血常规操作规程

血常规检验

一、【检验方法】：CD—1700 血细胞分析仪

二、【原理及意义】：

（一）Hb

1、原理：

红细胞被溶血素溶解，释放出血红蛋白，血红蛋白被SLS的亲水性的烷基部分所改变，由亚铁血红蛋白形态转变为高铁血红蛋白形态，形成SLS-Hb的正铁血红蛋白化合物，在555nm处有吸收峰，通过仪器内部的比色系统比色，可以测定Hb的浓度。该方法利用了氧化血红蛋白法和氰化血红蛋白法的优点。一方面，SLS-Hb法具有和氧化血红蛋白法一样的检测快速、无毒性成分的优点；另一方面也具有氰化血红蛋白法检测结果精确、重复性好的特点。

（二）RBC、MCV、MCH、MCHC、HCT、RDW-CV、RDW-SD

1、原理：

血液被稀释液稀释后，细胞一个一个通过狭缝，狭缝内外是有直流电的电解质环境，当细胞通过时会引起瞬时的电位变化，形成电脉冲，电脉冲的个数反应细胞的个数，大小反应细胞的大小。细胞体积在一定范围内划为红细胞；在某个范围划为血小板。同时通过仪器内部的数据分析系统换算出MCV、MCH、MCHC、Hct和统计学处理得出RDW-CV、RDW-SD 分析数据。

（三）WBC计数、及其分类

1、原理（电阻检测法）：

仪器吸取样本，用一定量的试剂和稀释液稀释后，让白细胞一个个依次通过计数池的微孔，利用细胞通过微孔时瞬间的电阻变化产生脉冲电流而计数。脉冲信号经放大、甄别后，微机处理数据得到其体积分布直方图。

淋巴细胞群为：35-90fl

中间细胞群为：90-160fl

粒细胞群为：160-300fl

三、【试剂品牌】：

1、稀释液：Sandem 氯化钠6.38g/L

硼酸1.0g/L

四硼酸钠0.2g/L

EDTA-2K 0.2g/L

2、Hb溶血素：SULFOLYSER(SLS-200A)

月桂洗硫酸钠 1.7g/L

3、清洗液：SANDEM CELLCLEAN

STACCLEANER-SYS

次氯酸盐 5%

4、抗凝剂： KEDTA·2HO（1.5-2.2mg每毫升血液）

四、【仪器】：

CD—1700 血细胞分析仪

五、【操作步骤】：

㈠开机：

1.插上电源，打开CD—1700 血细胞分析仪电源开关

2.仪器进入自动检测系统，自动检测各系统参数，同时测定本底参数。

3.当仪器显示窗口出现“Run Ready，说明仪器处于待测标本状态，进行血液质控品测试,

通过后可以正常测定血常规标本。

4.打开中文报告处理电脑和打印机，进行中文处理系统,登录.

