滇越金线莲快速繁殖技术研究
第19卷 第3期文山师范高等专科学校学报
Vo l 119 No 132006年9月
JOU RNAL OF WENSH AN TEACH ERS COLLEGE
Sep 12006
滇越金线莲快速繁殖技术研究
张 铁1,田雪琪1,李 彬2
(11文山师范高等专科学校生物资源开发研究中心,云南文山663000;
21文山民族职业技术学校,云南 文山 663000)
[收稿日期]2006-05-12
[基金项目]文山师范高等专科学校学术科研基金项目(2003201)
[作者简介]张铁(1969-),男,文山师专实验师,主要从事生物技术研究。
[摘要]
通过滇越金线莲种子无菌诱导和茎诱导芽以及丛生芽增殖、生根等试验,得出结论:滇越金线莲
种子在不含激素的H yponex 1培养基上有较好萌发率,并且在添加10%椰乳后原球茎能分化出健壮的苗。外植茎
在H yponex l+6-BA 1mg/L+NAA 0101/L 培养基上诱导产生芽的几率最高;最佳增殖培养基是H y ponex l+BA 015mg /L+NAA 011mg /L;生根培养基是H yponex l+6-BA 0105m g/L+NA A 011m g/L 。
[关键词]
滇越金线莲;兰科;开唇兰属;花叶开唇兰;组织培养;组培快繁
[中图分类号] Q943 [文献标识码] A [文章编号] 1671-3303(2006)03-0110-05 滇越金线莲(Anoectochilus chap aensis )为兰科开唇兰属多年生草本植物,是一种名贵珍稀的中药材,主要分布于云南文山与越南交界的边境线一带[1](P26-28)。由于其生物学特征及药效与同属植物花叶开唇兰相近[2],被当地药农无度采挖,加之生态环境的破坏,这一野生资源日趋枯竭。从文献资料看,对于滇越金线莲研究甚少,组培快繁研究还未见报导,作者以滇越金线莲种子和茎为材料,利用植物组织培养技术,建立了人工快繁技术体系,为保护、开发和利用这一资源奠定基础。
1 材料与方法
111 实验材料
材料于2003年9月采自麻栗坡火烧梁子林区,植株带有成熟蒴果。
112 实验方法11211 摘取尚未开裂蒴果及去除根叶的茎段,经表面清洗后,放入75%酒精中灭菌30秒,再以011%升汞灭菌7~10分钟,用无菌水冲洗4~5次。在无菌条件下将蒴果切开,将种子均匀撒播在培养基上,60天后统计萌芽率。在无菌条件下,将茎切成1cm 左右长带1~2腋芽的节段,接种到诱导培养基上。11212 选择M S 、改良VW (V acin 和Went,1949,添加M S 的微量元素)、Knudson C 、花宝一号(H y -ponex l,7-6-19)3g/L [3](P267)等4种基本培养基,
考察其对种子萌发的影响。
11213 在不同培养阶段,添加不同激素浓度配比6-BA 、NAA,考察其对外植体诱导、增殖及壮苗生根情况。
11214 在种子诱导培养基中添加10%的椰乳(CM),考察其对种子萌芽的影响;在壮苗培养基中分别添加10%香蕉提取物、10%马铃薯提取物,筛选最佳添加物壮苗培养基配方。
11215 除种子萌发期在暗处培养外,其余每天连续光照12h,光照强度1500~3000lx,培养温度25?1e 。
2 结果与分析
211 诱导种子萌发
通过种子无菌诱导试验,40天后可观察到种子开展萌动,出现肉眼可见的淡黄色的原球茎,与金线莲
种子无菌萌发时间相近[4](P3-5)。观察1/2MS 、VW 、KC 、H yponex l 等4种培养基对滇越金线莲种子萌发的影响,结果见表1,其优劣顺序为:Hyponex l>1/2MS >KC>VW 。在H yponex l 培养基上种子萌发快,萌发率最高,达到70%,原球茎生长状况最好;V W 培养基上种子萌发最慢,并且萌发率低,原球茎后期出现褐化、部分死亡。从添加椰乳(CM )对种子萌发的影响试验来看,添加椰乳不仅可提高于种子萌芽率,而且后期原球茎分化的苗健壮(图1)。
第19卷文山师范高等专科学校学报2006年第3期
表1不同基本培养基对滇越金线莲种子萌发的影响
基本培养基萌芽率%萌发特征
1/2M S50萌发快,原球茎生长整齐,后期苗弱
1/2M S+10%CM55萌发快,原球茎生长整齐,后期苗健壮
V W20萌发慢,原球茎后期褐化、部分死亡
V W+10%CM25萌发慢,原球茎后期褐化、部分死亡
H yponex l70萌发快,原球茎生长整齐,后期苗健壮
H yponex l+10%CM70萌发快,原球茎生长整齐,后期苗健壮
K C45萌发较快,原球茎生长整齐,后期苗弱
K C+10%CM50萌发较快,原球茎生长整齐,后期苗健壮注:播种60天后解剖镜下统计的萌发率
212芽的诱导、增殖
将茎段接在以H y ponex l为基本培养基的诱导基质上,培养12~14d后,茎段叶腋处及茎段基部开始分化出可观察到的乳白色的不定芽(图2、3)。30天后可见明显的丛生芽(见图4、5)。试验结果表明不同浓度的激素对滇越金线莲茎芽诱导有不同效果,丛生芽增殖率也有明显的不同(见表2)。
表2不同激素浓度配比对滇越金线莲茎诱导及增殖的影响
激素浓度(mg/L)
BA NA A 诱导率
(%)
增殖率
(%)
0000 11001057412180 1100116018360 1100124613240 21001056915340 2100116015430 2100124515270 31001053015270 3100112416320 3100122114250
表2表明,在未加激素时,从茎段不能诱导出芽。从试验结果中得出,当6-BA浓度在1~3mg/L、NAA浓度在0105~012mg/L时,均能诱导出芽,最适宜的诱导培养基是H y po nex l+6-BA1mg/L+ NAA0105mg/L。将诱导的芽接种到相同培养基上扩增,其产生的丛生芽的增殖率如表2所示,在不添加激素时,芽只是继续生长,不产生新的丛生芽。在添加一定配比浓度的6-BA和NAA后,能产生丛生苗,其中在H y ponex l+6-BA2m g/L+NAA 011mg/L培养基上丛生芽增殖率最高,可获得大量丛生芽。
213生根成苗
