血凝素

血凝素
血凝素

植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA),是一种有丝分裂原,主要用于激活免疫细胞――淋巴细胞,是利用国际先进的超低温冷冻技术从红芸豆中提取的一种物质。由于其较难提纯,且成本极高,因此一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。

一、主要成分植物血凝素的主要成分为植物多肽,是一种低聚糖(由D-甘露糖、氨基酸葡萄糖酸衍生物构成)与蛋白质的复合物。

二、药理作用

1.植物血凝素为广谱抗病毒药,可刺激T淋巴细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T 细胞,效应T细胞分泌产生大量细胞因子(如干扰素等)杀伤病毒,细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。

2.植物血凝素可同时刺激B细胞转化为浆母细胞后增殖分化为浆细胞,浆细胞产生大量非特异性抗体来中和病毒。

3.可增强机体免疫功能,提高骨髓造血机能,促进机体白细胞及多核白细胞数量明显增加;提高机体细胞诱生干扰素,增强机体免疫力,促进抗体形成,增强机体对病原微生物的吞噬作用。

4.植物血凝素与黄芪多糖、左旋咪唑、阿糖腺苷配伍,有明显的增效作用;与部分抗生素等配伍具有相加作用。

5.植物血凝素肌肉注射后约5~15分钟血药浓度达高峰,口服约1小时后血药浓度达高峰,代谢产物主要从尿液排出。

三、特点

1.使用方便、广泛,可以与许多药物同时使用,具有协同作用或相加作用。在粉、散剂中添加植物血凝素,具有明显提高原有产品疗效的作用,同时不干扰原产品的检测,且无种属特异性,可广泛应用于家禽、猪、牛等动物。

2.使用安全,首先使用植物血凝素后不影响机体抗体水平,可用于预防肉仔鸡后期常发的病毒性疾病,避免了由于加强免疫引起的抗体水平过高、疫苗应激反应、药残严重,影响家禽产品出口。其次植物血凝素抗病毒谱广、毒性小、安全范围大。

3.可以与疫苗同时使用,能起到弥补免疫空白期、减缓疫苗应激反应、增强免疫效果的作用。

4.植物血凝素经特殊加工可口服给药,不受消化酶和胃酸的破坏,可常温保存两年(液体保存时一般6个月左右就开始出现浑浊现象,降低疗效)。避免了一般干扰素质量不稳定、应用时口服吸收差、易被破坏,必须低温保存的缺陷。

四、作用

1.主要用于激活免疫细胞――淋巴细胞,是一种干扰素诱导剂,不仅可以刺激机体产生白细胞介素-2和干扰素,还可以刺激机体产生非特异性抗体。

2.广谱抗病毒药,可用于防制家禽、家畜病毒性疾病,如鸡的传染性支气管炎、传染性喉气管炎、新城疫、传染性法氏囊病、鸡痘;鸭瘟、鸭病毒性肝炎;猪圆环病毒病、猪繁殖与呼吸综合征、猪传染性胃肠炎、猪病毒性腹泻、猪繁殖与呼吸综合征、非典型猪瘟;犬、水貂的犬瘟热、犬细小病毒等病毒性疾病。

3.植物血凝素可作为动物免疫增强剂进行治疗、辅助用药或用于免疫功能受损引起的疾病,用来增强动物机体免疫力、提高药物的疗效。

五、临床应用

1、用于预防肉鸡常见病毒病,30日龄左右使用1~2次,可预防或减轻肉鸡后期病毒性疾病的发生;

2、用于预防仔猪断奶前后病毒性疾病,与强力霉素、头孢类抗生素等合用,可避免仔猪在断奶后因母乳抗体丧失而导致的免疫力下降或造成大面积发病和死亡;

3、植物血凝素+抗病毒药物+广谱抗生素可用于防制鸡病毒性疾病(如非典型新城疫、温和型禽流感、传染性法氏囊病初期、各型传染性支气管炎、鸡痘、传染性喉气管炎),急性病毒病慎用;

4、配合头孢类抗生素,每月对健康蛋鸡进行一次预防,可有效防止蛋鸡发生病毒性疾病;植物血凝素配合法氏囊抗体、庆大霉素或丁胺卡那可用于防制急慢性传染性法氏囊病;

5、配合呼吸道药物应用可用于防制家禽传染性支气管炎、传染性喉气管炎等由病毒引起的呼吸道系统疾病;

6、与鸭病毒性肝炎血清或黄芪多糖配合应用可用于防制鸭病毒性肝炎;

7、与黄芪多糖和丁胺卡那配合应用,可用于防制鸭瘟。

六、植物血凝素在动物疾病防止上的应用,主要进行以下实验:

1.利用鸡的白细胞脾细胞鸡胚成纤维细胞以有机锗(Ce—123)新城疫弱毒株(NDV-F)植物血凝素(PHA)聚肌胞(POLYI:C)为诱生剂,对外源性干扰素(IFN)诱生条件如诱生剂量诱生时间及培养条件进行了比较分析和探讨,结果发现以Ce—123诱生IFN的能力为最强,其他依次为:PHA NDV-F POLYI:C;且鸡脾细胞和鸡白细胞产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞;并且最佳诱生剂量依次为:Ce—123为70微克/毫升;鸡NDV-F为128HAU/毫升;POLYI:C 为60微克/毫升;PHA为20毫克/毫升。该研究表明,植物血凝素在机体内刺激机体产生干

扰素的能力是聚肌胞的30倍,所以服用1mg植物血凝素相当于服用30mg的聚肌胞和直接服用300mg干扰素。

2.PHA对家禽的新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、脑脊髓炎、流感等疾病的预防及治疗效果。结果表明PHA对下列病毒感染的保护率分别为新城疫77。5%、传染性法氏囊病92。5%、传染性支气管炎85%、传染性喉气管炎77。5%、脑脊髓炎90%、流感80%。

七、PHA的作用机理

1.PHA刺激T细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T细胞;效应T细胞分泌产生大量细胞因子(如干扰素等)杀伤病毒;细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。

