真菌检验

1、什么是真菌？

真菌为真核细胞型微生物，属于真菌界。具有典型的细胞核，不具有叶绿素，以腐生和寄生方式摄取营养，细胞壁含几丁质和纤维素，有完善的细胞器，能进行有性生殖和（

或）无性繁殖。真菌在自然界分布极为广泛，约有20余万种，大多对人无害，仅有约150种对人和动物致病。

2、真菌的基本结构是什么？

真菌的基本结构为菌丝和孢子，菌丝为微细的管状结构，具有细胞壁，细胞膜，细胞浆和细胞核，分枝或不分枝，分隔或不分隔，有粗有细，着色或不着色。一般致病真菌的菌丝较细而且分隔。孢子是真菌的繁殖器官，也是抵抗不良环境的结构，类似于高等植物的种子，是真菌分类坚定的最主要依据。

3、引起人和动物感染的真菌分为哪两类？

引起人和动物感染的真菌分为病原性真菌和条件致病菌两大类。病原性真菌本身具致病性，而条件致病菌一般不具致病性，只有在一定条件下，即机体免疫力降低时才致病。

4、引起真菌病的常见诱因有哪些？

长期使用广谱抗生素，皮质激素和免疫抑制剂，代谢障碍，血液病，尿毒症，慢性消耗性疾病，外伤，大手术，器官移植，静脉高营养，导插管，放化疗及爱滋病等都是重要的诱因。

5、真菌生长的特点？

真菌在生长过程中有从中心向四周等距离生长形成圆形菌落的倾向。也正因为这一特点使体股癣的皮肤损害表现为环行或多环行。

6、实验室检查真菌包括什么？

实验室检查主要包括真菌直接检查和真菌培养。

7 、真菌直接检查的意义？

（1）直接检查阳性有诊断意义，一般可确定有真菌感染，但阴性不能排除诊断。

（2）根据直接检查所见的真菌镜下形态可确定少数病原菌的种，如新型隐球菌，花斑癣菌等。有些可确定属，如念珠菌属等。

（3）直接检查所见的真菌形态，代表该菌在组织内的形态即组织象。（4）真菌镜下形态有时可提示该菌的活动性，如念珠菌出现真菌丝和假菌丝，皮肤癣菌的菌丝肥大粗长多分枝，胞浆浓都表示该菌处于活跃状态。

8 、真菌培养的目的是什么？

真菌培养的目的在于从临床标本中分离病原菌，确定是否有真菌感染及感染真菌的种类，以弥补直接检查的不足，同时在培养鉴定的过程中对其形态，镜下结构，生理特点和生化特征等进行充分的研究，以了解全部生活史并据以推断其应归隶的属和种，指导临床治疗。同时，分离的菌种可保存以便交流和继续研究。

9、真菌实验室怎样消毒？

工作台每日用消毒灵、5%石碳酸液或0.5%过氧乙酸消毒2次。每周实验室空气消毒1次（每4立方米空间用35ml 40%甲醇加入18g高锰酸钾，门窗紧闭熏蒸24h）。

10、万一发生真菌标本污染工作台面，该怎样做？

万一发生真菌标本污染工作台面不要立刻用水冲洗，而应先用纸巾覆盖，倒上5%的石碳酸液，20min后清除。

11、临床采集真菌标本注意事项？

（1）采集的标本要适宜，不同真菌感染应采取不同的临床标本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂，皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌感染应取血液，脑脊液、痰、脓汁等。

（2）在用药前采集标本，一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。

（3）采集标本要足量要求，血液很脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。（4）严格无菌操作，在采集标本时严格无菌操作，并进行消毒处理，尤其是在采集血液和脑脊液标本时，要避免污染杂菌。

（5）采集的标本要送检，对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本采集后最长不得超过2h。

12、致病真菌可分哪两类？

临床上常将致病真菌分为浅部真菌和深部真菌两类。浅部真菌主要侵犯皮肤角蛋白组织。包括角质层、甲板、毛发和羽毛等；深部真菌可累及皮肤、皮下组织，甚至全身的组织和器官。

