培养基综合介绍
生物培养基综合介绍
来源：添加时间：2010-2-1 10:42:00
1 概述
一培养基：是提供微生物生长繁殖盒合成代谢产物需要的按一定比例配制的多种营养物质的混合物：氮源、碳源、无机盐、微量元素、前体、诱导物。
二培养基组成影响细胞分化和产物形成
细胞分化：微生物细胞在一定条件下会发生细胞形态、生理功能和化学组成上彼此不同的变化。培养基中各种成分如二价阳离子核阴离子聚合物、表面活性剂和固形物含量，以及各种成分的浓度，培养液的PH都会影响细胞的分化，进而影响产物的合成。在青霉素丝状菌发酵过程中，控制菌丝形态使其保持适当的分支和长度，避免结球，是获得青霉素高产的关键。二价阳离子易引起菌丝体呈球状体生长，如果有阴离子聚合物（阴离子交换树脂）同时存在可阻止二价阳离子的影响。试验证明二价阳离子能与细胞表面的部分阴离子基团结合，通过盐桥或者克服细胞间阳电荷间的斥力，导致细胞间的相互作用，促进菌丝体呈球状体的形成。
三配制工业发酵培养基的一般要求
1 营养物质的成分比例合适，组成比较丰富，浓度恰当，能够满足菌种发芽和生长繁殖成有生理功能的菌丝体的需要，更重要的是能显示出产物合成的潜力。
2 在一定条件下，各组分彼此间不产生化学反反应，理化性质相对稳定。
3 粘度适中，具有适当的渗透压。
4 要考虑所选用的原材料的品种和浓度与代谢产物生物合成过程中的调节关系，要利于主要产物的生物合成并能维持较长时间的最高生产速率。
5 生产过程中既不影响通气和搅效果，又不影响产物的分离精制和废物处理。
6 大生长中选用的原材料尽量做到因地制宜、价廉、低成本。
2 培养基的成分
培养基的原材料归纳起来有碳源、氮源、无机盐、微量元素、水、生长因子、前体、诱导物等
一碳源
凡是构成微生物细胞和代谢产物碳素的物质来源，都可称为碳源。生产中常用碳源的来源主要有：糖类、脂肪、有机酸、醇等
（一）糖类
单糖：葡萄糖双糖：蔗糖，麦芽糖多糖：淀粉糊精纤维素
玉米淀粉：呈小颗粒结构、难溶于水，在热水中膨胀成胶状物。120－130℃淀粉被完全液化（酸性条件下），胶化和液化的淀粉可被微生物产生的胞外淀粉酶和糖化酶逐步分解成葡萄糖，被菌丝体利用。
（二）脂肪
一般的说在培养基中糖类缺乏或发酵至某一阶段，菌体利用油脂.发酵中添加油脂起消泡和补充谭源的双重作用。菌体利用油脂的作碳源的时候好氧量增加，因此必须充分地供氧，否则易导致有机酸积累，发酵液PH降低。
（三）有机酸醇
（四）碳氢化合物
二氮源
氮源是指构成微生物细胞和代谢产物中的氮素来源的营养物质。其主要功能是构成微生物细胞和含氮的代谢物，当培养基碳源不足时，可以作为补充碳源。铵盐：硫酸铵NH4CL 硝酸盐：Na
NO3合成产物：尿素天然原料：植物蛋白：黄豆饼粉、花生饼粉动物蛋白：鱼粉、牛肉膏、蛋白胨微生物蛋白：酵母膏、干酵母植物浆水：玉米浆
（一）无机氮源的特点
（二）1。成分单一，质量较稳定。
1 成分单一、质量稳定
2 易被菌丝体吸收微生物吸收利用铵盐和硝酸盐的能力强，NH4＋被细胞吸收以后直接被利用，因而硫酸铵等铵盐一般被称为速效氮源，而NO3－被吸收后需要进一步还原成NH4＋后再被微生物利用。铵离子对多数产物合成有调节作用，应控制加入的浓度。
3 改变培养液的PH
以（NH4）2SO4等铵盐为氮源时，由于NH4＋被菌体吸收，会导致培养基PH下降，而以硝酸盐为氮源时，由于NO3被菌体吸收利用，会导致PH升高，因此无机氮源具有改变培养液PH的作用。（三）有机氮源的特点
1 成分复杂
2 被菌体利用的速度不同。
玉米浆中的氮源物质主要以较易吸收的蛋白质降解产物形式存在，而降解产物特别是氨基酸可以通过转氨作用直接被利用，有利于菌体生长，为速效氮源;而黄豆饼粉和花生饼粉等中的氮主要以大分子蛋白形式存在，需要进一步降解成小分子的肽和氨基酸才能被微生物吸收，利用速度缓慢，有利于代谢产物的形成，为迟效氮源。在生产中，控制速效和迟效氮源的比例，以控制菌体生长和产物形成期的协调，达到提高产量的目的。
3微生物对氨基酸的利用有选择性
4 是引起发酵水平波动的主要因素
三无机盐和和微量元素
磷是构成菌体核酸、核蛋白等细胞物质的组成成分，是许多辅酶和高能磷酸键的成分，又是氧化磷酸化反应的必须元素。作为缓冲系统可以调节培养基PH，磷酸盐既能促进菌体的基础代谢，又能影响代谢的生物合成，因此磷酸盐是发酵生产中一种限制性的营养成分，如链霉菌、四环素等的发酵中，产物的合成速率是受到发酵液中磷酸盐浓度的调节。
硫是某些氨基酸、维生素的成分产量明显
铁是菌体的细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化物酶的组成元素，是菌体生命活动必须的元素之一。在四环素、麦迪霉素等发酵中，高浓度的Fe2+都显示较强的抑制作用，抗生素的下降。故此，铁制发酵罐在运行前，需要用稀硫酸铵或者稀硫酸溶液预处理几次，再用白料运转几批。
锌、镁、钴是某些酶的辅酶和激活剂。锌：微量可以促进菌体生长。镁除能激活一些酶活性外，能提高卡那霉素、新霉素、链霉素的产生菌对自身产物的耐受性。钴组成V12的元素之一，如庆大霉素发酵培养基中加一定量的钴（0。1－10ug/ml），能延长发酵周期，还能使抗生素产量成倍增加。
Na：维持细胞渗透压的功能K：影响细胞膜透性Ca：调节细胞透性，调节磷酸盐含量。
四水 1 起溶剂和运输介质 2 参与细胞内化学反应3 维持蛋白质核酸等生物大分子天然构象4 吸收代谢热量，稳定细胞内的温度 5 充足水分维持自身正常的形态 6 微生物通过水合作用和脱水作用控制由多亚基组成的结构，如：酶、微管、鞭毛的组装和解离。
五前体前体是指在产物的生物合成过程中，被菌体直接用于产物合成而自身结构无显著改变的物质。前体分内源性前体和外源性前体。内源性前体指菌体自身能合成的物质。外源性前体是指菌体自身不能合成或少量合成，必须在发酵过程中加入的物质。
六消沫剂
七其他成分有时为了促进菌体生长或者产物合成，或者抑制不需要的代谢产物的合成，需要向培养基中加入某种促进剂或者抑制剂。如在四环素发酵培养基中，加入溴化钠和M－促进剂，能够抑制金霉素（氯四环素）的生物合成。
3 培养基的种类和选择
一培养基的种类
合成培养基：由已知组分组成的各种营养物质组成的培养基
