漆酶高产菌株的筛选实验方案

漆酶简介

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶(Laccase, P-diphenol oxidase, EC.1.10.3.2)，广泛分布于高等动植物、昆虫、真菌分泌物和少量细菌中，其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌。

漆酶为含铜的糖蛋白，约由500 个氨基酸组成，多为单一多肽，个别为四聚体。糖配基占整个分子的10%～45%，糖组成包括氨基己糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等。由于分子中糖基的差异，漆酶的分子量随来源不同会有很大差异，甚至来源相同的漆酶分子量也会不同。通过对漆酶蛋白质晶体结构的研究发现,漆酶具有3个铜离子结合位点,共结合4个铜离子,且这4个铜离子处于漆酶的活性部位,在催化氧化反应中起决定作用，如果除去铜离子,漆酶将失去催化作用。

漆酶具有较强的氧化还原能力，能催化多酚、多氨基苯等物质的氧化，使分子氧直接还原成水，将酚类和芳胺类化合物还原成醌类物质，没有副产物的生成。由于漆酶具有特殊的催化性能和广泛的作用底物，使得漆酶具有广泛的应用价值。漆酶应用主要集中在制浆造纸，特别是纸浆的生物漂白，环境保护，木质纤维素降解等方面。造纸工业方面，由于漆酶能高效的降解木质素及与木质素具有相似结构的物质，避免造纸工序中所使用的化学物质影响环境。环境保护方面，漆酶能有效的除去工业废水、化学农药当中的毒物酚、芳胺、单宁和酚醛化合物，生物消除有毒化合物，使得漆酶在废水处理等环保事业有广阔的前景。

分光光度法测定漆酶活力最常用的底物是2,2’-连氮一双(3-乙基苯并唆毗咯琳-6-磺酸)(ABTS)。

实验一高产漆酶菌株酶活测定

1 主要试剂的配制

（1） 0.2 mmol/L pH 4.5柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液

A 液：0.2 mmol/L 柠檬酸溶液：称取柠檬酸21.014 g ，加入蒸馏水溶解定容

至500mL 。

B 液：0.2 mmol/L 柠檬酸钠溶液：称取柠檬酸钠29.412 g ，加入蒸馏水溶解

定容至500mL 。

A 液和

B 液混合，搅匀，于pH 计上调节至pH4.5。

（2） 0.5 mmol/L 的ABTS 溶液

将一片ABTS 片剂（142 mg /片）用0.2 mmol/L pH 4.5柠檬酸－柠檬酸钠缓

冲溶液溶解定容至250 mL ，配成1.0308 mmol/L 的ABTS 母液；再取48.5mL 的

ABTS 母液，用0.2 mmol/L pH 4.5柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液定容至100 mL 。

2 实验方法

漆酶活性的测定方法：

① 从三角瓶中取出适量酶液，离心取上清得到粗酶液，放于样品管中。空

白管加入1ml 液体的PDA 培养基。

② 每支离心管中加入5倍的柠檬酸－柠檬酸钠溶液稀释。

③ 将样品管，空白管，0.5mmol/LABTS 放在恒温水浴锅中，30℃预热10min 。

④ 加入2mL 预热好的酶液和0.5mmol/LABTS 溶液达到3mL 的反应液，于1cm

比色皿中，启动反应5分钟，测定420nm 下吸光值随时间的变化值，每分钟读一

次数。

在上述条件下，取吸光值变化的线性部分，定义每分钟转化1umol 的底物所

需的酶量为一个酶活力单位，用U/mL 表示。运用以下公式计算酶活。

漆酶酶活力U/mL =酶液稀释倍数???????-62110

V t εV OD 式中： ε----ABTS 在420nm 下吸光系数，为114106.3--??cm M ；

t?----1min；

?----1min内，吸光度OD的变化值；

V1----酶反应中，反应液的总体积，3mL；

V2 ----酶反应中，酶液的体积，2mL。

实验二高产漆酶菌株的酶学特性

1 主要试剂的配制

（1）0.2 mmol/L pH2.0—8.0的柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液

A液和B液混合，搅匀，于pH计上分别调节至pH2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0。

（2）0.1—0.5 mmol/L的ABTS溶液

将一片ABTS片剂（142 mg/片）用0.2 mmol/L pH 4.5柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液溶解定容至250 mL，配成1.0308 mmol/L的ABTS母液；再取48.5mL的ABTS母液，用0.2 mmol/L pH 4.5柠檬酸－柠檬酸钠缓冲溶液分别配制100 mL 的0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L、0.4 mmol/L、0.5 mmol/L的ABTS。

2 方法

2.1 米氏常数（Km值）的测定

在pH3.5的条件下，配制0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.3 mmol/L、0.4 mmol/L、0.5 mmol/L不同ABTS底物浓度，30 ℃反应，测定漆酶反应的初速度，求出二者的倒数，以1/V对1/[S]作图，按照双倒数法（Lineweave－Burk法）作图，得到斜率为Km/V的直线，由此得到米氏常数Km值。

2.2 漆酶的最适反应pH和pH稳定性测定

将漆酶分别加入到pH 2.0－pH 8.0缓冲液中，在30 ℃下，测定漆酶活性，检测漆酶的最适反应pH。另外，将漆酶分别加入pH 2.0－pH 8.0缓冲液中，放置1h后，在30 ℃，最适反应pH条件下，测定漆酶活性，以开始时漆酶活力为对照，计算漆酶的相对活力，得出漆酶的pH稳定性。

2.3 漆酶的最适反应温度和热稳定性测定

在漆酶最适反应pH条件下，分别在不同温度（20 ℃－80 ℃）下，测定漆

酶活性，得出漆酶的最适反应温度。将漆酶在pH 3.5环境中，分别在不同温度（20 ℃－80 ℃）下保温1 h，在最适反应温度、最适反应pH条件下测定漆酶活性，以保温前漆酶活力为对照，计算漆酶的相对活力，得出漆酶的热稳定性。2.4 表面活性剂对漆酶活性的影响

将漆酶置于含有1 mmol/L表面活性剂（Tris、EDTA、Tween80），pH 8.0缓冲液中，测定漆酶活性，以不添加表面活性剂漆酶活力为对照，计算漆酶的相对活力，测定表面活性剂对漆酶活性的影响。

