浙江大学生物化学丙实验报告2
实验报告
…
课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________
实验名称： 离子交换柱层析分离纯化蔗糖酶 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得
一、实验目的和要求
1、学习离子交换层析的基本原理；
[
2、学习离子交换层析分离蛋白质的基本方法和技术；
3、学习蔗糖酶活性检测的基本原理和方法。
二、实验内容和原理
（1）实验原理 1、离子交换层析：
以离子交换剂为固定相，液体为流动相进行。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或者借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。这些过程都是可逆的。在某一pH 值的溶液中，不同的蛋白质所带的电荷存在差异，因而与离子交换剂的亲和力就有区别。当洗脱液的pH 改变或者盐的离子强度逐渐提高时，使某一种蛋白质的电荷被中和，与离子交换剂的亲和力降低，不同的蛋白质按所带电荷的强弱逐一被洗脱下来，达到分离的目的。 离子交换剂是由基质、电荷基团（或功能基团）和反离子构成。
专业： 农业资源与环境 姓名： 李佳怡
学号： 46 日期： 地点： 生物实验中心310
装
订
线
由于蔗糖酶的pI 偏酸性,所以在 缓冲液的环境中，粗分离纯化样品蔗糖酶带负电荷，因此我们用阴离子交换剂达到分离蔗糖酶的目的。 2、酶活力检测(定性检测）
蔗糖酶（β-D-呋喃型果糖苷-果糖水解酶EC ），能催化非还原性双糖（蔗糖）裂解，将蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖 。
本实验采用－二硝基水杨酸法，其原理是－二硝基水杨酸与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，由此来确定并收集蔗糖酶纯化样品。
|
电荷基团 反离子
电荷基团
反离子
电荷基团
反离子
基质
^
—
＋
—
＋
＋
可逆交换
可逆交换
—
＋＋ 溶液中的离子
（交联纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖)
— —
—
|
阳离阴离子交换剂
（2）>
（3）实验内容
1、离子层析分离纯化实验1中粗分离纯化的蔗糖酶样品Ⅲ；
2、定性检测判断所提取的蔗糖酶纯化样品多少。
三、实验材料与试剂
1、实验材料
蔗糖酶粗分离纯化样品Ⅲ
2、实验试剂
①DEAE-Sepharose Fast Flow (弱碱性阴离子交换剂)；
，
②20mmol/L Tris-HCl 缓冲液；
③20mmol/L Tris-HCl，（1mol/L NaCl）缓冲液；
④L乙酸缓冲液，；
⑤5%蔗糖溶液；
⑥3，5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）。
附：3，5-二硝基水杨酸试剂配置方法
甲液：溶解结晶酚于10％NaOH溶液中，并用水稀释至69ml,在此溶液中加亚硫酸氢钠；乙液：称取255克酒石酸钾钠加到300ml 10%NaOH溶液中，再加入800ml 1%3,5-二硝基水杨酸溶液。甲,乙二溶液相混合即得黄色试剂,贮于棕色瓶中备用,在室温放置7-10天以后使用。
四、实验器材与仪器
】
1、高速冷冻离心机；
2、层析柱（φ×20㎝）；
3、恒流泵（流速～1ml/min）(10rpm)；
4、梯度混合器(100ml梯度杯)；
5、核酸蛋白检测仪（灵敏度）；
6、记录仪（纸速：min；灵敏度：50mV）；
7、部分收集器及收集试管（4ml/管）；8、铁架台、夹子（固定层析柱用）；
9、－20℃冰箱（保存样品用）；
10、微量移液枪200ul、1000ul；
11、离心管（留样品Ⅲ和样品Ⅳ用）；
12、7ml离心管（留样品Ⅳ用）；
13、恒温水浴（100℃）；
14、试管、移液管、试管架等。
五、操作方法和实验步骤
1、样品处理（实验1已经完成）
①取其中体积较多一只离心管中保存溶液用作离子交换柱层析进一步分离纯化蔗糖酶；
②剩余一只用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力的测定以及用于SDS-PAGE分析。
③本实验中取离心管中较多的一只离心管用于实验。
2、装柱、平衡：
①检漏：在层析柱中装入水，观察其有无渗漏，如有渗漏，需进行更换；
②连接纯化检测系统：按照示意图将系统连接；（梯度混合器在之后打开）
③调流速：装柱前先调好流速～1ml/min；
④加固定相（离子交换剂）：a将柱下端的出水口关闭；b加进5ml（约1/3柱床体积）20 mmol/L
的缓冲液；c将处理好的DEAE—Sepharose Fast Flow，轻轻搅
匀沿玻棒靠近柱管壁慢慢连续加进柱内至层析柱上端。
注意事项：a凝胶不能太稀，也不能太稠，刚好呈流质状态；b加入过程不能带进气泡。
⑤调整、平衡：待凝胶自然沉积离柱管上端约1-3cm后松开层析柱出口，控制流速～
1ml/min；待柱内凝胶沉降至稳定高度并分出水层后，吸去水层，用玻棒将沉降界
面搅匀，再补加处理好的凝胶，直到凝胶沉降至稳定高度距层析柱上端约3cm处
