一种新的染色体制片永久封片法
植物染色体制片与观察实验报告
植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组） 姓名：蔡梦雅 1230170010 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞 一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。 二、关键词：染色体洋葱压片法 三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析及有关制片方法进行了探讨。植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞核染色体。我们设计了不同的实验方案探究如何制作优良的植物染色体玻片，掌握染色体技术。 四、材料与方法： 1.取材 洋葱（Aillum cepa）的鳞茎 2.实验器具和药品 2.1器具 a.载玻片 b.盖玻片 c.烧杯 d.量筒 e.培养皿 f.滤纸 g.玻璃棒 h.镊子i.手术刀 2.2药品 a.0.1mol/L醋酸钠溶液 b.0.25%秋水仙素 c.冰醋酸 d.无水乙醇 e.1mol/LHcl f.纤维素酶 g.果胶酶 h.卡宝品红 2.3试剂配制 卡诺固定液：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 酸解液：一份无水乙醇与一份1mol/L 盐酸1:1进行配制。 酶解液：用0.4g的纤维素酶和0.15g的果胶酶溶解在20ml蒸馏水里。
人类染色体的识别及核型分析
生命与环境科学学院实验报告 实验课名称遗传学实验实验名称人类染色体的识别及核型分析成绩______________ 姓名王大锤实验报告系列年级学号组别一时间2015.温度6℃ 实验原理及目的 实验目的 1、学习并掌握染色体核型的分析方法； 2、熟悉人类染色体的特征； 3、了解人类染色体结构畸变的表示方法。 实验原理 1．染色体组型（核型）的基本含义 含义：生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。 包括：染色体的总数，染色体组的数量，每个染色体组内染色体基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置，随体或次缢痕等。 染色体组型是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。 2．人类染色体特征 Denver体制 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型（karyotype）的基本特点即Denver体制，成为识别人类各种染色体病的基础。 3.染色体显带标本 显带技术（banding technique）：用各种不同方法，以及用不同染料处理染色体标本后，每条染色体上出现明暗相间或深浅不同带纹的技术。 每条染色体带纹相对固定，可用于鉴别。 显带技术种类：Q带、G带、C带、R带、T带. G带是目前被广泛应用的一种带型。主要是被Giemsa染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 4.遗传学中一些常用于对染色体和核型分析的指标描述 界标(landmark)：稳定、明显标记的指标.包括末端、着丝粒和带. 区（region）：两相邻界标之间. 带（band）：着色处.（浅、深；亮、暗）. 臂（arm）：p、q 实验材料、仪器及试剂 1.人类染色体标本——非显带标本和显带标本 2.直尺，剪刀，计算机等。 实验步骤 ①染色体制片 制片方法：植物染色体——压片法（酸解、酶解） 动物染色体——滴片法（骨髓细胞、外周血细胞）标本种类：非显带染色体；显带染色体 图片要求：染色体分散；数目全；形态好 ②选择最佳图象拍照 ③测量、计算 ④配对 ⑤剪贴 ⑥排列 排列原则：从大到小；短臂向上；着丝粒在一条线上；性染色体单排。
实验一 物染色体压片技1.
实验一植物染色体压片技术 一、实验原理: 植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法,将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态,并对其染色体进行染色,压片后观察它的染色体分裂的一种方法。 二、实验目的: 植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术,是其他新技术所不能完全取代的,是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。 三、材料的制备: 黑麦根尖(2n=14 根尖材料的制备: 1.浸泡:大、油、壳→浸泡24h(23~25℃;小、裸的不浸泡。 2. 发根:将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养(锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草;最适温度(23~32℃;培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。目的:(1使分裂速度减慢,根尖长度整齐一致; (2调节工作时间。再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天;待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。 3. 愈伤材料的制备:(适合春、夏两季用刀片将树杆割去保护组织露出伤口,用75﹪乙醇消毒包裹一天,再用50~75ppm赤霉素处理;几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。 四、预处理:
