尿素总氮含量的测定蒸馏后滴定法

FNCPFL0001 尿素总氮含量的测定蒸馏后滴定法

F_NCP_FL_ 0001

尿素－总氮含量的测定－蒸馏后滴定法

1 范围

本方法适用于由氨和二氧化碳合成制得的尿素总氮含量的测定。本方法为仲裁检验方法。

2 原理

有硫酸铜存在下，在浓硫酸中加热使试料中酰胺态氮转化为氨态氮，蒸馏并吸收在过量的硫酸溶液中，在指示液存在下，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定剩余的酸。

3 试剂

3.1 五水硫酸铜(CuSO4·5H2O)

3.2 硫酸，ρ约1.84g/mL

3.3 硫酸溶液，c(1/2H2SO4)=0.5mol/L或c(1/2H2SO4)=1.0mol/L

量取15.0mL或30.0mL硫酸慢慢注入盛有400 mL水的600mL烧杯内，混匀。冷却后转移至1L容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。前者硫酸溶液的浓度为c(1/2H2SO4)=0.5mol/L，后者硫酸溶液的浓度为c(1/2H2SO4)=1.0mol/L。

3.4 氢氧化钠溶液，450g/L

3.5 甲基红-亚甲基蓝混合指示剂溶液

3.5.1 配制甲基红溶液(2g/L)：称取0.20g甲基红，溶于95%(体积分数)乙醇，用95%(体积分数)乙醇稀释至100mL。

3.5.2 配制亚甲基蓝溶液(1g/L)：称取0.10g亚甲基蓝，溶于95%(体积分数)乙醇，用95%(体积分数)乙醇稀释至100mL。

3.5.3 将50mL甲基红溶液(2g/L)和50mL亚甲基蓝溶液(1g/L)混合。

3.6 氢氧化钠标准滴定溶液，c(NaOH)=0.5mol/L

3.6.1 无二氧化碳水的制备：

将水注烧瓶入中(水量不超过烧瓶体积的2/3)，煮沸10min，放置冷却，用装有碱石灰干燥管的橡皮塞塞紧。制备10L~20L较大体积的不含二氧化碳的水，可插一玻璃管到容器底部，往水中通氮气1h~2h，以除去被水吸收的二氧化碳。

3.6.2 饱和氢氧化钠溶液的配制：

溶解162g氢氧化钠于150mL无二氧化碳水中，冷却至室温。通过合格的介质（例如：玻璃毛）过滤，清液贮存于密闭的聚乙烯容器内；或溶液贮存于密闭的聚乙烯容器，放置至上层溶液清澈（放置时间一周），使用时吸取清液。

3.6.3 氢氧化钠标准滴定溶液的配制：

量取27.2mL氢氧化钠饱和溶液清液，用无二氧化碳的水稀释至1L，混匀，贮存在带有碱石灰干燥管的密闭的聚乙烯瓶中，防止吸入空气中的二氧化碳。

3.6.4 标定：

用玛瑙研钵将10g～20g基准邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）研碎至粉状，置于120℃干燥箱内干燥2h，在干燥器内冷却。

配制酚酞指示剂溶液(10g/L)：称取1.0g酚酞，溶于95%(体积分数)乙醇，用95%(体积分数)乙醇稀释至100mL。

称取干燥过的邻苯二甲酸氢钾4.75g±0.05g（准确至0.0001g），置于250mL锥形瓶中，加100mL无二氧化碳的水溶解，加入3滴酚酞指示剂溶液，用氢氧化钠溶液滴定溶液至浅红色为终点。

3.6.5 计算

氢氧化钠标准滴定溶液浓度按下式计算：

m c ×=2042.0)NaOH ( 式中：

c (NaOH) ——氢氧化钠标准滴定溶液之物质的量浓度，mol/L ；

m ——称取的邻苯二甲酸氢钾质量，g ；

V ——滴定用去氢氧化钠溶液实际体积，mL ；

0.2042——与1.00mL 氢氧化钠标准滴定溶液[c (NaOH)=1.000mol/L]相当的以克表示的邻苯二甲酸氢钾的质量。

计算结果取四位有效数字。

3.6.6 精密度

做五次平行测定，取平行测定的算术平均值为测定结果。

五次平行测定的极差，应小于0.00100 mol/L 。

3.6.7 稳定性

氢氧化钠标准滴定溶液推荐使用聚乙烯容器贮存，若使用玻璃容器，当怀疑溶液与玻璃容器发生反应或溶液出现不溶物时，必须时常标定溶液。

3.7 硅脂

4 仪器设备

4.1 一般实验室仪器

4.2 蒸馏仪器

带标准磨口的成套仪器或能保证定量蒸馏和吸收的任何仪器。见下图。

4.3 梨形玻璃漏斗

4.4 防溅棒：一根长约100mm ，直径约5mm 的玻璃棒，一端套一根长约25mm 聚乙烯管。

5 分析步骤

5.1 试液制备

称取约5g 试样，精确至0.001g ，移入500mL 锥形瓶中，加入25mL 水、50mL 硫酸、0.5g 硫酸铜，插上梨形玻璃漏斗，在通风橱内缓慢加热，使二氧化碳逸尽，然后逐步提高加热温度，直至冒白烟，再继续加热20min 后停止加热，待锥形瓶中试液充分冷却后，小心加入300mL 水，冷却。

把锥形瓶中的试液，定量移入500mL 容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。

5.2 蒸馏

从容量瓶中移取50.0mL 试液于蒸馏烧瓶中，加入约300mL 水，4~5滴甲基红-亚甲基蓝混合指示剂溶液，放入一根防溅棒，套有聚乙烯管的一端向下。

用滴定管、移液管或自动加液器加40.0mL 硫酸溶液（0.5mol/L ）或20.0mL 硫酸溶液(1.0mol/L)于接受器中，加水使溶液量能淹没接受器的双连球瓶颈，加4~5滴甲基红-亚甲基蓝混合指示溶液。