为止（注意保持凝胶柱面平整）。用20 mmol/L Tris-HCl、的缓冲液连通
层析柱，进行柱平衡，直到流出液与缓冲液的pH一致。
3、加样：
①关闭恒流泵：停止加入20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。待缓冲液液面与胶体表面相切
时，恒流泵停止工作。
②加样品：用胶头滴管缓慢将蔗糖酶蛋白样品溶液（样品Ⅲ）加入层析柱中，注意顺着柱壁滴加，尽可能保持胶面平整。
注意事项：a加样过程中要缓慢，防止凝胶扬起；b在操作的过程中可以采取虎口加样的方法
③进行洗脱：打开恒流泵，使样品溶液进入胶体，待样品溶液完全进入胶体后，用少量洗脱缓冲液将残
余在层析柱壁上端样品洗下，并完全进入胶体后，再加洗脱缓冲液至一定高度。
4、洗脱（梯度洗脱法）
①平衡：加样后，用20mmol/L Tris-HCl 缓冲液进行平衡，洗脱流速为～1ml/min，洗去未被凝胶吸附的杂蛋白；
②梯度洗脱：待层析柱流出液在核酸蛋白检测仪上绘出基线稳定，用20mmol/L Tris-HCl
缓冲液NaCl梯度洗脱（浓度为0-1mol/L NaCl ）层析柱联上梯度混合
器，混合器中分别为50ml L Tris-HCl 缓冲液和50ml含1mol/L
NaCl的L Tris-HCl 缓冲液。洗脱流速为～1ml/min，每4ml
接一管，洗脱至缓冲溶液流完为止。
5、酶活力检测
①检测：跟踪测定峰值及两侧对应试管的蔗糖酶活力
(用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖，从而测定酶活力）
蔗糖酶活力检测
②留样：将蔗糖酶活力高的若干管酶液集中，留样用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定、SDS-PAGE 分析、酶的基本性质实验和用于“用正交法测定几种因素对蔗糖酶活性的影响”（半自主性设计实验），样品低温－20℃保存。
六、实验数据记录和处理
样品离心后：上层淡黄色，下层乳黄色。
柱层析图：
七、实验结果与分析
活力测定结果：根据水浴后各个试管内的颜色深浅判断，第11、12管颜色最深，判断其酶活力最高，与图谱波峰状况相吻合。
图谱分析：洗脱共有两个峰，第一个峰较高，为杂质峰，第二个峰才为洗脱峰。但洗脱凤峰形并不好，没有明显的下降坡，峰拖的很长。判断原因可能为：在加入蔗糖酶蛋白样品溶液时，由于样品量过多，分两次加入，前后两次之间有一定的时间差，导致洗脱峰出现后，下降缓慢，甚至有微微上升的趋势。并且，杂质峰也有下降后重新上升的峰，由此推断洗脱峰峰形不好的原因为加入样品时的不当操作。同时杂质峰很高，并且持续时间较长，表明杂质很多。
小结：蔗糖酶含量高而且活性强的时候，能在短时间内将大量的蔗糖水解成还原性糖，而－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热（100℃）被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比，可依此检验还原糖的量从而标定蔗糖酶的活力及含量。据实验结果检验可知第一个峰为杂质蛋白，第二个峰为蔗糖酶蛋白。实验收集的11、12管颜色最深，收集该两管酶液。
八、讨论、心得
1、此次实验涉及了很多仪器的使用，由此也总结了一些使用要点和此类实验中的一些注意事项：
①在进行凝胶的装填时需要一段时间等待沉降且在整个装填过程中决不能使凝胶暴露在空气里，一旦暴露，那么需要重新装填。且要求填装得均匀，整齐，没有气泡。本次试验我们小组就因为干胶而导致了实验的失败。不仅浪费了很多时间，也表明我们的实验能力还有待提高。
②在使用浓度梯度时需要注意首先应该排出其中的气泡，用胶头滴管分别对准气孔吹吸已达到出去气泡的目的。气泡的存在会影响盐溶液的浓度，从而影响实验的进行。
③在使用移液枪时应当注意不同的液体应当换取枪头，以免引起液体的污染。
④试管收集器有些时候不够灵敏，应当注意手动调节。
⑤在检测蔗糖酶时由于可以大致推测出现的试管号，在检测时可以有针对性的进行选取，比如可以按照1,3,5,6,7，8等这样的顺序检验。
⑥分离柱的螺帽在使用前应该清洗干净，防止堵塞。同时应该检查长细管是否流畅，以保证实验的顺利进行。
⑦在进行实验前需检查分离柱是否是垂直的。
⑧打开浓度梯度仪时，当有气泡进入柱时，要求凝胶上方有液体则保证了实验的安全性。
⑨由于该实验较为耗费时间，三个人应该明确分工，有条不紊，这样才可以做到高效。
2、理论深化：
①防凝胶干的目的：防气泡，使柱床压紧，减少死体积，从而避免颗粒大小不等的交换剂在自然沉降时分层的问题，有利于分辨率的提高。
②柱平衡的原因：离子层析法使用前必须平衡至所需的pH和离子强度。柱子装好后用起始缓冲液淋洗，直至达到充分平衡方可使用。
③为什么要洗脱加样——层析所用的样品应与起始缓冲液有相同的pH和离子强度，所选定的pH值应落在交换剂与被结合物有相反电荷的范围，同时要注意离子强度应低，可用凝胶过滤达此目的。
④梯度洗脱优点：提高柱效，改善检测器的灵敏度
⑤梯度洗脱原理：当样品中的一个峰的k值和最后一个峰的k值相差几十倍至几百倍时，使用梯度洗脱效果特别好。梯度洗脱中为保证流速的稳定，必须使用恒流泵，否则难获重复结果。梯度洗脱常用一个弱极性的溶剂A和一个强极性的溶剂B。
如图（两个图一种原理，前者为洗脱装置和柱子之间封闭，
