碱性磷酸酶alp偏低的原因是什么【健康必备常识】
碱性磷酸酶alp偏低的原因是什么
文章导读
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碱性磷酸酶alp是存在于成骨细胞中的一种酶，碱性磷酸酶的表达和稀泥是成骨细胞分化的一个明显特征。一般来说。碱性磷酸酶alp偏高和偏低都可能预示着我们身体的亚健康。某些疾病也会引起碱性磷酸酶含量的变化比如病毒性肝炎会引起其升高。那么，碱性磷酸酶alp偏低的原因是什么呢?
碱性磷酸酶是成骨细胞的一种外酶，它的表达活性是成骨细胞分化的一个明显特征。碱性磷酸酶在机体中的主要生理功能是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟基磷灰石的沉积提供必要的磷酸，同时水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨作用。
某些病理原因(如各种肝、骨等疾病)和生理性原因(如儿童生长发育期、妊娠2个月后等)均可引起血清ALP水平改变，临床主要为肝胆和骨骼疾病所引起。
碱性磷酸酶偏低的原因
儿童ALP活性降低会影响骨骼发育，甚至骨骼发育停止，成为临床上的呆小症、软骨发育不全及恶质病;
妇女中以老年妇女ALP活性降低者为多见，可能与老年妇女绝经后雌激素分泌减少，
骨碱性磷酸酶250的平衡方法
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 骨碱性磷酸酶250的平衡方法 导语：骨碱性磷酸酶250是关于我们身体成长的指标，我们应该尽可能的去平衡骨碱性磷酸酶250的值，可能我们大家对于这种问题还不是很熟悉吧，我们这 骨碱性磷酸酶250是关于我们身体成长的指标，我们应该尽可能的去平衡骨碱性磷酸酶250的值，可能我们大家对于这种问题还不是很熟悉吧，我们这方面的内容关注的比较少，但是骨碱性磷酸酶250却与我们每天的生活息息相关，但是现在很多人出现了骨碱性磷酸酶250不平衡的情况，如果出现问题就会威胁我们的身体健康，所以我们一定要想办法平衡它，那么骨碱性磷酸酶250怎么平衡呢，下面就让我们跟随文章来一起了解一下吧。 平衡方法： 1.碱性磷酸酶升高主要与肝脏和胆囊疾病有关，但是任何检查项目判断疾病都是要相互联系的，不可单一来看。如果仅仅是ALP升高，且升高幅度不大，转氨酶、胆红素、GGT、B超等都正常的话，基本没有什么大碍。小孩母亲是大三阳，有可能在怀孕或生产过程中将病毒传染给孩子，小孩如果也是乙肝病毒携带者的话，只要转氨酶、胆红素正常，B超没问题就可以不予治疗，只要做到每半年检查肝功能、B 超一次即可。肝功能正常的乙肝病毒携带者是不需要任何治疗的，平时做到饮食均衡，不要熬夜，不要喝酒，不要服用有损害肝脏副作用的药物，心情开朗就可以避免发病。但由于免疫激活，有些人到一定年龄后就可能发生肝炎，这时才需要服用护肝、抗病毒药物治疗。 2.如果是生理性的原因，就属于正常现象，大家不必担心。如果是病理性的原因，患者首先要弄清楚是哪种病引起的，并在医生的指导下积极主动地进行治疗。乙肝患者碱性磷酸酶偏高，主要还是由于乙 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
2.1土壤酸性磷酸酶活性测定
土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 （1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。 （2）pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液（pH=5.0） A：0.2mol/L 醋酸溶液（11.5mL，稀释至1000mL） B：0.2mol/L 醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL） 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 （3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 （4）酚的标准溶液： 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01mg酚）。 （5）甲苯。 （6）0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标（mg）绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml 甲苯，轻摇15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚（mg）=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数
碱性磷酸酶-基因实验
编号 内蒙古大学生命科学学院生物系 基因工程实验室 本科基因工程实验论文开题报告 论文题目：碱性磷酸酶基因表达载体的 构建及在大肠杆菌中的表达 学生姓名： 年级： 专业： 指导教师： 二〇一三年八月十二日