复合培养基：组成不明确的天然产物和无机盐等组成的培养基
1 孢子培养基一般一般的说，孢子培养基中基质浓度特别是有机氮源要低些，无机盐的浓度要适量，生长中常用的是麸皮培养基大/小米培养基等
2 种子培养基要求营养丰富，完整易于吸收，氮源和维生素的含量高一点，常用原料有葡萄糖、糊精、蛋白胨、玉米浆、酵母粉等。
3 发酵培养基组成丰富、营养成分浓度适中，产物合成时期PH波动小。
二培养基的设计
原则：满足菌体细胞生长繁殖和合成代谢产物的元素需要，还要提供维持生命活动和合成代谢产物所需要的能量，菌体对数生长期开始时，利于有生理功能的军体的迅速生长繁殖，对数生长期末期能迅速转入代谢产物合成的生成期，并使产物合成速率保持一定的线性关系，这种线性关系保持较长时间。
碳氮比例影响最大：碳氮比偏小，能导致菌体生长旺盛，易造成菌体提前衰老自溶，影响产物积累；碳氮比过大，菌体繁殖数量少，不利于产物的积累；碳氮比较合适，但是碳氮源浓度过高，仍能导致菌体的大量繁殖，增大发酵液浓度，影响溶解氧浓度，引起菌体代谢异常，影响产物合成。碳氮比较合适，但是碳源、氮源浓度过低，会影响菌体的繁殖，同样不利于产物的积累。
三培养基的筛选
4 影响培养基质量的因素
一原材料质量的影响
有机氮源：品种、产地、加工方法、贮存方法。东北黄豆饼粉含硫氨基酸高。玉米浆是亚硫酸浸泡玉米的水经过浓缩加工制成，呈鲜黄至至暗褐色，玉米浆重的磷含量（0.11-0.4%之间）
碳源：若用蛋白质含量（0.6%）高的淀粉制备葡萄糖的结晶母液作碳源，会出现发酵前期泡沫增多，通气效果下降，导致异常发酵。
无机盐和前提物质要纯。
二水质的影响
三灭菌的影响
饱和蒸汽灭菌的方法：高温降解，时间越长，营养成分破坏越多，产生对微生物有毒的物质。特别是还原糖、肽类、蛋白质等有机氮源一起加热时，更容易产生化学反应，形成5－羟甲基糠醛和棕色的类黑精，氨基酸能加速葡萄糖的降解反应。赖氨酸与糖类易反应，形成棕色物质，糖类与磷酸盐络合形成棕色色素，以上反应易导致代谢途径改变合菌体繁殖不利，故采用糖与其他成分分别灭菌。
灭菌中磷酸盐合钙、镁、铁等阳离子结合形成沉淀。培养基中加一点消泡剂，可以减少泡沫的形成，避免微生物的存在。
四PH的影响
PH偏高或者偏低过大，灭菌中加速营养的破坏，一般用K2HPO4和KH2PO4组成的混合物、CaC O3做Ph缓冲剂。
五其他因素的影响粘度氧化还原电位
制备淀粉的原料成分
玉米浆的成分g/100g液态玉米浆：干物：46－50 灰分：8－10 总氮3。3－3。7 总糖0。8－4。4 酸度：108－144乳酸：11。6－19。3PH 4。0－4。7 磷：1。5－1。9 钙：0。02－0。
07 钾2。0－2。5 沉淀固体：38。4－52。0
消泡剂：SAG 硅消泡剂
GPE 泡敌（聚氧乙烯氧丙稀甘油）
选用和设计培养基的原则
一、选用和设计培养基的原则和方法 （一）配制培养基的4个原则 1.目的明确 培养不同的微生物必须采用不同的培养条件；培养目的不同，原料的选择和配比不同；例如枯草芽孢杆菌： 一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基； 根据不同的工作目的，微生物不同的营养需要，运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来配制最佳的培养基。 2.营养协调 微生物细胞组成元素的调查或分析，是设计培养基时的重要参考依据。 微生物细胞内各种成分间有一较稳定的比例。 在大多数化能异养菌的培养基中，各营养要素间在量上的比例大体符合以下十倍序列的递减规律： 要素：H2O＞C源+能源＞N 源＞P、S＞K、Mg＞生长因子 含量：(～10-1) (～10-2) (～10-3) (～10-4) (～10-5) (～10-6) A.选择适宜的营养物质,实验室的常用培养基： 细菌：牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）； 放线菌：高氏1号合成培养基培养； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌：查氏合成培养基； 实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基； 生理、代谢研究：选用相应的培养基配方； B.营养物质浓度及配比合适 营养物质的浓度适宜, 营养物质之间的配比适宜； 高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长，反而起 到抑制或杀菌作用。 培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和（或）代谢产 物的形成和积累，其中碳氮比（C／N）的影响较大。 真菌需C／N比较高的培养基；（素食） 细菌（动物病原菌）需C／N比较低的培养基；（荤食） 发酵生产谷氨酸时： 碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。 NH3 ＞ CO(NH2)2 ＞ NH4NO3 ＞ (NH4)2CO3 ＞ (NH4)2SO4 含氮量（82％）（46％）（35％）（29.2％）（21％） 这说明在同样重量时，在以上各氮源中含氮量以氨为最高，尿素次之，硝酸铵和碳酸铵更次之，而硫酸铵则最低。 3.理化适宜 指培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件较为适宜。 包括：pH、渗透压和水活度、氧化还原电位
细胞培养综述
