分离纯化复习

选择：

1. 适合于亲脂性物质的分离的吸附剂是（B )。

A.活性炭

B.氧化铝

C.硅胶

D.磷酸盐

2. 凝胶色谱分离的依据是（B )。

A.固定相对各物质的吸附力不同

B.各物质分子大小不同

C.各物质在流动相和固定相中的分配系数不同

D.各物质与专一分子的亲和力不同

3. 超滤膜通常不以其孔径大小作为指标，而以截留分子量作为指标。所谓"分子量截留值" 是指阻留率达(B )的最小被截留物质的分子量。

A.80%以上

B.90%以上

C.70%以上

D.95%以上

4. 进行梯度洗脱，若用50g吸附剂，一般每份洗脱液量常为（C )

A. 20ml

B.100ml

C. 50ml

D. 90ml

5. 常用的紫外线波长有两种（B )

A. 256nm和365nm

B.254nm和365nm

C. 254nm和367nm

D. 256nm和367nm

6关于用氢键形成来判断各类溶剂互溶规律，下列（A )项是正确的叙述。

A氢键形成是能量释放的过程，若两种溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则有利于互溶。

B氢键形成是能量吸收的过程，若两种溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则有利于互溶。

C氢键形成是能量释放的过程，若两种溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则不利于互溶。

D氢键形成是能量吸收的过程，若两种溶剂混合后形成的氢键增加或强度更大，则不利于互溶。

7. 关于萃取下列说法正确的是（C )

A.酸性物质在酸性条件下萃取B碱性物质在碱性条件下萃取

C.两性电解质在等电点时进行提取

D.两性电解质偏离等电点时进行提取

8. 颗粒与流体的密度差越小，颗粒的沉降速度（A )

A.越小

B.越大

C.不变

D.无法确定

9. 纯化酶时，酶纯度的主要指标是：（D )

A.蛋白质浓度

B.酶量

C.酶的总活力

D.酶的比活力

10. 非对称膜的支撑层（C )。

A.与分离层材料不同

B.影响膜的分离性能

C.只起支撑作用

D.与分离层L径相同

11. 在蛋白质初步提取的过程中，不能使用的方法（C )。

A.双水相萃取

B.超临界流体萃取

C.有机溶剂萃取

D.反胶团萃取

12. HPLC是哪种色谱的简称（C )。

A.离子交换色谱

B.气相色谱

C.高效液相色谱

D.凝胶色谱

13. 那一种凝胶的孔径最小（A )

A. Sephadex G-25

B.Sephadex G-50

C.Sephadex G-100

D.Sephadex G-200

14. 蛋白质溶液进行有机溶剂沉淀，蛋白质的浓度在（A )范围内适合。

A.0.5%?2%

B.l%?3%

C.2%?4%

D. 3%?5%

15. 下列哪项不属于发酵液的预处理：（D )

A.加热

B.调pH

C.絮凝和凝聚

D.层析

16. 超临界流体萃取中，如何降低溶质的溶解度达到分离的目的（C )

A.降温B升髙压力 C.升温 D.加入夹带剂

17. 离子交换剂不适用于提取（D )物质。

A.抗生素

B.氨基酸

C.有机酸

D.蛋白质

18. 离子交换用的层析柱直径和柱长比一般为（B )之间

A.1:10-1:20

B.1:10-1:50

C.1:10-1:30

D.1:20-1:50

19. 工业上常用的过滤介质不包括（D )

A.织物介质

B.堆积介质

C.多孔固体介质

D.真空介质

20. 微孔膜过滤不能用来（D )

A.酶活力测定

B.mRNA的测定及纯化

C.蛋白质含量测定

D.分离离子与小分子

21. 在高效液相色谱中,下列哪种检测器不适合于在梯度洗脱时使用. （D )

A.紫外检测器

B.荧光检测器

C.蒸发光散射检测器

D.示差折光检测器

22.超滤技术常被用作（C )

A.小分子物质的脱盐和浓縮B小分子物质的分级分离C.小

分子物质的纯化 D.固液分离

23. 在超滤过程中，主要的推动力是（C )