㈡关机：

1.仪器使用完毕，依次按”main”,”special protocol””more”进入””start clean”将清洗液置于针下,

按键开始吸样,约十分分后清洗完毕,再按“Shut Down”键。

2.自动血细胞计数仪进入自动冲洗状态，当自动血细胞仪显示窗口出现“stand by”时可以

安全关机，关闭仪器开关，关闭电脑。

㈢血细胞分析仪的保养（每周一次）

1.按“main”键,选择drain bath项，按键进入,然后再按一次充满,。

2.选择“start clean”项，按键。

3.,在“RBC”和“WBC”计数池中各加1毫升专用清洁液，浸泡十分钟

4.按“main”键,选择drain bath项,再按一次,再按”clear orifice”,仪器自动清洁保养。

5.仪器表面需经常擦洗，保持仪器整体清洁。

㈣每日质控

在每天样本检测前，取专用血液质控品做质控，并做好登记。若检测结果均在范围内，则可进行样本检测，若有失控出现，则需重新定标。

六、【参考范围】：

1．(1)白细胞(WBC)计数：成人(4 –10)×109/L

儿童(5 -12) ×109/L

新生儿(15-20) ×109/L

(2)白细胞分类(成人)：中性粒细胞 50-70%

淋巴细胞 20-40%

嗜酸性粒细胞 0.5-5%

嗜碱性粒细胞 0-1%

单核细胞 3-8%

2．红细胞(RBC)：男(4-5.5) ×1012/L

女(3.5-5) ×1012/L

新生儿(6-7) ×1012/L

3．血红蛋白(HGB)：男120-160g/L

女110-150g/L

新生儿170-200g/L

4．血小板(PLT)：(100-300) ×109/L

5．血球压积(HCT)：男0.42-0.49 L/L

女0.37-0.43 L/L

6．平均红细胞体积(MCV)：82-95fl

每升血液中血细胞比容（L/L）×1015

MCV（fl）=

每升血液中红细胞总数

7．平均红细胞血红蛋白含量(MCH)：27-31pg

MCH （g/L ）=

每升血液中血红蛋白浓度（g/L ）

每升血液中红细胞总数

8． 平均红细

胞血红蛋白浓度(MCHC)：320-360g/L

9．RDW-CV 、RDW-SD ： RDW-CV ：11.6%-14.0%；

RDW-SD ：39.0-46.0fL 。

10．PDW （15.05-18.1）%

MPV (9.4-12.5)fl ；

P-LCR (13-43)％。

七、【临床意义】：

1．白细胞

（1） 白细胞计数

①生理性增加新生儿、运动、饭后、冷水浴后、疼痛、月经期、受寒、妊娠、分娩、阵发性心动过速、阳光或紫外光照射、抽搐、恶心、呕吐、麻醉等。

②病理性增加类白血病、白血病、急性化脓性细菌感染、急性溶血、急性失血、单核细胞增多症、淋巴细胞增多症、真性红细胞增多症、腮腺炎、病毒性肝炎、淋巴瘤、组织坏死、手术后、肿瘤转移、药物中毒、代谢性酸中毒、过敏等。

③减少伤寒、副伤寒、斑疹伤寒、兔热病、布鲁杆菌热、流感、麻疹、风疹、革登热、传染性肝炎（亦可增多）、疟疾、过敏性休克、系统性红斑狼疮、粟粒性结核、败血症、重症细菌感染、恶液质、放射治疗、肿瘤化疗。恶性贫血、非白细胞性贫血、再生障碍性贫血、脾功能亢进、戈谢病、Felty 综合症、Che ^diak-Higashi 综合症、阵发性睡眠性血红蛋白尿症等。

（2） 白细胞分类计数：见下表

各种白细胞增多、减少的临床意义

细胞类别 增多 减少

MCHC （g/L ）=

每升血液中血红蛋白浓度（g/L ）

升血液中血细胞比容（L/L ）

中性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细胞

单核细胞类白血病、白血病、化脓性细胞感染、

溶血性贫血、急性出血、急性溶血、

手术后、恶性肿瘤、组织损伤、皮肤

病、真性红细胞增多症、脾切除术后。

参见嗜酸性粒细胞计数

慢粒、何杰金病、癌转移、铅和铋中

毒等。

百日咳、传染性单核细胞增多症、淋

巴细胞性白血病、传染淋巴细胞增多

症、病毒性肝炎、弓形虫病

单核细胞性白血病、系统性红斑狼

疮、亚急性细菌性心内膜炎、活动性

结核、急性感染恢复期、原虫感染

伤寒、副伤寒、流感、麻疹、再生障

碍性贫血、黑热病、病毒感染、原虫

感染、病毒性肝炎、脾功能亢进、贫

血、原发性中性粒细胞减少症、肝硬化

急性感染、粟粒性结核、晚期肿瘤、

艾滋病、伴T淋巴细胞减少的免性缺

陷

使用皮质类固醇激素、再生障碍性贫

血、多毛细胞白血病.

