单细胞藻类培养液的成分
单细胞藻类培养液的成分
单细胞藻类培养液的成分有下列七类。
(一)大量元素
1 ?氮(N)
单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KN03)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵
(NH4NO3)、硝酸钙［Ca(NO)3)2］、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵［(NH4)2SO4］、发酵人尿……等。其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。
2 ?磷(P)
单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾
(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。
3 ?铁(Fe)
单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCI3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁［Fe2(SO4)3］、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵［Fe(NH4)3(C6H5O7)］等。其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。铁也容易产生沉淀。所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法
都取得一定的成功，但都不够十分完善。
在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化
(Pringsheim , 1963)。
在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石
酸盐：迈尔(Myers ,1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。
应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。
由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。
因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素。
4 .钾(K)
单胞藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCI)、硝酸钾(KN03)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)等。一般培养液中由于氮、磷元素的加入，也附带加入了钾营养元素。除此以外，可再加入氯化钾。
5 .镁(Mg)
培养液中镁的来源，常用的是硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCI2)两种。可以单独使用其中一种，也可两种同时使用。镁元素在天然海水中的含量很大(1 200mg/L以上)，一般是足够的。
6 .硫(S)
培养液中硫的来源一般是加入其他营养元素的硫酸盐类(如硫酸铵、硫酸镁、硫酸铁、硫酸高铁、
硫酸锰、硫酸铜等)在获得其他营养元素的同时，也获得了硫元素。
7 .钙(Ca)
培养液中钙的来源，常加入氯化钙(CaCl2)或硝酸钙［Ca(N03)2］。
8 .硅(Si)
在硅藻培养液中一般都加入硅元素，硅元素的来源，常用的是硅酸钠(Na2SO3)和硅酸钾
(K2SiO3)
