多细胞动物的起源题库2-2-10
多细胞动物的起源题
库2-2-10
问题：
[填空题]一个受精卵经分裂形成很多细胞的全过程称（）。
问题：
[填空题]动物受精卵细胞卵裂时，与卵轴平行的称（）；与卵轴垂直的称（）。
问题：
[填空题]根据卵的类型不同。卵裂可分为（）、（）、（）、（）等四种类型。https://www.360docs.net/doc/be8757740.html,/ 足球世界杯
问题：
[填空题]在卵的全裂类型中，根据分裂球排列不同，还可分为（）、（）。
问题：
[填空题]动物卵裂的结果，分裂球形成中空的球状胚，称为（）；其间的空腔称为（）。
问题：
[填空题]原肠胚的形成方式有（）、（）、（）、（）、（）。
问题：
[填空题]一个典型的原肠胚包括（）、（）、（）、（）、（）等五部分。
问题：
[填空题]中胚层及体腔的形成方式有（），（）。原口动物都是以（）法形成中胚层，以（）法形成体腔；而后口动物则是以（）法形成中胚层和体腔。
(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
多细胞生物的起源
多细胞动物的起源 姓名：王园 学号：20117319 专业：生物科学 学院：农生院 时间：2012.3.3
随着科学的进步和人类的进一步探索，越来越多的例子和研究证明多细胞动物起源于单细胞动物。在未来的日子里，揭开多细胞的起源将不会成为难题。如：“多细胞生物起源或可追溯至寒武纪前”的发表证明人类的研究已经取得一定的成就，谜底解开之日将不会远。 一、多细胞动物起源于单细胞动物 动物由单细胞演变为多细胞是动物发展史的一个重要阶段。一切高等生物，包括动物、植物，都是多细胞的。但多细胞动物的进化发展远较植物的快。这是因为多细胞动物在进化过程中发展了两侧对称的体型，进而身体各部分明显分工，出现了头部，使得神经、感官等大大发展，而这些发展都是由于多细胞动物长期适应于活跃的、主动的生活方式而形成的。 原生动物——单细胞动物虽然也能完成起生命的各种活动，并有些单细胞动物结构上有一定程度的复杂化，但由各种细胞器来完成的各种不同的功能，这仅仅是一个细胞内的分化。原生动物也有一些多细胞群体，它们只是以群体的方式存在，一般仍是以一个个细胞为独立的生活单位的，彼此之间并不发生密切联系。 多细胞动物我们称之为Metozoa，即后生动物，这是相对于原生动物（prot-ozoa）而言的。后生动物包括除原生动物以外的绝大多数的多细胞动物。 也有学者认为在原生动物和后生动物之间存在着一个小类群-- 中生动物Mesozoa，这类动物寄生在海洋无脊椎动物的体内，个体细胞数目20-30个。
二、由单细胞动物发展到多细胞动物的证据 现在公认多细胞动物起源与单细胞动物，证据主要如下三个方面： 1、古生物学方面 从不同地层中的化石种类来判断。化石---古代动、植物的遗体或遗迹。化石研究发现，越是古老的地层，化石种类越简单。在太古代（地质史最古老的年代），距今32亿到距今18亿年的中生代的地层中有大量有孔虫的化石。而晚近地层中的化石种类则较复杂，并且动物杂交的程度是一个渐进的变化过程。说明动物是有简单到复杂逐渐进化的，也就是有单细胞到多细胞逐渐发展的。 2、形态方面 从现存的动物种类来看，有最原始的单细胞动物——原生动物，还有处于不同发展水平的多细胞动物，形成了一个由简单到复杂、由低等到高等的序列。特别是在原生动物中出现了群体鞭毛虫，比如团藻、盘藻等界于单细胞和多细胞之间的类群。有人认为这些群体鞭毛虫就是由单细胞--多细胞的过度类型。有由此推断单细胞动物通过这一过渡类群变为多细胞动物。 3、胚胎方面 胚胎的发育是由受精卵经过卵裂、囊胚、原肠胚、中胚层及体腔形成以及胚层分化等一系列过程发育为一个个体的，无论是哪一种多细胞动物，它的早期胚胎发育是极为相似的。 三、单细胞到多细胞的学说得到了许多学者
第3章 多细胞动物的起源
第三章多细胞动物的起源 1.一般了解中生动物的简要特征以及对其分类地位的不同看法。 答：有些学者基于中生动物全部为寄生，且生活史较复杂，结构简单是适应寄生生活的退化现象，因此认为它是退化的扁形动物。还有一些学者基于其身体结构有体细胞和生殖细胞的分化，体表具纤毛，且其寄生历史较长，因此认为中生动物是原始的种类，是由最原始的多细胞动物进化而来的，或认为是早期后生动物的一个分支。近年来经生化分析表明，中生动物细胞核中鸟嘌呤和胞嘧啶的含量（23%）与原生动物纤毛虫类的含量相近，而低于其它多细胞动物者，包括扁形动物者（35%~50%）。因此认为中生动物和原生动物的纤毛虫类的亲缘关系较近，更可能是真正原始的多细胞动物。至于中生动物和后生动物是否各自独立地来于原生动物的祖先，或中生动物确是原始的或退化的扁虫？还很不清楚。因此，其分类地位尚难确定。 2.根据什么说多细胞动物起源于单细胞动物？ 答：一般公认多细胞动物起源于单细胞动物。其证据是： (一)古生物学方面古代动、植物的遗体或遗迹，经过干百万年地壳的变迁 或造山运动等，被埋在地层中形成了化石。已经发现在最古老的地层中，化石种类也是最简单的。