A、浓度差

B、电势差

C、压力

D、重力

填空：

1.等电点沉析注意事项：等电点的改变、目的物的稳定性、盐溶作用、pH的调节。

2.中药有效成分提取常用方法：溶剂提取法P38、超临界CO2流体萃取法P89、超声波协助浸取技术P59、微波协助浸取技术P57。

3.膜分离中，按膜粒子大小的分类：微滤、超滤、纳滤和反渗透。（P243）

4.分子印迹反应聚合物的制备过程：模板分子与功能单体产生相互作用、交联反应、印迹分子的去除。

5.常用离心设备分为两类：沉降离心机、过滤离心机

6.结晶形成的三个过程：过饱和溶液的形成、晶核的形成及晶体的生长。

7.影响微波浸取的因素：溶剂、温度和压力、微波功率和萃取时间、物料的含水量、溶液的

pH。（P56）

8.液-液萃取从机理上分为：物理萃取、化学萃取（P7-9）

9.根据干燥曲线，物料干燥分为哪两阶段：恒速干燥和降速干燥

10. 分子筛色谱主要应用领域：P127凝胶色谱分离技术、P155大孔吸附树脂分离技术。

。

名词解释：

1.SBE提取：综合运用了化学仿生与医学仿生的原理，又将整体药物研究与分子药物研究法相结合，从生物药剂学的角度，模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原理，为经消化道给药的中药制剂设计的一种新的提取工艺。（P64）

2.反渗透：1.在只有溶剂能通过的渗透膜的两侧，形成大于渗透压的压力差，就可以使溶剂发生倒流，使溶液达到浓缩的效果，这种操作成为反渗透 2. 当外加压力大于渗透压时，水将从溶液一侧向纯水一侧移动，此种渗透称之为反渗透。

33.吸附：当流体与多孔固体接触时，流体中某一组分或多个组分在固体表面处产生积蓄，此现象称为吸附。

34.生物分离技术：是指从动植物与微生物的有机体或器官、生物工程产物（发酵液、培养液）及其生物化学产品中提取、分离、纯化有用物质的技术过程。

35.CM-Sephadexc-50:即羧甲基纤维素，是弱酸性阳离子交换剂，吸水量为每克干胶吸水五克。

36.真空冷冻干燥：也称冷冻干燥，简称冻干，是将物料冻结到共晶点温度（将物料全部冻结时的温度）以下，在真空条件下，使制品中的水分直接由固态升华为气态并被移走，从而获得干燥产品的一种干燥方法。

37.色谱技术：是一组相关分离方法的总称，色谱柱的一般结构含有固定相（多孔介质）和流动相，根据物质在两相间的分配行为不同（由于亲和力差异），经过多次分配（吸附-解吸-吸附-解吸...），达到分离的目的。

38.超临界流体：超临界流体是状态超过气液共存时的最高压力和最高温度下物质特有的点——临界点后的流体。

39.离子交换：利用离子交换树脂作为吸附剂，将溶液中的待分离组分，依据其电荷差异，依靠库仑力吸附在树脂上，然后利用合适的洗脱剂将吸附质从树脂上洗脱下来，达到分离的目的。离子交换法：利用溶液中带电粒子与离子交换剂之间结合力的差异而进行的分离纯化方法。

40.离心过滤：使悬浮液在离心力场作用下产生的离心力压力，作用在过滤介质上，使液体通过过滤介质成为滤液，而固体颗粒被截留在过滤介质表面，从而实现固液分离的目的。是离心与过滤单元操作的集成，分离效率更髙。

1.超滤：凡是能截留相对分子量在500以上的高分子膜分离过程称为超滤，它主要是用于从溶剂或小分子溶质中将大分子筛分出来。

2.超声波提取（supersonic wave extraction SWE ）：利用超声波具有的机械效应、空化效应及热效应，通过增大溶剂（介质）分子的运动速度，增大溶剂的穿透力，提取中药中有效成分

的方法。

简答题：

41.分子蒸馏技术的优点（5个）？

1）操作温度低2）真空度高3）受热时间短4）分离能力高5）不可逆过程。42.简述结晶过程中晶体形成的条件？

结晶过程包括过饱和溶液的形成、晶核的形成及晶体的生长三个过程，其中溶液达到过饱和状态是结晶的前提，过饱和度是结晶的推动力。

43.凝胶层析的5种用途？

1）用于蛋白质、多肽、脂质、抗生素、糖类、核酸及病毒等物质的分离纯化 2）用于测定生物大分子的相对分子量 3）用于生物大分子溶液的脱盐及除去小分子物质 4）用于溶解目标产物的缓冲液的交换 5）用于医药产业中无热原水的制备及低分子生物制剂中抗原性杂质的除去。：（1．分离纯化：GFC可用于相对分子质量从几百到106数量级的物质的分离纯化，