取茎段粗壮,长势好的苗接种以下各培养基中诱导生根成苗。
表3不同生根培养基的培养结果
激素浓度(mg/L)
BA N A A 株叶片数
(片/株)
株根数
(条/株)
叶片畸形率
(%)
001111120 001011151140 00111192100 001511711821 010501013101170 01050112132130 010501521221123 01101012151150 0110112102110 01101511811823 015010121111632 01501121311935 01501511911756
在没有激素的培养基上,虽然可以得到株形正常的小苗,但生长速度慢,不适于作快速繁殖。在BA浓度达到015mg/L、NAA浓度达到015mg/L时,苗虽然生长快,但叶片出现叶脉缺失等畸形现象,不能大量发育出正常的苗。因此,既能尽量保证苗的正常发育,又能保证苗生长速度快的培养基是:H yponex l+6-BA0105mg/L+NAA011mg/L(见表3)。
214壮苗、移栽
将已生1~2条根,株高4cm左右的正常小苗移入H yponex l基本培养基、或分别添加10%香蕉提取物、10%马铃薯提取物的H yponex l基本培养基中壮苗。
4周后,从三组试管苗生长对比试验得出,添加10%香蕉取物或10%马铃薯提取物的Hyponex l基本培养基中的苗长势较好,试管苗健壮、根系发达(图6、7)。
经过4周的壮苗培养,幼苗一般长到5~6cm、具有3~4片叶片、2~3条的根时,将瓶子移到室外打开瓶盖炼苗3~5天,然后洗去小苗基部的残留培养基,移入无菌珍珠岩中,每天进行一次叶片喷雾,每周用1/5H yponex l液体培养基施入珍珠岩中,保持环境相对湿度在80%~90%,经过四周的过渡栽培再移入荫棚中,成活率可达98%以上。
3小结
311滇越金线莲种子在不含激素的Hyponex l培养基上种子萌发快,萌发率最高,原球茎生长状况最好。312添加适量的椰乳后,种子萌发率显著增加,表明椰乳内具有某种活性物质可促进种子的萌发,我们在对兰科文山红柱兰的研究中也得到类似的结果[5](P225-226)。
313滇越金线莲茎在H yponex l+6-BA1mg/L+ NAA0105mg/L培养基上诱导产生芽的几率最高;最佳增殖培养基是Hyponex l+6-BA2mg/L+NAA011 mg/L;生根培养基是H yponex l+6-BA0105mg/L +NAA011mg/L;壮苗培养基是H yponex l+10%的香蕉及10%的马铃薯提取物。
314丛生苗产生有两种途径:一种是节间腋芽萌发伸长,逐渐形成不定芽(图4),继代时把不定芽切割成带一个腋芽的茎段,增殖率250%~430%,若停止继代转入生根培养基,每个小芽可形成植株;另一种是接触培养基的节膨大,节周围长满重重叠叠的突起,随着突起的生长,节的形态消失,形成不规则的团状肉质原球茎和丛生芽(图3),原球茎可进行增殖,若割成3~4块,每块又可形成若干新的原球茎,它增殖率比较高,可达320%~460%;若停止切割,每个原球茎就能长成一个完整的植株。但后一种途径产生丛生苗的增殖率高,形成的苗较弱、畸形苗几率高。
315在生根培养过程中,培养基中附加10%的香蕉及10%的马铃薯提取物对试管苗壮苗及生根有明显促进作用。
316根系发育良好的植株,对霉菌有较好抵抗力。
图7经过壮苗处理的滇越金线莲苗
[参考文献]
[1]张铁等1文山金线莲种质资源初步调查[J]1文山师范高
等专科学校学报2005,(1).
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青岛:青岛出版社,20021[3]谭文澄1观赏植物组织培养[M]1中国林业出版社,19881
[4]黄慧莲等1金线莲种子诱导成苗的研究[J]1中药材2002,
(1).
[5]丁长春等1文山红柱兰快速繁殖技术的研究[J]1文山师
范高等专科学校学报,2005,(3).
A Study on Embryo Germination and Proliferation in Vitro of
Anoectochilus Chap aesis
ZhANG Tie1,T IA N Xue-qi1,LI Bin2
(1.Research and Development Center of Biological Resources,Wenshan Teachers p College,Wenshan,Yunnan 663000,China;21Wenshan Vocational and Technical College for Nationalities,Wenshan,Yunnan663000,China)
Abstract:T his paper presented the o ptimal culture conditions fo r the in vitr o em br yo g erm ination and prolif-eration in vitro o f A noectochilus chap aesis.The results w ere as follow s:the seeds g er minated w ell in Kyo to me-dium w ithout gro w th regulators,and new shoots w ere differentiated fr om protocorm w hen10%CM w ere added. In a seco nd ex periment,the stems w ere then used as ex plants and produced new shoots best in the medium of H yponex l+6-BA1mg/L+NAA0101/L;the best prolifer ation medium was H ypo nex l+BA015m g/L+ NAA011mg/L;and the best ro oting medium was H y ponex l+6-BA0105mg/L+NAA011mg/L.