在太古代的地层中有大量有孔虫壳化石，而在晚近的地层中动物的化石种类也较复杂，并且能看出生物由低等向高等发展的顺序。说明最初出现单细胞动物，后来才发展出多细胞动物。从辩证唯物主义的观点来看，事物的发展是由简单到复杂、由低等到高等，生物的发展也不例外。(二)形态学方面从现有动物来看，有单细胞动物、多细胞动物，并形成了由简单到复杂、由低等到高等的序列。在原生动物鞭毛纲中有些群体鞭毛虫，如团藻，其形态与多细胞动物很相似，可推测这类动物是从单细胞动物过渡到多细胞动物的中间类型，即由单细胞动物发展成群体以后，又进一步发展成多细胞动物。 (三)胚胎学方面在胚胎发育中，多细胞动物是由受精卵开始，经过卵裂、 囊胚、原肠胚等一系列过程，逐渐发育成成体。多细胞动物的早期胚胎发育基本上是相似的。根据生物发生律，个体发育简短地重演了系统发展的过程，可以说明多细胞动物起源于单细胞动物，并且说明多细胞动物发展的早期所经历的过程是相似的。恩格斯说：“有机体的胚胎向成熟的有机体的逐步发育同植物和动物在地球历史上相继出现的次序之间有特殊的吻合。正是这种吻合为进化论提供了最可靠的根据。” 3.初步掌握多细胞动物胚胎发育的共同特征（从受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、 中胚层与体腔形成、胚层分化等方面）。 答：多细胞动物的胚胎发育比较复杂。不同类的动物，胚胎发育的情况不同，但是早期胚胎发育的几个主要阶段是相同的。 (一)受精与受精卵由雌、雄个体产生雌雄生殖细胞，雌性生殖细胞称为卵。 卵细胞较大，里面一般含有大量卵黄。根据卵黄多少可将卵分为少黄卵、中黄卵和多黄卵。卵黄相对多的一端称为植物极，另一端称为动物极。雄性生殖细胞称为精子，精子个体小，能活动。精子与卵结合为一个细胞称为受精卵，这个过程就是受精。受精卵是新个体发育的起点，由受精卵发育成新个体。(二)卵裂受精卵进行卵裂，它与一般细胞分裂的不同点在于每次分裂之后，新的细胞未长大，又继续进行分裂，因此分裂成的细胞越来越小。这
多细胞动物的起源学说
多细胞动物的起源学说 （一）群体学说 大多数学者认为，多细胞动物起源于群体鞭毛虫类似的祖先。对此也有两种假说： 1、原肠虫学说 赫克尔提出和团藻相似的群体单细胞动物一端内陷，形成了有原肠和两胚层的原始多细胞动物。把此祖先称为原肠虫。 2、吞噬虫学说 梅契尼可夫提出，具有单层细胞的单细胞群体内，一部分细胞摄取食物后进入群体之内，形成了两胚层的实心的原始多细胞动物。把此祖先称为吞噬虫。 因现存的较低等的动物，多由细胞移入而形成两胚层。内陷法到后来才有。因此，吞噬虫学说可能更接近于事实。 （二）合胞体学说 认为多细胞动物起源于多核纤毛虫的原始类群，后生动物的祖先是具合胞体结构的多核细胞。 生物发生率(biogenetic law) 也叫重演律（recapitulation law），是德国人赫克尔(E.H.Haeckel)用生物进化论的观点总结了当时胚胎学方面的工作提出来的。当时在胚胎发育方面已揭示了一些规律， 如在动物胚胎发育过程中，各纲脊椎动物的胚胎都是由受精卵开始发育的，在发育初期极为相似，以后才逐渐变得越来越不相同。达尔文曾作过一些论证，认为胚胎发育的相似性，说明它们彼此有亲缘关系，起源于共同的祖先，个体发育的渐进性是系统发展中渐进性的表现。达尔文还指出了胚胎结构重演其过去祖先的结构，“它重演了它们祖先发育中的一个形象”。海克尔明确地论述了生物重演律。1866年他在《有机体普通形态学》书中说：“生物发展史可分为2个相互密切联系的部分，即个体发育和系统发育，也就是个体的发育历史和由同一起源所产生的生物群的发展历史。个体发育史是系统发展史的简单而迅速的重演。”如青蛙的个体发育，由受精卵开始，经过囊胚、原肠胚、三胚层的胚，无腿蝌蚪、有腿蝌蚪，到成体青蛙。这反映了它在系统发展过程中经历了像单细胞动物、单细胞的球状群体、腔肠动物、原始三胚层动物、鱼类动物，发展到有尾两栖到无尾两栖动物的基本过程。说明了蛙个体发育重演了其祖先的进化过程，也就是个体发展简短重演了它的系统发展，即其种族发展史。 生物重演律对了解各动物类群的亲缘关系及其发展线索极为重要。因而对许多动物的亲缘关系和分类位置不能确定时，常由胚胎发育得到解决。生物重演律是一条客观规律，它不仅适用于动物界，而且适用于整个生物界，包括人类在内。 简而言之，生物发生率揭示了个体发育是系统发育快速的重演 群落 community 亦称生物群落(biological community)。 生物群落是指具有直接或间接关系的多种生物种群的有规律的组合，具有复杂的种间关系。我们把在一定生活环境中的所有生物种群的总和叫做生物群落，简称群落。组成群落的各种生物种群不是任意地拼凑在一起的，而有规律组合在一起才能形成一个稳定的群落。如在农田生态系统中的各种生物种群是根据人们的需要组合在一起的，而不是由于他们的复杂的营养关系组合在一起，所以农田生态系统极不稳定，离开了人的因素就很容易被草原生态系统所替代。
动物细胞培养及无血清培养研究进展