用硅脂涂抹仪器接口，按图示装好蒸馏仪器，并保证仪器所有连接部分密封。

通过滴液漏斗向蒸馏烧瓶中加入足够量的氢氧化钠溶液（450g/L ），以中和溶液并过量25mL ，应当注意，滴液漏斗内至少存留几毫升溶液。

加热蒸馏，直到接受器中的溶液量达到250mL~300mL 时停止加热，拆下防溅球管，用水洗涤冷凝管，洗涤液收集在接受器中。

5.3 滴定

将接受器中的溶液混匀，用氢氧化钠标准滴定溶液(0.5mol/L)滴定，直至溶液呈灰绿色，滴定时要使溶液充分混匀。

5.4 空白试验

随同试样测定做空白试验。

6 结果计算

试料中总氮（N ，以干基计）含量w ，以质量分数（%）表示，按下式计算：

100

1005005010001401.0)(O H 122w m V V c w ?××××?×= 式中：

V 1——滴定试样溶液消耗的氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL ；

V 2——滴定空白试验溶液消耗的氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL ；

c ——氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，mol/L ；

m ——试料的质量，g ；

0.01401——1.00mL 氢氧化钠标准滴定溶液[c (NaOH)=1.000mol/L]相当于氮的质量； O H 2w ——试料的水分含量，%。

平行测定结果的平均值作为测定结果，所得结果表示至二位小数。

7 精密度

平行测定结果的绝对差值不大于0.10%；

不同实验室测定结果的绝对差值不大于0.15%。

8 参考文献

GB/T 2441.1-2001 尿素测定方法总氮含量的测定

HG/T 2843-1997 化肥产品化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液

土壤中氮含量的测定分析(精)

土壤中氮含量的测定分析核心提示：摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。关键词：土壤；全氮；测定方法土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态... 摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。关键词：土壤；全氮；测定方法土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态氮两大类，其中95%以上为有机态氮，主要包括腐殖质、蛋白质、氨基酸等。小分子的氨基酸可直接被植物吸收，有机态氮必须经过矿化作用转化为铵，才能被作物吸收，属于缓效氮。土壤全氮中无机态氮含量不到 5%，主要是铵和硝酸盐，亚硝酸盐、氨、氮气和氮氧化物等很少。大部分铵态氮和硝态氮容易被作物直接吸收利用，属于速效氮。无机态氮包括存在于土壤溶液中的硝酸根和吸附在土壤颗粒上的铵离子，作物都能直接吸收。土壤对硝酸根的吸附很弱，所以硝酸根非常容易随水流失。在还原条件下，硝酸根在微生物的作用下可以还原为气态氮而逸出土壤，即反硝化脱氮。部分铵离子可以被粘土矿物固定而难以被作物吸收，而在碱性土壤中非常容易以氨的形式挥发掉。土壤腐殖质的合成过程中，也会利用大量无机氮素，由于腐殖质分解很慢，这些氮素的有效性很低。土壤中的氮素主要来自施肥、生物固氮、雨水和灌溉水，后二者对土壤氮贡献很小，施肥是耕作土壤氮素的主要来源，而自然土壤的氮素主要来自生物固氮。土壤含氮量受植被、温度、耕作、施肥等影响，一般耕地表层含氮量为0.05%～0.30%，少数肥沃的耕地、草原、林地的表层土壤含氮量在 0.50%～0.60%以上。我国土壤的含氮量，从东向西、从北向南逐渐减少。进入土壤中的各种形态的氮素，无论是化学肥料，还是有机肥料，都可以在物理、化学和生物因素的作用下进行相互转化。 1 土壤全氮的测定 1.1 开氏法近百年来，许多科学工作者对全氮的测定方法不断改进，提出了许多新方法，主要有重铬酸钾-硫酸消化法、高氯酸-硫酸消化法、硒粉-硫酸铜-硫酸消化法。但开氏法目前仍作为一个统一的标准方法，此法容易掌握，测定结果稳定，准确率较高。开氏法测氮的原理为：在盐类和催化剂的参与下，用浓硫酸消煮，使有机氮分解为铵态氮。碱化后蒸馏出来的氨用硼酸吸收，以酸标准溶液滴定，求出土壤全氮含量（不包括硝态氮）。含有硝态和亚硝态氮的全氮测定，在样品消

尿素测定方法

实验十七实验名称：尿素的测定实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒实验原理：尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。操作方法： 1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液 2、按下列顺序加入各试剂单位ml 空白标准样本蒸馏水0.01 —— 样本－－0.01 标准液－0.01 －工作液 1.0 1.0 1.0 3、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA 实验现象与数据：记录ΔA 结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l）参考范围：1.7-8.3mmol/l 临床意义：实验十八实验名称：血清尿酸的测定实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。操作方法：按以下步骤操作单位ml 标准测定空白样本－0.025 －标准液0.025 －－蒸馏水－－0.025 酶试剂 1.0 1.0 1.0 混匀37℃温浴5min，以空白管调零。546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A 结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L

科普一下：临床医学检验中“尿素”与“尿素氮”的正确使用!