1. 方法:(化学和物理两种 (1 化学方法:(适合所有生物 a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末,易溶于水的巨毒药品; b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体,用少量的乙醇溶解再稀释, 对禾本科植物的随体表现很清楚; C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液,易溶于乙醇和苯;难溶于水, 100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟; (以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5h d. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体,难溶于水;具有强烈的腐蚀 性,只能处理1~1.5h。 (2 物理方法:(适合禾本科作物,本次实验所采用 冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。 预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成;增加中期图象,改变细胞质的粘度,使染色体缩短变粗,易于染色体的显带及研究。五、固定: 卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸; 卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 (5︰3︰2(乙醇︰氯仿︰醋酸; 固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞,使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。 六、保存:
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察
果蝇唾腺染色体标本的制备和观察 摘要本实验通过用黑腹果蝇的三龄幼虫的唾腺，来观察果蝇的唾腺染色体。目的在于学会辨认果蝇的唾腺的特征和识别各条不同的染色体以及掌握其基本的特征。了解唾腺染色体的作用和意义。 １．引言 果绳唾睬染色休为多线染色休,形成原因是由于染色休不断复制,但细胞不分裂从而形成了多线染色休,其上每一横纹相当于一个顺反子,横纹的形态特征有着种的特异性和稳定性。因此果蝇唾睬染色休成为了研究染色休结构、基因定位、基因功能的重要实验材料。1881年Ba}biani首次在摇蚊幼虫的唾腺细胞中发现多线染色体.20世纪30年代Painter首先用果蝇唾腺体作为遗传学数据在细胞学上的验证材料,他研究了多线染色体上的横纹跟基因的关联性以及染色体的物种特异性。Bridges也对果蝇唾腺体进行了广泛详细的研究,制成一系列与已有的基因连锁图相对应的果蝇细胞学图。 ２．实验材料和方法 ２．１实验材料 受精的雌果蝇、盖玻片和载玻片、镊子、解剖针解剖镜和显微镜、醋酸地衣红染液、指甲油 生理盐水、香柏油、镜头纸。 ２．２实验方法 ２．２．１实验材料的获取和处理 （1）三龄幼虫的培养：取20-30只受精的雌果蝇于培养基中，在22摄氏度的恒温冰箱中饲养7天得到肥大的果蝇三龄幼虫。
（2）唾腺的剥取和制片：取果蝇三龄幼虫于一滴加了生理盐水的载玻片上，用两根解剖针，一根扎住口器，一根扎住体前1/3处像两端拉唾腺腺体随之而出。唾腺是一对透明的茄子状腺体，外有白色的脂肪组织（不透明）在腺体的前端各延伸出一细管汇合在一起与口器相连，相对于其他组织唾腺最为透明因此在黑色背景下其他组织呈白色,而唾腺是半透明的,辨别时应在明亮的光源下进行，果蝇的唾腺细胞很大，在解剖镜下可以看见其轮廓。幼虫被拉断时唾腺也可能随之被拉出,也可能仍连在口器上,这时可用解剖针轻轻将其挤压出来。拉出的腺体有可能仍为完整的左右对称的长茄状囊体,也可能分开、断裂。去除幼虫其它组织部分，并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。快速的将唾腺染色体转移到另一干净的载玻片上，每片2-3个，然后用醋酸地衣红染液染色10-15分钟，用吸水纸吸去多余的染液盖好盖玻片，敲散细胞，压匀，涂上指甲油。然后镜检。 ３．实验结果 理想情况下，果蝇的唾腺染色体应该是清晰的5条长臂加一条短臂。5条长臂分别为X、2R、2L、3R、3L和短臂4号染色体。X染色体明显的特征是在接近末端有一段永久性的膨突，另外，X染色体和4号染色体都仅仅只有一条臂且X染色体是除了4号染色体之外的最短的一条臂。4号染色体最短，很容易分辨出来；其次2号和3号的染色体的两条臂不容易区别，但是，仔细的看还是有差别的，根据理想的染色体图，我们可以发现，一般情况下3L末端有一个缢缩，杨大翔在“果蝇唾腺染色体的制备与观察实验”的背景知识一文中用图片的形势展示了各条臂的末端的主要的特点，可以根据图示来辨别各条臂。
植物染色体的制片与观察