13、紫外线能否杀灭真菌？

大剂量的紫外线或X线对真菌有抑制作用，但无杀菌作用。

14、真菌病分为几类？

传统上将真菌病分为四大类，即浅表真菌病、皮肤真菌病、皮下组织真菌病和系统性真菌病。浅表真菌病和皮肤真菌病又称为浅部真菌病，而深部真菌病则包括皮下组织真菌病和系统性真菌病。有些真菌如念珠菌，既能侵犯浅部又能累及深部。

15、真菌直接检查的方法？

标本置与玻载片上，加上一滴载液，盖上盖玻片，放置片刻或微加热，即在火焰上快速通过2-3次，不可煮沸，以免结晶。然后轻压盖玻片，驱逐气泡并将标本压薄，用吸纸吸去周围溢液，置显微镜下检查。要注意避免载液溢上盖玻片。标本宜薄而均匀。检查时应遮去强光，先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察菌丝和孢子的形态、特征、位置、大小和排列等。

16、直接镜检阳性表示什么？

直接镜检阳性表示：（1）有诊断意义（2）代表组织相。直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态。（3）判断某些真菌种的致病性等。

17、直接镜检的局限性是什么？

（1）阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同；（2）有假阳性结果，因此对直接镜检可疑结果应作复查，或用其他检验方法鉴定。

18、真菌直接检查的注意事项及鉴别要点？

直接检查时，标本中的菌丝必须和上皮细胞的边缘，弹力纤维、植物纤维及其他人工和天然的纤维鉴别。鉴别要点在于真菌菌丝的两侧边缘平行，粗细均匀，弯曲舒展自然，内有胞浆和颗粒，折光性强等。酵母应与脂肪球、气泡、花粉等鉴别，必要时可做染色检查。

19、临床真菌标本的采集类别有哪些？

（1）皮肤的角质性物质：毛发、指（趾）甲、皮屑等。

（2）各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、粪便、尿液等。（3）血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。20、真菌检验的方法包括什么？

真菌检验的方法包括直接镜检真菌形态、真菌抗原检测、真菌分离培养与坚定、真菌核酸检测及真菌毒素检测等。

21、检测真菌抗原常用的方法是什么？

采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集实验、ELISA、半定量放射免疫测定法。

22、真菌培养的影响因素是什么？

真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。

23、真菌培养的菌落特征是什么？

真菌培养后可形成两种菌落：（1）酵母型菌落，是单细胞真菌的菌落，形态与细菌菌落相似，但较大一些，菌落表现光华、湿润、柔软、边缘

整齐，如新生隐球菌。（2）霉毒型菌落，是多细胞真菌菌落。菌落呈棉絮状、绒毛状、粉末状，并产生不同的色素，如皮肤癣菌。

24、直接镜检常用的载液有几种？

1．氢氧化钾溶液

成分：

K O H 10 ～40g

蒸馏水100 ml

配制：用蒸馏水将氢氧化钾溶解即可。

2．乳酸－石炭酸－甘油液

成分：

纯结晶石炭酸10g

甘油20 ml

纯乳酸10 ml

蒸馏水10 ml

配制：上述各成分混合溶解即可。

3．墨汁

成分：

优质无颗粒墨汁。

配制：与标本混合后即可观察。

4．甘油氨水液

成分：

甘油20 ml

酒精20 ml

氨水10 ml

配制：上述各成分混合后即可。

5．水杨酸－石炭酸－水合氯醛液

成分：

水合氯醛液40g

纯乳酸20 ml

纯石炭酸40g

水杨酸钠10g

配制：上述各成分混合后加温溶解即可。

6．生理盐水液

成分：

NaCl 0．9g

蒸馏水100 ml配制：用蒸馏水将氯化钠溶解即可。

25、观察菌落形态时应注意什么？

观察菌落形态时应注意：（1）菌落性质，是酵母菌还是霉菌；（2）菌落大小，一般病原性真菌菌落小，而条件致病性真菌菌落大；（3）菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。（4）致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉；致病性真菌有时使培养基开列，但污染霉菌很少引起培养基开列。

