实验一参考资料
实验一单结晶体管触发电路、锯齿波同步移相触发电路实验
一、实验目的
(1)熟悉单结晶体管触发电路的工作原理及电路中各元件的作用。
(2)掌握单结晶体管触发电路的调试步骤和方法。
二、实验所需挂件及附件
序号型号备注
1 HKDD-1 电源控制屏该控制屏包含“三相电源输出”等几个模块。
2 HKDT05 晶闸管触发电路
3 双踪示波器
三、实验线路及原理
（1）单结晶体管触发电路的工作原理已在第6页中作过介绍（请翻到指导书第6页单结晶体管触发电路）。
（2）锯齿波同步移相触发电路的原理图在本实验指导书的第8页中介绍。锯齿波同步移相触发电路由同步检测、锯齿波形成、移相控制、脉冲形成、脉冲放大等环节组成中的相关内容。
四、实验内容
(1)单结晶体管触发电路的调试。
(2)单结晶体管触发电路各点电压波形的观察。
(3)锯齿波同步移相触发电路的调试。
(4)锯齿波同步移相触发电路各点波形的观察和分析。
五、预习要求
(1)阅读本教材第6页中有关单结晶体管触发电路的内容，弄清单结晶体管触发电路的工作原理。
(2)阅读本教材第8页锯齿波同步触发电路中有关锯齿波同步移相触发电路的内容，弄清锯齿波同步移相触发电路的工作原理。
(3)掌握锯齿波同步移相触发电路脉冲初始相位的调整方法。
六、思考题
(1)单结晶体管触发电路的振荡频率与电路中C1的数值有什么关系?
(2)单结晶体管触发电路的移相范围能否达到180°左右?
(3)锯齿波同步移相触发电路有哪些特点?
(4)锯齿波同步移相触发电路的移相范围与哪些参数有关?
七、实验方法
(1)单结晶体管触发电路的观测
将HKDD-1 电源控制屏的电源通过设备左侧自藕调压器黑色旋钮使三相输出为线电压380V,相电压220V，因为HKDT05的正常工作电源电压为220V 10%。如果输入电压超出其标准工作范围，挂件的使用寿命将减少，甚至会导致挂件的损坏。将输出的相电压调到220V左右，然后才能将U,V,W其中某一相与N相电源接入挂件，用两根导线将220V交流电压接到HKDT05的“外接220V”端，将单结晶体管上RP1电阻调到初始位（最左端），按下“启动”按钮，打开HKDT05电源开关。这时挂件中所有的触发电路都开始工作，用双踪示波器观察单结晶体管触发电路，用一组示波器探头去测量交流输出端AC30V正弦波，然后用另外一组示波器探头去测量交流经半波整流后“1”点的波形，经稳压管削波得到“2”点的波形，调节移相电位器RP1往右边旋转，观察“4”点锯齿波与在正弦波中的周期变化及“5”点的触发脉冲波形在正弦波中的周期变化；最后观测输出的“G、K”触发电压波形，其能否正弦波周期中30°～170°范围内移相?