2..PHA同时可刺激B细胞转化为浆母细胞然后增殖分化为浆细胞,浆细胞产生大量的非特异性抗体来中和病毒。

细胞分裂素具体介绍知识分享

三、细胞分裂素的发现和种类 一、细胞分裂素的发现和种类 生长素和赤霉素的主要作用都是促进细胞的伸长,虽然它们也能促进细胞分裂,但是次要的,而细胞分裂素类则是以促进细胞分裂为主的一类植物激素。 (一)细胞分裂素的发现 斯库格(F.Skoog)和崔氵山王攵(1948)等在寻找促进组织培养中细胞分裂的物质时,发现生长素存在时腺嘌呤具有促进细胞分裂的活性。1954年,雅布隆斯基(J.R.Jablonski)和斯库格发现烟草髓组织在只含有生长素的培养基中细胞不分裂而只长大,如将髓组织与维管束接触,则细胞分裂。后来他们发现维管组织、椰子乳汁或麦芽提取液中都含有诱导细胞分裂的物质。1955年米勒 (https://www.360docs.net/doc/d215744831.html,ler)和斯库格等偶然将存放了4年的鲱鱼精细胞DNA加入到烟草髓组织的培养基中,发现也能诱导细胞的分裂,且其效果优于腺嘌呤,但用新提取的DNA却无促进细胞分裂的活性,如将其在pH<4的条件下进行高压灭菌处理,则又可表现出促进细胞分裂的活性。他们分离出了这种活性物质,并命名为激动素(kinetin,KT)。1956年,米勒等从高压灭菌处理的鲱鱼精细胞DNA分解产物中纯化出了激动素结晶,并鉴定出其化学结构(图7-15)为6-呋喃氨基嘌呤 (N6-furfurylaminopurine),分子式为C 10H 9 N 50 ,分子量为215.2,接着又人工合 成了这种物质。激动素并非DNA的组成部分,它是DNA在高压灭菌处理过程中发生降解后的重排分子。激动素只存在于动物体内,在植物体内迄今为止还未发现。 尽管植物体内不存在激动素,但实验发现植物体内广泛分布着能促进细胞分裂的物质。1963年,莱撒姆(D.S.Letham)从未成熟的玉米籽粒中分离出了一种类似于激动素的细胞分裂促进物质,命名为玉米素(zeatin,Z,ZT),1964年确定其化学结构为6-(4-羟基-3-甲基 -反式-2-丁烯基氨基)嘌呤 〔6-(4-hydroxyl-3-methy-trans-2-butenylamino)purine〕,分子式为C 10H 13 N 50 , 分子量为129.7(图7-15)。玉米素是最早发现的植物天然细胞分裂素,其生理活性远强于激动素。 图 7-15 常见的天然细胞分裂素和人工合成的细胞分裂素的结构式 1965年斯库格等提议将来源于植物的、其生理活性类似于激动素的化合物统称为细胞分裂素(cytokinin, CTK,CK),目前在高等植物中已至少鉴定出了30多种细胞分裂素。

重组融合人血清白蛋白-人白介素-2+C125A突变体在毕赤酵母中的表达

598食品与生物技术学报第29卷 的产物,经EcoRI和NotI双酶切得到长约2.2kb 的插入片断和长约9.3kb的载体片断,表明融合基 因已经成功插入到载体pPICgk中。质粒测序结果 显示,全部序列没有发生突变,与预期一致。 1.GelextractionofIL2ml2.GelextractionofpBlue/ HSA,3.DigestionofpBHImwithEeoRI#4.Doublediges— tionofpBHImwithEcoRl/Notl;M.XDNA/HindⅢMarker 圈1重组质粒pBHlm的酶切分析 Fig.1Restrictionanalysisoftherecombinantplasmid pBHlm 3.3阳性转化子的筛选及诱导产物的Western blot鉴定 质粒pPHIm经SalI酶切,回收线性化片断,电 击转化P.pastorisGSll5感受态细胞。涂布MD 平板,30℃培养4d后共长出了约400个转化子,挑 选其中200个菌落进行初筛,选其中表达量较高的 10株重组菌进行复筛验证,得到一株产量最高的重 组菌P.pastorisGSll5/pPHIm,诱导3d后上清液 的SD§PAGE分析和Westernblot结果如图3 所示。 3’AIL2m 1.DigestionofpPIC9KwithEcoRl;2.DigestionofpPHImwith EcoRI;3.DoubledigestionofpPHImwithEco—Rl/NotI;M.).DNA/HindⅢMarker 图2重组质粒pPHIm的物理图谱(A)和酶切分析 (B) Fig.2PhysicalmapIA)andrestrictionanalysis(B)of therecombinantplasmidpPHlm 研究发现,表达的蛋白质的相对分子质量约为82000,与理论计算HSA-IL2m的相对分子质量相 符,且这一位置的蛋白与11.-2、HSA的抗体都能发 生免疫反应,进一步证实酵母经诱导表达HSA— IL2m。但70000和45000这两处的降解条带又都 可以与HSA的抗体发生免疫反应,认为是融合蛋 白降解所产生的条带。经白蛋白测定试剂盒测得 其中白蛋白融合蛋白的量约为60.2mg/L(以 HSA—IL2m计)。 3.4诱导产物的活性测定 发酵液经脱盐处理后,冻干保存。取0.1mg冻干粉用2mLPBS复溶后,离心取上清,测得其中 融合蛋白的量约为300/-g/mL。采用IL-2依赖细 胞株CTLL一2以标准品IL-2为对照,对上清液中的 融合蛋白的生物学活性进行了测定。标准品的活 性为2×105IU/mL,用RPMll640稀释到浓度为 200IU/mL。测定结果表明,上清液中的融合蛋白 可以有效的刺激CTLL-2细胞增殖。以标准品的 最高浓度OD啪值为100o/6,计算标准品、样品梯度 百分率。将百分率换算为概率单位,以概率单位为 纵坐标,以稀释度X的对数为横坐标,绘制直线回 归图(图4),通过计算得出融合蛋白粗蛋白的比活 性为1.51×106 IU/mg。

植物血凝素的药理作用

一、药物构成及规格: 本品又称植物血球凝集素,通过超低温萃取技术从红芸豆中提取得到的植物蛋白,主要成分为D-甘露糖、氨基葡糖醛酸衍生物所构成的低聚糖辅基与蛋白质复合物,并通过冷冻干燥技术制成。 二、理化特性 1. 本品为一种植物蛋白质; 2. 分子量大约为128KDa; 3. 本品为白色至类白色团粉末,性质稳定; 4. 本品易溶于水,溶液呈乳浊状。 三、药物特点 1. 本品通过超低温提取,并通过包被制剂技术,增强了本品抗热变性能力,同时不会被动物或昆虫胃肠的蛋白酶降解,在很大的pH范围内稳定。因而不但延长了储存周期,而且在使用时,不受胃肠道中蛋白酶的影响。 2. 本品与聚肌胞诱导干扰素有所不同。本品主要诱导产生γ-干扰素,而聚肌胞诱导机体产生α-干扰素。γ-干扰素有自己独有的受体,同时γ-干扰素可以发挥“抗原定位”作用,使免疫系统能够为特殊的病毒筛选出特殊的抗体,并且可以对那些能够吞噬和消灭病原体的免疫细胞产生活化作用。本品同样对于不同动物使用都可有效诱生干扰素,无种属限制,避免了直接使用干扰素的缺陷。 3. 本品因其独特的糖蛋白复合结构,在体内可迅速代谢掉,不会造成残留危害人类健康,符合当今用药要求。 四、效果分析: 1. 本品口服可以与小肠上皮细胞结合,从而促进幼仔畜胃肠道的发育和胃肠道功能成熟,减少肠道大分子的吸收,增加胰腺蛋白和胰岛素的含量,促进了仔畜的食欲,从而减弱了大多数仔畜都会发生的断奶后生长抑制;而注射给药PHA与肠外其他组织结合,增加了肝脏和脾脏的重量。瑞典农业大学( Swedish University of Agricultural Sciences)的研究小组在2004年国际猪兽医学会(IPVS)猪健康代表大会上报告说:现已证实植物血凝素可促进哺乳仔猪和大鼠肠道的成熟。Thomsson等研究了植物血凝素是否能促进断乳小猪肠道的发育。结果显示,使用PHA的断乳小猪在断乳后第一周生长较快(P=0.013),腹泻指数比对照组减少(P=0.10),且采食量增加(P=0.028),小肠屏障特性增加,小肠总长度长于对照组(P=0.063)。总之,断乳前饲喂植物血凝素改变了小肠的特性更有利于仔猪断乳。 2. 本品是免疫学研究中极其重要的试剂,本品在免疫学中的重要性与淋巴细胞的相互作用