学生姓名 论文题目 开题时间 项目来源本科生基因工程大实验课 一、立论依据 项目的研究意义，国内外研究现状及发展趋势分析，主要参考文献及出处：碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP, ALKP) (EC 3.1.3.1)属磷酸单脂酶族，底物专一性较低，广泛应用于表位连锁图谱，探针标记测序和免疫组织化学等领域。分子生物学中，ALP分解寡聚核甘酸的末端单酯化磷酸，是常用的遗传工程酶。1 产碱性磷酸酶的生物有很多，从细菌到高等哺乳动物均有分布。人血液中的碱性磷酸酶含量是重要的指标之一，其检验结果及异位表达对癌症等许多疾病有着指导意义。2，3目前商业碱性磷酸酶主要来源于动物（小牛肠碱性磷酸酶）、植物（麦芽）和微生物（细菌碱性磷酸酶）(Bacterial alkaline phosphatase, BAP)。 在革兰氏阴性细菌中，BAP表达于细胞膜外的周质空间。相比表达于胞内使其更机动和高效。BAP的功能已基本揭示，简单来说BAP是细菌产生摄取应用的自由磷酸基团的一种方式，4被大量的实验证据所支持。然而，缺乏BAP的E. coli 仍然能够存活，所以应该还存在相关的替代机制。5 目前，对BAP的研究热点主要由于其海洋有机磷利用的酶特性等集中于海洋微生物领域。海洋细菌碱性磷酸酶的亚细胞研究揭示了其相关合成基因及表达特性对于海洋有机磷循环及海洋生物多样性的贡献。研究人员证实了3733种BAP序列(包括PhoA, PhoD, and PhoX )，包含胞质分泌及胞外位于不同支载结构。大量的实验数据支持了细菌于海洋表面部分光耦合的磷摄取机制。6鉴于磷对于海洋维持初级产能的重要性，并且考虑到其最主要的来源之一－有机磷分解，海洋生物BAP
骨型碱性磷酸酶在骨肿瘤诊断中的价值
作者单位:100044北京大学人民医院检验科[葛艳玲(现工作单位100035北京积水潭医院检验科)] 通讯作者:张正,电子信箱:zhangzh4768@https://www.360docs.net/doc/4b13238715.html, ?临床实验诊断研究? 骨型碱性磷酸酶在骨肿瘤诊断中的价值 葛艳玲 张正 【摘要】 目的 检测恶性骨肿瘤、良性骨肿瘤及转移性骨肿瘤患者血清中的总碱性磷酸酶 (T ALP)和骨型碱性磷酸酶(BALP)活性,以观察T ALP和BALP在骨肿瘤的鉴别诊断中的价值及在监 测恶性骨肿瘤治疗中的作用。方法 对2004年积水潭医院骨肿瘤科收治的40例恶性骨肿瘤、40例 良性骨肿瘤及14例转移性骨肿瘤患者,采用法国临床化学会推荐的速率法测定血清T ALP及酶联免 疫吸附(E L I S A)方法测定BALP水平。结果 恶性骨肿瘤组的T ALP活性为(325155±356136)U/L, BALP活性为(177119±240167)U/L,与同龄对照组T ALP(120170±70159)U/L,BALP(61130± 44145)U/L比较有统计学意义(P<0105)。转移性骨肿瘤组的T ALP(100114±35139)U/L,BALP (32193±15168)U/L,与同龄对照组T ALP(57164±11106)U/L,BALP(19192±7153)U/L比较有 显著性统计学意义(P<0101)。而良性骨肿瘤组与同龄对照组相比无统计学意义(P>0105)。同时 恶性骨肿瘤与其他两组比较也都有统计学意义(P<0101),并且恶性骨肿瘤组患者化疗前后的结果 也有统计学意义(P<0105)。结论 血清T ALP和BALP是反映骨肿瘤骨代谢的一个灵敏而简便的 生化指标,并对骨肿瘤的鉴别诊断及疗效观察具有一定的临床意义。作为骨肿瘤的检测指标,血清 BALP比T ALP更为特异和敏感。 【关键词】 碱性磷酸酶; 骨肿瘤 Appli ca ti on of bone2spec i f i c a lka li n e phospha t a se i n bone tu m or GE Yan2ling,ZHAN G Zheng1 D epart m ent of C linical L aboratory,B eijing U niversity Renm ing Hospital,B eijing100044,China(G E Yan2ling, D epart m ent of C linical L aboratory,B eijing J ishuitan Hospital,B eijing100035,China) Corresponding author:ZHAN G Zheng,Em ail:zhangzh4768@yahoo.co https://www.360docs.net/doc/4b13238715.html, 【Abstract】 O bjecti ve To deter m ine the seru m levels of t otal alkaline phos phatase(T ALP)and bone2s pecific alkaline phos phatase(BALP)in patients with malignant bone tu mor,benign bone tu mor and malignant tu mor metastasized t o the bone and t o exp l ore the value of T ALP and BALP in identifing and diagnosing of bone tu mor,als o in monit oring the effect of therapy about malignant bone tu mor1M ethods Seru m T ALP and BALP in40malignant bone tu mor patients,40benign bone tu mor patients and14malignant tu mor metastasized t o the bone patients in2004were studied1Seru m T ALP was assayed by SF BC rate method and BALP by enzy me linked i m mu mo abs orbence assay(E L I S A)1Results The seru m levels of T ALP and BALP were(325155±356136)U/L and(177119±240167)U/L res