细胞培养综述 摘要：为了模拟机体生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。培养出的活细胞具有量大、均一和可重复性的特点，可以通过各种物理、化学、生物等因素进行调控，并且可以通过倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等多样的方法进行研究，已广泛运用在不同科学研究领域。 关键词：分化，细胞分型，生长增殖过程，传代 一、体、外细胞的差异和分化 1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系[1]。因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体细胞的性状。实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。 虽然体外细胞与机体细胞存有差异，但并未失去研究的意义。且不论其有许多性状仍与体相同（如体外培养的心肌细胞仍可博动），只从细胞遗传学（Cyto－genetics）的角度看，离体细胞仍带有全套的二倍体基因。细胞在培养中的表现，只不过是相应基因关闭／开启
引起的现象，这并非是绝对缺陷。恰恰相反，在培养的细胞中某些特定功能的丧失，可为该基因的表达与调控提供线索。 2、分化；体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的政变，细胞分化的表现和在体不同。细胞是否表现分化关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为[2]。 二、体外培养细胞的分型 （一）贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞，判断细胞形态时不能接体组织学标推判定，仅大致分成以下四型： 1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管皮等常呈本型状态。另外，凡培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。 2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态[3]。 3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其
PDA培养基
gus基因存在于E.coli等一些细菌基因组内，编码β-葡萄糖苷酸酶。β-葡萄糖苷酸酶是一个水解酶，以β-葡萄糖苷酸酯类物质为底物，其反应产物可用多种方法检测出来。由于绝大多数植物没有检测到葡萄糖苷酸酶的背景活性，因此这个基因被广泛应用于基因调控的研究中。可作为GUS报告基因 检测方法 根据gus基因检测所用的底物不同，可以选择三种检测方法：组织化学法、分光光度法和荧光法（灵感度为分光光度检测法最高），其中最为常用的是组织化学法。 组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸（X-Gluc）作为反应底物。将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡，若组织细胞发生了解gus 基因的转化，并表达出Gus，在适宜的条件下，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，这是由其初始产物经氧化二聚作用于形成的靛蓝染料，它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色，用肉眼或在显微镜下可看到，且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织，甚至单个细胞内的表达情况。 CTAB法的全称是十六烷基三甲基溴化铵法（Hexadecyltrimethy Ammonium Bromide）。主要用于提取生物DNA 步骤（1）2%CTAB抽提缓冲液在65℃水浴中预热。 （2）取少量实验材料（约300mg）置于研钵中，用液氮磨至粉状； （3）加入700ul的2%CTAB抽提缓冲液，轻轻搅动； （4）将磨碎液分倒入1.5 ml的灭菌离心管中，磨碎液的高度约占管的三分之二； （5）置于65℃的水浴槽或恒温箱中，每隔10 min轻轻摇动，30~60min 后取出； （6）冷却2 min后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至满管，剧烈振荡2~3 min（若提取的是总基因组，则不能剧烈震荡。），使两者混合均匀； （7）放入离心机中10 000 rpm离心10 min，与此同时，将600 ul的异丙醇加入另一新的灭菌离心管中； （8） 10 000 rpm离心1 min后，移液器轻轻地吸取上清夜，转入含有异丙醇的离心管内，将离心管慢慢上下摇动30 sec，使异丙醇与水层充分混合至能见到DNA絮状物； （9）10000 rpm离心1 min后，立即倒掉液体，注意勿将白色DNA沉淀倒出，将离心管倒立于铺开的纸巾上；
PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法 一、目的要求 1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2．学习并掌握棉塞的制作方法。 二、培养基的配制原理 培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训 和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不 同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。 三、实训材料和用具 琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布， 四、操作方法与步骤 (一) 培养基的配制 PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。 (1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小 块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁 热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放 在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再 补充水分至所需量。 (3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用 三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超 过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4) 加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试 管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防 止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 (二) 棉塞的制作 棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基
(完整版)PDA培养基的配方及配制方法
PDA培养基的配方及配制方法 PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。它属于固体培养基、半合成培养基。PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。 PDA培养基的配方 土豆 200g 葡萄糖 20g 琼脂 15～20g 水 1000mL pH值自然 PDA培养基的配制 (1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20-30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解 把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g(提前搞碎)，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。 (3)分装 按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4)加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎 加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
选择性培养基
葡萄糖肉浸液肉汤Dextrose Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养 配方：（g/L）牛肉粉3.0 氯化钠5.0 蛋白胨10.0 磷酸氢二钾2.0 葡萄糖10.0 pH 值7.5 ±0.1 25℃ 原理：蛋白胨、牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；磷酸氢二钾为缓冲剂；葡萄糖提供碳源。 用法：称取本品30.0g,煮沸溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15 分钟,备用。质量控制：在36± 1℃培养24 小时。质控菌株溶血性链球菌单增李斯特氏菌大肠杆菌沙门氏菌27853 25922 14028 生长情况（10-8）+++ （10-8）+++ +/+/ 匹克氏肉汤基础A Pick’s Broth BaseA 用途：用于溶血性链球菌的增菌培养 配方：（g/L）胰蛋白胨10.0 牛心浸粉20.0 叠氮钠0.065 结晶紫0.002 pH 值7.3-7.5 原理：25℃胰蛋白胨、牛心浸粉提供碳氮源、维生素和生长因子；脱纤维兔血（或羊血）为溶血性链球菌提供大量生长因子；结晶紫和叠氮钠为选择性抑菌剂。 用法：称取本品30.0g,加热溶于1000ml 蒸馏水中,分装, 121℃高压灭菌15 分钟, 冷至50℃左右时,加入脱纤维羊血,混匀。 质量控制：在36± 1℃培养18-24 小时。 肉浸液肉汤培养基Meat Infusion Broth 用途：用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的增菌培养（GB 标准） 配方：（g/L）牛肉粉3.0氯化钠5.0蛋白胨12.0 磷酸氢二钾2.0 pH 值7.5 ±0.1 原理：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；磷酸氢二钾为缓冲剂；氯化钠可维持均衡的渗透压。 用法：称取本品20.0g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌15 分钟,备用。 质量控制：在36± 1℃培养18-24 小时。25℃ 质控菌株溶血性链球菌金黄色葡萄球菌大肠埃希氏菌沙门氏菌 菌株编号ATCC32210 ATCC25923 ATCC25922 ATCC14028 生长情况+++ +++ +++ +++ 浑浊浑浊浑浊浑浊 叠氮钠葡萄糖肉汤Azide Dextrose Broth 用途：用于链球菌的增菌培养 配方：（g/L）胰蛋白胨15.0 牛肉浸粉4.5 氯化钠7.5 葡萄糖7.5叠氮钠0.2 pH 值7.0 - 7.4 原理：胰蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；葡萄糖提供碳源；叠氮化
马铃薯葡萄糖培养基常备法