26、分离皮肤真菌的皮肤真菌实验培养基是什么？

培养基是：（DTM）含蛋白胨、葡萄糖、酚红、放线菌酮、庆大霉素、四环素等成分。由于皮肤真菌的代谢产物呈碱性，以致其生长周围的培养基呈红色。

27、分离新生隐球菌的选择培养基是什么？

分离新生隐球菌的选择培养基是左旋多巴-枸橼酸铁和咖啡酸培养基，因新生隐球菌有酚氧化霉（Plrno oxidase）活性，此霉与左旋多巴和枸橼算铁反映时，能氧化O-联苯酚形成黑素而呈褐色至黑色，或酚氧化霉和咖啡酸作用而显棕色菌落。

28、真菌培养的方法有几种？各自优缺点是什么？

培养方法有平皿培养、大试管培养和玻片培养等。平皿培养的优点是表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。大试管培养的优点是水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。玻片培养（为量培养、小培养）是将培养皿的真菌培养切成一个1cm*1cm的小方块在无菌载玻片中央，然后将真菌点种于小方块培养基的一侧，再盖上无菌盖玻片后培养，培养后将其盖玻片放入另一载玻片上于显微镜下观察菌丝和孢子，可用于真菌菌种的鉴定。

29、真菌的生化反映有哪些？

检验真菌常用的生化反映有糖（酵）类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。主要用于检验深部感染的真菌。

30、配置培养基的一般步骤是什么？

（1）按要求称取脱水培养基，倒入所要求量的蒸馏水中，反复搅拌使各成分混合成均匀混悬液。（2）各成分混合均匀后以文火缓慢加热并不断搅拌，煮沸1 min，不能过热，以免破坏有效成分。（3）分装试管应在高压灭菌前，而分装平皿应在高压灭菌后，均待培养基冷却至45-50度时分装。（4）高压灭菌一般为118-121度，6.81kg

（15磅），15min.时间过长会影响培养基的质量。（5）培养基中需加血或其他不能高压灭菌的成分如抗生素等，应在培养基冷却至

45-50度时以无菌方法加入并搅拌均匀。（6）试管一般每分管分装培养基7-8ml ,平皿约15ml。若需培养4-6周，平皿内应有35-40ml的量以保证培养期间培养基不会干掉。（7）分装后的平皿和斜面应置温室中24h，再贴上标签，放入冰箱中4度保存。（8）冰箱中贮藏时，试管应棉塞向上，平皿应顶盖朝下。（9）每批培养基制备完毕后随机抽取若干干管，接种上已知菌种，做质量检查，不合格者应全部放弃。（10）脱水培养基配制后一般不需要测PH值。按配方基本成分配制的培养基除非另有说明，否则在加入琼脂或高压灭菌前必须测定PH值。（11）配制液体培养基方法与半周体培养要求相同。（12）已配制的培养基棉塞试管的有效期一般为14d，平皿为30 d。时间过长应于放弃，以免其内部成分发生变化，影响真菌的生长。

31、体癣和股癣主要由哪些病原菌引起的？

毛癣菌、小孢子菌属和表皮癣菌属中的所有真菌都可以引起人类体癣和股癣。在我国，体癣的主要致病菌种是红色毛癣菌、须癣毛菌、犬小孢子菌、猪小孢子菌、铁锈色小孢子菌等。股癣的致病菌种与体癣大致相同，但也有差异。股癣较少有小孢子菌感染，而以红色毛癣菌、须癣毛菌等为主，白念珠菌股癣也较常见。

