细胞库建立准则
精心整理
细胞库建立概况
一、对细胞库细胞基质总的要求
(一)细胞系／株历史资料
1．细胞系／株来源资料
应具有细胞系／株来源的相关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株来也可引用正式发表文献。
状况的相关资料。
2
应提供细胞培养液的详细成分。如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的相关资料
。
(二)细胞库的建立
细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。
1．原材料的选择
建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相关规定。神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。
培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应
符合规定(附录XIIID)。
格制品。
2．细胞培养操作的要求
动物。
3
细胞库为三级管理，即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库。如为引进的细胞，可采用主细胞库和工作细胞库组成的二级细胞库管理。在某些特殊情况下，也可使用主细胞库一级库，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。
(1)原始细胞库(PCB)
由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产或检定。在特定条件下，将一定数量、
成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于安瓿，于液氮或一130℃以下冻存，即为原始细胞库，供建立主细胞库用。
(2)主细胞库(MCB)
取原始细胞库细胞，通过一定方式进行传代、增殖后均匀混合成一批，定量分装，保存于液氮或一130℃以下。这些细胞必须按其特定的质控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，供建立工作细胞库用。
(3)工作细胞库(WCB)
工作细胞库的细胞由MCB
或一130℃以下备用，即为工作细胞库。
生产。
4．细胞库的管理
冻存的细胞存活率应在90％以上。冻存后的细胞，应至少做一次复苏培养并连续传代至衰老期，检查不同传代水平的细胞生长情况。
主细胞库和工作细胞库分别存放。非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存放。(三)细胞库细胞的检定
细胞检定主要包括以下几个方面：细胞鉴别、外源因子污染和内源因子的检测、致瘤性检测等。必要时还须进行细胞染色体核型检查。这些检测内容对于MCB细胞和WCB细胞均适用。
建立细胞库的实验室应至少进行一次MCB细胞的全面检定，检定应包括：细胞鉴别试验，细菌、真菌检查，支原体检查，外源病毒因子检查等。每次建立WCB后，均应按规定项目进行检定。
1．细胞鉴别试验
新建细胞系／株、细胞库(MCB和WCB)
为本细胞，无其他细胞的交叉污染。(如特征染色体标志)、遗传标志检测(如DNA
列)、免疫学检测((如同工酶试验)等。
2
3
取细胞培养上清液样品，应为阴性。
4．细胞内、外源病毒因子检查
应注意检查细胞系／株中是否有细胞来源物种中潜在的可传染的病毒，以及由于操作带入的外源性病毒。对细胞进行病毒检查的种类及方法，须根据细胞的种属来源、组织来源及细胞特性决定。
(1)细胞形态观察及红细胞吸附试验(简称血吸附试验)
取混合瓶细胞样品，接种至少6个细胞培养瓶或培养皿，待细胞长成单层后换维持液，持续培养两周。每日镜检细胞，细胞应保持正常形态特征。
细胞至少培养14天后，分别取1／3细胞培养瓶或培养皿，用0·2％～0.5％豚鼠红细胞和鸡红细胞混合悬液进行血吸附试验。加入红细胞后置4～8℃30分钟，然后置20～25℃30分钟，分别进行镜检，观察红细胞吸附情况，结果应均为阴性。
新鲜红细胞在2～8℃保存不得超过7天，且溶液中不应含有钙离子或镁离子。
(2)不同细胞传代培养法检测病毒因子
取培养77天，
若待检细胞已知可支持人巨细胞病毒
观察28
(3)
MCB细胞或WCB须采用动
成鼠和鸡胚(两组不同日龄)共计4
组，按表80％以上动物或鸡胚健存，此
(见表1)。豚鼠主要用于检查细胞内结核分枝杆菌，在注射前观察4周，结核菌素试验为阴性者方可用于试验。家兔主要用于检测猴来源细胞中是否存在B病毒污染，也可用兔肾细胞培养法代替。
动物组要求数量接种途径细胞浓度／个活细胞·ml※接种细胞液量／ml·只- 观察天数结果判定
乳鼠24小时内10(2窝) 脑内腹腔 >107 O．01O．1 21 应健存
成鼠15～20g 10 脑内腹腔 >2X106 0.03O．5 21 应健存
鸡胚①9～11日龄10 尿囊腔>5X106 O．2 3～4 尿液血凝试验阴性
鸡胚5～6日龄10 卵黄囊>2X106 O．5 5 应存活
豚鼠350～500g 5 腹腔>4X105 5．O 42 应健存，解剖无结核病变
家兔 1.5～2.5kg 5 皮下皮内②>2X10s 9.0O．1×10 21 无异常，健存(4)逆转录病毒及其他内源性病毒或病毒核酸的检测
可采用下列方法对MCB细胞或WCB细胞以及增殖到或超过生产用体外细胞龄限制次
的细胞进行逆转录病毒的检测。
(PERT)或
②透射电镜检查收集待检细胞，个细胞，且细胞存活率应不低于99
小鼠来源和其他啮齿类来源的细胞系或其杂交瘤细胞系有可能携带潜在的逆转录病毒。因此，对于人一鼠杂交瘤细胞系则应进行特异性逆转录病毒检测。如用于单克隆抗体生产的小鼠细胞系，则可不检测特异性的逆转录病毒，但在生产工艺中应增加病毒灭活程序。
(5)特殊外源病毒因子的检测
应对MCB细胞或WCB细胞进行特殊病毒的检测。检测病毒的种类应根据细胞系／株种属、组织来源等确定。
如鼠源的细胞系，可采用小鼠、大鼠和仓鼠抗体产生试验，检测其种特异病毒。
人源的细胞系／株，则应检测如人鼻咽癌病毒、人巨细胞病毒、人逆转录病毒、人乙型肝炎病毒、人丙型肝炎病毒。在某些情况下，也可能进行转化病毒的检测，如人乳头瘤病毒、腺病毒及人单纯疱疹病毒。这些病毒的检测可采用适当的体外检测
技术。
5．致瘤性检查
、C127胞如Vero
将来源于
下述两种致肿瘤性试验方法可任选其一：