实验三漆酶的固定化

一、实验原理

壳聚糖是一种生物相溶性好、可生物降解、无毒易得的天然功能高分子材料，被广泛用来作为固定化酶的载体。壳聚糖分子中D－葡胺糖的-NH2可与双功能试剂戊二醛的一个-CHO缩合，戊二醛的另一个-CHO与酶的游离氨基缩合，从而壳聚糖－戊二醛－酶结构，即固定化酶。本实验采用以戊二醛为双功能试剂的载体交联法固定化漆酶。

二、材料、试剂和仪器

1.材料：壳聚糖，漆酶

2.试剂：1％的冰醋酸溶液、甲醛（37％）、1mol/L NaOH、0.8％的戊二醛（用

磷酸缓冲液配制）、0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.2）、2 mol/L NaOH

1%冰醋酸溶液；2mol/L的NaOH溶液

37%的甲醛溶液；0.1mol/L pH7.2的磷酸缓冲液；

0.8%的戊二醛溶液；0.1mol/L pH7.5的PBS磷酸缓冲液（内含0.5mol/L 的NaCL）

0.1mol/L的磷酸缓冲液（pH7.2）：Na2HPO4?12H2O，25.79g；NaH2PO4?12H2O，

4.37g，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。

0.1mol/L的PBS磷酸缓冲液（pH7.5）：Na2HPO4?12H2O，30.08g；NaH2PO4

?12H2O，4.37g，NaCL，29.22g用蒸馏水溶解并定容至1000ml。

0.8%的戊二醛溶液：将25%的戊二醛用磷酸缓冲液配制而成，现配现用。

三、实验步骤

1.壳聚糖凝胶颗粒的制备

称取0.5g壳聚糖充分溶解于35mL1％的冰醋酸溶液中，加入3mL甲醛（37％）迅速混匀，在40℃水浴中静置保温60min，得到透明的凝胶，加少量蒸馏水将凝胶挤压破碎，倒出并在研钵中进一步破碎成适当大小的凝胶颗粒，接着在烧杯中使其悬浮于100mL蒸馏水中，不断地用2 mol/L的NaOH将悬浮液的pH值调至8.0，放置10min，然后用蒸馏水在抽滤漏斗上洗涤凝胶颗粒数次，抽去多余水分，备用。

2.壳聚糖凝胶颗粒的活化

取上述凝胶颗粒10g，加入40mL 0.8％的戊二醛，室温放置60min，用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.2）洗涤凝胶颗粒3－4次，以除去多余的戊二醛，抽滤备用。

3.酶的固定化

向上述的凝胶颗粒中加入15mL漆酶酶液，4℃下放置1h，中间搅动数次，而后用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 7.2）洗涤凝胶颗粒3－4次，以除去未固定的酶，即得固定化酶。

4. 酶活力的测定

（1）溶液酶活力的测定

（2）残留酶活力的测定

（3）固定化酶活力的测定

四、数据处理及计算

固定化酶总活力数

活力回收（％）＝×100％

溶液酶总活力数

固定化酶总活力数

相对活力（％）＝×100％

溶液酶总活力数－残留酶活力数

实验四漆酶及固定化漆酶的应用

一、漆酶对染料及果汁内酚类物质的降解

溴甲酚绿

二、染料最大吸收波长的确定

将溴甲酚绿用pH 4.5的柠檬酸缓冲液溶解，于UV－2450紫外可见分光光度计在200 nm－800 nm范围内进行扫描，确定溴甲酚绿的最大吸收波长λmax。

三、染料脱色率的确定

将溴甲酚绿用pH 4.5的柠檬酸缓冲液溶解，加入一定量的漆酶液，反应一段时间后，于最大吸收波长处测定吸光值。按照以下公式计算染料的脱色率，比较不同脱色条件对染料酶解的影响。

染料脱色率R(%)=

0 A A

×100％

其中：A0为染料在最大吸收波长处的吸光值。

A1为反应体系加入漆酶以后在最大吸收波长处的吸光值。

实验十一紫外诱变技术及抗药性突变菌株的筛选

实验十一紫外诱变技术及抗药性突变菌株的筛选 Ⅰ. 紫外诱变技术一实验目的以紫外线处理细菌细胞为例，学习微生物诱变育种的基本技术。了解紫外线对细菌细胞的作用。二实验材料和用具菌株：大肠杆菌（Escherichia coli）培养基：营养肉汤（nutrient broth）固体和液体培养基生理盐水等器皿：10ml及1ml的移液管，无菌试管，无菌培养皿，无菌三角瓶（内有无菌的玻璃珠20~40粒），无菌漏斗（内有两层擦镜纸），无菌离心管，离心机，紫外诱变箱等。三实验原理以微生物的自然变易作为基础的筛选菌种的机率并不很高。因为自发突变率小，一个基因的自发突变率仅为10-6~10-10左右。为了加大突变频率，可采用物理或化学的因素进行诱发突变。物理因素中目前使用得最方便且十分有效是UV，UV诱变一般采用15w的紫外灭菌灯，其光谱比较集中在253.7nm处，这与DNA的吸收波长一致，可引起DNA分子结构发生变化，特别是嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体，从而引起菌种的遗传特性发生变易。在生产和科研中可利用此法获得突变株。四实验内容 1、对出发菌株进行处理，制备单细胞悬液； 2、紫外线进行处理； 3、用平板菌落计数法测定致死率；

五操作步骤（一）出发菌株菌悬液的制备 1. 出发菌株移接新鲜斜面培养基，37℃培养16~24h ； 2. 将活化后的菌株接种于液体培养基，37℃ 110rpm 振荡培养过夜（约16h ），第二天，以20~30%接种量转接新鲜的营养肉汤培养基，继续培养2~4h ； 3. 取4ml 培养液与5ml 离心管中，10000rpm 离心3~5min ，弃去上清液，加4ml 无菌生理盐水，重新悬浮菌体，再离心，弃去上清，重复上述步骤用生理盐水恢复成菌悬液； 4. 将上述菌悬液倒入装有小玻璃珠的无菌三角瓶内，振荡20~30min ，以打散细胞； 5. 取诱变前的0.5ml 菌悬液进行适当稀释分离，取三个合适的稀释度倾注肉汤平板，每一梯度倾注两皿，每皿加1ml 菌液，37℃倒置培养24~36h ，进行平板菌落计数。（二）UV 诱变 1. 将紫外灯打开，预热30min ； 2. 取直径6cm 的无菌培养皿（含转子），加入菌悬液5ml ，控制细胞密度为107~108个/ml ； 3. 将待处理的培养皿置于诱变箱内的磁力搅拌仪上，静止1分钟后开启磁力搅拌仪旋纽进行搅拌，然后打开皿盖，分别处理5s 、10s 、15s 、30s 、45s ，照射完毕后先盖上皿盖，再关闭搅拌和紫外灯； 4. 取0.5ml 处理后的菌液进行适当稀释分离，取三个合适的稀释度倾注肉汤平板进行计数（避光培养）。六实验结果对平板菌落进行计数，并计算死亡率。 %100///?-=ml ml ml 照射前活菌数照射后活菌数照射前活菌数死亡率