(2)单结晶体管触发电路各点波形的记录
当α＝30o、60o、90o、120o时，将单结晶体管触发电路的各观测点波形描绘下来，并与图1-1的各波形进行比较。
图1-1
(3)锯齿波同步移相触发电路的观测
用双踪示波器观察锯齿波同步触发电路各观察孔的电压波形，用一组示波器探头去测量交流同步输出端电压AC7V正弦波，然后用另外一组示波器探头去测量以下几点的波形：
1.同时观察同步电压和“1”点的电压波形如图1-2“TP1”所示，了解“1”点波形形成的原因。
2.调节RP1电位器观察“1”、“2”点的电压波形到如图1-2“TP1/TP2”所示，了解锯齿波宽度和“1”点电压波形的关系，同时观察锯齿波斜率的变化（顺时针方向调节锯齿波斜率变小，逆时针方向调节是锯齿波斜率变大）。
3.调节电位器RP2，RP3逆时针旋转到头，观察“3”～“6”点电压波形和输出电压的波形，记下各波形的幅值与宽度，并比较“3”点电压U3和“6”点电压U6的对应关系。
(4)调节触发脉冲的移相范围
将控制电压U ct调至零(将电位器RP2顺时针旋到底)，用示波器观察同步电压信号和“6”点U6的波形，调节偏移电压U b(即调RP3电位器)，使α=170°。
图1-2锯齿波同步移相触发电路
(5)调节Uct（即电位器RP2）和Ub(即调RP3电位器)使α=60°，观察并记录U1～U6及输出“G、K”脉冲电压的波形，标出其幅值与宽度，并记录在下表中(可在示波器上直接读出，读数时应将示波器的“V/DIV”和“t/DIV”微调旋钮旋到校准位置)。
U1U2U3U4U5U6幅值(V)
宽度(ms)
八、实验报告
画出α=60°时，单结晶体管触发电路各点输出的波形及其幅值。
(1)整理、描绘实验中记录的各点波形，并标出其幅值和宽度。
(2)总结锯齿波同步移相触发电路移相范围的调试方法，如果要求在U ct=0的条件下，使α=90°，如何调整?
(3)讨论、分析实验中出现的各种现象。
九、注意事项
双踪示波器有两个探头，可同时观测两路信号，但这两探头的地线都与示波器的外壳相连，所以两个探头的地线不能同时接在同一电路的不同电位的两个点上，否则这两点会通过示波器外壳发生电气短路。为此，为了保证测量的顺利进行，可将其中一根探头的地线取下或外包绝缘，只使用其中一路的地线，这样从根本上解决了这个问题。当需要同时观察两个信号时，必须在被测电路上找到这两个信号的公共点，将探头的地线接于此处，探头各接至被测信号，只有这样才能在示波器上同时观察到两个信号，而不发生意外。
触发电路工作原理
1、单结晶体管触发电路
利用单结晶体管(又称双基极二极管)的负阻特性和RC的充放电特性，可组成频率可调的自激振荡电路，如图1-4所示。
图中V6为单结晶体管，其常用的型号有BT33和BT35两种，由等效电阻V5和C1组成组成RC充电回路，由C1-V6-脉冲变压器组成电容放电回路，调节RP1即可改变C1充电回路中的等效电阻。
图1-4 单结晶体管触发电路原理图
图1-5 单结晶体管触发电路各点的电压波形(α=900)
工作原理简述如下：
由同步变压器副边输出30V的交流同步电压，经VD1半波整流，再由稳压管V1、V2进行削波，从而得到梯形波电压，其过零点与电源电压的过零点同步，梯形波通过R7及等效可变电阻V5向电容C1充电，当充电电压达到单结晶体管的峰值电压U P时，单结晶体管V6导通，电容通过脉冲变压器原边放电，脉冲变压器副边输出脉冲。同时由于放电时间常数很小，C1两端的电压很快下降到单结晶体管的谷点电压U v，使V6关断，C1再次充电，周而复始，在电容C1两端呈现锯齿波形，在脉冲变压器副边输出尖脉冲。在一个梯形波周期内，V6可能导通、关断多次，但只有输出的第一个触发脉冲对晶闸管的触发时刻起作用。充电时间常数由电容C1和等效电阻等决定，调节RP1改变C1的充电的时间，控制第一个尖脉冲的出现时刻，实现脉冲的移相控制。单结晶体管触发电路的各点波形如图1-5所示。
电位器RP1已装在面板上，同步信号已在内部接好，所有的测试信号都在面板上引出。
3、锯齿波同步移相触发电路I、II
锯齿波同步移相触发电路I、II由同步检测、锯齿波形成、移相控制、脉冲形成、脉
冲放大等环节组成，其原理图如图1-8所示。
图1-8锯齿波同步移相触发电路I原理图
由V3、VD1、VD2、C1等元件组成同步检测环节，其作用是利用同步电压U T来控制锯齿波产生的时刻及锯齿波的宽度。由V1、V2等元件组成的恒流源电路，当V3截止时，恒流源对C2充电形成锯齿波；当V3导通时，电容C2通过R4、V3放电。调节电位器RP1可以调节恒流源的电流大小，从而改变了锯齿波的斜率。控制电压U ct、偏移电压U b和锯齿波电压在V5基极综合叠加，从而构成移相控制环节，RP2、RP3分别调节控制电压U ct和偏移电压U b的大小。V6、V7构成脉冲形成放大环节，C5为强触发电容改善脉冲的前沿，由脉冲变压器输出触发脉冲，电路的各点电压波形如图1-9所示。
本装置有两路锯齿波同步移相触发电路，I和II，在电路上完全一样，只是锯齿波触发电路II输出的触发脉冲相位与I恰好互差180O，供单相整流及逆变实验用。
电位器RP1、RP2、RP3均已安装在挂箱的面板上，同步变压器副边已在挂箱内部接好，
所有的测试信号都在面板上引出。
图1-9 锯齿波同步移相触发电路I各点电压波形(α=900)
传感器实验参考资料解析
光电传感器测转速实验 实 验 指 导 书