32、手癣和足癣主要由哪些病原菌引起的？

手癣和足癣的病原菌相似，在世界各地亦基本相同，主要是红色毛癣菌、须癣毛菌、玫瑰色毛菌、絮状表皮癣菌，烧碱的有断发毛菌、犬小孢子菌、石膏样小孢子菌等。

33、为什么AIDS患者易感染真菌？

近年来，随着AIDS发病率的不断增加，真菌病在AIDS患者中的感染率也成倍增加。其原因主要与下列几方面有关：（1）AIDS患者免疫力、尤其是细胞免疫力低下，CD4计数明显减少，这种病人特别容易感染致病真菌，因为机体抵抗真菌感染的主要机制依赖于细胞免疫。（2）由于对AIDS患者诊断和治疗的手段改善，早期发现、早期合理治疗AIDS愈加成为可能，AIDS患者生存期延长，但免疫力低下的情形难以改变，易患真菌病的诱因未能祛除。（3）新的、有效的抗细菌药物的出现和应用，治疗了不少AIDS患者并发的细菌感染，从而使真菌感染更明显化；同时由于大剂量广谱抗生素的使用，使条件致病性真菌的继发感染率上升，真菌病的发病率也由此增加。（4）深部真菌病起病隐匿，易被忽视，病人常见预防性用药中往往不含

抗真菌剂，而一旦发现治疗又较为困难，因此此病对AIDS患者的危害性大。

34、AIDS患者易被那些真菌感染？

AIDS患者对几乎所有的致病真菌和条件性真菌均易感染。其中念珠菌、隐球菌属为AIDS患者中常见的致病真菌，除此之外马内菲青霉、夹膜组织脑浆菌、粗球孢子菌、北美芽生菌等原为局限于某地域的地区流行性真菌病的病原体也冲破地域限制而感染AIDS患者。AIDS 患者并发真菌病的特点是：病情严重、发展迅速、易于播放、治疗困难、疗效长、剂量大、易容易复发。真菌病的并发常常是AIDS患者的重要致死原因。

35、真菌标本接种后的注意事项、？

标本接种后，每周至少检查2次，要注意菌落的形态、颜色和观察其镜下结构。

（一）菌落外观：（1）生长速度：菌落在7-10 d内生长，为生长速度快。3周只有少许生长，为慢。一般浅部真菌超过2周、深部真菌超过4周仍无生长，可报告阴性。（2）菌落大小：多数真菌菌落的大小和生长时间成正比。菌落大小用cm表示。（3）表面形态：真菌菌落表面形态多种多样，有平滑状、皱褶状、大脑状、同心圆状、放射沟纹状、火山口状、凸起、凹陷或下沉等。（4）菌落的质地：可以是乳酪样或者是霉菌样。（5）菌落的颜色和色素：除少数菌种外，一般不作为坚定的主要依据。（6）菌落的边缘：有些整齐有些不整齐有些突起有些下凹。（7）菌落的高度和下沉现象：有些菌落扁平，有些隆起，有些菌落下沉现象明显。（8）渗出物，一些真菌的菌落表面会出现液滴，注意其数量和颜色。（9）变异：不同的真菌对变异的易感性不同。

（二）显微镜检查：小培养可置普通显微镜下直接检查，而试管和平皿培养的菌落则需挑取后做涂片检查。

36、真菌的染色方法有哪些？

（1）HE染色、（2）革兰氏染色、（3）抗酸染色、（4）GF染色、（5）嗜银染色、（6）过碘酸锡夫染色、（7）吉姆萨染色、（8）粘蛋白卡红染色。36 什么是支原体？

支原体是一类大小和和结构复杂程度介于病毒和细菌之间，能在无生命的培养基中生长和增殖的最小原核微生物。支原体主要存在于人和动物的腔道黏膜上。在机体免疫力低下或黏膜受损时寄居的支原体可发展为致病原。

37、什么是科玛嘉培养基？

对传统培养基上生长的菌落鉴别需要繁杂的程序，而科玛嘉培养基由于含有特殊显色物质，无需通过任何仪器，仅通过观察菌落颜色既能在24小时内用肉眼对细菌进行定性和定量的分析。使用科玛嘉培养基将大大提高实验室微生物检测效率，并省时省力，使用方法与传统培养基相同。

38、科玛嘉显色培养基有几种？

科玛嘉显色培养基有八种：

念珠菌培养基：用于分离和鉴别主要致病性念珠菌（白色念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌）