植物染色体的制片与观察以及核型分析组员：郑石悦陈雨佳吴俊强 植物染色体的制片与观察 一.实验目的： 1.了解预处理，固定，解离，染色，烤片，及压片的步骤和作用。 2.掌握植物有丝分裂染色体常规制片技术。 3.观察有丝分裂过程中染色体的形态特征以及动态变化。 二．实验原理： 1.植物根尖分生组织的细胞有丝分裂比较旺盛，每天都有分裂高峰时期。 2.不同植物分裂高峰时期是不同的。大蒜和洋葱细胞的有丝分裂高峰时期通常在上午九点到十一点。 3.把分裂时期的根尖用固定液固定，再经染色后压片，在显微镜下进行观察，就能看到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 4.预处理可以使染色体缩短变粗，易于计数。同时抑制细胞分裂过程中纺锤丝的形成，使更多细胞停留在分裂中期。这时，染色体分散在整个细胞质中，有利于染色体的形态数目观察。 三．实验材料： 洋葱 实验用具： 显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，镊子，解剖针，恒温培养箱，恒温水浴箱，棉签，刀片 试剂： 95%乙醇，冰醋酸，盐酸，醋酸洋红染色液，秋水仙素，2甲苯 四.实验步骤： 1.材料的培养：洋葱置于盛有湿沙的托盘中，20~25度培养至根长1~2厘米时取材。取材时使用解剖针及镊子。 2.预处理： （1）化学药物处理：0.05%~0.2%秋水仙素水溶液在室温条件下处理2~4个小时（注意时间不能过长，过长染色体会变得很短，不利于研究）
（2）冷冻处理：将根尖置于盛有冰雪混合物的烧杯中，保存于1~4度的冰箱20~24个小时（化学药物处理对染色体有破坏。冷冻处理无破坏，对禾本科植物效果良好） 3.固定:将材料再用蒸馏水冲洗两次，转入卡诺氏固定液（乙醇和冰醋酸以三比一混合）中固定24个小时（注意取材和固定时要在有丝分裂高峰期）。 4.解离：将根尖用蒸馏水冲洗后放入已经在60度恒温水浴箱中预热的1mol每升的盐酸中，60度水浴约十分钟，当根尖的伸长区变透明而分生区呈米黄色或乳白色时即可取出，用蒸馏水冲洗后备用。 5.染色及压片：取出根尖，去掉伸长区，留1~2mm的分生组织区滴一滴醋酸洋红染色液，染色2~3分钟，然后盖上盖玻片，在酒精火焰上方加热至手背触摸盖玻片时感到微烫（酒精灯加热的作用是 1.软化细胞，易于压片2.使细胞质颜色变浅，使染色体颜色反差加大，利于观察）。在盖玻片上盖上吸水纸，用左手大拇指和二拇指固定盖玻片两端，右手拿棉签垂直敲击盖玻片几下，使材料分散。然后用右手大拇指用以按压盖玻片，将材料压成一层。 6.观察：将压好的片现在低倍镜下观察，找到处于分裂时期的细胞后，再转换到高倍镜下观察染色体的形态特征，观察不同分裂时期的细胞即可了解染色体在整个细胞分裂时期的动态变化特点。 核型分析实验
植物细胞染色体制片及有丝分裂观察
实验报告 学生姓名： 学号： 专业: 年级、班级： 课程名称： 遗传学实验 实验项目：植物细胞染色体制片及有丝分裂观察 实验目的 1.学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体压片技术 2.观察有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化 实验原理 1. 在有丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状的发育和遗传的稳定性。 2. 有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的装片。 实验材料 无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、饱和对二氯苯水溶液、0.1%秋水仙素、0.1N 盐酸、洋葱根尖 实验步骤 材料培养 取材 预处理 固定 解离（酸解） 实验结果 醋酸洋红染色 染色 改良品红染色 压片 镜检
图1 染色后低倍镜下洋葱根尖细胞全视野图图2 处于分裂间期的洋葱根尖细胞图3 处于有丝分裂前期的洋葱根尖细胞图4 处于有丝分裂中期的洋葱根尖细胞 图5 处于有丝分裂后期的洋葱根尖细胞图6 处于有丝分裂末期的洋葱根尖细胞
思考与分析 根据你的实验情况总结出制备好一张优良的细胞分裂标本应注意哪些问题？ 预处理方面 由于正常情况下细胞分裂中期持续的时间很短，且分裂现象较少，因此在预处理时可采用化学或物理方法使细胞分裂停止于中期，从而获得更好的观察效果。 解离方面 在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不易分散，若解离过长则在下一步处理时由于材料过软而易将根尖丢失。 3.取材方面 只取2mm ～3mm 长的分生区 要细心区别根尖的前端和后端，若误取了根尖的后端，在观察时，则只会见到长方形的成熟区细胞，见不到方形的分生区细胞。材料经解离、冲洗后根尖前端分生区部分呈乳白色、比较圆滑，后端部分则较透明和粗糙（取根时不用剪刀而改用镊子夹取则更明显）。 4.染色方面 ⑴使用醋酸洋红染色时，可以在酒精灯上稍加热，这样可以使材料更易着色和染色背景更清晰。 ⑵媒染一定要充分，媒染后的水洗也要充分，洗不足时影响染色效果，并会在组织内外产生大量沉淀，制成的片子污浊。 图7 有丝分裂中期的洋葱根尖细胞绘制图（10x40） 图8 有丝分裂后期的洋葱根尖细胞绘制图 （10x40）
压片法制片