pectively in malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of the sa me age contr ol gr oup(120170±70159)U/L and (61130±44145)U/L(P<0105)1The seru m levels of T ALP and BALP were(100114±35139)U/L and (32193±15168)U/L res pectively in malignant tu mor metastasized t o the bone gr oup were als o significantly higher than those of the sa me age contr ol gr oup(57164±11106)U/L and(19192±7153)U/L(P<0101) 1The seru m levels in benign bone tu mor gr oup were higher than those of the sa me age contr ol gr oup,but the t w o gr oup s have no significantly statistics(P>0105)1A t the sa me ti m e,the seru m levels in malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of benign bone tu mor gr oup and malignant tu mor metastasized t o the bone gr oup(P<0101)1The seru m levels of T ALP and BALP in p re2therapy malignant bone tu mor gr oup were significantly higher than those of post2therapy(P<0105)1Conclusi on Seru m T ALP and BALP were sensitive and convenient bi oche m ical indexs which reflected metabolis m of patients of bone tu mor1Moreover,they have clinical i m portance f or differential diagnosis and observati ons of therapy1 A s an index of bone tu mor,seru m BALP was more s pecific and sensitive than T ALP1 【Key words】 A lkaline phos phatase; Bone tu mor 骨肿瘤虽不是常见病,但在骨科领域内占有重 要地位。骨肿瘤的诊断必须是临床、影像和病理三
土壤酸性磷酸酶活性测定
2.1土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约，尤其是磷酸酶的参与，可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明，磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关，与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 （1）0.5%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）。 （2）pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液（pH=5.0） A：0.2mol/L 醋酸溶液（11.5mL，稀释至1000mL） B：0.2mol/L 醋酸钠溶液（16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL） 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 （3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂：取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺，用10ml 96%乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 （4）酚的标准溶液： 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L（每毫升含0.01mg酚）。 （5）甲苯。 （6）0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制：取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标（mg）绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中，加2.5ml 甲苯，轻摇15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠（用醋酸盐缓冲液配制），仔细摇匀后放入恒温箱，在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚（mg）=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数 1 / 1