微量元素的种类很多，但单胞藻培养液配方中常用的约10余种。现将其名称及一般使用的化合
物列举如下：
1?硼(B)硼酸(H3BO3)，焦性硼酸钠(Na2B4O7)。
2 .锰(Mn) 硫酸锰(MnSO4)，氯化锰(MnCI2)。
3 .锌(Zn) 硫酸锌(ZnSO4)，氯化锌(ZnCI2)。
4 .铜(Cu) 硫酸铜((ZuSO4)，氯化铜(CuCl2)。
5 .钼(Mo) 钼华(MoO3)，钼酸铵［(NH4)2O.7MoO3］。
6 .钻(Co)氯化钻(CoCl2)。
7 .钛(Ti) 氯化钛(TiCI2)。
8 .钨(W) 钨酸钠(Na2wO4)。
9 .铬(Cr)硫酸铬钾［CrK(SO4)2］，铬酸钾(K2CrO4)。
10 .镍(Ni) 硫酸镍(NiSO4)。
11 .钒(V)钒酸钠(NaVO3)，钒酸铵(NH4VO3)。
12 .镉(CA) 氯化镉(CdCI2)。
13 .锶(Sr) 硫酸锶(SrSO4)。
这些微量元素可以分开单项列于培养液配方中，也可以把微量元素集中配成微量元素溶液，然后
按一定量加入培养液中。这些微量元素溶液有各种配方，一些常用配方将在第69?70页介绍。
藻类对微量元素的需要量和中毒量(致毒量)的差距一般很狭小，略微超过需要量即会引起中毒。微量元素也容易形成胶体复合物和发生沉淀，使藻类细胞不能利用。由于以上两种原因，致使在培养液中保持适量的微
量元素是很困难的。络合剂的应用是解决以上困难的办法之一。
良好的田园土壤抽出液一般含有藻类生长繁殖所需要的各种微量元素和溶解有机物质，且具有类似络合剂的作用。所以在培养液中加入土壤抽出液是解决微量元素供应的有效办法。
（三）辅助生长有机物质
藻类除了必须吸收无机营养之外，也吸收水中的溶解有机物质，如维生素Bl、维生素B12、生
物素... 等，这些物质对藻类的生长有辅助作用，称为辅助生长有机物质。
辅助生长有机物质能促进藻类细胞的生长繁殖，还能增强藻类细胞对环境的适应能力，因此受到重视，加入培养液中的辅助生长有机物质种类也愈来愈多。常用的有维生素B12、维生素B1（硫铵素）、维生素B2、维生素B6、维生素H、生物素、柠檬酸、乳精酸、烟酸，对氨安息香酸、叶酸、泛酸钙、肌醇、腐肉碱、胸（腺）间氮苯、葡萄糖、肝抽出物、酵母抽出物、贝肉汤、鱼粉、咸鱼汁……等。
辅助生长有机物质可以分别加入培养液中，也可以把多种辅助生长有机物质配成混合液，称维生素溶液，在配制培养液时按一定比例加入。
土壤抽出液除含有无机微量元素外，还含有某些辅助生长有机物质。在培养液中加入土壤抽出液实际上加入了某些辅助生长有机物质。
（四）土壤抽出液
土壤抽出液含有单细胞藻类需要的微量元素和辅助生长有机物质，培养液中加入适量的土壤抽出液，一般能获得良好效果。
土壤抽出液的制作虽然简单，但处理方法各有不同。现将常用的方法介绍如下。
1 ?土壤抽出液I取土壤1kg，加纯水1 000ml，煮沸60min，在暗处放置2d，过滤，以滤液600ml加纯水400ml使用。
2 ?土壤抽出液U 取土壤1kg，加纯水1 000ml，再加入氢氧化钠2?3g，煮沸120min，冷
却后过滤，滤液直接使用。
3?土壤抽出液川取土壤1kg，加自来水2 000ml，煮沸煎浓，把上部泥浆倾入烧杯中澄清，
静置一昼夜后，次日吸取上层清液，再煮沸煎浓。第3天再如法煎煮，最后倾入三角烧瓶中，加棉花塞，煎浓，直至得到l 000ml的深褐色的土壤抽出液。每次使用后，煮沸灭菌保存（朱树屏，1964 .）。
4.土壤抽出液W取田园土壤1kg，加水2 000ml，搅拌均匀，浸泡，用前吸取上清液，煮沸消毒后使用（黎尚豪等，1959）。
5 .海泥（或土壤）抽出液V 取海滩上砂质较少，有机质较多而又不是过分淤黑的上层软泥（或田园土壤），清除其中的小树枝和小石块等杂物，以容量计算1份泥加2份水，充分搅拌均匀，静置l?2min ,待粗砂、小石下沉，把上层泥浆倾人铝锅中，弃去底部粗砂、小石等杂物，按每 1 000ml泥浆加入NaOH 1g的量加入NaOH，煮沸20?30min，煮时需不断搅拌。煮后静置24h，吸取上清液使用。海泥抽出液吸出后，除当天使用外，可以装入大烧瓶中再经煮沸1?2次（每天1 次），可作较长时间的保存，使用时再经煮沸。