例如蛋白质、肽、脂质、抗生素、糖类、核酸及病毒（50～400nm）的分离与分析。

GFC还可用于医药产业中无热原水的制备以及生物制剂中抗原性杂质的除去。

1 青霉素纯化2．脱盐除去相对低分子质量物质。

例如，经过盐析沉淀获得的蛋白质溶液中盐浓度很高，一般不能直接进行离子交换层析分离，可首先用GFC脱盐。 3.多糖的分离）

44.影响有机溶剂萃取分离的主要因素？（P23-25）

1）溶质的结构 2）萃取剂 3）稀释剂 4）体系的pH 5）操作温度（药材的粉碎粒度、浸取的温度、浸取的时间、浸取压力、浓度差、浸取溶剂、药物成分的影响）

45.超声提取的特点？（P60）

1）无需高温，节省能源，热敏成分不破坏。 2）提取效率，高药材资源不浪费 3）具有广谱性，实用性广 4）常压提取，安全性好 5）减少能耗（1不需高温，节省能源，热敏成分不破坏。 2. 提取效率提高，药材资源不浪费3. 省溶剂。4. 物理变化，成分活性不受影响。 5. 时间短，省时，杂质少，成分含量高）

46.超临界流体分离原理和特点？

1）分离原理：超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度(溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。

2）超临界CO2流体特点：具有常温、无毒、环境友好、使用安全简便、萃取时间短、产品质量高等优点。此外，超临界CO2流体萃取也存在一定的局限性，其对脂溶性成分的溶解能力较强而对水溶性成分的溶解能力较低；设备造价高，比较适用于高附加值产品的提取；更换产品时设备清洗较为困难。

47.简述软水和无盐水的制备方法？

1）软水的制备：利用钠型磺酸树脂除去水中的钙离子和镁离子等碱金属后即可制得软水。

2）无盐水的制备：将原水通过氢型强酸性阳离子交换树脂和羟型强碱或弱碱性阴离子交换树脂的组合，进过离子交换反应，将水中所有的阴、阳离子除去，从而制得纯度很高的无盐纯水。

4. 何谓超临界流体萃取，并简述其分离原理？

答:超临界流体萃取是利用超临界流体具有的类似气体的扩散系数，以及类似液体的密度(溶解能力强）的特点，利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分离简单，但设备投资较大。

图形类题

48.画出常规超临界CO2流体的工艺路线图，并写出每个单元操作在工艺流程中的作用？（P72）

高压泵、加热器、萃取釜：将超临界流体的温度（加热器）、压力（高压泵）调节到超过临界状态的某点上，使其对原料中的某些特定溶质具有足够高的溶解度，在超临界CO2流经这些特定溶质时将其迅速的溶解（萃取釜）于其中。

加热器：调节温度使超临界流体变为气体，溶质溶解度降低。

分离釜：气体对溶质的溶解度极低，流体与溶质分离。

冷凝釜：气体在冷凝釜中变为液体。

高压泵、加热器：经高压泵压缩升压，流体流经加热器被加热而重新达到具有良好溶解性能的超临界状态。

49.分子印迹的流程图，并写出两张图的原理？（P182）

8-1图：A.印迹分子与具有适当功能基团的功能单体通过共价键、氢键、离子作用或疏水作用，在一定条件下形成主客体复合物即印迹过程。B.通过光引发或热引发在大量交联剂存在下进行自由聚合反应，将主客体配合物固定在高度交联的高分子母体中，制得高聚物。C.通过一定方法洗去印迹分子，得到在高分子共聚物中留下一个与印迹分子在空间结构上完全匹配，并含有与印迹分子专一结合的功能基团的三维空穴。这个空穴可以选择性地重新与印迹分子结合，它对模板分子表现出特效的选择性和识别能力。

8-2图：共价结合又称为预组装，是印迹分子首先共价联结到单体上，然后聚合，聚合后再打开共价键，去除印迹分子。非共价结合又称为自组装，是单体和模板分子间通过弱的相互作用力非共价键结合（如静电力、疏水作用力、氢键、金属配位键、偶极以及范德华力等）形成多点相互作用的“单体-模板分子”的复合物，聚合后这种作用被固定下来，然后通过淋洗的方法除去印迹分子。

50.柱色谱装置图（见实验讲义），以湿法装柱为例，说明柱色谱原理？（装柱、上样、洗脱、收集）

柱色谱分为4个过程：装柱、上样、洗脱、收集。吸附柱色谱是在色谱柱中填入多孔性或粉末状固体吸附剂，由于不同物质的吸附能力不同，往下洗脱的速度也不同，随着洗脱剂的洗脱作用，分离开的溶质从柱上分别洗出收集。例如湿法装柱，在色谱柱中依次填入填料：滤纸、脱脂棉、石英砂、中性Al2O3、石英砂。当样品加入到色谱柱上端，在洗脱剂的洗脱作用下，溶质在柱中自上而下按对吸附剂的亲和力大小形成若干色带。再加入洗脱剂时，已经分开的溶质可以从柱上分别被洗出收集。

51.蛋白质的分离纯化过程图（填空和原理说明）（P259）