噻苯隆一种新型高效的细胞分裂素

噻苯隆(TDZ):一种新型高效的细胞分裂素—荷兰Duchefa Biochemie 名称:Thidiazuron(TDZ) 货号:T0916 CAS号: 51707-55-2 分子量:220.2 噻苯隆是一种新型高效的细胞分裂素用于组织培养能更好的促进植物的芽分化。噻苯隆在棉花种植上作落叶剂使用。噻苯隆被植物吸收后,可促进叶柄与茎之间的分离组织自然形成而脱落,是很好的脱叶剂。 噻苯隆(TDZ),脲基细胞分裂素,是Dropp?的活性分成。它是N,N-diphenylurea(DPU)的衍生物,它属于取代苯基脲类化合物展现出类似具有腺嘌呤基细胞分裂素的活性。取 1/10-1/100 N6-取代的腺嘌呤基细胞分裂素的浓度时噻苯隆能达到同样的效应。不像天然的细胞分裂素,噻苯隆不含嘌呤环。另外启维益成代理的噻苯隆具有高度稳定性,且具有两个功能团:苯基和噻二唑,用其它的环状结构取代这两个功能基团的任何一个,TDZ都表现出活性下降。 TDZ的工作浓度随着物种的不同而不同。在栽培品种棉花’ Stoneville 519’的(Gossypium hirsutum L.)研究中,使用浓度范围为10-100uM的噻苯隆来诱导幼叶的脱落。噻苯隆的功能是通过诱导内源性乙烯的产生从而调节棉花叶子的脱落。 在植物组织培养中的应用: 在形态发生的早期阶段,称为愈伤组织的未分化细胞团开始发育。人们通常把生长素加入到细胞培养基中以诱导细胞增殖和愈伤组织生长,人工合成生长素类物质(NAA等)和其他具有生长素活性的植物生长调节物质(2, 4-D)已被广泛地用于这一目的。在多种植物培养体系中添加TDZ都表现出能诱导愈伤组织形成,而且大大高于其他植物生长调节物质的细胞增殖速率。 Capelle等(1983)的研究表明TDZ诱导愈伤组织生长的速率是其他植物生长调节剂的

植物血凝素的提取

植物血凝素也称为植物凝集素(PHA),可自制也可购自商品。自制的方法常用生理盐水提取法。 (A)干品制备法(1)选广东鸡子豆10g,用蒸馏水冲洗,置培养皿内用75%酒精一次性浸洗,倒掉酒精留间隙置37℃。恒温箱内24-48小时;(2)在无菌条件下研碎鸡子豆,加生理盐水30ml,摇匀后放入4℃冰箱24小时,第二天再加生理盐水70ml,再置4℃冰箱内24小时。每8-12小时摇荡一次。(也可一次性加100ml生理盐水);(3)无菌条件下移入10-50ml离心管内,3000-4000rpm30分钟。在无菌箱内把上清液分装于10ml小瓶,置冰箱冷冻层备用;(4)效价:外周血染色体制备每100ml培养基加PHA约2ml。注:若整个过程未在无菌条件下进行,分装时用G5玻砂漏斗除菌即可。 (B)鲜品制备法:(1)选择完整无破皮鲜菜豆20g,用75%酒精浸泡10分钟;(2)在净化工作中用无菌盐水或蒸馏水漂洗二次,然后置无菌乳钵中捣成糊状,用100ml无菌盐水浸泡封口;(3)移入4℃冰箱中置24小时,中间摇动数次,次日3000rpm30分钟,在无菌情况下分装上清液于10ml小瓶内,置冰箱冷冻层备用。(4)效价:正式使用前先用一定量作效价测定,按效价使用。 青豌豆的提取:取青豌豆100克,加含0.15M氯化钠的0.01M pH7.0磷酸缓冲液200ml浸泡过夜,经膨胀后用组织捣碎机捣碎,倒入布袋中压榨出水提液,在沉渣中再力0入磷酸缓冲液100ml搅拌,浸泡1时,压榨出水提液,合并水提液,量出总体积。加0.01%叠氮钠防腐。2.蛋白质沉淀:边搅边加入固体硫酸铵达80%饱和(每升溶液加硫酸铵561克)冷藏过夜。吸取上清液,沉淀再用二层滤纸抽气过滤至干,即得粗制青豌豆素蛋白沉淀物硫酸铵糊。置冰箱保存。3.亲和层析分离(1)装柱:取直径为1.0 cm,长度为25 cm的层析柱,按(实验十五)操作,自顶部缓缓加入稀薄的Sephadex G25悬液,待凝胶上升至距顶柱约3-5 cm即可,用1M NaCl溶液平衡10分钟。(2)加样并收集:称硫酸铵糊0.3克溶于 3 ml IM氯化钠中,离心3000rPm10分钟,取上层悬液上柱,用1M NaCl洗脱收集每管 3.5 ml,在280 nrn紫外光上比色检测,直至吸光值下降到接近零为止。此洗脱峰为不与葡萄糖亲和的杂蛋白峰。改用含0.2M葡萄糖的1M NaCl进行洗脱。收集每管 3.5 ml,也在280nrn处检测、直至吸光值下降至接近零为止。此洗脱峰为青豌豆素峰,再用1M NaCl洗脱,再生柱,约需10分钟。4.青豌豆素生物活性测定。取新鲜兔血l ml于抗凝管中,离心去除血浆,血球用生理盐水洗涤离心1000rpm/5min三次,直至洗液无血色为止,加生理盐水稀释20倍制成兔红细胞悬液,置冰箱中备用。取点滴板一块在三孔中分别滴入对照生理盐水、280 nrn吸收峰的吸光值相同的杂蛋白和青豌豆蛋白各2滴(用生理盐水将二种蛋白质稀释到吸光值相同),再分别滴入兔红细胞悬液1滴。置37℃保温10分钟,取出后分别用玻棒在孔中轻轻搅动,比较三者红细胞的凝集情况。再将杂蛋白和青豌豆素溶液进一步用生理盐水稀释成1:5、l:25、l:125、1:625……再用上述方法检查比较它们对兔红细胞的凝集作用,求出它们最大生物活性的稀释倍数。兔红细胞的凝集作用也可用显微镜下进行观察、比较。注意事项:不同蛋白质凝集活性的比较需在以相同280 nrn 吸光值的蛋白质量作对比,故必需稀释

