碱性磷酸酶

碱性磷酸酶
碱性磷酸酶

碱性磷酸酶(ALP或AKP)

正常范围(连续监测法)

女性,1-12岁小于500U/L;大于15岁,40-150U/L;

男性,1-12岁小于500U/L;12-15岁,小于750U/L;大于15岁,40-150U/L。

中性粒细胞碱性磷酸酶染色

碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾脏,骨骼、肠、和胎盘等组织。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。其中第1 、2 、6 种均来自肝脏,第3 种来自骨细胞,第 4 种产生于胎盘及癌细胞,而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝。

化学特征

碱性磷酸酶名字

alkaline phosphatase (ALP 或AKP)

碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶,即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反,激酶是磷酸化酶,可以利用能量分子,如A TP,将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有最大活力,对来源于细菌中的ALP来说,其最适pH是8.0,而对来源于牛的ALP则是8.5。

ALP是一种含锌的糖蛋白,在碱性环境中(最适Ph为10左右)可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。

碱性磷酸酶偏高的原因

当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。

碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因,具体讨论如下:

1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期,这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃,所以检测时值会偏高。

2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于胆汁排泄障碍,反流入血,引起血清中的碱性磷酸酶偏高。

3、骨骼有病时,例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。

4、其他不是很常见的疾病,例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等。

有何影响

碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进

时,血清碱性磷酸酶亦可升高,所以对人体的危害是比较大的。

偏高的危害

碱性磷酸酶(ALP)是诊断胆道系统疾病时常用的指标。碱性磷酸酶存在于机体的各个组织,以骨骼,肝脏,肾脏含量较多.正常血清中的碱性磷酸酶主要来自于骨骼,由成骨细胞产生,经血液到肝脏,从胆道系统排泄.胆汁淤积性肝炎肝炎和肝外梗阻时此酶明显升高,ALP只能提示胆道梗阻性病变,不能鉴别梗阻是良性还是恶性.一般慢肝大多都有多多少少的纤维化现象,只是轻重而已.

碱性磷酸酶偏高预示着肝脏异常,碱性磷酸酶偏高时,有可能是肝囊肿、肝结核、阻塞性黄疸、继发性肝癌和原发性肝癌等;碱性磷酸酶偏高预示着骨骼疾病,碱性磷酸酶偏高时,有可能是骨软化症、骨折愈合期、骨细胞癌和恶性肿瘤骨转移等;碱性磷酸酶偏高预示着白血病、甲状腺机能亢进。

升高

能引起碱性磷酸酶升高的疾病

1.肝胆疾病:如肝硬化、肝癌、肝炎、肝外胆道阻塞等可造成碱性磷酸酶升高。

2.骨骼疾病:如佝偻病,软骨病,骨恶性肿瘤等均可引起碱性磷酸酶升高。当骨骼发生病变时就会引起碱性磷酸酶升高。

来源

人体内情况

碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时,血清碱性磷酸酶亦可升高,应加以鉴别。

正常范围(连续监测法)

女性,1-12岁小于500U/L;大于15岁,40-150U/L;

男性,1-12岁小于500U/L;12-15岁,小于750U/L;大于15岁,40-150U/L。

高值可能说明有胆管阻塞现象;低值更多出现于儿童和孕妇身上。高值可能表明骨沉积活跃,因为ALP是成骨细胞活动(造骨)的副产物(例如在佩吉氏斯症[畸形性骨炎]的案例中)。一般来说,低值要比高值少见。

临床意义

临床上测定ALP主要用于骨骼、肝胆系统疾病的诊断和鉴别诊断,尤其是黄疸的鉴别诊断。对于不明原因的高ALP血清水平,可测定同工酶以协助明确其器官来源。

1.生理性增高:儿童在生理性的骨骼发育期,碱性磷酸酶活力可比正常人高1~2倍。处于生长期的青少年,以及孕妇和进食脂肪含量高的食物后均可以升高。

2.病理性升高:

(1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等;

(2)肝胆疾病如肝外胆道阻塞、肝癌、肝硬化、毛细胆管性肝炎等;

(3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。

3.病理性降低:见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。

药物意义

催化克林霉素磷酸酯水解成为克林霉素,使其发挥抗生作用。

编辑本段异常原因

碱性磷酸酶异常多见于阻塞性黄疸,原发、继发性肝癌,胆汁淤积性肝炎等。如果是肝细胞性黄疸,转氨酶的活性会很高,但碱性磷酸酶稍高或者是正常。而如果是阻塞性黄疸则正好相反,血清碱性磷酸酶会明显升高,转氨酶则轻度增高;而肝癌病变时,血清碱性磷酸酶明显增高,转氨酶升高却并不明显,血清胆红素也不高。[5]

碱性磷酸酶异常还见于骨骼性疾病,如成骨不全,纤维性骨炎,骨质软化症,骨折修复愈合期,骨转移癌。

血清碱性磷酸酶异常还有可能因为贫血及肿瘤,儿童甲状腺发育不全;重症型慢性肾炎,甲状腺功能不全者;维生素C缺乏症坏血病、乳糜泻、恶病质、贫血肝病。

肝胆疾病

肝细胞参与合成ALP,肝胆疾病时增高的ALP来自肝细胞。

淤胆性疾病时ALP的升高

ALP存在于毛细胆管面的微绒毛上,在胆汁分泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALP mRNA转译增高,肝细胞合成ALP亦增高。ALP经胆汁排出,肝内外胆管阻塞时,ALP有非常明显的升高,ALP升高先于黄疸的出现,在黄疸消退后还可持续异常。