1. 压片法 在生物技术上，除用切片法观察细胞外，还可用压片法，尤其是观察细胞中的染色体数目，用压片法最为合适，不仅省事，结果也比切片法好。压片法是将材料置载玻片上，用解剖刀或解剖针拨开，加染液一滴，盖以盖玻片，施以压力，使材料破碎，细胞分散，然后进行观察。压片法种类很多，下面介绍两种： (1). 醋酸——洋红法 此法多用于制备幼小花药，观察花粉母细胞减数分裂的压片。而对根尖压片有时染色不好(但对洋葱根尖染色较好)。其步骤如下： a. 将花药或根尖(先切成0.5cm长)，投入卡诺氏固定液中固定1刻钟至l小时，然后移至70％酒精中保存。 b. 取固定保存的材料放入盐酸酒精解离液(95％酒精一份，浓盐酸一份，将二者混合即成)中5～8分钟。或置1N盐酸(取比重1.19的盐酸82.5毫升，加水至1000毫升即成)中于60℃的水浴温度下，处理6～8分钟，至透明为止。 c. 用清水冲洗干净解离液。 d. 取洗净的材料，放在载玻片上，用醋酸洋红染液(或醋酸苏木精染液)染色5～10分钟。 e. 然后将材料移至另一清洁的载玻片上。重新用染液装片，覆以盖玻片，以铅笔的橡皮头端轻轻压盖玻片，使材料呈现分散的薄层，置镜下观察。 (2). 铁矾——苏木精法 此法一般用于细胞有丝分裂中的染色体计数，由于染色体被染成紫兰黑色，用于显微照相，效果较好。（由于各种植物有自己的特殊性，因此，取材的时间、取材的部位、预处理的时间、固定的时问、水解的时间、染色的时间等，都有可能不同。在此只作了大致的介绍，具体材料还需作预备实验进行摸索。另外还要注意，各次水洗一定要洗干净沾在材料上的药液，以免影响下一个步骤的结果。）染色步骤如下(以蚕豆根尖作材料为例)： a. 取材：将蚕豆种子萌发。待种子根长至1cm左右，在上午8时～11时之间，切下长约0.5cm的根尖，进行预处理。 b. 预处理：目的使分裂细胞的染色体缩短和比较分散，便于压片观察。预处理是在固定以前进行，方法是将材料切下放入以下溶液： 0.05～0.2％秋水仙碱水溶液中处理2～5小时； 或：对二氯苯饱和水溶液中处理3-5小时； 或：8-羟基奎啉(0.004～0.005％)，处理2～12小时； 或：富民隆乳剂(0.01％)，处理24～48小时； 或：在0～3℃下冷冻处理24小时。 c. 固定：通常用95％酒精—冰醋酸(3：1)固定液固定1～24小时。固定后换入70％酒精中保存。一般可保存1～2星期，如放入冰箱中(3～8℃)则可保存数月。(4) 离析：将保存在70％酒精中的根尖，用刀纵切成两半，换入蒸馏水，然后移入1N盐酸中，在60℃的水浴中离析10～15分钟。 d. 水洗：离析后必须用水洗净残留盐酸，否则会影响染色。 e. 媒染：将根尖移入4％铁矾水溶液中，媒染20～30分钟，然后用水洗净。 f. 染色：放入0.5％苏木精水溶液染色3～5小时，如果需要染色较久(例如过夜)则可将苏木精溶液浓度稀释。 g. 压片：用镊子夹取根尖一段，放在载玻片上，滴上一小滴醋酸，迅速捣碎根尖，盖上盖玻片，用铅笔的橡皮头轻压，使材料分散成一薄层。 h. 镜检：将材料压好后，放置显微镜下观察。
实验一 物染色体压片技1
实验一植物染色体压片技术 一、实验原理： 植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法，将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态，并对其染色体进行染色，压片后观察它的染色体分裂的一种方法。 二、实验目的： 植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术，是其他新技术所不能完全取代的，是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。 三、材料的制备： 黑麦根尖(2n=14) 根尖材料的制备： 1.浸泡：大、油、壳→浸泡24h(23~25℃)；小、裸的不浸泡。 2. 发根：将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养（锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草)；最适温度(23~32℃)；培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。目的:(1)使分裂速度减慢，根尖长度整齐一致； (2)调节工作时间。再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天；待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。 3. 愈伤材料的制备：(适合春、夏两季)用刀片将树杆割去保护组织露出伤口，用75﹪乙醇消毒包裹一天，再用50~75ppm赤霉素处理；几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处理： 1. 方法：(化学和物理两种) (1) 化学方法：(适合所有生物) a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末，易溶于水的巨毒药品)； b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体，用少量的乙醇溶解再稀释， 对禾本科植物的随体表现很清楚)； C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液，易溶于乙醇和苯；难溶于水， 100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟)； （以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5h） d. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体，难溶于水；具有强烈的腐蚀 性，只能处理1~1.5h)。 (2) 物理方法：(适合禾本科作物，本次实验所采用) 冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。 预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成；增加中期图象，改变细胞质的粘度，使染色体缩短变粗，易于染色体的显带及研究。五、固定： 卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸); 卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 （5︰3︰2）(乙醇︰氯仿︰醋酸); 固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞，使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。 六、保存： 冲洗置换，从95﹪~70﹪的乙醇梯度置换；每次置换需停留
