实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定.
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定
课程名称:兽医微生物学实验学时:6学时
一、目的要求
1.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性;
2.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法;
3.掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理;
4.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现;
5.熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。
二、知识背景
肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌,运动者周身鞭毛;在普通培养基上生长好;发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气;在麦康凯琼脂上生长;细胞色素氧化酶阴性;还原硝酸盐为亚硝酸盐等。碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。
大肠埃希氏菌(E.coli简称大肠杆菌,作为原发和继发病原可引起多种动物疾病:犊牛的肠道感染和水泻;幼猪的水泻和腹泻,二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病;狗的尿道感染;鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿(Coligranuloma。
沙门氏菌(Salmonella,虽然沙门氏菌血清型超过2200个,但承认的种为数不多,在O抗原的基础上,沙门氏菌血清组(群用字母A、B、C…表示,然后根据它的H抗原(鞭毛抗原再分,用阿拉伯数字1、2、3…等表示,沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病,是肠杆菌科重要的致病菌,如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium可引起动物流产,胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎,这个菌常形成厚的荚膜。变形杆菌(proteus引起动物的尿道和胃肠道疾病。耶尔森氏菌(yersinia引起鼠疫、胃肠炎等。
生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。
三、实验材料
每6人一组,每组所需材料:
1.普通琼脂斜面培养物2管:分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌(提供实验用菌种;
2.普通肉汤2管:分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;
3.普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌;
4.生化试验用培养基2套,包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质,M.R、V.P试验、
柠檬酸盐利用,硝酸盐还原试验等;
5.三糖铁琼脂斜面培养基2管;
6.选择性培养基2个,如:麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板;
7.各种生化试验试剂:靛基质试剂,M.R试剂,V.P试剂,硝酸盐还原试剂;
8.沙门氏菌因子血清。
四、操作程序
1.观察大肠杆菌和沙门氏菌在琼脂平板上的菌落特征并作描述;
2.观察大肠杆菌和沙门氏菌肉汤培养物,注意生长表现;
3.从两种菌琼脂平板上挑取菌落涂片作革兰氏染色,注意菌体形态特征和染色特性;
4.用两种菌琼脂斜面培养物分别接种生化试验用的各种培养基以及三糖铁琼脂斜面(先斜面划线再穿刺
接种;
5.用两种菌肉汤培养物在鉴别性培养基平板划线,分别用其1/2面积;
6.将接种的试管和平板以组为单位放人37℃培养箱中培养24-48小时,观察结果;
7.检查并记录大肠杆菌和沙门氏菌糖发酵试验结果及在三糖铁琼脂斜面/底部的生长表现;
8.观察大肠杆菌和沙门氏菌在麦康凯琼脂平板上的菌落表现;
9.沙门氏菌血清群和型的鉴定。
(1分群:取一张洁净玻片,取2满环沙门氏菌多价O血清(A—E群至玻片上,再用接种环挑取疑为
沙门氏菌的纯培养物少许,与玻片上的多价O血清混匀,再稍动玻片,若在2min 内出现凝集现象,即可初步确定该菌为沙门氏菌:同样用生理盐水代替多价血清作一对照,以免由于细菌的自凝而判断错误。再用代表A群(O2、B群(O4、C1群(O7、C2群(O8、D群(O9与E群(O3的O因子血清作同样的玻片凝集反应,视其被哪一群O因子血清所凝集,则确定被检沙门氏菌为该群。
(2定型:菌群决定后,用该群所含的各种O因子血清和被检菌作玻片凝集反应,以确定其含哪些O抗
原。同样,用该群H因子血清与被检菌作玻片凝集反应、以确定其H抗原。根据检出的O抗原和H 抗原列出被检菌的抗原式,查对沙门氏菌的抗原表即可知被检菌为哪种沙门氏菌,譬如某一菌的O 抗原为O1、4、5、12,而H抗原为i:1,2,其抗原结构式为1,4,5,12:i:1,2,查知这个菌为鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimuium。
一般情况下,如不要求定型,只做到定群这一步即可。在实际工作中,判定被检菌是否为沙门氏菌,应根据被检菌的生化反应和血清学诊断结果结合起来考虑。凡两者均符合沙门氏菌特性,即确认为沙门氏菌,凡两者中有一项符合沙门氏菌特性者,则可认为是沙门氏菌。
本实验中大肠杆菌与沙门氏菌的区别
肠杆菌科细菌检验程序示意图
五、细菌特性描述菌种
描述其主要生物学特性与生化特性菌落:
革兰氏染色:
菌体形态:
运动性:
葡萄糖乳糖蔗糖麦芽糖
糖发酵
靛基质 M.R V .P 枸橼酸盐利用生化试验
大肠杆菌 (E.coli 三糖铁琼脂斜面(斜面/底部的变化: 菌落:。
革兰氏染色:。
菌体形态:
运动性:。
葡萄糖乳糖蔗糖麦芽糖糖发酵
靛基质 M.R V .P 枸橼酸盐利用生化试验
沙门氏菌 (S.typhimurium
三糖铁琼脂斜面(斜面/底部的变化:
六、问题分析
1、比较大肠杆菌与沙门氏菌形态、染色特征以及在普通肉汤和普通琼脂培养基上的生长表现。
2、大肠杆菌与沙门氏菌主要生化性质有哪些不同?
3、对本试验中的几种生化实验的原理?
4、血清型的分群和定型在肠杆菌科细菌鉴定上有何重要性?