①裸鼠至少10只，将细胞悬浮于适量无血清培养基中，使细胞浓度为每lml含5×107个细胞，每只裸鼠皮下注射或肌内注射O．2ml；同时用Hela细胞或HeP-2细胞设立阳性对照，阳性对照组至少10只，每只注射0．2ml含106个细胞；可用人二倍体细胞株作为阴性对照，阴性对照组至少10只，每只注射0．2ml含107个细胞。
②新生小鼠(3～5日龄)，8～lOg小鼠10只，在出生后第0天、2天、7天和第14天，分别用O．1ml抗胸腺血清(ATS)或球蛋白处理，然后同上每只皮下接种107个活细胞。并设立阳性对照组，对照组至少接种10只。
结果判定：
①定期观察并触摸注射部位有无结节形成，且形成的任何结节均应进行双向测量并记录。
②阳性对照组至少有9
织学检查。
④未发生结节的动物，半数动物应观察12周，
(四)
"一、(二)细胞库的建立"中有关规定。
从冻存的WCB中取出一支或多支安瓿，混合后培养，传至一定代次后供生产用。其代次不得超过该细胞用于生产的最高限定代次。从WCB取出的细胞种子增殖的细胞不得再回冻保存或再用于生产。
体外培养细胞龄的计算
二倍体细胞龄以细胞群体倍增(PopulationDoubling)计算，以每个培养容器细胞群体细胞数为基础，每增加一倍作为一世代，即一瓶细胞传二瓶(1：2分种率)，再长满瓶为一世代；一瓶传四瓶(1：4)为二世代；一瓶传八瓶(1：8)则为三世代。生产用细胞龄限制在细胞寿命期限的前2／3内。
传代细胞系则以一定稀释倍数进行传代，每传一次为一代。
二、连续传代细胞系的特殊要求
的检定"
1．用于生产的细胞代次
代次，须经批准。
2
"一、(三)4．(1)细胞形态
三、人二倍体细胞株的特殊要求
新建的人二倍体细胞株必须具有以下资料：建立细胞株所用胎儿的胎龄和性别、终止妊娠的原因、所用胎儿父母的年龄、职业及健康良好的证明(医师出具的健康状态良好、无潜在性传染病和遗传性疾患等证明)，以及胎儿父系及母系三代应无明显遗传缺陷疾病历史的书面调查资料。
人二倍体细胞株应在传代过程的早期，选择适当世代水平(2～8世代)增殖出大量细胞，定量分装后，置液氮中或一130℃下冻存，供建立PCB之用，待全部检定合格后，即可正式定为PCB，供制备MCB用。
1．染色体检查及判定标准
新建人二倍体细胞株及其细胞库必须进行染色体检查。对于已建株的人二倍体细胞株，如WI-38、MRC-5、2BS、KMBl7等，在建立MCB时可不必进行细胞染色体检查。
(1)染色体检查
新细胞建株过程中，每8～12
连续培养过程中，至少应有4
每次染色体检查，应至少随机取1000
核型分析，并应粗数500
可用G50个中期细胞染色体带型，应用照相图片作出带型分析。
(2)判定标准
对1000个和500个中期细胞标本异常率进行检查，合格的上限(可信限90％Poison 法)如表2。
表2人二倍体细胞染色体分析标准
┏━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━┓
┃┃检查细胞数┃
┃异常┃┃
┃┃┃1000┃500┃100┃
┣━━━━━━━━━━━╋━━━━━╋━━━━╋━━━━┫
┃染色单体和染色体断裂┃47┃26┃8┃
┃结构异常┃17┃10┃2┃
┃超二倍体┃8┃5┃2┃
┃亚二倍体①┃180┃90┃18┃
┃多倍体②┃30┃17┃4┃
本重新计数。
②一个中期细胞内超过53
2．无菌检查
每8～12A）。
3
每8～12(附录ⅫB)。
4
二倍体细胞株传代过程中，至少对2个不同世代水平进行病毒包含体、乙型肝炎、丙型肝炎、EB病毒、艾滋病病毒检查等，结果应均为阴性。
5．致瘤性检查
每8～12世代应做一次致瘤性检查(方法见本规程"一、(三)5．致瘤性检查")，结果应无致瘤性。
6．生产过程细胞培养物检查
(1)染色体检查
可根据制品特性及生产工艺，确定是否进行生产过程中细胞培养物的染色体检查。通常，含有活细胞的制品或纯度不足的制品，应对所用细胞培养物进行染色体检查及评价(见本规程"三、1．染色体检查及判定标准")。但如采用已建株的人二倍体细胞生产，则不要求进行染色体核型检查。
(2)细胞鉴别试验
按本规程"一、(三)细胞库细胞的检定"
(3)无菌检查
按附录ⅫA进行，应符合规定。
(4)支原体检测
按附录ⅫB进行，应为阴性。
(5)
此批细胞的2％～5
(三)4．(1)细胞形态观察及红细胞吸附试验"和"的规定进行外源病毒污染检查。
重组细胞，系通过DNA重组技术获得的含有特定基生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程因序列的细胞系，因此重组细胞系的建立应具有细胞基质构建方法的相关资料，如细胞融合、转染、筛选、集落分离、克隆、基因扩增及培养条件或培养液的适应性等方面的资料。细胞库细胞的检查应按本规程"一、
(三)细胞库细胞的检定"的规定进行，但还应进行下述检查：
1．细胞基质的稳定性
生产者须具有该细胞系用于生产的目的基因的稳定性资料，包括重组细胞系的遗传稳定性、目的基因表达稳定性、目的产品持续生产的稳定性，以及一定条件下保存时细胞生产目的产品能力的稳定性等资料。
2．鉴别试验
除按本规程"一、(三)1．细胞鉴别试验"进行外，还应通过检测目的蛋白基因或蛋白进行鉴别试验。
3．重组细胞产物的外源病毒因子检测
应按本规程"一、(三)4．(1)
培养法检病毒因子"
子的检测。
五、原代细胞的要求
(一)
1．动物组织来源
应符合※※凡例"的有关要求。对各种动物都应有明确的健康状况和洁净级别要求。2．生产或检定用猴
多采用非洲绿猴、恒河猴等，我国以恒河猴为主。应为笼养或小群混养的正常健康猴。动物用于制备细胞前，应有6周以上的检疫期，检疫期中出现病猴或混入新猴，应重新检疫。从外面新引入猴群应做结核菌素试验及猴疱疹I型病毒(B病毒)的检查。
胎猴-肾可用于生产，对其母猴应进行检疫。
(二)原代细胞培养物检查
用于细胞制备的动物剖检应正常，取留的器官组织亦应正常，如有异常，不能用于制备细胞。
1．细胞培养原材料检查及细胞培养操作
按本规程"一、(二)1．原材料的选择"及"2·细胞培养操作的要求"进行。
2．细胞培养物检查
(1)细胞形态检查
异常和病变，否则不得用于生产。
(2)对照细胞检查
14天，并做下列各项检查，结果均应为阴性。
进行。
"一、(三)4．(1)细胞形态观察及红细胞吸附试验"和"(2)不同细胞传代培养法检测病毒因子"进行外源病毒污染检测。
④原代细胞培养物特定病毒检查。原代猴。肾细胞培养应检查SV40病毒、猴艾滋病毒和B病毒，应用Vero细胞或原代绿猴肾细胞、兔肾细胞检查。地鼠肾原代细胞应用BHK21细胞培养检查，观察细胞形态，如有可疑，应在同种细胞上盲传一代继续观察。