碱性磷酸酶显色剂使用方法
5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT （四唑硝基蓝）是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 使用方法 1. 在膜或组织切片，最后一次洗涤完毕后，加入适量BCIP/NBT染色工作液 2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深度. 3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应 4. 膜标本可干燥后避光保存；组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可以用中性红复染染色 干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种 碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 成骨细胞染色方法 以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 （1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。 （2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。 （3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 （4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。 （5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2偶氮偶联法： 【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml 六偶氮副品红0.5ml
骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比
骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后，骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%，显著高于血钙检测准确率73.75%，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据，但血钙误诊率较高，而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高，临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断，从而提高患儿诊断正确率及治疗效果，保障其预后及生活质量。 标签：骨源性碱性磷酸酶；血钙；对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病，发病原因主要为机体中钙营养严重丢失，目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日～12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究，从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果，为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据，现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例，年龄1～6岁，平均年龄（ 2.98±1.02）岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织（WHO）制定的佝偻病诊断标准；②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病；③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病；④体温正常，无骨折、强直性骨关节炎等疾病；⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本，骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法，由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒，以检测结果不大于200U/L为阴性，反之为阳性；血钙采用偶氮砷法检测，由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂，以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性，反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析，计量资料采用t检验（由x±s表示），计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
酸性磷酸酶活性测定方法