马铃薯葡萄糖培养基常备法 马铃薯葡萄糖培养基是优良的半合成培养基，因马铃薯营养丰富，性能稳定，适宜大多数真菌类微生物（如食用菌、酵母菌等）的培养，故被微生物工作者视为基础培养基，实际上它确实是四季必备的常用培养基。但马铃薯的收获是有季节性的，错过季节，往往因购不到马铃薯而无法制备马铃薯培养基，以致影响科研和生产的正常进行。下面介绍两种制作马铃薯葡萄糖培养基的常备方法。 1．液体马铃薯培养基常备法 （1）制取马铃薯常备液在马铃薯上市季节，选购一批个大，皮滑，无病毒的马铃薯，按常规，将其清洗、削皮、切片，按料水20∶100的比例配方，以80℃的水温浸煮60min，使其营养物质充分溶解水中，过滤，装瓶加塞。以1.5×105pa的压力灭菌30min，备用。为使马铃薯常备液更理想，在配制时还需注意以下事项：1、削皮时一定要将马铃薯的芽眼挖尽。因芽眼中往往存有很多芽孢杆菌，如不挖除不仅消毒麻烦，亦易招致细菌性污染。2、配制的常备液如短期内使用，则可用棉花塞瓶口。如欲放置较长时间，应用橡皮塞塞瓶口。高压灭菌时一定逐渐排除冷空气，如快速排气，会使瓶塞弹出。3、常备液装瓶时，可以装上几种不同的量，以备制用时按需取液。4、常备液于常温环境中，一般可保存8个月左右。保存于冰箱内，可一年不变质。 （2）制马铃薯葡萄糖培养基何时需用马铃薯葡萄糖培养基，可随时将马铃薯常备液取来，加热后溶入2%琼脂，再加2%葡萄糖，然后装入试管，按常规高压灭菌，制成即可。 2．固体马铃薯培养基常备法 （1）制取马铃薯常备粉块同样需选购好马铃薯，然后将其洗净、削皮，挖去芽眼，用蒸具隔水蒸30min。但切勿放在水中烧煮，致使营养损失。然后，将马铃薯取出，研成泥浆状，压薄后摊于搪瓷盘中，晒干或置于37℃的恒温箱内烘干，备用。 （2）制马铃薯葡萄糖培养基将已制好备用的马铃薯粉块，按100ml水加马铃薯粉块约15g的比例，先置于沸水中浸煮30min，浸出其营养成份后，过滤。然后溶入2%琼脂及2%葡萄糖，装入试管按常规高压灭菌，制成斜面即可。
细胞培养基种类
细胞培养基的选择及常用数据库 日期：2012-04-13来源：未知作者：网友点击：次细胞实验技术 经典的培养基有很多种，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 ◆MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及 浓度。 ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于 贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。 ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细 胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。 ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于 克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞 的培养。 以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，也很好用。选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。Sigma网站上也有一个Media Expert，包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等，它还
细胞培养知识
细胞培养基础知识 细胞培养基本条件 1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。 4、恒定的细胞生长温度 维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。 5、合适的气体环境 气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。 细胞培养基种类与基本成分 细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培
养基两类。干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。 1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质： 氨基酸 氨基酸是组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。 碳水化合物 碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。 无机盐 培养液中无机盐的主要功能是帮助细胞维持渗透压平衡。此外，通过提供钠，钾和钙离子，帮助细胞调节细胞膜功能。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意：向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES 时需按以下方法调节钠离子浓度。
放线菌的选择培养基
高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离 实验材料： 培养基成分：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4?3H2O、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、琼脂。 实验内容： 高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4?3H2O 、MgSO4?7H2O作为无机盐，FeSO4?7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。 放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。分离放线菌常用稀释倒平板法。根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并 可得到纯菌株。 实验步骤： 1.高氏一号合成培养基的制备 先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用50~100ml水调成糊状，再在另一容器内加入900~950ml热水，将小烧杯内淀粉倒入混匀。