5、大肠杆菌与沙门氏菌在三糖铁琼脂斜面与底部生长表现有何不同?简述原理。
七、成绩评定
1.能认真预习实验内容,教师提问优秀者占总成绩20%。
2.动手能力好、能独立操作且操作正确占总成绩40%。
3.报告清晰、结果正确、并有一般讨论分析占总成绩 30%。
4.讨论分析有参考文献、具有创新意识者占总成绩10%。
临床检验技师-微生物检验(2019)练习第十四章-肠杆菌科及检验.doc
2019第十四章肠杆菌科及 检验 一、A1 1、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误的是 A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻 B、E PEC主要引起婴儿腹泻 C、E IEC引起黏液脓血便 D、E HEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急性肾衰竭 E、E AggEC其中0157:117可引起出血性大肠炎 2、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 3、肠杆菌科细菌的菌体抗原是 A、0抗原 B、H抗原 C、V i抗原 D、K抗原 E、V i抗原和K抗原 4、志贺菌属分群、分型的依据是 A、0抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、V抗原 E、0抗原和K抗原 5、无鞭毛的细菌是 A、埃希菌属 B、沙门菌属 C、志贺菌属 D、变形杆菌属 E、枸椽酸杆菌属 6、宋内志贺菌 A、为A群志贺菌 B、为B群志贺菌 C、包括10个血清型
D、培养中常有扁平的粗糙型菌落 E、快速发酵乳糖 7、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都不对 8、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是 A、发酵乳糖 13、发酵山梨醇 C、发酵葡篇糖 D、硫化氢试验 E、明胶水解试验 9、根据0抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为 A^痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、痢疾杆菌 10、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群（型） A、痢疾志贺菌 福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都是 11、下列为沙门菌分群依据的抗原是 A、菌体抗原 B、鞭毛抗原 C、Vi抗原 D、M抗原 E、5抗原 12、辅助诊断伤寒病的实验是 A、肥达试验 B、汹涌发酵试验 C、抗溶血素“0”试验 D、Weil-Felix 试验
微生物检验肠杆菌科及检验
第十九章肠杆菌科及检验 本章考点： 1.概述 （1）概念 （2）命名与分类原则 （3）共同特点 （4）自然与人体内的分布 （5）微生物学检查方法 （6）临床意义 2.埃希菌属、沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、耶尔森菌属 （1）生物学性状 （2）微生物学检查法 （3）临床意义 一、概述和通性 （一）概念 肠杆菌科是由多个菌属组成，其生物学性状相似，均为革兰阴性杆菌。大多数肠道杆菌属于正常菌群，作为条件致病菌而引起疾病。其中包括常引起腹泻和肠道感染的细菌（埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属）和常导致院内感染的细菌（枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属），以及一些在一定条件下偶可引起临床感染的细菌。 （二）分类 根据《伯杰系统细菌学手册》（1984年）将肠杆菌科的细菌分为20个属即埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、哈夫尼亚菌属、爱德华菌属、普罗威登斯菌属、变形杆菌属、摩根菌屑、耶尔森菌属等。 （三）生物学特性 1.形态与染色 革兰阴性杆菌，其菌体大小为（1.0～6.0）μm×（0.3～1.0）μm。多数有周鞭毛，除外志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。均不形成芽胞，少数菌属细菌可形成荚膜。 2.培养：需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长并形成中等大小的S型菌落，液体培养基中呈混浊生长。 3.生化反应：发酵葡萄糖产酸、产气，乳糖发酵试验: 肠道非致病菌（＋），肠道致病菌（－）（除外变形杆菌）。肠杆菌科定科试验主要项目是革兰阴性杆菌、触酶阳性，氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阳性。 4.抗原构造：包括菌体（O）抗原，鞭毛（H）抗原和表面抗原（如Vi抗原、K抗原）3种。 5.变异：包括菌落S～R变异，鞭毛H～O变异和耐药性或生化反应性质的改变。 6。抵抗力：不强。加热60℃，30分钟即被杀死。不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。对低温有耐受力，能耐胆盐。 （四）致病性 肠杆菌科细菌种类多，可引起多种疾病： 1.致病性肠道杆菌：以肠内感染为主，腹泻为共显症状，引起急慢性肠道感染、食物中毒、旅游者腹泻及肠热症等。
2020临床初级检验技士考试《微生物》章节训练题库：肠杆菌科及检验
2020临床初级检验技士考试《微生物》章节训练题库：肠杆菌科及检验 一、A1 1、下列关于肠道感染大肠埃希菌的病原群，说法错误 的是 A、ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻 B、EPEC主要引起婴儿腹泻 C、EIEC引起黏液脓血便 D、EHEC可引起严重的腹痛、痉挛，严重者可发展为急 性肾衰竭 E、EAggEC其中O157:H7可引起出血性大肠炎 2、S-R变异是 A、抗原性变异 B、鞭毛变异 C、耐药变异 D、菌落变异 E、毒力变异 3、志贺菌属分群、分型的依据是 A、O抗原
B、H抗原 C、K抗原 D、V抗原 E、O抗原和K抗原 4、无鞭毛的细菌是 A、埃希菌属 B、沙门菌属 C、志贺菌属 D、变形杆菌属 E、枸橼酸杆菌属 5、肠杆菌科细菌的鞭毛抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、Vi抗原 D、K抗原 E、Vi抗原和K抗原 6、志贺菌属是主要的肠道病原菌之一，包括哪些血清群(型) A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌
D、宋内志贺菌 E、以上都是 7、大肠埃希菌与沙门菌、志贺菌具有鉴别性的生化反应是 A、发酵乳糖 B、发酵山梨醇 C、发酵葡萄糖 D、硫化氢试验 E、明胶水解试验 8、下列细菌中，引起细菌性痢疾症状最轻的是 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌 D、宋内志贺菌 E、以上都不对 9、根据O抗原，志贺菌属分为多个群，其中A群为 A、痢疾志贺菌 B、福氏志贺菌 C、鲍氏志贺菌
E、痢疾杆菌 10、宋内志贺菌 A、为A群志贺菌 B、为B群志贺菌 C、包括10个血清型 D、培养中常有扁平的粗糙型菌落 E、快速发酵乳糖 11、志贺菌属与类志贺邻单胞菌的鉴别试验是 A、氧化酶和动力试验 B、血清凝集试验 C、加热破坏K抗原 D、在KIA上培养24小时以上 E、免疫荧光菌球法 12、在志贺菌中，其中一个血清群的菌落有光滑型和粗糙型两种，诊断血清中同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清，这个血清群是 A、A群 B、B群 C、C群
肠杆菌科细菌分布及耐药
肠杆菌科细菌是引起临床感染常见的革兰阴性杆菌，也是造成医院内感染的主要致病菌。近年来，随着第3代头孢菌素的广泛应用，各种肠杆菌科病原菌的种类与耐药情况已发生变化，造成的感染临床治疗困难。现对本院2006—2011年临床分离的肠杆菌科细菌的分布及耐药情况进行动态观察和分析，为临床抗菌药物的及时、合理使用提供依据，制定经验治疗方案。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株来源2006年12月至2011年12月本院临床科室送检的各种标本中分离到的肠杆菌科细菌，去除同一患者中同一部位所获重复菌株。质控菌株为大肠埃希菌（ATCC25922）和肺炎克雷伯菌（ATCC700603）符合《临床检验操作规程》3版[1]。 1.1.2抗菌药物及试剂药敏纸片及琼脂均为杭州天和微生物试剂公司产品。 1.2方法 1.2.1标本采集与培养按临床微生物培养操作规范进行标本的采集与培养[2]。 1.2.2细菌鉴定及药敏试验细菌鉴定采用肠杆菌科编码系统，药敏试验采用K-B法，按美国临床和实验室标准化协会（CLSI）规定判断药物敏感性。1.2.3产超广谱-内酰胺酶（ESBLS）测定：参照NCCLS推荐的纸片扩散表型确定法[3]。 1.3数据处理将结果输入WHONET5.3软件进行分析，同一患者的相同菌株只作1次分析。 2结果 2.1肠杆菌科细菌检出情况本院5年间从临床标本中分离661株肠杆菌科细菌，其中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）阳性株280株，占42.4%。2007—2011年产ESBLs菌株分布情况见表1。 2.2菌种分布与变迁肠杆菌科细菌的检出率，从2007年的98株到2011年161株，而且主要是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，见表2。 肠杆菌科细菌分布及耐药分析 赵海1，沙迎菁2（1.青铜峡市人民医院检验科，宁夏青铜峡751600；2.青铜峡市妇幼保健所检验科，宁夏青铜峡751600） 【摘要】目的动态观察并分析该院临床标本分离的肠杆菌科细菌的分布及耐药情况。方法采用2000年美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）颁布的纸片扩散法中的筛选试验和确认试验，药敏试验采用K-B法。结果最常见的肠杆菌科细菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、福氏志贺菌、变形杆菌属和沙雷菌属。耐药分析显示，亚胺培南一直对所有常见肠杆菌科细菌保持良好的抗菌活性，其次为阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦和头孢吡肟/舒巴坦。氟喹诺酮类药物对除大肠埃希菌以外的其他肠杆菌细菌抗菌活性好。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的比例逐年增高。结论院内细菌耐药性监测不仅能指导临床合理使用抗菌药，还能延缓耐药性的产生和蔓延。 【关键词】β内酰胺酶类；肠杆菌科；抗菌药；抗药性，细菌；微生物敏感性试验 文章编号：1009-5519（2012）16-2424-02中图法分类号：R378.2文献标识码：A Distribution and drug resistance analysis in Enterobacteriaceae bacteria Zhao Hai1，Sha Yingqing2（1.Department of Lab-oratory，Qingtongxia Municipal People′s Hospital，Qingtongxia，Ningxia751600，China；2.Department of Laboratory，Qingtongxia Municipal Maternal and Child Health Care Hospital，Qingtongxia，Ningxia751600，China） 【Abstract】Objective To dynamically observe and analyze the distribution and drug resistance of Enterobacteriaceae bacteria isolated from the clinical specimens in this hospital.Methods The screening test and verification test in the disc diffu-sion method promulgated by the the American Committee for Clinical Laboratory Standards（NCCLS）in2000were adopted.The drug sensitivity test used K-B method.Results The most common Enterobacteriaceae bacteria were Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae，Shigella