实验九酸性磷酸（酯）酶活性测定1．目的要求 掌握酸性磷酸（酯）酶活性测定的原理和方法。 2．方法原理 酸性磷酸（酯）酶是一种存在于生物体内水解有机磷酸酯键的酶。以对硝基酚磷酸钠作为底物，在酸性磷酸酯酶的作用下，在碱性条件下水解生成黄色的对硝基酚，可用分光光度计进行比色测定。它们在各类种子中普遍存在，且含量较多，在萌发前期，随着种子的萌发进程活性增加，通常酸性磷酸酶活性与种子活力呈正比。 3．主要实验仪器及材料 干种子或吸胀种子、电子天平、分光光度计、恒温水浴箱、带塞刻度试管、小烧杯、研钵、塑料管、剪刀。 4．掌握要点 掌握常用的测定酸性磷酸（酯）酶活性的方法——对硝基酚磷酸钠法。 5．实验内容 （1）酶液提取。称取1g样品，用5mL研磨缓冲液在研钵中冰浴研磨成浆，再用5mL 研磨缓冲液冲洗，转移至离心管中，在20000rpm下离心10min。吸出上清液，即为酶粗提液。可放在冰箱中储存备用。 （2）活力测定。取酶液0.1—1mL（视酶含量多少而定），加水至1mL，然后加入缓冲液1mL和对硝基酚磷酸钠溶液0.1mL。空白对照用1mL研磨缓冲液代替酶制剂。充分混匀后，放在30℃恒温箱中保温10min，时而摇动。10min后，加入1m0.5mol/LNaOH溶液，充分混合，终止反应，并使对硝基酚呈黄色。在400nm波长下测吸光度A。 （3）计算酶活性，以每毫克种子每分钟水解底物的nmol数表示。 酶活性nmol/min.mg= ） （ ） （ 试样的 g W V V A ? ? ? min 10 1 1.3 019 .0 式中0.019为pH=14时，对硝基酚的μmol吸光系数，即对硝基酚的浓度为1mol/L时，其A=0.019； 3.1为0.0031×1000，反应混合液的体积为3.1，将μmol化为nmol乘上1000； V为酶制剂总体积； V1为每次用酶体积。
实验三+酸性磷酸酶的组织器官定位
实验三植物体内酸性磷酸酶的组织定位 一、实验目的 1、掌握植物体内酸性磷酸酶的金属盐―铅法染色进行组织定位的原理与技术。 2、掌握制作徒手切片的技术。 二、实验原理 酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)广泛分布于机体各种组织细胞内，主要存在于细胞的溶酶体内，常作为溶酶体的标志酶，此外，还存在于内质网和胞质内。在核酸和蛋白质代谢活动增加时，酸性磷酸酶活性增强。酸性磷酸酶还参与酯类代谢。因此，它在疾病、免疫反应和细胞损伤与修复过程中具有一定生物学意义。 酸性磷酸酶金属盐―铅法，其基本原理是在酸性环境下，底物β―甘油磷酸钠被酸性磷酸酶水解，释放出磷酸，磷酸遇铅离子则生成磷酸铅沉淀，最后与硫化铵作用形成棕褐色硫化铅沉淀。 三、实验材料、试剂和仪器 1、实验材料：甘蓝叶片与小白菜叶片。 2、实验试剂：丙酮、β―甘油磷酸钠溶液、2%硫化铵等。 3、实验用品：刀片、镊子、培养皿、托盘等。 四、实验步骤 1、甘蓝叶脉染色 （1）徒手切片的制作：在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住甘蓝叶脉，右手平稳地拿住刀片。然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，自左前方向右后方均匀地拉切。当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用于材料染色。 （2）将一部分材料薄片铺在载玻片上，滴加蒸馏水铺平材料，加入1滴冰的丙酮溶液，固定15min。固定完成后，用蒸馏水水洗，一边滴加蒸馏水，一边用吸水纸吸，反复2-3次。用滴管慢慢的将切片挑起来，放置在含有10ml的底物溶液中，37℃保温1h。将切片用蒸馏水水洗2~3次后，放置在含有2% 的硫化铵溶液中1-2min，蒸馏水水洗2-3次。将染色的切片盖上盖玻片，制作成临时玻片。显微镜下观察，拍照记录染色结果。 （3）将另一部分切片放置蒸馏水中加热用作空白对照。其余操作同上。 2、小白菜根系染色 （1）将小白菜的根系蒸馏水洗净后，用刀切开，一半用于组织染色，另一半放在蒸馏水中加热煮死，作为空白对照。 （2）将根系放置在含有冰的丙酮溶液中固定15min，用蒸馏水水洗2~3次。固定完
骨源性碱性磷酸酶在骨质疏松及类风湿性关节炎诊治中的意义
骨源性碱性磷酸酶在骨质疏松及类风湿性关节炎诊治中的意义 【摘要】目的：探讨血浆骨源性碱性磷酸酶(BAP)在骨质疏松及类风湿性关节炎（RA）诊治中的意义。方法：选择30例骨质疏松症和30例RA患者和30例健康体检者(对照组)，进行血浆BAP浓度水平测定，计算其血浆浓度并进行比较。结果：30例骨质疏松症患者与健康对照组及30例RA患者与健康对照组BAP 水平差异均有显著性意义（P<0.01），而30例骨质疏松症患者与30例RA 患者血浆BAP浓度比较，无显著性差异。结论：BAP在骨质疏松及RA患者诊断及治疗过程中有很好的临床指导意义。 【关键词】血清骨源性碱性磷酸酶；类风湿性关节炎；骨质疏松；诊断治疗。 骨质疏松和内风湿性关节炎（RA）是危害中老年人身体健康的常见病，都可造成患者骨关节骨质丢失和破坏，而且这两种疾病本身又有一定相关性，严重危害人类健康，而在其发生、发展过程中，患者大多存在不同程度骨代谢标志物骨源性碱性磷酸酶(BAP)水平的升高。现就我院2004年6月~2007年11月收治的30例骨质疏松症患者和30例RA患者BAP水平的测定情况，与同期在我院体检的30例健康人群做对比，以了解BAP在该类疾病中的临床应用价值。 1 材料与方法 1.1 对象：30例骨质疏松症患者和30例RA患者均系我院住院患者，年龄42~76岁，30例骨质疏松症患者中男14例，女16例，30例RA患者中男12例，女18例，以上病例均为确诊病例，（其中RA符合美国风湿病学院1987年制定的诊断标准；骨质疏松症经临床及放射线检查符合WHO1994年确立的诊断标准）。对照组：体检中筛选的健康人30例，年龄30~56岁，男15例，女15例。 1.2 方法：对所选病例组及健康对照组由专人负责采集空腹肘静脉血，按要求做BAP测定。标本检测使用美国Metra公司提供的试剂盒，将抗凝血以3 000 r/ min 离心15 min，取血浆检测。 1.3 统计方法：测定结果用均数±标准差表示，采用配对t 检验。 2 结果
酸性磷酸酶的临床意义