粉末直接压片法
粉末直接压片法 “药片者，即以一种或数种药物或与辅药和后制成之固体片状物。”作为大家日常生活中最常接触到的药物剂型之一，片剂出现的年代相当久远——如古罗马时期的英格兰地区，在制作一种治疗视力模糊的药物时，会将药物成分与树胶或其它粘性物质混合在一起，硬化并印制成片状，易于在应用时溶解。 虽然以现代人的眼光看，古老片剂的原料及工艺都相当令人忧心，但从中体现的基本的压片方法却一直影响着后世。如今，为了适应现行药品生产质量管理规范（GMP）及现代医疗对片剂质量的要求，即使片剂已在临床应用上处于主导地位，但在处方开发中，仍需要对其不断地进行工艺创新，如何研制出畅销片剂也成为了众多制药企业共同的战略目标。 目前的制片工艺主要可分为4小类，分别为『湿法制粒压片法』、『干法制粒压片法』、『粉末直接压片法』及『半干式颗粒压片法』。其中，粉末直接压片法具备操作简单、生产周期短、生产成本低、工艺适应性强等特点，被认为是目前最值得推广的一种片剂制备工艺。 一、粉末直接压片法简介 粉末直接压片法是指不经过制粒过程直接把药物和辅料的混合物进行压片的方法。粉末直接压片法避开了制粒过程，因而具有省时节能、工艺简便、工序少、适用于湿热不稳定药物等突出优点。目前，各国的直接压片品种不断上升，有些国家高达60%以上。 但需要注意的是，由于大多数药物的理化性能无法满足粉末直接压片的要求，因此需要选用性能优越的新型辅料来改善药物的流动性和可压性。1963年喷雾干燥乳糖以及微晶纤维素的首次出现，从根本上改善了粉末的流动性能，突破了粉末直接压片工艺的主要技术瓶颈，对于制药工业具有里程碑式的意义。 二、粉末直接压片法的优势 1、提高片剂的崩解性能 片剂的崩解主要是依靠片剂中的崩解剂通过毛细管作用或膨胀作用来促使片剂崩解。采用粉末直接压片法制备片剂时，其崩解剂不会由于前期接触水分而降低崩解性能，从而保证了良好的崩解特性。 2、提高难溶性药物片剂的溶出性能 由于溶解度小的药物受其比表面积和药物成品表面性质的影响较大。采用粉末直接压片工艺，选用亲水性好的辅料（例如乳糖）作为填充剂，在保证片剂迅速崩解的
压片法实验报告
题目：压片法实验报告 目的：掌握压片法的基本技术，以葱为例观察植物有丝分裂的各个时期,并对葱的染色体计数。 材料：葱根尖。 方法与操作步骤 一、取材：上午8:30取洁净的葱根尖，取尖端2-3cm长于称量瓶中。 二、前处理：为了得到更多中期分裂项的细胞，同时使染色体缩短和良好分散， 可对根尖进行预处理。处理方法为：浓度为0.002M的8-羟基喹啉前处理3小时 三、固定：卡诺氏（无水乙醇：冰醋酸=3:1）固定液（用量应在材料大小的20 倍以上）固定9个小时。 四、解离 1、用蒸馏水冲洗材料后，用50%乙醇处理30分钟。 2、1mol／L盐酸解离37分钟。 3、软化45%冰醋酸处理30min。 五、染色：改良苯酚品红染色10-18个小时。 六、制片 1、取一个根尖放于一张洁净的载玻片的中间。 2、切取根尖端的3-4mm。 3、在材料上滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。 4、用食指和中指固定住盖玻片，然后用笔平整的一端撞击盖玻片，用吸水纸吸 取多余水分。 七、镜检 1、镜检时先用10*10倍需找比较适合观察的各分裂相细胞。 2、然后在换10*40倍进一步观察所选细胞的染色体分散效果如何，是否在一个近似的平面上。选取染色体分散比较好，且近似在一个平面上的中期分裂相的细胞做染色体计数；选取典型的各分裂时期观察有丝分裂的前期、中期、后期和末期。 3、将10*40倍下选好的细胞换到油镜（10*100）倍观察，在100倍物镜下观察需要滴香柏油在盖玻片上。 结果与分析 一、结果分析 1、染色体计数的观察如下列图片所示
2n=16 2n=16
2n=16 通过以上的观察数出葱染色体条数为2n=16。
植物染色体制片与观察实验报告审批稿
植物染色体制片与观察 实验报告 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组） 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞 一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。 二、关键词：染色体洋葱压片法 三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析
染色体核型分析系列之三大技术介绍