Key words:A noectochilus chap aesis;Orchidaceae;Anoectochilus Blum e;Anoectochilus rox burg hii;tissue culture;micro pro pog ation
金线莲组织培养方法
金线莲组织培养方法 一种药用金线莲组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：１）培养基准备该步骤包括配制，分装，灭菌三步，其中配制：以１／２ＭＳ为基本培养基，每升添加６－苄氨基嘌呤２ｍｇ、α－萘乙酸１．０～１．５ｍｇ、芸苔素内酯０．０５ｍｇ、香蕉１００ｇ、琼脂６．５ｇ和蔗糖２５ｇ，混合后的培养基的ｐＨ值调节至５．６；分装：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；灭菌：将加入培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：１２１℃、１０５ｋＰａ下灭菌１５分钟，灭菌后及时取出培养瓶，冷却备用；２）外植体处理和接种该步骤分为两种情形，当采用自然生长的植株作为外植体时包括清洗，消毒，接种三步，其中清洗：选择自然生长、无病虫害的健壮植株，用加入少许肥皂粉的水清洗植株，后用流水冲洗２小时；消毒：在无菌条件下，去除叶片，将植株茎段在７５％的酒精中浸润１０秒后，放入１０％的次氯酸钠消毒１５分钟，用无菌水清洗６遍，沥干水分，放入无菌的培养皿中备用；接种：将消毒后备用的茎在无菌条件下切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；当采用组培无菌苗时直接进行无菌接种，即在无菌条件下将组培无菌苗去叶，将茎切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；３）培养该步骤将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，培养条件为：温度２５±２℃，光照时间每天１２小时，光照强度１５００～２０００ｌｘ，培养时间四个月左右，培养期间要勤检查，发现污染的要及时去除；４）移栽选苗高约６～８ｃｍ、具叶３张以上、茎基直径约２ｍｍ、发根２～３条的试管苗，炼苗４天后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移栽至１份菜园土＋２份粗砂＋１份木屑，或１份菜园土＋１份粗砂＋２份木屑的基质中。 2一种菌根真菌在金线莲栽培中的应用技术，采用小菇属4种真菌：石斛小菇(Mycena dendrobii)、紫萁小菇(Mycenaosmundicola)、兰小菇(Mycena orchidicola)、开唇兰小菇(Mycena anoectochila)中的任选一种或由其中任意两种或两种以上组成，其主要步骤及条件如下(所述比例均为重量百分比)：(1)菌根真菌的培养将上述的菌根真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，分别转接于PDA平皿中，于25℃恒温培养12-20d，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基进行培养和发酵或接入固体培养基进行培养；(2)金线莲苗的培养芽增殖培养基：MS(Murashige and Skoog 1968)培养基，附加6-BA(6-苄基嘌呤1.2mg/L、NAA(萘乙酸)0.6mg/L；丛芽增殖培养基：MS为基本培养基，附加6-苄基嘌呤(BA)1.5mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L，玉米素(ZT)0.15mg/L；苗继代培养基：1/2MS，200g/L马铃薯提取液，25g/L蔗糖，琼脂9g/L，pH5.8；(3)菌根真菌与金线莲苗共生栽培(a)金线莲栽培基质蛭石∶砂子＝4∶1或森林腐殖土∶砂子＝6∶1或泥炭土∶砂子＝5∶1或泥炭土∶砂子∶蛭石＝4∶1∶2；(b)金线莲菌根共生栽培在硬质材料的托盘或盆中立体栽培，其容器的基部平铺一层金线莲栽培基质，其上按株行距栽培一株或一丛的金线莲苗，在苗根的基部放置少量粉碎的湿栎树(山毛榉科Fagaceae)树叶，其上再放以上备好的液体菌根真菌2ml或固体菌根真菌1-2g，使金线莲的根与菌接触，用栽培基质将苗覆盖2-3厘米厚，浇放置至室温的水；(c)栽培条件采用塑料薄膜温室、玻璃温室、露天栽培遮阳网遮阴，环境温度为18-25℃，光照量为正常日光量的1/3，照度2000Lx；(d)金线莲的收获收获时可剪取地上部分，也可一次性连根取出洗净栽培基质；阴干或60℃以下烘干；其中所述的菌根真菌的液体培养为：培养基的配制：葡萄糖2.5％；KH2PO4 0.15％；K2HPO4 0.1％；MgSO4 0.15％；天然物：麦麸3％(煮汁)，高压灭菌后分别接入上述真菌；培养条件：培养基pH5.6；三角瓶摇床培养瓶装
金线莲种植项目
金线莲种植项目简介 一、项目名称：金线莲种植及产品研发项目 二、项目选址：广西玉林市 三、项目特色： 金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。金线莲几百年来作为民间常用草药,在民间传说具有治疗百病之功效，为历代皇宫的专用御品。经医院临床应用，金线莲具有肝保护、抗HBV、抗氧化、抗肿瘤活性、降高血糖、降高血脂、降高血压、降高尿酸、小儿哮喘、小儿抽动秽语、抗炎、利尿、镇静、止痛等多种治疗功效。 金线莲只能生长在人迹罕至处于原始生态的深山老林内，需要特殊的大自然循环气候，阳光雨露的巧妙结合，在自然界的蕴藏量已很稀少。1990年，金线莲被列为濒危药用植物。 玉林属于典型的亚热带季风气候，气候温和，年平均温度22℃；雨量充沛，年平均降雨量为1650毫米；光热充足，年平均日照时数1795小时，无霜期长，年平均无霜天数为346天。极端最低温-2℃，极端最高温38.4℃。全年降水天数在160天以上。各月平均风速适宜，在每秒1.3~1.8米之间。天然气候非常适合金线莲生长，十分适合规模化人工培育开发。 四、交通区位条件 玉林市位于广西壮族自治区东南部，西距自治区首府南宁市190公里。东经109°39′至110°18′，北纬22°19′至23°01′。东连广东省茂名市。西接广西壮族自治区钦州市，南邻广西壮族自治区北海市，北毗广西壮族自治区贵港市，东北与广西壮族自治区梧州市接壤。玉林市内发达便利的高等级公路，架构了以玉林城区为中心的“半小时经济圈”；连接周边城市的高等级公路四通八达，国道324线与黎湛铁路纵横相交；已建成的南宁经玉林至广州高速公路以及洛湛铁路、玉林至北海高速公路、铁路，正编织以玉林城区为中心的综合交通运输网络。交通运输十分便捷。 五、市场开发现状
金线莲种植投资方案