定位培养基：用于分离和鉴别尿道病原体（大肠杆菌、肠球菌、克雷伯氏菌、变形杆菌、假单胞菌、葡萄球菌等）

Rambach琼脂：用于分离和鉴定沙门氏菌

沙门氏菌培养基：用于鉴别包括伤寒杆菌在内的沙门氏菌

大肠杆菌培养基：用于大肠杆菌的鉴定和计数

ECC培养基：用于大肠杆菌和大肠菌群的鉴定和计数

O157培养基：用于分离和鉴定大肠杆菌O157

光环培养基：用于金黄色葡萄球菌的鉴定和计数

39、什么是念珠菌显色培养基？

念珠菌显色培养基除了可象传统培养基（沙保氏）一样用于来培养和检测酵母菌，而且可以根据此菌落颜色、形态正确鉴定95%以上的白念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌。同样，能以相类似的准确度鉴定光滑念珠菌。它还能检出并鉴定混合培养物中酵母菌。在培养24-48小时后提供结果，比标准分离和鉴定快。

40、各种念珠菌在科玛嘉显色培养基的菌落特点？

菌落色彩初筛念珠菌绿色、翠绿色（直径约2mm）白色念珠菌蓝灰色、铁蓝色（直径约1.5mm）热带念珠菌粉红色（模糊、有微毛、菌落较大直径约4-5mm) 克柔氏念珠菌

紫色（直径约2mm）光滑念珠菌白色等其他念珠菌

41.何谓病原性真菌？

病原性真菌按其侵犯的部位不同分为浅部感染真菌和深部感染真菌

两大类。

42、浅部感染真菌包括哪几类及其临床意义？

浅部感染真菌包括表面感染真菌、皮肤癣真菌和皮下组织感染真菌三类。

表面感染真菌主要寄居于人体皮肤和毛干的最表层，在我国主要是糠枇马拉色菌，为条件致病菌，是一种嗜脂性酵母样菌。它侵犯皮肤角质层引起一种慢性、无症状或轻微症状的浅部真菌病，即汗斑，原名花斑癣。此外还可引起毛囊炎、脂溢性皮炎等。

皮肤癣菌分为毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子癣菌属三个属。皮肤癣菌易侵犯人体皮肤、指甲、毛发的角蛋白组织并生长繁殖致病，是因为其能产生数种角质溶解酶。皮肤癣菌引起的各种癣为头癣、体癣、股癣、足癣、手癣和甲癣等。

引起皮下组织感染的真菌主要有着色真菌和孢子丝菌。一般经外伤感染后，皮下组织真菌在局部皮下组织繁殖，并缓慢向周围组织扩散，还可经淋巴、血液向全身扩散。

43、深部感染真菌包括什么？

深部感染真菌是指能侵袭深部组织的内脏及全身的真菌，主要有假丝酵母菌、隐球菌、曲酶、毛酶、组织鲍浆菌和卡氏肺孢菌等，其中以隐球菌感染较常见。

44.假丝酵母菌的种类及临床意义？

假丝酵母菌，俗称念珠菌，生物学分类为半知菌亚门、半知菌纲、隐球菌目、假丝酵母菌属。本菌属有81个种，其中有11种对人有致病性，以白假丝酵母菌为最常见的致病菌。此外，热带假丝酵母菌、克柔假丝酵母菌和光滑假丝酵母菌也较多引起疾病。

白假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道粘膜上，当机体发生正常菌群失调或抵抗力降低时，可引起各种念珠菌病。可引起女性阴道炎、外阴炎、引起男性念珠菌龟头炎、包皮炎。可引起体制虚弱婴儿的鹅口疮，引起假丝酵母菌性肠炎、肺炎、膀胱炎、肾盂肾炎和中枢神经系统白假丝酵母菌病，如脑膜炎、脑膜脑炎、脑脓肿等。此外，因心瓣膜手术而引发念珠菌性心内膜炎、长期用静脉内导管而引起全身性假丝酵母菌病，病死率极高。

45、新生隐球菌的微生物特性？

新生隐球菌在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在4-6微米，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌体大1-3倍，折光性强，一般染色法不易着色。常采用墨汁负染色法，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。