2．红细胞(RBC)：

①生理性减少见于妊娠中后期、6个月至2岁的婴儿等。

②病理性减少造血原料不足、造血功能障碍、红细胞破坏过多或失血所引起的各种贫血。

③相对性增多主要因血浆容量减少所致，见于脱水、呕吐、腹泻、多尿、多汗、大面积烧

伤、吸烟、高血压、肥胖等。

④代偿性增多主要见于缺氧、新生儿、高原环境、CO中毒、严重肺气肿、肺源性心脏病、

先天性心脏病、心衰等。

⑤绝对性增多克隆性真性红细胞增多；非隆性红细胞增多，与促红细胞生成素产生过多有关，见于肾癌、肝细胞癌、雄激素分泌细胞肿瘤、肾囊肿、肾盂积水、肾移植、小脑血管瘤、子宫肌瘤。

3、血红蛋白(Hb)：

生理性增加：新生儿、高原居住者。

病理性增加：真性红细胞增多症、代偿性红细胞增多症（如先天性青紫性心脏病、慢性肺性疾病、脱水）。

减少：各种贫血、白血病、产后、手术后、大量失血。

4．红细胞比积(HCT)：与红细胞计数、血红蛋白测定的意义类同。

5．血小板(PLT)：

（1）生理性正常人血小板在一天内可有6%-10%变化；表现为早晨低，午后较高；春季低，冬季略高；平原较低，高原较高；静脉血比毛细血管血高10%；月经前低，后升高；

妊娠中晚期升高，分娩后减低；运动后升高，休息后恢复。

（2）病理性

减少：除创伤之外，血小板减少是引起出血的常见原因。常见疾病有：①、血小板生成障碍，如急性白血病、再生障碍性贫血；②、血小板破坏过多，如ITP、脾功能亢进，系统性红斑狼疮；③、血小板消耗过多，如DIC、血栓性血小板减少性紫癜。

增多（血小板大于400×109/L）：①、骨髓增生性疾病：慢性粒细胞白血病，真性红细胞增多症；②、原发性血小板增多症；③、急性大出血，急性溶血，急性化脓性感染；④、脾切除手术后。

6．MCV、MCH、MCHC

主要用于贫血的形态学分类，见下表:

贫血的形态学分类

MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）

大红细胞性贫血

正红细胞性贫血

单纯小细胞性贫血小细胞低色素性贫血100-160

80-100

72-80

50-80

35-50

27-35

21-26

12-30

310-370

310-370

300-370

240-300

7．RDW-CV、RDW-SD：

(1)用于缺铁性贫血的诊断和疗效观察，缺铁性贫血时RDW增大，经治疗后可恢复正常。

(2)用于小细胞低色素性贫血的鉴别，缺铁性贫血时RDW增大，而轻型珠蛋白生成障碍性

贫血时RDW正常。

(3)RDW与MCV结合可将贫血分为6种。①小细胞均一性：MCV下降，RDW正常，如轻型

珠蛋白生成障碍性贫血。②小细胞不均一性：MCV下降，RDW增大，如缺铁性贫血。③正

常细胞均一性：MCV 、RDW 均正常，如某些慢性疾病。④正常细胞不均一性：MCV 正常，RDW 增大，如早期缺铁性贫血。⑤大细胞均一性：MCV 增大，RDW 正常，如再生障碍性贫血。⑥大细胞不均一性：MCV 、RDW 均增大，如巨幼细胞性贫血。

8．MPV 、PDW 、P-LCR ：

①MPV 其临床意义要结合PLT 的变化才有价值。①、鉴别血小板减少的原因：当骨髓造血功能损伤致血小板减少时，MPV 减少；当血小板在周围血液中破坏增多时，导致血小板减少，MPV 增大；血小板分布异常致血小板减少时，MPC 正常。②、MPV 增大可作为骨髓造血功能恢复的较早期指征：骨髓造血功能衰竭时，MPV 与PLT 同时持续下降；造血功能抑制越严重，MPV 越小；当造血功能恢复时，MPV 增大常先于PLT 升高。③、其它：MPV 增大见于骨髓纤维化、ITP 、血栓性疾病及血栓前状态、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、镰刀细胞性贫血；MPV 减小见于脾亢、化疗后、AA 、巨幼细胞性贫血等。 ②PDW 是反映血小板体积大小的异质性参数，增大见于急淋化疗后、巨幼细胞性贫血、脾切除、慢粒、巨大血小板综合症、血栓性疾病等；可用于鉴别原发性血小板增多症和反应性血小板增多症，前者PDW 增加，后者PDW 正常。