简 介 一、本实验装置的设计宗旨： 本实验装置具有设计性、趣味性、开放性和拓展性，实验中大量重复的接线、调试和后续数据处理、分析、可以加深学生对实验仪器构造和原理的理解，有利于培养学生耐心仔细的实验习惯和严谨的实验态度。非常适合大中专院校开设开放性实验。本实验装置采用了性能比较稳定，品质较高的敏感器件，同时采用布局较为合理且十分成熟的电路设计。 二、光电传感器测转速实验实验装置 1．传感器实验台部分 2．九孔实验板接口平台部分：九孔实验板作为开放式和设计性实验的一个桥梁（平台）； 3．JK-19型直流恒压电源部分：提供实验时所必须的电源； 4．处理电路模块部分：差动放大器、电压放大器、调零、增益、移相等模块组成。 三、主要技术参数、性能及说明： （1）光电传感器：由一只红外发射管与接收管组成。 （2）差动放大器：通频带kHz 10~0可接成同相、反相、差动结构，增益为100~1倍的直流放大器。 （3）电压放大器：增益约为5位，同相输入，通频带kHz 10~0。 （4）19JK -型直流恒压电源部分：直流V 15±，主要提供给各芯片电源： V 6 ,V 4 ,V 2±±±分三档输出，提供给实验时的直流激励源；V 12~0：A 1ax Im =作 为电机电源或作其它电源。 光电传感器测转速实验 【实验原理】 如图所示：光电传感器由红外发射二极管、红外接收管、达林顿出管及波形整形组成。
发射管发射红外光经电机转动叶片间隙，接收管接收到反射信号，经放大，波形整形输出方波，再经转换测出其频率，。 图1 【实验目的】 了解光电传感器测转速的基本原理及运用。 【实验仪器】 如图所示，光电式传感器、JK-19型直流恒压电源、示波器、差动放大器、电压放大器、频率计和九孔实验板接口平台。 图2 图3 【实验步骤】 1．先将差动放大器调零，按图1接线；
参考资料
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参考文献格式 (1)
几种常见参考文献的著录格式 一、专著 [序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识].出版地：出版者，出版年.起止页码. [1]刘国钧，陈绍业，王凤翥.图书馆目录[M].北京：高等教育出版社，1957:15-18. 二、期刊文章 [序号]主要责任者.文献题名[J].刊名，年，卷(期)：起止页码. [2]何龄修.读顾城《南明史》[J].中国史研究，1998(3)：167-173. [3]金显贺.一种用于数字滤波技术[J].清华大学学报：自然科学版，1993，33(4)：62-67. [4]刘超,卓馨，吴怡康，等.一种新的吲哚乙胺型夫碱的合成、表征及其晶体结构[J].宿州学学报，2012，27(5)：62-67. 三、专著或文集中析出文献 [序号]析出文献作者.析出文献题名[M]//专著或文集作者.专著或文集名.出版地：出版者，出版年：起止页码. 四、学位论文 [序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识].存放地：大学到系部，出版者，出版年：起止页码. [5]谢博.高校教师评价体系的研究[D].重庆：西南交通大学管理科学与工程学院,2010:42-45. 五、报纸文献
[序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识].报纸名称，年-月-日(版序) [6]江山.文艺研究要百花齐放[N].文艺时报，2009-02-18(6) 六、标准文献 [序号]标准代号.标准名称[S].出版地：出版单位，出版年 [7] GB/T 2694-2010.输电线路铁塔制造技术条件[S].北京：中国电力出版社，20009 七、网络文献 [序号]作者名.作品名[EB/OL].[访问时间,00-00-00].网址
最新材料力学实验参考教学教材
实验一、测定金属材料拉伸时的力学性能 一、实验目的 1、测定低碳钢的屈服极限s σ，强度极限b σ，延伸率δ和面积收缩率ψ。 2、测定铸铁的强度极限b σ。 3、观察拉伸过程中的各种现象，并绘制拉伸图（l F ?-曲线）。 二、仪器设备 1、液压式万能试验机。 2、游标卡尺。 三、实验原理简要 材料的力学性质s σ、b σ、δ和ψ是由拉伸破坏试验来确定的。试验时，利用试验机自动绘出低碳钢拉伸图和铸铁拉伸图。对于低碳材料，确定屈服载荷s F 时，必须缓慢而均匀地使试件产生变形，同时还需要注意观察。测力回转后所指示的最小载荷即为屈服载荷s F ，继续加载，测得最大载荷b F 。试件在达到最大载荷前，伸长变形在标距范围内均匀分布。从最大载荷开始，产生局部伸长和颈缩。颈缩出现后，截面面积迅速减小，继续拉伸所需的载荷也变小了，直至断裂。 铸铁试件在极小变形时，就达到最大载荷，而突然发生断裂。没有流动和颈缩现象，其强度极限远低于碳钢的强度极限。 四、实验过程和步骤 1、用游标卡尺在试件的标距范围内测量三个截面的直径，取其平均值，填入记录表内。取三处中最小值作为计算试件横截面积的直径。 2、 按要求装夹试样（先选其中一根），并保持上下对中。 3、 按要求选择“试验方案”→“新建实验”→“金属圆棒拉伸实验”进行试验，详细操 作要求见万能试验机使用说明。 4、 试样拉断后拆下试样，根据试验机使用说明把试样的l F ?-曲线显示在微机显示屏 上。从低碳钢的l F ?-曲线上读取s F 、b F 值，从铸铁的l F ?-曲线上读取b F 值。 5、 测量低碳钢（铸铁）拉断后的断口最小直径及横截面面积。 6、 根据低碳钢（铸铁）断口的位置选择直接测量或移位方法测量标距段长度1l 。 7、 比较低碳钢和铸铁的断口特征。