在原发性胆汁肝硬化、药物性肝炎、肝移植排斥或淤胆型病毒性肝炎引起的肝内淤胆,都会使ALP升高,甚至高达正常值的4倍。

肝内占位性病变时ALP的升高

即使无黄疸,在肝占位性病变时血清ALP也可升高,包括肝肿瘤和肝脓肿,机制不明,可能与存在小胆管阻塞有关。在单小叶或节段的胆管阻塞,血清ALP升高可以是唯一的检验异常。

恶性肿瘤时ALP明显升高,是肿瘤的标记酶。在肝硬化病人的病程观察中如发现血清ALP 升高,须考虑合并HCC的可能性。

肝转移性肿瘤与其他肝占位性病变一样,血清ALP可明显升高。某些肝外肿瘤也可合成ALP,并不表示肝外肿瘤已有肝转移。

成骨细胞与ALP

成骨细胞的活性及成骨作用的变化与血清ALP的活力密切相关。骨骼疾病患者主要由于成骨细胞增殖使血清ALP升高。畸形性骨炎显著升高,为正常参考值上限的10倍至几十倍,但血清钙磷多正常。佝偻病和骨软化症患者ALP变化与病程、病情有关,早期ALP轻度升高,随病情加重而呈持续性上升,可达正常上限的4~10倍。治疗2周后酶活力下降。骨折愈合期ALP活力轻度升高,成骨骨癌者显著升高。各种类型的骨质疏松,良性成骨细胞瘤等ALP无明显变化。甲状旁腺功能亢进患者因田状旁腺素过多引起溶骨作用加强,使ALP 活力中度或重度升高,同时血钙升高,血磷降低。此点有助于与畸形骨炎、佝偻病的鉴别。对血清ALP成分的测定结果表明,其主要作用在于鉴别血清中升高的ALP是单独地还是同时来自肝和骨组织。血液中同时出现肝型和骨型ALP升高,最常见于恶性肿瘤。肝型ALP 增加几乎都是肝脏恶性肿瘤浸润的结果。肝型ALP继发性沉积于骨组织,常可引起成骨反应,因而伴有骨型ALP增高。所以恶性肿瘤患者血清肝型和骨型都增高的比例较大,定量测定肝型与骨型ALP同工酶,对判断肿瘤的扩散和疗效均具有重要价值。

碱性磷酸酶偏低的原因

碱性磷酸酶可出现偏高症状,同时,也可出现偏低症状,碱性磷酸酶偏低的原因,主要可分以下几种:

1.常见于重症型慢性肾炎,甲状腺功能不全者;

2.营养不良、呆小症;

3.维生素C缺乏症坏血病、乳糜泻、恶病质、贫血;

4.遗传性低磷酸酶血症。

碱性磷酸酶出现低值的现象虽少见,但由于碱性磷酸酶偏低,主要由病理性方面的因素引起,因此,提醒患者切忌轻视此症状的发生

碱性磷酸酶-基因实验

编号 内蒙古大学生命科学学院生物系 基因工程实验室 本科基因工程实验论文开题报告 论文题目:碱性磷酸酶基因表达载体的 构建及在大肠杆菌中的表达 学生姓名: 年级: 专业: 指导教师: 二〇一三年八月十二日

学生姓名 论文题目 开题时间 项目来源本科生基因工程大实验课 一、立论依据 项目的研究意义,国内外研究现状及发展趋势分析,主要参考文献及出处:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP, ALKP) (EC 3.1.3.1)属磷酸单脂酶族,底物专一性较低,广泛应用于表位连锁图谱,探针标记测序和免疫组织化学等领域。分子生物学中,ALP分解寡聚核甘酸的末端单酯化磷酸,是常用的遗传工程酶。1 产碱性磷酸酶的生物有很多,从细菌到高等哺乳动物均有分布。人血液中的碱性磷酸酶含量是重要的指标之一,其检验结果及异位表达对癌症等许多疾病有着指导意义。2,3目前商业碱性磷酸酶主要来源于动物(小牛肠碱性磷酸酶)、植物(麦芽)和微生物(细菌碱性磷酸酶)(Bacterial alkaline phosphatase, BAP)。 在革兰氏阴性细菌中,BAP表达于细胞膜外的周质空间。相比表达于胞内使其更机动和高效。BAP的功能已基本揭示,简单来说BAP是细菌产生摄取应用的自由磷酸基团的一种方式,4被大量的实验证据所支持。然而,缺乏BAP的E. coli 仍然能够存活,所以应该还存在相关的替代机制。5 目前,对BAP的研究热点主要由于其海洋有机磷利用的酶特性等集中于海洋微生物领域。海洋细菌碱性磷酸酶的亚细胞研究揭示了其相关合成基因及表达特性对于海洋有机磷循环及海洋生物多样性的贡献。研究人员证实了3733种BAP序列(包括PhoA, PhoD, and PhoX ),包含胞质分泌及胞外位于不同支载结构。大量的实验数据支持了细菌于海洋表面部分光耦合的磷摄取机制。6鉴于磷对于海洋维持初级产能的重要性,并且考虑到其最主要的来源之一-有机磷分解,海洋生物BAP

血清碱性磷酸酶ALP测定

血清碱性磷酸酶ALP测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。 2 实验原理 本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础,所采用的反应原理与反应式如下。 ALP 对-硝基苯磷酸盐 + H2O ----------- 对硝基酚 + 磷酸 在上述反应中,对-硝基苯酚的生成速率与样本中碱性磷酸酶的活力成正比。通过在405 nm处监测吸光度的上升速率,即可测得样本中碱性磷酸酶的活性。 3 标本采集与处理: 3.1 病人准备:无特殊要求。 3.2 标本类型:标本最好是无溶血的血清。