酸性磷酸酶的临床意义 酸性磷酸酶是一种广泛存在于人体组织内的一种物质，主要存在于细胞和体液里面，血液里面的酸性磷酸酶，主要来源于前列腺，来源于血小板，白细胞等，其中在前列腺里面，含量是最丰富的。在日常的医疗检查当中，通过对酸性磷酸酶的检查，能够取得前列腺癌的辅助诊断的作用，另外对于血液病、骨类疾病也有一定的诊断的作用和效果。 ★临床意义 正常人血清中的酸性磷酸酶来源于骨、肝、肾、脾、胰等组织，故不论男女老幼，其含量大致相同。而前列腺患者以及出现肝炎、甲状旁腺机能亢进、红血球病变等疾病时，血清中酸性磷酸酶的活力都会升高。为了鉴别血清中增加的酸性磷酸酶是来自前列腺还是来自其他器官，必须加以区别。为此可进一步采用某些抑制剂进行选择性抑制作用。例如：乙醇和酒石酸对前列腺酸性磷酸酶有显着的抑制作用，而对红血球酸性磷酸酶的抑制作用较弱。
ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。 (1)前列腺癌：尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对前列腺癌的诊断较ACP敏感，二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病：粒细胞白血病、高雪病、尼曼匹克病、原发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病：前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病：变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、多发性骨髓瘤及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移，ACP活性也可升高。 (5)其他：甲状腺功能亢进，急、慢性肾炎、尿潴留等ACP
活性可增高。 正常男性血清中酸性磷酸酶1/3～1/2来自于前列腺，女性血清中的酸性磷酸酶主要来自肝脏、红细胞和血小板。酸性磷酸酶有20种同工酶，临床测定的同工酶大致为两大类：一类是前列腺酸性磷酸酶；另一类是非前列腺酸性磷酸酶。酸性磷酸酶测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。
碱性磷酸酶(ALP)
International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC) Scientific Division Committee on Reference Systems for Enzymes (C-RSE) IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C Part 9. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of Alkaline Phosphatase [Orthophosphoric-Monoester Phosphohydrolase, Alkaline Optimum, EC 3.1.3.1] Gerhard Schumann1, Rainer Klauke1, Francesca Canalias2, Steffen Bossert-Reuther3, Paul F.H. Franck4, F.-Javier Gella5, Poul J. J?rgensen6, Dongchon Kang7, Jean-Marc Lessinger8, Mauro Panteghini9, Ferruccio Ceriotti10 1Medizinische Hochschule Hannover, Institut für Klinische Chemie, Hannover, Germany 2Departament de Bioquímica i Biologia Molecular, Laboratori de Referència d'Enzimologia Clínica, Universitat Autònoma de Barcelona, Cerdanyola del Vallès, Spain 3 Roche Diagnostics GmbH, Research & Development Department, Mannheim, Germany 4Klinisch Chemisch en Hematologisch Laboratorium, HagaZiekenhuis, Den Haag, The Netherlands 5BioSystems S.A., Barcelona, Spain 6Department of Clinical Chemistry, Kolding Hospital, Kolding, Denmark
骨型碱性磷酸酶
骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用 文章来源：医学网发表时间：2007-07-04 09:51:00 关键字：磷酸酶 碱性磷酸酶(ALP，EC3. 1.3.1)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，包括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型4种同工酶。前三者基因定位于染色体重2q34-37的相邻位点，后者基因定位于染色体的1q36-34之间，其中非特异性型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。对这些同工酶的理化性质、分子生物等特性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应用。本文拟就年来国际上常用的骨型碱性磷酸酶(BAP)研究方法及其在临床上的应用研究进展作一综述。 1骨型碱性磷酸酶的特性 骨型碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶，为糖蛋白，分子量约为12000道尔顿。该酶在细胞内合成时新生的酶蛋白先在内质网糖基化，再通过高尔基体转运到细胞膜表面，通过多糖链与磷酯酰肌醇相连嵌合到细胞膜的外浆膜。在多糖-肌醇磷酸特异水解酶的作用下，骨型碱性磷酸酶能被释放到血循环中。骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。骨型碱性磷酸酶在体内的其他生化功用有待进一步的阐明。 2骨型碱性磷酸酶的检测