参考文献实验报告格式
参考文献实验报告格式 在这个阶段中，学生根据已有知识的经验，通过演绎、归纳、推理而提出的假设，不少带有猜测的性质。此时教师要引导学生积极作出假设，不应压抑学生的思维，不管是对是错，都不要忙于作出评价。下面是精心收集的参考文献实验报告格式，希望能对你有所帮助。 一、实验目的 1.干涉的实验目的 1)组装调节迈克尔逊干涉仪，观察点光源产生的非定域等厚、等倾干涉条纹记录。 2)观察干涉条纹反衬度随光程差变化。了解光源干涉长度的意义，检查防震台稳定性。 3)比较平面波和球面波产生干涉条纹的区别。 2.衍射的实验目的 1)验证夫琅禾费衍射图样的若干规律。 2)掌握测量利用光电元件测量光强的方法。 3)用Matlab模拟夫琅禾费衍射现象。 二、实验仪器 1.干涉实验仪器 He-Ne激光器，反射吧镜，衰减器，分光光楔，扩束器，显微物镜镜头，光阑，CCD，配备相关软件的计算机，白板。 2.衍射实验仪器
He-Ne激光器，反射镜，双凸透镜，狭缝，圆孔，一维光栅，衰减器，CCD，计算机。 三、基本原理 1.迈克尔逊干涉仪的非定域干涉条纹 本仪器是用分裂振幅的方法产生双光束干涉以实现光的干涉。从激光器岀射的光束经过准直扩束器系统，形成一束宽度合适的平行光束。这束平行光射入分光棱镜之后分为两束。一束由分光棱镜反射后到达发射镜，经反射后透过分光棱镜，形成岀射光束，这是第一光束；另一束透过分光棱镜，到达反射镜，经过反射后再次到达分光棱镜，形成反射光束，这是第二束光。在分光棱镜前方两束光的重叠区域放上CCD。 干涉原理，如有图所示，其中S为单色点源，M1、M2为互相垂直放置的平面反射镜。BS为分束镜，放在M1M2法线的交点上，并分别与M1、M2成45°角。电光源S发出球面波经BS的镀膜层分为两束光。这两束光分别经M1、M2反射又回到BS，在BS上透过和反射的这两束光在BS的右侧空间形成一非定域的干涉场。屏幕放在干涉场中垂直于光束方向，在屏幕 上可以看到干涉条纹。M2’与M1平行时（及M2与M1相互垂直），产生圆形干涉条纹，当M2’与M1之间有一定小的倾角时，屏幕上的干涉条纹不再是圆形的封闭曲线，而变成弯线或是接近直线（实际上是双曲线或椭圆的一部分）。 圆心条纹中心处的光强取决于M1M2相对的距离d，即：
参考文献的写法(全)[1]
参考文献（即引文出处）的类型以单字母方式标识： M——专著，C——论文集，N——报纸文章，J——期刊文章，D——学位论文，R——报告，S——标准，P——专利； 对于不属于上述的文献类型，采用字母“Z”标识。 参考文献一律置于文末。其格式为： （一）专著 示例 [1] 张志建.严复思想研究[M]. 桂林：广西师范大学出版社，1989. [2] 马克思恩格斯全集：第1卷[M]. 北京：人民出版社，1956. [3] [英]蔼理士.性心理学[M]. 潘光旦译注.北京：商务印书馆，1997. （二）论文集 示例[1] 伍蠡甫.西方文论选[C]. 上海：上海译文出版社，1979. [2] 别林斯基.论俄国中篇小说和果戈里君的中篇小说[A]. 伍蠡甫.西方文论选：下册[C]. 上海：上海译文出版社，1979. 凡引专著的页码，加圆括号置于文中序号之后。 （三）报纸文章 示例[1] 李大伦.经济全球化的重要性[N]. 光明日报，1998-12-27，（3）（四）期刊文章 示例[1] 郭英德.元明文学史观散论[J]. 北京师范大学学报（社会科学
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高电压技术实验参考资料剖析
高电压技术实验参考资料 一、高电压实验课的目的和任务 1.熟悉和掌握高电压试验的基本技术。 2.通过实验，培养同学分析问题和解决问题的能力，使同学们初步掌握进行实验研究的一些基本方法。 3.树立安全第一的观点，保证人身和设备的安全是进行高压试验特别强调的问题，思想上必须自始至终保持高度的重视。 4.培养同学重视实际、遵守制度、爱护国家财产和严谨踏实的工作作风。 二、高电压试验的基本技术 1.掌握高电压试验的基本安全技术。 通过实验，同学们不仅在思想上要树立安全第一的观点，而且在实际工作中要养成严格的安全习惯。所以，要求同学们正确而熟练的掌握以下的基本安全技术。 a、掌握高压实验中必须的安全措施(防护栏、联锁、接地和安全距离)以及试验前的安全检查内容。 b、按照实验规则的要求，呼叫口令，并按实验程序进行操作。 c、掌握基本安全工具——接地杆的使用和检查。 2.学会安排试验条件和掌握工频试验变压器的正确使用。 3.掌握高电压试验的基本方法和典型仪器的使用。 a、掌握主要电力设备(套管、避雷器、电力变压器、线路绝缘子、电缆、电容器等)绝缘的基本检查和试验方法，包括绝缘电阻、泄漏电流、介质损耗因数、局部放电等的测量。以及击穿试验、耐压试验等。 b、掌握测量球隙、静电电压表、多种分压器、兆欧表、以及数字量的测量和使用方法。