3.3 血清分离:应在收集后两小时内分离出来。避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。 3.4 标本存放:2~3天内的活性损失:15~25℃保存:<10%;标本稳定性:4~8℃保存稳定7天;-20℃保存至少可稳定2个月标本。如果分析延迟8小时以上,最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。 3.5 标本运输:常温条件下运输 3.6 标本拒收标准:细菌污染的不能做测定。 4 实验材料: 4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司ALP试剂盒(沪食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1 试剂组成 试剂1(R1): 乙酸 镁 3.0mmol/ L 硫酸锌 1.5mmol/L HEDTA 3.0mmol/ L AMP缓冲液420mmol/L

试剂2(R2):对-硝基 苯磷酸盐 81.5mmol /L AMP缓冲液420mmol/L HEDTA 5.0mmol/L 4.1.2 试剂准备:试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存:在2~8℃避光、密封的储存条件下,试剂(盒)自生产之日起有效期为12个月。试剂启用后,在2~10℃避光的条件下可稳定14天。 4.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。 4.1.5 注意事项:试剂中含有稳定剂,可能存在一定的刺激作用或毒性,请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触,即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.2 校准品:使用上海复星长征医学科学有限公司提供的ALP校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器

碱性磷酸酶偏高的原因

碱性磷酸酶偏高的原因 当受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1] 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因,具体讨论如下: 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期,这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃,所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、、继发性肝癌、性等时,过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于胆汁排泄障碍,反流入血,引起中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时,例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病,例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。 有何影响 碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、、、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、、、时,血清碱性磷酸酶亦可升高,所以对人体的危害是比较大的。 酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)主要存在于,定位于溶酶体内。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。

(1)前列腺癌:尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对的诊断较ACP敏感,二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病:白血病、、匹克病、、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病:前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病:变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移,ACP活性也可升高。[1] (5)其他:,急、慢性肾炎、尿潴留等ACP活性可增高。 是一种糖酵解酶。存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。是能催化乳酸脱氢生成的酶,几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。乳酸脱氢酶大于300,属于增高,600,高出1倍,有参考价值。如果排除急性心肌梗死、巨幼细胞性贫血及溶血性疾病后,首先要考虑恶性肿瘤。虽不是恶性肿瘤唯一的诊断,但确实对肿瘤诊断有重要的临床意义,最好做进一步检查,防患于未然。 糖的吸收途径: 小肠绒毛吸收小肠内葡萄糖的方式为二级。小肠内钠离子浓度高于小肠绒毛内的钠离子浓度,因而两者之间存在钠离子浓度差的,通过该钠离子的浓度差,葡萄糖和钠离子可以从小肠内通过离子通道进入小肠绒毛;

血液生化检查各指标及对应正常值列表

血液生化检查各指标及对 应正常值列表 Prepared on 22 November 2020

血液生化检查各指标及对应正常值列表 (二氧化碳结合力) 2O~30 mmol/L (一氧化碳定性)(—) (a羟丁酸脱氨酶) 90~22O IU/L (磷酸肌酶激酶) 25~170 mmol/L (乳酸脱氢酶) 40~100 mmol/L (激肌酸激酶同功酶) 0~16 (血清白/球蛋白)~2-3g (高密度脂蛋白〕~ mmol/L (低密度低蛋白)~ mmol/L (极低密度脂蛋白) 1~3 mmol/L (C反应蛋白)(—) (免疫球蛋白)~ mg/ml (免疫球蛋白) 9~23 mg/ml (免疫球蛋白)~ ml (铁蛋白) 20~200 ng/ml (蛋白电脉) 3~ % (蛋白电脉)~ % (蛋白电脉)~ % (蛋白电脉)~ % (纤维蛋白原) 2~4g/L () 44~133 µmol/L

(肌酐清除率) 80~120 ml/分 (血糖)~ mmol/L (血淀粉酶) 40~160 U (补体)~L (抗链O) 1:400以下 (类风湿因子)(—) (肥达氏反应)(—) (外裴氏反应)(—) (癌胚抗原)<5mg 血生化 项目结果 ----------参考值---------- 谷丙转氨酶-ALT 0 ~ 40 U 尿素~ 7 mmol/L 血肌酐 40 ~ 130 umol/L 血尿酸 180 ~ 410 umol/L 胆固醇~ mmol/L 甘油三脂~ mmol/L 葡萄糖~ mmol/L 总胆红素 3 ~ 24 umol/L 项目谷丙转氨酶-ALT 临床意义正常时,谷-丙主要存在于组织细胞内,以肝细胞含量最多,心肌细胞中含量其次,只有极少量释放血中。所以血清中此酶活力很低。当、心肌病变、

碱性磷酸酶米氏常数的测定

碱性磷酸酶米氏常数的测定 [目的与要求] 通过碱性磷酸酶米氏常数的测定,了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性,加深对酶促反应动力学的理解。 [原理] 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度,反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时,反应速度会达到一个极限值,即最大反应速度(V max),如图37所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度,[S]为底物浓度,K m为米氏常数(Michaelis constant),而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时,K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol/L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数,测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法,大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定,K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程,推导出如下方程式,即: 1/V = (K m +[S])/ V max[S]或1/V = K m/ V max·(1/[S])+1/ V max 此式为直线方程,以不同的底物浓度1/[S]为横坐标,以1/V为纵坐标,并将各点连成 一直线,向纵轴方向延长,此线与横轴相交的负截距为-1/ K m,由此可以正确求得该酶的K m 值,如图38所示。 图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法 本实验以碱性磷酸酶为例,测定不同底物浓度的酶活性,再根据Lineweaver-Burk法作图,计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多,底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物,由碱性磷酸酶催化水解,生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化,生成红色的醌衍生物,颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性,也可以从标准曲线上查知酚的含量,进而算出酶活性的大小。反应式如下:

碱性磷酸酶显色剂使用方法

5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT (四唑硝基蓝)是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 使用方法 1. 在膜或组织切片,最后一次洗涤完毕后,加入适量BCIP/NBT染色工作液 2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时),直至显色至预期深度. 3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应 4. 膜标本可干燥后避光保存;组织切片或细胞样品,显色反应终止后,可以用中性红复染染色 干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种 碱性磷酸酶(ALP)是成熟成骨细胞的标志性酶,同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 成骨细胞染色方法 以ALP为目标物的检测方法: 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下,以镁离子作为激活剂,能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸,磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙,再与硝酸钴作用形成磷酸钴,经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 (1)将无菌的玻片放入培养皿中,传代时加入适量的细胞悬液,作细胞爬片,呆细胞长满玻片后取出。 (2)PBS冲洗后用冷丙醇固定10min,蒸馏水冲洗数次。 (3)入孵育液中,37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 (4)2%硝酸钴中浸3-5min,蒸馏水洗数次。 (5)1%的硫化铵中2min,自来水冲洗,自然干燥,封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2偶氮偶联法: 【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液(PH 9.2)50ml 六偶氮副品红0.5ml

血液生化检查各指标及对应正常值列表

血液生化检查各指标及对应正常值列表 ALT (谷丙转氨酶)0~4O IU/L CO2Cp (二氧化碳结合力)2O~30 mmol/L AST (谷草转氨酶)0~45 IU/L CO (一氧化碳定性)(-) TP (总蛋白)60~80 g/L HBDH (a羟丁酸脱氨酶)90~22O IU/L ALB (白蛋白)35~55 g/L CPK (磷酸肌酶激酶)25~170 mmol/L ALP (碱性磷酸酶)40~160 IU/L LDW (乳酸脱氢酶)40~100 mmol/L GGT (丫.谷氨酪转肽酶)0~50 IU/L CPK-MB (激肌酸激酶同功酶)0~16 TBIL (总胆红素)1.7~17.1μmol/L A/G (血清白/球蛋白)3.5~5.5/2-3g DBIt (直接胆红素)0~6.0 μmol/L HDL (高密度脂蛋白〕1.14~1.91 mmol/L Crea (肌酐)44~133 µmol/L VLDL (低密度低蛋白)0.11~0.34 mmol/L Ua (尿酸)90~360 µmol/L LDL (极低密度脂蛋白)1~3 mmol/L UREA (尿素氮)1.8~7.1 mmol/L CRP (C反应蛋白)(-) GLU (血糖)3.61~6.11 mmol/L IgA (免疫球蛋白)0.9~4.5 mg/ml TG (甘油三脂)0.56~1.7 mmol/L IgG (免疫球蛋白)9~23 mg/ml GHO (胆固醇)2.84~5.68 mmol/L IgM (免疫球蛋白)0.8~2.2 ml Mg (血清镁)0.8~1.2 mmol/L SF (铁蛋白)20~200 ng/ml K (血清钾)3.5~5.5 mmol/L α(蛋白电脉)3~4.9 % Na (血清钠)135~145 mmol/L β(蛋白电脉)3.1~9.6 % Cl(血清氯)96~108 mmol/L γ(蛋白电脉)6.6~13.7 % Ca (血清钙)2.2~2.7 mmol/L δ(蛋白电脉)9.5~20.3 % P (血清磷)0.97~1.61 mmol/L Fdg (纤维蛋白原)2~4g/L

碱性磷酸酶

骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时,血清碱性磷酸酶亦可升高,应加以鉴别。 研究应用 碱性磷酸酶也是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。与辣根过氧化物酶(HRP)相比,ALP用作标记酶的优点是,稳定性高、灵敏度高,缺点是成本高,标记困难。 在研究中最常用的ALP如下: ◇细菌碱性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase (BAP), 来源:Escherichia coli C4 ; ◇ Shrimp alkaline phosphatase (SAP), 来源:一种北极虾 (Pandalus borealis) ; ◇ 小牛肠碱性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase (CIP); ◇ 胎盘碱性磷酸酶Placental alkaline phosphatase (PALP)和分泌性碱性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase (SEAP),后者是前者的C末端短缺版——与PALP相比,SEAP没有PALP的C末端最后24个氨基酸(这24个氨基酸构成了与糖基化磷脂酰肌醇靶向锚定的区域) ALP主要应用于分子生物学和酶免分析中: ★分子生物学中主要用作核酸的去磷酸化。因为DNA通常会在5'端结合磷酸基团,用ALP去磷酸化能防止DNA分子5'端与3'端连接,从而在后续步骤准备好之前让DNA分子抑制处于线性化状态;同样,通过去磷酸化可用作放射标记示踪。通常用作这些目的用的最多的是Shrimp alkaline phosphatase (SAP),因为在反应完成之后它是最容易灭活的。 ★酶免分析中应用最多的是ELISA,以竞争法测小分子抗原为例,抗体先与固相载体结合,然后让待测样品与事先经ALP标记过的该抗原竞争地与抗体结合,洗去未反应的过量ALP-抗原,加入显色底物。则可以通过与按梯度浓度变化的标准品绘出的标准曲线对比从而知道待测样品中抗原的浓度。ELISA中用的比较多的是辣根过氧化物酶(HRP),底物为OPD,深桔黄色,检测波长492nm;TMB,蓝绿色,检测波长450nm 碱性磷酸酶,底物为PNPP(对-消基苯磷酸酯),黄色,检测波长405nm ★目前工业上一个普遍的应用是作为检验牛奶的巴斯的灭菌的标志:被巴斯德过高温灭菌的分子会被灭活,向其中和未巴斯灭菌的牛奶中加入ALP的底物,2分钟后未灭菌的样品应该显黄色,如果待测样品(指被巴斯灭菌过的牛奶)也能呈现相同颜色,则说明巴斯灭菌温度未过度。当然总有例外,因为有少数细菌会产生耐热的ALP。 测定方法 有很多种,我国曾应用较广的为磷酸苯二钠比色法,但现在应用较多的是连续检测法。 原理为以磷酸对硝基酚为底物,2-氨基-2-甲基-1-丙醇或二乙醇胺为磷酸酰基的受体。在碱性环境下,ALP催化4-NPP水解产生游离的对硝基酚,在碱性溶液中转变成黄色。根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位。 正常范围 正常范围(连续监测法) 女性,1-12岁小于500U/L;大于15岁,40-150U/L; 男性,1-12岁小于500U/L;12-15岁,小于750U/L;大于15岁,40-150U/L。