染色体核型分析三大技术介绍 ·概念 是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、形态与功能之间关系所不可缺少的重要手段。经行核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因。染色体核型分析技术，传统上是观察染色体形态。但随着新技术的发现与应用，染色体核型分析三大技术包括：GRQ带技术、荧光原位杂交技术、光谱核型分析技术。 ·三大技术介绍 一、GRQ带技术 人类染色体用Giemsa染料染色呈均质状,但是如果染色体经过变性和(或)酶消化等不同处理后,再染色可呈现一系列深浅交替的带纹,这些带纹图形称为染色体带型。显带技术就是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色,使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。每个染色体都有特定的带纹,甚至每个染色体的长臂和短臂都有特异性。根据染色体的不同带型,可以更细致而可靠地识别染色体的个性。染色体特定的带型发生变化,则表示该染色体的结构发生了改变。一般染色体显带技术有G显带(最常用),Q显带和R显带等。 百奥赛图提供的小鼠染色体核型分析服务，就是利用Giemsa染色法，对染色体染色后进行显带分析，保证基因敲除小鼠在染色体水平阶段没有发生变异，从而确保基因敲除小鼠可以正常繁殖。
二、荧光原位杂交技术 荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,FISH)是在20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料。FISH的基本原理是将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA 纤维切片上,再用与荧光素分子耦联的单克隆抗体与探针分子特异性结合,来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析，可判断单个碱基突变。此时，一个染色体核型，即为一个碱基。近年来，采用荧光原位杂交技术，将荧光素标记的探针进行染色体核型特定位点的检测和标记，可以精确地检测染色体上DNA链中，单个碱基的突变，从而大大提高了染色体核型分析的精度。 三、光谱核型分析技术 SKY(spectralkaryotying)光谱染色体自动核型分析是一项显微图像处理技术,SKY通过光谱干涉仪,由高品质CCD获取每一个像素的干涉图像,形成一个三维的数据库并得到每个像素的光程差与强度间的对应曲线,该曲线经傅立叶变换之后得到该像素的光谱,再经由软件分析之后用分类色来显示图像或将光谱数据转换成相应的红绿蓝信号后以常规方式显示。
实验二十八植物染色体压片法
遗传学实验指导
实验须知 一、实验课的目的 1、培养锻炼科学的思维方法、实事求是的科学态度和严格的科学作风，提高分析问题解决问题的能力。 2、通过实验加深对理论的理解，学习掌握基本的分子生物学实验技能与实验方法，为今后的学习和研究打下一定的基础。 3、培养学生爱护公物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。 二、实验课的要求 1、课前必须预习，了解基本原理和主要步骤及意义，写出预习报告。 2、上实验课必须穿白大衣，带实验讲义和实验报告纸。 3、遵守实验制度，注意安全（如水、电、煤气、强酸、强碱、有毒物质等）。 4、实验中要正规操作，动手动脑主动进行实验；掌握关键，力求得出准确结果；仔细观察，认真思考，及时做好记录；综合分析得出正确结论。 5、在实验过程中不许大声喧哗，有问题及时请教老师。 6、器材、药品等按规定使用，严禁乱用乱放。 7、爱护仪器，实验过程中因个人未能按实验要求操作而导致的器材损坏，按规章制度进行赔偿。 8、实验结束后，相关器材要彻底清洗干净，放到指定位置。 9、废弃物按要求分类收集、处理。 10、值日生要打扫干净实验台、地面等，并负责关好门窗，检查水、电、煤气等。 11、因故不能上实验者应有请假手续，是否进行补课由教研室研究决定。
目录 实验须知 1 实验一洋葱根尖压片与有丝分裂观察 3 实验二染色体组型分析 5 实验三减数分裂 7 实验四人工诱发多倍体植物 9 实验五植物的离体培养和快速繁殖 11 实验预习报告格式要求 13 实验报告格式要求 13
实验一洋葱根尖压片与有丝分裂观察 一、实验原理 植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。 二、实验目的 1、学习根尖染色体压片法。 2、掌握有丝分裂过程。 三、实验材料 洋葱（Aillumcepa）的鳞基 四、实验器具和药品 1.用具：染色板，载玻片，盖玻片，指管，温度计，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，毛边纸。 2.药品：无水酒精，70％酒精，冰醋酸，对二氯苯或秋水仙素，碱性品红，石碳酸，甲醛，山梨醇，二甲苯。 卡诺固定液的配制：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 染色液的配制： 配方Ⅰ.石碳酸品红（Carbol.fuchsin），先配母液A 和B。 母液A：称取3 克碱性品红，溶解于100 毫升的70％酒精中（此液可长期保存）。 母液B：取母液A10 毫升，加入90 毫升的5％石碳酸水溶液（2 周内使用）。 石碳酸品红染色液：取母液B45 毫升，加入6 毫升冰醋酸和6 毫升37％的甲醛。此染色液含有较多的甲醛，在植物原生质体培养过程中，观察核分裂比较适宜，后来在此基础上，加以改良的配方Ⅱ，称改良石碳酸品红，可以普遍应用于植物染色体的压片技术。 配方Ⅱ：改良石碳酸品红 取配方Ⅰ.石碳酸品红染色液2—10 毫升，加入90—98 毫升45％的醋酸和1.8 克山梨醇（sorbitol）。此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。 五、实验说明 1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。 2.植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。 3.前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3—4 小