适用于配备压力泵的色谱柱，后者为洗脱装置和柱子之间
隔离开来，是梯度洗脱的简易装置。）两个容器放于同一
水平上，两容器连通，B与柱相连，当溶液由B流入柱时，
A中的溶液就会自动来补充，经搅拌与第一容器的溶液相
混合，这样流入柱中的缓冲液的洗脱能力即成梯度变化。
3、实验体会
这次试验整体感觉是混乱，主要原因是对实验过程和仪器操作的不熟悉以及思路的不清晰。虽然课件上已经把实验讲述的十分清楚，但是我们小组三人在操作过程中对实验的注意事项不了解，导致了干胶之类的事情发生，应该在每一个环节前理解每个操作的意义，关注注意事项，防止实验失误。所以，如果预习的时候更加仔细一些，对实验过程中可能出现的问题有一定的预想，做好准备措施。另外对实验结果如有一定的了解，这样实验做起来也会更加有方向性和目的性。
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华中师范大学研究生学位论文规范
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华中师范大学研究生学位论文规范 研究生学位论文是学位申请者获取博士、硕士学位的重要依据，是研究生科研能力、科研成果的集中体现，同时也是重要的社会文献资料。为了规范学位论文撰写，提高我校研究生学位论文质量，根据GB／T 7７１3－１987《科学技术报告、学位论文和学术论文的编写格式》和GB/Ｔ7７14－20０5《文后参考文献著录规则》，并结合我校实际,制定本规范。 一、学位论文的基本要求 1、硕士学位论文的基本要求:查阅资料广泛,综合分析透彻，接触学科前沿，了解本领域国内外学术动态;论文的选题应在学术上或对社会发展具有一定的理论意义或实践价值;论文研究成果有所发现、有所创新，能够表明作者已具有独立从事科学研究工作的能力或综合运用科学理论、方法和技术解决实际问题的能力。学位论文应在导师指导下,由硕士研究生本人独立完成。 2、博士学位论文的基本要求：充分了解相关领域的历史与现状，熟悉本研究领域的前沿和国内外学术动态;论文选题有重大的理论意义或实用价值；论文具有创造性，研究成果对学科发展、经济建设、科技进步与社会发展具有明显的贡献;能够表明作者已具有较强的独立从事科学研究工作的能力。学位论文应在导师指导下,由博士研究生本人独立完成。 ３、除外语类专业外,研究生学位论文一般用中文撰写。非中文撰写的学位论文,博士学位论文至少要有8000字以上的详细中文摘要,硕士学位论文至少要有３000字以上的详细中文摘要。详细中文摘要作为论文附录。 二、学位论文的内容要求 学位论文的内容一般包括十三个部分，依次为封面、中文扉页、英文扉页、论文原创性声明和使用授权说明、摘要、Abstract、关键词（中英文）、目录、正文、参考文献、附录、攻读学位期间发表的学术论文、致谢。各部分具体要求如下: １、封面 采用研究生院统一制定的格式，包含分类号、密级、UＤＣ、编号、论文题目、学位申请人姓名、申请学位学生类别、申请学位学科专业、指导教师姓名。具体样式见附一。 分类号:暂空 密级:非涉密(公开)论文不需标注密级,涉密论文须标注论文的密级。 ＵDC：暂空。 编号:暂空。 论文题目:能概括整个学位论文的中心内容,简明、扼要。论文题目一般不超过2５个字，必要时可加副标题(在题目下一行以“——”打头，居中）。
浙江大学生物化学(乙)第1次
您的本次作业分数为：100分单选题2.生成酮体和胆固醇都需要的酶是（）。 A HMG-CoA 合成酶 B HMG-CoA还原酶 C HMG-CoA裂解酶 D 乙酰乙酰硫激酶 E 转硫酶正确答案:A 单选题 3.乳糖操纵子的调节水平在（）。 A 复制 B 转录 C 转录后 D 翻译 E 翻译后正确答案:B 单选题 4.变构效应物对酶结合的部位是（）。 A 活性中心与底物结合的部位 B 活性中心的催化基团 C 酶的-SH基 D 活性中心以外的特殊部位 E 活性中心以外的任何部位正确答案:D 单选题 5.1分子葡萄糖经糖酵解分解为2分子乳酸时，其底物水平磷酸化次数为（）。 A 1 B 2 C 3 D 4 E 5 正确答案:D 单选题 6.酶的辅基具有下述性质（）。 A 是一种结合蛋白 B 与酶蛋白结合比较疏松 C 由活性中心的若干氨基酸残基组成 D 决定酶的专一性 E 与酶蛋白亲和力较大，一般不能用透析等物理方法彼此分开正确答案:E 单选题 7.体内转运一碳单位的载体是（）。 A 生物素 B 磷酸吡哆醛
C 四氢叶酸 D 二氢叶酸 E CoA 正确答案:C 单选题 8.原核生物转录的终止因子是（）。 A α B ρ C β D σ E Γ 正确答案:B 单选题 10.下列哪一物质含有高能键？（） A 6-磷酸葡萄糖 B 1,6-二磷酸果糖 C 1,3-二磷酸甘油酸 D 烯醇式丙酮酸 E 乳酸正确答案:C 单选题 12.肝脏不能氧化利用酮体是由于缺乏（）。 A HMGCoA合成酶 B HMGCoA裂解酶 C HMGCoA还原酶 D 琥珀酰CoA转硫酶 E 乙酰乙酰CoA硫解酶正确答案:D 单选题 14.下列关于遗传密码的基本特点，哪一点是错误的？（） A 密码无标点 B 一种氨基酸只有一种遗传密码 C 有终止密码和起始密码 D 密码专一性主要由头两个碱基决定 E 病毒、原核细胞或真核细胞都利用同一套遗传密码正确答案:B 单选题 16.三羧酸循环的第一个产物是（）。 A 乙酰CoA B 草酰乙酸 C 柠檬酸 D 苹果酸