非致病性隐球菌无荚膜。

46、新生隐球菌的致病物质是什么？

新生隐球菌的致病物质是荚膜。

47、隐球菌的临床意义是什么？

本菌属外源性感染。经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散时可侵犯

所有脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节，新生隐球菌病好发于细胞免疫功能底下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖

尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。因此，临床上隐球菌

性脑膜炎常在系统性红斑狼疮、白血病、淋巴瘤等病人中发生，在

国外已成为AIDS最常见的并发症之一，是AIDS死亡的首要原因。

48.抗真菌药物敏感性试验的设计和操作原则是什么？

抗真菌药物敏感性试验的设计和操作如同抗菌药物敏感性试验，原则为：①提供两

种以上有相当活性的抗真菌药物的可信测量方法；②和体内的活性具有相关性，可预测

治疗的效果；③可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生；④可预期

研究新药的潜在治疗效能。

常用肉汤稀释法，包括常量稀释法和微量稀释法。真菌包括酵母菌

和丝状菌，前者感染率高于后者。

49、什么是支原体？

支原体是一类大小和和结构复杂程度介于病毒和细菌之间，能在无

生命的培养基中生长和增殖的最小原核微生物。支原体主要存在于

人和动物的腔道黏膜上。在机体免疫力低下或黏膜受损时寄居的支

原体可发展为致病原。

50、支原体的分类？

支原体在自然界分布广泛，迄今分离到150余种，寄居于人类的支原

体有16种，对人有致病性的有5种：肺炎支原体，解脲脲原体（Uu)

人型支原体（Mh）,生殖支原体（Mg）,发酵支原体（Mf）。

51、支原体的致病机理是什么？

支原体主要在细胞外寄生，也可进入细胞内。它们自细胞表面嵌入，与宿主细胞争夺营养物质，影响蛋白质和DNA的合成，致使宿主细胞

染色体异常，严重者导致细胞死亡。具有致病性的支原体通过其特

殊结构，紧紧地黏附于易感宿主细胞膜表面的受体上。在黏附后，

通过与宿主细胞膜间的相互作用释放有毒的代谢产物，同时，自宿

主细胞吸取自身需要的营养成分，从细胞膜获得脂质和胆固醇，从

而引起细胞膜损伤。

52、支原体的培养特性？

支原体主要以二分裂的方式繁殖，故繁殖较慢，平皿上菌落呈草莓状，反复传代后呈荷包蛋状菌落。

53、肺炎支原体的临床意义？

肺炎支原体主要侵犯呼吸系统，临床上大多数表现为上呼吸道感染综合征，首先引起上呼吸道感染，然后下行引起气管炎，支气管炎，毛细支气管炎和肺炎。X线可见两侧肺部呈羽毛状浸润。也可引起严重的双侧肺炎和其他系统的肺外并发症。