金线莲投资方案 金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。经有关部门测定发现，金丝莲中氨基酸组成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参。 近3年，金线莲产业发展更是突飞猛进，尤其以福建市场最为火热。目前单以福建省计算，进行金线莲生产和加工的公司就有30多家。尽管生产企业和生产规模连年增加，但是金线莲仍供不应求，这导致了金线莲的价格也逐年走高。因此金线莲无疑具有广阔的市场前景和巨大的经济效益。 方案一：按单卖鲜品计算 一、设施面积： 第一期以300平方米的面积为计算单位，大棚的投资大约为1.5万元。 二、苗木费用：300平方米大约可以种植6万棵，每株苗0.5元，共3万元的购苗费用，其他电费、种植基质、人工等费用2万元。第一期总投入需要投入6.5-7万元。从7月份开始种，10月份收，每棵可以长到重约5克。产量约为600斤鲜品，按平均一斤200元（具体要看销售能力和当地的市场情况）算，销售额为12万元，三个月后就可以收回投入的资金7万元，并实现
盈利5万元，并且在第二期开始，无需设施的投资。第二期投入10万元计算，可以买苗20万棵，同等价格条件下，全部售完，年底当可实现盈利15万元。 方案二：按单做盆栽计算（300盆） 一、设施成本： 第一期仍以300平方米的面积为计算单位，大棚的投资大约为1.5万元。 二、生产资料费用： 1. 种植篮（盆）10元/个,第一期以300盆计算。需要3000元。 2. 种植基质：按每盆5元计算，需要1500元。 3. 水，电费：2000元计算。 4. 苗木费用：每盆按30元计算，需要9000元。（以1万元计算） 三、人工费用：（包含养护人工成本） 按每盆10元计算，需要3000元 四、销售成本：运输费用：按1万元计算 总投资需要：4万元 效益分析：以每盆280元计算，销售额8.4万元，一期，2个月后可盈利4.4万元。 第二期，省去设施成本1.5万元，按500盆计算，可以实现
金线莲组织培养及栽培技术研究
金线莲组织培养及栽培技术研究 吴艺东 (南靖国有林场,福建漳州 363600) 摘 要:金线莲属名贵中草药,野生数量极少,通过人工栽培形成规模生产,才能满足市场需要。试验研究了金线莲组培育苗、大棚栽植等过程中应注意的有关影响因素。 关键词:金线莲;外植体;组培;移栽;基质;消毒;温度;湿度 中图分类号 S567 23+9 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2009)15-46-01 金线莲又称金线兰、金不换、金钱草、鸟人参等,为兰科化叶开唇属的多年生草本植物,是珍稀民间草药,全草入药,味平、甘,常用于治疗小儿惊风高热、糖尿病、高血压、肝炎、风湿性关节肿瘤及其他疑难杂症。 金线莲属植物有30多种,一般分布在海拔300~ 1200m的丘陵地;我国福建、广东、广西、海南、四川、贵州、云南均有野生金丝莲。它性喜阴凉、潮湿,尤其喜欢生长在有常绿阔叶树木的沟边、石壁、土质松散的潮湿地带,要求温度18~20 ,光照约为正常日照的1/3,最忌阳光直射。其株高8~20c m,根茎细软,茎圆筒形,先端直立,基部成匍匐状,茎节明显;叶互生具柄,呈椭圆形,叶面有光泽、墨绿色中有金黄脉网,叶背淡紫红色;花为完全花,总状花序具有1~6朵松散的花,花序梗长8~13c m,被柔毛,花苞片淡紫色,卵状披针形。金线莲除药用外,还是一种极具观赏价值的室内观叶珍品。由于其对生态环境要求严格,加之近年自然环境遭受严重破坏,野生金线莲越来越少,因而商品价格居高不下,鲜草价达400元/kg以上,干草价达2000~3000元/kg。因此,国内相关部门经过研究实践,目前人工栽培技术已进入推广阶段。本文就金线莲的组织培养与人工栽植的过程进行试验分析。 1 外植体的建立 1 1 取材 于2007年5~10月在南靖县山城镇和南坑镇高山坑沟采集长势良好、无病虫害的野生金线莲植体,取回后置于南靖国有林场小山城工区搭建的阴凉大棚内培养7d左右,以减少其所带的杂菌。 1 2 预处理 将金线莲从大棚中取出,用流水将植株洗净后去掉根、叶,再用小刀把叶鞘及顶芽外叶削掉,整个过程不要伤及腋芽。用棉花沾肥皂水擦洗植株并浸泡10m in后用纱布包起,移至超净工作台上。 1 3 消毒 用75%酒精振荡10~15s后,再用0 1%升汞水灭菌3m in,无菌水冲洗2遍。最后用12%漂白粉澄清液灭菌10m i n,无菌水冲洗5遍后即可进行接种。 1 4 接种 将消毒好的材料切成带1~2个腋芽的茎段,接到诱导培养基上。诱导培养基为1/2M S(即大量元素减半,其他成分不变)+6-BA5m g/L+NAA1m g/L+琼脂粉0 65%+3%蔗糖,p H5 8。培养温度(25 3) ,诱导过程中无光照或低光照(500~600l x) 2 继代增殖培养 接种15d后开始萌动。观察发现,顶芽较腋芽更容易萌动,腋芽以丛生生长为主,顶芽则以伸长生长为主。再培养30d后将诱导出的芽切成带1~2个腋芽的茎段,接到增殖培养基M S+6-BA3m g/L+KT2mg/L+NAA0 3 m g/L+0 65%琼脂+3%蔗糖。继代培养前期低光照,随后可适当增强光照(1000~1200l x)。 3 生根培养 取茎段粗壮,长势好的金线莲接到生根培养基M S+ I BA1m g/L+KT0 2m g/L+NAA4m g/L+0 65%琼脂+ 3%蔗糖+0 3%活性炭,每天光照10h,光照度1500~ 1200l x。培养10d后开始生根,根不从切口处而从靠近培养基的每个节上长出1~2条,呈肉质状。根比较短且不分支,其上有细密、乳白色后径根毛。培养50d左右,植株长至8c m时可进行室外移栽。 4 大棚搭建和组培苗移栽 大棚用毛竹和水管搭成,顶部先覆盖一层薄膜,再在上面用80%遮阳网覆盖,顶高大约3m左右,棚内搭3层盆架,第一层离地面10c m,上两层各离70c m,棚内地面铺15c m高的河沙(上沙下土),用于保湿。移栽一般选择在气温较低的秋冬季节,将促根后的金线莲移至室外进行适应性炼苗后,将苗从瓶中拔出、洗净,种植于阴凉大棚内。栽培基质采用A 腐殖土 椰康 细沙=1 1;B 松木树皮粉碎加工 泥炭土=2 1(每100kg基质加0 5kg进口复合肥)。移植前基质进行日晒消毒,移植后用1 5000倍绿佳喷淋消毒,整个移栽过程要做好喷水工作。 5 移栽后管理 把金线莲移至阴凉大棚内专用花盆内,每盆栽植20株左右,大棚内温度控制在20~28 ,使空气相对湿度保持在70%~80%;以后每7d喷1次1/4M S或氨基酸800倍左右喷施来补充养分,以够湿为准;如遇有猝倒病则喷施多茵灵或托布津1000倍液,3个月培养期后出苗,选择根壮叶繁的15c m高优质苗。采后用清水(下转211页) 46安徽农学通报,Anhu iAgri Sci Bu ll 2009,15(15) 作者简介:吴艺东(1971-),男,福建南靖人,林业工程师,主要从事林业资源培育和林木种苗培育工作。 收稿日期:2009-06-08
金线莲调研报告