关于重组人血白蛋白的系统性表述

关于重组人血白蛋白的系统性表述 人血白蛋白(HSA)作为一种重要的临床急救药物及重要的药物辅料,在医药,科研及化妆品生产等领域应用广泛。随着国内医疗水平及居民收入水平的提升和对血液制品认知度的提高,血液制品的临床使用量不断增加,市场容量不断增长,行业快速发展。根据国家医药管理局的报告,2010年全国16城市医院血液系统用药金额约62亿元,其中白蛋白类药物占据了血液制品的主要份额(大于50%)。但作为一种血液制品,HSA同时也面临原料短缺及病毒污染等缺陷的影响。 用基因工程重组人血清白蛋白(rHSA)替代HSA是国际上公认的最有前途的高新技术途径。 一.什么是重组人血白蛋白 1.定义 通过基因重组的技术将目的蛋白的基因克隆后,将该基因插入到某种生物(如细菌、酵母、植物,哺乳动物细胞等)中进行复制,然后收集的白蛋白称为重组人血白蛋白。 2.rHSA的等级分类 按不同的质量标准分为了培养基级、药用辅料级和药用注射级(药用级)三类,三类级别的重组人血白蛋白生产工艺相同,但最终控制参数不同,药用级白蛋白质量标准最高。 3.rHSA的表达系统分类 白蛋白(Human Serum Albumin,HSA)是一组复杂的大分子蛋白质,必须经过正确的折叠、组装和翻译后修饰,才能赋予其特定的结构和功能,表达系统是重组人血白蛋白生产过程中极其重要的环节。 (1)原核表达系统 HSA基因最早就是在原核生物大肠杆菌(E.coli)中表达成功的,Lawn等于1981

年首次报道了rHSA的cDNA序列并首次构建了第一个表达rHSA的表达载体pHSA,然后在E.coli中表达成功,表达量为细胞总蛋白的7%,但E.coli表达系统体外很难正确折叠和组装结构复杂的HAS,缺乏翻译后的修饰和加工,表达的蛋白多形成包涵体,且纯化较难,所以未能得到有生物功能的蛋白,细菌细胞壁脂多糖还会造成热反应。因为HSA在原核生物中表达量不高且分泌效果不够理想,所以研究的重点转向其在真核生物细胞中的表达。 (2)酵母表达系统 酵母作为单细胞真核生物,既具有原核生物的容易培养、生长繁殖快、相对易于进行基因工程操作等优点,还具有原核生物缺少的其他优点,如蛋白质翻译后修饰和加工以获得有生物活性的重组蛋白,表达量和分泌量较大,易于产业化培养,非常适合白蛋白及其他非糖基化血浆蛋白的大规模制备。 研究者们用到的酵母表达系统有毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)等。在酿酒酵母中,Okabayashi等通过构建在染色体LEU2和HIS4位点上整合的质粒获得能连续分泌rHSA的稳定转化株,每升培养基达到85mg rHSA。 毕赤酵母表达量和分泌量高且稳定,自身分泌蛋白量小,作为基因表达系统研究和使用的最多,已基本掌握其生长规律及大规模高密度发酵技术,被认为是最有发展前景的蛋白质生产工具之一。毕赤酵母非常适合人血白蛋白等非糖基化血浆蛋白的大规模制备,成为目前rHSA的主要表达系统。 (3)其他表达系统 作为“生物反应器”的转基因动物自1987年以来就引起学者们广泛的关注。就生产rHSA来说,最理想的表达场所是乳腺,因为乳腺是外分泌器官从而不会影响转基因动物本身的生理,表达的蛋白能经过充分的翻译后修饰加工,组织细胞密度高从而分泌水平高,目标蛋白纯化相对容易。2000年黄淑帧等通过

免疫学练习 2013-5

一、选择题(每道题可以有一个或多个答案) 1. 免疫细胞包括:()A. 淋巴细胞B. 红细胞C. 抗原提呈细胞D. 粒细胞E. 巨噬细胞 2. 黏膜免疫系统包括:( )A. 扁桃体B. 阑尾C. M细胞D. 派氏集合淋巴结E. 脾索 3. 超抗原的特点是:()A. 可以多克隆激活某些T细胞B. 必须经过抗原提呈细胞的加工和处理C.半抗原D. 有严格的MHC限制性E. 与自身免疫病无关 4. 下列哪些物质的有效成分不包括免疫球蛋白()A. 破伤风抗毒素 B. 变应素C.胎盘球蛋白D. 植物血凝素 E. 免疫血清 5. C3b的生物学效应包括()A. 溶解细胞B. 调理作用C. ADCC D. 免疫调节E. 趋化作用 6. 下列细胞因子的受体与IL-6受体共用β链(gp130)的有()A. IL-10 B. IL-11 C. LIF D. G-CSF E. TNF 7. 固有免疫细胞表面模式识别受体包括()A. TLR B. IL-6受体C. 甘露糖受体D. C3b受体E. IgG Fc受体 8. T细胞TCR识别抗原的共受体分子是()A. CD2 B. CD3 C. CD4 D. CD8 E. CD9 9. 下列内分泌因子中下调免疫应答的有()A.雌激素B.抗利尿激素C.皮质类固醇D.胰岛素E.甲状腺素 10. 口服免疫原最不可能建立的是()A.胃肠黏膜局部免疫耐受B.全身免疫耐受C.中枢免疫耐受D.外周B细胞免疫耐受E.外周T细胞免疫耐受 11. 下列哪些疾病不属于自身免疫性疾病()A.SLE B.溃疡性结肠炎C.类风湿性关节炎D.荨麻疹E.重症肌无力 12. 下列疾病属于SCID的有()A.性联重症联合免疫缺陷病B.遗传性血管神经性水肿C.腺苷脱氨酶缺陷病D.DiGeorge综合征E.Bruton病 13. 下列抗原中属于癌-睾丸(C-T)抗原的有:()A.MAGE-A1 B. CEA C. AFP D. NY-ESO-1 E. Her-2 14. 引起排斥反应的抗原有()A.MHC-I类抗原B.MHC-II类抗原C.MHC-III类抗原D.癌胚抗原E.血型抗原 15. 溶血空斑试验是用于检测()A.B细胞B.T细胞C.树突状细胞D.NK细胞E.中性粒细胞 16. CTLA-4的配体是:()A. CD23 B. CD32 C. CD21 D. CD80/86 E. CD51/CD29 17. 有多个重复B细胞表位的抗原是:( )A. Supper antigen B. TD-Ag C. TI-Ag D. 构象决定基E. 线性决定基 18. 下列那些作用与B细胞在生发中心的分化成熟无关:()A. 抗原受体编辑B.Ig亲和力成熟C.Ig类别转换D. B细胞表达MHC I类抗原E. 体细胞突变 19. 肿瘤相关抗原()A. 只表达于肿瘤细胞,正常组织不表达B. 凡肿瘤细胞均有表达C. 高表达于肿瘤细胞,正常组织不表达或低表达D. 表达于胚胎细胞和肿瘤细胞 E. 只在肿瘤周围组织表达 20. 新生儿先天性胸腺缺陷,可导致()A. 细胞免疫缺陷,抗体产生正常B. 细胞免疫正常,抗体产生下降 C. 细胞免疫缺陷,抗体产生下降D. 细胞吞噬功能障碍E. 补体系统功能紊乱 21. 可以促进B细胞产生IgE的细胞因子是()A. IL-1 B. IL-2 C. IL-3 D. IL-4 E. IL-8 22. 抗体分子的CDR位于哪个结构域()A. CH和CL B. VH和VL C. VH和CH D. VH和CL E. CH 23. 用以下哪种标记最适合鉴别或分离成熟的T细胞()A. CD3 B. CD4 C. CD8 D. CD14 E. CD19