、*
细胞规程
生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程本规程适用于人用生物制品生产用动物细胞基质及检定用动物细胞，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。细胞基质系指可用于生物制品生产的所有动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。 生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。生产杂交瘤制品的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。 一、对生产用细胞基质总的要求 用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国务院药品监督管理部门批准。 （一）细胞系/株历史资料 1. 细胞系/株来源资料 应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。 人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及健康状况及病原体检测结果的相关资料。 动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、供体的一般健康状况及病原体检测结果的相关资料。 如采用已建株的细胞系/株，应具有细胞来源的证明资料。应从能够提供初始细胞历史及其溯源性书面证明材料的机构获得，且应提供该细胞在该机构的详细传代记录，包括培养过程中所使用的所有原材料的详细信息，如种类、来源、批号、生产日期及有效期、制备或使用方法、质量标准及检测结果等。 2．细胞系/株培养历史的资料 应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系/株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，外源插入序列，筛选细胞所进行的任何遗传操作或筛选方法、在动物体内传代过程以及细胞生长特征、培养液成分等。同时还应具有细胞鉴别、内源及外源因子检查结果的相关资料。
细胞库建立标准
细胞库建立概况 一、对细胞库细胞基质总的要求 (一)细胞系／株历史资料 1．细胞系／株来源资料 应具有细胞系／株来源的相关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。 人源细胞系／株须具有细胞系／株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。动物来源的细胞系／株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。 2．细胞系／株培养历史的资料 应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系／株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测结果的相关资料。 应提供细胞培养液的详细成分。如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量
保证的相关资料 。 (二)细胞库的建立 细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。 1．原材料的选择 建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相关规定。神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。 培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应符合规定(附录XIII D)。 不得使用人血清作为细胞培养液。如需使用人血白蛋白，则须使用有批准文号的合格制品。 消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。特别应检测胰蛋白酶来源的动物可能携带的病毒，如细小病毒等。 用于生物制品生产的培养物中不得使用青霉素或β- 内酰胺(β-Lactam)类抗生素。 2．细胞培养操作的要求 细胞培养生产人员应定期检查身体。在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物的操作；在同一工作日进行细胞操作前，不得操作或接触有感染性的微生物或动物。
细胞系或细胞株的建立
、概念、概念 1、细胞系（Cell Line）：原代培养舞经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。 2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finitecell strain）；如果可以连续传代，称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。 二、建立细胞系（或株）的要求 什么样的体外培养群可被认可为己鉴定的细胞，视具体情况而定，无统一规定。对于用作原代培养的细胞只要供体均一，取材部位及组织种类等条件稳定即可，如用做长期培养，特别是反复传代的细胞，常需做如下说明： 1、组织来源：细胞供体所属物种，来自人体或者动物； 个体性别、年龄；取材的器官或组织。 如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病历号等。 2、细胞生物学检测： 了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。 如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。 3、培养条件和方法；应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。 三、若干细胞建株的要点及基本过程 （一）肿瘤细胞培养技术要点 1、取材：材料主要来源于外科手术或活检瘤组织，取材时避免用坏死组织，要挑选瘤细胞集中和活力较好的部位，瘤性转移淋巴结或胸腹水是较好的培养材料。