不同地点取的土壤或海泥制成的土壤抽出液或海泥抽出液的营养成分和数量是不相同的，这是由于不同地点的土壤或海泥所含物质的成分和数量存在着差别的缘故。因此在取用土壤或海泥时，必须
固定地方，不要经常变换，对其培养效果及合适的使用量，均应通过培养试验，了解掌握。
（五）络合剂
无机态铁和微量金属元素容易形成胶体复合物和发生沉淀，不能为藻类利用。为了防止这些元素溶胶化和沉淀的发生，保持其对藻类的可利用态，以维持在培养液中的适量存在，哈特纳（Hutnei , 1950）首先应用了称为络合剂的化合物。迈尔（Myers，1951）在培养小球藻中成功地使用了EDTA。其后，在许多培养液配方中，都有络合物的使用。最常用的络合剂为乙二胺四乙酸（EDTA），此外
还有亚硝基R盐、三价氮基三醋酸（NTA）、羟基乙基乙烯二胺三醋酸（HOEDTA）等。
络合剂，本质上相当于环状有机化合物这一类，非常稳定，应用一定数量的络合剂，可以防止铁
和微量元素的沉淀和溶胶化，并能根据质量作用定律释放出足量的离子供藻类细胞利用，能够大大地减少对藻类供应适量铁和微量元素的困难，并能使元素的量达到比藻类所能忍受的较高的浓度。
但也有关于应用络合剂后，引起某些金属元素缺乏的报道（M. R. Droop ,1969）。
（六）植物生长调节剂
植物生长调节剂又称植物生长激素，有促进藻类细胞生长繁殖的作用。在培养液中加入某些植物生长调节剂，增产效果明显。向曙光等（1986 ; 1989）在亚心形扁藻的培养液中加入30?50mg/L增产灵，净增产率为60 %?70 %。又加入40rng / L乙烯利，净增产率为56 % ［87］。徐淑凤等（1987）培养底栖硅藻，在培养液中添加0.5mg /L的a-夸乙酸钠，对底栖硅藻的生长繁殖具有明显的促进作用［85］。
（七）缓冲剂
在培养液中加入缓冲剂，可加强缓冲作用。常用的缓冲剂有三羟甲基氨基甲烷和二甘氨酸。
以上介绍了培养液的成分，共七类。但不是说单胞藻培养液都必须具备这七类成分。其中最重要而且是必不可少的是大量元素，其次是微量元素和辅助生长有机物质，其他成分只在某些培养液配方中使用其中的一类或两类
单细胞藻类
、单细胞藻类 单细胞藻是海洋植物中结构最简单、但在海洋生态系统中最具重要意义的一群生物，它们是许多水生动物的直接饵料。而那些不是直接摄食单细胞藻类为生的动物，也大都是间接地以它们作饵料，经过一次或多次转换才成长起来的。据初步估算，自然界要生产出一公斤的鱼肉，约需数百公斤至上千公斤的单细胞藻类。因此，可以说：海域单细胞藻类的丰富程度是该海域渔业丰歉的一重要决定因素。当然，这里也应指出，如果某海域有机污染严重，造成水体富营养化，那么，在温、盐等环境条件适宜的情况下，可能会形成‘赤潮’(有关‘赤潮’的问题将在第五章海洋灾害加以叙述)。此外，有些单细胞藻类在研究海流与水团的动态方面有重要意义；有些种类可附着于大型海藻体表，成为藻类养殖的害藻；有些还附生于船底，能降低船的航速。 单细胞藻类在硅藻门、甲藻门、裸藻门、金藻门、黄藻门、蓝藻门、红藻门、绿藻门中都有它们的存在。其中，种类最多、数量最大的是硅藻门和甲藻门。 福建海域地处台湾海峡西部，是东海和南海的过渡区，常年受南海暖流和闽浙沿岸流的交错影响，况且还接纳许多河川输入的大量营养盐，水体肥沃，单细胞藻类非常丰富，调查记载的种类近千种，数量常年平均每立方米水体有单细胞藻类1340万个左右。近岸、港湾区的数量还要大得多，如：厦门西港区1987年调查时，年平均竟高达每立方米水体1.8亿个。 (一)硅藻门(Bacillariophyta) 硅藻为单细胞生活或借助胶质连成群体。细胞具有特殊的壳壁，壳壁主要成分是由果胶质和硅质组成。壳壁由两瓣套合，分为上、下壳，上壳稍大、下壳较小。壳面有各种花纹。根据花纹排列，分为中心纲和羽纹纲。福建省沿海(包括台湾海峡)共已记录了784种，其中，中心纲308种，羽纹纲476种。现将最主要属种简介如下： 1.中心纲(亦称辐射纲)(Centricae)