金线莲调研报告 ——,福建漳州、厦门 一、金线莲组织培养 1、培养基制作配制培养基 南靖本地大量培养及种植金线莲外，香蕉也是本地一个重要农业种植品种。上山下乡路途中常常可见大片香蕉种植基地。本地金线莲培养企业也在培养基配方中加入香蕉作为添加物，此外还有活性炭。其他配方为企业机密，不对外透露。 分装 加塞 灭菌 2、接种 过程：母苗→取出→去除叶片、根部，留下茎→剪成茎段→置入新培养基→ 摆好茎段→加塞→移至培养室培养4个月→留作母苗↓↘烘干出售出瓶种植 茎段长1cm-3cm,每一茎段留一个茎节每瓶培养基接种25左右个茎段 3、培养培养条件： 培养灯光：普通荧光灯，适宜光强为3000lux左右，但有厂家为控制电费成本低于该光强
培养温度：空调控制为25℃左右 开灯时间：一般为白天关灯，夜间开灯12h。主要为夜间温度低，控制空调电费成本考虑。 培养时间：从接种之日培养至出瓶一般为4个月左右，期间不转接，直至金线莲出瓶。培养目的： 留作母苗：继续留在培养室，作为下一次接种的母苗。烘烤干品：冲洗根部培养基后烘烤成干品后出售。 出瓶种植并洗瓶：出瓶冲洗培养基后进行种植。清洗时应特别注意不要损伤根部，不可使用毛刷，用水漂洗。 4、残次品：残次品：接种剪下的叶片、根茎及炼苗失败的瓶苗洗净培养基后，厂家也将其 烘烤成干品制成茶包低价出售。有的干品在500元/斤左右。 5、典型案例：福建“嘉胜集团”系南靖县乃至福建省最大的金线莲组培集团，该公司有接种室12间，接种工作人员≥200人，金线莲组培苗月产量可达100万瓶。 二、金线莲大棚种植 1、炼苗：瓶苗出培养室后一般炼苗15-30d，或者更久。炼苗一般有专用炼苗大棚，瓶苗出培养室后运至炼苗大棚摆放即可，使瓶苗逐步适应外界的光、温、湿等。 2、出瓶：开盖后适当加水于瓶内，然后摇晃，用手指轻轻勾出苗后，洗净培养基。 3、种植：
金线莲有什么功效和作用
金线莲有什么功效和作用 金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。经有关部门测定发现，金丝莲中氨基酸组成、成分、含量及抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参。几百年来作为民间常用草药。 1、金线莲的形态特征 根茎较细，节明显，棕褐色。叶上面黑柴色，有金黄色网状脉，下面暗红色，主脉3~7条。总状花序顶生，花序轴被柔毛，萼片淡紫色。气微，味淡。
2、金线莲的药材现状 本品呈皱缩卷曲，不规则状的干燥全草，根茎圆柱形，多弯曲，长1-5cm，表面棕褐色，茎节明显，下部集生2-4片叶，叶互生，多卷缩而完整，展开为宽卵形，表面黑棕色，下面暗红色，部分叶脉紫红色，叶柄基部鞘状抱茎，偶见总状花序顶生，花暗棕色，少见蒴果矩圆形，香气特异，味淡。3、金线莲的成分 含糖类成分（多糖13.326%，低聚糖11.243%，还原糖 9.73%）、牛磺酸、强心甙类、酯类、生物碱、甾体，多种 氨基酸，微量元素及无机元素等。 4、金线莲的要理 （成份中）氨基酸和微量元素两者的含量均高于国产西洋参和野山参；它们与牛磺酸、多糖类成分具有营养、抗衰老、调节人体机体免疫的作用。因此，台湾民众及畲族等群众将其当作补虚的滋补强壮品是有道理的。 性味、功效：甘、平；具清热凉血、袪风利湿、强心利尿、固肾、平肝等功效。 5、金线莲主治 清热凉血，除湿解毒，平衡阴阳、扶正固本，阴阳互补、生津养颜、调和气血、五脏、养寿延年的功用。入肾、心、肺三经，能全面提高人体免疫力，增强人体对疾病的抵抗力。
主治肺热咳嗽，肺结核咯血，尿血，小儿惊风，破伤风，肾炎水肿，风湿痹痛，跌打损伤，毒蛇咬伤、支气管炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、急慢性肝炎、风湿性关节炎肿瘤等疑难病症，也兼除青春痘。 6、金线莲的适宜人群 商务人士 金线莲是工作劳累者保健首选天然饮品：金线莲能入肾、心、肺三经，具有调和五脏、保肝护肝、解酒等功效。 能全面提高人体免疫力，增强人体对疾病的抵抗力。 中老年人 金线莲对支气管炎、肾炎、膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎、急慢性肝病、高血压、动脉硬化、脑血栓等均有辅助功效。 小儿 金线莲对小儿高烧不退、咳嗽、急惊风效果好。 女性 金线莲常煲汤饮用，能排毒养颜抗衰老、调节内分泌、调和气血、生津养颜。 青少年 饮用金线莲一段时间，能有效消除青春痘和粉刺。
植物组织培养的一般流程
植物组织培养的一般流程 一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤： （1）准备阶段 查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。 （2）外植体选择与消毒 选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。（3）初代培养 接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。 （4）继代培养 分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。 （5）生根培养 刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。 （6）炼苗移栽 选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。 二、单项选择题 1. 在衡量杂种优势（H ）时，超中优势的计算方法为（P 1 、P 2 分别表示两亲本的性状平均值，F 1 为杂种一代的性状平均值）：A. H ＝[F 1 -(P 1 +P 2 )/2]/(P 1 -P 2 )/2 B. H ＝(F 1 -P 1 )/P 1 C. H ＝[F 1 -(P 1 +P 2 )/2]/(P 1 +P 2 )/2 D. H ＝ (F 1 -P 2 )/P 2 2. 根据植物梢端组织发生层学说，如果L II 层细胞发生突变，则下列器官或组织会发生变异的是： A ．表皮B. 种子C. 不定根D. 中柱 3. 对于孢子体型自交不亲和而言，下列基因型的杂交组合能产生后代的是： A ．S 1 S 2 ×S 1 S 2 B ．S 1 S 2 ×S 1 S 3 C ．S 1 S 2 ×S 2 S 3 D ．S 1 S 2 ×S 3 S 4
金线莲组培快繁
金线莲组培快繁技术研究 【摘要】目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0 mg/L +NAA0.5～1.0 mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3 mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。 【关键词】金线莲；快速繁殖；增殖；生长；移栽金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。 金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处