实验室菌种的使用和管理【内容充实】

xxx食品检测中心作业指导书 1.目的规范实验室菌种的收集、使用、保管程序；确保实验室的安全。 2.范围本管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。 3.职责 3.1菌种保管员：按照本指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作。 3.2科室负责人：负责监督菌种的使用及管理。 4.管理细则本实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体；保存的菌种主要用于各类培养基、检测试剂的性能测试和质量控制。 4.1在本实验室保管的菌种名 4.1.1保留工作菌种：大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2a ATCC12022、副溶血性弧菌200904-1、金黄色葡萄球菌ATCC25923、表皮葡萄球菌ATCC12228溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、普通变形杆菌，克雷伯氏杆菌，小肠结肠炎耶森氏菌ATCC 23715 、单核增生李斯特菌ATCC19111、枯草芽胞杆菌ATCC6633b 、蜡状芽胞杆菌A TCC11778、白色念珠菌A TCC10231、酿酒酵母ATCC9763、黑曲霉菌、展青霉菌、黄曲霉菌。 4.1.2常规检测,科研分离得到的有保留价值的三类/四类菌种根据需要可继续保留；如果在食品中分离到二类/一类菌种,及时送上级单位进一步鉴定,并按规定立即销毁。本实验室不保存一类、二类菌种。 4.2 菌种的保管 4.2.1实验室菌种保存于专用的菌种室。 4.2.2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种。 4.2.3使用菌种需提出申请、经科室负责人批准后，向菌种保管员领用。 4.2.4菌种应按规定的时间定期转种，一般每转种3代做一次鉴定，如发现污染或变异应及时处理。 4.2.5保管人员工作变动时应作好交接工作。 4.3 菌种的使用和保存 4.3.1菌种的类别 4.3.1.1实验室内的标准菌种根据用途不同，分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。 ①储存菌种：以冷冻干燥保藏为主，用于菌种的长期保存，一般是从菌种保藏中心或专业实验室购买得到的标准菌株，用符号S表示。一般可保存5年。 ②传代用菌种：采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡覆盖保藏法，用于菌种的传代，用符号G 表示。甘油冷冻管保藏法一般可保存2年； ③工作菌种：保存于半固体内或琼脂斜面培养基中，作为工作用菌种，用符号W表示。一般可保存1～2个月。 4.3.1.2实验室从样品中分离得到的菌株用符号Y表示。

微生物的诱变育种

微生物的诱变育种作者：佚名来源：生物秀时间：2008-4-18 实验仪器大全实验试剂大全一、实验目的和内容目的：以紫外线诱变获得用于酱油生产的高产蛋白酶菌株为例，学习微生物诱变育种的基本操作方法。内容：1．对米曲霉(Aspergills oryzae )出发菌株进行处理，制备孢子悬液。 2．用紫外线进行诱变处理。 3．用平板透明圈法进行两次初筛。 4．用摇瓶法进行复筛及酶活性测定。二、实验材料和用具米曲霉斜面菌种；豆饼斜面培养基、酪素培养基、蒸馏水、0.5%酪蛋白；三角瓶(300mL、500mL)、试管、培养皿(9cm)、恒温摇床、恒温培养箱、紫外照射箱、磁力搅拌器、脱脂棉、无菌漏斗、玻璃珠、移液管、涂布器、酒精灯。三、操作步骤 (一)出发菌株的选择及菌悬液制备 1．出发菌株的选择可直接选用生产酱油的米曲霉菌株，或选用高产蛋白酶的米曲霉菌株。2. 菌悬液制备取出发菌株转接至豆饼斜面培养基中，30℃培养3～5d 活化。然后孢子洗至装有1mL 0.lmol/L pH6.0 的无菌磷酸缓冲液的三角瓶中(内装玻璃珠，装量以大致铺满瓶底为宜)，30℃振荡30min，用垫有脱脂棉的灭菌漏斗过滤，制成把子悬液，调其浓度为106～108 个/mL，冷冻保藏备用。 (二)诱变处理用物理方法或化学方法，所用诱变剂种类及剂量的选择可视具体情况决定，有时还可采用复合处理，可获得更好的结果。本实验学习用紫外线照射的诱变方法。 1．紫外线处理打开紫外灯(30W)预热20min。取5mL 菌悬液放在无菌的培养皿(9cm)中，同时制作5 份。逐一操作，将培养皿平放在离紫外灯30cm(垂直距离)处的磁力搅拌器上，照射l min 后打开培养皿盖，开始照射，与照射处理开始的同时打开磁力搅拌器进行搅拌，即时计算时间，照射时间分别为15 s、30 s、l min、2 min、5 min。照射后，诱变菌液在黑暗冷冻中保存1～2h 然后在红灯下稀释涂菌进行初筛。 2．稀释菌悬液按10 倍稀释至10-6，从10-5和10-6中各取出0.lmL 加入到酪素培养基平板中(每个稀释度均做3 个重复)，然后涂菌并静置，待菌液渗入培养基后倒置，于30℃恒温培养2～3d。 (三)优良菌株的筛选 1. 初筛首先观察在菌落周围出现的透明圈大小，并测量其菌落直径与透明圈直径之比，选择其比值大且菌落直径也大的菌落40～50 个，作为复筛菌株。 2．平板复筛分别倒酪素培养基平板，在每个平皿的背面用红笔划线分区，从圆心划线至周边分成8 等份，1～7 份中点种初筛菌株，第8 份点种原始菌株，作为对照。培养48h 后即可见生长，若出现明显的透明圈，即可按初筛方法检测，获得数株二次优良菌株，进大摇瓶复筛阶段。3．摇瓶复筛将初筛出的菌株，接入米曲霉复筛培养基中进行培养，其方法是，称取麦秩85g，