藻类培养论文 牛浩
吉林化工学院 环境科学与工程专业 环境生物学设计性实验 院系:资源与环境工程学院 班级：环境科学与工程1301 姓名：牛浩 指导老师：邹继颖 学号：1310338102
天然藻类培养和应用 （吉林，吉林，吉林化工学院，牛浩，132022） 摘要：藻类植物是自然界中非常重要的一大类生物类群，它们不仅是用于科学研究的良好材料，在医药、食品、精细化工、环境保护、水产养殖等方面都有着广泛的应用，研究观察藻类不但有一定的理论意义，也具有重要的应用价值[1]。藻类应用技术在国内外一直是研究的热门，藻类大量培养技术是一切的基础。本实验重点探讨藻类培养的一般步骤和前景。 关键词：藻类；材料；应用价值；培养；前景 Natural algae cultivation and application (Jilin, Jilin, Jilin institute of chemical industry, NiuHao, 131022) Abstract:the algae is a very important categories of organisms in nature, they are not only used in scientific research of good material, in food, fine chemical, pharmaceutical, environmental protection, has been widely used in such aspects as aquaculture, algae research to observe not only has certain theoretical significance, also has important application value. Algae application technology at home and abroad has been a research hot, plenty of algae cultivation technology is the foundation of all things.This study focuses on the general steps of algae cultivation and prospect. Keywords:algae, materials, application value, cultivation,prospects 前言：多数的单细胞藻具有生长繁殖快、环境适应力强、培养周期短等特点。可实现在人工控制条件下大量培养获得高产的目[1]的而藻类中含有丰富的蛋白质、油脂、糖类、色素等可供人类利用，加之藻类本身适应环境的能力极强，繁殖速度快，占地面积小等优势使得藻类在解决资源枯竭、人口压力、环境污染等方面具有独特的优势。产油藻作为生物燃料的原料，成为可以满足不断增长的能源需求的一条解决途径；藻类提供的营养物质可以有效的缓解人口和土地方面的压力；在水环境方面，藻类可以用来净化水质，治理水体污染。 1.材料与方法 1.1实验用具 显微镜、显微图像采集系统、采集瓶、培养瓶、吸管、镊子、刀、标签、记
单细胞藻类