54、支原体的形态特点？

支原体由于其缺乏细胞壁，故在形态上呈多形性，能通过除菌滤器，在固体培养基上形成特殊的油煎蛋样菌落。

55、支原体的抵抗力如何？

支原体对热的抵抗力一般与细菌相似，一般消毒剂容易将其杀死，但在低温或冷冻干燥条件下可长时间存活。

56、检查肺炎支原体的标本的种类？

一般可取病人痰，咽拭子、鼻咽洗液，支气管分泌物等。因肺炎支原体有黏附细胞作用，以拭子标本为好。

57、肺炎支原体血清学诊断方法有哪些？

肺炎支原体感染的血清学诊断方法有ELISA、冷凝集试验、补体结合试验、间接血凝试验等。

58、生殖道支原体感染者的标本采集？

男性病人可用灭菌棉拭由前尿道2-4cm处取样，女性病人在宫颈管内1-2cm处采集。根据患者病情需要，尚可取患者的前列腺按摩液、精液及患病处分泌物做标本。

59、支原体的分离培养及鉴定程序？

采集标本---接种液体培养基---置37度孵育1-5天，每日观察培养基颜色变化。直至Uu或Mh有颜色改变.(Uu一般阳性结果在1-2天内，Mh 在2-3天内）---（1）Uu或Mh液体培养基pH升（颜色由黄色或橘黄色变为红色），初步诊断为Uu或Mh。（2）SP-4液体培养基ph下降（由红色变为黄色），初步诊断为发酵醣类支原体如MgMf等。进一步鉴别诊断可采用PCR。---立即转种固体培养基，置于皿于5%-10%CO2和90%-95%N2环境中（或用烛缸代替）---37度孵育3-5天（Uu及Mh），Mg需更长时间。Dienes染色---在低倍显微镜下，观察油煎蛋状集落。

60、解脲脲原体（Uu)分离培养的原理？

Uu具有尿素酶，能分解尿素产氨，使含酚红指示剂液体培养基pH值上升，颜色由黄色变为红色。再将液体培养物转种到固体培养基上，能生长成具特征性油煎蛋样菌落。

61.解脲脲原体（Uu)分离培养的方法？

将标本接种于液体培养基后，置37度温箱中培养，每日观察。在有氧和无氧环境下均能生长，但放于含5%-10%CO2环境中生长更好。60%-80%温度环境适宜支原体生长。Uu生长繁殖到达高峰后极易死亡，故应及时转种。固体培养基也可放入烛缸内，经3-5天孵育后，在低倍显微镜下观察Uu菌落形态。

62.解脲脲原体（Uu)分离培养的结果判断？

若培养基发生由黄变红的颜色变化，透明无浑浊（有别于某些细菌及真菌生长）则可初步判断为有支原体生长。大多数Uu在24小时内可获得阳性结果。如果培养基发生颜色变化，但液体又有浑浊，则应排除杂菌污染，可用滤膜过滤后再接种观察。进一步诊断需将液体培养物接种到固体培养基上培养，经Dienes法染色后在低倍镜下观察菌落形态。阴性结果需观察5-7天。Uu在固体培养基上菌落核心呈粗颗粒状，具极窄的边，有时呈油煎蛋样。如用Dienes染色，菌落为特异的蓝色。

63.解脲脲原体（Uu)培养特性？

Uu营养要求较高，需要供给胆固醇和酵母，37度生长良好，22度生长差，42度不生长。最适pH值为5.5-6.5。生长除胆固醇外，尚需尿素，有脲酶能水解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸。

64.解脲脲原体（Uu)临床意义？

Uu所引起的疾病最常见的是非淋菌性尿道炎（NGU），也有30%-40%的NGU由Uu所致。Uu多寄生在男性尿道、阴茎包皮和女性阴道。若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睾炎；女性阴道炎、宫颈炎，并可导致流产。

65.解脲脲原体（Uu）的致病机制？

Uu的致病机制可能与其侵袭性酶和毒性产物有关。解脲脲原体吸附宿主细胞后，可产生磷脂酶分解细胞膜中的磷脂，影响宿主细胞生物合成。尿素酶分解尿素产生氨，对细胞有毒性作用。产生IgA蛋白酶，可降解IgA1形成Fab和Fc，破坏泌尿生殖道粘膜表面的IgA的局部抗感染作用，有利于Uu粘附于泌尿生殖道粘膜的表面而致病。66.检测支原体抗体滴度可用何试验？其原理是什么？

检测支原体抗体滴度可用间接血凝试验。其原理是，在一定条件下，

抗体和相应抗原相遇，可形成抗原抗体复合物。这种复合物分子团很小，不能形成肉眼可见的反应。用经鞣酸处理的红细胞作载体，将抗原吸附在其表面，使红细胞致敏，待与相应的血清抗体相遇时，可出现肉眼可见的凝集现象。