科普一下：临床医学检验中“尿素”与“尿素氮”的正确使用！发表时间：2019-12-04T11:09:47.143Z 来源：《健康世期界》2019年15期作者：徐登波 [导读] 四川省成都市武侯区人民医院 610041 我国经济建设以来，医疗行业得到较快发展，其中医学检验技术在此过程中得到不断优化，成为临床诊断中较为重要的一种检测方法，能够有效提升临床诊断准确性，不但能够使临床工作顺利开展，而且对患者疾病情况实施全面的测定，为采取针对性治疗方案奠定良好的基础。随着人们生活质量的不断提高，生活与工作压力逐渐增加，肾病发生率逐年提升，主要是受一些因素的影响，比如饮食习惯、生活习惯以及环境等，对患者生活质量造成不同程度的影响，这就需要采用科学、有效的检验方法对疾病实施有效评价，以此能够提升临床诊断准确性，从而提高患者治疗的效果，为提升患者生活质量奠定良好的基础。本文以尿素与尿素氮为例，首先阐述尿素氮与尿素的临床检验与尿素氮临床检验意义，而后对尿素氮检验使用与常见问题进行探究，最后着重探讨尿素在临床中的使用与两者之间检验方法的正确选择，分析在临床治疗过程中检验方法的正确使用，这对选择正确的治疗方法具有加大促进作用。一、尿素氮与尿素的临床检验在对患者肾功能医学检验的过程中，尿素临床检验在其中较为重要，但是因传统书籍中把尿素编写为尿素氮，导致临床医生在对两者检验区别与分析的过程中，很难对两者有全面的理解，致使无法深入分析尿素氮与尿素检验之间存在的差异性，这对临床科学判定产生不同程度的影响，所以为了提高肾功能患者诊断正确性，需要对尿素氮与尿素临床检验进行深入分析与应用，这提供患者治疗效果，恢复肾功能具有较大促进作用。二、尿素氮临床检验意义在对尿素氮进行临床检验的过程中，会出现数值增高的情况，这在较大程度上与肾前性少尿、肾功能损伤以及摄入过多等因素有关。此外，在对尿素氮进行临床检验期间，能够有效提升临床诊断准确率，但是在一些情况下检验报告很难对患者具体病情进行准确反应，这就需要通过化验单实施针对性判断，以此对患者实际病情与病情发展得出有效结论。除此之外，还需要采用科学的临床检验方法，能够为尿素氮数值的有效控制奠定良好的基础，并且在此基础上也是提高治疗方法疗效的重要标准。尿素氮数值降低在检验的过程中也时有发生，主要是与患者怀孕、肝脏功能等因素有较大关系，若出现数值降低的情况，应当对肝功能进行全面检查，并在此基础上对此进行全面分析，以此采取针对性治疗措施，这对疾病治疗具有较大的促进作用，为患者生活质量的提升意义重大。三、尿素氮检验使用分析 1、尿素氮检验使用目前我国临床在对尿素氮检验的过程中，一般情况下正常值为3.3 mmol/L-6.0mmol/L之间为正常，其检验的主要目的是对患者肾功能情况进行准确判断，由此可以看出尿素氮在使用的过程中，对患者疾病诊断与治疗尤为重要。此外，在一些情况下对患者进行痛风检验实施评定的过程中，主要使用血尿素氮检测方法，在检验的过程中首先需要对患者近期饮食情况、身体状况以及服用药物类型等进行全面了解，以此为提升检验结果的准确性奠定良好的基础，能够有效提高检验结果分析的准确性，与此同时对检验结果产生的不良影响的有效降低具有较大促进作用。在对尿素氮临床检验的过程中，对检验结果进行评定分析，能够为患者临床诊断与针对性治疗提供有利的数据依据。 2、尿素氮临床检验常见问题我国尿素氮在进行临床检验的过程中存在一些问题，比如抗凝剂使用不当、稳定性差以及NADH不足等问题，所以需要对患者临床实际检验中存在的问题进行深入分析，并在此基础上采取针对性解决方法，不但能够避免问题的发生，而且还可为检验准确性的提高奠定良好的基础，这对提高患者生活质量尤为重要。但是，因尿素氮中NADH稳定性相对较差，并且易被氧化，根据目前医疗技术很难对此问题进行解决，这就需要在检验期间应采取有效措施，最大程度降低环境因素的影响，并且在此基础上还需要对检测偏差进行纠正，以此确保将偏差降至最低，可有效提升检验结果的准确性，从而使尿素氮临床医学检验具有较高的科学性与可靠性。四、尿素在临床医学检验中的使用尿素与尿素氮之间能够相互转换，并且有固定的转换公式：mg/dL尿素氮0.0357=mmol/L尿素。尿素在临床医学检验的过程中，与尿素氮之间需要进行转换，在转换的过程职工能够通过计算来完成，但是在实际检验的过程中，不能只通过简单计算对尿素实施有效检验，其中与尿素氮检验相比较为全面，并且在此基础上具有较高的准确性，能够针对患者疾病情况收集评价信息。目前，尿素医学临床检验一般情况下采用尿素酶方法与直接方法实施有效测定，其中直接方法是通过尿素与相关试剂之间的有效作用，而对肾功能测定的方法主要使用二乙酰胯方法，尿素酶在医学检验的过程中，主要是将尿素转换成氨，再实施测定的一种方法，两者方法相比，直接方法在检测的过程中相对简单，并且在此基础上具有较高的灵活性，但是在检验期间加热环节会出现不同程度的异味，对检验过程产生一定影响，随着医学技术的不断发展逐渐被尿素酶替代。尿素酶所采用的方法具有较高的特异性，并且反应专一，不受外界因素的影响，具有较高的准确率，其缺点是检测过程需要花费大量时间来完成，并且会受到氨的影响。这就需要在临床实际应用的过程中，根据患者实际情况针对性选择检测方法。在检测的过程中，还应采取有效措施降低外部因素与内部因素造成的影响，从而为检测准确率的提升奠定良好的基础，也为临床医师进行准确诊断提供有利依据。五、正确选择尿素与尿素临床检验方法尿素氮与尿素两种临床检验方法在检验期间会受到较多因素的影响，这就需要在检测期间对影响因素与实际检测情况进行深入分析，以此选择科学合理的检验方法。此外，检验工作人员需要认识到检验方法选择的重要性，并且检验方法选择完成后需要对患者实际疾病情况进行全面了解，同时此基础上对医院医疗技术进行分析，针对性选择制备检测过程中所使用到的材料与试剂，能够确保检验结果的正确性，以此避免因一些材料与试剂存放不正确导致检验结果出现偏差。除此之外，检验工作人员还应采取有效措施对检验结果产生的偏差与

实验五血清尿素氮的测定

血清尿素氮的测定一.实验原理血清中尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸溶液中共煮时，可生成双乙酰和尿素形成的红色复合物(二嗪衍生物)，其颜色深浅与尿素含量成正比，与同样处理的尿素标准液比色。即可求得血清中尿素的含量。由于反应在强酸中进行，所产生的羟胺是干挠物质，所以必须用氧化剂将其氧化除去。在呈色反应中产生的有色复合物对光不稳定．加入氨基硫脲可增加其稳定性，还可提高尿素与双乙酰反应的灵敏度。二.实验操作取试管3支，注明空白管、标准管、测定管，按下表操作 540nm比色，以空白管调零，测定各管吸光度值。三.计算