取材后尽快培养，因故不能立即培养者，可冻存。其培养方法及冻存方法同前述正常组织。 2、成纤维细胞排除：在肿瘤组织中常混杂有一些成纤维细胞，培养时能与瘤细胞同时生长，并常压过癌细胞，导致癌细胞生长受阻以至消失，应仔细排除。 排除方法常有：机械刮除法、反复贴壁法、消化排除法、胶原酶消化法等。 3、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率 根据实验经验，肿瘤细胞在体外不易培养，建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。一般当肿瘤组成或细胞被原代培养后，要经过对新环境的适应才能生长，因此不能局限于一般培养法，须采用一些特殊措施。如：用适宜底物，鼠尾胶原底层及饲细胞底层等。用细胞生长因子，根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子，如胰岛素、氢化可的松，雌激素等。也可以考虑动物媒介培养。 （二）人类淋巴母细胞建株方法 l、4ml肝素抗凝血于离心管中，加入2ml RPMI 1640。 2、混匀后沿管壁缓慢加到预置有4ml淋巴细胞分离液的液面上静置30min。 3、1500rpm，15min，吸取白细胞层（第二层）于另一离心管中。 4、加RPMI 1640 5ml洗涤白细胞两次。 5、将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl的EBV（EB病毒）液，混匀。 6、水浴摇床，40次/分，37℃，3hr。 7、1500rpm，15min。将细胞接种至1ml培养基中（内含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl环胞霉素，轻轻混匀，37℃培养。 8、5天后观察细胞转化和生长情况，决定是否半量换液。一般半量换液l—2次，并维持环胞霉素的浓度。
细胞培养标准流程
细胞间基本规定 每次操作结束后开启超净台紫外（30 min）和房间大紫外（30 min）。 显微镜开启使用后将光调暗，最后一个操作者将显微镜关闭。 超净台用完收拾干净，移液器、盒子等摆放整齐。 带走空盒子、细胞圆盘以及封口膜等任何因你而产生的垃圾。 细胞培养盘至少需备注：所属者，细胞系名称 细胞间冰箱内物品至少需备注：所属者，物品名称。基培需写上开启时间。 细胞培养标准流程 1、细胞换液、传代（以圆盘培养为例） Note：所有用于培养细胞的液体均需提取20-30分钟从冰箱取出恢复到室温或置于37℃的水浴箱内。所有物品（包括双手）进入安全柜之前要酒精消毒。 步骤：1.观察：高倍镜下观察细胞状态、密度以及是否染菌 2.弃旧：细胞生长融合达90%时，吸出培养基 3.漂洗：PBS（2mL）漂洗1-2次 4.消化：加入1ml%胰蛋白酶，轻轻晃动圆盘让所有细胞接触到胰酶，后吸去胰酶计时CO 放置40s-1min,，轻轻拍打圆盘侧壁促使细胞脱壁。 2 5.终止：吸弃胰酶后加入2ml含10%FBS的完全培养基终止消化。 6.吹悬：轻轻吹打混匀，(倒置显微镜下观察细胞完全脱壁，呈卵圆形)，吹打成单细胞悬液后按1：2 或1：3 比例传代接种于新培养皿。再加入10ml全培。（大盘10ml全培，小盘6ml全培） （细胞生长快留30%，慢40%-50%；其余细胞可提取蛋白或RNA） 7.培养：每天或每两天更换一次培养基，直至细胞生长至融合时再次进行传代，每日在倒置显微镜下观察细胞形态及生长情况。 PS:六孔板一般加培养基2300μL/孔。 2、细胞转染
TurboFect 转染试剂转染（用于质粒的转染，说明书附后） 细胞接板24 h 后转染。转染时细胞密度需达到70-90%。 以6 孔板为例，转染前细胞先换液，加4ml全培。 取 ml 离心管，加入400 μL 无血清无双抗DMEM 培养液，加入质粒2 μg，混匀后静置5 min，再转染试剂4 μL，混匀（转染试剂是质粒的2倍），室温静置15－20 min。 (转染试剂需加在培养液中部，切忌勿贴壁;静置时间不可超过20 min） 无血清无双抗DMEM量＝全培体积的10％。如6孔板加4mL培养液培养，即转染体系为400ul无血清无双抗DMEM。 缓慢均匀加到培养液后，轻轻晃动圆盘，使其均匀分布。 转染后6h后细胞换液，排除试剂的毒性影响。 24～48 h 后收集细胞用于后续实验。 Note：如果用这种方法转染效率一直不佳，可以在接种细胞前，把转染试剂配好，把转染试剂加到培养盘上，再把细胞接种上。该方法不适用所有细胞，这种方法会导致细胞死亡，不贴壁。 HiPerFect转染试剂转染（用于siRNA的转染，说明书附后） For transfection of eukaryotic cells with siRNA and miRNA 以6 孔板为例，转染之前，以2mL全培接种×105细胞于6孔板每孔。 将细胞放置在培养箱中培养，直至转染。（前50%---染90%） 取 ml 离心管，加入100 μL 无血清无双抗DMEM 培养液，加入 siRNA(20uM浓度，相当于μL)5uL,转染试剂12μL，轻轻混匀，室温 静置5-10 min。 siRNA：转染试剂：无血清无双抗DMEM 5uL：12ul：100ul。（比例待定） 将步骤3混合液缓慢均匀加到培养液后，轻轻晃动圆盘，使其均匀分布。 24～48 h 后收集细胞用于后续实验。
喜格干细胞库建设之管理规范
《人间充质干细胞库建设与管理规范》 DB33/T2030—2017 SICOLAB干细胞库建设之管理规范 范围：人间充质干细胞库、胎盘组织造血干细胞库的建设、操作规范、质量管理的基本方法。适用：人间充质干细胞库、胎盘组织造血干细胞库建设与管理。 1、人员要求与管理 ①负责新生儿脐带、胎盘样本采集人员为经过严格专业培训的护士或助产士职称以上卫生专业技术人员并经过考核合格者。 ②干细胞库应设质量授权人一职，由法人授权，任职资质应符合《药品生产质量管理规范（GMP）》要求，主要承担细胞产品放行的职责，确保每批已放行产品的生产、检验和储存均符合质量标准。 ③干细胞库应设细胞库主任一职，由法定代表人担任或授权，保证干细胞库日常工作按规范运行，库主任应具有生物学或医学相关专业硕士以上学历，三年以上行业质量管理工作经验。干细胞库主任下设技术主管和质控主管，其中质控主管应具备药学、医学或生物学本科以上学历，在质量管理方面有丰富的经验。技术主管应具备具有生物学或医学相关专业本科以上学历，在生产管理方面有丰富经验。 ④负责干细胞制备、深低温冻存及复苏的技术人员应具有制剂基本知识、生物安全知识、GMP理论基础和至少1年以上细胞培养工作经历，同时应具有生物学或相关专业大专以上学历。 ⑤负责干细胞质量控制人员应具有制剂基本知识、质量管理和GMP理论基础，有医学检验或药企质量相关工作经验，同时应具有生物学或医学检验相关专业本科以上学历。 2、人员培训与考核 ①干细胞库工作人员上岗前应经过专业培训，培训形式应包含内部培训与外部培训。内容包括但不限于干细胞理论与实践、生命伦理、干细胞法律法规、GMP管理、制剂基本知识、细胞培养基础、生物安全、仪器设备使用与维护方法、物料管理与清洁卫生、干细胞库管理、岗位职责、操作规范等内容，外部培训经由相关行政部门组织，所有培训需经考试合格并取得相关资质后由干细胞库主任批准方可上岗。 ②干细胞库工作人员每年应按计划接受培训并参与考核。考核未通过者，应重新接受培训，考核合格后由干细胞库主任批准后方可再次上岗。 ③干细胞库工作人员培训及考核结果应有相关档案记录。 3、人员出入制度 ①人干细胞库工作区域应建立实验室人员及外来人员准入制度，并建立相应人员准入登记记录制度。细胞库设立门禁系统，非实验室工作人员须经干细胞库主任审批后，由指定工作人员陪同进入实验室，未经许可不得随意触碰仪器设备、翻阅文件记录、拍照或携带物品进出。
细胞库建立标准
细胞库建立概况 一、对细胞库细胞基质总得要求 (一）细胞系/株历史资料 1.细胞系/株来源资料 应具有细胞系/株来源得相关资料,如细胞系/株制备机构得名称,细胞系／株来源得种属、年龄、性别与健康状况得资料。这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献. 人源细胞系／株须具有细胞系/株得组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况得相关资料。动物来源得细胞系／株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体得一般生理状况得相关资料。 ２。细胞系／株培养历史得资料 应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系/株过程得相关资料，包括所使用得物理、化学或生物学手段，就是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行得任何遗传操作或选择方法等。同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测结果得相关资料。 应提供细胞培养液得详细成分。如使用人或动物源成分,如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其她生物学活性得物质,应具有这些成分得来源、制备方法、质量控制、检测结果与质量保证得相关资料 . (二)细胞库得建立 细胞库得建立可为生物制品得生产提供已标定好得、细胞质量相同得及能持续稳定传代得细胞种子。 1。原材料得选择 建立细胞库得各种类型细胞得供体均应符合细胞库细胞得检定中相关规定。神经系统来源得细胞不得用于生物制品生产. 培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区得健康牛群，其质量标准应符合规定(附录XIIＩD)。 不得使用人血清作为细胞培养液。如需使用人血白蛋白,则须使用有批准文号得合格制品。 消化细胞用胰蛋白酶应进行检测,证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。特别应检测胰蛋白酶来源得动物可能携带得病毒,如细小病毒等。 用于生物制品生产得培养物中不得使用青霉素或β-内酰胺（β—Lactａｍ)类抗生素。 2。细胞培养操作得要求 细胞培养生产人员应定期检查身体。在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物得操作;在同一工作日进行细胞操作前,不得操作或接触有感染性得微生物或动物。 3.建立细胞库 细胞库为三级管理,即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库．如为引进得细胞，可采用主细胞库与工作细胞库组成得二级细胞库管理．在某些特殊情况下,也可使用主细胞库一级库,但须得到国务院药品监督管理部门得批准。 (1）原始细胞库(PCB) 由一个原始细胞群体发展成传代稳定得细胞群体，或经过克隆培养而形成得均一细胞
细胞传代标准化步骤
细胞传代标准化步骤 Last revised by LE LE in 2021
细胞传代标准化流程： 穿戴好白大褂和手套，用75%酒精擦手； 1、取出细胞，显微镜下观察细胞形态和密度，确定细胞生长状况，是否需要传代或换液； 2、将培养基（如有需要还有血清和大瓶高糖培养基）、PBS、胰酶培养基等预热及超净台消毒 结束后，将试剂及细胞等喷酒精后移入超净台，将废液缸喷足酒精移入超净台，取酒精棉放入超净台； 3、点燃酒精灯，将瓶口拧松，过火消毒； 4、在确定细胞生长状况良好且没有污染的情况下，将培养皿中的培养基取（大培养皿6ml， 中培养皿3ml）至一个新的15ml离心管中；（一个1ml枪头） 5、用适量PBS清洗细胞表面（大皿5ml，中皿3ml），并弃去PBS；（一个5ml枪头） 6、加入适量胰酶消化细胞（大皿1ml，中皿0.5ml），此时可将细胞置于37°C细胞培养箱内 消化；（C2C12用5min，3T3-L1用1.5min），（一个1ml枪头） 7、待消化完全后，用胰酶6倍体积的完全培养基中止消化，并吹打培养皿皿底，将细胞移入 离心管；（一个5ml枪头） 8、1000rpm，5min离心，离心间隙可以准备好传代的细胞培养皿，并加好培养基； 9、弃上清，口擦酒精，烧口； 10、加适量完全培养基吹打混匀细胞(沿壁轻轻吹打24次左右)，按合适比例进行细胞传 代，在盖上标记好细胞名称、代数及传代日期并放入孵箱。（一个1ml枪头） 11、将所有试管收至冰箱，将废液缸及废液取出，装至一次性PE手套，废液缸喷酒精清洗 12、用酒精棉仔细擦拭操净台表面，检查显微镜、离心机是否关闭，孵箱是否正常； 13、做试验记录，打开超净台和细胞间紫外，15min后关闭
人类间充质干细胞库建设与管理规范
SZDB/Z 126—2015 I SZDB/Z 深 圳 市 标 准 化 指 导 性 技 术 文 件 人类间充质干细胞库建设与管理规范 2015 - 02 -06发布 2015-03 -01实施 深圳市市场监督管理局 发布 ICS 07.080 C 04 SZDB/Z 126-2015