动物细胞培养及无血清培养研究进展 摘要：细胞培养是生物学中一项重要技术，应用较为广泛，目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。其中动物细胞培养是动物细胞工程中最常用的技术手段，而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。本文主要介绍了动物细胞培养和其中发展较快的无血清培养技术的研究应用进展。为未来实际的研究和生产作一些总结和展望。 关键词：动物细胞；细胞培养；无血清培养基 1 引言 组织培养技术创建于18世纪末，之后于1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下，以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后，才逐渐发展成为一种从机体获取细胞，模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。近年来生命科学迅速发展，各种在分子水平的实验如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等，都是借助细胞培养技术而得以实现的。然而各领域的动物细胞培养技术发展并不平衡，存在许多的局限性，使用范围有限，还未出现适合整个生命科学研究领域的培养体系。因此本文对细胞培养及大规模培养、无血清培养做一些总结。 2动物细胞培养 动物细胞培养方式包括原代和传代培养。培养方式有贴壁、悬浮以及固定化培养等方式。 2.1动物细胞培养的基本概念 细胞培养指的是从体内组织取出细胞，并为其提供一个无菌、具有适当温度及酸碱度的环境，给予充分营养，使其生长繁殖并维持其结构和功能的一种培养技术。从体内取出的细胞进行的首次培养式细胞培养最初的阶段，也称为原代培养。原代培养式细胞培养当中重要的必经环节。原代培养细胞生长到一定时候后，由于受群体环境影响，需要转移到另一个容器，这种培养称为传代培养。传代后的动物细胞与原代培物形状一致的话，则表示传代成功，这些细胞称为细胞系或细胞株。 2.2动物细胞培养技术的内容
动物细胞培养技术实验
实验十五动物细胞培养技术及其应用 一．实验目的 通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。 二. 实验内容 1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术； 2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术； 3.细胞污染检测方法与技术； 4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。 三．实验用品 1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等 2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH 计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液 管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、 24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH 试纸、酒精棉球等 3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、 Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris 碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、 DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。 四．实验方法与步骤 （一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏 1. 缓冲液及培养基配制 Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。4℃下保存。 胰蛋白酶液： 称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s 液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。 4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。 MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。4℃下保存。Grace培养基：取一份GIBCO公司的Grace培养基粉剂，按说明用量加入1000ml三蒸水100单位／毫升青、链霉素，充分混匀使溶解，调节pH值至6.8左右。 0.22 μm 滤膜抽滤除菌，4℃下保存。此为基础培养基。使用前加入10%胎牛 血清。 细胞冻存液：基础培养基加入10%DSMO，20%胎牛血清，用前配制。 PBS缓冲液：137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.1 mmol/L Na2HPO4, 1.5 mmol/L KH2PO4,