血清尿素氮（mmol / L ）=——————— X 17.85 测定管吸光度标准管吸光度正常值参考范围3．57～14．28mmol ／L 四.临床意义血液中非蛋白含氮化合物包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、胆红素及氨等。其中尿素含量约占l ／3～1／2。尿素是蛋白质代谢的产物．通过肾脏排出，故测血清尿素氮可作为检测肾脏功能的试验，并且其增高程度与病变的严重程度呈平行关系。五.试剂 1.尿素氮试剂：蒸馏水lOOml ，浓硫酸44ml ，85％磷酸66ml ，冷却至室温后，加氨基硫脲50mg ，硫酸镉(3CdSO ４·8H 2O)2g ，溶解后稀释至1000ml 。 2.20g ／L 二乙酰一肟试剂：称取二乙酰一肟20g ，加入蒸馏水约900ml ，溶解后稀释至1000ml. ３.尿素氮标准贮存液(357mmol ／L)：称取尿素1.072g 溶解于蒸馏水中定容至1000ml 。４.尿素氮标准应用液(17.85mmol ／L)；取贮存液5ml ，加蒸馏水至100ml 。

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书 1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD＋+H2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用

无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试剂1：6×64ml＋试剂2：6×16ml） 6.1.1 试剂组成试剂1： Tris缓冲液pH7.8 120mmol/L α-酮戊二酸7mmol/L ADP 0.6mmol/L 谷氨酸脱氢酶≥1000U/L

脲酶≥6000U/L 试剂2： NADH 0.25mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品

尿素合成中缩二脲含量的测量及控制

第一章尿素 1.1 尿素简介尿素是人工合成的第一个有机物，是一种高浓度氮肥，属中性速效肥料，也可用了生产多种复合肥料。在土壤中不残留任何有害物质，长期施用没有不良影响。畜牧业可用作反刍动物的饲料。但在造粒中温度过高会产生少量缩二脲，又称双缩脲，对作物有抑制作用。我国规定肥料用尿素缩二脲含量应小于0.5％。缩二脲含量超过1％时，不能做种肥，苗肥和叶面肥，其他施用期的尿素含量也不宜过多或过于集中。尿素广泛存在于自然界中，如新鲜人粪中含尿素0.4％。尿素产量约占我国目前氮肥总产量的40％，是仅次于碳铵的主要氮肥品种之一。尿素作为氮肥始于20世纪初。20世纪50年代以后，由于尿素含氮量高(45％～46％)，用途广泛和工业流程的不断改进，世界各国发展很快。我国从20世纪60年代开始建立中型尿素厂。1986～1992年，我国尿素产量均在900万吨以上。目前占氮肥总产量的40％。尿素分子式是CO(NH2)2，因为在人尿中含有这种物质，所以取名尿素[1]。尿素含氮(N)46％，是固体氮肥中含氮量最高的。工业上用液氨和二氧化碳为原料，在高温高压条件下直接合成尿素，化学反应如下： 2NH3+CO2→NH2COONH4→CO(NH2)2+N2O 尿素易溶于水，在20℃时100毫升水中可溶解105克，水溶液呈中性反应。尿素产品有两种。结晶尿素呈白色针状或棱柱状晶形，吸湿性强。粒状尿素为粒径1～2毫米的半透明粒子，外观光洁，吸湿性有明显改善。20℃时临界吸湿点为相对湿度80％，但30℃时，临界吸湿点降至72.5％，故尿素要避免在盛夏潮湿气候下敞开存放。目前在尿素生产中加入石蜡等疏水物质，其吸湿性大大下降。尿素是生理中性肥料，在土壤中不残留任何有害物质，长期施用没有不良影响。但在造粒中温度过高会产生少量缩二脲，又称双缩脲，对作物有抑制作用。我国规定肥料用尿素缩二脲含量应小于0.5％。缩二脲含量超过1％时，不能做种肥，苗肥和叶面肥，其他施用期的尿素含量也不宜过多或过于集中。

实验2 氮肥中含氮量的测定可参考《分析化学》P170

实验二氮肥中含氮量的测定(甲醛法) 请同学们参考《分析化学实验》P170-172页的实验内容一、氢氧化钠标准溶液的配制和标定（一）目的要求 1.了解碱标准溶液一般的配制和标定方法。 2.掌握用邻苯二甲酸氢钾标定氢氧化钠溶液的方法。（二）原理碱标准溶液常用氢氧化钠来配制。氢氧化钾一般并不优于氢氧化钠，而且价格高，因此仅在个别特殊情况下使用。由于氢氧化钠固体易吸收空气的CO2和水分，因此碱标准溶液不能直接配制，而必须用标定法。氢氧化钠吸收空气中的CO2，以及水中溶解的CO2，使配得的溶液中含有少量Na2CO3。含有碳酸盐的标准碱溶液，将使滴定反应复杂化，甚至使测定发生一定的误差。因此应配制不含碳酸盐的碱溶液： 1. 取1份纯净的NaOH，加入1份水，搅拌使之溶解，配制成50%的NaOH浓溶液（约14.5mol·L-1）。在此溶液中，碳酸钠几乎不溶解。待碳酸钠沉降下来之后，吸取上层清液，用新煮沸并冷却的蒸馏水稀释至所需的浓度。 2. 1L氢氧化钠标准溶液中，加入1~2mL20%BaCl2溶液，摇匀后用橡皮塞塞紧，静置过夜，待碳酸钡完全沉淀后，将上层清液转入另一试剂瓶中，塞好备用。苛性碱标准溶液侵蚀玻璃，最好用塑料瓶贮存。在一般情况下，可用玻璃瓶贮存碱标准溶液，但须用橡皮塞。浓NaOH溶液和NaOH标准溶液在存放过程中要密封。因此，常安装虹吸管和钠石碳管（如图4-2），以防止其吸收空气中的CO2。标定碱溶液时，常用邻苯二甲酸氢钾和草酸等作基准物质，亦可用标准酸溶液与之比较以进行间接标定。用邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）标定氢氧化钠时，反应如下： KHC8H4O4 + NaOH == NaKC8H4O4 + H2O 化学计量点时溶液pH值约9.1，可用酚酞作指示剂。邻苯二甲酸氢钾易得到纯品，在空气中不吸水，容易保存。（三）试剂