常见化验指标的正常值及临床意义

常见化验指标的正常值及临床意义 为了方便朋友们查询医院常见化验指标的正常值,特此整理如下:(如有与下列正常值有差异者,请以所在医院的正常值为准) 谷丙转氨酶(ALT) 正常值 3.00-40.00 u/l 临床意义: (1)ALT活性在下列疾病可见升高 a.肝胆疾病:传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等 b.心血管疾病:心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等 c.骨骼肌疾病:多发性肌炎、肌营养不良等 (2)一些药物和毒物可引起ALT活性升高,如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等 谷草转氨酶(AST) 正常值3.00-40.00 u/l 临床意义: (1)AST在心肌细胞内含量较多,当心肌梗死时,血清中AST活性增高,在发病后6-12小时之显著增高,在48小时达到高峰,约在3-5天恢复正常 (2)疟疾、流行性出血热、传染性单核细胞增多症、多发性肌炎、肌营养不良、急性胰腺炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血清AST活性轻度增高 (3)肝炎时,AST和ALT均可明显增高,可高与正常值上限10-30倍,这在其它疾病时少见.在黄疸期间,AST和ALT即可见增高,有助于早期诊断,由于肝中AST含量增高,往往AST>ALT,但由于ALT清除率较慢,所以不久以后即ALT>AST.恢复期一般ALT恢复较慢,持续ALT、AST 增高,往往说明有慢性肝炎.AST/ALT比值如<1,则有可能是慢性迁延性肝炎.如酶活性增高,且AST/ALT比值>1,则很有可能是慢活肝.。 r_谷氨酰转移酶(r_GT) 正常值 11.00-61.00 u/l 临床意义: 人体各器官中r_GT的含量按下列顺序排列:肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑.肾脏中含量较高,但肾脏疾病时,血液中的该酶活性增高不明显.肾单位病变时,r_GT经尿排出,检验尿中酶活性可能有助于诊断肾脏疾病,r_GT主要诊断肝胆疾病.显著增高常见于:原发行肝癌、胰腺癌、阻塞性黄疸、胆汁性肝硬化、胰头癌、肝外胆管癌等.轻度或中度增高见于:传染性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、急慢性胰腺炎、胆石症等 碱性磷酸酶(ALP) 正常值 53.00-140.00 u/l 临床意义: (1)碱性磷酸酶活性增高可见于下列疾病: a.生理性增高:妊娠期、儿童生长发育期、射入性血糖增多及紫外线照射后 b.肝胆疾病:阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌、肝脓肿

碱性磷酸酶

碱性磷酸酶(ALP或AKP) 正常范围(连续监测法) 女性,1-12岁小于500U/L;大于15岁,40-150U/L; 男性,1-12岁小于500U/L;12-15岁,小于750U/L;大于15岁,40-150U/L。 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾脏,骨骼、肠、和胎盘等组织。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。其中第1 、2 、6 种均来自肝脏,第3 种来自骨细胞,第 4 种产生于胎盘及癌细胞,而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝。 化学特征 碱性磷酸酶名字 alkaline phosphatase (ALP 或AKP) 碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶,即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去,并生成磷酸根离子和自由的羟基,这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反,激酶是磷酸化酶,可以利用能量分子,如A TP,将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有最大活力,对来源于细菌中的ALP来说,其最适pH是8.0,而对来源于牛的ALP则是8.5。 ALP是一种含锌的糖蛋白,在碱性环境中(最适Ph为10左右)可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。 碱性磷酸酶偏高的原因 当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因,具体讨论如下: 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期,这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃,所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于胆汁排泄障碍,反流入血,引起血清中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时,例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病,例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等。 有何影响 碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进