第三章多细胞动物的起源
第3章多细胞动物的起源 第1节从单细胞到多细胞 一、知识点 I、理论：一切高等动物虽然都是多细胞的，但其发展是不平衡的 II、动物体复杂化的关键：对称体型和头部的形成 III、两侧对称的意义：有利于动物活动；促使身体分为前后、左右、背腹 IV、发展过程中3类动物：原生动物、中生动物、后生动物 V、中生动物：一类小型的内寄主动物。结构简单，分为菱形虫纲、直泳虫纲。 1、菱形虫纲：包括双胚虫、异胚虫。无性生殖或有性生殖。 2、直泳虫纲：寄生在多种海生无脊椎动物体内。成虫多雌雄异体，少数雌雄同体。没有轴细胞。 VI、原始的多细胞动物：一般认为是中生动物，因为它和原声动物的纤毛虫类的亲缘关系比较近 二、多细胞动物起源于单细胞动物的证据 I、古生物学方面：古代动植物的遗体或残骸。在最古老的地层中，化石种类是最简单的。II、形态学方面：简单——>复杂；低等——>高等 III、胚胎学方面：受精卵——>卵裂——>囊胚——>原肠胚 第2节胚胎发育的重要阶段 胚胎发育分为：受精与受精卵——卵裂——原肠胚的形成——中胚层及体腔的形成——胚层的分化 I、受精与受精卵：精子与卵子结合为一个细胞称为受精卵 II、卵裂： 1、完全卵裂：多见于少黄卵。a、等裂：海胆、文昌鱼；b、不等裂：海绵动物、蛙类。 2、不完全等裂：多见于多黄卵。受精卵只在不含卵黄的部位进行分裂。a、盘裂：乌贼、鸡卵；b、表面卵裂：昆虫卵 III、囊胚的形成：囊胚：囊胚腔、囊胚层。 IV、原肠胚的形成：内陷、内移、内转、外包、分层。最常见的是内陷和外包同时进行，分层和内移相伴而行 V、中胚层及体腔的形成：端细胞法（裂体腔法）；体腔囊法：棘皮动物、毛鄂动物、半索动物、脊索动物 VI、胚层的分化：动物体的器官都是由内、中、外胚层发育而来 1、内胚层：分化为消化管的大部分上皮、肝、胰、呼吸器官、排泄和生殖器官的小部分 2、中胚层：分化为肌肉、结缔组织、生殖和排泄器官的大部分 3、外胚层：分化皮肤上皮、神经组织、感觉器官、消化管的两端 第3节生物发生律与多细胞起源学说 一、生物发生律 赫克尔在《普通形态学》中说：生物发展可分为2个密切联系的部分：个体发育和系统发展。也就是个体发育的历史和由同一起源所产生的生物群的发展历史。个体发育史是系统发展史简单而迅速的重演 二、多细胞起源学说 I、群体学说： 1、赫克尔的原肠虫学说：多细胞动物最早的祖先是由类团藻的球形群体，一面内陷形成多
(完整版)动物细胞培养及应用发展史
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
常用的五种动物细胞培养方式
?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。
细胞实验室
一．建设方案之动物细胞培养实验室（设备片） 在生命科学科领域中细胞学有着至关重要的地位，近年来细胞学发展迅速，并取得了相当大的进展，细胞学相关实验室的建设也是各个研究院及院校生物学科必备的实验室。 细胞相关实验所需仪器及耗材种类繁多，接下来就细胞培养实验室常用仪器作下简单介绍：一、纯水系统 细胞培养用水一般要求双蒸水（0.8MΩ以上），实际上普通蒸馏水经玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水是不能满足要求的，而且水中的内毒素直接参与细胞凋亡，血清中内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内毒素含量过高，会直接导致细胞提前老化。因此建议配置正式的水纯化系统。 二、液氮罐 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。 三、超净工作台/生物安全柜 细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。 四、CO2培养箱 CO2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。 五、恒温水浴 从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。 六、超低温冰箱 细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般4℃下存放30 min，转放-20℃ 1 hour，再转入-70至-80℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-196℃)，这时就必须配备一台-86℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。 七、离心机 细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的