实验十三血清尿素氮测定(脲酶—Berthelot比色法)

实验十三血清尿素氮测定（脲酶—Berthelot比色法）一、实验目的与要求 1 了解血液尿素氮（BUN）在人体营养学上的生理学意义及其在代谢上的重要性。 2 掌握血液尿素氮测定方法及721分光光度计或AT648半自动生化多用仪的使用方法和现代生化检测试剂盒的应用。二、实验原理尿素在脲酶作用下分解生成氨。在碱性条件下，经次氯酸氧化生成的氯胺与苯酚被亚硝基铁氰化钠催化生成蓝色的靛酶。其反应式为： CH2NH2N尿素O+HOH脲酶NH3彩+CHOH2N氨基甲酸O-2NH3+CO2 氨 NH3+OCl-NH2Cl+OH- 次氯酸氨胺催化剂 NH2Cl+OH+OH-Cl-+H2O+HONH2 苯酚P胺基苯酚 HONH2+OH-+O2==N——O-+H2O 酚靛三、实验仪器与试剂 1 仪器（1） AT648半自动生化分析仪1台；（2） 4孔恒温水浴锅1个；（3）振动摇床1台。 2 分组及仪器2人一组，每组仪器包括：（1）试管架1个；（2） 2ml试管10个；（3） 20μl微量加样器1个；（4） 1ml移液管1个；（5） 5ml移液管2个；（6）吸耳球1个；（7）搪瓷盘1个；（8）微量加样滴头；（9）吸水纸。 3 本试剂盒内含5种试剂：（1）脲酶（冻干） 2瓶（2） pH 8.0缓冲液：由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成 1×46ml （3）显色剂Ⅰ：由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成 1×225ml （4）显色剂Ⅱ：由氢氧化钠和安替福民组成 1×225ml （5）尿素氮标准液（20mg/dl） 2×2ml 四、实验步骤 1 血清（1）取脲酶一瓶，用23.0ml pH 8.0缓冲液溶解。（2）于一系列试管中，按下表加入各溶液。表131系列反应管中所加溶液的量空白管标准管样品管样品（μl）——20标准液（μl）—20—酶液（μl）0.50.50.5 （3）于37℃水浴中保温15min，然后各管分别加入显色剂Ⅰ和显色剂Ⅱ各2.5ml。（4）再于37℃水浴中保温20min，取出冷却至室温，于721分光光度计/ AT648半自动生

牛奶中尿素氮含量检测及在营养管理中的意义及原因分析

牛奶中尿素氮含量检测及在营养管理中的意义牛奶中尿素氮含量检测及在营养管理中的意义自20世纪90年代中期以来，欧美等奶业发达国家将牛奶中尿素氮的含量的检测作为其牛群改良计划(DHI)中必备的检测指标。MUN检测比检测血液中尿素氮更加容易和廉价。一些研究表明，当乳中尿素N的量低于19mg/100ml时，牛的受胎率可以增加20%。很显然，当MUN>19mg/100ml时，子宫内环境不利于胚胎着床。 MUN含量过低通常表明日粮蛋白质缺乏。另外，日粮中非降解蛋白量过高会造成MUN浓度过低。当日粮中可降解蛋白量过低，日粮蛋白质在瘤胃中消化受阻，会导致干物质采食量的下降和产奶量的下降。乳蛋白量过低通常由于MUN过低，NSC采食量下降和日粮非降解蛋白含量有关。所以，检测MUN的含量对于更为准确地平衡日粮，提高乳蛋白量和提高繁殖效率都具有主要的理论和实践意义。大多数牛群不需要每个都测定MUN，测定MUN的最佳时机是当日粮发生显著的变化以后，如使用新的饲料原料，精料饲喂量过多，初始测定需要决定正常的或者典型的MUN范围。牛群需要按照产奶的阶段分为4组，产奶期<50天;产奶期50天-100天;产奶期101天-200天;产奶期>200天。产奶期<50天的牛测定MUN对决定产奶高峰期的营养计划至关重要。产奶50天-100天的牛测定MUN的意义，在于看是否受胎率会受到影响，对于产奶101天-200天的牛群，测定MUM主要是观察是否日粮蛋白质的摄入量会影响产奶量。对于200天以上产奶的牛，如果MUN过高，表明日粮蛋白质部分被浪费。理想的范围为14mg-18mg/100ml。如果MUN超出正常的较为理想的范围，可重新对配方进行评估和调整。为了确保蛋白质不会成为产奶的限制因素，MUN值最好接近正常值的上限(18mg/100ml)。影响牛奶尿素氮的饲料、饲养因素 1、泌乳牛的日粮中，日粮总粗蛋白水平过高，与此相对应的日粮干物质的单位能量浓度过低，由此形成奶牛的日粮出现能氮失衡，造成多余的氨被浪费。比如，初产牛日粮干物质，单位能量浓度低于1.6兆卡/公斤，高产牛日粮干物质蛋白单位能量浓度，低于1.7兆卡/公斤。初产牛的日粮干物质蛋白超过20%，高产牛日粮干物质蛋白超过18%，低产牛日粮干物质蛋白超过17.5%，都可能造成牛奶尿素氮超标。 2、饲喂了过多的瘤胃降解蛋白和可溶性蛋白，或者两者都有。即使日粮的总蛋白只是正常的，也有可能造成牛奶尿素氮升高。 3、如果奶牛发生了瘤胃酸中毒，瘤胃微生物随之减少，微生物蛋白也会降低，而氨则不能被瘤胃微生物扑捉，从而使大量的氨进入了血液，由此奶牛血液中的PH值升高，牛奶尿素氮也将相应升高。

氮肥中氮含量的测定—氨态氮的测定方法电子教案(精)