于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。 1 材料与方法 1.1 材料无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。 1.2 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5 min，然后用流水冲洗30 min。在超静工作台前，用75% 酒精湿润5～6 s，放入0.1%的HgCl 溶液灭菌12～13 min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2 cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA 4.0 mg/L +NAA 0.4 mg/L 培养基上，pH5.6，蔗糖 2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃，光照时间12 h/d，光照强度1 500～2 000 lx。 1.3 不定芽诱导 1.3.1 基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS（Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin & Went)，B5（Gamborg·Miller & Ojima）和KC(Knudson C)等5种，分别添加6－BA 4.0mg/L，NAA 1.0 mg/L。 1.3.2 激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不
金线莲种植项目
金线莲种植项目 金线莲种植项目简介 一、项目名称:金线莲种植及产品研发项目 二、项目选址:广西玉林市 三、项目特色: 金线莲别名金线兰、金丝草，为兰科开唇植物花叶兰属多年生珍稀中草药。它在民间使用范围较广，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称。金线莲几百年来作为民间常用草药,在民间传说具有治疗百病之功效，为历代皇宫的专用御品。经医院临床应用，金线莲具有肝保护、抗HBV、抗氧化、抗肿瘤活性、降高血糖、降高血脂、降高血压、降高尿酸、小儿哮喘、小儿抽动秽语、抗炎、利尿、镇静、止痛等多种治疗功效。 金线莲只能生长在人迹罕至处于原始生态的深山老林内，需要特殊的大自然循环气候，阳光雨露的巧妙结合，在自然界的蕴藏量已很稀少。1990年，金线莲被列为濒危药用植物。 玉林属于典型的亚热带季风气候，气候温和，年平均温度22?;雨量充沛，年平均降雨量为1650毫米;光热充足，年平均日照时数1795小时，无霜期长，年平均无霜天数为346天。极端最低温-2?，极端最高温38.4?。全年降水天数在160天以上。各月平均风速适宜，在每秒1.3~1.8米之间。天然气候非常适合金线莲生长，十分适合规模化人工培育开发。 四、交通区位条件 玉林市位于广西壮族自治区东南部，西距自治区首府南宁市190公里。东经109?39′至110?18′，北纬22?19′至23?01′。东连广东省茂名市。西接广西壮族自治区钦州市，南邻广西壮族自治区北海市，北毗广西壮族自治区贵港市，东
北与广西壮族自治区梧州市接壤。玉林市内发达便利的高等级公路，架构了以玉林城区为中心的“半小时经济圈”;连接周边城市的高等级公路四通八达，国道324线与黎湛铁路纵横相交;已建成的南宁经玉林至广州高速公路以及洛湛铁路、玉林至北海高速公路、铁路，正编织以玉林城区为中心的综合交通运输网络。交通运输十分便捷。 五、市场开发现状 随着国民经济的高速增长和城市化进程的加快，以及全社会对健康的日益重视。近年来药膳和保健品越来越热门，然而像金线莲这种既美观又能食用的品种并不多。类似的大概还有铁皮石斛，三叶青。金线莲作为高档保健品倍受市场青睐，相关制品供不应求，高端金线莲制品市场价格达到每斤1万元以上。 六、项目内容、建设规模: 需求适宜种植土地300多亩。项目可采取“公司+合作社+农户”生产经营模式。公司主要负责金线莲种苗培育、技术研发、初制品收购、产品深加工和市场推广等;由农户按统一标准规模化种植。主要建设项目包括:金线莲研发中心、示范基地建设、产品深加工等。七、项目投资金额及收益分析: 项目总投资约一千万元，共分三期投资，第一期投资额为200万元，第二期投资额为300万元，第三期投资额为500万元。项目投资利润率15%，投资回收期约7年。八、风险评估 金线莲种植经营活动和其它领域的经营活动一样，同样存在着经济风险，只有对其进行科学的预测和分析，有效的规避这些可能存在的经济风险，才能使该项目产生更大的经济效益、社会效益。经济风险从大的方面来讲只有两方面:一个是我们赖以生存的大自然，另一个则是我们人类自己。 1. 自然风险
金线莲栽培方法种植方法
金线莲栽培种植方法 一、金线莲的生态习性： (1)温度 生长适宜温度是20～32℃。金线莲对温度的适应性较强。在栽培过程中，在大棚覆盖下，连续30d的0～5℃的低温对金线莲还无明显伤害。15天34度以上日温，容易造成叶子卷。 (2)水分 金线莲性喜湿润。水分是影响金线莲存活的最主要因子。金线莲不可能在气候干燥、土壤缺水的环境生存。金线莲自然分布于湿度大的森林环境之中及一些溪涧附近。人工栽培要让金线莲处于相对湿度在70％以上的小环境下。可以在栽种盆边经常洒水。 (3)光照 金线莲属喜阴植物，其光合作用的光饱和点低，适宜光照度为3000lux左右。80%遮阳网+80%遮阳网+1层塑料膜。在自然条件下，上层乔木郁闭度70％～80％，下层植被覆盖度40％左右。 (4)土壤 土壤要求疏松、透气、湿润。在自然条件下，腐殖土、黄壤、红壤类型的土壤都有金线莲分布。金线莲宜在偏酸性土壤条件下生根。推荐用优质腐殖质土。 二、金线莲人工栽培技术要点 金线莲的人工栽培现主要采用大棚栽培。建造大棚应根据金线莲的生长要求，选择在有林有水的山沟，以保证阴凉，有水灌溉，冬季避风保暖，减少散热，保持湿度，且交通便利。人工组培苗常年均可栽植，每平方用专用方盘栽种300棵，栽植宜浅忌深，栽后覆盖干净干燥的栽培介质，喷洒清水，棚内温度保持20～30℃，并注意保湿。田间管理的好坏，关系到金线莲的成活率和生长及产量，应着重做好： (1) 光照 棚内透光度的大小与生长发育密切相关，透光以三阳七阴为宜。一般栽培时可用80％遮光网双层控制在3000lx左右。 (2)介质 金线莲属兰科又是药用植物，所以必须使用清洁及适宜的栽培介质栽培，适宜的介质除了须具备良好的透气性外尚须良好的保水性。本公司瓶苗健壮，出瓶即可定植。定植时土壤以红壤与黄壤中的砂壤土为主作为栽培介质，质地疏松，偏酸性，适宜金线莲种植。推荐用泥炭土和珍珠岩.