实验室常用菌株及特性

一、实验室常见菌株简介 Xl1-Blue菌株基因型：endA1 gyrA96(nalR) thi-1 recA1 relA1 lac glnV44 F?[Tn10 proAB+ lacIq Δ(lacZ)M15] hsdR17(rK- mK+)。特点：具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。用途：分子克隆和质粒提取。 BL21(DE3)菌株基因型：F– ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。特点：该菌株用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达。 BL21(DE3)ply菌株基因型：F- ompT gal dcm lon hsdSB(rB- mB-) λ(DE3) pLysS(cm R)。特点：该菌株带有pLysS，具有氯霉素抗性。此质粒还有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。用途：蛋白质表达 DH5α菌株基因型：F- endA1 glnV44 thi-1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK-, λ– 特点：一种常用于质粒克隆的菌株。其Φ80dlacZΔM15基因的表达产物与pUC 载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 JM109菌株基因型：endA1 glnV44 thi-1 relA1 gyrA96 recA1 mcrB+ Δ(lac-proAB) e14- [F? traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]hsdR17(rK-mK+)。特点：部分抗性缺陷，适合重复基因表达, 可用于M13克隆序列测定和蓝白斑筛选。用途：分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。 DH10B菌株基因型： F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 endA1 recA1 deoR Δ(ara,leu)7697 araD139 galU galK nupG rpsL λ- The most widely used E. coli strain for BAC cloning is DH10B 。 host for pUC and other α-complementation vectors; pBR322

02微生物实验室菌种管理规程

1、目的：规范微生物试验用菌种的管理，确保菌种的有效使用。 2、适用范围：微生物试验用菌种的管理。 3、责任者：质检科负责人、微生物试验人员、菌种管理人员 4、正文：概念 a、标准菌株：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌株。 b、标准储备菌株：由标准菌株经一次传代得到的培养物。 c、商业派生菌株：由供应商提供的所有特性与标准菌株等效的菌株。 d、工作菌株：由标准储备菌株经传代得到的培养物。

e、代：将活的微生物接种到新鲜培养基中进行培养，并希望获取新的微生物培养物。这种操作方式，新培养物对接种培养物而言就称为一代。菌种的采购和接收菌种的采购从药检所或菌种保藏中心等外单位购入菌种斜面或冻干菌种。根据工作需要对购买国内保藏中心提供的菌种斜面提前1个月填写采购申请单，冻干菌种提前2个月申请购买，国外保藏中心提供的菌种应提前3个月申请购买。菌种的接收检定菌应设专人保管，管理人员应接受过专业培训，有足够的菌种保存经验。接收菌种时，应核实菌种的名称、编号、传代代数、数量、有效期等，并调查清楚菌种的保存条件和注意事项。接收时应填写菌种接收登记表。内容包括：菌种名称、菌种保藏中心编号、传代次数、接收日期、菌种来源等。对新购入的冻干菌种在使用前应按要求对其进行生物形态确证试验和纯度鉴定，由于新购买的菌种斜面已由菌种提供单位做过生物形态确证试验和纯度鉴定，所以传代5代以内的菌种斜面不需要进行纯度鉴定。对新购入的斜面菌种应在2～8℃保存，并应在1周内转接。菌种的复苏使用人员根据需要应向菌种管理人员领取菌种，仔细核对标签上菌名、编号，并在《菌种接收及领用登记表》上记录菌名、数量、领用人、领用日期等信息。菌株解冻后不得重新冷冻和再次使用。菌种复苏应在生物安全柜内操作。常用菌种接种用培养基和培养条件表菌种的传代每株菌种应建立菌种使用及传代记录，斜面菌种应根据其特性决定传代时间间隔。

初中物理创新实验设计方案1

初中物理创新实验设计方案一、实验课题名称：惯性定律演示仪二、实验设计思路：运用惯性定律（牛顿第一定律）：物体在不受任何外力作用的时候总保持静止或匀速直线运动（物体总保持原有在运动状态直到有外力迫使它改变为止）三、实验或实验器材在教材中所处的地位与作用：该实验是八年级物理第八章第二节内容，在已经学习了牛顿第一定律的基础上，研究所有物体都具有惯性，对于学生理解、学习、运用牛顿第一定律以及惯性的知识具有相当重要的作用。可以说，这个实验是探究物体惯性的核心演示实验，一旦学生通过观察本实验仪的演示，必定会十分深刻在理解和掌握惯性在相关知识。四、实验器材：长木板、小车、弹簧、直塑料细管、漏斗、橡皮筋、细线、弹珠、铁钉五、实验原型及不足之处: 传统的实验方法是使用控制变量法，使两种物质的质量相等，吸收的热量相同，通过观察温度计上示数的变化，得出结论：温度计示数上升较快的物质，升高1℃所需的热量较少，吸收热量的能力较小（即比热容较小）。它的不足之处： ⑴水和食用油吸收相同的热量用这套实验装置有较大的误差，容易受到外界环境的影响（如风向、石棉网的初温、两个酒精等的火焰有大小等）不便于控制； ⑵通过实验得出的结论是：吸热能力的大小与温度的变化成反比，学生要多转动一下思维才能理解，结论没有改进后的直接； ⑶所需要的实验器材也比较多，不利于实验的准备与操作。 ⑷所用烧杯体积过大，与空气的接触面积过大，所以散热过多，造成实验测量误差过大。（如图）六、实验创新与改进之处： ⑴将两套装置合二为一，减少了小组实验时对器材的需要；

