色，组织被含有三氯化铁和碘的苏木精染色后,再用过量的媒染剂(三氯化铁)中断组织与染料的结合。染料被分化液中的大量媒染剂吸引,使其从组织中清除。弹性纤维对铁苏木精具有较强的吸引力, 使染料能比其他组织保留更久。 应用：观察血管弹性纤维的形态及变化。 4.天狼猩红染色 原理：天狼猩红和其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸附牢靠。偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼猩红染色液结合后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。 应用：观察组织纤维化程度，以偏振光进行胶原亚型的分区。 5.VonKossa染色 原理：组织切片以硝酸银处理，钙可被银沉积物替换，由强光还原为可见的金属银。 应用：观察组织内病理性钙沉积情况。 6.红油O染色 原理：油红O为脂溶性染料,在脂肪内能高度溶解,可特异性的使组织内甘油三酯等中性脂肪着色。 应用：主要对组织内脂质（如脂滴）染色。
7.PAS染色 原理:PAS染色（Periodic Acid-Schiff stain）又称过碘酸雪夫染色或糖原染色。过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色，沉着于含糖原的细胞结构上。 应用：观察肝脏、肌肉等组织内糖原的变化；观察肠、胃、肺、支气管等杯状细胞酸性粘液物质变化。 8.阿利新蓝染色 原理：阿利新蓝（Alcian）为类铜钛花青共轭染料，可与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。 应用：常用于软骨组织或早幼粒细胞、巨核细胞染色，可鉴别酸性黏蛋白（硫酸黏蛋白和唾液黏蛋白）、蛋白多糖和透明质酸等成分。 9.甲苯胺蓝染色 原理：甲苯胺蓝为醌亚胺染料，甲苯胺蓝中的阳离子可与组织细胞的酸性物质结合而呈蓝色。 应用：观察软骨组织形态或组织内肥大细胞的数量及分布。 10.尼氏染色 原理：Nissl染色液(Nissl Staining Solution)的有效成分是碱性染料焦油紫(Cresyl violet)，其和RNA或DNA结合后，可染色粗面型内质网上的核糖体，也可染色细胞核，使其呈现斑驳的蓝紫色。 应用：观察脑或脊髓等中枢神经系统内神经元尼氏体的变化。 11.LFB髓鞘染色 原理：Luxol fast blue（LFB，罗克沙尔坚牢蓝）属铜-酚箐燃料，在乙醇溶液中可与髓鞘磷脂特异性结合。 应用：观察神经髓鞘的形态及变化。 12.普鲁士蓝染色 原理：亚铁氰化钾溶液可使三价铁离子从蛋白质中被稀盐酸分离出来，三价铁与亚铁氰化钾反应，生成一种不溶解的蓝色化合物亚铁氰化铁（普鲁士蓝）。 应用：常用于吞噬细胞内三价铁盐的含量测定和定位。 13.番红-固绿染色
食品微生物学考试答案总结
第一章绪论 微生物有哪五大共性? 1、体积小、比表面积大 2、吸收多、转化快 3、生长旺、繁殖快 4、适应强、易变异 5、分布广、种类多 什么是微生物、微生物学？学习微生物学的任务是什么？ 微生物：一群体形、构造简单的低等生物的总称。微生物学：研究微生物及其生命活动规律的科学。研究食品微生物的任务： 1、研究与食品有关的微生物的生命活动的规律2、研究如何利用有益微生物为人类制造食品3、研究如何控制有害微生物，防止食品发生腐败变质4、研究检测食品中微生物的方法，制定食品中的微生物指标，从而为判断 食品的卫生质量而提供科学依据。 简述微生物在工业生产中的应用？ 微生物在食品中的应用： 1、微生物菌体的应用：食用菌就是受人们欢迎的食品；乳酸菌可用于蔬菜和乳类及其他多种食品的发酵，所以，人们在食用酸牛奶和酸泡菜时也食用了大量的乳酸菌；单细胞蛋白（SCP）就是从微生物体中所获得的蛋白质，也是人们对微生物菌体的利用。2、微生物代谢产物的应用：人们食用的食品是经过微生物发酵作用 的代谢产物，如酒类、食醋、氨基酸、有机酸、维生素等。 3、微生物酶的应用：如豆腐乳、酱油。酱类是利用微生 物产生的酶将原料中的成分分解而制成的食品。微生物酶制剂在食品及其他工业中的应用日益广泛。 什么是“科赫原则” 为证明某种特定细菌是某种特定疾病的病原菌这个原则的主要要点： 1、在所有病例中都能发现这种病菌2、把这种病菌从病原体中分离出来，并完成纯培养3、将纯菌接种给健康动物，能引起相应的疾病4、在接种纯菌而致病的动物身上，仍能取得同种病菌，并仍能在体外实现纯培养。 我国学者汤飞凡教授的（2）分离和确证的研究成果，是一项具有国际领先水平的开创性成果。 （1）鼠疫杆菌（2）沙眼病原体（3）结枋杆菌（4）天花病毒 表示微生物大小的常用单位为：（B） Ａmm Ｂμm Ｃcm Ｄ m 第二章原核微生物 微生物包括的主要类群有原核微生物、真核微生物和非细胞微生物。 细菌的基本形态有球状、杆状和螺旋状。 细菌的特殊构造有荚膜、鞭毛、菌毛和芽孢等。 革兰氏染色的步骤分为初染、媒染、脱色和复染，其中关键步骤为脱色；而染色结果G-为红色、G+为紫色，如 大肠杆菌是革兰氏阴性菌、葡萄球菌是革兰氏阳性菌。 G+细胞壁的主要成份是肽聚糖和磷壁酸。 