三、对同学们的要求 1.预习：要求掌握实验内容、方法及基本原理，并选择试验所需设备、元件、仪器、仪表(包括使用方法)及试验点。画出试验线路图和原始记录表格。 2.实验：必须认真操作，观察实验中发生的现象，记录每次数据，注意安全，严格遵守实验规则，听从教师指导，实验后清理现场。 3.写出实验报告： 格式如下： a、实验目的 b、实验线路图，线路图要整齐、清楚(不得徒手画)，并对图中设备的符号列表说明 c、实验内容及数据整理：数据应列表，对所用符号的含义和单位应加以说明，需计算部分应列出引用的公式和说明计算方法。必要时，应绘曲线。 d、现象描述：主要是放电现象，或在实验中遇到的其它现象(如故障现象)，若无此内容，可省略。 e、分析讨论：对整个实验的数据、波形、实验现象用所学的知识进行分析讨论，并加以总结。 f、.严格遵守课堂纪律，不得迟到、早退。按时交报告。 四、高压实验室学生实验规则： (一) 实验前： 1.预习与组织： a、同学必须认真预习实验内容，教师要提问检查，不预习者不得参加实验，实验前应交前次实验报告。 b、每实验组推选组长一人，组内可轮流担任，并兼安全监护人。 2.实验前的检查： a、检查设备、仪表有元损坏。如有损坏.应立即向教师报告。
参考资料
参考资料 1.本文讲解怎样处理鼠标消息。编程思路有很多种，本文只是提供一种思路，并非一定要照这么做。 通常写小游戏时，很多人会有一个主循环，类似这样： while(true) { 获取用户控制(); 进行游戏运算(); 绘制游戏内容(); Sleep(xx); } 当添加鼠标操作时，会这样写（错误代码）： // 定义变量，保存鼠标消息 MouseMsg msg; // 游戏的主循环 while(true) { if (MouseHit()) // 当有鼠标消息的时候执行 { msg = GetMouseMsg(); // 获取鼠标消息 switch(msg.uMsg) // 根据不同的鼠标消息，执行不同的代码 {
case xxxx: 进行游戏运算(); break; case xxxx: 进行游戏运算(); break; } } 绘制游戏内容(); Sleep(xx); // 延时，降低 CPU 占用率 } 这个代码的问题是，由于Sleep 的存在，导致鼠标消息的产生速度，超过游戏处理的速度。比如有Sleep(20)，那么主循环每秒钟最多循环50 次，也就最多处理50 次鼠标消息。但是鼠标移动时也会产生一系列的鼠标消息，这个速度远远超过每秒钟50 次，这就导致鼠标消息的缓冲区溢出，会导致每次处理得鼠标消息都是旧的，并且无法接收新的鼠标消息。 于是，有人在Sleep(xx) 之前，增加了函数FlushMouseMsgBuffer()，将多余的鼠标消息清空。很明显的，这样会造成另一个问题：鼠标消息丢失。产生的效果就是操作不灵敏，一些点击操作无效。因为鼠标移动的消息数量占大多数，点击操作占少数，清空的鼠标消息很可能包括点击操作，所以点击操作最受影响。 作为一种解决方案，可以考虑这么做： // 定义变量，保存鼠标消息 MouseMsg msg; // 游戏的主循环 while(true) { while (MouseHit()) // 当有鼠标消息的时候执行 { msg = GetMouseMsg(); // 获取鼠标消息
英语语言学参考资料1
Chapter I Introduction I. Decide whether each of the following statements is True or False: 1. Linguistics is generally defined as the scientific study of language. 2.Linguistics studies particular language, not languages in general. 3. A scientific study of language is based on what the linguist thinks. 4. In the study of linguistics, hypotheses formed should be based on language facts and checked against the observed facts. 5. General linguistics is generally the study of language as a whole. 6. General linguistics, which relates itself to the research of other areas, studies the basic concepts, theories, descriptions, models and methods applicable in any linguistic study. 7. Phonetics is different from phonology in that the latter studies the combinations of the sounds to convey meaning in communication. 8. Morphology studies how words can be formed to produce meaningful sentences. 9. The study of the ways in which morphemes can be combined to form words is called morphology. 