⑵便于控制相同时间内吸收的热量相同这个变量，误差更小； ⑶两试管与空气的接触面更小，散热较少，误差较小； ⑷将烧杯较大的吸热面改为试管底部较小的吸热点（两试管型号相同、质量相等），就保证了相同时间内吸收的热量相同 ⑸实验中，将原实验观察温度计示数变化改为观察并记录两物质升高相同温度时的时间，这样做的好处是使实验结论更直接；（如图）七、实验原理：通过控制两物质质量相等、吸收热量相同、升高相同的温度等因素，来观察手中的秒表。升高相同温度时，所用时间较长的物质吸收的热量自然多一些，单位质量吸收热量的能力更强（即比热容更大一些）。说明：完成实验时需控制的几个量 ⑴两试管型号相同、质量相等； ⑵试管中的水和食用油质量相等； ⑶试管中的水和食用油初温相同（可将两试管放入装有冷水的同一烧杯中1～2分钟）； ⑷相同时间内两试管吸收的热量相等； ⑸两试管中的液体升高相同的温度；改变的量： ⑴升高相同温度时所需要加热的时间不同； ⑵升高相同温度时所吸收的热量不同。八、实验操作步骤： ⑴将装有质量相等的水和食用油的试管插入事先准备好的同一烧杯的冷水中1～2分钟，保证两试管中液体的初温相同； ⑵将初温相同的两试管从冷水中拿出来同时放入正在加热的石棉网上，并放入温度计（同时按下秒表开始计时），观察通过热传递获得热量的两试管中温度计的变化； ⑶在温度计达到70℃时分别记下所用的时间； ⑷比较升高相同温度时所用时间的不同； ⑸得出结论：升高相同温度时，所用时间较长的物质吸收的热量较多，吸收热量的能力较强（比热容较大）。

实验十四、从样品中分离筛选某一纯的微生物菌株

实验十四从样品中分离筛选某一纯的微生物菌株命题实验：“如何从目的样品的杂菌中筛选出纯种的目的菌种”。综合性实验需在教师指导下，学生独立完成查阅资料、方案设计、采样、器材准备、培养基制作、灭菌、无菌操作、样品处理、富集培养、分离、纯化、培养、稀释、镜检、染色、菌种鉴定、结果讨论、撰写实验研究报告、讲评等工作。 1.指导思想：提高学生学科素质，适度开放实验室，给学生一定的自主支配实验内容、时间和空间的权利。在满足教学大纲的基础上，将部分经典的验证性实验整合为相对独立、体现综合性与研究性的实验内容。 2.实施过程：（1）教学内容重组及基本培训：微生物学四大基本技术，即显微技术、无菌操作技术、纯培养技术、分离技术基本涵盖了微生物实验的基本知识和基本操作技能，该部分按常规实验教学方式先进行培训。

（2）提出综合性实验命题：综合性实验命题要能培养学生灵活运用理论知识的能力。如纯化菌种、培养基制备、菌种鉴定等；独立操作能力。如：培养基制备、灭菌、分离、稀释、镜检、染色、无菌操作等；自行设计实验，撰写研究报告能力。如自学的相关知识，准备实验用品、设计实验步骤、分析实验结果等；以及初步了解科学问题的提出方式、检验、研究技术路线设计等科学研究基本方法。（3）学生组成小组与教师建立约定：实验小组按学生的兴趣自愿组合，每组3-4人，自行推举小组长。为确保实验的正常进行，需要小组长与教师共同制定学习约定，内容包括实验进度计划、人员分工、实验方案、结果要求等。（4）学生搜集相关资料并自行设计实验：学生在资料的查询基础上提出实验方案要求设计合理、步骤详尽，操作明确并有可行性探讨。要根据实验室实际条件（用具、药品、仪器等）对实验做出合理的构思。（5）学生自主实施实验及问题分析：教师时刻注意观察学生操作的准确性。一旦出现问题，教师与学生共同分析问题的原因，并及时予以解决。（6）分析实验结果，撰写报告并讲评：与传统实验最明显的区别是使学生不断在尝试失败、解决问题过程中得到结果，因此，讲评特别重要，他可以强化学生对科学研究过程的理解，还可以针对实验设计启发学生提出新的问题。（7）完成综合性实验报告：包括以上各个部分的详细内容。 3.综合性实验包括的主要内容及学时分配大体情况如下（共6学时）：（1）实验前的准备工作：查阅资料、设计实验方案、采样、玻璃器皿的洗涤、包扎、灭菌、棉塞制作、无菌水、培养基制备、样品处理等：1学时。（2）划线法或倾注法分离、纯化、培养细菌、酵母菌、霉菌，环境污染程度检测，无菌操作训练等：2学时（3）细菌、酵母菌、霉菌属的鉴定：包括个体及群体形态鉴定、多媒体显微技术、镜检、染色、典型生理生化特性鉴定、生长繁殖条件测定、环境条件影响实验等：2学时（4）整理实验结果，撰写实验研究报告，总结等：1学时

营养缺陷型菌株的筛选和鉴定

营养缺陷型菌株的筛选和鉴定 mutugenesis and isolation of auxotroph 细菌革兰氏染色法 gram stain 酵母菌的形态结构观察 yeast morphology 培养基的配制和灭菌 types of mddia and sterlization 菌种保藏 preservation of cultures 细胞计数法 conting of cell 凝集反应 agglutination reactions 相差显微镜 phase contrast microscope 细胞融合 cell fusion 质粒DNA的提取 isolation of plasmid DNA 植物DNA的提取 isolation of plant DNA 多肽的末端分析 analysis of terminal of polypeptide PCR扩增DNA PCR amplify DNA fragment SDS-聚丙烯凝胶电泳 SDS-polyacrylamide gel electrophoresis 蛋白质的性质 properties of protein 植物组织培养 plant tissue culture BL-410生物机能实验系统简介 the introduction of BL-410 biofunctional experiment system 青蛙坐骨神经-腓肠肌标本的制备 preparation methods for nerve-muscle specimen of frog 人ABO血型的鉴定 Identification of humankind ABO blood group