大学物理实验课后答案
（1）利用f=(D+d)(D-d)/4D 测量凸透镜焦距有什么优点？ 答这种方法可以避免透镜光心位置的不确定而带来的测量物距和像距的误差。 （2）为什么在本实验中利用1/u+1/v=1/f 测焦距时，测量u和v都用毫米刻度的米尺就可以满足要求？设透镜由于色差和非近轴光线引起的误差是1％。 答设物距为20cm，毫米刻度尺带来的最大误差为0.5mm，其相对误差为 0.25％，故没必要用更高精度的仪器。 （3）如果测得多组u，v值，然后以u+v为纵轴，以uv为横轴，作出实验的曲线属于什么类型，如何利用曲线求出透镜的焦距f。 答直线；1/f为直线的斜率。 （4）试证：在位移法中，为什么物屏与像屏的间距D要略大于4f？ 由f=(D+d)(D-d)/4D → D2-4Df=d2→ D(D-4f)=d2 因为d>0 and D>0 故D>4f 1.避免测量u、ν的值时，难于找准透镜光心位置所造成的误差。 2.因为实验中，侧的值u、ν、f都相对较大，为十几厘米到几十厘米左右，而误差为1%，即一毫米到几毫米之间，所以可以满足要求。 3.曲线为曲线型曲线。透镜的焦距为基斜率的倒数。 ①当缝宽增加一倍时,衍射光样的光强和条纹宽度将会怎样变化?如缝宽减半,又怎样改变? 答: a增大一倍时, 光强度↑；由a=Lλ/b ，b减小一半 a减小一半时, 光强度↓；由a=Lλ/b ，b增大一倍。 ②激光输出的光强如有变动,对单缝衍射图象和光强分布曲线有无影响?有何影响? 答:由b=Lλ/a.无论光强如何变化,只要缝宽不变,L不变,则衍射图象的光强分布曲线不变 (条纹间距b不变)；整体光强度↑或者↓。 ③用实验中所应用的方法是否可测量细丝直径？其原理和方法如何？ 答：可以，原理和方法与测单狭缝同。 ④本实验中，λ=632。8nm,缝宽约为5*10^-3㎝,屏距L为50㎝。试验证： 是否满足夫朗和费衍射条件？ 答：依题意： Lλ=（50*10^-2）*（632.8*10^-9）=3.164*10^-7 a^2/8=(5*10^-5)^2/8=3.1*10^-10 所以Lλ< 生物化学（丙）期中试卷 一．判断题 1.1分子的NADH+H+经呼吸链氧化可产生 2.5分子ATP。 2.蛋白质变性的本质是蛋白质分子的高级结构被破坏，一级结构则保持完整。 3.琥珀酸脱氢酶和NADH脱氢酶的辅助因子都是FAD。 4.磺胺药可使乙酰胆碱酯酶的Km上升，Vmax不变。 5.ATP的主要功能是为机体提供能量和提供活性磷酸基团。 6.糖异生是指由丙酮酸、琥珀酸CoA、6-磷酸果糖、苹果酸等物质转变为葡萄糖的过程。 7.蛋白质三级结构的稳定力包括氢键、盐键、疏水相互作用、范德华力、二硫键、配位键 等次级键。 8.同源蛋白质的种属差异性说明一级结构的局部改变并不会影响蛋白质的功能。 9.同工酶是指功能相同，但结构和性质不同的一类酶。 10.限制性内切酶是指在一特殊序列处将DNA的两条链同时切断的一类酶。 11.ATP是磷酸果糖激酶I的底物，因此对该酶的活性起别构激活作用。 12.反馈抑制作用是指反应的产物对催化反应的酶的抑制作用。 13.硫辛酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸和辅酶A都可以作为酰基的载体起传递作用。 14.酶催化高效性的机理是通过酸碱催化、温度效应、共价催化等因素降低了反应的活化能。 15.蛋白质的基本化学键是肽键、核酸的基本化学键是3’,5’-磷酸二酯键。 二．单选题 1.根据酶催化反应的性质，延胡索酸酶属于： (1)水解酶类(2)合成酶类(3)裂合酶类(4)转移酶类 2.当[S]=2Km时，V的值是： (1)2Vmax(2)2/3Vmax(3)1/3Vmax(4)1/2Vmax 3.下列酶催化的反应无CO2参与的是： (1)6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 (2)苹果酸酶 (3)3-磷酸甘油醛脱氢酶 (4)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 4.1分子的F1，6-2P被彻底氧化分解为CO2和H2O可产生的高能化合物分子数为（通过 α-磷酸甘油穿梭）： (1)32(2)30(3)34(4)28 5.在2,4-二硝基苯存在下一分子FADH2通过呼吸链可产生的ATP分子数是： (1)1(2)0(3)1.5(4)2.5 6.DNA的双螺旋结构中，主要的稳定力是： (1)氢键 (2)疏水相互作用 (3)范德华力 (4)离子键 7.下列代谢途径既不发生在细胞液也不发生在线粒体中的是： (1)EMP途径(2)TCA途径(3)HMP途径(4)乙醛酸循环 8.蛋白质的特征吸收波长是：(1)260nm(2)280nm(3)340nm(4)500nm 9.下列代谢途径中能为机体提供NADPH+H+的代谢途径是： (1)糖酵解途径(2)乙醛酸循环途径(3)磷酸戊糖途径(4)呼吸链 10.在酶的活化和去活化中，磷酸化和去磷酸化常发生在那个氨基酸残基： 大学物理实验答案 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】 实验一 物体密度的测定 【预习题】 1．简述游标卡尺、螺旋测微器的测量原理及使用时的注意事项。 答：（1）游标卡尺的测量原理及使用时的注意事项： 游标卡尺是一种利用游标提高精度的长度测量仪器，它由主尺和游标组成。