碱性磷酸酶标记方法

碱性磷酸酶标记方法(戊二醛两部法) 将100uL碱性磷酸酯酶加入到300uL10mM PBS(pH7.2),再加入40uL 25%的戊二醛,混匀,4摄氏度活化20小时; 透析至10mM PBS(pH7.2),24小时,换液4次; 将目的蛋白用10mM PBS(pH7.2)配成4mg/mL; 将125uL目的蛋白加入活化过的碱性磷酸酶中(终浓度为5000U AP/mg蛋白),混匀,4摄氏度反应24小时。 参考文献:A蛋白碱性磷酸醋酶的标记及酶联测试 Enzyme Linked Immunosorbent Assay Using Alkaline Phosphatase Conjugated with Streptococcal Protein G 使用200mgAP/mg 蛋白 2.5mg AP(50IU/mg),加入200uL含1.25%戊二醛的100mM 的PB(pH6.8),混匀,室温反应过夜; 4摄氏度条件下,电磁搅动,透析至50mM PBS(pH7.2),12小时,换液4次; 1.5mg目的蛋白溶于100uL 1M的CB(pH9.5); 将活化的AP加入配好的蛋白质液体中,混匀,4摄氏度条件下反应24小时; 加入10uL 200mM的赖氨酸溶液,混匀,22摄氏度条件下反应2小时; 4摄氏度条件下透析至50mM PBS(pH7.2),12小时,换液4次; 离心,取上清,用50mM TB7.4+0.6% BSA+0.05% NaN3稀释10倍,-20摄氏度保存。 底物缓冲液:100mM TB9.0+100mM NaCl+1mM MgCl2 参考文献:碱性磷酸酶标记链霉亲和素 2.戊二醛交联标记法: 此法是以双功能交联剂为桥,使酶与抗体(抗原)结合。最常用的交联剂是戊二醛。它具有两个活性醛基,可分别与酶分子和抗体(抗原)分子上的氨基结合。戊二醛法又根据试剂加入的方法分为一步法和二步法。 一步法将抗体(抗原)、酶和戊二醛同时混合。此法操作简便,广泛用于;HRP、AP与抗体(抗原)的交联。但酶标记物的产率低,由于结合物立体构型障碍,酶和抗体容易失活;酶和抗体易发生自身交联,影响标记效果。 二步法先将过量的戊二醛与酶反应,让酶分子上的氨基仅与戊二醛分子上的醛基结合,不发生酶与酶的结合,除去未与酶结合的多余戊二醛后,再加入抗体(抗原),形成酶—戊二醛—抗体(抗原)结合物。其优点是酶标记物均一,无自身聚合,分子量小易穿透细胞膜,灵敏度与活性均较高,但其产率更低。 戊二醛标记法: 酶结合量(mg/ml)=OD403X0.4 IgG含量(mg/m1)= (OD280 -OD403 X 0.42)X 0.94X0.62 过碘酸钠标记法 IgG含量(mg/m1)=(OD280-OD403 X 0.3)X0.62。 计算克分子比或摩尔比(E/P) HRP/IgG=HRP(mg/m1)/HRP分子量÷IgG(mg/m1)/IgG分子量 =HRP(mg/m1)/40 000÷IgG (mg/m1)/160 000

医院常见化验指标的正常值及临床意义参考模板

医院常见化验指标的正常值及临床意义 一、谷丙转氨酶(ALT) 临床意义: (1)ALT活性在下列疾病可见升高 a.肝胆疾病:传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等 b.心血管疾病:心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等 c.骨骼肌疾病:多发性肌炎、肌营养不良等 (2)一些药物和毒物可引起ALT活性升高,如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等 二、谷草转氨酶(AST) 临床意义: (1)AST在心肌细胞内含量较多,当心肌梗死时,血清中AST活性增高,在发病后6-12小时之显著增高,在48小时达到高峰,约在3-5天恢复正常 (2)疟疾、流行性出血热、传染性单核细胞增多症、多发性肌炎、肌营养不良、急性胰腺炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血清AST 活性轻度增高

(3)肝炎时,AST和ALT均可明显增高,可高与正常值上限10-30倍,这在其它疾病时少见.在黄疸期间,AST和ALT即可见增高,有助于早期诊断,由于肝中AST含量增高,往往AST>ALT,但由于ALT清除率较慢,所以不久以后即ALT>AST.恢复期一般ALT恢复较慢,持续ALT、AST增高,往往说明有慢性肝炎.AST/ALT比值如<1,则有可能是慢性迁延性肝炎.如酶活性增高,且AST/ALT比值>1,则很有可能是慢活肝.。 三、r_谷氨酰转移酶(r_GT) 临床意义: 人体各器官中r_GT的含量按下列顺序排列:肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑.肾脏中含量较高,但肾脏疾病时,血液中的该酶活性增高不明显.肾单位病变时,r_GT经尿排出,检验尿中酶活性可能有助于诊断肾脏疾病,r_GT主要诊断肝胆疾病.显著增高常见于:原发行肝癌、胰腺癌、阻塞性黄疸、胆汁性肝硬化、胰头癌、肝外胆管癌等.轻度或中度增高见于:传染性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、急慢性胰腺炎、胆石症等 四、碱性磷酸酶(ALP) 临床意义: (1)碱性磷酸酶活性增高可见于下列疾病: a.生理性增高:妊娠期、儿童生长发育期、射入性血糖增多及紫外线照射后