SZDB/Z 126—2015 II 目次 前言................................................................................. I II 1 范围 (1) 2 规范性引用文件 (1) 3 术语和定义 (1) 4 生命伦理 (4) 5 人类间充质干细胞库建设 (4) 6 机构设置 (5) 7 操作规范 (6) 8 安全管理 (10) 附录A（资料性附录）供者健康信息采集 (16) 附录B（资料性附录）人类间充质干细胞样本编码规则 (17) 附录C（资料性附录）人类间充质干细胞库整体的操作流程 (18) 参考文献 (19)
SZDB/Z 126—2015 III 前言 本指导性技术文件按GB/T 1.1–2009给出的规则起草。 本标准由深圳市经济贸易和信息化委员会归口。 本标准负责起草单位：深圳华大基因研究院。 本标准主要起草人：周欣、张勇、张曦、冀旭、燕舞、林洁璇、张家文、黄海军、彭冬秀、孙长斌、 杨阳、黎苑杰。 本标准为首次发布。
SZDB/Z 126—2015 人类间充质干细胞库建设与管理规范 1 范围 本标准规定了人体来源间充质干细胞库相关的生命伦理、间充质干细胞库建设、机构设置、操作规范和安全管理的基本方法。 本标准适用于人体来源间充质干细胞库的建设与管理规范。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本 适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 1.1-2009 标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写 GB 2894-2008 安全标志及其使用导则 GB/T 5458-2012 液氮生物容器 GB 7000.2-2008 应急照明灯具安全要求 GB/T 12905-2000 条码术语 GB 13690-2009 化学品分类和危险性公示通则 GB 15258 化学品安全标签编写规定 GB/T 17172-1997 417 条码 GB/T 18347-2001 128 条码 GB/T 18883-2002 室内空气质量标准 GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求 GB 19652-2005 放电灯（荧光灯除外）安全要求 GB/T 20269-2006 信息安全技术信息系统安全管理要求 GB/T 22278-2008 良好实验室规范原则 GB/T 27025-2008 检测和校准实验室能力的通用要求 GB 50016-2006 建筑设计防火规范 GB 50034-2004 建筑照明设计标准 GB 50052-2009 供配电系统设计规范 GB 50140-2005 建筑灭火器配置设计规范 GB 50346-2012 实验室建筑技术规范 GB 50351-2005 储罐区防火堤设计规范 AQ 3013-2008 危险化学品从业单位安全标准化通用规范 CNAS-CL05-2009 实验室生物安全认可准则 MH/T 1019-2005 民用航空危险品运输文件 WS/T 224-2002 真空采血管及其添加剂 WHO Third Edition 实验室生物安全手册 3 术语和定义 1
细胞库建立准则
精心整理 细胞库建立概况 一、对细胞库细胞基质总的要求 (一)细胞系／株历史资料 1．细胞系／株来源资料 应具有细胞系／株来源的相关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株来也可引用正式发表文献。 状况的相关资料。 2 应提供细胞培养液的详细成分。如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的相关资料 。 (二)细胞库的建立
细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。 1．原材料的选择 建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相关规定。神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。 培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应 符合规定(附录XIIID)。 格制品。 2．细胞培养操作的要求 动物。 3 细胞库为三级管理，即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库。如为引进的细胞，可采用主细胞库和工作细胞库组成的二级细胞库管理。在某些特殊情况下，也可使用主细胞库一级库，但须得到国务院药品监督管理部门的批准。 (1)原始细胞库(PCB) 由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产或检定。在特定条件下，将一定数量、
成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于安瓿，于液氮或一130℃以下冻存，即为原始细胞库，供建立主细胞库用。 (2)主细胞库(MCB) 取原始细胞库细胞，通过一定方式进行传代、增殖后均匀混合成一批，定量分装，保存于液氮或一130℃以下。这些细胞必须按其特定的质控要求进行全面检定，全部合格后即为主细胞库，供建立工作细胞库用。 (3)工作细胞库(WCB) 工作细胞库的细胞由MCB 或一130℃以下备用，即为工作细胞库。 生产。 4．细胞库的管理 冻存的细胞存活率应在90％以上。冻存后的细胞，应至少做一次复苏培养并连续传代至衰老期，检查不同传代水平的细胞生长情况。 主细胞库和工作细胞库分别存放。非生产用细胞应与生产用细胞严格分开存放。(三)细胞库细胞的检定
深圳综合细胞库设计建设SICOLAB