相关知识依据国家标准GB/T8572-2010复合肥料中总氮含量的测定知识点：肥料中氮的测定方法 1、氨态氮的测定（1）酸量法(碳酸氢铵和氨水） ①方法原理:试液与过量的硫酸标准滴定溶液作用，加热煮沸5min ，冷却后加2d 混合指示剂，用氢氧化钠标准溶液返滴定剩余硫酸，由硫酸标准溶液的量和消耗量氢氧化钠标准溶液的量，求出氨态氮的含量。反应如下： 2NH 4HCO 3＋H 2SO 4＝(NH 3)2SO 4＋2CO 2↑＋2H 2O 2NaOH ＋H 2SO 4(剩余)＝Na 2SO 4＋2H 2O ②结果计算: 试样中氮含量以质量分数表示，按下式计算 ③方法讨论此方法适用于碳酸氢铵、氨水中氮含量的测定。迅速精确称量试样，立即将试样用水洗入已盛有已知浓度硫酸溶液的锥形瓶中，使试样完全溶解反应。（2）蒸馏后滴定法 ①方法原理:样品与过量强碱溶液作用，然后从碱性溶液中蒸馏出的氨，用过量的硫酸标准溶液吸收，以甲基红或甲基红-亚甲基蓝乙醇溶液为指示剂，用氢氧化钠标准溶液返滴定至终点。由硫酸标准溶液的量和消耗的氢氧化钠标准溶液的量，求出氨态氮的含量。 NH 4+＋OH -＝NH 3↑＋H 2O 2NH 3＋H 2SO 4＝(NH 4)2SO 4 2NaOH ＋H 2SO 4(剩余)＝Na 2SO 4＋2H 2O ②结果计算: 计算试样中的含氮量同酸量法 ③方法讨论此方法适用于含铵盐的肥料和不含受热易分解的尿素或石灰氮之类的肥料的测定。蒸馏后滴定法操作过程相对繁琐，但测定结果准确，使用范围广，常用作仲裁分析。（3）甲醛法氨态氮强酸的铵盐甲醛法强碱分解-蒸馏法氨水或弱酸的铵盐：返滴定法

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法

血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法 1.实验原理脲酶-谷氨酸脱氢酶（Urease-GLDH）连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下，氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH同时被氧化成NAD＋。NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。脲酶尿素+ 2H2O 2 NH4＋+ 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD ＋+H 2O 2 标本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。

3. 标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：奥林巴斯尿素测定试剂盒试剂1：＋试剂2：6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存试剂保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的

尿素软膏中尿素含量的测定

尿素软膏中尿素含量的测定首都医药1999年第2期第6卷药检技术作者：姜厚德单位：安徽省金寨县青山镇卫生院(237331) 关键词：尿素；非水滴定；含量测定摘要用非水滴定法测定尿素软膏中尿素含量，并用B.P法作比较，二者测定结果较接近，用于测定自制尿素软膏的尿素含量也全部合格。此法关键是用醋酐增强了尿素的碱性而使滴定终点突跃明显；加入苯溶解凡士林，排除了在测定过程中的干扰。尿素(Urea)为脱水药，作用与山梨醇相似，外用可抗菌、止痒及软化角质。尿素软膏为皮肤科常用制剂。英国药典(BP)和美国药典(USP)对尿素的制剂和原料的含量测定均采用凯氏定氮法，当测定软膏时，常因基质的突然沸腾而导致失败。笔者采用非水滴定法测定尿素软膏中尿素的含量，取得较好效果。 1实验依据由于尿素是极弱的碱(Kb＝1.5×10-14)，在水和冰醋酸中都不能进行滴定，为增强滴定突跃，故采用增强尿素的碱性以便直接滴定。 2试药和仪器尿素、高氯酸、盐酸、醋酐均为AR；25型酸度计(上海雷磁仪器厂)，S648型电热恒温水浴箱(上海医疗器械七厂)。 3方法和结果 3.1通过多次筛选和实验，取能实现明显滴定终点突跃的醋酐-苯(1∶1v/v)为溶媒。 3.2准确称取干燥至恒重的尿素5份，用电位滴定法，甘汞电极和玻璃电极分别为参比电极和指示电极，加结晶紫指示液3滴，用0.1mol HClO4液滴定，经酸度计测量加入不同体积时所对应的电位值，画表求得△E/△V的最大值为400mv，5份供试品的终点颜色均为刚转黄色。

3.3精密称取15%尿素软膏0.5g，加入醋酐-苯10ml，置水浴上加热并振摇使溶解，放冷，加入结晶紫指示液3滴，用0.1mol HClO4液滴定至恰显黄色，并将结果用空白校正，即得(每1mol/ml hClO4液和0.006006g的CH4NO相当)。 3.4精密称取干燥至恒重的尿素8份，各用4份分别以B.P法和本法测定，平均含量分别为98.40%和98.47%，比较接近一致。 3.5回收率测定：精密称取干燥至恒重的尿素约75mg，加入凡士林0.5g，按本法进行，以B.P法测得的含量98.4%为标准，计算称取量中含尿素的量。计算结果平均回收率为100.03%。再用本法对本院制剂室自制的15%尿素软膏进行含量测定，结果全部合格。 4讨论 4.1本法为利于溶解凡士林及作为惰性溶媒，故加入苯。 4.2加入醋酐旨在提高尿素的碱性，因为醋酐含乙酰阳离子〔(CH3CO)3＋O〕，比醋酸含质子〔CH3COOH2＋〕的酸性更强。 4.3非水滴定法简便易行、快速准确，适合医院制剂室作为中间品质量控制和含量测定的方法。

血清尿素测定参考方法

ICS 11．020 C 50 VS 中华人民共禾口国卫,--l=行业标准 WS／T 345—20 11 血清尿素测定参考方法 Reference procedure of the measurement of urea in serum 201 1-09-30发布2012—04—01实施中华人民共和国卫生部发布