动物细胞培养技术小鼠脾脏细胞
姓名：XX 系年级：2013级XX班学号：201300XXXXXXX 实验题目:动物细胞培养同组者: XXXXX 动物细胞培养技术 【实验目的】 1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法； 4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率； 【实验原理】 （一）. 动物细胞培养技术 动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。 细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于 单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用 细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离； (2).观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；(3).细胞培养得到的产物少。 培养细胞的生存条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。 细胞培养的方法：1. 原代培养：直接从生物体内获取细胞，组织或器官，进行体外培养直 至第一次传代为止。2. 传代培养：当培养的细胞增殖达到一定密度之后，则需要再做培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比例转移到另一个容器中的扩大培养。原代细胞培养的方法有：单层细胞培养法和组织块培养法 细胞传代培养包括：贴附生长细胞的传代：洗细胞——酶消化——接种——观察 悬浮生长细胞的传代：A.直接传代 B.离心传代 单层培养细胞的生长过程分为：游离期，吸附期，繁殖期，维持期，衰退期 培养细胞的形态分型：A. 贴附型 B.悬浮型 （二）. 细胞死活鉴定 细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。 活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异： ①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只
动物细胞培养在药物领域的应用2
动物细胞培养在药物领域的应用 摘要：动物细胞培养开始于本世纪初 1962 年, 其规模开始扩大, 发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法, 利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单克隆抗体等, 已成为医药生物高技术产业的重要部分。本论文主要介绍动物细胞培养在药物领域的应用。 关键词：现代生物技术、动物细胞工程、动物细胞培养、药物领域、单克隆抗体 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。 一、首先介绍下动物细胞特点及其培养的基本要求和技术 1、动物细胞特点 动物细胞没有细胞壁，只有细胞膜，细胞质，细胞核，而且大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或者半固体的表面才能生长。 体外培养的动物细胞可分为原代细胞和传代细胞。原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞。适应在体外培养条件下持续传代培养的细胞称为传代细胞。通常体外大量培养的动物细胞有哺乳动物细胞、昆虫细胞、禽类细胞和鱼类细胞等。 2、动物细胞培养的要求 动物细胞培养的条件：无菌、无毒的环境；营养物质（合成培养基）；温度和pH （36.5±0.5℃，7.2~7.4）；气体环境（氧气和二氧化碳）等。 其中动物细胞对营养要求更加苛刻，包括有氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或者半乳糖，除此之外还要有血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。这些都是组成培养基的重要成分。 动物细胞培养还需要防止污染问题，细菌、真菌、病毒均可以导致动物细胞在培养过程中受到感染而死亡。而生物的组织材料、操作者自身、培养基、各种器皿以及环境均会引起污染。显著的污染标志是培养基的pH迅速改变，细胞外形模糊，甚至出现漂浮的集落。 3、动物细胞培养的步骤 ①无菌操作取出目的细胞所在组织，以培养液漂洗干净； ②以锋利无菌刀具割舍多余部分，切成小组织块； ③将小组织块置解离液离散细胞（解离液含有蛋白酶类）； ④低速离心洗涤细胞后，讲目的细胞吸移至培养瓶内培养。注意，哺乳动物细胞的大量培养需要提供较大的支持界面，原因前面已经说过，那是因为哺乳动物细胞只有附着在固体或者半固体的表面才能生长。 4、动物细胞培养的方法