体内小鼠实验方案

实验报告抗肿瘤药物体内活性研究一、实验原理聚合物胶束的粒径约为0-200 nm，可以利用肿瘤组织的增强渗透保留效应(EPR)，选择性地透过肿瘤血管并积累在肿瘤组织，实现被动靶向；被特定官能团修饰的聚合物胶束则能响应部位的物理化学变化，实现靶向部位的载体聚集和药物定点释放。抗肿瘤药物的反复使用容易导致肿瘤细胞产生多药耐药性(MDR)，肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性后，对结构与作用机制不同的其它抗肿瘤药产生交叉耐药的现象极大的限制了化疗药物的疗效。纳米药物传递系统如脂质体、胶束、纳米粒等作为MDR逆转策略越来越引起关注。胶束能通过EPR效应使药物选择性地在肿瘤部位累积和释放，增加细胞内药物浓度，缓控释药物，并通过靶向细胞上特异受体对应的配体修饰，达到主动靶向，从而逆转肿瘤细胞耐药。盐酸阿霉素(DOX·HCl)，属于蒽环类抗生素，能够抑制癌细胞遗传物质核酸的合成，具有广谱的恶性肿瘤的治疗效果，广泛用于宫颈癌细胞、卵巢癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤、肺癌、肝癌等的治疗。然而，阿霉素的急性和慢性毒副作用限制了其在临床上的广泛应用，急性毒副作用包括恶心、呕吐、骨髓抑制和心率失常;慢性毒性表现为肝脏、大脑和肾脏的损伤，对心脏具有不可逆的剂量依赖性的损伤。用聚合物构建新型药物胶束传递系统，提高对疏水性药物的包载能力和药物稳定性;通过小分子修饰实现被动和主动靶向。此外,通过相关实验考察作为药物载体的聚合物胶束的耐药能力，以此来证明聚合物胶束的生物安全性好、稳定性高、载药量高、响应性强、靶向性准、缓控释性能好。二、实验目的 1.运用抗肿瘤药物在小鼠体内评价方法，筛选出具有高表达、特异性、高亲和力的主动/被动靶向、无细胞毒性、抗肿瘤效果好的聚合物胶束。 2.动物体内抑瘤实验基于活体成像技术，建立药物抗肿瘤效果活体动物影响研究方法。三、实验内容

大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变与筛选山大微生物大实验

山东大学实验名称：大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选作者：姚健(201000140136) 同组者：刘新强指导老师：林建群(教授) 实验日期：2013年5月22日-6月1日

微生物大实验报告大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选山东大学生命基地班姚健 201000140136 摘要：营养缺陷型菌株或称异养型（auxotroph）菌株是许多微生物生理生化以及遗传研究的重要菌株材料。此类菌株不仅在生物研究方面有着很重要的作用，而且在生物工程和生物技术上都有很重要的作用。营养缺陷型菌株的筛选也成为了微生物科学工作者必备的基本实验技能之一。实验采用物理诱变非电离辐射紫外线（15W）为诱变剂，来对大肠杆菌诱发突变，并用抗青霉素法淘汰野生型（富集营养缺陷型），采用点植对照法检出营养缺陷型，划线复证后得到两株营养缺陷型菌，进行生长谱法鉴定，两个平板都长满了菌落，即没有预期的营养缺陷型菌株出现。 Abstract:Auxotrophic bacterias are very important materials in the microbial biochemical and genetical research.Auxotrophic bacterias are important to not only bioresearch but also biotechnology.The screening of auxotrophic bacterias has become one of scientists’ primary experimental skills.We use the ultravioley light as the mutagen to induce the mutation of the E.coli,then weed out the wild type by Penicillin resistance method to gather auxotrophic bacterias,next we check out the auxotrophic bacterias by spot planting.We get two auxotrophic bacterias by marking out，finally we test the type of auxotroph by auxanography.Each bacteria grew well everywhere in the plate indicating that t here’s no auxotrophic bacteria. 关键词：大肠杆菌；营养缺陷型菌株；紫外线诱变；划线复证；生长谱测定；筛选 Key words:Escherichia;auxotrophic bacteria；ultravioley mutation;marking out;auxanography;screening 1引言筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。本实验选用紫外线为诱变剂来诱发突变，并用青霉素法淘汰野生型，逐个测定法检出缺陷型，最后经生长谱法鉴定细菌的营养缺陷型。 1.1 营养缺陷型营养缺陷型是指野生型菌株由于某些物理因素或化学因素处理，使编码合成代谢途径中某些酶的基因突变，丧失了合成某些代谢产物(如氨基酸、维生素)的能力，必须在基本培养基中补充该种营养成分，才能正常生长的一类突变株[1]。这类菌株可以通过降低或消除末端产物浓度，在代谢控制中解除反馈抑制或阻遏，而使代谢途径中间产物或分支合成途径中末端产物积累。在氨基酸、核苷酸生产中已广泛使用营养缺陷型菌株；也可用于遗传学分析、微生物代谢途径的研究及细胞和分子水平基因重组研究中作为供体和受体细胞的遗传标记。因此，营养缺陷型在工业上有重要的应用价值。营养缺陷型是由野生型突变产生，营养缺陷型经回复突变恢复野生表型得到原养型。为了获得营养缺陷型菌株，需从诱变处理后的菌液中认真筛选，以便检出突变体，常用的方法有：影印接种法、夹层培养法和青霉素浓缩法等。 1.2 紫外线诱变诱变育种是人为地采用物理、化学的因素，诱导有机体产生遗传变异，并经过人工选择、鉴定、培育新品种的方法。诱变育种的目标是改变或增加一个满意品种的某一特性，而在其他方面保持不变。诱变育种具有以下特点：1）提高突变率，扩大变异谱；2）适于进行个别性状的改良；3）育种程序简单，年限短；4）变异的方向和性质不定。紫外线是一种短波光，波长介于100-400nm之间。它是一种非电离辐射诱变剂，照射物体时可使原

实验室常用的细菌作用及其选择

第一篇：JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别 1：DH5a菌株 DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1 2：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3） 3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr 4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac －proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15] 5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697， galU ，galK ，rps， (Strr) endA1， nupG 6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验

化学实验方案设计的基本要求

【同步教育信息】一. 本周教学内容：化学实验方案设计的基本要求二. 重点、难点： 1. 了解化学实验方案设计的基本要求。 2. 培养学生分析、概括、总结、综合和归纳的能力，提高学生的思维能力。三. 具体内容：所谓实验设计，是用多种装置和仪器按某种目的进行串联组合完成某项实验，其类型较多，考查形式多样。解答这类题目，要求学生对所学过的物质的性质、制备和净化，常用仪器和装置的作用及使用时应注意的问题等知识融会贯通，要善于吸收新信息并且能加以灵活运用。化学实验方案设计题具有较强的综合性，但一个化学实验，必须依据一定的实验原理，使用一定的仪器组装成一套实验装置，按一定顺序进行实验操作，才能顺利完成。据此，一道综合实验方案设计题，可以把它化解成几个相互独立又相互关联的小实验、小操作来解答。