目次前言 1范围· ·Ⅲ， 2规范性引用文件● 3术语和缩略语·● 4测定原理·· ··0 5测定样品 0 6测定试剂.0 6．1警示与安全注意事项.0 6．2试剂原料- 0 6．3试剂眭能要求.0 6．4试剂制备 0 6．5标准液的制备·0 7测定条件·，7．1仪器· 7．2最终反应混合液的浓度 7．3血清尿素测定条件，如7．4校准的扩展不确定度u 8测定······u 8．1无蛋白滤液的制备··· 8．2试剂准备 8．3标准曲线制作··· 8．4测定方法······ 8．5测定范围u他挖地n 8．6误差的来源 8．7测定样品要求 9结果计算·····- 9．1计算实际吸光度值···n¨¨n 9．2标准曲线的制作·一n 9．3样品测定结果的计算·-‘H 9i 4卓岔换算·····- M 附录A(规范性附录)L一谷氨酸脱氢酶催化活性浓度测定附录B(规范性附录)脲酶催化活性浓度测定···¨n

前言本标准修改采用由国际检验医学溯源联合委员会(JCTLM)批准的《CDC人血清尿素参考方法(分光光度法)》，并参考ISO 15193：2009《体外诊断器具生物源样品中量的测定参考测定程序的表述》适当增加内容。本标准按照GB／T 1．1—2009给出的规则起草。本标准由卫生部临床检验标准专业委员会提出。本标准起草单位：卫生部临床检验中心。本标准主要起草人：杨振华、陈宝荣、邵燕、陈琦、孙慧颖、胡滨。 Ⅲ

尿素中含氮量的测定

尿素中含氮量的测定一、实验目的 1.学会用甲醛法测定氮含量，掌握间接滴定的原理。 2.学会NH 4+的强化，掌握试样消化操作。 3.掌握容量瓶、移液管的正确操作。 4.进一步熟悉分析天平的使用。二、实验原理常用的含氮化肥有NH 4Cl 、(NH 4)2SO 4、NH 4NO 3、NH 4HCO 3和尿素等，其中NH 4Cl 、(NH 4)2SO 4和NH 4NO 3是强酸弱碱盐。由于NH 4+的酸性太弱(Ka=5.6×10-10)，因此不能直接用NaOH 标准溶液滴定，但用甲醛法可以间接测定其含量。尿素通过处理也可以用甲醛法测定其含氮量。甲醛与NH 4+作用，生成质子化的六次甲基四胺(Ka=7.1×10-6)和H +，其反应如下： 4NH 4+ + 6HCHO = (CH 2)6N 4H + + 3H + + 6H 2O 所生成的H +和(CH 2)6N 4H +可用NaOH 标准溶液滴定，采用酚酞作指示剂。标定NaOH 标准溶液的基准物质为邻苯二甲酸氢钾，其反应为：化学计量点时，溶液呈弱碱性(pH=9.20)，可选用酚酞作指示剂。三、仪器与试剂容量瓶(250mL)、移液管(25mL)、锥形瓶(250mL)、碱式滴定管(50mL)、洗耳球、分析天平氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾、硫酸铵、甲基红指示剂(0.2%水溶液)、酚酞(0.2%乙醇溶液)、甲醛溶液(1:1) 四、实验步骤 1．0.1mol·L -1NaOH 标准溶液的配制及标定 CO O H CO O K +NaO H CO O K CO O Na +H 2O

用台秤迅速称取1g NaOH固体于100mL小烧杯中，加约30mL无CO2的去离子水溶解，然后转移至容量瓶中，用去离子水稀释至250mL，摇匀后，用橡皮塞塞紧。洗净碱式滴定管，检查不漏水后，用所配制的NaOH溶液润洗2～3次，每次用量5～10mL，然后将碱液装入滴定管中至“0”刻度线上，排除管尖的气泡，调整液面至0.00刻度或零点稍下处，静置1min后，精确读取滴定管内液面位置，并记录在报告本上。用差减法准确称取0.4～0.6g已烘干的邻苯二甲酸氢钾两份，分别放入两个已编号的250mL锥形瓶中，加20～30mL水溶解(若不溶可稍加热，冷却后)，加入1～2滴酚酞指示剂，用0.1mol·L-1 NaOH溶液滴定至呈微红色，半分钟不褪色，即为终点，计算NaOH标准溶液的浓度。 2．硫酸铵(NH4)2SO4中氮含量的测定准确称取1.6～2.0g(NH4)2SO4试样于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解，然后完全转移至250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用移液管移取25.00mL上述试液于250mL锥形瓶中，加水20mL，加1～2滴甲基红指示剂，溶液呈黄色；然后加入10mL已中和的1∶1甲醛溶液和1～2滴酚酞指示剂，摇匀，静置2min后，用0.1mol·L－１NaOH标准溶液滴定至溶液呈淡红色，持续半分钟不褪色即为终点，记下读数，计算试样中氮的百分含量，以N%表示。平行测定两次，要求相对平均偏差不大于5%。思考题 1．尿素为有机碱，为什么不能用标准酸溶液直接滴定?尿素经消化转为NH4+，为什么不能用NaOH溶液直接滴定? 答：尿素为弱碱，因此不能用标准酸溶液直接滴定。由于NH4+的酸性太弱(K a=5.6×10-10)，因此不能直接用NaOH标准溶液滴定。 2．计算称取试样量的原则是什么?本实验试样量如何计算? 答：试样消耗滴定剂的体积控制在20-25ml。计算称取试样量的原则是尽

血清尿素UREA测定

血清尿素UREA测定 1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。尿素酶尿素 + 2H2O 2 NH4＋ + 2 HCO3－谷氨酸脱氢酶 NH4＋+α-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD＋+H2O 3 标本： 3.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子

的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。 3.3标本存放：血清或血浆稳定性：4～25℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性：20～25℃保存可稳定2天；4～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定1个月。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）：α-酮戊二酸 7.5mmol/ L 谷氨酸脱氢酶＞800U/L NADH 0.35mmol /L 二磷酸腺苷 1.5mmol/L Tris缓冲液

115mmol/L 试剂2（R2）： Tris缓冲液115mmol/ L 尿素酶＞40000 U/L α-酮戊二酸7mmol/L 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。 4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的UREA校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