人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分，而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难，因为这两种同工酶来源于同一基因，其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似，且相互间有交叉免疫反应，目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。 电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。
碱性磷酸酶染色(NAP)
碱性磷酸酶染色（NAP） 碱性磷酸酶染色（NAP）在临床的应用基本属于常规筛查的染色法。 （1）原理（偶氮偶联法）：血细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4～9.6的条件下将基质液中的α-磷酸萘酚钠水解，产生α-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀，定位于酶活性所在之处。 （2）结果判断：阳性结果为胞质内出现灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀 ①（一）灰褐色沉淀，为0分。 ②（+）胞质出现灰褐色沉淀，为1分。 ③（++）胞质深褐色沉淀，为2分。 ④（+++）胞质中已基本充满棕黑色颗粒状沉淀，但密度较低，为3分。 ⑤（++++）胞质全被深黑色团块沉淀所充满，密度高，甚至遮盖胞核，为4分。 （3）参考值：成熟中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）的积分值为7～51。由于各实验室的实验条件不同，正常值也有差异，应建立本实验室的正常值。这里的正常值仅供参考。 （4）临床意义: ①生理变化： ①年龄变化：新生儿NAP活性增高，以后下降。儿童期各年龄大致相似，成年期较儿童期活性减低，老年期更低。 ②应激状态下的变化：紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。 ③月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。 ④妊娠期的变化：妊娠2～3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。 ②病理性变化： ①感染：细菌性感染时NAP积分值增高。在细菌性感染中球菌性感染较杆菌性感染为高；在球菌性感染中，急性较慢性为高。病毒性感染时，NAP积分值一般无明显变化。因此本染色法有时可帮助鉴别细菌性感染和病毒性感染； ②血液病：慢性粒细胞白血病的NAP积分值明显减低，常为“0”，缓解时NAP
小儿骨源性碱性磷酸酶检测结果浅析
小儿骨源性碱性磷酸酶检测结果浅析 Analysis of Pediatric Bone Alkaline Phosphatase Test Results/XIAO Xiang-dong.//Medical Innovation of China，2012，9(23)：092-093 Bone alkaline phosphatase；Rickets；Early diagnosis First-author’s address：Zhangdian Maternity and Child Care Center of Zibo，Zibo *****，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.23.059 佝偻病(Rickets)是婴幼儿时期常见的慢性营养缺乏性疾病，是因维生素D缺乏，导致钙磷代谢失常，而使骨骼钙化不良所致。它不但影响患儿的骨骼发育，同时还影响患儿神经、肌肉、造血、免疫等多组织、器官的功能。佝偻病很少直接危及生命，但因发病缓慢，易被忽视，一旦发生明显症状时，机体的抵抗力低下，易并发肺炎、腹泻、贫血等其他疾病。20世纪90年代后，中国严重佝偻病发病率已逐年降低，但轻、中度佝偻病发病率仍较高。因此早期发现、预防佝偻病比治疗佝偻病具有更重要的意义。小儿骨源性碱性磷酸酶(NBAP)在佝偻病发病初期即出现升高，而且升高程度与佝偻病活动程度密切相关。因此，小儿NBAP检测对佝偻病的早期筛查、诊断、预防和治疗都有很大的应用价值。 1资料与方法 1.1一般资料随机抽取了儿童保健门诊3～36个月婴幼儿400例，其中男212例，女188例；年龄3～12个月174例，13～24个月121例，25～36个月105例，对其进行外周血NBAP检测。采用小儿NBAP检测试剂盒。 1.2方法采用小儿NBAP检测试剂盒。NBAP试剂盒为北京中生金域诊断技术有限公司生产。试剂盒组成：NBAP反应装置、显色液、洗涤液、终止液、一次性定量取血管(含吸头)、使用说明书(含标
碱性磷酸酶标记方法