由各个小实验确定各步操作方法，又由各个小实验之间的关联确定操作的先后顺序。（一）化学实验设计的类型根据不同的标准，可以将中学化学教学中的实验设计划分成不同的类型。（1）根据实验在化学教学认识过程中的作用来划分。 ①启发性（或探索性）实验设计。由于这类实验是在课堂教学中配合其他化学知识的教授进行的，采取的又多是边讲边做实验或演示实验的形式，因此，在设计这类实验时，要注意效果明显、易操作、时间短、安全可靠。 ②验证性实验设计。由于这类实验的目的主要是验证化学假说和理论，又多采取学生实验课或边讲边做实验的形式，因此，在设计这类实验时，除了上述要求外，还要注意说服力要强。 ③运用性实验设计。这类实验的目的是综合运用所学的化学知识和技能，解决一些化学实验习题或实验问题。因此，在引导学生进行实验设计时，要注意灵活性和综合性，尽可能设计多种方案，并加以比较，进而进行优选。从课内、课外的角度来分，运用性实验设计又包括课内的实验习题设计和课外的生产、生活小实验设

诱变育种流程及紫外诱变育种的详细步骤

诱变育种流程及紫外诱变育种的详细步骤 -标准化文件发布号：（9456-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII

诱变育种的一般步骤： 1.首先是天然菌种的选育：调查研究及查阅充分的资料 ↓ 设计实验方案 ↓确定采集样品的生态环境采样 ↓确定特定的增殖条件增殖培养确定特殊的选择培养基及可能的定性或半定量快速检出法平板分离 ↓ 原种斜面 ↓确定发酵培养基础条件筛选 ↓ 初筛（1株1瓶） ↓ 复筛（1株3～5瓶） ↓结合初步工艺条件摸索再复筛（1株3～5瓶） ↓ 3～5株 ↓ 单株纯种分离生产性能试验 →毒性试验菌种鉴定 2.诱变菌种：

出发菌株----菌种纯化(出发菌株性能测定)----制备斜面孢子----制备单孢子悬液(悬液进行活菌计数)----诱变剂处理(存活菌数的测定并计算存活率)----平板分离(测定变异率)----挑取变异菌落并移植至斜面上----初筛(初筛数据分析，生产性状的粗测)----斜面传代----复筛(复筛数据分析，精确测定生产性状)----变异菌株(菌株参数分析)----小型或中型投产试验----大型投产试验。诱变育种应把握的主要原则有以下几点：1)选择简便有效的诱变剂。在选用理化因素作诱变剂时，在同样效果下，应选用最简便的因素；在同样简便的条件下，应选用最高效的因素。2)挑选优良的出发菌株。最好采用生产上已发生自变的菌株，选用对诱变剂敏感的菌株，选取有利于进一步研究或应用性状的菌株。4)处理单细胞或孢子悬液。单细胞悬液应均匀而分散，孢子、芽孢等应稍加萌发。5)选用合适的诱变剂量。一般正变较多出现在低剂量中，负变较多地出现在高剂量中。6)选用高效的筛选方法。紫外线诱变育种：紫外线诱变一般采用15W紫外线杀菌灯，波长为253- 265nm．灯与处理物的距离为30cm，照射时间依菌种而异，一般为几秒至几十分钟。一般我们常以细胞的死亡率表示，希望照射的剂量死亡率控制在70～80%为宜。被照射的菌悬液细胞数，细菌为106个/ml左右，霉菌孢子和酵母细胞为106～107个 /ml。由于紫外线穿透力不强，要求照射液不

营养缺陷型菌株的筛选

营养缺陷型菌株的筛选采用辐射，化学试剂等因素处理细菌，以提高其变异几率，关键步骤是进行营养缺陷型微生物的筛选工作，营养缺陷型是指通过诱变产生的，由于发生了丧失某酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长的突变株。营养缺陷型的筛选与鉴定涉及下列几种培养基：基本培养基（MM，符号为[-]）是指仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需的最低成分的合成培养基。完全培养基(CM，符号为[+])是指可满足某种微生物的一切营养缺陷型菌株的营养需要的天然或半合成培养基。补充培养基（SM，符号为[A]或[B]等）是指在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺陷型菌株生长需求的合成或半合成培养基。营养缺陷型菌株不仅在生产中可直接作发酵生产核苷酸、氨基酸等中间产物的生产菌，而且在科学实验中也是研究代谢途径的好材料和研究杂交、转化、转导、原生质融合等遗传规律必不可少的遗传标记菌种。营养缺陷型的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型四个环节。现分述如下：第一步，诱变剂处理：与上述一般诱变处理相同。

第二步，淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般较低。通过以下的抗生素法或菌丝过滤法就可淘汰为数众多的野生型菌株即浓缩了营养缺陷型。抗生素法有青霉素法和制霉菌素法等数种。青霉素法适用于细菌，青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，杀死正在繁殖的野生型细菌，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌。制霉菌素法则适合于真菌，制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用，从而引起膜的损伤，也是只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌。在基本培养基中加入抗生素，野生型生长被杀死，营养缺陷型不能在基本培养基中生长而被保留下来。菌丝过滤法适用于进行丝状生长的真菌和放线菌。其原理是：在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能。通过过滤就可除去大部分野生型，保留下营养缺陷型。第三步，检出缺陷型：具体方法很多。用一个培养皿即可检出的，有夹层培养法和限量补充培养法；在不同培养皿上分别进行对照和检出的，有逐个检出法和影印接种法。可根据实验要求和实验室具体条件加以选用。现分别介绍如下：

亲子科学小实验活动方案

亲子科学小实验活动方案参加科学试验活动的儿童，本身就是一个个天生的小“科学家”。当我们有目的指向地让他（她）们确立了生物学家、物理学家、化学家或者是地理学家的身份后，这些小“科学家”们：首先，理解了科学家——就是通过做实验来发现某些东西的人。下面是5068儿童网橙子整理的关于亲子的活动方案，供大家学习和参阅! 亲子科学小实验活动方案：谁能穿越管子活动目标： 1、通过试验获得相关物体特性的经验。(如：光是直射的，先是柔软的，可以弯曲的等。) 2、在活动中提出自己的假设，并乐意通过实验来验证。 3、激发幼儿对科学的探究兴趣，提高幼儿的动手操作能力。活动准备：不同形状的白色弯管若干，一段既有螺帽的尼龙线、打气筒、铅笔、手电筒若干，直管弯管若干，幼儿实验记录表若干，教师实验记表一张。活动过程： 1、出示直管。师：这是什么?平时有什么东西可以穿越这根直管? 师：今天老师给你们带来了四样东西，它们分别是一端系由螺帽的线、打气筒、铅笔、会发光的手电筒，(一端系由螺帽的线、打气筒、铅笔、会发光的手电筒)你们来猜猜看，这些东西他们哪些能穿