果蝇唾腺染色体的制片与观察资料讲解
果蝇唾腺染色体的制 片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察 一、实验目的 1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法； 2、观察果蝇的唾腺染色体。 二、实验原理 1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨 型染色体。唾腺染色体的显著特征是： （1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍； （2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体； （3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记； （4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。 许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。 果蝇唾液腺： 2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，
构成一个永久间期系统。唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，多则可达2的10次方至15次方次复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物，称为多线染色体。由于细胞分裂停止在间期，核物质螺旋化程度低而充分伸展，这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约2000um，是其体细胞中期染色体长度的100—200倍。伸展形式的DNA长度约为40000um，只需简单的染色和压片，就可以很容易地在光学显微镜下观察到。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。 在染色体臂上还可看到某些带纹通过染色体的界旋、膨大形成的疏松区和巴尔比尼环，其富含转录出来的RNA ，因此不着色，是基因活动的区域。在个体发育的不同阶段，疏松区或巴尔比尼环在染色体上出现的部位不同，因此可以研究基因的表达，开展各种染色体变异的研究等等。 果蝇共有4对染色体。其中一对为性染色体（XY或XX），XX染色体为顶端着丝粒染色体，呈杆状，Y染色体为“J”形；第二对、第三对染色体均为中央着丝粒染色体，呈“V”形；第四对染色体短小，为顶端着丝粒染色体，呈点状，附在染色盘边缘。由于唾腺染色体的假联会，X染色体的一端在异染中心上，另一端游离；而第二对、第三对染色体着丝粒在中央，可以从异染中心呈“V”字形向外伸展出四条臂（2L、2R、3L、3R），Y 染色体着丝粒附近的异染色质参与了染色中心的形成，所以理想的片子，不管雌雄果蝇的唾腺细胞在显微镜下均可见五条长臂（X、2L、2R、3L、3R)和一条短臂（第四条染色体臂不易观察）。雄果蝇唾腺细胞中的X染色体臂比雌果蝇的稍细。在染色体臂上可观察到许多明暗相间的带。
玉米染色体制片心得
甜玉米染色体制片心得 10科4 第二小组 成功之前总会经历失败，我们小组第一次实验整整持续了两天，用了低渗制片法，也用了压片法，但都看不到染色体，以失败告终，失败原因有以下几方面： 1.取材时根尖较长，分裂最旺盛期已过 2.酶液用水来配，酶解过程中会使细胞吸收涨破 3.酸解时间过长 4.低渗时转速设置不合理 5.染液染色效果差 6.整个实验时间安排欠合理 总结失败的原因，最后制定另一套实验方案，并严谨进行实验，最后终于看到较满意的染色体，实验步骤归纳如下： 实验步骤： 1.催芽培养（10.29下午） 将甜玉米11-6种子置于水中浸泡1小时后，放入铺有两层纱布的培养皿中，加适量水置于培养箱中培养。 2.预处理（11.1 18:20） ①配制0.1%秋水仙碱：将1%秋水仙碱稀释到0.1% ②取材：玉米根尖长到1~2cm，切根尖0.5cm ③处理：将根尖放入0.1%秋水仙碱中室温下进行预处理，当时时间为18:40 3.固定（11.1 21:40） 用蒸馏水冲洗3次，吸去蒸馏水，注入固定液（乙醇：酒精=3:1）固定 4.酶解（11.2 12:00） ①配酶液：各称取0.25g的果胶酶和纤维素酶溶解到刚配制好的0.1%醋酸钠中，定容至10mL. ②解离：将根尖从固定液中夹出置于酶液中酶解，当时时间为12:40 5.染色、观察（11.2 16:00-21:00） ①洗去酶液：将酶液吸掉（16:30完成），加入0.1mol/L醋酸钠将酶液渗出，然后转让45%醋酸中 ②染色：染色前用蒸馏水水洗根尖一次，然后加入改良品红染色12min. ③压片观察：敲破观察。 经过小组成员的配合和努力，本次实验总算有了个满意的结果，当然对于我们的成功，黎杰强老师功不可没，在这我代表小组全体成员对黎杰强老师百忙之中抽空过来给我们耐心指导表示万分感谢！。
实验五 植物根尖染色体压片技术