单细胞藻类之--微绿球藻 微绿球藻（Nannochloropsis oculata），或叫眼状微绿球藻。本属还有其它几种培养作为水产动物的活饵料的。在分类上属于绿藻门，绿藻属，四胞藻目，胶球藻科。 一、形态特 征：细胞为 球形，直径 为2—4微 米，单独或 集合，色素 体一个，淡 绿色，侧生， 仅占着周 围的一部 分，眼点圆 形，淡橘红 色。在活泼 生长的情 况下，色素 体颜色很 深，不容易 观察到眼点，在氮缺乏的培养中，色素体变淡，眼点明显。没有蛋白核。有淀粉粒1—3个，明显，侧生。细胞壁极薄，幼年细胞看不到，在分裂之前才变得明显。分裂进行时，细胞壁扩大，与细胞之间形成空隙。 二、繁殖方式：微绿球藻进行二分裂繁殖，细胞分裂成为2个子细胞，细胞分裂后，子细胞由母细胞的细胞壁裂开处脱出，子细胞附着在细胞壁上，互相连结成为一个松散的树枝状群体。 三、生态条件： 1、盐度：微绿球藻对盐度的适应范围很广，在盐度为4—36的范围内均能正常生长繁殖，并可保养在2—54的盐度范围内。江西省宜春高新技术专利产品开发中心提供光合细菌培养基配方技术。 2、温度：微绿球藻在10--36℃的温度范围内都能比较迅速的繁殖，最适温度为25--30℃。 3、光照：在适温条件下，最适光照强度为10000勒克斯。 4、酸碱度：适宜的酸碱度范围为：PH7.5—8.5。 微绿球藻在有机质多，特别是氮肥多，氨盐丰富的水体中，生长特别繁茂。 单细胞藻类之--塔胞藻 塔胞藻（Pyramimonas sp.）分类上属于绿藻门，绿藻纲，团藻目，衣藻科，塔胞藻属。可以用于海湾扇贝幼体的饵料。 一、形态特征：单细胞，不具细胞壁，多数呈梨形、侧卵形，少数呈半球形。细胞长12—16
绿藻栅藻培养
绿藻栅藻培养 藻类，特别是单细胞藻类的营养丰富，含有动物和人生长发育所必需的营养物质。自上世纪四十年代以来,各国学者都试图用藻类这一资源解决人类食物和动物饵料的缺乏问题。另一方面，藻类可直接或间接的作为鱼类及其他水生动物的饵料。 1 藻类的培养方式 藻类的培养方式，以藻类培养的目的要求而各种各样。但可分为密闭式培养和开放式培养两大类。 1.1密闭式培养 密闭式培养的目的是不使外界杂藻、菌类及其他有机体混入培养物中。将培养液密封在与外界完全隔离的透明容器中，由此通气，搅拌，输送培养液及调节水温和取样等设备，也都要与外界隔离。培养容器多为管状，也有池状，用有机玻璃或透明的聚乙烯所料做成水平管道，直立或斜立在地上，暴露阳光或人工光照下。这种培养方式，成本高，好控制，产量亦稳定。 1.2开放式培养 将藻类培养于敞开的容器(如水泥池、管道、木盆等)中。方法设备较简便，可进行小量或大面积的培养。该法培养物中易发生敌害生物污染，但成本低，使用较普遍，也是今后藻类培养所应采取的方式。开放式可分如下几种类型： (1) 开放循环培养：其特点式培养液借助循环水泵而不断循环流动。培养物能循环，就可省却搅拌工作。 (2) 开放非循环培养：其特点是培养液不循环流动，而定时由小管通入CO2和空气到培养液中；同时也起搅拌作用。此法在大面积培养中使用较普遍。优点是设备简单，无需动力，水泵及大量的CO2及通气设备。 (3) 半开放循环培养：半开放培养是指培养容器或池，槽等场所虽仍敞开，但有些部分密闭，或用塑料布覆盖。这种培养方式，利用管道，依靠动力，使培
养液流动和通入含二氧化碳的空气。该方式设备复杂，但效果较好。 2 藻种的分离 为了要进行某种藻类的科学研究活大量培养，有必要把某种藻类与其他生物分离。分离培养藻种，可分为两大类，一为单种培养，即藻类虽只有一种，但还混杂细菌。另一为纯培养，即不仅藻类只有一种，亦无其它任何生物。纯培养比较困难，一般的分离培养往往只能做到单种培养。 主要根据培养的目的要求，及某一种类的生物学特征。藻类的分离主要有以下几种常用方法。 2.1 离心法 将混合液用离心机离心，水中不同藻体及细菌就以不同的速度下沉，因此得以分开。这样将不同时间下从导管底的藻体取出，经镜检选定某种藻类最多的沉积物，再加清水，继续离心，如此反复就可得到比较单纯的藻体，在接种相应培养液中培养。该法可消除细菌，并增加纯粹分离的可能性，至少可作为藻种平板培养的准备工作。另外，在水液中藻体含量较少时，可用此法集中藻体。但此法不能做到使不同藻类完全分离。 2.2 稀释法 该方法用已消毒试管5只，在第一管盛蒸馏水10mL，第2～5管都装5mL，用高压蒸汽消毒，待冷却后，第1管用滴管滴入混合藻液1～2滴，充分振荡，使均匀稀释。