设主 尺上的刻度间距为y ，游标上的刻度间距为x ，x 比y 略小一点。一般游标上的n 个刻度间距等于主尺上(n -1)个刻度间距，即y n nx )1(-=。由此可知，游标上的刻度间距与主尺上刻度间距相差n 1,这就是游标的精度。 教材P33图1-2所示的游标卡尺精度为 mm 501,即主尺上49mm 与游标上50格同长，如教材图1-3所示。这样，游标上50格比主尺上50格（50mm ）少一格（1mm ），即游标上每格长度比主尺每格少1÷50 = 0.02(mm)， 所以该游标卡尺的精度为0.02mm 。 使用游标卡尺时应注意：①一手拿待测物体，一手持主尺，将物体轻轻卡住，才 可读数。②注意保护量爪不被磨损，决不允许被量物体在量爪中挪动。③游标卡尺的外量爪用来测量厚度或外径，内量爪用来测量内径，深度尺用来测量槽或筒的深度，紧固螺丝用来固定读数。 （2）螺旋测微器的测量原理及使用时的注意事项： 螺旋测微器又称千分尺，它是把测微螺杆的角位移转变为直线位移来测量微小长 度的长度测量仪器。螺旋测微器主要由固定套筒、测量轴、活动套筒(即微分筒)组成。 如教材P24图1-4所示，固定套管D上套有一个活动套筒C(微分筒)，两者由高精度螺纹紧密咬合，活动套筒与测量轴A相联，转动活动套筒可带动测量轴伸出与缩进，活动套筒转动一周( 360)，测量轴伸出或缩进1个螺距。因此，可根据活动套筒转动的角度求得测量轴移动的距离。对于螺距是0.5mm螺旋测微器，活动套筒C的周界被等分为50格，故活动套筒转动1 格，测量轴相应地移动0.5/50=0.01mm,再加上估读，其测量精度可达到0.001 mm。 使用螺旋测微器时应注意：①测量轴向砧台靠近快夹住待测物时，必须使用棘轮而不能直接转动活动套筒，听到“咯、咯”即表示已经夹住待测物体，棘轮在空转，这时应停止转动棘轮，进行读数，不要将被测物拉出，以免磨损砧台和测量轴。②应作零点校正。 2．为什么胶片长度可只测量一次？ 答：单次测量时大体有三种情况：（1）仪器精度较低，偶然误差很小，多次测量读数相同，不必多次测量。（2）对测量的准确程度要求不高，只测一次就够了。（3）因测量条件的限制，不可能多次重复测量。本实验由对胶片长度的测量属于情况（1），所以只测量1次。 实验报告 课程名称： 生物化学实验（丙） 指导老师： 方祥年 成绩：__________________ 实验名称： 蔗糖酶的提取 同组学生姓名： 金宇尊、鲍其琛 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 六、实验数据记录和处理 七、实验结果与分析（必填） 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法； 2、巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 1、实验内容： 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理： ①酵母细胞破碎 细胞破碎的常用方法 液体剪切法固体剪切法压力和研磨 物理法、化学渗透法、酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取出来。 ②蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉10g/组(3～4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇(-20℃），20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）；研砵（每组一套）；50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）；高速冷冻离心机；恒温水浴箱（50℃）；量筒（50ml）、微量移液枪（1000ul)及枪头或移液管（1ml)、玻棒、滴管等;1.5ml离心管（留样品Ⅰ、Ⅱ用）及离心管架；制冰机；－20℃冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10g+约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨(干磨)：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：量取总体积40 ml的20mmol/L Tris-HCl pH7.3 缓冲液，分2次加研磨10min， 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后(托盘天平上)，离心10min （条件：4℃、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上清液并量出体积V1（样品I），另留1ml上清液（样品I ）放置－20℃冰箱保存用于蔗糖酶蛋白含量测定、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I），迅速放入50℃恒温水浴，保温30min， 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min。 （条件：4℃，12000r/min） ④收集+测量：收集上清液并量出体积V2（样品Ⅱ），另留1ml上清液（样品Ⅱ）放置－20℃冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测定、测定蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上清液加入相同体积的－20℃的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀， 一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP+生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异同 3 请对中心法则加以阐述 4 凝胶过滤是分离蛋白质混合物最有效的方法之一,请说明其工作原理并简述用该法分离蛋白质的实验操作步骤 The Short-Term Results Report By Individuals Or Institutions At Regular Or Irregular Times, Including Analysis, Synthesis, Innovation, Etc., Will Eventually Achieve Good Planning For The Future. 编订：XXXXXXXX 20XX年XX月XX日 大物实验报告简易版 大物实验报告简易版 温馨提示：本报告文件应用在个人或机构组织在定时或不定时情况下进行的近期成果汇报，表达方式以叙述、说明为主，内容包含分析，综合，新意，重点等，最终实现对未来的良好规划。文档下载完成后可以直接编辑，请根据自己的需求进行套用。 【实验目的】 1、了解示波器的基本结构和工作原理，学 会正确使用示波器。 2、掌握用示波器观察各 种电信号波形、测量电压和频率的方法。 3、掌握观察利萨如图形的方法，并能用利 萨如图形测量未知正弦信号的频率。 【实验仪器】 固纬GOS-620型双踪示波器一台，GFG-809 型信号发生器两台，连线若干。 【实验原理】 示波器是利用示波管内电子束在电场或磁 场中的偏转，显示电压信号随时间变化波形的 一种电子观测仪器。在各行各业与各个研究领域都有着广泛的应用。其基本结构与工作原理如下 1、示波器的基本结构与显示波形的基本原理 本次实验使用的是台湾固纬公司生产的通用双踪示波器。基本结构大致可分为示波管(CRT)、扫描同步系统、放大与衰减系统、电源系统四个部分。“示波管(CRT)”是示波器的核心部件如图1所示的。可细分为电子枪，偏转系统和荧光屏三部分。 1)电子枪 电子枪包括灯丝F，阴极K，控制栅极G，第一阳极A1，第二阳极A2等。阴极被灯丝加热后，可沿轴向发射电子。并在荧光屏上显现一 浙江大学2001年攻读硕士学位研究生入学考试题 考试科目:生物化学,编号555 注意:答题必须写在答题纸上,写在试卷或草稿纸上均无效 一是非题1/30 1 酶反应的专一性取决于其辅助因子的结构 2 肽酰转移酶在蛋白质合成中催化肽键的生成和酯键的水解 3 E.coli 连接酶摧化两条游离单链DNA分子形成磷酸二酯键 4 通过柠檬酸途径将乙酰辅酶A转移至胞液中,同时可使NADH上的氢传递给NADP 生成NADPH 5 亮氨酸的疏水性比缬氨酸强 6 必需氨基酸是指合成蛋白质必不可少的一些氨基酸 7 脯氨酸是α螺旋破坏者 8 维系蛋白质三级结构最重要的作用力是氢键 9 在DNA变性过程中总是G-C对丰富区先解链 10 真核细胞中DNA只存在于细胞核中 11 DNA双螺旋的两条链方向一定是相反的 12 酶影响其催化反应的平衡 13 酶促反应的米氏常数与催化的底物无关 14 维生素E是一种天然的抗氧化剂 15 维生素B1的辅酶形式是TPP 16 ATP是体内能量的储存形式 17 糖酵解过程无需氧气的参与 18 胆固醇是生物膜的主要成分,可调节生物膜的流动性 19 蛋白质的生理价值主要取决于必需氨基酸的种类,数量和比例 20 磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶起作用 21 DNA复制时,后滞链需多个引物 22 绝缘子和增强子一样都属于顺式作用元件 23 PCR是包括变性,复性和延伸三个步骤的循环反应 24 Sanger曾两获诺贝尔奖 25 核糖体上有三个与tRNA有关的位点:A位点,P位点,E位点 26 生长激素释放抑制因子是一个14肽 27 脂肪酸合成酶催化的反应是脂肪酸-β氧化反应的逆反应 28 镰刀型贫血症患者血红蛋白与正常人的血红蛋白在氨基酸组成上只有2个残基有差别 29 地球上所有生物中存在的蛋白质和核酸的种类总数都超过1亿种 30 中国科学家在今年完成了人类基因组1%的测序任务 二写出下列物质的分子结构式1/6 1 Thr 2 D-核糖 3 A 4 GSH 5 尼克酰胺 6 丙酮酸 三名词解释4/24 1 反密码子 2 操纵基因 3 多肽核酸( peptide nucleic acid ) 4 折叠酶 5 共价调节 6 Humen Genome Project 四综合题10/40 1 试表述Glu经脱氨基,有氧氧化等途径彻底分解成NH3 , CO2, 和H2O 时的代谢路线,要求用箭头表示所经过的主要中间产物.