2016年上半年黑龙江全科学主治医师(高级职称)考试题

2016年上半年黑龙江全科学主治医师(高级职称)考试题 本卷共分为2大题60小题,作答时间为180分钟,总分120分,80分及格。一、单项选择题(在每个小题列出的四个选项中只有一个是符合题目要求的,请将其代码填写在题干后的括号内。错选、多选或未选均无分。本大题共30小题,每小题2分,60分。) 1、男性,66岁,高血压史30年,糖尿病史1年,未规律服用降糖药物,身高164cm,体重72kg,血清肌酐146μmol/L,空腹血糖8.5mmol/L,不应采取的治疗方案是 A.二甲双胍B.胰岛素C.瑞格列奈D.格列喹酮E.阿卡波糖+中效胰岛素2、肝肾虚所致经行发热的最佳选方是 A.蒿芩地丹四物汤B.保阴煎C.左归丸D.血府逐瘀汤E.补中益气汤 3、妊娠贫血心脾两虚证的常用方 A.六味地黄丸B.四物汤C.地黄饮子D.归脾汤E.八珍汤 4、关于强直性脊柱炎(AS)的病理表现错误的是 A.骶髂关节是AS最早累及的部位B.淀粉样变性和骨折属原发性病变C.可累及内脏或其他组织如:虹膜炎,主动脉根炎D.复发性非特异性炎症主要见于滑膜、关节囊、韧带或肌腱骨附着点E.附着点病为AS的基本病变 5、多寐的病因多责之于: A.脾虚湿盛B.心虚胆怯C.心肾不交D.肾精亏耗E.阴虚火旺 6、在牙体组织的反应中哪项反应与矫治力无关 A.矫治力过大则可发生牙髓炎B.牙髓组织可发生轻度充血,对温度的变化敏感C.牙根特发性吸收D.牙根尖进行性吸收E.牙骨质的吸收与牙槽骨相比,其吸收范围小程度轻 7、脑囊虫病出现癫痫发作主要因为 A.脑膜包囊B.小脑包囊C.脑室内包囊D.皮质包囊E.基底池内包囊 8、流感病毒分甲、乙、丙三型的依据是 A.神经氨酸酶抗原性B.病毒内部和外部的抗原结构C.植物血凝素抗原性D.临床表现E.流行病学特征 9、琼脂印膜材料的凝固原理为 A.聚合变化B.物理温度变化C.物理压力变化D.离子交换变化E.化学变化 10、盗汗又称为 A.寝汗B.黄汗C.战汗D.绝汗E.以上都不对 11、慢性血行播散型肺结核多数 A.无明显中毒症状B.X线胸片表现为哑铃型阴影C.多发生干酪样坏死D.有明显中毒症状E.结核菌素试验阳性 12、传染性非典型肺炎的病理改变主要显示 A.支气管痉挛B.弥漫性肺泡损伤和炎症细胞浸润C.肺泡水肿D.坏死组织阻塞细支气管E.炎症细胞浸润 13、女子在青春期,月经异常责之于 A.脾B.肺C.心D.肾E.肝 14、正常情况下,基底细胞分裂周期约为:

【CN109810185A】一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910276004.5 (22)申请日 2019.04.08 (71)申请人 北京蛋白质组研究中心 地址 102206 北京市海淀区中关村生命科 学园生命园路38号 (72)发明人 钱小红 张养军 余谦 张普民  高方圆 焦丰龙 夏朝双 张汉卿  (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅 (51)Int.Cl. C07K 14/765(2006.01) C07K 1/36(2006.01) C07K 1/18(2006.01) C07K 1/20(2006.01) C07K 1/30(2006.01) (54)发明名称 一种重组人血清白蛋白的分离纯化方法 (57)摘要 本发明公开了一种重组人血清白蛋白的分 离纯化方法。该方法首先采用热乙醇沉淀法从转 基因猪血浆中对重组人白蛋白进行粗提纯,再利 用两种色谱方法以串联方式进一步精纯化,即先 用阴离子交换色谱法进行第一步精纯化,再采用 反相色谱法或者凝胶色谱法进行二次精纯化。结 果表明,本发明能从转基因猪血浆中分离纯化出 高纯度的重组人血清白蛋白,并有望替代人血清 白蛋白用于临床用药和生化研究中。权利要求书2页 说明书5页 附图3页CN 109810185 A 2019.05.28 C N 109810185 A