再分别称取其它药品，并加热搅拌使之溶解后，调pH至7.2~7.4，分装，0.1Mpa（15lb/in2）15~30min高压蒸汽灭菌。 2.土壤中放线菌的分离 （1）取9套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）、组别、姓名、操作日期等。每个稀释度做三个培养皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷至50℃左右的高氏一号培养基15~20ml左右，待冷凝成平板。 （2）将土样放入用酒精擦拭过的乳钵中，除去石块、草根、研磨压碎后，称取5g，放入盛有45ml无菌水的三角瓶中。振荡10min，即10-1的土壤悬液，静置30s。 （3）另取装有9ml无菌水的试管4支，编号10-2、10-3、10-4、10-5。用无菌吸管无菌操作取10-1浓度的土壤悬液1ml并加入编号10-2的无菌试管中，并吹吸吸管2~3次，使与9ml水混匀，即为10-2浓度的土壤稀释液。依此类推，直到稀释至10-5的试管中（每个稀释度换1 支无菌吸管）。 （4）用无菌吸管从浓度最小稀释液开始，每次吸取0.5ml加到一组相应编号（10-5）的高氏
血管内皮细胞培养
血管内皮细胞（endothelial cell, EC）体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈“鹅卵石样”镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。
中图版高中生物选修1第一章第二节培养基对微生物的选择作用课后训练
培养基对微生物的选择作用练习 1下列操作不属于微生物的分离步骤的是（）。 A．稀释B．划线或涂布 C．接斜面 D．培养 2 需要在火焰旁操作的有（）。 ①土壤取样②稀释土壤溶液③涂布平板④微生物的培养 A．①②③④ B．②③④ C．③④ D．②③ 3 在对纤维素分解菌进行选择培养时用液体培养基的原因是（）。 A．用液体培养基可获得大量菌体 B．纤维素分解菌适宜在液体培养基上生长 C．在液体培养基中纤维素分解菌繁殖速度更快 D．用液体培养基可获得高纯度的纤维素分解菌 4 在一个“淀粉—琼脂”培养基的5个圆点位置，分别用不同方法处理，将此实验装置放在37 ℃恒温箱中，保温处理24 h后，将碘液滴在培养基的5个圆点上，其实验结果记录于下表： ）。 A．棕黄色、棕黄色、淀粉酶 B．蓝黑色、棕黄色、麦芽糖酶 C．棕黄色、蓝黑色、淀粉酶 D．棕黄色、蓝黑色、麦芽糖酶 5 实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上划3条等长的平行线（3条线均与下图中的链霉素带接触），将平板置于37℃条件下恒温培养3天，结果如下图所示。从实验结果分析以下叙述，不正确的是（）。 A．链霉素能阻止结核菌的生长 B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D．链霉素可以用于治疗伤寒病人 6 为验证某同学的培养基是否被污染，可以设计两组实验，甲组用严格消毒的培养基并稀释涂布培养，乙组直接用该同学的培养基进行培养，此实验中乙组为（）。 A．空白对照 B．自身对照 C．条件对照 D．标准对照 7 下表表示在不同培养基中细菌的生长繁殖情况。（E、F、G、H、I、J、K、M为培养基的成分，“＋”表示生长，“—”表示不生长）请分析下列哪种物质细菌不能合成（）。
从二维到三维细胞培养的变迁
从二维到三维细胞培养的 变迁 Newly compiled on November 23, 2020
细胞培养技术进展概述及分析 细胞培养一直是细胞生物学中基础且核心的部分。无论是进行细胞性状研究，还是进行细胞产物的研发，都需要以细胞体外扩增技术-即细胞培养技术为基础。随着生命科学的发展，细胞培养技术更是被广泛应用于生物学、、新药研发等多个领域，成为生命科学最重要的基础技术之一。 传统的细胞培养即细胞的平面培养，细胞在培养过程中只能沿平面延伸，属于细胞的二维培养技术。这种培养方式经济、便利、易操作，符合某个历史阶段对细胞培养技术的要求。但随着研究的深入，传统的二维培养技术已经不能满足细胞培养需求。盖因生物体内的细胞是在立体三维的微环境中生长的，二维培养微环境与体内微环境差异太大，影响细胞的基因表达、信号转导等，导致所培养的细胞逐渐丧失其在生物体内的生物学特性及功能，失去研究及应用价值。传统的二维培养技术，已经成为细胞学为基础的众多学科进步的壁垒之一。 科学家开始寻求更贴近自然状态的细胞培养技术。一种与活体组织内的细胞外基质相似的，能更好的模拟细胞在体内生长环境的培养技术，即细胞的三维培养技术。 目前已开发出很多细胞三维培养技术，大致可分为需要支架的三维培养技术和不需要支架的三维细胞培养技术。支架类主要是在三维空间内构建供细胞附着和生长的类似脚手架的多孔结构, 细胞依附于支架进行三维生长和迁移, 主要的支架材料有胶原和水凝胶等；而不需要支架的三维培养技术主要是通过物理方法使贴壁细胞悬浮于培养基中以达到三维培养的目的, 目前主要的技术有微载体、磁悬浮、悬滴板和磁性三维生物印刷等技术。
酵母表达培养基介绍
毕赤酵母表达的培养基配制［5］ 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基： Trypton l％ Y east Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0 制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基： Trypton l％ Y east Extract 0.5％ NaCl 0.5％ PH 7.0 制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。 