10. Syntax is different from morphology in that the former not only studies the morphemes, but also the combination of morphemes into words and words into sentences. 11. The study of meaning in language is known as semantics. 12. Both semantics and pragmatics study meanings. 13. Pragmatics is different from semantics in that pragmatics studies meaning not in isolation, but in context. 14.Social changes can often bring about language changes. 15. Sociolinguistics is the study of language in relation to society. 16. Modern linguistics is mostly prescriptive, but sometimes descriptive. 17. Modern linguistics is different from traditional grammar. 18. A diachronic study of language is the description of language at some point in time. 19 Modern linguistics regards the written language as primary, not the written language. 20. The distinction between competence and performance was proposed by F. de Saussure.
FISH实验文献参考
Video Article Fluorescent in situ Hybridization on Mitotic Chromosomes of Mosquitoes Vladimir A. Timoshevskiy1, Atashi Sharma1, Igor V. Sharakhov1, Maria V. Sharakhova1 1Department of Entomology, Virginia Tech Correspondence to: Maria V. Sharakhova at msharakh@https://www.360docs.net/doc/d610377204.html, URL: https://www.360docs.net/doc/d610377204.html,/video/4215 DOI: doi:10.3791/4215 Keywords: Immunology, Issue 67, Genetics, Molecular Biology, Entomology, Infectious Disease, imaginal discs, mitotic chromosomes, genome mapping, FISH, fluorescent in situ hybridization, mosquitoes, Anopheles, Aedes, Culex Date Published: 9/17/2012 Citation: Timoshevskiy, V.A., Sharma, A., Sharakhov, I.V., Sharakhova, M.V. Fluorescent in situ Hybridization on Mitotic Chromosomes of Mosquitoes. J. Vis. Exp. (67), e4215, doi:10.3791/4215 (2012). Abstract Fluorescent in situ hybridization (FISH) is a technique routinely used by many laboratories to determine the chromosomal position of DNA and RNA probes. One important application of this method is the development of high-quality physical maps useful for improving the genome assemblies for various organisms. The natural banding pattern of polytene and mitotic chromosomes provides guidance for the precise ordering and orientation of the genomic supercontigs. Among the three mosquito genera, namely Anopheles, Aedes, and Culex, a well-established chromosome-based mapping technique has been developed only for