权 利 要 求 书1/2页CN 109810185 A 1.一种对含有重组人血清白蛋白的血浆中的重组人血清白蛋白进行分离纯化方法,包括: 1)去除含有重组人血清白蛋白的血浆中的凝血因子和纤维蛋白原后,将所得血浆上清液用热乙醇沉淀法进行粗提纯,得到rHSA粗提取液; 2)将所述rHSA粗提取液脱盐浓缩后,用阴离子交换色谱柱洗脱,收集洗脱液即为第一步精纯化rHSA溶液; 3)将所述第一步精纯化rHSA溶液脱盐浓缩后,用反相色谱柱或凝胶色谱柱进行二次精纯化,即得到rHSA溶液,完成所述重组人血清白蛋白的分离纯化。 2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述含有重组人血清白蛋白的血浆按照如下步骤制得:对含有重组人血清白蛋白的血进行血浆抗凝处理后离心,收集上清液而得; 具体的,所述血浆抗凝处理步骤中,所用抗凝剂为柠檬酸钠水溶液;所述含有重组人血清白蛋白的血与抗凝剂的体积比为15:1~20:1;所述抗凝剂的浓度为70g/L~90g/L; 所述离心步骤中,离心力为1500-2500×g;具体为2000×g;时间为20-40min;具体为30min。 3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述步骤1)去除含有重组人血清白蛋白的血浆中的凝血因子和纤维蛋白原的方法包括:将所述含有重组人血清白蛋白的血浆冷冻沉淀,解冻后离心,收集上清液,即为所述血浆上清液; 具体的,所述冷冻沉淀步骤中,温度为-30--10℃;具体为-20℃; 所述解冻步骤中,温度为0-10℃;具体为4℃; 所述离心步骤中,离心力为4500-5500×g;具体为5000×g;时间为10-20min;具体为15min。 4.根据权利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:所述步骤1)热乙醇沉淀法包括:将所述血浆上清液与由蛋白保护剂、变性剂、氯化钠和水组成的混合液混匀后,调节pH至 5.0~7.0,在55℃~80℃,恒温保持20~60min,冷却至室温后调节pH至4.0~5.0,静置,一次离心,收集上清,淋洗所得沉淀,再进行二次离心,收集上清,合并两次上清,即为所述rHSA粗提取液。 5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:所述蛋白保护剂为辛酸钠;所述辛酸钠在由蛋白保护剂、变性剂、氯化钠和水组成的混合液中的浓度为5~10g/L; 所述变性剂为有机溶剂;具体为乙醇;所述氯化钠在由蛋白保护剂、变性剂、氯化钠和水组成的混合液中的浓度为5~9g/L;所述由蛋白保护剂、变性剂、氯化钠和水组成的混合液的体积用量与所述血浆上清液相同; 所述变性剂的用量为所述血浆上清液体积的8%~12%; 所述静置步骤中,温度为室温;时间为1-3h;具体为2h; 所述淋洗步骤中,所用淋洗液为pH值为4.8的蒸馏水; 所述一次离心和二次离心步骤中,离心力为4500-5000×g;具体为5000×g;时间为50-70min;具体为60min。 6.根据权利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于:所述步骤2)中,所用流动相A为0.02mol/L Tris-HCl,流动相B为0.02mol/L Tris-HCl+0.3mol/L NaCl; 所用阴离子交换色谱柱为DEAE弱阴离子交换色谱柱;流速为1mL/min;柱温为室温;检 2

转基因水稻大规模生产重组人血清白蛋白

转基因水稻大规模生产重组人血清白蛋白 由武汉大学生命科学院教授、武汉禾元生物科技有限公司董事长杨代常领衔的研发团队从2006年开始进行植物源替代血浆来源的医药蛋白的 研究与开发,现已取得突破性进展并已跨入规模化生产的阶段,填补了国际上此项技术空白。相关论文于2011年10月31日在线发表于《美国 科学院院报》。该论文在线之际,受到国外Scientist ,Nature news, The Australian, Thomson Reuters, Fox News, Agence France Presse (AFP法新社)等美国、英国、俄罗斯、德国、巴西、印度各专业杂志及媒体的广泛关注和报道。 该研究表明由转基因水稻种子生产的重组人血清白蛋白(OsrHSA)在生理生化性质、物理结构,生物学功能、免疫原性与血浆来源的人血清白 蛋白一致;并建立了大规模生产重组人血清白蛋白的生产工艺,获得了高纯度和高产量重组人血清白蛋白产品。利用大量数据证明了转基因 水稻种子可取代现有基于发酵的表达技术来生产重组蛋白质是经济有效的。正如PNAS 审稿人对该文章的评价:“这篇文章解决了在科学上振 奋人心、在经济上都非常重要的议题--即用转基因植物生产血浆产品或其他蛋白产品的技术平台,可代替其他基于发酵的表达技术,其重 要性也不言而喻……这篇文章近乎完美地证实了植物生产的医药蛋白和批准临床使用的血浆来源医药蛋白是完全相同的,并提供了翔实数据 证明植物系统规模化容易和成本优势。” 目前,人血清白蛋白(human serum albumin)广泛应用于临床治疗和细胞培养领域。常见的人血清白蛋白大多数从人的血浆中提取,这样的生 产方式不仅受到血浆供应的限制,而且还具有携带病毒传播的高风险性。国际上以重组人血白蛋白替代血源产品的应用已成为趋势,国内市 场需求也逐年扩大,2010年已达150吨。尽管市场广阔,但高纯度重组人血白蛋白的规模化生产技术和质量控制技术却是世界性难题。武汉禾 元历经多年的技术攻关,利用水稻胚乳表达技术平台,研发出国际先进水平的重组人血白蛋白产品生产技术,并成功实现重组人血白蛋白规 模化和产业化,完全摆脱了相关制约,具有纯度更高、无动物组分、安全、高效、绿色环保、廉价、无限量供应等优势。随着植物源重组人 血清白蛋白的发展,我国人血清白蛋白日益紧张的局面必将得到缓解。

植物血凝素试验

植物血凝素试验 文章目录*一、植物血凝素试验的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、植物血凝素试验的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、植物血凝素试验的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、植物血凝素试验的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、植物血凝素试验的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应植物血凝素试验的基本信息 1、定义本试验是测定非特异性细胞免疫较有价值的方法。在前壁掌侧皮内注射,18及24小时后观察结果。 2、专科分类无 3、检查分类免疫检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹非空腹 植物血凝素试验的正常值和临床意义 1、正常值用5μgPHA皮试,红肿直径为8.5±0.1mm为阳性;

用10μgPHA皮试,红肿直径11.2±0.4mm为阳性。 2、临床意义本试验阴性见于细胞免疫缺陷病、部分麻风病人(约50%-70%呈阴性)以及病情严重的急、慢性肝炎、亚急性肝坏死病例、麻疹、结核病等。恶性肿瘤有转移者其阳性率仅为5%-10%;而良性肿瘤或无转移的恶性肿瘤病人其阳性率与正常人相仿。晚期实体瘤、慢性淋巴细胞白血病等PHA反应可呈阴性。 植物血凝素试验的检查过程及注意事项 1、检查过程取PHA1支(含10mg/支)用生理盐水稀释成每0.1ml 5,10或20μg。消毒前臂内侧皮肤用1ml注射器抽取适量药液,皮内注入0.1ml使局部形成白色小泡。 18~24h后测量局部红肿硬结的直径,一般5mm为阳性,但红肿常于24h开始逐渐消退,48h后已无明显红肿存在。正常人用5μg PHA皮试,阳性率为100%,红肿直径为8.5±0.1mm用10μg PHA皮试,阳性率为100%,红肿直径为11.2±0.4mm。女性皮试反应显著高于男性。9岁以下反应最弱,随年龄增长反应逐渐增大。30岁以上呈较一致的强反应期。本试验可用于各种年龄组,对小儿更为适用。 2、注意事项极少数患者,可在皮肤试验时发生过敏性休克,