flexneri，proteus and Serratia.The drug resistance analysis showed that imipenem always matained good antibacterial activity to all common Enterobacteriaceae bacteria，followed by amikacin，cefoperazone/sulbactam and cefepime/sul-bactam.Fluoroquinolones had good antibacterial activity to other Enterobacteriaceae bacteria except Escherichia coli.The propor-tion of Escherichia coli and ESBLs-producing Klebsiella pneumoniae was increased year by year.Conclusion The drug resis-tance surveillance of nosocomial bacteria can not only guide clinical rational use of antibacterial drugs，but also delay the pro-duction and spread of drug resistance. 【Key words】Beta-lactamases；Enterobacteriaceae；Anti-bacterial agents；Drug resistance，bacterial；Microbial sensitivity tests 表1肠杆菌科细菌分布情况（株） 年度 2007 2008 2009 2010 2011合计 98 111 140 151 161 661 24 34 63 65 67 253 47 50 52 55 57 261 15 18 16 17 19 85 8 6 6 10 13 43 4 3 3 4 5 19 32 37 61 71 79 280 32.7 33.3 43.6 47.0 49.1 42.4 总数痰尿大便咽拭子大便ESBLs阳性阳性率（%）
微生物检验第十四章 肠杆菌科及检验讲义
第十四章肠杆菌科及检验 概述和通性——分类 根据细菌的形态、生化反应、抗原性质以及核酸相关性进行分类。大多数属于正常菌群（条件致病菌）。 引起腹泻和肠道感染：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌属等。 导致院内感染：枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属和摩根菌属等。 概述和通性——生物学特性 形态与结构 形态：杆菌。 染色：G-。 特殊结构： 多数有周鞭毛，能运动。 志贺菌属和克雷伯菌属无鞭毛。 均不形成芽胞，少数菌属（埃希菌属和克雷伯菌属）可形成荚膜。 培养特性 营养要求：不高。
气体环境：需氧或兼性厌氧。 菌落特征：普通琼脂培养基和麦康凯培养基上均能生长，并形成中等大小的菌落，湿润光滑。 抗原 变异： 包括菌落S-R变异和鞭毛H-O变异。 表现为耐药性或生化反应性质的改变。 抵抗力： 不强。加热60℃，30分钟即被杀死。 不耐干燥，对一般化学消毒剂敏感。 对低温有耐受力，能耐胆盐。 概述和通性——微生物检验及鉴定 标本采集 形态学检查：革兰阴性杆菌。 分离培养： 将粪便或肛拭标本立即接种在肠道菌选择培养基上或先增菌后再分离。 克氏双糖铁琼脂（KIA）培养基：葡萄糖/乳糖发酵；产气；硫化氢试验。 动力-吲哚-尿素（MIU）培养基 生化反应： ①用葡萄糖氧化-发酵试验及氧化酶试验与弧菌科和非发酵菌鉴别； ②用苯丙氨酸脱氨酶和葡萄糖酸盐试验，分为苯丙氨酸脱氨酶阳性、葡萄糖酸盐利用试验阳性和两者均为阴性反应三个类群； ③选择生化反应进行属种鉴别； ④用诊断血清做凝集反应。 埃希菌属——分类 包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。 临床最常见的是大肠埃希菌，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道正常菌群。 埃希菌属——生物学特性 形态与结构
肠杆菌科细菌讲义
第五节变形杆菌属、普罗威登菌属、摩根菌属 ( Proteus , Providencia , Morgannella ) 为一群苯丙氨酸脱氨酶阳性细菌，是肠道正常菌群，亦是引起医源性感染的重要条件致病菌。 变形杆菌属 包括4个种：普通变形杆菌(P.vulgaris，又分为生物2群和生物3群)、奇异变形杆菌( P.mirabilis)、潘氏变形杆菌(P.penneri) 、产粘变形杆菌( P.myxofaciens )。广泛存在于泥土、水和被粪便污染的物质中。与人类致病有关是前3种，普通变形杆菌和奇异变形杆菌能引起人的原发性和继发性感染，泌尿系感染的主要病原菌之一，还常引起伤口、呼吸道、新生儿脐带感染等，此外还能引起食物中毒，奇异变形杆菌是婴儿肠炎的病原菌之一。潘氏变形杆菌是新近发现命名的，是引起医院感染的病原菌。 生物学性状：G-杆菌，呈多形性，有周身鞭毛，运动活泼，大多数菌株在普通琼脂平板上呈迁徙生长现象(可被石碳酸或胆盐等抑制)，产硫化氢、苯丙氨酸和脲酶均阳性，KIA 呈K(不发酵乳糖)/A++。 抗原构造；本属菌X19、X2、Xk的菌体抗原与某些立克次体有共同抗原，用这些菌株替代立克次体与患者血清作凝集反应，可作为立克次体病的辅助诊断，称外-斐反应。 普罗威登菌属 包括5种：产碱普罗威登菌(P.alcalifaciens)、斯氏普罗威登菌(P.stuartii)、雷氏普罗威登菌(P.rettgeri)、拉氏普罗威登菌(P.rustigianii)和海氏普罗威登菌(P.heimbochae).与人类致病有关常见前3种，有碱化尿液的作用，促使尿结晶形成，与泌尿系统结石形成有关。斯氏普罗威登菌和雷氏普罗威登菌可致泌尿道感染和其他肠外感染，并引起许多医院感染的爆发流行。 种间鉴定见书P174表17-16 摩根菌属 只有摩根摩根菌一个种，可致泌尿道和伤口感染，并与腹泻有关。种属间鉴别如下：总鉴定见表17-17（P176） 第六节耶尔森菌属(Yersinia) 它包括7个种，与人类致病关系较大的有3种，即鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌。 一、鼠疫耶尔森菌(Y.pestis) 是鼠疫(Plaque)的病原菌。通过人与感染动物(或人)接触或鼠蚤叮咬而受感染，属烈性传染病。是自然疫源性疾病。 二、小肠结肠炎耶尔森菌(Y.enterocolitica) 本菌天然寄居在多种动物体内，通过污染食物和水，经粪-口途径感染或接触染疫动物而感染。本菌是肠杆菌科中的肠道致病菌之一，近年来某些血清型引起的肠道感染正逐年上升。 1