Anopheles, whose members possess readable polytene chromosomes 1. As a result of genome mapping efforts, 88% of the An. gambiae genome has been placed to precise chromosome positions 2,3 . Two other mosquito genera, Aedes and Culex, have poorly polytenized chromosomes because of significant overrepresentation of transposable elements in their genomes 4, 5, 6. Only 31 and 9% of the genomic supercontings have been assigned without order or orientation to chromosomes of Ae. aegypti 7 and Cx.quinquefasciatus 8, respectively. Mitotic chromosome preparation for these two species had previously been limited to brain ganglia and cell lines. However, chromosome slides prepared from the brain ganglia of mosquitoes usually contain low numbers of metaphase plates 9. Also, although a FISH technique has been developed for mitotic chromosomes from a cell line of Ae. aegypti 10, the accumulation of multiple chromosomal rearrangements in cell line chromosomes 11 makes them useless for genome mapping. Here we describe a simple, robust technique for obtaining high-quality mitotic chromosome preparations from imaginal discs (IDs) of 4th instar larvae which can be used for all three genera of mosquitoes. A standard FISH protocol 12 is optimized for using BAC clones of genomic DNA as a probe on mitotic chromosomes of Ae. aegypti and Cx.quinquefasciatus, and for utilizing an intergenic spacer (IGS) region of ribosomal DNA (rDNA) as a probe on An. gambiae chromosomes. In addition to physical mapping, the developed technique can be applied to population cytogenetics and chromosome taxonomy/systematics of mosquitoes and other insect groups. Video Link The video component of this article can be found at https://www.360docs.net/doc/d610377204.html,/video/4215/ Protocol 1. Chromosome Preparation Mosquito larvae were reared using a standard protocol described in Methods in Anopheles Research available at the website of the Malaria Research and Reference Reagent Resource Center(MR4) 13. The temperatures of mosquito rearing were modified to provide the highest number of chromosomes in imaginal discs and lowest mortality of the larvae. The stages of mosquito larvae development were determined based on the sizes of their head capsules 13. 