放线菌是一类呈菌丝生长和以孢子繁殖的原核生物，其菌丝有基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种类型。 菌落（colony）：由单个或少量细胞在固体培养基表面繁殖形成的、肉眼可见的子细胞群体。 芽孢：某些细菌生长到一定阶段，在细胞内形成的一个圆形、椭圆形的、对不良环境条件具有较强抵抗能力的休眠体。 放线菌：一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的原核微生物。 立克次氏体：一类大小介于通常的细菌与病毒之间，在许多方面类似细菌，专性活细胞内寄生的原核微生物。 蓝细菌（Cyanoobacteria）：一大类群分布极广的、异质的、绝大多数情况下营产氧光合作用的、古老的原核微生物。支原体：是一类无细胞壁，介于独立生活和活细胞内寄生的最小型原核微生物。 鞭毛：某些细菌表面生有一种纤长而呈波浪形弯曲的丝状物。 伴孢晶体：在芽孢旁伴生的菱形碱溶性的蛋白质晶体。 在使用显微镜油镜时，为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加:：C A.二甲苯 B.水 C.香柏油 G-菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是（4） （1）支原体；（2）L型细菌；（3）原生质体；（4）原生质球 产甲烷菌属于（1） （1）古细菌；（2）真细菌；（3）放线菌；（4）蓝细菌 在下列微生物中（2）能进行产氧的光合作用 （1）链霉菌；（2）蓝细菌；（3）紫硫细菌；（4）大肠杆菌
细胞各种染色方法
细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。 第一节培养细胞的常规检查和观察方法 细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。细胞常规检查观察的内容为： 一、肉眼观察 一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3～4天换液一次。培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长，甚至死亡。细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。贴壁细胞培养时若出现混浊，多为污染。悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。 二、显微镜观察 生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大，折光性强，轮廓不清。相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构。若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落，有时细胞表面及周围出现丝絮状物。若细胞营养不良状况没有得到及时纠正，进一步发展可见到部分细胞死亡，崩解漂浮在培养液中。发现这种情况应及时处理，只有生长良好的细胞才能进行传代培养和实验研究。 三、细胞的生长状态 细胞培养时，经初代培养或传代培养，都有一长短不同的潜伏期，在培养过程中注意观察细胞增殖生长的状态极为重要。各种细胞增殖的时间不尽一致。传代细胞系，胚胎组织或幼体细胞潜伏期短，一般在接种培养第二天即可见细胞生长增殖，3～4天便可连接成片。成体组织的潜伏期长，老年组织和癌组织潜伏期更长，可达一周左右。原代细胞培养中最先可见从组织块中边缘“长出”细胞，这种细胞是从原代组织块中游走出来的，并不是细胞增殖产生。这种早期游出的细胞多以成纤维细胞为主，其易生长，适应性强，呈放射状或旋涡状分布，很快生长并互相连接成网状。传代细胞在传代后，一般经过悬浮、贴壁伸展很快进入潜伏期，对数生长期，细胞大量繁殖，逐渐相连成片而长满瓶底。一旦发现细胞长满瓶底80%就应及时传代，否则会影响细胞生长甚至脱落。悬浮细胞当发现生长显著、密度增大、分布稠密、培养液变黄时也应及时传代。 四、微生物污染 细胞接种、传代、换液加药后应经常观察，密切注意是否有微生物污染发生。一旦发现培养液混浊、液体内漂浮着菌丝或细菌，或生长明显变缓，胞质内颗粒增多，有中毒表现等
微生物学终极总结
第一章绪论 一、什么是微生物？一类形体微小、单细胞或个体较为简单的多细胞，甚至无细胞结构的低等生物的统称。 二、微生物几个基本特性。1、体积小、面积大。2、微生物的种类多。3、在自然界中分布极为广泛。4、生长旺，繁殖快。5、适应性强，易变异 三、微生物学发展简史分几个阶段，其中代表人物是谁？主要做了什么贡献？微生物的利用与发现：酿酒 1）时间：1676~1861 开创者：安东?列文虎克（Antony Leeuwenhoek )。 特点：自制单式显微镜观察细菌；微生物形态描述 微生物学及食品微生物学的建立 1）巴斯德（Luise Pasteur）贡献：A、彻底否定了“自生说”学说。B、免疫学——预防接种。C、证实发酵是由微生物引起的。D、其他贡献：巴斯德消毒法等。 2）柯赫（Robert Koch）的贡献：A、微生物学基本操作技术的贡献：a）细菌纯培养方法的建立。b）设计了各种培养基，实现了在实验室内对各种微生物的培养。c）蒸汽灭菌。d）染色观察和显微摄影。B、对病原细菌研究作出了突出贡献：a）具体证实了炭疽杆菌是炭疽病的病原菌；b）发现了肺结核病的病原菌；c）证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——著名的柯赫原则。 四、日常生活中与食品生产、储藏、变质等有关的微生物问题。 1）防止食品腐败变质的方法：防止食品腐败变质常用的方法；各类方法的适用