综合细胞库设置和管理规范 SZDB/Z266—2017 深圳综合细胞库设计建设标准引用——喜格SICOLAB GB/T5458-2012液氮生物容器 GB/T18442.3-2011固定式真空绝热深冷压力容器第3部分:设计 GB19489-2008实验室生物安全通用要求 GB/T20269-2006信息安全技术信息系统安全管理要求 GB/T20801.4-2006压力管道规范工业管道第4部分:制作与安装 GB/T20988-2007信息安全技术信息系统灾难恢复规范 GB/T22239-2008信息安全技术信息系统安全等级保护基本要求 GB50034-2013建筑照明设计标准 GB/T50174-2008电子信息系统机房设计规范 GB50243-2002通风与空调工程施工质量验收规范 SN/T2294.5-2011检验检疫实验室管理第5部分:危险化学品安全管理指南 SZDB/Z188-2016细胞制备中心建设与管理规范 深圳综合细胞库设计建设及管理要求——喜格SICOLAB 一、总体原则 1、设计建造应符合GB19489-2008第5章的要求。（地形、地质、水文条件、占地面积、周围环境、交通状况等应满足建筑安全及使用要求） 2、应满足样本储存和样本信息储存等功能的要求。（提供镜像保存服务的应在异地设立镜像储存库） 3、功能分区 ①细胞库总体平面布局应清晰合理，宜设置行政办公区域、样本库区域、档案存放区域、机房区域（电子信息储存），且各区域相互独立，不应交叉混合使用。 ②样本库区域应根据使用需求和样本储存条件进行功能分区，应能够防止混淆、差错和交叉污染。 至少包括： ——样本接收区（包含暂存区）； ——样本-80℃储存区； ——样本-150℃深低温储存区； ——气体储存区； ——物料储存区。 二、场地与设施 1、样本库环境要求 ——通风应符合GB50243-2002的要求；
车间菌种库的建立
对来自车间的营养琼脂平板进行分离纯化以求得纯种菌株 分离纯化 含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物（Mixed culture）。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。 １、倾注平板法 首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40~50°左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。（图３，a） 图３倾注平板法（a）涂布平板法（b）图解 1.菌悬液 2.熔化的培养基 3.培养物 4.无菌水 ２、涂布平板法 首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图３－５，b） ３、平板划线法 最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。（图4）当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，最后在所划的线上分散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。（图4） ４、富集培养法
富集培养法的方法和原理非常简单。我们可以创造一些条件只让所需的微生物生长，在这些条件下，所需要的微生物能有效地与其他微生物进行竞争，在生长能力方面远远超过其他微生物。所创造的条件包括选择最适的碳源、能源、温度、光、pH、渗透压和氢受体等。在相同的培养基和培养条件下，经过多次重复移种，最后富集的菌株很容易在固体培养基上长出单菌落。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。通过多次重复移种便可以得到纯的寄生菌。 图4 平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 ５、厌氧法 在实验室中，为了分离某些厌氧菌，可以利用装有原培养基的试管作为培养容器，把这支试管放在沸水0浴中加热数分钟，以便逐出培养基中的溶解氧。然后快速冷却，并进行接种。接种后，加入无菌的石蜡于培养基表面，使培养基与空气隔绝。另一种方法是，在接种后，利用N2或CO2取代培养基中的气体，然后在火焰上把试管口密封。有时为了更有效地分离某些厌氧菌，可以把所分离的样品接种于培养基上，然后再把培养皿放在完全密封的厌氧培养装置中。 我们采用的是平板划线分离法，具体步骤如下 1倒平板 2划线 3培养：将划线后的平板至于34.5度下培养，初步筛选，此后镜检是否为单一微生物，若有杂菌，继续分离纯化。 纯化后的菌株就可以进行菌种鉴定了
细胞库建立标准样本
细胞库建立概况 一、对细胞库细胞基质总规定 (一)细胞系／株历史资料 1．细胞系／株来源资料 应具备细胞系／株来源有关资料，如细胞系／株制备机构名称，细胞系／株来源种属、年龄、性别和健康状况资料。这些资料最佳从细胞来源实验室获得，也可引用正式刊登文献。 人源细胞系／株须具备细胞系／株组织或器官来源、种族及地区来源、年龄、性别及生理状况有关资料。动物来源细胞系／株须具备动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地区来源、年龄、性别、病原体检测成果及供体普通生理状况有关资料。 2．细胞系／株培养历史资料 应具备细胞分离办法、细胞体外培养过程及建立细胞系／株过程有关资料，涉及所使用物理、化学或生物学手段，与否有外源添加序列，以及细胞生长特性、生长液成分、选取细胞所进行任何遗传操作或选取办法等。同步还应具备细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测成果有关资料。 应提供细胞培养液详细成分。如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其她生物学活性物质，应具备这些成分来源、制备办法、质量控制、检测成果和质量保证有关资料 。 (二)细胞库建立 细胞库建立可为生物制品生产提供已标定好、细胞质量相似及能持续稳定传代细胞
种子。 1．原材料选取 建立细胞库各种类型细胞供体均应符合细胞库细胞检定中有关规定。神经系统来源细胞不得用于生物制品生产。 培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区健康牛群，其质量原则应符合规定(附录XIII D)。 不得使用人血清作为细胞培养液。如需使用人血白蛋白，则须使用有批准文号合格制品。 消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。特别应检测胰蛋白酶来源动物也许携带病毒，如细小病毒等。 用于生物制品生产培养物中不得使用青霉素或β- 内酰胺(β-Lactam)类抗生素。 2．细胞培养操作规定 细胞培养生产人员应定期检查身体。在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物操作；在同一工作日进行细胞操作前，不得操作或接触有感染性微生物或动物。 3．建立细胞库 细胞库为三级管理，即原始细胞库、主细胞库及工作细胞库。如为引进细胞，可采用主细胞库和工作细胞库构成二级细胞库管理。在某些特殊状况下，也可使用主细胞库一级库，但须得到国务院药物监督管理部门批准。 (1)原始细胞库(PCB) 由一种原始细胞群体发展成传代稳定细胞群体，或通过克隆培养而形成均一细胞群体，通过检定证明合用于生物制品生产或检定。在特定条件下，将一定数量、成分均一细胞悬液，定量均匀分装于安瓿，于液氮或一130℃如下冻存，即为原始细胞库，供建立主细胞库用。