动物细胞培养室布局设计SICOLAB
动物细胞培养室布局设计SICOLAB 随着动物细胞培养技术在组织学与胚胎学、细胞生物学、肿瘤学、免疫学、营养学、药理学、毒理学等学科的广泛应用，促使细胞培养技术的普及已成为一种可能。目前，有许多基层科研机构正在建立动物细胞培养实验室，SICOLAB就细胞培养室的硬件建设谈点看法，供参考。1总体原则 1.1净、污分流细胞培养室与相关辅助用房必须分开。培养室内环境要求清洁、空气清新、无尘、干燥。 1.2布局合理，方便操作所有实验室的布局要求统一、协调，最好相邻，以利于工作;室内各项设备安排要紧凑，节省空间，方便工作，避免交叉干扰。 2细胞培养实验室 2.1准备室主要用于培养器皿的洗涤、消毒、培养物的准备和物资保存等。为避免相互间不必要的生物或化学污染，可以数间小室组成为佳;准备室应具备良好的通风和采光，但应避免灰尘污染。 2.1.1洗涤区设有水槽、洗涤池，地面应设置地漏，以利水渍快速干燥。 2.1.2消毒区供物品和器械消毒及烘干用，常用消毒方法有干热法和湿热法。因设备耗电量大、产热量高，应单独配备供电线路。 2.1.3制水区用于制备符合实验要求的清洁水，以供洗涤培养器具和配制培养液用。要求供、排水方便。 2.1.4控温设备区主要放置冰箱、低温冷藏箱、培养箱等设备，以保存实验室内需低温保存的物品，如细胞株、某些试剂、酶、培养基、配制好的溶液及供实验室内常规培养和孵化胚胎等需要。 2.1.5精密仪器区主要放置电子天平、酶标仪、分光光度计等设备。要求工作台有较好的水平度、有较高的抗震能力、环境温湿度变化小、无尘等。 2.2培养室 2.2.1缓冲间常设于培养室外，要求清洁、干燥和不通风，并设置紫外灯等必要的环境消毒设备。 2.2.2培养室常称无菌室，是专门用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室，要求清洁、干燥、无菌、不通风。室内除放置CO2培养箱、超净台、倒置镜、水浴摇床、离心机和冰箱等设备外，还应有放置无菌器具的橱柜和一定的操作空间。 2.3其他实验室根据研究方向可配套建立诸如细胞遗传学实验室、细胞生物学实验室、分子生物学实验室、电生理实验室、生化实验室、形态学工作室等。 3配备仪器设备 3.1超净工作台是目前普遍应用的无菌操作装置。按气流方向的不同可分为水平流和垂直流二种，以垂直流超净台较为常用，气流从上向下流动，形成气流屏障，能较好地保持台面无菌和操作条件。 3.2控温设备主要指CO2培养箱、三气(O2、N2、CO2)培养箱、隔水式电热恒温培养箱、生化培养箱、小型孵化器、冰箱、低温冷藏箱、制冰机、水浴摇床、水浴箱等设备。主要提供细胞源(如胚胎)、处理细胞源、培养细胞、保存药品和细胞株。 3.3离心机常用为低速离心机，但某些特殊细胞需要控温故应配置一台冷冻离心机。3.4显微设备必须放置一台倒置显微镜，以便随时观察细胞，掌握情况。最好附带照相装置，以随时拍照，记录细胞生长情况。另外应根据需要选配相差装置、荧光装置、保温装置、缩时拍摄电影装置等。为更好分析处理细胞培养结果，还应配置显微图像捕获装置和相应分析处理系统(含计算机)。 3.5细胞计数设备一般可借助血细胞计数板进行计数，有条件者可选购电子细胞计数仪。
动物细胞培养在药物上的应用
动物细胞培养在药物上的应用 摘要我国药物市场正迅速发展，药物生产技术不断地进行技术革新。动物细胞培养技术不仅提高我国药物生产工艺水平和药物质量，更推动了动物细胞培养技术在我国药物行业中的研发应用和技术发展。本文从动物细胞培养技术的发展、趋势、应用及前景等方面进行了综述，分析并探讨了动物细胞培养技术在我国药物生产中的应用前景。 关键词：动物细胞培养药物应用前景 1.动物细胞培养技术的发展及趋势 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harrison)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 50年代末，随着生物科学和技术科学的相互渗透，遗传学和生物化学的相互结合，出现了分子遗传学、分子生物学、细胞工程等新兴科学，这些新科学的形成和发展都与细胞培养有密切关系。当前细胞培养技术已广泛用于生物学和医学研究的各个领域，出现了用各种理化措施诱发出遗传缺欠细胞株、应用细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体、用培养细胞检测环境中可疑致癌物质、癌基因转染和细胞转化等。