范围、效果、影响因素； 2）微生物引起的食品腐败变质现象及其机理：微生物引起各类食品的变质现象；微生物引起食品变质相关的内因、外因及其相互的联系；微生物引起食品腐败变质的机理。 第二章微生物的形态、结构与功能 一、细菌 形态：球状、杆状、螺旋状 结构：基本结构和特殊结构。 基本结构：细胞壁、细胞质膜、细胞质，间体，核糖体，核，内含物颗粒。 特殊结构：芽孢、鞭毛、荚膜。 一）细胞壁： 1、化学组成：G＋（肽聚糖，磷壁酸）；G-（肽聚糖，脂蛋白、脂多糖）；重点是肽聚糖的结构、G+ 与G- 壁结构差异及革兰氏染色机理。 2）肽聚糖(peptidoglycan )分子由肽和聚糖组成。肽包括短肽尾和肽桥两种，而聚糖由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸两种单糖连接而成。 3）革兰氏染色机制 第一步：结晶紫使菌体着上紫色。 第二步：碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。
Hoechst染色方法
Hoechst染色方法 实验步骤 1．贴壁细胞 1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片至于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%——80%满。 2)刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 3) 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。 4) 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。 5) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。 6) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡，使细胞接触封片液，切勿弄反。 7) 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 2. 悬浮细胞 1) 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。 2) 离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动。 3) 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。 4) 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。 5) 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。 6) 用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。 7) 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。 8) H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
染色方法总结
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
染整拉毛年终总结
染整拉毛年终总结 织物的染整工艺词释 桃绒感处理工艺:是指某种丝织物特别柔软的感觉以及获得这种感觉的处理工艺. 烧毛处理工艺:指一种用于除去未缠绕纤维和突起纤维在纱线表面所形成的茸毛的处理办法. 起绒处理工艺:一种通过旋转,表面带有用于割断织物表面纤维的针刀的滚轮,使织物其毛的处理工艺.丝光处理工艺:用氢氧化钠溶液对纯棉或高含棉量的纱线和织物进行处理以增加其表面光泽的工艺. 上浆处理工艺:通过使用特殊物质以增加布料韧性和光泽的处理办法.蜡染处理工艺:一种用于产生类似传统的爪洼蜡染印花布效果的印染办法.波纹工艺:使用不同压力的轧辊对织物进行压轧以获得波纹效果的工艺.轧光处理工艺:用表面展平和熨平的办法使织物具有特殊光泽的处理办法. 拉毛处理工艺:对经过竖毛处理后的长毛绒类织物所进行的以产生类似于动物毛的织物表面效果的处理工艺.石洗处理工艺:最初是对于制造牛仔服和运动外套的粗斜纹布所进行的处理工艺.现推行到其它织物,用以产生一种“饱经风霜”的特殊效果。 水洗处理工艺：使织物产生一种古旧，褪色的外观感觉的处理工艺。