病原生物学教学大纲
《病原生物学》教学大纲 课程名称：病原生物学 Pathogenic Biology 课程编码：00412018 学时与学分：72学时／4学分（其中实验学时：18 ） 先修课程：《人体解剖学》，《生理学》，《组织胚胎学》，《医学生物学》，《生物化学》 适用专业（方向）：中医七年制专业 一、课程性质、目的与任务 病原生物学是研究病原微生物、人体寄生虫的生物学特性及其与人体相互作用的规律的一门学科；是基础医学与临床医学之间的桥梁。本课程的教学目的在于使学生掌握基本理论、基本知识和基本操作技能，为学习有关临床学科打下基础。 二、基本教学内容和学时安排 第一篇医学微生物学（11学时） 医学微生物学概论 目的要求 【掌握】⑴正常菌群的概念。 ⑵正常菌群的生理作用。 ⑶微生态失调的原因及条件致病菌、菌群失调症的概念。 【熟悉】⑴微生物和病原微生物的定义。 ⑵微生物按细胞结构特点的分类。 【了解】医学微生物学的范畴、研究对象及发展简史, 现代医学微生物学新进展及其在生命科学中的意义。 教学内容 1. 微生物的定义、分类（三大类微生物的分类依据及种类）。 2. 正常菌群。正常菌群的生理作用。人体常见的正常菌群。 3. 病原微生物的定义。微生物与人类的关系。医学微生物学的范畴、研究对象。 4. 医学微生物学的发展简史，现代医学微生物学新进展及其在生命科学中的意义。 教学方法 课堂讲授与自学结合。
第一篇细菌学 第一章细菌的形态与结构 第一节细菌的形态；第二节细菌的结构；第三节细菌的形态与结构检查法 目的要求 【掌握】⑴细菌细胞壁的功能、主要成分、G+菌与G-菌细胞壁的不同点及其医学意义。 ⑵细菌的特殊结构及其在医学上的意义。 【熟悉】细菌的大小(测量单位)与形态。熟悉革兰氏染色法的原理及意义（实验课内容）。 【了解】⑴细菌L型的概念及其医学意义。 ⑵细菌胞膜及胞质内与医学有关的重要结构与功能。 教学内容 1. 细菌的大小与形态：细菌的基本形态，细菌的不规则形态（衰退型）；细菌的基本结构：细胞壁的功能、主要成分，G+菌与G-菌细胞壁的不同点及意义。细菌L型的生物学特性及临床意义。细胞膜与细胞质及其内含物的组成与功能。 2. 细菌的特殊结构：荚膜的定义、化学组成、抗原性及致病性。鞭毛的定义、化学组成，抗原性及其功能。菌毛的定义、化学组成、种类及其与致病力的关系。芽胞的定义、形成、对外界因素的抵抗力及其与医学的关系。 教学方法 课堂讲授与自学结合。 第二章细菌的生理 第一节细菌的理化性状；第二节细菌的营养和生长繁殖； 第三节细菌的新陈代谢；第四节细菌的人工培养 目的要求 【掌握】细菌的合成代谢产物及其意义。 【熟悉】⑴细菌生长繁殖的条件、生长方式与速度及生长曲线。 ⑵细菌常见的生化反应及分解代谢产物的意义。 ⑶专性厌氧菌有氧环境中不能生长的原理。 【了解】⑴细菌的理化性状。了解细菌的人工培养（实验课内容）。 ⑵细菌的属、种、型、株的概念。 教学内容 1. 细菌的理化性状与新陈代谢：细菌的理化性状，细菌的新陈代谢。营养物质，营养类型及营养机理。 2. 细菌生长繁殖与生长繁殖：生长繁殖的条件、方式与速度、生长曲线。细菌的培养（实验课内容）。细菌的分类和命名。 教学方法 课堂讲授与自学结合。 第三章消毒与灭菌 第一节物理消毒灭菌法；第二节化学消毒灭菌法
14.肠杆菌科及检验
一、概述 1.多数有周鞭毛，志贺菌属、克雷伯菌属、鼠疫耶尔森菌和EIEC无鞭毛。无芽孢，少数有荚膜 2.需氧或兼性厌氧，在普通培养基或麦康凯培养基上均能生长形成中等大小的菌落，表面光滑，液体培养基中呈浑浊生长。 3.发酵葡萄糖，产酸产气，H2S试验阳性（志贺菌、大肠埃希菌等为阴性） 4.定科试验：触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性、乳糖发酵试验（非致病菌+，致病菌-，变形杆菌除外） 5.抗原结构包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原（Vi、K等） 二、埃希菌属 1.革兰阴性杆菌，兼性厌氧，多数有周鞭毛、菌毛、荚膜及微荚膜 2.发酵葡萄糖、乳糖麦芽糖和甘露醇，产酸产气 3.氧化酶（-）、IMViC（++--）、MIU（++-） 4.主要引起疾病胆囊炎、泌尿系感染等。 5. ①肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）：霍乱样肠毒素腹泻 ②肠致病型大肠埃希菌（EPEC）：主要引起婴儿腹泻（血清学鉴定试验为血清凝结试验） ③肠侵袭型大肠埃希菌（EIEC）：志贺样腹泻（脓血便） ④肠出血型大肠埃希菌（EHEC）：其中O157：H7可引起出血性大肠炎和出血性尿毒综合征。临床特征为严重的腹痛、痉挛，反复血性腹泻，伴发热、呕吐 ⑤肠黏附型大肠埃希菌（EAggEC）：腹泻 三、志贺菌 1.志贺菌属分为痢疾、福氏、鲍氏、宋内四群。可引起人类细菌性痢疾 2.取粪便或肛拭标本接种GN肉汤增菌，再进行分离培养。可选择SS培养基、麦康凯培养基、中国蓝培养基。 3.KIA：K/A（宋内志贺菌可迟缓分解乳糖）、产气-/+、硫化氢（-）、MIU：-、+/-、-、氧化酶（-）、IMVIC（-+--） 4.在普通平板和SS培养基上形成中等大小、半透明的光滑性菌落 5.可引起人类细菌性痢疾，小儿易引起急性中毒性痢疾 四、沙门菌 1.革兰阴性直杆菌，周身鞭毛，多数有菌毛。为胞内寄生菌，寄生于肠道 2.可导致疾病 ①肠热病（伤寒、副伤寒）：为法定传染病②食物中毒③慢性肠炎④败血症 3.肥达试验：由已知的伤寒沙门菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒菌的H抗原与不同稀释度的病人血清做定量凝集实验。属于直接凝集试验，来判断机体是否受沙门菌感染而导致肠热病并判断沙门菌种类 4.发酵葡萄糖，产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气） 5.在SS培养基中产H2S，菌落中心呈黑色 6.抗原结构包括菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原和表面抗原（Vi、M、5） 7.为提高检出率，血液1-2周采集，粪便与尿液（2-3周采集）。整个病程中骨髓分离细菌阳性率较高 8.沙门菌属最后鉴定是通过血清学鉴定
常见肠杆菌科细菌主要鉴定特性2