③P-LCR 代表血小板计数中体积 >12fL 的血小板的比值或数量，有助于识别堆集血小板、大血小板和细胞碎片，并可监测骨髓的造血功能。

八、【标本采集】：

随机采取病人静脉血，用40g/L EDTA-K 2 抗凝(50ul 抗凝1ml 血，相当于2mgEDTAK 2/1ml 血)。

九、【注意事项】：

1、血细胞计数应用EDTA-K 2为抗凝剂，用量为EDTA-K 2*2H 2O1.5—2.0mg 可抗凝1ml 血，

不能用肝素或枸橼酸钠等抗凝剂。

2、采集后在室温中贮存不应超出6h ；如需制用血涂片应在2h 内完成。

3、测定前抗凝血应充混匀，任何小凝块或血小板聚集均会影响血细胞计数。

4、注意病理因素对血液分析仪使用的影响，特别是各系统的报警提示。如是否有大血小板对血小板计数的影响；有无有核红细胞对白细胞计数的影响等等。

5、如有冷凝集现象，将血置37℃水浴箱10min 后立即测试。

十、【质量控制】：

1．每日工作开始应先做全血质控品，。

2．出现失控，应校正后并重做质控，直至符合质控要求。

3．按要求做好仪器校正和仪器对比工作。

4．做好质控、失控和校正登记。

十一、【报告复查】：对以下情况的样本进行复查(仪器及手工)；

(1) 白细胞低于3.0×109/L；

(2) 红细胞数与血红蛋白明显不符；

(3) 血小板低于50×109/L；

(4) 白细胞分类时，中间细胞>15%，以及机器未能分出的样本需手工分类。

白细胞计数:

原理：血液经稀酸溶液稀释后，红细胞被破坏，放入血细胞计数池内，置显微镜下计数，求得每微升中的白细胞数。

试剂：

冰醋酸10ml

蒸馏水加至500ml

10g/L美蓝3滴

器材：20微升吸管，血细胞计数板，显微镜。

操作：加计数试剂0.38ml于小试管内，取血20微升吹入试剂，混匀。静置1-2分钟。低倍计数，计数4角得4大方格，计数总数乘以50即为白细胞/微升。

血小板计数:

原理：血液用血小板计数试剂稀释后，在显微镜下计数。

试剂

1.草酸铵稀释液草酸铵1.0g，乙二胺四乙酸二钠0.014g,40%甲醛溶液0.1ml加水至100ml，

加亚甲蓝少许，过滤后置冰箱备用。

2.许汝和稀释液尿素9g，乙二胺四乙酸二钠0.5g，巴比妥钠0.3g，加蒸馏水水至100ml，

过滤后置冰箱备用。

3.Barr稀释液白皂素0.25g，枸橼酸钠3.5g，煌焦油蓝0.1g，40%甲醛溶液1.0ml，加水

至100ml，过滤后置冰箱备用。

操作

1.选上述任一试剂（本科室用2液），每管加0.38ml，加入全血20微升，充分混匀。

2.用改良牛鲍计数板，将血液稀释液充池后，置于有滤纸得培养皿内，放置至少10min，待

血小板沉降后计数。

3.计数中央大方格内5个中方格得血小板数，其结果乘1000，即得每微升血液中血小板数。手工白细胞分类计数:

㈠、原理

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用复合染料染色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），以观察数量、形态和质量的变化，对疾病有辅助诊断意义。

㈡、试剂

瑞姬氏复合染色液

Ⅰ液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液。再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，以后存放一周即能使用。

Ⅱ液：pH 6.4-6.8磷酸盐缓冲液

磷酸二氢钾（无水） 6.64g

磷酸二氢钠（无水） 2.56g

加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调整pH，加水至1000ml

㈢、操作

1.采血后推制厚薄适宜的血膜片应呈舌状，头、体、尾清晰可分。

2.推好的血膜在空气中晃动，以促使快干。天气寒冷或潮湿时，应于37℃温箱中促干，

以免细胞变形缩小。

3.染色。平置玻片于染色架上，滴加染液3-5滴，使其迅速盖满血膜，约1分钟后，

滴加缓冲液5-10滴，轻轻摇动玻片或对准血片吹气，与染液充分混合，5-1分钟后

用冲去染液，待干。

4.选择涂片的体尾交界处染色良好的区域，在油镜下计数100个白细胞，按其形态特

征进行分类计数，求出各类细胞所占比值（百分率）。

编写：

科主任：