越直管，哪些不能?(幼儿猜测) 师：让我们动手做个实验试一试吧!老师为你们准备了实验级路标，你们可以把实验中的发现记录下来，能穿越直管的，就在表格后面这里打个“勾”如果不能得就打个“叉”。 2、幼儿进行直管的实验。师：谁愿意把实验中的发现和大家说一说?那些东西能穿越直管那些不能?(教师把有争议的实验再示范做一次，并在教师的试验记录表上做好记号) 提问：(1)为什么带有螺帽的线、打气筒里打出的气、铅笔、光都能穿越直管?(因为空启示流动的，线是柔软的可以弯曲的，铅笔是直的，光是直射的，所以能穿越弯管。) (2)这四样东西能穿越这样的管子吗?(出示弯管)哪些能哪些不能穿越?(幼儿猜测) 3、幼儿进行弯管的实验。师：谁来说一说你在实验中的发现?教师把有争议的实验再示范做一次，并在教师的试验记录表上做好记号。提问：为什么铅笔和光线能穿越直管却不能穿越弯管?(因为铅笔和直管一样是直的只能穿越直管不能穿越弯管，而光线是直射的所以也不能穿越弯管。) 教师总结：线是柔软的可以弯曲的所以它能穿越直管和弯管，打气筒里打出的气是流动的所以也能穿越直管和弯管，铅笔是直的不能弯曲所以它只能穿越直管不能穿越弯管，光是直射的所以也只能穿越

抗植物病原菌活性菌株的筛选

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选43第三章　抗植物病原菌活性菌株的筛选　对从芹菜和油菜中分离得到的215株内生菌包括34株内生放线菌进行拮抗植物病原菌的体外活性筛选第一节活性菌株的筛选１．１材料　１．１．１待测菌　从油菜和芹菜中分离的215株内生菌纯化后使用直喙镰孢菌Fusarium orthoceras 由中国科学院沈阳应用生态研究所惠赠１．１．３培养基　改良沙氏培养基　１．２方法　１．２．１菌块活性的检测　采用菌块对峙培养测定法接种于改良沙氏培养基的培养皿中央下培养24 h ????2??óé????ú下培养72h ????T×?1×÷ó??÷??μ??ú?ê??DD?′é?

蔬菜内生放线菌的分离和生物活性初探 44 初筛有活性的菌株用改良沙氏液体培养基28·￠?íòo5000rpm离心10min???′3次ｍ的滤膜过滤下保存冷却凝固后 28ò??±?ó?à??μ?2??-?ú×÷?a???? ò?è???1?ê??????à??ò????ê?úêμ?éêòμ?ì?ía??D?é????D时初始对照组菌块直径对于215株内生菌包括34株放线菌进行了菌块活性的初筛其中放线菌为8株而从放线菌中筛选到活性菌株的比例为23.5可见从放线菌中发现生物活性的概率远高于其它微生物１ＹＣＥＤ　３　ＹＣＥＤ　１５Ｂ＊ＹＣＥＤ　１６Ｂ＊ＹＣＥＤ　２４Ｂ＊

第三章抗植物病原菌活性菌株的筛选45 ＣＨＳＨ　１２Ｂ　ＣＨＳＨ　１９Ａ＊ＣＨＳＨ　２５ＢＣＨＳＨ　３４＊ＣＨＳＨ　３８＊ＹＩＭ１８　 ?ú?ê±ào??D′?óD*标志的为放线菌代表有活性代表没有活性　１．３．２发酵液活性检测　发酵液活性复筛的实验结果如图３当相对抑制率小于３０图中不做表示从图３放线菌ＣＨＳＨ１９Ａ　发酵液拮抗立枯丝核菌的活性最高ＹＣＥＤ７ＣＨＳＨ１９ＢＣＨＳＨ３４和ＣＨＳＨ３５６对三种病原真菌均有拮抗活性　部分菌株固体培养时有抑制活性如ＣＨＳＨ３２对三种病原菌ＹＣＥＤ３其原因可能有产生抗生素的同时产生一种分解抗生素的物质抗生素的产生与琼脂中含有的某些微量物质有关发酵液显示出活性ＹＩＭ１６和ＹＩＭ１８对立枯丝核菌ＣＨＳＨ１８和ＣＨＳＨ１２Ｂ对苹果黑腐皮壳虽然比较简便造成漏筛也就是前面使用的菌块活性和发酵液活性适于大量筛选液体发酵可利用发酵液进行更多的试验

科学小实验活动方案

科学小实验活动方案 Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】

科学小实验活动方案白山市浑江区第二实验小学一、指导思想为了进一步推动我校科技教育，普及科学知识，培养学生的科学创新精神和科技创新能力，提高学生的综合科学素养，激发学生爱科学、学科学、用科学的热情，展示学生的创造能力和特长，推进素质教育的实施。二、活动目的 1、让孩子们学的开心，玩的开心。在学习中培养兴趣，在游戏中学习科学。 2、培养学生独立思考、创新进取的科学素养。三、活动时间及地点时间：2014年3月地点：科学实验室四、活动对象三年级到六年级学生科学教师五、活动内容选取比较简单的实验，准备好实验材料，创造机会让学生动手做实验，让学生参与到其中，亲历实验过程，真正经历科学学习过程。（具体内容见附件）五、活动措施?

1．根据不同的实验内容，开展丰富多彩的实验活动。老师可减少不必要活动前准备，多让学生自己进行准备，选取最适合的实验材料进行活动，提高活动效益。? 2．活动时老师要作适当讲解，进行必要规范的演示，学生分组要团结合作。? 3．实验活动过程中，教师要加强巡视指导，以保证学生实验成功率达到100%。? 4、注意注重安全教育，对较危险的实验应多强调注意事项，要求学生严格规范操作。? 5、鼓励学生动手的同时多动脑，大胆地创新。引领学生实验胆大心细，在活动中满足孩子童真的天性和激发孩子对科学探究的兴趣。五、预期成果通过本次活动，激发学生探究科学活动的潜能，使他们能够在以后的教学活动中，乐于参与到实验活动中来，从而提升学生整体的科学素养。六、附件： 1、带电的气球 2、有趣的微小世界 3、当小苏打遇到白醋后 4、走进丰富多彩的物质世界 2014年2月