菌属菌种 葡萄糖 产酸葡萄糖 产气 乳糖 硫化氫 (H2S) 吲哚 (Ind) 枸橼酸盐 (Cit) 脲酶 (Ure) 动力 (Mot) 鸟氨酸 (Orn) 赖氨酸 (Lys) 埃希菌属大肠埃希菌100 95 95 1 98 1 1 95 65 90 志贺菌属A、B、C群志贺菌100 0 0 0 45 0 0 0 0 0 D群宋内志贺菌100 0 2 0 0 0 0 0 98 0 爱德华菌属迟缓爱德华菌100 100 0 100 99 1 0 98 100 100 沙门菌属伤寒沙门菌100 0 1 97 0 0 0 95 97 98 枸橼酸菌属弗劳地枸橼酸菌100 89 78 78 33 78 44 89 0 0 异型枸橼酸菌100 98 50 0 99 99 75 95 99 0 克雷伯菌属肺炎克雷伯菌100 97 98 0 0 98 95 0 0 98催娩克雷伯菌100 97 100 0 99 95 90 0 0 99 肠杆菌属产气肠杆菌100 100 95 0 0 95 2 97 98 98 阴沟肠杆菌100 100 93 0 0 100 65 95 96 0 哈夫尼亞菌属蜂房哈夫尼菌100 98 5 0 0 10 4 85 98 100 多源菌属聚团肠杆菌100 20 40 0 20 50 20 85 0 0 沙雷菌属粘质沙雷菌100 55 2 0 1 98 15 97 99 99 变形杆菌属普通变形杆菌100 85 2 95 98 15 95 95 0 0 奇异变形杆菌100 96 2 98 2 65 98 95 99 0 摩根菌属摩根摩根菌99 90 1 20 95 0 95 95 95 1 普罗威登斯菌属雷氏普罗威登斯菌100 10 5 0 99 95 98 94 0 0 耶尔森菌属小肠耶尔森菌100 5 5 0 50 0 75 2 95 0 参考《全国临床检验操作规程》第3版，红色鉴定关键指标
微生物检验第十四章 肠杆菌科及检验练习
第十四章肠杆菌科及检验 一、A1 1、吲哚试验阳性的组合 A、大肠埃希菌、普通变形杆菌、霍乱弧菌 B、大肠埃希菌、鼠伤寒沙门菌、产气肠杆菌 C、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、肺炎克雷伯菌 D、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌 E、产气肠杆菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌 2、能利用含硫氨基酸生成硫化氢的细菌是 A、大肠埃希菌 B、奇异变形杆菌 C、产气肠杆菌 D、肺炎克雷伯菌 E、宋内志贺菌 3、从腹腔感染患者腹腔液中出分离一革兰阴性杆菌，氧化酶阴性，苯丙氨酸脱氨酶阳性，在血平板上有迁徙生长，H2S阳性，它可能是 A、变形杆菌 B、摩根菌 C、普罗威登斯菌 D、伤寒沙门菌 E、枸橼酸杆菌 4、用于粪便污染检测指标的是 A、霍乱弧菌 B、产气肠杆菌 C、阴沟肠杆菌 D、变形肠杆菌 E、大肠杆菌 5、主要流行的肠出血性大肠埃希菌的O血清型是 A、O6 B、O25 C、O157 D、O111 E、O158 6、致病性大肠埃希菌的致病特点是 A、只引起肠道感染 B、不引起泌尿生殖器感染 C、腹泻可由两种肠毒素引起 D、外毒素可引起严重的毒血症
E、不引起败血症 7、下列除哪项外，均为肠道菌的主要抗原 A、O抗原 B、H抗原 C、荚膜抗原 D、芽胞抗原 E、菌体抗原 8、典型的大肠埃希菌的生化反应结果是 A、乳糖（－），IMViC（＋、－、－、－） B、乳糖（＋），IMViC（＋、＋、－、－） C、乳糖（－），IMViC（＋、＋、－、－） D、乳糖（－），IMViC（＋、＋、＋、－） E、乳糖（－），IMViC（＋、－、－、－） 9、肠杆菌科中，表面抗原是 A、O抗原 B、H抗原 C、K抗原 D、以上都是 E、以上都不是 10、IMViC试验不包括 A、糖发酵试验 B、V-P试验 C、甲基红试验 D、枸橼酸盐利用试验 E、吲哚试验 11、H-O变异属于 A、毒力变异 B、菌落变异 C、鞭毛变异 D、形态变异 E、耐药性变异 12、目前筛选伤寒带菌者的方法是检测血清中的 A、O抗体 B、H抗体 C、K抗体 D、Vi抗体 E、M抗体 13、属于直接凝集反应的是 A、抗“O”试验
食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验编制说明
食品安全国家标准《食品微生物学检验肠杆菌科检验》 （征求意见稿） 编制说明 一、标准起草的基本情况: （一）任务来源 受国家卫生与计划生育委员会食品安全标准与监测评估司（原卫生部食品安全综合协调与卫生监督局）委托，根据《食品安全国家标准管理办法》、《食品安全国家标准制（修）订项目管理规定》，按照食品安全国家标准审评委员会的工作安排，对本标准进行制定。 （二）简要起草过程 2011年7月，卫生部食品安全综合协调与卫生监督局下达《食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验》标准制定任务，项目编号为spaq-2011-61。随即成立标准制定专家组，确立标准制定的基本原则，比较与研究我国及国际标准相关内容，并结合方法的研究工作，形成《食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验》标准的征求意见稿。 （三）起草单位、协作单位、主要起草人 参与本标准的起草单位有辽宁出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、山东出入境检验检疫局、浙江出入境检验检疫局及河南出入境检验检疫局。 （四）主要起草人 本标准主要起草人为：刘淑艳、卢行安、蒋丹、赵守成、王刚、姜英辉、程洁、苗丽、吕佳、柳媛、宋慧君、马惠蕊。起草人员负责标准制定工作的组织、协调，相关资料的查阅、收集，标准文本及编制说明的起草、撰写，通过电子邮件、传真等方式，征集、整理和归纳相关的意见和建议。 二、标准的重要内容及主要修改情况 本标准研究对比了国际标准ISO 21528-1：2004 食品和动物饲料微生物学肠杆菌科检测和计数方法第1部分：带前增菌的MPN法和ISO 21528-2：2004食品和动物饲料微生物学肠杆菌科检测和计数方法第2部分：菌落计数法；并依据伯杰细菌鉴定手册第八版，肠杆菌科的分类，选择肠杆菌科12个属及其它对照菌株，共25株进行了本标准方法的检验，确定了肠杆菌科检验的MPN法及菌落计数法。
肠杆菌科细菌综述