环染处理工艺：是一种对于表面光滑的丝织物以类似于树干年轮的同心圆方式进行染色的一种工艺。打褶处理工艺：用于制造不同形式（阳光状或风琴状）的缩褶或起泡织物的工艺。 压皱处理工艺：对于制造年轻人时髦的织物进行的处理工艺。 防皱处理工艺：用于制造无皱织物的物理或化学的处理工艺。 技术性整理工艺：技术性整理工艺的目的不仅在于用一般的处理工艺。如：软化处理，防皱处理，防缩处理等来增强织物的性能；而且可用于特殊处理工艺，如：防霉处理，防腐处理，斥油处理等来增强用于特殊目的的织物的性能，这些性能可达到很高的技术水平。例如：经过抗静电处理的织物可以消除因摩擦而产生的静电而适合于实验中使用；而经过阻燃处理的织物可用于体育活动或具有危险性的工作。 简介几种功能性纺织品的加工整理方法 抗静电加工整理防水透湿加工整理防水拒油整理抗菌仿臭整理 阻燃整理防紫外线整理防电磁辐射整理发泡涂层整理有机硅涂层整理 浅谈一些新型纤维: 随着经济的发展，科技的发达。人们对纺织品的需求从量到质，来了一个根本的大转变。从过去的棉，麻，丝，毛到复合纤
细菌的简单染色
实验二细菌的简单染色、革兰氏染色 虽然各种类型的显微镜能够观察到微生物的各种形态结构，但一般实验室常用的是普通光学显微镜。由于细菌体积小且透明，在活体细胞内又含有大量的水分，因此，对光线的吸收和反射与水溶液相差不大。当把细菌悬浮在水滴内，放在显微镜下观察时，由于与周围背景没有显著的明暗差，难于看清它们的形状，更谈不上识别其细微结构。而经过染色，就可借助颜色的反衬作用比较清楚地看到菌体形态，亦即菌体表面及内部结构着色与背景形成鲜明对比，这样便可在普通光学显微镜下清晰地观察到微生物的形状和结构，而且还可以通过不同的染色反应来鉴别微生物的类型和区分死、活细菌等，因此，微生物染色技术是观察微生物形态结构的重要手段。 本实验通过对细菌的染色观察，使同学们在掌握细菌染色技术的基础上，了解各种其他的染色制片技术；观察微生物的各种形态结构，以巩固课堂知识，增强感性认识。 一、目的要求 1．学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的单染色方法及无菌操作技术。 2．巩固显微镜的使用方法。 二、基本原理 1.简单染色法：所谓单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形态的观察。 在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，所以常用碱性染料进行染色。碱性染料并不是碱，和其他染料一样是一种盐，电离时染料离子带正电，易与带负电荷的细菌结合而使细菌着色。例如，美蓝（亚甲蓝）实际上是氯化亚甲蓝盐，它可被电离成正、负离子： 带正电荷的染料离子可使细菌细胞染成蓝色。常用的碱性染料除美蓝外，还有结晶紫（crystal violet）、碱性复红（basicfu-chsin）、番红（又称沙黄，safranine）等。 细菌体积小，较透明，如未经染色常不易识别，而经着色后，与背景形成鲜明的对比，使易于在显微镜下进行观察。 2.革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。 G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染
PI染色检测细胞周期实验步骤
protocol：PI染色检测细胞周期 1、收集细胞：胰酶（含EDTA）消化收集对数生长期细胞（加热处理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有0.5-2×10*6个），吸取旧培养基到一个新离心管里；少量常温PBS（根据培养皿大小决定量，PBS洗可以保证消化效率）洗2次，清洗的PBS也要收集到上述离心管内【检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的PBS】；然后胰酶消化（注意一定要消化完全，显微镜下观察细胞呈单个，而不是成片脱落）后利用旧培养基中和胰酶；离心(1000r/300g5min)收集细胞沉淀。 2、用预冷的PBS清洗细胞两次。 3、固定细胞：用0.5ml预冷的PBS重悬细胞沉淀，使细胞充分悬浮成单细胞，再将重悬细胞加入1.2ml预冷的99.7%无水乙醇(乙醇终浓度70%)，吹打混匀以免细胞团聚，4℃固定2H至过夜。 4、细胞染色：离心（1000r/300g5min）收集固定的细胞，以1.8 mL的PBS洗细胞一次，离心(第一次实验时用7000rpm才把细胞离心下来，但最后流式结果显示细胞没有碎)再次获取细胞沉淀后加入1 00μlRNaseA于37℃水浴30min，最后加入400μlPI避光染色30 min（常温或4℃均可） 【有的试剂盒说明是：每个样本加入500uL染色剂（据样本数，用P BS临时配好总量，其中PI 50ug/ml、RNase A 100ug/mL、Triton X-100 0.2%）4℃避光染色30分钟】 5、流式分析
以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。分析时，使用FL2-w和FL2-A显示，去除联体细胞。