植物组织培养实验基本步骤。。
植物组织培养实验基本步骤 一、母液的配置 1、MS大量元素母液的配制 将大量元素配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。按照配方表中用量依次分别称取扩大10倍的：NH4NO3 、KNO3 、KH2PO4 、 MgSO4·7H2O 、CaCl2·2H2O ，所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，最后定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 2、MS微量元素母液的配制 将微量元素配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别依次称取：MnSO4· 4H2O 、ZnSO4·7H2O 、 H3BO3 、KI 、CuSO4·5H2O 、CoCl2·6H2O ，用蒸馏水逐个溶解，待全部溶解后，用容量瓶定容至500ml，转入500ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 3、MS铁盐母液配制 将铁盐配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：称
FeSO4·7H2O 和Na2·EDTA ，把FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别置于200ml蒸馏水中，加热并不断搅拌使之溶解（磁力搅拌器，边加热，边搅拌）。保持加热，把FeSO4溶液慢慢倒入Na2·EDTA溶液中并不断搅拌，接近沸腾时停止加热，待溶液冷却后加蒸馏水到最终容积500ml，置于棕色细口瓶中，用力振荡1～2min，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期、配制人姓名。在室温下避光保存一段时间令其充分反应后，再置于4℃冰箱中保存备用。 4、MS有机化合物母液的配制 将有机化合物配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。按照配方表中用量分别称取扩大100倍的：肌醇、维生素B1 、烟酸、甘氨酸、维生素B6 、蔗糖，用蒸馏水依次溶解并定容至500ml后，转入500ml 细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、配制日期、配制人姓名，置于4℃冰箱中保存备用。 二、植物激素的配置 常见激素：二氯苯氧乙酸（2，4－D）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚－3－丁酸（IBA）、激动素（6-糠氨基嘌呤、 KT）、6－苄氨基嘌呤（6－BA）、赤霉素（GA3）、 1、生长素类： （1）、生长素类在组织培养中的主要作用是：诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织
金线莲的离体快繁
特种经济动植物２００７．５ 金线莲【Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ（Ｗａｌｌ．）Ｌｉｎｄｌ．】别名花叶开唇兰，为兰科开唇兰属多年生草本植物，是一种珍稀中草药。有关部门测定发现，金线莲中氨基酸组成成分含量、抗衰老活性微量元素的含量均高于国产和野生西洋参，在中药界有药王之称。全草味甘，性凉，有清热润肺、消肿解毒的功效。用于治疗肺热咳嗽、肺结核、风湿性关节痛、胃炎、膀胱炎、肾炎、吐血、毒蛇咬伤；还可降低胆固醇，防止血压升高等。 由于人们长期大量采挖和野生动物包括昆虫的咬食，加之近年来的山地开发、生态资源的破坏，野生金线莲数量大为减少，致使药源紧缺，国内外市场供不应求。 金线莲的种子发育不全，在自然条件下发芽率很低，传统的分根扦插繁殖时间长、繁殖系数低，无法大量种植生产。而利用植物组织培养繁殖可大大提高繁殖速度，并有效地保护野生资源，解决中药材来源匮乏的问题，满足人们用药的需要。 在培养基中添加马铃薯提取液来取代水解乳蛋白或其它有机复合物，既降低了成本，又取得了较好的培养效果。 １ 离体快繁技术 １．１ 外植体的准备 为了获得较多的接种材料和降低污染率，可将植株剪成带２～３节的插条扦插于细河沙与珍珠岩的混合基质中，浇透水，搭一塑料小拱棚，在棚上盖上双层遮阳网，使温度保持在２０～２５℃，湿度在８０％左右，２５天生根发芽。当芽长到１ｃｍ左右时剪下，作为接种材料。采芽前１５天左右不要浇水。也可以直接从产地取嫩枝作为外植体。 １．２培养条件及马铃薯提取液的制作方法 以Ｎ６培养基为基本培养基。根状茎诱导培养基： Ｎ６＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＮＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋１０％马铃薯提取液＋０．０８％活性炭；增殖培养基：Ｎ６＋６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋ＮＮＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋１０％马铃薯提取液＋０．０８％活性炭。上述培 养基均加０．７％琼脂和３％白糖，ｐＨ５．５～６．０。培养温度 ２０～２５℃，每天光照１２小时，光照度２０００～２５００Ｌｘ。 马铃薯提取液的制作方法：将未发芽的马铃薯去皮，按需制培养基量计算并称量，用清水洗净，切成厚２～３ｍｍ、 长和宽分别为３～４ｃｍ的薄片，放入比需制培养基量少一些的清水中，大火煮开后１５～２０分钟，用单层纱布过滤，其过滤液即为马铃薯提取液。 ２生长与分化 ２．１无菌材料的获得 将金线莲嫩枝上的叶片去掉，留１～２ｍｍ长的叶柄以保护腋芽；把嫩枝剪成单节茎段，然后将茎段和芽用洗衣粉液摇洗，再用清水洗净，放自来水下冲洗３０分钟以上。 在无菌条件下用７５％乙醇浸泡３０秒，转到０．１％ＨｇＣｌ２液中灭菌５～６分钟，再用无菌水摇洗 ３～４次，接种到根状茎诱导培养基上，每瓶接１个茎 段或１个芽。 ２．２根状茎的诱导及芽的生长 接种在根状茎诱导培养基上的茎段从第３周开始长出嫩绿色尖尾状的腋芽；１个月时腋芽长成根状 ●王勤罗林会 （贵州遵义职业技术学院贵州遵义５６３００６）的离体快繁 金线莲 Ｙ ａｏｙｏｎｇｚｈｉｗｕ 药用植物３６
水稻转基因组织培养步骤的具体事宜
农杆菌介导的转化 一．试剂 1 6-BA (6-BenzylaminoPurine) Sigma Cat No. B-5898 2 KT (Kinetin) Sigma Cat No. K-0753 3 NAA (Napthalene acetic acid) Sigma Cat N-0640 4 IAA (Indole-3-acetic acid) Sigma Cat No. I-5148 5 2,4-D (2,4-Dichlorophenoxyacetic acid) Sigma Cat No. D-8407 6 Kanamycin USB Cat No. 17924 7 CH (Casein Enzymatic Hydrolysate) Sigma Cat No. C-7290 8 Hn (hygromycin B) GiBco BRL Cat No. 10687-010 9 Cn (Carbenicillin) 国产分装 10 Nicotinic acid Sigma Cat No. N-0765 11 Pyridoxine HCl Sigma Cat No. P-8666 12 Thiamine HCl Sigma Cat No. T-3902 13 Inositol Sigma Cat No. I-3011 14 Phytagel Sigma Cat No. P-8169 15 Dimethyl Sulfoxide-DMSO Sigma Cat No. D-5879 16 X-gluc (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-D-galactoside) Sigma Cat No. B-3783 17 AS (Acetosringone) Aldrich chem., CO 01531 EG 二．溶液 1.MS max NH4NO316.5g KNO319.0g KH2PO4 1.7g MgSO4?7H2O 3.7g CaCl2?2H2O 4.4g 或CaCl2 3.32g 逐一溶解药品后，加dH2O定容到1000ml。 2.MS min母液(100×) KI 0.083g H3BO30.62g MnSO4?4H2O 2.23g 或MnSO4? H2O 1.69g ZnSO4?7H2O 0.86g Na2MoO4? 2H2O 0.025g CuSO4? 5H2O 0.0025g CoCl2? 6H2O 0.0025g 注意：Na2MoO4必须单独溶解后再与其它组分混合。 加dH2O定容到1000ml室温保存。 3.N6max母液(10×)