肠杆菌科细菌综述 作者：王晓英 上海交通大学生命学院研究生 学号：1080809089 摘要：本文介绍了受到广泛关注的肠杆菌科细菌的分类，与人类相关的肠杆菌科细菌感染引起的肠胃炎和慢性疾病，以及对于肠杆菌科细菌的研究在公共卫生领域的重要意义。 没有哪一类微生物比肠杆菌科更多地受到医学和生物学界的关注。自该科设立以来，肠杆菌就与人类和脊椎动物胃肠道的定居以及随后肠道感染继发的病理过程密切相关。基于一些病人表现出种种胃肠道症状，包括痢疾（志贺菌），伤寒热（伤寒沙门菌）和婴儿夏季腹泻（各种病原体），并且从有症状病人粪便中分离到病原因子，早期先驱性的研究工作识别和鉴定了这类细菌的许多特征。这些年来，肠杆菌在引起肠道外疾病（包括血源感染，呼吸道和泌尿道感染，伤口和（或）手术部位的感染过程及眼，耳，鼻和喉疾病）方面所起到的重要作用越来越明显。在过去20年中，随着医学干预和治疗方式的相应改变，肠杆菌在肠道外感染中的作用逐步增大。1. 肠杆菌科的分类： 基于表型方法，分子方法，分子探针，多相分类学等方法将肠杆菌细分成40多个属。到目前为止，这些类群的重点是与人类疾病相关的属，特别是埃希菌属，沙门菌属和志贺菌属。其次是数量增长较快的类群，包括主要与植物有关或引起植物疾病（植物病原菌）的种和属。此类群中最古老的属是欧文菌属，这一类群现在包括7个不同的属，其中有一些原先归于欧文菌属后转归于其他属，如泛菌属。肠杆菌科中第三类主要是昆虫病原菌或昆虫，寄生虫的内共生体。此类群中最为熟知的属是光杆菌属（Photorhabdus）和致病杆菌属（Xenorhabdus）。Buchnera aphidicola 是蚜虫的内共生体，与其宿主形成了极长期的稳定关系，以至于历经5000万年到7000万年该菌并没有发生遗传学重组或基因获取。最后一类群包罗万象，包括水生微生物（布戴维氏采菌属和布拉格菌属），与酿酒有关的微生物（脂杆菌属）和与温泉相关的嗜盐菌和嗜热菌（Alterococcus）。以下列举一些重要的肠杆菌属： 1.1昆虫病原菌内共生体： 杀雄菌属，Buchnera菌属，
肠杆菌科的检验 微生物实验
实验三：肠杆菌科的检验 一、接种细菌： MAC培养基接种大肠埃希菌和变形杆菌，SS培养基接种福氏志贺菌和乙型副伤寒沙门菌，采用分区划线法，放在35℃温箱中培养18—24h。 二、观察肠道杆菌在MAC和SS平板上的菌落形态。 1、SS平板： 1）福氏志贺菌形成无色、半透明、光滑、湿润、突起、直径为1—2mm大小的菌落；2）乙型副伤寒沙门菌为中心带黑褐色，其余部分为半透明、光滑、湿润、突起的小菌落2、MAC平板： 1）大肠埃希菌形成红色、圆形、凸起、边缘整齐、多数为光滑型的菌落。中等大小。2）变形杆菌为圆形、扁平、无色、半透明的菌落。 三、涂片、革兰染色 将玻片分为四个区域，并分别标记，将四种肠道杆菌分别在四个区域内的生理盐水中研磨，待其自然干燥后固定，采用“改良快速法”进行染色，结果如图所示： 福氏志贺菌乙型副伤寒沙门菌变形杆菌大肠埃希菌 G-杆菌G-直杆菌，较细长G- 杆菌G-直短杆状 显微镜检查特征为革兰阴性杆菌，肠杆菌科多数细菌的形态及染色性相似，根据形态及染色性难以相互鉴别。 四、生化试验： 1、氧化酶试验（纸片法）：在滤纸条上滴一滴氧化酶试剂，用无菌接种环挑取待测菌落在滤纸条上滴了试剂的部位研磨，；滤纸变为红色则为阳性，不变色为阴性，结果表明，以上四种肠道杆菌的氧化酶试验均为阴性。 2、接种KIA、MIU上。 五、 2、微量生化：
六、沙门菌、志贺菌的血清学鉴定： 1、在洁净载玻片上两端分别滴加一滴志贺菌四种多价血清和福氏四价血清，各取一环志贺菌在两种血清上研磨10S，观察两组结果均出现肉眼可见的凝集物，提示该菌为福氏志贺菌。 2、采用同上方法，在洁净玻片上分别在其两端滴加一滴沙门菌多价O（A—F）和Hd血清，各取一环待测菌与之混合，研磨10S，几分钟后观察两组结果，出现肉眼可见的颗粒状凝聚物表示该菌为乙型副伤寒沙门菌。 七、讨论： 1、做生化试验时，有些细菌为致病菌，故实验时要保护好自己，且实验废弃物要妥善处理，以免发生有害菌的感染。 2、接种细菌过程中，因为MAC培养基和SS 培养基成分不同。故应看清菌种后再接种，以免影响实验结果。 3、志贺菌属和大肠埃希菌的鉴别：志贺菌无动力，赖氨酸阴性、发酵糖产酸不产气。 4、志贺菌属和伤寒沙门菌鉴别：伤寒沙门菌在KIA培养基上的表现和志贺菌相似，鉴别点是伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性，能与沙门菌因子血清（OA-F）凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。
肠杆菌科细菌感染
肠杆菌科细菌感染 肠杆菌科细菌包括一大群生物性状相似的革兰阴性无芽胞杆菌，其中部分为致病菌，如：沙门菌属、志贺菌属等;而多数为肠道正常菌群，在一定条件下可以致病，故称为条件致病菌。 肠杆菌科的分类主要根据生化反应和抗原构造，按照Bergery分类法，分为5个族、12个属。近年来由于分子生物技术的发展，现已可采用计算机技术分析各种生化反应和比较细胞核DNA的同源性等，在此基础上，目前肠杆菌科细菌分为25个属。 肠杆菌科细菌的分类表： 埃希菌属志贺菌属爱德华菌属沙门菌属 拘椽酸菌属克雷伯菌属肠杆菌属哈夫尼亚菌属 沙雷菌属变形菌属普鲁菲登菌属多源杆菌属 莫根菌属耶尔森菌属克鲁菌属欧文菌属 布丘菌属西地西菌属爱文菌属塔特姆菌属 拉恩菌属米勒菌属勒克菌属勒米诺菌属 Yoken菌属 肠杆菌科细菌为革兰阴性杆菌，两端钝圆，无芽胞。多数细菌有周身鞭毛，能运动，个别细菌有荚膜。多数细菌有菌毛。本科细菌为需氧和兼性厌氧菌，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，各种细菌菌落大小相似，直径2～3μm。 本科细菌中致病菌不发酵乳糖，条件致病菌中除变形杆菌外，均可发酵。发酵迅速者有埃希菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属;缓慢发酵者有爱德华菌属、沙雷菌属等。各种肠杆菌科细菌的生化反应表现多样， 不同菌属的生化反应甚不一致，故可作为肠杆菌科细菌鉴定的依据之一。 肠杆菌科细菌构造复杂，菌体表面有多种抗原，主要有菌体抗原0、鞭毛H抗原和荚膜K 抗原三种。细胞壁共分三层:细胞外膜、粘肽糖肽与质周隙组成的胞壁层和细胞膜。0抗原为细胞壁成分，由蛋白脂多糖组成，耐热。0抗原可分三部分:①多糖侧链，各种不同肠杆菌科细菌具有不同的糖成分，多糖的排列也不相同，因而决定了0抗原的特异性;②核心部分，包括外核心区、骨架和核心糖脂，各种肠道杆菌的核心部分相同;③类脂A，与内毒素有关，可引起与内毒素血症相同的发热、炎症和血液动力学改变的各种临床表现。荚膜抗原能抑制细菌与0抗血清的凝集，并可促使细菌易于粘附于粘膜表面，与细菌的侵袭力有关，如：大肠杆菌的Ki抗原和伤寒杆菌的Vi抗原。H抗原由鞭毛蛋白组成，不耐热，其抗原的特异性决定于多肽链上氨基酸的排列顺序和空间构型。H抗原可能与细菌在尿路中的播散有关。多数肠杆菌科细菌表面有菌毛，为一种蛋白成分，与细菌对粘膜表面的粘附能力有关。
实验六 肠杆菌科细菌的微生物学鉴定.