动物细胞培养将在药物上有着广泛的应用。 2.动物细胞培养技术的应用 2.1.动物细胞培养技术在临床医学上的应用 动物细胞培养技术可用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断。目前，人们已经能够用羊膜穿刺技术获得脱落于羊水中的胎儿细胞，经培养后进行染色体分析或甲胎蛋白检测即可诊断出胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型。以此可避免先天残疾儿的诞生。现在用这种方法已能检测出几十种代谢性遗传缺陷疾病和先天畸型疾病。其次，现在的一些科学研究已能通过染色体对比分析检测出易患癌症的病人，以便进行及早的预防和治疗。在这方面，我国的科学工作者有较突出的研究成果，他们改进了淋巴细胞的培养方法，从而使带有癌基因的人的染色体表现出明显高于常人的畸变率，这就从细胞分子水平揭示了癌症的病理、病因，并为癌症的早期诊断和预防提供了科学依据。再次，细胞培养还可用于临床治疗。目前已有将正常骨髓细胞经大量培养后植入患造血障碍症患者体内进行治疗的报道。另外，动物细胞培养生产
动物细胞培养实验室构建方案
动物细胞培养实验室构建方案 细胞学在生命科学科中起着至关重要的作用，近年来细胞学蓬勃发展，并取得了重大的进展，细胞实验室的构建也是各个院校生物学科必备的实验室。 细胞实验谨慎复杂，需要的实验设备种类繁多，下面就一些动物细胞实验室必备仪器进行简单介绍： 一、CO 2培养箱 CO 2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外 培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O 2浓度等。细 胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO 2 培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。 Thermo Scientific 8000系列CO 2培养箱具有专业的灭菌和抑菌 功能。如140℃，12Hour 干热灭菌，能有效杀死各种微生物；Hepa 过滤器，腔体内达到100级空气质量；不锈钢抛光内胆，有效抑制微生物附着；银离子消毒盒防止水盘中水染菌等，为您的细胞培养保驾护航。 二、纯水系统 细胞培养用水一般要求双蒸水（0.8M Ω以上），实际上普通蒸馏水经玻璃器皿 中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水是不能满足要求的，而且水中的内毒素直接参 与细胞凋亡，血清中内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内毒素含量过高，会直接导致细胞提前老化。因此建议配置正式的水纯化系统。 Thermo Scientific Barnstead 纯水机水质稳定有保证，耗材寿命长，运程成本低廉，是您实验室纯水系统优质的选择。 三、超净工作台/生物安全柜 细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。 新加坡ESCO 超净工作台和生物安全柜，为您提供更加安全的防护。 四、液氮罐 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。 图 1 Thermo Scientific 8000 CO 2培养箱 图2 Thermo Scientific Barnstead 纯水机
动物细胞培养技术研究进展
动物细胞培养技术研究进展 （张云生西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌 712100） [摘要]:动物细胞培养是生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法，可分为原代和传代培养，有贴壁、悬浮和固定化培养等培养方式。细胞生长具有特殊的生物学性质，需要无菌、恒温和充分的营养环境。动物细胞培养技术在拥有广阔的发展空间和光明前景的同时也面临着诸多问题和挑战。 [关键词]:细胞培养；微载体；中空纤维；微囊；生物反应器 1885年，W Roux尝试使组织离体培养,被认为是组织细胞培养技术的萌芽； 1907年Harrison和1912年Carrel开始把组织培养作为一种方法,用于研究离体动物细胞的培养，标志着细胞培养技术(Cell culture technology)的诞生。此后,随着抗生素、培养基、培养装置以及工艺方法的不断改进，动物细胞培养(Animal cell culture)的研究和应用逐步增多和深入，发展至今已成为在生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法。