1.Hatch mosquito eggs at 28 °C, and after 2-3 days, transfer 2nd or 3rd instar larvae to 16 °C for Ae. aegypti and Cx. quinquefasciatus and to 22 °C for An. gambiae. 2.Place 4th instar larvae on ice for several minutes for immobilization. 3.Transfer larva to a slide with a drop of cold hypotonic solution (0.5% sodium citrate or 0.075 M potassium chloride), and place it under the stereo microscope. 4.Select larva with oval IDs (Figure 1B) for further dissection. 5.Decapitate larva, and cut the cuticle from the ventral side of the larval thorax using dissecting scissors (Figure 2A). Make additional cut in second or third abdominal segment to dissect the gut from the larva. The directions of the cuts are shown by arrows. 6.Open the cuticle, and remove the gut and fat body from the larva. Remove the hypotonic solution from the slide using filter paper, and add a fresh drop of hypotonic solution directly to the IDs (Figure 2B). Keep larva in hypotonic solution for 10 min at RT. 7.Remove hypotonic solution using filter paper, and apply Carnoy's solution (ethanol/acetic acid in 3:1 ratio). After adding fixative solution, IDs immediately turn white and become easily visible under the microscope (Figure 2C). https://www.360docs.net/doc/d610377204.html,ing dissecting needles, remove IDs from the larva (Figure 2D), and transfer them to a drop of 50% propionic acid. Remove any other tissues, such as the gut and fat body, from the slide. Cover IDs with an unsiliconized 22x22 cover slip, and keep for 10 min at RT. 9.Cover the slide with filter paper, and squash the tissue by tapping the eraser of a pencil on the perimeter of the cover slip. 10.Briefly analyze the quality of the slide using the phase-contrast microscope at 100x or 200x magnification (Figure 3). Preparations with >50 chromosome spreads can be considered suitable for FISH.
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参考文献的标准格式[1]
参考文献著录格式标准规范 参考文献应引作者亲自阅过的近年的主要文献，一般文章不超过5篇，评述、综述性文章不超过20篇。未公开发表的资料请勿引用，但可作脚注处理。参考文献列于文后，正文中也须用上角标标出引用文献的序号。参考文献用“顺序编码制”，即各篇文献按其在正文中的标注序号依次列出。参考文献条目著录：个人著者采用姓在前，名在后的著录格式。作者3人以下全部著录，4人以上只著录前３人，之间加“，”，后加“等” 或“etal”。 1.参考文献类型及标识 2.文后参考文献编排格式 （1）专著、论文集、学位论文、报告 [序号]作者.文献题名[文献类型标识] ．出版地：出版者．出版年，起止页码（任选）. 范例：[1]杨浩滨.食品微生物学[M].北京：北京农业大学出版社，1995，28-30. (2) 期刊文章 [序号]主要责任者.文献题名[J].刊名，年，卷（期）：起止页码. 范例：[5]肖凯军.大豆分离蛋白的酶法改性[J]. 食品科学，1995，
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