2.3 YPD （又称YEPD） Y east Extract Peptone Dextrose Medium，（Y east Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基） Trypton 2% dextrose (glucose) 2% +agar 2% +Zeocin 100 μg/ml 液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。 2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Y east Extract Peptone Dextrose Medium）： yeast extract 1% peptone 2% dextrose (glucose) 2% sorbitol （山梨醇）1 M +agar 2% + Zeocin 100 μg/ml 不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。 2.5 MGY Minimal Glycerol Medium （最小甘油培养基） （34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的10*YNB母液、2ml 的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。 2.6 MGYH Minimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基+ 0.004%组氨酸） 在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。2.7 RD Regeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基） （含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸） 1. 将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌；
培养基的选择-整理
培养基的选择和优化（初稿） 一、培养基的概念：culture medium 是人们提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物需要的多种营养物质的混合物。其成分和配比对微生物的生长、发育、代谢产物的合成，甚至对于发酵工业的生产工艺都有很大的影响。 二、用途和分类： 用途：筛选菌种、保藏菌种、检验杂菌、培养种子、发酵生产。 分类： 1.按成分不同：天然：用化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物配制。 例：牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基。 合成：化学成分完全了解的物质配制而成的培养基。 例：查氏培养基、高氏 1号培养基 复合（半合成培养基）：天然成分+化学试剂 2.按物理状态：固体：加入一定量的凝固剂，琼脂含量1.5%-- 3.0%， 常用来微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏。 半固体：琼脂0.3%--0.5%，观察运动特征，分类鉴定 液体：不加任何凝固剂， 大规模生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究。 3.按实验目的：基础：适合大多数微生物生长的培养基，如牛肉膏蛋白胨培养基 加富：在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成的一类培养基。如高糖培养基 选择：在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。如麦康凯培养基 鉴别：用于鉴别不同微生物的培养基，微生物产生某种代谢产物，与培养基中的化学物质发生化学反应，产生明显的特征变化，如EMB培养基 三、成分来源： （人工配制的、适合微生物生长、繁殖或产生代谢产物的营养基质，是微生物学研究和微生物发酵生产的基础。任何培养基都应具备微生物所需要的六大营养要素，且其间的比例合适。） 营养: 有机体吸取和利用营养物质的过程。 营养物质: 微生物为了生存就必须从环境中吸取各种物质以合成细胞物质、提供能量以及在新陈代谢中起调节作用。这些物质就称为营养物质。
培养基汇总
培养基成分汇总 显色培养基 ?大肠杆菌显色培养基 ?大肠菌群显色培养基 ?大肠杆菌／大肠菌群显色培养基 ?TBX培养基 ?细菌总数显色培养基 ?O157显色培养基 ?沙门氏菌显色培养基 ?李斯特氏菌显色培养基 ?金黄色葡萄球菌显色培养基 ?弧菌显色培养基 ?念珠菌显色培养基 ?阪崎肠杆菌显色培养基 ?肠球菌显色培养基 ?尿道定位显色培养基 菌落总数检测培养基 ?平板计数琼脂（PCA） ?TTC营养琼脂 ?营养肉汤（NB） ?营养琼脂（NA） ?2216E琼脂 ?标准I号营养琼脂 ?标准II号营养琼脂 ?胰胨大豆胨固绿琼脂 ?m-TGE肉汤 ?水平板计数琼脂培养基 ?TGE培养基 ?CVT琼脂 ?肉汤培养基 ?酵母粉琼脂 ?平板计数琼脂 ?平板计数琼脂（含麦芽提取物）?2216E液体培养基 ?嗜冷菌计数琼脂 ?NA培养基 ?MPC琼脂培养基 ?接触皿培养基 ?R2A琼脂 大肠杆菌O157检验培养基 ?三糖铁（TSI）琼脂 ?月桂基硫酸盐胰蛋白胨MUG培养基 ?mEC肉汤 ?mTSB肉汤 ?SD-39琼脂 ?改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂?改良EC肉汤(mEC+n) ?半固体琼脂 ?山梨醇麦康凯琼脂基础（SMAC） ?改良麦康凯肉汤（CT-MAC） ?月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤-MUG ?PBS-Tween20洗液 ?O157显色培养基 大肠菌群、大肠杆菌检验培养基?月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） ?EC肉汤 ?乳糖胆盐发酵培养基 ?乳糖复发酵培养基 ?去氧胆酸盐琼脂（DC） ?MR-VP培养基 ?结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） ?西蒙氏枸橼酸盐琼脂 ?肠道菌计数琼脂（VRBDA） ?品红亚硫酸钠琼脂 ?乳糖蛋白胨培养液 ?亮绿乳糖培养基 ?肠道菌增菌肉汤（EE） ?LB肉汤 ?LB营养琼脂 ?苯丙氨酸脱氨酶培养基 ?伊红美蓝琼脂（EMB） ?哥伦比亚MUG培养基 ?BDS培养基 ?葡萄糖琼脂 ?Andrade氏糖类肉汤 ?Korser氏枸椽酸盐肉汤 ?Endo培养基 ?缓冲MUG琼脂