67.解脲脲原体（Uu）影响生育的机理？

Uu有粘附精子的作用，阻碍精子的运动，产生神经氨酸酶样物质干扰精子和卵子的结合，且与人精子膜有共同抗原，对精子可造成免疫损伤而致不育。

68.支原体分子生物学诊断方法？

目前主要应用聚合酶链反映（PCR）及DNA探针技术作诊断。前者以部分脲酶基因的核苷酸序列为模板，合成相应的引物经体外扩增后，Uu16个血清型均见460bp的DNA片段。通过对PCR产物的核酸杂交和序列分析，可将各种支原体鉴别分类。DNA探针技术是直接用缺口转移法制备P标记的DNA探针，测定时将标本粗提DNA100微升点样到硝酸纤维膜上，与放射性探针杂交，可测出50-100pg的DNA。

69.机体抗支原体免疫的情况如何？

支原体感染后的免疫机制比较复杂，现以肺炎支原体感染为例。肺炎支原体感染后可诱发机体产生体液免疫和细胞免疫。一般认为糖脂抗原主要引起体液免疫，蛋白质抗原主要引起细胞免疫。体液免疫所产生的特异性抗体在防止再感染上有重要作用。细胞免疫方面，肺炎支原体感染后可使淋巴细胞转化率增高，诱导产生IL-2等。目前认为可能是肺炎支原体引起宿主细胞抗原结构改变产生的自身抗体，或是肺炎支原体与宿主组织共同的糖脂抗原引起的交叉反应。

70.生殖道支原体可引起哪些疾病？

急性尿道综合征，非淋菌性尿道炎，肾盂肾炎，阴道炎，盆腔炎，不育症，死产，早产及低出生体重儿，羊膜绒毛膜炎，流产热和产后热等。

71.沙眼衣原体的概念？

沙眼衣原体是衣原体属微生物，具有细胞壁，核糖体，DNA和RNA，有合成蛋白质，核酸和脂类的能力。但它不能产生三磷酸腺苷（ATP），而完全依靠宿主细胞提供必须的能量。

72.沙眼衣原体的发育周期？

衣原体在宿主细胞内生长繁殖，有独特的发育周期，呈球形，可见到两种不同的颗粒结构。原体为感染型，有致病性。原体一旦进入细胞内就发育成始体。始体为繁殖型，无感染性，其具有新陈代谢

活性，行二分裂增殖，生成具有传染性的原体，然后释放出来，感染邻近细胞。衣原体完成一个生活周期约需48-72h。

73.沙眼衣原体有多少型？可引起哪些疾病？

目前已知沙眼衣原体有15个血清型，不同型可引起不同的疾病。

血清型疾病传播途径分布

A，B，Ba,C 地方性致盲性沙眼眼-眼

东南亚、北非、中东、美国等地

D 至K 包涵体性结膜炎生殖道-眼

世界各地

非淋菌性尿道炎生殖道途径

世界各地

宫颈炎、盆腔炎生殖道途径

世界各地

新生儿肺炎生殖道-其他器

官世界各地

L1，L2，L3 性病性淋巴肉芽肿生殖道途径

热带某些地区

74.沙眼衣原体的病原学检测的目的？

（1）确定病因。（2）检查衣原体有助于对患者及其性伴的治疗，防止进一步传播。（3）女性患者检查并治疗衣原体感染，将能防止其远期并发症，如异位妊娠或不育的发生。（4）诊断无症状感染者约有70%-80%的女性、50%的男性感染了衣原体后、并无任何临床表现。发现这类患者并给予治疗，将消除可能的传染源防止某些并发症。

75.用于细胞培养和抗原检测试验的标本如何采集？

对于细胞培养和抗原检测试验，采集标本最重要的原则是，要取到含足够数量的衣原体颗粒的标本。衣原体是一种细胞内寄生物，它只生长在细胞中。因此，所采标本必须含有上皮细胞。阴道和尿道分泌物并不是合适的标本，而必须采集感染细胞。

76.用于核酸扩增试验的标本如何采集？

用于核酸扩增试验的标本与上述用于细胞培养和抗原检测试验的标本相同。不过由于本试验敏感性很高，所以取材的要求，不那样严格，甚至阴道分泌物、尿道分泌物、尿液等均可作为标本进行检测。取材后的棉拭子可置于生理盐水中，或干拭子送检。

77.检测沙眼衣原体的方法有哪些？