血凝素

植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA),是一种有丝分裂原,主要用于激活免疫细胞――淋巴细胞,是利用国际先进的超低温冷冻技术从红芸豆中提取的一种物质。由于其较难提纯,且成本极高,因此一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。 一、主要成分植物血凝素的主要成分为植物多肽,是一种低聚糖(由D-甘露糖、氨基酸葡萄糖酸衍生物构成)与蛋白质的复合物。 二、药理作用 1.植物血凝素为广谱抗病毒药,可刺激T淋巴细胞增殖分化产生大量效应T细胞和细胞毒T 细胞,效应T细胞分泌产生大量细胞因子(如干扰素等)杀伤病毒,细胞毒T细胞可直接杀伤病毒。 2.植物血凝素可同时刺激B细胞转化为浆母细胞后增殖分化为浆细胞,浆细胞产生大量非特异性抗体来中和病毒。 3.可增强机体免疫功能,提高骨髓造血机能,促进机体白细胞及多核白细胞数量明显增加;提高机体细胞诱生干扰素,增强机体免疫力,促进抗体形成,增强机体对病原微生物的吞噬作用。 4.植物血凝素与黄芪多糖、左旋咪唑、阿糖腺苷配伍,有明显的增效作用;与部分抗生素等配伍具有相加作用。 5.植物血凝素肌肉注射后约5~15分钟血药浓度达高峰,口服约1小时后血药浓度达高峰,代谢产物主要从尿液排出。 三、特点 1.使用方便、广泛,可以与许多药物同时使用,具有协同作用或相加作用。在粉、散剂中添加植物血凝素,具有明显提高原有产品疗效的作用,同时不干扰原产品的检测,且无种属特异性,可广泛应用于家禽、猪、牛等动物。 2.使用安全,首先使用植物血凝素后不影响机体抗体水平,可用于预防肉仔鸡后期常发的病毒性疾病,避免了由于加强免疫引起的抗体水平过高、疫苗应激反应、药残严重,影响家禽产品出口。其次植物血凝素抗病毒谱广、毒性小、安全范围大。 3.可以与疫苗同时使用,能起到弥补免疫空白期、减缓疫苗应激反应、增强免疫效果的作用。 4.植物血凝素经特殊加工可口服给药,不受消化酶和胃酸的破坏,可常温保存两年(液体保存时一般6个月左右就开始出现浑浊现象,降低疗效)。避免了一般干扰素质量不稳定、应用时口服吸收差、易被破坏,必须低温保存的缺陷。

人血清白蛋白临床治疗的作用

人血清白蛋白临床治疗的作用 人血清白蛋白,当前在临床的治疗方面,可以说它的作用越来越大,有很多的疾病都能通过人血清白蛋白,通过有效的治疗让自己得到有效的康复,所以对于很多的患者,想具体全面了解一下人血清白蛋白的临床治疗的作用,为了你们全面了解,就来一起看看下面介绍。 “人血清白蛋白”,临床上是治疗烧伤、休克、肝腹水、肝硬化、肾水肿、脑水肿等疾病的“黄金救命药”,并可用于癌症、艾滋病的辅助治疗,是疫苗生产、干细胞培养的重要原料。眼下,它只能从血浆中提取,缺口极大。而现在,在中国能让它从大米里“长”出来。 人血清白蛋白是我国的一线大宗临床用药的重大品种,国际市场上需求大约600吨/年;我国临床需求约为215吨/年左右。随着我国预防为主的医药策略的推进,疫苗生产的需求将增至60-70吨,因而我国的人血清白蛋白需求将达到近300吨/年左右。而我国供应量仅能满足市场的1/3,人血清白蛋白在医院里

已是“一药难求”,一些重要疾病因人血清白蛋白的短缺不能得 到有效治疗,尤其是我国肝病的重灾国家,有肝炎引起的肝硬化腹水病人较多,对人血清白蛋白需求量大。尽管人血清白蛋白加工工艺安全性较好,但仍存在感染肝炎、艾滋等血液病毒的风险;我国曾出现因卖血而造成的艾滋病村的悲剧。 禾元生物利用水稻胚乳细胞作为植物生物反应器表达的植 物源重组人血清白蛋白OsrHSA已通过临床前试验。结果表明与 市售制剂对照品血浆来源的人血清白蛋白相比,植物源重组人血清白蛋白对大鼠和灵长类食蟹猴的毒理学反应与药物代谢动力 学均无显著差别,部分指标甚至优于血浆来源的人血清白蛋白。这是国际上首次通过临床前试验证明植物源重组人血清白蛋白 的药物安全性,为植物源重组人血清白蛋白进入临床试验奠定了基础。OsrHSA已成功实现了规模化和产业化。 人血清白蛋白临床治疗的作用,以上的内容就会很多的患者,介绍了人血清白蛋白的临床治疗,以及它的作用,所以在充分了解后,相信你已经了解了人体血清白蛋白的临床治疗作用,在了解后,如果你得了需要通过这方面治疗的一些疾病,可以尽快选择人血清白蛋白。

PHA生物材料介绍

聚羟基脂肪酸酯 聚羟基脂肪酸酯(PHA,polyhydroxyalkanoates)近20多年迅速发展起来的生物高分子材料——聚羟基脂肪酸酯(PHA),是很多微生物合成的一种细胞内聚酯,是一种天然的高分子生物材料。因为PHA同时具有良好的生物相容性能?生物可降解性和塑料的热加工性能。因此同时可作为生物医用材料和生物可降解包装材料,这已经成为近年来生物材料领域最为活跃的研究热点。PHA还具有非线性光学性?压电性?气体相隔性很多高附加值性能。天然的或合成的生物可降解的高分子材料往往有很高的水蒸气透过性,这在食品保鲜中是不利的。而PHA则具有良好的气体阻隔性,使其可能应用在较长时间的鲜品保鲜包装上。因为水汽的穿透是保鲜包装中的重要指标,PHA在这一点上的性能是完全可以和现在的PET?PP等产品等相比的。另—方面,PHA还具有较好的水解稳定性,将PHA用75℃的自动洗碗机总洗20个循环,PHA制成杯的形状和分子量都没有发生变化,表明PHA可以很好地用于器具生产。此外与其它聚烯烃类?聚芳烃类聚合物比,PHA还具有很好的紫外稳定性。PHA还可作为生物可降解的环保溶剂的来源,如3-羟基丁酸乙酯EHB(ethyl3—hydroxy—butyrate)是水溶性的,聚有低挥发性,可以用于清洁剂?胶)粘剂?染料?墨水的溶剂。正因为PHA 汇集了这些优良的性能,使其可以在包装材料?粘合材料?喷涂材料和衣料?器具类材料?电子产品?耐用消费品?农业产品?自动化产品?化学介质和溶剂等领域中得到应用。(1)与PLA等生物材料相比,PHA结构多元化,通过改变菌种?给料?发酵过程可以很方便地改变PHA的组成,而组成结构多样性带来的性能多样化使其在应用中具有明显的优势。根据组成PHA分成两大类:一类是短链PHA(单体为C3-C5),一类是中长链PHA(单体为C6-C14),这些年已有报道菌株可合成短链与中长链共聚羟基脂肪酸酯。PHA的生产经历了第一代PHA——聚羟基丁酸酯(PHB),第二代PHA——羟基丁酸酸共聚酯(PHBV)和第三代PHA—聚3-羟基丁酸-3-羟基己酸酯(PHBHHx)的生产,而第四代PHA羟基丁酸羟基辛酸(癸酸)共聚酸[PH-BO(PHBD)]尚处于开发阶段。其中作为第三代PHA的PHBHHx是由清华大学及其合作企业实现了首次大规模生产。与传统化工塑料产品的生产过程相比较,PHA的生产是一种低能耗和低二氧化碳排放的生产,因此从生产过程到产品对于环境保护都是很有利的。(2)PHA生产的另一条可行的途径是利用转基因植物来实现。PHA在植物中的合成,可以利用光能消耗二氧化碳,成为一种可持续?可再生的材料生产方式。现在已在烟草?马铃薯?棉花?油菜?玉米?苜蓿等植物中实现了包括PHB?PHBV以及中长链PHA等不同PHA的合成。而其中在马铃薯块根中的PHA合成是最具生产前景的。目前PHA 的价格还很难和石油化工塑料相竞争,而聚丙烯的价格低于1美元/kg,而一些最便宜的生物可降解塑料的价格为3-6美元/Kg,而当今理想的PHB的生产成本为4美元/kg,随着规模的扩大,生产成本将进一步降低,但很难达到2-3美元/kg,这主要是由于细菌发酵底物成本所决定。但通过转基因植物的PHA合成,有望将PHA的成本大大降低,因为植物利用二氧化碳和太阳能生产植物油和淀粉的成本分别为0.5-1美元/kg和0.25美元/kg,另外植物中PHA的提取过程也有了较好的研究,提取成本不高于细菌中PHA的提取成本。PHA在植物中的生产将使经济作物的可再生资源使用大大地迈进,这个项目的成功可能使到2020年植物生产基本化学原料和材料中可更新资源的使用达到现在的5倍。