大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究

大肠杆菌碱性磷酸酶的体外定向进化研究 徐卉芳1,2) 张先恩2)3 张治平2) 张用梅2) (1)中国科学院微生物研究所,北京100080;2)中国科学院武汉病毒研究所,武汉430071) A.E.G.CASS (Biochemist ry Depart ment,I m perial College of Science,Technology and Medici ne,South Kensi ngton,L ondon S W72A Y,U K) 摘要 大肠杆菌碱性磷酸酶(E.coli alkaline phosphatase,EAP,EC3111311)是一个非特异性二聚体磷酸单酯酶.采用易错聚合酶链反应(error prone PCR)的方法,在原有高活力突变株的基础上,对EAP远离活性中心催化三联体的区域进行定向进化,经两轮error prone PCR,获得催化活力较亲本D101S突变株提高3倍、较野生型酶提高35倍的进化酶42186,并对该酶的催化动力学特征进行了分析.进化酶基因的DNA测序表明42186含两个有义氨基酸置换:K167R和S374C,二者既不位于底物结合位点,也不位于酶的金属离子结合位点. 关键词 定向进化,易错聚合酶链反应,大肠杆菌碱性磷酸酶,催化活力 学科分类号 Q58,Q81 近年来,以连续易错聚合酶链反应(error prone PCR)和DNA改组(DNA shuffling)为基础的体外分子定向进化策略,为蛋白质工程的发展提供了一个颇具前景的新方法[1~3].该法无需事先了解蛋白质的三维结构信息,而是在实验室模拟自然进化的过程(突变、重组和筛选),配合适当的选择压,使基因发生适应性突变,在短时间内完成目的特性或功能的进化.迄今为止,研究者们已用该法进化了各种各样的酶特征,找到并发现了许多合理设计(rational design)所不能预测到的突变[2~5]. 大肠杆菌碱性磷酸酶(EAP)是一个非特异性磷酸单酯酶,催化磷酸单酯水解生成无机磷酸和相应的醇、酚或糖类化合物.当有磷酸受体(如: Tris或二乙醇胺)存在时,它还可以催化磷酸基团的转移反应[6,7].EAP是一个同源二聚体金属酶,每个单体由449个氨基酸、两个Zn2+和一个Mg2+组成.分别位于两个单体上的两个活性中心相距3nm,可以看作是由Asp1012Ser1022Ala103催化三联体、3个金属离子和它们的配体、一些水分子以及Arg166组成[6].作为所有碱性磷酸酶的模型, EAP是研究最透彻的碱性磷酸酶,大量点突变阐明了许多氨基酸的结构功能[7].与哺乳动物碱性磷酸酶相比,EAP具有很高的热稳定性,但相对活力较低.以往定点突变研究表明:D101S是活性最高的突变株之一[8~10],我们以前的研究结果也证明,在最适反应条件下该突变株的活力是野生型的9~10倍[10]. 经对不同来源、不同催化活力的AP氨基酸序列比较表明[6]:它们的活性中心序列是高度保守的,特别是Asp1012Ser1022Ala103催化三联体.因此,探讨非活性三联体区域的氨基酸突变是否会提高EAP催化活力是令人感兴趣的.在本研究中,我们以D101S为亲本,试图采用体外分子定向进化的策略来提高其催化活力.通过两轮error prone PCR随机突变,结合双重筛选方法,成功地获得了活力提高的变异株.对它们催化动力学的分析,为进一步了解EAP的反应机理提供了新的线索. 1 材料与方法 111 菌株、质粒及主要试剂 大肠杆菌SM547(Δ(phoA2proC),phoR,tsx:: T n5,Δlac,gal K,leu,Str r)和质粒p EK48(含野生型EAP基因phoA)系K antrowitz教授惠赠,质粒pEK48/D101S(含D101S突变酶基因)系本实验室构建[10].限制性内切酶、T aq DNA聚合酶和T4 DNA连接酶购自T akara公司;生色底物52溴242氯2 32吲哚磷酸盐(BCIP)、对硝基酚磷酸二钠盐(pNPP)和荧光底物42甲基伞形酮磷酸(42 methylumbelliferyl phosphate,42MUP)购自Sigma公司.Q2Sepharose TM Fast Flow阴离子交换柱购自  3通讯联系人.  T el:027*********,E2mail:x.zhang@https://www.360docs.net/doc/6c12766156.html,  收稿日期:2002206207,接受日期:2002206228

碱性磷酸酶测定

碱性磷酸酶测定 一、试剂配制 1、甲苯 2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液:称取20g纯氯化铵,溶于 少量水(我配200ml,用一百多毫升水溶40g氯化铵), 然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml,用pH试纸测 pH,pH为10即可,不用刻意调pH。(氨水很臭,需要带 口罩在通风橱配) 3、8%铁氰化钾溶液(只能用一周,放冰箱保存):取8g铁氰 化钾,用水定容至100ml。 4、2%4-氨基安替比林(只能用一周,放冰箱保存):取2g4- 氨基安替比林,用水定容至100ml。 5、0.5%磷酸苯二钠溶液(用pH9.4硼酸缓冲液配) (1)先配制pH9.4硼酸盐缓冲液:称取4.768g硼砂(十 水合四硼酸钠)和0.44g纯氢氧化钠,用蒸馏水定容至 1000ml。(硼砂需要用电炉加热配制,硼砂用称量纸称量, 氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH,pH试纸测为9) (2)称取5.05g磷酸苯二钠,用pH9.4硼酸缓冲液定容 至1000ml。 6、酚标准溶液: 酚溶液:称取1g苯酚用水溶至1L,保存于暗色瓶中。(苯酚还是需要水浴加热,详细配法看脲酶测定,但由于1g很难准确称量,

并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚,但测量后不影响标线的准确程度,R值为三个9) 酚工作液:取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL) 二、测定过程 1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶(每个样需要3个 重复,前两个重复和第三个重复分开放,第三个重复为 无基质重复,每天做两个无土样重复,此重复加甲苯、 磷酸苯二钠溶液),加5滴甲苯(用滴管加5滴),盖盖 盖子后用震荡机低速震荡15min(我选择160的速度), 然后给第三个重复加入20ml蒸馏水,给前两个重复加入 20ml磷酸苯二钠,盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒 温箱培养2小时。 2、培养结束后过滤,过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶(用 5ml枪加,由于过滤液体没那么多,每加一个样用两遍蒸 馏水润洗枪),加水至大概20ml,再加0.25ml氯化铵-氢 氧化铵缓冲液,0.5ml4-氨基安替比林液,0.5ml铁氰化钾 溶液(用1ml枪加),每加一种都要充分摇匀。立即显色, 立即定容。 3、标准液是吸取1,3,5,7,9,11,13ml氮的工作液,移至50ml容 量瓶,加水加水至大概20ml,再加0.25ml氯化铵-氢氧 化铵缓冲液,0.5ml4-氨基安替比林液,0.5ml铁氰化钾溶 液。(和第二条同步)