每次用消毒吸管，从第1管中吸取5mL滴入第二管中如前振荡，使均匀稀释。以后依次同样滴入第3～5 管，并都充分均匀稀释。然后把五个已盛又消毒的琼胶培养基培养皿，加热使之溶解，待冷却而尚未凝固时，分别滴入五个试管的藻液各一滴，用力振荡，使藻液充分混乳培养基中。待冷凝后，把五个培养皿放在受着漫射光窗口，一直到出现藻群时为止，在20℃左右时，约10天即出现藻群。用消过毒的白金丝取些藻群，进行琼胶固体培养基的不通气培养。此过程反复多次，直至得到完全分离的纯藻种群为止。此法稀释要使用较多容器分组培养，比较麻烦，但较易成功。
单细胞藻类的培养
第六章单细胞藻类的培养 一、名词解释 1，生物饵料2，纯培养3，单种培养4，混合培养5，开放式培养 6，封闭式培养7，饱和光照强度8，补偿光照强度 9，一次性培养10，半连续培养11，连续培养 12，一级培养13，二级培养14，三级培养 15，倍增时间 二，选择题 1，下列哪种藻的最佳培养条件为高温、强光和强碱性？ A．钝顶螺旋藻B．湛江等鞭金藻C．中肋骨条藻D．小球藻 2，下列哪种藻是目前单细胞藻类中产业化程度最高的一个微藻？ A．微绿球藻B．等鞭金藻C．三角褐指藻D．钝顶螺旋藻 3，下列哪些金属元素为藻类生长繁殖必须的常量元素？ A．K，Mg，Zn B．K，Mg，Fe C．Mg，Fe，Cu D．K，Cu，Zn 4，实验室小型培养单胞藻，海水的消毒通常采用下列哪种方法？（C） A．烘箱干燥消毒B．有效氯消毒C．煮沸消毒D．高锰酸钾消毒 5，下列哪种藻类具有厚的细胞壁，一般不直接作为饵料投喂？ A．小球藻B．湛江等鞭金藻C．角毛藻D．微绿球藻 6，下列哪种藻类的形态随培养条件的改变会发生明显的变化？ A．小球藻B．三角褐指藻C．中肋骨条藻D．巴夫藻 7，下列哪种藻类的最佳培养生态和应用途径与三角褐指藻相似？ A．亚心形扁藻B．等鞭金藻C．小新月菱形藻D．巴夫藻 8，下列哪种藻类主要用作鲍鱼育苗中匍匐幼虫和稚鲍的饵料？ A．亚心形扁藻B．等鞭金藻C．小新月菱形藻D．舟形藻 9，藻类培养过程中，一般选择在什么时间接种？ A．清晨5~8点B．上午8~10点C．下午4~6点D．晚上 10，按接种后藻液中藻细胞浓度算，金藻和硅藻的接种密度最好应控制在什么浓度？ A．在500万细胞/毫升以上B．在10万细胞/毫升以上 C．在100万细胞/毫升以上D．在50万细胞/毫升以上 11，标准的血球计数板盖上盖玻片后，一个中央大格所在区域的体积是 A．1mm3B．10mm3C．0.1mm3D．0.1mL 12，单细胞藻类培养池的设计上要求： A．面积相对小，池子浅，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 B．面积相对大，池子深，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 C．面积相对小，池子深，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 D．面积相对大，池子浅，光照充足，最好内壁贴白色瓷砖 13，下列哪种藻类在南方甲壳动物育苗中广泛应用？ A．亚心形扁藻B．中肋骨条藻C．小新月菱形藻D．三角褐指藻 14，在藻类培养中，充气可促进藻类生长。但为了预防敌害生物通过空气污染藻液，空气在注入藻液之前最好经过洗气装置，下列哪种溶液最适宜作为洗液？ A．氢氧化钠溶液B．次氯酸钠溶液C．硫酸铜溶液D．盐酸溶液 15，不同的光波长，对同一种藻类的生长效能的影响不同。三角褐指藻在哪种色光下生长最
单细胞藻类培养技术