计算1摩尔Glu共可产生多少摩尔的NH3,CO2,ATP? 2 以血红蛋白为例说明蛋白质四级结构的含义,比较血红蛋白与肌红蛋白结构和功能的异 全日制教育硕士专业学位研究生培养方案 一、培养目标 培养掌握现代教育理念、具有较强的教育教学实践和研究能力的高素质的中小学教师。具体要求为： （一）拥护中国共产党领导，热爱教育事业，具有良好的道德品质，遵纪守法，积极进取，勇于创新。 （二）具有良好的学识修养和扎实的专业基础，了解学科前沿和发展趋势。（三）具有较强的教育实践能力，能胜任相关的教育教学工作，在现代教育理论指导下运用所学理论和方法，熟练使用现代教育技术，解决教育教学中的实际问题；能理论结合实践，发挥自身优势，开展创造性的教育教学工作。 （四）熟悉基础教育课程改革，掌握基础教育课程改革的新理念、新内容和新方法。 （五）能运用一种外国语阅读本专业的外文文献资料。 二、招生对象 具有国民教育序列大学本科学历（或本科同等学力）人员。 三、学习方式和年限 采用全日制学习方式，学习年限一般为2年。 四、课程设置 课程设置要体现理论与实践相结合的原则，分为学位基础课程，专业必修课程，专业选修课程，实践教学四个模块。总学分不少于36学分。 （二）专业必修课（10学分） （三）专业选修课（6学分） （四）实践教学（8学分） 实践教学实践原则上不少于1年。实践教学包括教育实习、教育见习、微格教学、教育调查、课例分析、班级与课堂管理实务等实践形式，其中到中小学进 行实践活动的时间不少于半年（创造条件，尽可能采取顶岗实习的方式）。其中：教育实习：6学分，安排在第3学期进行。 教育见习、微格教学、课例分析：1学分，结合相关课程的学习进行。 教育调查、班级与课堂管理等： 1学分，结合相关课程进行。 五、教学方式 要重视理论与实践相结合，采用课堂参与、小组研讨、案例教学、合作学习、模拟教学等方式。应在中小学建立稳定的教育实践基地，做好教育实践活动的组织于实施。成立导师组负责研究生的指导，并在中小学聘任有经验的高级教师担任指导教师，实行双导师制。 六、学位论文与学位授予 （一）学位论文选题应紧密联系基础教育实践，来源于中小学教育教学中的实际问题。论文形式可以多样化，如调研报告、案例分析、校本课程开发、教材分析、教学案例设计等。论文字数不少于1.5万字。 （二）论文评阅人和答辩委员会成员中，应该至少有一名具有高级教师职称的中小学教师或教学研究人员。 （三）修满规定学分，并通过论文答辩者，经学位授予单位学位评定委员会审核，授予教育硕士专业学位，同时获得硕士研究生毕业证书。 七、其他 非师范类专业毕业生入学后，应至少补修3门教师教育课程（如教育学，心理学和学科教学论），不计学分。跨专业毕业生入学后，至少补修2门学科专业基础课，不计学分。 非师范及跨专业生补修课程 实验十三 拉伸法测金属丝的扬氏弹性摸量 【预习题】 1．如何根据几何光学的原理来调节望远镜、光杠杆和标尺之间的位置关系？如何调节望远镜？ 答：（1）根据光的反射定律分两步调节望远镜、光杠杆和标尺之间的位置关系。第一步：调节来自标尺的入射光线和经光杠杆镜面的反射光线所构成的平面大致水平。具体做法如下：①用目测法调节望远镜和光杠杆大致等高。②用目测法调节望远镜下的高低调节螺钉，使望远镜大致水平；调节光杠杆镜面的仰俯使光杠杆镜面大致铅直；调节标尺的位置，使其大致铅直；调节望远镜上方的瞄准系统使望远镜的光轴垂直光杠杆镜面。第二步：调节入射角（来自标尺的入射光线与光杠杆镜面法线间的夹角）和反射角（经光杠杆镜面反射进入望远镜的反射光与光杠杆镜面法线间的夹角）大致相等。具体做法如下：沿望远镜筒方向观察光杠杆镜面，在镜面中若看到标尺的像和观察者的眼睛，则入射角与反射角大致相等。如果看不到标尺的像和观察者的眼睛，可微调望远镜标尺组的左右位置，使来自标尺的入射光线经光杠杆镜面反射后，其反射光线能射入望远镜内。 （2）望远镜的调节：首先调节目镜看清十字叉丝，然后物镜对标尺的像（光杠杆面镜后面2D 处）调焦，直至在目镜中看到标尺清晰的像。 2．在砝码盘上加载时为什么采用正反向测量取平均值的办法？ 答：因为金属丝弹性形变有滞后效应，从而带来系统误差。 【思考题】 1．光杠杆有什么优点？怎样提高光杠杆测量微小长度变化的灵敏度？ 答：（1）直观 、简便、精度高。 （2）因为 D x b L 2?=?，即b D L x 2=??，所以要提高光杠杆测量微小长度变化的灵敏度L x ??，应尽可能减小光杠杆长度b （光杠杆后支点到两个前支点连线的垂直距离），或适当增大D （光杠杆小镜子到标尺的距离为D ）。 2．如果实验中操作无误，得到的数据前一两个偏大，这可能是什么原因，如何避免？ 答：可能是因为金属丝有弯曲。避免的方法是先加一两个发码将金属丝的弯曲拉直。 3．如何避免测量过程中标尺读数超出望远镜范围？ —1— 华师〔2014〕80号 各学院、各部处、各单位： 《华南师范大学学位授予工作细则（2014年修订）》经学校学位评定委员会审议通过，现印发给你们，请遵照执行。 华南师范大学 2014年6月5日 —2— 第一章 总 则 第一条 依据《中华人民共和国学位条例》和《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》以及国务院学位委员会有关文件精神，结合学校具体情况，制定本工作细则。 