化肥中含氮量的测定

硫酸铵中含氮量的测定一、实验目的 1.学会用甲醛法测定氮含量，掌握间接滴定的原理。 2.学会NH 4+的强化，掌握试样消化操作。 3.掌握容量瓶、移液管的正确操作。 4.进一步熟悉分析天平的使用。二、实验原理常用的含氮化肥有NH 4Cl 、(NH 4)2SO 4、NH 4NO 3、NH 4HCO 3和尿素等，其中NH 4Cl 、(NH 4)2SO 4和NH 4NO 3是强酸弱碱盐。由于NH 4+的酸性太弱(Ka=5.6×10-10)，因此不能直接用NaOH 标准溶液滴定，但用甲醛法可以间接测定其含量。(NH 4)2SO 4通过处理也可以用甲醛法测定其含氮量。甲醛与NH 4+作用，生成质子化的六次甲基四胺(Ka=7.1×10-6)和H +，其反应如下： 4NH 4+ + 6HCHO = (CH 2)6N 4H + + 3H + + 6H 2O 所生成的H +和(CH 2)6N 4H +可用NaOH 标准溶液滴定，采用酚酞作指示剂。标定NaOH 标准溶液的基准物质为邻苯二甲酸氢钾，其反应为：化学计量点时，溶液呈弱碱性(pH=9.20)，可选用酚酞作指示剂。三、仪器与试剂容量瓶(250mL)、移液管(25mL)、锥形瓶(250mL)、碱式滴定管(50mL)、洗耳球、分析天平氢氧化钠、邻苯二甲酸氢钾、硫酸铵、甲基红指示剂(0.2%水溶液)、酚酞(0.2%乙醇溶液)、甲醛溶液(1:1) 四、实验步骤 1．0.1mol·L -1NaOH 标准溶液的配制及标定 COOH COOK +NaOH COOK COONa +H 2O

用台秤迅速称取1g NaOH固体于100mL小烧杯中，加约30mL无CO2的去离子水溶解，然后转移至容量瓶中，用去离子水稀释至250mL，摇匀后，用橡皮塞塞紧。洗净碱式滴定管，检查不漏水后，用所配制的NaOH溶液润洗2～3次，每次用量5～10mL，然后将碱液装入滴定管中至“0”刻度线上，排除管尖的气泡，调整液面至0.00刻度或零点稍下处，静置1min后，精确读取滴定管内液面位置，并记录在报告本上。用差减法准确称取0.4～0.6g已烘干的邻苯二甲酸氢钾两份，分别放入两个已编号的250mL锥形瓶中，加20～30mL水溶解(若不溶可稍加热，冷却后)，加入1～2滴酚酞指示剂，用0.1mol·L-1 NaOH溶液滴定至呈微红色，半分钟不褪色，即为终点，计算NaOH标准溶液的浓度。 2．(NH4)2SO4中氮含量的测定准确称取1.6～2.0g(NH4)2SO4试样于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解，然后完全转移至250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用移液管移取25.00mL上述试液于250mL锥形瓶中，加水20mL，加1～2滴甲基红指示剂，溶液呈黄色；然后加入10mL已中和的1∶1甲醛溶液和1～2滴酚酞指示剂，摇匀，静置2min后，用0.1mol·L－１NaOH标准溶液滴定至溶液呈淡红色，持续半分钟不褪色即为终点，记下读数，计算试样中氮的百分含量，以N%表示。平行测定两次，要求相对平均偏差不大于5%。思考题 1．尿素为有机碱，为什么不能用标准酸溶液直接滴定?尿素经消化转为NH4+，为什么不能用NaOH溶液直接滴定? 2．中和甲醛和尿素消化液中的游离酸时，分别选用何种指示剂?为什么这样选择?

23 生物化学实验--二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮

二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮【目的】 1. 掌握二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验方法。 2. 熟悉二乙酰一肟显色法测定血清尿素氮的实验原理。 3. 了解血清尿素氮测定的临床意义。【原理】在酸性条件下加热，稳定的二乙酰一肟水解成不稳定的二乙酰，后者与血清中的尿素反应合成红色的二嗪化合物，其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的尿素标准液比色可求得血清中的尿素含量。其反应式如下：【器材】 1 ．血清； 2 ．微量移液器； 3 ．刻度吸量管； 4. 沸水浴； 5. 分光光度计。【试剂】 1 ．血清新鲜人或动物血清，无溶血。 2 ．酸性试剂（或称尿素氮试剂）

在三角烧瓶中加蒸馏水约 100ml ，再加浓硫酸 4ml 及 85% 磷酸 66ml 。冷至室温，加入氨基硫脲 50mg 及硫酸镉（CdSO 4 ·8H 2 O ） 2g （提高尿素与二乙酰反应灵敏度），溶解后用蒸馏水稀释至 1L 。置棕色瓶在冰箱保存。可稳定半年。 3 ．二乙酰一肟溶液称取二乙酰一肟 20g 。加蒸馏水约 900ml ，溶解后，再用蒸馏水稀释至 1L 。置棕色瓶中，贮放冰箱内可保存半年不变。 4 ．尿素氮标准液（ 14mmol/L ， 19.6mg/dl ）称取干燥纯尿素 4 2mg ，加少量蒸馏水溶解后，移入 100ml 容量瓶，加氯仿数滴防腐，再加蒸馏水至刻度，在冰箱中可稳定半年。如用 8mmol/L 苯甲酸溶液代替蒸馏水配制，此标准溶液防腐效果更好。【操作】取 3 支试管，标明测定管、标准管及空白管，按下表操作。混匀后，置沸水浴中加热 12min ，取出，置冷水中冷却 5min 后，用于波长540nm ，以空白管调 0 ，读取并记录标准管及测定管吸光度值。【计算】【注意事项】 1 ．本法线性范围达 40mg/dl 尿素氮，即吸光度 0.7 。果遇高于此浓度标本，必须用生理盐水作适当的稀释后重测，然后乘以稀释倍数为结果。 2 ．虽有氨基硫脲和镉离子，但仍有轻度褪色现象（每小时小于 5% ），故加热显色冷却后，应及时比色。