实验六肠杆菌科细菌的微生物学鉴定 课程名称:兽医微生物学实验学时:6学时 一、目的要求 1.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌形态与染色特性以及主要培养特性; 2.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌常规微生物学诊断法; 3.掌握大肠杆菌和沙门氏菌生化试验的方法和原理; 4.熟悉大肠杆菌和沙门氏菌在选择性和鉴别培养基上的生长表现; 5.熟悉沙门氏菌血清分群、定型的方法和步骤。 二、知识背景 肠杆菌科的细菌为革兰氏阴性、中等大小的杆菌,运动者周身鞭毛;在普通培养基上生长好;发酵葡萄糖和碳水化合物者产酸或产酸产气;在麦康凯琼脂上生长;细胞色素氧化酶阴性;还原硝酸盐为亚硝酸盐等。碳水化合物的利用和其它生化试验是肠杆菌科细菌鉴定的重要试验。 大肠埃希氏菌(E.coli简称大肠杆菌,作为原发和继发病原可引起多种动物疾病:犊牛的肠道感染和水泻;幼猪的水泻和腹泻,二月龄以上猪的出血性肠炎和水肿病;狗的尿道感染;鸡的气囊炎和大肠杆菌肉芽肿(Coligranuloma。 沙门氏菌(Salmonella,虽然沙门氏菌血清型超过2200个,但承认的种为数不多,在O抗原的基础上,沙门氏菌血清组(群用字母A、B、C…表示,然后根据它的H抗原(鞭毛抗原再分,用阿拉伯数字1、2、3…等表示,沙门氏菌可引起多种动物和人的疾病,是肠杆菌科重要的致病菌,如鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium可引起动物流产,胃肠炎和败血症。
其它肠杆菌科成员:肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae可引起牛乳房炎、肺炎、母马的宫颈炎和子宫炎,这个菌常形成厚的荚膜。变形杆菌(proteus引起动物的尿道和胃肠道疾病。耶尔森氏菌(yersinia引起鼠疫、胃肠炎等。 生化试验和血清群的鉴定和定型在肠杆菌科细菌的鉴定中占很重要的位置。 三、实验材料 每6人一组,每组所需材料: 1.普通琼脂斜面培养物2管:分别为大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌(提供实验用菌种; 2.普通肉汤2管:分别用来接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌; 3.普通琼脂平板2个分别用来划线接种大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌; 4.生化试验用培养基2套,包括葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管、靛基质,M.R、V.P试验、 柠檬酸盐利用,硝酸盐还原试验等; 5.三糖铁琼脂斜面培养基2管; 6.选择性培养基2个,如:麦康凯琼脂平板或远滕氏琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板; 7.各种生化试验试剂:靛基质试剂,M.R试剂,V.P试剂,硝酸盐还原试剂; 8.沙门氏菌因子血清。 四、操作程序 1.观察大肠杆菌和沙门氏菌在琼脂平板上的菌落特征并作描述;
肠杆菌检验程序(详细版)
肠杆菌科 【器材】 一、SS平板培养基：选择性培养基，有促进目的菌生长的物质和鉴别用指示剂. 1、煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等能抑制G+菌及大多数大肠生长，胆盐促进伤寒生长。 2、大肠分解乳糖产酸：中性红（6.8红－8.0黄）变红，与胆盐结合合成胆酸，因而形成中心混浊的深红色菌落，病原菌不分解乳糖，故菌落呈透明微黄色。 3、枸橼酸铁能指示硫化氢产生，硫化铁呈黑色 4、硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺、沙门菌的毒害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性，使大肠红色鲜明 二、KIA斜面培养基：用酚红作指示剂（6.8黄－8.4红）。上层为固体琼脂斜面，含乳糖。下层为半固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。 1、细菌如能发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则斜面及底层均呈黄色，且有气泡。非致病菌（如大肠埃希菌）一般既可利用乳糖也可利用葡萄糖，但肺克也是如此。 2、如细菌只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡:乳为1:10，斜面所产生的少量的酸可因接触空气而氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层则是在相对缺氧的状态下，所生成的酸不被氧化挥发而保持黄色。致病菌一般不能利用乳糖，可用于区别致病/非致病菌。 3、如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫酸亚铁反应生成硫化亚铁（黑色沉淀物），使培养基变黑。 左：不发酵乳糖，强产硫化氢。中：不发酵乳糖，不产硫化氢。右：发酵乳糖，不产硫化氢 4、接种方法：先穿刺到底，再在斜面划线。 【实验内容】 一、氧化酶试验 原理：见奈瑟菌属部分 操作：取氧化酶纸片，刮去KIA或普通平板或普通平板上的较大菌落，观察纸片颜色的变化，呈蓝紫色为阳性，不变为阴性（如试剂为盐酸二甲基对苯二胺，阳性者则为红色）。肠杆菌科多为阳性（但变形杆菌为阴性）。 注意事项：因SS培养基中的化学成分和生化反应复杂，其菌落可使滤纸变为紫红色，故对肠道杆菌进行触酶和氧化酶试验时，宜从普通平板或KIA斜面上取菌，以保证试验结果正确。 二、动力试验： 原理：有动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线扩散生长。 培养基：半固体培养基 方法：分别穿刺接种大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，37 ℃孵育16-18h 结果：穿刺线扩散，培养基透明度减低为动力阳性；穿刺线清晰，培养基透明为动力阴性。本试验，大肠为（+），肺杆为（-） 三、吲哚试验：（靛基质试验）
肠杆菌检验程序(详细版)
肠杆菌科 【器材】 一、 SS 平板培养基：选择性培养基，有促进目的菌生长的物质和鉴别用指示齐U 1煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等能抑制 G+菌及大多数大肠生长，胆盐促进伤寒生长。 2、 大肠分解乳糖产酸：中性红（ 6.8红—8.0黄）变红，与胆盐结合合成胆酸，因而形成中心混浊的 深红色菌落，病原菌不分解乳糖，故菌落呈透明微黄色。 3、 枸橼酸铁能指示硫化氢产生，硫化铁呈黑色 4、 硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺、沙门菌的毒害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性，使大肠红 色鲜明 二、 KIA 斜面培养基：用酚红作指示剂（6.8黄—8.4红）。上层为固体琼脂斜面，含乳糖。下层为半 固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。 1细菌如能发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则斜面及底层均呈黄色，且有气泡。非致病菌（如大肠埃 希菌）一般既可利用乳糖也可利 用葡萄糖，但肺克也是如此。 2、 如细菌只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因 葡:乳为1:10，斜面所产生的少量的酸可因接触空气而氧化 挥发，从而使斜面 部分保持原来的红色；底层则是在相对缺氧的状态下，所生成的酸不被氧化挥发而 保持黄色。致病菌一般不能利用乳糖，可用于区别致病 /非致病菌。 3、 如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫酸亚铁反应生成硫化亚铁（黑色沉淀物） 左：不发酵乳糖，强产硫化氢。中：不发酵乳糖，不产硫化氢。右：发酵乳糖，不产硫化氢 4、接种方法：先穿刺到底， 【实验内容】 一、 氧化酶试验 原理：见奈瑟菌属部分 操作：取氧化酶纸片，刮去 紫色为阳性，不变为阴性 变形杆菌为阴性）。 注意事项：因SS 培养基中的化学成分和生化反应复杂，其菌落可使滤纸变为紫红色，故对肠道杆菌 进行触酶和氧化酶试验时，宜从普通平板或 KIA 斜面上取菌，以保证试验结果正确。 二、 动力试验： 原理：有动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线扩散生长。 培养基: 半固体培养基 方法：分别穿刺接种大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌， 37 C 孵育16-18h 结果：穿刺线扩散，培养基透明度减低为动力阳性；穿刺线清晰，培养基透明为动力阴性。本试验, 大肠为（+）,肺杆为（-） 三、吲哚试验：（靛基质试验） 原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，与对二甲基氨基苯甲醛形成红色 化合物。 培养基：蛋白胨水 方法：将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水培养基中， 37 C 孵育16-18h 结果：取出后，滴加吲哚试剂 2d ，混匀，可见培养物上层呈玫瑰红色为 +，不变色为-。本试验，大肠 为（+）,伤寒为（-） ，使培养基变黑。 再在斜面划线。 KIA 或普通平板或普通平板上的较大菌落，观察纸片颜色的变化，呈蓝 （如试剂为盐酸二甲基对苯二胺， 阳性者则为红色）。肠杆菌科多为阳性（但