碱性磷酸酶标记方法(戊二醛两部法) 将100uL碱性磷酸酯酶加入到300uL10mM PBS（pH7.2），再加入40uL 25%的戊二醛，混匀，4摄氏度活化20小时； 透析至10mM PBS（pH7.2），24小时，换液4次； 将目的蛋白用10mM PBS（pH7.2）配成4mg/mL； 将125uL目的蛋白加入活化过的碱性磷酸酶中（终浓度为5000U AP/mg蛋白），混匀，4摄氏度反应24小时。 参考文献：A蛋白碱性磷酸醋酶的标记及酶联测试 Enzyme Linked Immunosorbent Assay Using Alkaline Phosphatase Conjugated with Streptococcal Protein G 使用200mgAP/mg 蛋白 2.5mg AP（50IU/mg），加入200uL含1.25%戊二醛的100mM 的PB（pH6.8），混匀，室温反应过夜； 4摄氏度条件下，电磁搅动，透析至50mM PBS（pH7.2），12小时，换液4次； 1.5mg目的蛋白溶于100uL 1M的CB（pH9.5）； 将活化的AP加入配好的蛋白质液体中，混匀，4摄氏度条件下反应24小时； 加入10uL 200mM的赖氨酸溶液，混匀，22摄氏度条件下反应2小时； 4摄氏度条件下透析至50mM PBS（pH7.2），12小时，换液4次； 离心，取上清，用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05% NaN3稀释10倍，-20摄氏度保存。 底物缓冲液：100mM TB9.0+100mM NaCl+1mM MgCl2 参考文献：碱性磷酸酶标记链霉亲和素 2．戊二醛交联标记法： 此法是以双功能交联剂为桥，使酶与抗体(抗原)结合。最常用的交联剂是戊二醛。它具有两个活性醛基，可分别与酶分子和抗体(抗原)分子上的氨基结合。戊二醛法又根据试剂加入的方法分为一步法和二步法。 一步法将抗体(抗原)、酶和戊二醛同时混合。此法操作简便，广泛用于；HRP、AP与抗体(抗原)的交联。但酶标记物的产率低，由于结合物立体构型障碍，酶和抗体容易失活；酶和抗体易发生自身交联，影响标记效果。 二步法先将过量的戊二醛与酶反应，让酶分子上的氨基仅与戊二醛分子上的醛基结合，不发生酶与酶的结合，除去未与酶结合的多余戊二醛后，再加入抗体(抗原)，形成酶—戊二醛—抗体(抗原)结合物。其优点是酶标记物均一，无自身聚合，分子量小易穿透细胞膜，灵敏度与活性均较高，但其产率更低。 戊二醛标记法： 酶结合量(mg／ml)=OD403X0.4 IgG含量(mg／m1)= （OD280 －OD403 X 0.42）X 0.94X0.62 过碘酸钠标记法 IgG含量(mg／m1)＝(OD280－OD403 X 0.3)X0.62。 计算克分子比或摩尔比(E／P) HRP／IgG＝HRP(mg／m1)／HRP分子量÷IgG(mg／m1)／IgG分子量 =HRP(mg／m1)／40 000÷IgG (mg／m1)／160 000
骨碱性磷酸酶
骨碱性磷酸酶 什么是骨碱性磷酸酶 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性，籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下： 正常水平≤200u/L 预防水平250u/L 医疗水平300u/L 在骨代谢疾病的监测中，生化标志物是一个有用的指标。尿中羟(基)脯氨酸(Hydroxyproline)水平和血清总碱性磷酸酶水平，已经用于监测变形性骨炎的治疗效果。骨质疏松，相对于变形性骨炎，是一种更轻微的骨重建的过程，因此需要更敏感和特异的标志物。为此，OCTEIA Ostase?为实验室提供了血清骨碱性磷酸酶(BAP)定量的检测方法，该检测方法现已显示，在用于骨代谢疾病的诊治方面证明是有效的。 骨碱性磷酸酶偏高是怎么回事 碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。那么骨碱性磷酸酶偏高是怎么回事？ 由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等骨碱性磷酸酶会升高。 如果有条件可以做一下碱性磷酸酶同功酶，或者要求医院用热稳定试验鉴别是来自肝脏还是来自骨骼。 骨碱性磷酸酶偏低是怎么回事
骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。骨碱性磷酸酶低更多出现于儿童和孕妇身上，一般来说，骨碱性磷酸酶偏低的原因是： 1、贫血引起的骨碱性磷酸酶偏低。 2、儿童甲状腺性能不全引起的骨碱性磷酸酶偏低。 3、重症慢性肾炎引起的骨碱性磷酸酶偏低。 4、病毒性感染时其活性在正常范围或略低引起的骨碱性磷酸酶偏低。 5、营养不良、呆小症，维生素C缺乏症坏血病、乳糜泻、恶病质，遗传性低磷酸酶血症引起的骨碱性磷酸酶偏低。 骨碱性磷酸酶偏高怎么办 骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一，它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况，是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标，也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 正常值范围：小于或等于200U/L。 分度：骨碱性磷酸酶越高，说明“缺钙”越严重。那么骨碱性磷酸酶偏高怎么办？ 骨碱性磷酸酶（U/L）预防或治疗的方法： 1、正常：于或等于200，一天一粒鱼肝油预防； 2、轻度：00～250（不包括250），每天一粒鱼肝油治疗； 3、中度：50～300（不包括300），用大剂量的维生素D3治疗； 4、重度：大于或等于300 用大剂量的维生素D3治疗。