第二条 学校授予学士、硕士、博士三级学位，按哲学、经济学、法学、教育学、文学、历史学、理学、工学、农学、医学、管理学和艺术学等学科门类分别授予；专业学位按国务院学位委员会批准的类别授予。 第三条 凡遵守中华人民共和国宪法和法律，遵守学校相关规章制度，品行端正，遵守学术道德规范，具有一定学术水平者，可根据所学专业的要求，按本细则规定申请相应学位。申请人不得以同一篇论文向国内两个学位授予单位申请学位。 第二章 组织机构 第四条 学校学位评定委员会和学位评定分委员会机构设置和职能按《华南师范大学学位评定委员会工作条例（试行）》执行。 第三章学士学位 第五条申请学士学位的条件 （一）普通全日制本科毕业生及来华留学本科毕业生 符合本细则第三条规定的本科学生，完成教学计划的各项要求，经审核准予毕业，且符合以下条件者，可提出学士学位授予申请： 1.普通全日制本科毕业生平均学分绩点达到1.5及以上；来华留学汉语言专业本科毕业生中国汉语水平考试（简称HSK）须达到八级（或新HSK5级A等）水平； 2.在校学习期间无考试作弊； 3.在校学习期间未受过记过及以上处分；或受警告及严重警告处分累计不多于1次。 （二）成人高等教育本科毕业生,参照《华南师范大学授予成人高等教育本科毕业生学士学位工作细则》执行。 （三）网络高等教育本科毕业生,参照《华南师范大学授予网络高等教育本科毕业生学士学位工作细则（试行）》执行。 第六条学士学位授予程序 （一）符合第五条规定的本科毕业生，应在规定时间内向学院提交学士学位授予申请，由学院审核其申请材料并经学位评定分委员会表决通过后，提交学校学位评定委员会审定。 （二）学士学位的审定与授予，参照第四章第十二、十三条相关规定执行。 —3— 专业：农业资源与环境 姓名：李佳怡 ____________ 学号：_J6 _______________ 日期： __________________ 地点：生物实验中心310课程名称：生物化学实验（丙） 实验名称：蔗糖酶的提取 一、实验目的和要求（必填） 三、实验材料与试剂（必填） 五、操作方法和实验步骤（必填） 七、实验结果与分析（必填） .指导老师：方祥年 成绩:_ _同组学生姓名：金宇尊、鲍其琛 二、实验内容和原理（必填） 四、实验器材与仪器（必填） 六、实验数据记录和处理 八、讨论、心得 一、实验目的和要求 1、 学习掌握蔗糖酶的提取、分离纯化的基本原理和方法; 2、 巩固理论知识，学会学以致用并发现新问题。 二、实验内容和原理 订 1、实验内容: 线 蔗糖酶的提取、分离纯化 2、实验原理: ① 酵母细胞破碎 液体剪切法―超声波法.机械搅拌法.高压匀浆法 固体剪切法一压力和研磨 非机械法——> 物理法.化学渗透法.酶溶 本实验采用研磨的方法。通过固体剪切法（研磨）将酵母细胞破碎，把蔗糖酶从酵母细胞中提取岀 来。 ② 蔗糖酶的初步分离纯化 蛋白酶常用的初步分离纯化方法有：盐析、选择性变性、有机溶剂沉淀等。 本实验采用选择性变性（加热）、有机溶剂（乙醇）沉淀等方法对蔗糖酶进行初步的提纯以及收集 样品。 由于一般酶蛋白在常温下分离纯化过程中易变性失活，为了能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯 操作中要始终保持酶的活性，如在低温下操作等，这样才能得到较好地分离提纯效果。 实验报告 细 胞 破碎 的 常 用 方 法 三、实验材料与试剂 1、实验材料 市售干酵母粉10g/组（3?4人） 2、实验试剂 石英砂，95%乙醇（-20*0,20mmol/L Tris-HCl 缓冲液。 四、实验器材与仪器 电子天平（称量干酵母粉）：研碎（每组一套）：50ml高速离心管（4支/组、4孔50ml离心管架一个/组）；托盘天平（离心管平衡用）：高速冷冻离心机：恒温水浴箱（50°C）；量筒（50ml）、微量移液枪（lOOOu 1）及枪头或移液管（1ml）、玻棒、滴管等;离心管（留样品I、II用）及离心管架：制冰机：一20°C冰箱。 五、操作方法和实验步骤 1、酵母细胞破粹（干磨法） ①称量：称取市售干酵母粉10計约3-5 g石英砂放入研钵 ②研磨（干磨）：至尽可能成细粉末状（约15min） ③加液+研磨：呈:取总体积40 ml的20mmol几Tris-HCl缓冲液，分2次加研磨lOmin, 使呈糊状液体； ④离心：将糊状液体转移到2支50ml离心管中，两支离心管平衡后（托盘天平上），离心lOmin （条件:4°C、12000r/min） ⑤收集+测量：收集上淸液并量出体积VI （样品I）,另留1ml上淸液（样品I ）放置一20°C冰箱保存 用于蔗糖酶蛋白含量测眾、蔗糖酶活力测定和SDS-PAGE分析 2、热处理 ①水浴热处理：将上步抽提液（样品I）,迅速放入50°C恒温水浴，保温30min, 并每隔5min用玻璃棒温和搅拌提取液。 ②冰浴冷却：保温后迅速用冰浴冷却5min ③离心：将热处理后的样品I转移至两支50ml离心管中，平衡后，离心10min a （条件：4°C, 12000r/min） ④收集+测量：收集上淸液并量出体积V2 （样品II）,另留1ml上淸液（样品II ）放宜一20°C冰箱保存（用于蔗糖酶蛋白含量测左、测左蔗糖酶活力和SDS-PAGE分析。 3、有机溶剂（乙醇）沉淀 ①冰浴：将热处理后的上淸液加入相同体枳的一20°C的95%乙醇，冰浴中温和搅动混匀，浙大生化(丙)课堂期中试卷
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