实用技术—生物饵料责任编辑 李振龙 单细胞藻中含有大量的多聚不饱和脂肪酸（PUFAs）、EPA和DHA，而且多数的单细胞藻具有生长繁殖快、环境适应力强、培养周期短等特点。可实现在人工控制条件下大量培养获得高产的目的，是鱼、虾、贝类等海产品的理想鲜活饵料，藻类培养质量的好坏将直接影响海产品育苗的成败，因此单细胞藻类的培养技术是育苗成功的基础和关键技术。随着人工育苗技术的成熟，单细胞藻类在贝类、虾蟹类、鱼类人工育苗中得到了广泛应用。以下简述一下藻类培养的注意问题： 一、培养方式 根据藻种培养的目的和要求的不同，单细胞藻的培养方式也有多种。根据藻的纯度一般分为纯种培养和单种培养。培养方法主要分为保种室培养和生产性培养。目前水产养殖过程中最为基础的培养是直接在自然水域中培养单细胞藻。经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻；有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物；有多种小型底栖动物等，利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻，促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖。而随着土池育苗的发展以及藻类在毒理学科研的需要，也可使用封闭或半封闭方式定向培养纯种单细胞藻。 二、扩种 目前的生产性培养主要分为一级、二级和三级培养。一级是藻种活化培养，一般在单细胞藻的保种室里进行，多采用250mL～5000mL的三角烧瓶，逐渐扩大培养；二级是藻种扩大培养，采用40L或50L的塑料桶、塑料袋充气培养单细胞藻；三级是在土池里投喂饵料的培养。 刚买回来的藻种一般进行一级扩种，扩种过程要求严格的无菌环境，最好每天早上7∶30左右，时间不易过早，待藻种上浮后扩种，取上层活跃藻体转接。不宜在晚上接种，因为晚上不少藻类沉在底部，而白天藻类进行光合作用，趋光上浮，便于观察其运动能力，还可起到选种的作用；刚买回的藻种第一次转接时不易全部转接，转接其三分之一至二分之一即可，并放在温度较低、光线较弱的地方培养，待藻适应光照条件后再调至其生长所需正常温度、光照条件进行培养，20天左右转接一次。 陈爱华等对等鞭金藻培养密度和接种时间比较试验结果表明，接种密度越低，生长速度越快，生长倍率越高。接种比率也是在藻种培养中需要注意的问题：以一级培养为种源的二级培养接种比例为1∶10，以二级培养为种源的扩种比例为1∶5。扩种一般选在上午8∶00到10∶00进行。 当二级培养的藻种经5天～6天培养后，临近对数生长期时，可进行生产性扩种。扩种比例为1∶40左右，扩种时间一般在上午9∶00到10∶00。 三、管理 藻类培养过程中光照、温度、湿度等条件的控制对藻类生长都起到十分关键的作用，因此接种后加强培养池的管理是提高产量的重要环节。生产性培养要用网捞出池面的污物，保持池水的洁净；为使藻处于悬浮的状态，不沉入池底，使其进行光合、呼吸作用且营养分布均匀，每天搅拌池水6次～8次；一级培养也要每天人工摇动3次～4次，以使藻类生长均匀，防止藻类出现沉淀与附壁现象。 1.对藻类生长状况的日常检查 每天早晚各做一次全面检查，观察藻类的颜色、透明度、附壁、沉淀和充气状况，必要时可配合显微镜检查。扩种后的藻种颜色很明显的由浅变深，若颜色变化不明显或出现其他颜色转变，就要及时查找原因；藻类对生长环境变化敏感，当出现环境不适应时就会出现沉淀和附壁现象；藻种一旦出现浑浊现象一般就要考虑是否存在敌害生物的污染，基于以上每天对藻种做日常检查是十分必要的。 2.镜检 显微镜检查是藻类培养中不可缺少的一步，一般7天～10天需进行一次全面的镜检，主要目的是检查有无敌害生物的污染，鉴定敌害生物的种类，从而及早采取相应措施。当培养出现异常现象时应及时镜检。 3.培养条件控制 不同的单细胞藻类品种有不同的生长最适温度，培养温度的高低直接影响其繁殖速度。过大的温差对单胞藻培养是十分不利的，尤其是在冬季，在向培养池补充水分或接种时，应尽量将水温调至所培养藻种的适温范围之内。当培养水温达到29℃以上时，对藻类生长不利，藻体老化快、易污染。在夏季控温的最好办法是将门窗打开，通风降温。 光照是影响单胞藻生长的主要因素之一。夏季，不要把藻类培养物放在直射太阳光下，而要放在凉爽的场所。在秋、冬季节，如希望藻类保持积极的生活活动状态，就要把培养物移到有人工光照处。而生产性培养、规模化培养需要较强的光照，可以人工补充光源强度。 单细胞藻类培养技术 ◇田程 崔建升 刘杰 河北科技大学环境科学与工程学院 050018 42《中国水产》2011年第5期