利用细胞培养开展体外试验，成为了阐释生命现象、发病机理和筛选药物的重要手段；利用细胞培养技术结合细胞融合(Cell fusion) 、细胞杂交(Cell hybridization)以及转基因(Transgene)技术进行基因重组、组织构建是遗传和组织工程的重要工具；利用细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等，已成为医药生物技术产业的重要部分[1]。 1 基本概念[1, 2 ] 细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体内生存环境，在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下，使其生长繁殖并维持结构和功能的一种培养技术。从体内取出细胞首次培养即为原代培养( Primary Culture)，这是细胞培养的最初和必经阶段。当原代培养细胞生长到一定时期，受到群体环境限制，就需要转移到另一容器才能继续生长，称为传代或继代培养( Subculture)。根据原代培物性状的一致性与否，传代成功后称为细胞系( Cell line)或细胞株(Cell Strain)。这些细胞一般可顺利传40～50代次，并保持染色体二倍体数量和接触抑制，传至50代左右时则出现生长停滞，大部分衰老死亡，此类称为有限细胞系/株；在细胞传代的过程中，有些因发生遗传突变获得了持久性增殖能力的细胞称为无限细胞系/株。 2 体外培养动物细胞的生物学特性 动物细胞无细胞壁，机械强度低，对剪切力敏感，适应环境能力差；倍增时间长，生长缓慢，易受微生物污染；对生长环境和培养环境要求苛刻[3]。 2. 1 细胞生命周期性变化[1] 体外培养的细胞从适应环境、旺盛生长到由于自身和环境限制缓慢或停滞生长经历一个周期变化。 1. 潜伏期(Latent phase) 细胞从接种到适应新环境生长繁殖的一段时间，此间细胞胞质回缩，代谢缓慢。 2. 指数生长期(Logarthmic growth phase)指数生长期是细胞活力最好的时期，细胞增殖旺盛。在接种细胞数量适宜的情况下。指数生长期持续3～5 d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少,营养环境恶化，呈现接触抑制(Contact inhibition)。恶性细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑
构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室
细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。 细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。 因此，无论是动物细胞培养室还是植物细胞培养实验室，必定有一下几种房间。 ①洗涤间：根据工作量的大小决定其大小。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。 ②培养基配制间：配备的主要仪器设备有：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。 ③消毒间：配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。 ④无菌操作室：无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 ⑤培养室。 在实验室内，还会有以下常用的基本设备。 Ⅰ.仪器： （1）显微镜：倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。 （2）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37℃，温差变化一般不应超过±0.5℃，细胞在温度升高2℃时，持续数小时即不能耐受，40℃以上将很快死亡。因此需要有能控制温度的培养箱，如具有较高灵敏度的恒温培养箱及CO2培养箱。 （3）干燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，电热干燥箱升温较高，一般需达到160℃以上。通常使用鼓风式电热干燥箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风，应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至100℃以下方可开门。 （4）水纯化装置：细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。水纯化时可采用离子交换装置或蒸馏器。离子交换纯水尚不能有效去除有机物，因此用水时尚需再次蒸馏。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。 （5）冰箱：细胞培养室必须配备。