细胞分裂素

研究生课程论文 课程名称 作物遗传与分子育种 开课时间 2013-2014学年第一学期 学院 化学与生命科学学院 学科专业 遗传学 学 号 2013210635 姓名 蒋续续 学位类别 全日制硕士 任课教师 马伯军 交稿日期 成绩 评阅日期 评阅教师 签 名

植物细胞分裂素及其研究进展 蒋续续 (浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004) 摘要:细胞分裂素是一类重要的植物激素,在植物的生长发育过程中起着重要的作用。随着近年来深入的研究,其化学结构与生理功能已经研究地十分透彻。而且细胞分裂素与其他激素相互作用调控植物发育的相关研究也已经展开并取得了可喜的进展。由于它的作用机理已经被人们研究清楚,所以在农业上的到了广泛的应用,提高了作物的产量与品质,大大促进了农业的发展。 关键词:细胞分裂素,生理结构,应用 Plant Cytokinin and Its Research Progress Abstract:Cytokinin is a kind of important plant hormone and plays an important role in the process of plant growth. With in-depth research in recent years, its chemical structure and physiological function has been studied very well. And the study of interaction between cytokinin and other hormones in regulating plant development has begun and got the gratifying progress. Because of its mechanism of action has been clear, so it has widespread application in agriculture, increasing the crop yield and quality, greatly promoting the development of agriculture. Keywords:cytokinin,Physiological structure,application

关于重组人血白蛋白的系统性表述

盛年不重来,一日难再晨。及时宜自勉,岁月不待人。 关于重组人血白蛋白的系统性表述 人血白蛋白(HSA)作为一种重要的临床急救药物及重要的药物辅料,在医药,科研及化妆品生产等领域应用广泛。随着国内医疗水平及居民收入水平的提升和对血液制品认知度的提高,血液制品的临床使用量不断增加,市场容量不断增长,行业快速发展。根据国家医药管理局的报告,2010年全国16城市医院血液系统用药金额约62亿元,其中白蛋白类药物占据了血液制品的主要份额(大于50%)。但作为一种血液制品,HSA同时也面临原料短缺及病毒污染等缺陷的影响。 用基因工程重组人血清白蛋白(rHSA)替代HSA是国际上公认的最有前途的高新技术途径。 一.什么是重组人血白蛋白 1.定义 通过基因重组的技术将目的蛋白的基因克隆后,将该基因插入到某种生物(如细菌、酵母、植物,哺乳动物细胞等)中进行复制,然后收集的白蛋白称为重组人血白蛋白。 2.rHSA的等级分类 按不同的质量标准分为了培养基级、药用辅料级和药用注射级(药用级)三类,三类级别的重组人血白蛋白生产工艺相同,但最终控制参数不同,药用级白蛋白质量标准最高。 3.rHSA的表达系统分类 白蛋白(Human Serum Albumin,HSA)是一组复杂的大分子蛋白质,必须经过正确的折叠、组装和翻译后修饰,才能赋予其特定的结构和功能,表达系统是重组人血白蛋白生产过程中极其重要的环节。 (1)原核表达系统

HSA基因最早就是在原核生物大肠杆菌(E.coli)中表达成功的,Lawn等于1981年首次报道了rHSA的cDNA序列并首次构建了第一个表达rHSA的表达载体pHSA,然后在E.coli中表达成功,表达量为细胞总蛋白的7%,但E.coli表达系统体外很难正确折叠和组装结构复杂的HAS,缺乏翻译后的修饰和加工,表达的蛋白多形成包涵体,且纯化较难,所以未能得到有生物功能的蛋白,细菌细胞壁脂多糖还会造成热反应。因为HSA在原核生物中表达量不高且分泌效果不够理想,所以研究的重点转向其在真核生物细胞中的表达。 (2)酵母表达系统 酵母作为单细胞真核生物,既具有原核生物的容易培养、生长繁殖快、相对易于进行基因工程操作等优点,还具有原核生物缺少的其他优点,如蛋白质翻译后修饰和加工以获得有生物活性的重组蛋白,表达量和分泌量较大,易于产业化培养,非常适合白蛋白及其他非糖基化血浆蛋白的大规模制备。 研究者们用到的酵母表达系统有毕赤酵母(Pichia pastoris)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维氏酵母(Kluyveromyces lactis)等。在酿酒酵母中,Okabayashi等通过构建在染色体LEU2和HIS4位点上整合的质粒获得能连续分泌rHSA的稳定转化株,每升培养基达到85mg rHSA。 毕赤酵母表达量和分泌量高且稳定,自身分泌蛋白量小,作为基因表达系统研究和使用的最多,已基本掌握其生长规律及大规模高密度发酵技术,被认为是最有发展前景的蛋白质生产工具之一。毕赤酵母非常适合人血白蛋白等非糖基化血浆蛋白的大规模制备,成为目前rHSA的主要表达系统。 (3)其他表达系统 作为“生物反应器”的转基因动物自1987年以来就引起学者们广泛的关注。就生产rHSA来说,最理想的表达场所是乳腺,因为乳腺是外分泌器官从而不会影响转基因动物本身的生理,表达的蛋白能经过充分的翻译后修饰加工,组

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