学校、幼儿园健康细胞创建标准
附件3 健康学校评价标准（试行） 前提条件：开设健康教育课、符合无烟学校标准、无集体性食物中毒和安全事故发生。 1.将健康促进学校工作纳入学校重点工作，公开承诺并呼吁全体师生共同参与健康促进学校建设。 2.成立健康促进学校工作领导小组，校长是第一责任人，明确相关职能部门职责。设专人负责，定期接受培训，做好计划和总结。 3.制定促进师生健康的政策、规章制度和管理措施，包括校内禁烟、饮水和食品安全、健康教育课、体育活动、体检和预防接种、健康帮扶等内容。 4.学校设立卫生室或保健室，配备专业技术人员或保健教师，定期接受培训。 5.开设高质量的健康教育课程，保障学生体育锻炼时间和强度，开展健康教育主题活动，提高师生健康素养和身体素质。 6.为学生提供充足卫生的饮水和合理的营养膳食。 7.开展健康管理和疾病防控工作，定期组织体检，对传染病、学生常见疾病和多发疾病开展监测和管理。 8.校园环境符合无烟学校参考标准，教学和生活建筑质量、教室黑板和课桌椅设置符合国家有关标准，有足够使用的卫生厕所和洗手设施。 9.师生互尊互爱，开展心理健康主题活动，促进学生潜能发展，营造良好的社会人文环境。 10. 加强学校与家庭的健康互动，积极争取当地政府对学 - 1 -
校健康工作支持。 - 2 -
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健康促进学校建设的前提条件。 - 5 -
附件7 健康托幼机构评价标准（试行）前提条件：符合无烟标准、无集体性食物中毒和安全事故发生。 1、成立健康促进幼托机构工作领导小组，园长是第一责任人。设专兼职人负责，定期接受培训，做好计划和总结，落实“健康建设目标责任制”。 2、制定促进师生健康的政策、规章制度和管理措施，包括园内禁烟、饮水和食品安全、体育活动等内容。 3、幼托机构园内建筑物、户外场地、绿化用地、卫生厕所和盥洗室等卫生环境和水杯、毛巾、床位和被褥等个人卫生用品符合国家有关标准。 4、落实食品安全制度，为儿童提供合理的营养膳食。 5、开展多形式健康教育活动，定期向家长、保教人员及幼儿进行健康教育。 6、儿童入园体检率、保教人员每年健康体检率均达到100%。 7、建立10项卫生保健制度，符合实际情况，操作性强。 8、设立卫生室或保健室，配备符合国家规定的卫生保健人员，定期接受培训。 9、开展疾病防控和常见病管理工作，对传染病、儿童常见疾病和多发疾病开展监测和管理，儿童基础免疫全程接种率达100%。 10、开展儿童心理行为保健工作，促进儿童身心健康发展，营造良好的社会人文环境。 6
细胞实验室建设要求和布局
细胞实验室主要是在合适的温湿度、光照度、PH值、洁净度的环境下研究培养出来的细菌。主要是运用于医学领域。 细胞实验室的建设要求： 一、基本要求 1、总建筑面积宜不小于1000m2。 2、洁净区使用面积宜不小于500m2。 3、洁净室的净高度应在2.5-2.8m之间。 二、总体布局 1、总体平面布局应符合GB19489、GB50333、GB50346、GB50457的要求。 2、洁净区各室布局应清晰合理，不应交叉混合使用，且应符合人、物分流的原则。 3、人流通道、洁净区入口应设缓冲室。 4、废物、污染物需设置专用传递窗。 5、传递窗送风方式应采用上送侧回的方式。 6、通道门的开启方向应由低洁净级向高洁净级的方向开启。 7、所有洁净区不应安装水池和地漏。（除更衣室外） 三、环境要求
1、环境设计应符合GB19489、GB50346、GB50457、《药品生产质量管理规范》和AABB的要求。 2、洁净区的环境技术指标应符合要求： 3、空气洁净度等级划分应符合要求； 4、二更、缓冲、细胞制备区、细胞培养区的空气洁净度应符合表1中的C级。细胞制备操作相关区域的空气洁净度至少应在C级背景下的A级环境中进行； 5、温度应控制在22±4℃，湿度应控制在45%～65%为宜； 6、洁净区与非洁净区之间、不同空气洁净度的洁净区之间的压差应＞10Pa。洁净区内不同功能及级别房间之间宜保持适当的压差梯度，以防止污染和交叉污染； 7、总送风量中（非单向流）应有10%～30%的新风量； 8、噪声级（空态）应≤65dB(A)； 9、般照明的照度值宜＞300LX，对照度有特殊要求的区域（细胞产品灯检区）应设置局部照明。
细胞制备中心建设与管理规范
ICS 07.080 A40SZDB/Z 深圳市标准化指导性技术文件 SZ DB/Z 188-2016 细胞制备中心建设与管理规范 Specifications for establishment and management of cellular therapy product manufacturing facility 2016-06-14发布2016-07-01实施深圳市市场监督管理局发布
SZDB/Z 188-2016 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 (1) 2 规范性引用文件 (1) 3 术语和定义 (1) 4 建设要求 (2) 4.1 总体原则 (3) 4.2 功能分区 (3) 4.3 建筑要求 (3) 4.4 环境要求 (4) 4.5 装修装饰要求 (4) 4.6 设施设备要求 (4) 4.7 细胞储存区要求 (6) 5 中心设置和人员要求 (6) 5.1 设置原则及要求 (6) 5.2 关键人员职责及能力要求 (6) 6 管理要求 (7) 6.1 人员管理 (7) 6.2 设备管理 (8) 6.3 物料管理 (9) 6.4 过程控制 (10) 6.5 标签与编码管理 (11) 6.6 细胞产品管理 (11) 6.7 运输和转运 (12) 6.8 不合格细胞产品的处理和废弃 (13) 6.9 安全管理 (13) 6.10 信息化管理 (14) 附录A（资料性附录） 中心设施设备配置 (15) 附录B（规范性附录） 仪器设备的技术特征及要求 (17) I