碱性磷酸酶(ALP)

International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC) Scientific Division Committee on Reference Systems for Enzymes (C-RSE) IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C Part 9. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of Alkaline Phosphatase [Orthophosphoric-Monoester Phosphohydrolase, Alkaline Optimum, EC 3.1.3.1] Gerhard Schumann1, Rainer Klauke1, Francesca Canalias2, Steffen Bossert-Reuther3, Paul F.H. Franck4, F.-Javier Gella5, Poul J. J?rgensen6, Dongchon Kang7, Jean-Marc Lessinger8, Mauro Panteghini9, Ferruccio Ceriotti10 1Medizinische Hochschule Hannover, Institut für Klinische Chemie, Hannover, Germany 2Departament de Bioquímica i Biologia Molecular, Laboratori de Referència d'Enzimologia Clínica, Universitat Autònoma de Barcelona, Cerdanyola del Vallès, Spain 3 Roche Diagnostics GmbH, Research & Development Department, Mannheim, Germany 4Klinisch Chemisch en Hematologisch Laboratorium, HagaZiekenhuis, Den Haag, The Netherlands 5BioSystems S.A., Barcelona, Spain 6Department of Clinical Chemistry, Kolding Hospital, Kolding, Denmark

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP) 简介: 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。 Leagene 中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NAP)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在pH9.2~9.8的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI 磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液专门用于血液或骨髓细胞涂片的中性粒细胞的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠。 组成: 自备材料: 1、 载玻片 2、 4%多聚甲醛 3、 显微镜 操作步骤(仅供参考): (一)、涂片 1、制备新鲜血液或骨髓细胞涂片,NAP 固定液固定,充分水洗。 2、滴加配制好的NAP 孵育液,孵育,水洗。 3、滴加核固红染色液或甲基绿染色液复染。水洗、晾干、镜检。 编号 名称 DE0003 4×2ml DE0003 4×10ml Storage 试剂(A): NAP 固定液 2ml 10ml RT 避光 试剂(B): NAP 孵育液 B1: AS-BI 染色液 1ml 5ml -20℃ 避光 B2: FBB 染色液 1ml 5ml 4℃ 避光 临用前,B1:B2混合,即为NAP 孵育液,即配即用。 试剂(C): 核固红染色液 2ml 10ml RT 避光 试剂(D): 甲基绿染色液 2ml 10ml RT 避光 使用说明书 1份

碱性磷酸酶染色(NAP)

碱性磷酸酶染色(NAP) 碱性磷酸酶染色(NAP)在临床的应用基本属于常规筛查的染色法。 (1)原理(偶氮偶联法):血细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4~9.6的条件下将基质液中的α-磷酸萘酚钠水解,产生α-萘酚与重氮盐偶联形成不溶性灰黑色沉淀,定位于酶活性所在之处。 (2)结果判断:阳性结果为胞质内出现灰褐色至深黑色颗粒状或片状沉淀 ①(一)灰褐色沉淀,为0分。 ②(+)胞质出现灰褐色沉淀,为1分。 ③(++)胞质深褐色沉淀,为2分。 ④(+++)胞质中已基本充满棕黑色颗粒状沉淀,但密度较低,为3分。 ⑤(++++)胞质全被深黑色团块沉淀所充满,密度高,甚至遮盖胞核,为4分。 (3)参考值:成熟中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)的积分值为7~51。由于各实验室的实验条件不同,正常值也有差异,应建立本实验室的正常值。这里的正常值仅供参考。 (4)临床意义: ①生理变化: ①年龄变化:新生儿NAP活性增高,以后下降。儿童期各年龄大致相似,成年期较儿童期活性减低,老年期更低。 ②应激状态下的变化:紧张、恐惧、激烈运动等NAP活性可增高。 ③月经周期中的变化:经前期增高,行经后降低,经后期恢复。 ④妊娠期的变化:妊娠2~3个月的NAP积分值轻度增高,以后逐月增高,分娩时达高峰,产后则恢复正常。 ②病理性变化: ①感染:细菌性感染时NAP积分值增高。在细菌性感染中球菌性感染较杆菌性感染为高;在球菌性感染中,急性较慢性为高。病毒性感染时,NAP积分值一般无明显变化。因此本染色法有时可帮助鉴别细菌性感染和病毒性感染; ②血液病:慢性粒细胞白血病的NAP积分值明显减低,常为“0”,缓解时NAP

碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法) 简介: 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ,简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组织内,其活性所需最适pH 9.2~9.8。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠比色法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法,其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下,可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。通过分光光度比色法测定510nm 处吸光度,据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 操作步骤(仅供参考): 1、 配制标准品工作液:。按照下表稀释系列标准品溶液。 2、 准备样品: ① 细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离 心取上清,-80℃冻存,用于碱性磷酸酯酶的检测。 ② 血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的 测定,尿液通常也可以直接用于测定,-80℃冻存,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 ③ 高活性样品:如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶,可以使用原有的裂解液或 编号 名称 TE0007 50T TE0007 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 25ml 50ml 4℃ 避光 试剂(C): 显色基液 75ml 150ml -20℃ 避光 试剂(D): Phenol 标准(1mg/ml) 1ml 2ml RT 试剂(E): ddH 2O 5ml 10ml RT 使用说明书 1份 0 1 2 3 4 5 Phenol(0.05mg/ml)(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 ddH 2O(ml) 0.55 0.45 0.35 0.25 0.15 0.05 相当于金氏单位(U/L) 10 20 30 40 50

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