实验五植物根尖染色体压片技术 一、实验目的 1．学习植物根尖压片方法的基本技术。 2．熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体的变化。 二、实验原理 有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。大蒜体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。 三、实验材料 大蒜根尖。 四、实验器具和药品试剂 显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸等。 卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液。 五、实验方法和步骤 1、材料准备选取大蒜茎块放在培养皿中，放清水浸泡，放进20～25℃培养箱内培养。当根尖长1～2cm 时，即可以进行处理。 2、低温处理将材料，浸入蒸馏水内，放置到4℃冰箱中处理24小时以上。 3、固定通常采用的是卡诺氏固定液。固定的目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投入固定液中4℃冰箱处理24小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内0～4℃保存备用。经过较长时间保存的材料，在进行观察前可用固定液再处理一次，效果较好。 4、解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到青霉素试管内，用清水洗几次，吸干水，加入1mol/L HCl溶液，在60℃下水解6~8分钟，解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗2～3次，以利于着色。 5、染色、压片将解离后的根尖放在培养皿内，滴加希夫试剂染色10分钟左右。制片时，
果蝇唾腺染色体的制片与观察
果蝇唾腺染色体的制片与观察 一、实验目的 1、练习果蝇幼虫唾腺分离技术及唾腺染色体的制片方法； 2、观察果蝇的唾腺染色体。 二、实验原理 1、唾腺染色体：唾腺染色体是双翅类昆虫唾腺细胞的间期核中所看到的巨 型染色体。唾腺染色体的显著特征是： （1）形状为带状，宽达5微米，长达2000微米它相当于普通染色体的100～200倍； （2）核不分裂，由于染色体不断复制，形成了多线性染色体，宽度增加，同时长度也增加，成为巨型染色体； （3）带的全长几乎都有明显的嗜碱性的横纹，横纹的宽度有大有小，密度有疏有密，但是它的数目，位置等等对于同源染色体来说却都是同样的。 唾腺染色体的DNA含量达4，000—8，000c。横纹被认为是染色小粒横向排列而成的。横纹是详细研究染色体的部分缺失、倒位、重复、反复、易位等现象的标记； （4）由于2条同源体细胞染色体联会，在黑腹果蝇（2n= 8）中，V形的第二染色体和第三染色体各有两条臂，又各条染色体在异染色质多的着丝粒附近互相靠拢，与核仁一起在核的中央形成一个染色中心。唾腺染色体的一条或几条横纹常显著膨起，这部分称为Bal- biani环。一般把多线性的巨大染色体中的这种膨大起称为疏松结构。 许多双翅类以及二、三种脉翅类昆虫的食道、肠、马氏管和神经细胞中，以及在植物界的Rhinanthus（胡麻科）的胚盘细胞、虞美人草的反足细胞等都能看到具有这样特征的染色体（巨大染色体或多线染色体）。 果蝇唾液腺： 2、果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期， 构成一个永久间期系统。唾腺细胞数目不增加，但体积增大，其中每条染
色体的
染色体核型分析
姓名程开源系年级2010级临床医学八年制同组者孙琳、孙晶鑫、窦云德 科目分子细胞生物学题目染色体核型分析学号201000232012 【实验目的】 1.了解小白鼠睾丸细胞染色体的形态及数目。 2.初步掌握小白鼠睾丸细胞染色体的玻片标本制作方法。 3.观察动物细胞染色体的数目和形态。 【实验原理】 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中制备染色体。小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织。骨髓细胞中，有丝分裂指数相当高，因此可以直接得到中期细胞而不必象淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培养；对大型动物通常采用对骨骼、脊或胸骨穿刺术吸取红骨髓，小型动物多采用剥离术取股骨以获得骨髓细胞。 制作染色体标本的先决条件 1. 细胞具有旺盛的分裂能力 选择活跃的组织：胸腺，骨髓，睾丸，小肠 施加药物使细胞分裂：PHA 2. 设法得到大量的中期细胞：秋水仙素 (1) PHA：粗细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞 (2) 秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。 (3) 低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体展开 (4) 空气干燥：使细胞和染色体展开 (5) 固定：用甲醇：冰醋酸=3:1作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白讲，变性后硬度增加，保持了染色体的“及时形态”，对细胞膜蛋白讲，变性使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 【实验材料】 1.材料：小白鼠。 2.试剂：秋水仙素、0.3%KCl溶液、甲醇、冰醋酸、磷酸缓冲液（pH=6.8）吉 姆萨原液。 3.器械：手术刀、手术剪、镊子、试管架、解剖盘、注射器、针头、吸管、离 心管、离心机、玻片(冰片)、天平、试镜纸、二甲苯、吸水纸、香柏油、烧杯、水浴锅。 【实验步骤】 4.取雄性小鼠以每克体重4ug注射秋水仙素，经14-16小时后，断头法杀死小 鼠，取出睾丸，用生理盐水（0.9%的NaCl）吸去血污。 5.放入装有1ml 0.3% KCl 液的小烧杯中剪碎（呈乳白色）。