细胞培养各种培养基简介
DMEM、RIPA1640、F12、L15等细胞培养基的基本知识 培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM 含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。 二、血清 细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些 痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清
如何选择好的培养基
如何选择好的培养基 培养基选择方法 选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考： (1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基; (2)可以查阅文献或在购买细胞株时咨询; (3)平常惯用的培养基; (4)许多培养基可以适合多种细胞，根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基; (5)用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断; (6)根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。 培养基注意事项 培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项： 从污染的源头开始 确认工作细胞库是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。 确认毒种工作种子批是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。 确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染：用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中，可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养，48小时即可观察有无污染。 一些单位在使用血清时候往往不经过过滤除菌处理便直接加入到培养液中，可能带来污染。
其它：高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证，确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证，后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。 另外，应将有毒区与无毒区严格分开，并有各自独立的空气净化系统及孵室，有毒区对无毒区应保持相对负压，防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。 从GMP管理、SOP操作方面加强管理力度 每二周或每周对无菌操作室及洁净区域按GMP要求进行检测 人员的GMP管理和无菌操作强化培训 一些特殊情况 细菌的大小从0.1-700μm，为防止细小细菌的污染，过滤除菌应尽量采用0.1μm的滤膜或滤芯。 大面积污染时，应对所有设施、用具及操作环境进行彻底消毒。
几种常用鉴别和选择培养基的配制
几种常用鉴别和选择培养基的配制 一、目的要求 了解选择培养基和鉴别培养基的配制原理。 学习和掌握马丁培养基、含氨苄青霉素的LB培养基及伊红美蓝琼脂培养基的配制方法。 二、基本原理 马丁培养基及含氨苄青霉素的LB培养基两者均属选择培养基。马丁培养基常用于从自然环境中分离真菌，培养基中的去氧胆酸钠和链霉素(30 u／m1)不是微生物的营养成分。由于去氧胆酸钠为表面活性剂，不仅防止霉菌菌丝蔓延，还可抑制G+细菌生长，而链霉素对多数G-细菌具抑制生长作用。所以它们是用于抑制细菌和放线菌的生长，而对于真菌的生长则没有影响．从而达到分离真菌的目的。含氨苄青霉素的LB培养基在基因工程研究中常用于筛选具有氨苄青霉素抗性的菌株。培养基中含有一定浓度(100μg/ml培养基)的氨苄青霉素，它能杀死培养基中一切不抗氨苄青霉素的细菌，而只有对氨苄青霉素具有抗性的细菌才能正常生长繁殖，从而达到快速筛选氨苄青霉素抗性菌株的目的。 伊红美蓝琼脂培养基是一种鉴别培养基。常用于检查乳制品和饮用水中是否含有致病性的肠道细菌。培养基中的伊红为酸性染料，美蓝则为碱性染料。当大肠杆菌发酵乳糖产生混合酸时，细菌带正电荷，与伊红染色，再与美蓝结合生成紫黑色化合物。在此培养基上生长的大肠杆菌形成呈紫黑色带金属光泽的小菌落。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。不能发酵乳糖的细菌产碱性物较多，带负电荷，与美蓝结合，被染成蓝色菌落。 三、实验材料 (一)药品 葡萄糖、蛋白胨、KH 2P0 4 ·3H 2 O、MgSO 4 ·7H 2 O，胰蛋白胨，酵母提取物，NaCl、 乳糖、K 2HP0 4 、伊红、美蓝、琼脂等。 (二)溶液 0.1％孟加拉红溶液、链霉素溶液(10000u／m1)、2％去氧胆酸钠溶液、氨苄青霉素溶液(25mg／m1)、2％伊红溶液、0.5％美蓝溶液、1mol/l NaOH、1mol/l HCl 溶液等。 (三)仪器