金线莲组培快繁技术研究
金线莲组培快繁技术研究 【摘要】?? 目的建立金线莲快繁体系。方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0?mg/L?+NAA0.5～1.0?mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0?mg/L＋6-BA?0.5?mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3?mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。?? 【关键词】??金线莲；?快速繁殖；?增殖；?生长；?移栽? 金线莲Anoectochilus?roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。? ????? 金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处于供不应求的状况。近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。现将有关实验结果如下。? 1??材料与方法? 1.1??材料??无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。? 1.2?? 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5?min，然后用流水冲洗30?min。在超静工作台前，用75%?酒精湿润5～6?s，放入0.1%的HgCl溶液灭菌12～13?min，用无菌水冲洗5～6次。将消毒好的茎按上段（具茎尖）、中段和下段（匍匐茎段）切成长约1.5～2?cm，带有1～2个节间的小段，分别接种于MS+6－BA?4.0?mg/L?+NAA?0.4?mg/L?培养基上，pH5.6，蔗糖 2.5%，琼脂0.7%。培养条件为：温度(25±2）℃?，光照时间12?h/d，光照强度1?500～2?000?lx。? 1.3??不定芽诱导? 1.3.1??基本培养基对不定芽诱导的影响采用单因素实验，培养基选用MS （Murashige-Skoog）［3］，1/2MS（大量元素减半，其他成分不变），VW(Vacin?&?Went)，B5（Gamborg?Miller?&?Ojima）和KC(Knudson?C)等5种，分别添加6－BA?4.0mg/L，NAA?1.0?mg/L。? 1.3.2??激素对不定芽诱导的影响以MS为基本培养基，添加不同种类及浓度的细胞分裂素和生长素。? ????? 上述实验选取无菌健壮植株，切取长约1～1.5?cm，带有一个节间的茎中段，每处理接10个茎节，重复3次。培养期间定时观察不定芽生长情况，培养60?d后统计不定芽数。其它条件同实验“1.2”项。? 1.4??壮苗培养? 1.4.1??激素对幼苗生长和发根的影响以1/2MS为基本培养基，NAA设1～5?mg/L?5个处理，6－BA设0.5，1.0和1.5?mg/L?3个处理，共15个处理。?
金线莲研究进展_综述_蔡文燕
2003,32(3):68-72. Ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ 金线莲研究进展（综述） 蔡文燕，肖华山，范秀珍 （福建师范大学 生物工程学院，福建 福州 350007） 摘 要：本文对珍稀中草药金线莲的生物学特性、资源分布、药用价值、成分分析、生理活性、细胞学、分子生物学、组织培养及栽培技术等方面作了综述，为深入研究和合理开发利用金线莲提供参考。 关键词：金线莲; 药用植物; 观赏植物 中图分类号：Q949.71+8.43 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2003)03-0068-05 A review of research on Anoectochilus roxburghii CAI Wen-yan, XIAO Hua-shan, FAN Xiu-zhen (Bioengineering College, Fujian Normal University, Fuzhou 350007, Fujian China) Ａｂｓｔｒａｃｔ： In this paper, r esearches on the rare medicinal herb Anoectochilus roxburghii including biological characteristics, distribution, medicinal value, ingredient analysis, molecular studies, tissue culture and cultural practices are reviewed. It provides a scientific basis for further study, development and utilization of A. roxburghii. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Anoectochilus roxburghii ;medicinal herb; ornamental plant 金线莲（Anoectochilus roxburghii）即花叶开唇兰，别名金蚕、金线兰、金石松、金线虎头蕉、金线入骨消等，是兰科开唇兰属的一种多年生草本植物。它主要分布于亚洲的日本、中国、斯里兰卡、印度和尼泊尔等国。金线莲是我国传统的珍贵药材，有清凉解毒，滋阴降火，消炎止痛之功效。对无名肿痛、发烧、止泻、蛇伤均有显著疗效，且无毒副作用，使用安全。金线莲株型小巧，叶型优美，叶脉金黄色，呈网状排列，是观赏价值极高的室内观叶珍品[1]。随着研究的深入，金线莲的优良品质突显，日益受到世人青睐，具有广阔的开发利用前景。本文就金线莲各项研究作一综述，以期为深入研究和合理开发利用提供参考。 1 生物学特性及资源分布 金线莲为陆生兰[2]，多年生草本，高4～18cm，根茎细软, 茎圆筒形, 先端直立, 基部匍匐状, 茎节明显；叶互生, 叶柄基部呈鞘状, 叶片卵形或圆卵形，长1.5～3.5cm，宽1～3cm，先端急尖，基部近圆形，上表面黑紫色，有金黄色脉网，下表面淡紫红色。金线莲的花期在福建一般为9月中旬至11月上旬，开花时间多在午夜，气温22～25℃、相对湿度86%～95%时开花多，高地比低处开花早，后开的花不稔[3]；花为完全花，总状花序具有1～6朵松散的花，花序梗长8～13cm，被柔毛，花苞片淡紫色，卵状披针形。除药用外, 金线莲兼具赏叶和观花之功用，是一种观赏价值极高的室内花卉珍品。 金线莲在我国主要分布于亚热带地区，即福建、广东、广西、浙江、江西、海南、云南、四川、贵州以及西藏南部等省区[2]，其中以闽、浙、赣为主产地，台湾省亦产，但植物种不同，为台湾开唇兰（A. formosanus）。金线莲属中阴性植物，性喜温凉潮湿环境。陈裕等[4]从多点实地调查发现：其垂直分布幅度较广，海拔300～1200m均有分布，尤以海拔300～600m的中低丘陵区分布较多；并非在 收稿日期：2003-03-05 基金项目：福建省科技厅资助项目（K96016） 作者简介：蔡文燕（1979-），女，福建漳州人，硕士研究生，从事植物生理与生物化学研究。