单细胞藻轮虫培养技术要点
单细胞藻、轮虫培养技术要点 陈世杰 （福建省水产研究所，厦门361012） 福建省水产技术推广总站 福建省水产饲料研究会 二OO 四年三月·厦门 目录 1、单细胞藻培养实用技术要点 1.1单细胞藻选用对象 1.2培养单细胞藻器具的清毒 1.3小球藻的分级培养 1.4营养及接种 1.5管理工作要点 1.6PVC 透明塑袋培养 1.7敌害生物防控 1.8防治三例 1.9单细胞藻的浓缩与冷藏 2、轮虫培养实用技术要点 2.1轮虫个体的大小 2.2生态习性 2.3繁殖特点 2.4食性与食料 2.5培养方式 2.6投饵密度 2.7营养强化 2.8轮虫的收获 2.9“饥饿轮虫”问题 单细胞藻、轮虫培养技术要点 陈世杰 （福建省水产研究所，厦门361012） “兵马未动，粮草先行”，“手中有粮，心里不慌”。在饵料浮游动物（轮虫、卤虫、桡足类、枝角类等）的培养中，单细胞藻类作为最重要的基础性生物饵料来讲，在很大程度上是最优质而又不可或缺的；同时，单细胞藻在水产养殖中的作用日益凸显，其大量培养和生产不仅为鱼、虾、贝类等各种水产经济动物福建饵料动物培育技术 讲习班讲稿
的苗种生产提供饵料，而且有些还可作为鱼虾配合饲料的重要添加物，起到营养平衡与强化效果，利于培育健壮的苗种。单细胞藻作为培养轮虫的优质饵料，其关系更加密切，最重要的一点，是可以使轮虫摄食后，富有高度不饱和脂肪酸（HUFA）,大大提高轮虫的营养价值。 1、单细胞藻培养实用技术要点 1.1单细胞藻选用对象 有句俗话——“绿水养鱼、褐水养虾”，就是说，养鱼池水中以适量绿藻、养虾池水中以适量硅藻为宜，而贝类幼体在浮游期以金藻和绿藻为宜，在匍匐期则以底栖硅藻为宜。 常用的绿藻类如小球藻(Chlorella)、微绿球藻(Nanno-chloropsisoculata)、盐藻(Dunaliella)、亚心形扁藻(Platymo-nassubcordif ormis)、青岛大扁藻(P.helgolandica var.tsing- taoensis)、四肩突四鞭藻(Tetraselmistetrathele)；常用的硅藻如牟氏角毛 藻(Chaetocerosmuelleri)、简单角毛藻(Chaet. simplex)、新月菱形藻(Nitschiaclosterium)、三角褐指藻(Phaeodactylumtricornutum)、中肋骨条藻(Skeletonema costatum)。 常用的金藻类如绿光等鞭金藻(Isochrysisgarbana)、湛江叉鞭金藻(Dicrateriazhanjiangensis)、绿色巴夫藻(Pavlovaviridis)、鲁兹帕夫藻(P.lutheri)；常用的底栖硅藻如舟形藻(Navicula)、卵形藻(Cocconeis)、双 眉藻(Amphora)、弯杆藻(Achnanthes)。 目前，在应用中，微绿球藻、骨条藻和金藻类巴夫藻更显现优点。 单细胞藻作为饵料培养轮虫及水产动物幼体苗种饵料，有以下特点： ①个体小(苗种、幼体之口径约为其体长的1/10)，而细胞藻又应是其口径的√2/2或<4/5。 ②运动速度、分布情况与幼体活动习性一致，便于摄食即摄食的机会更多。 ③营养丰富，尽量选取无坚硬外壁的，适于消化吸收。 ④本身及其代谢产物无毒，不影响幼体、苗种的正常生长。 ⑤繁殖快，对环境的适应性强，容易大量培养和生产。 1.2培养单细胞藻器具的消毒 ①在水中煮沸，5～15分钟；或在高压蒸气灭菌锅中，以1kg/cm2压力、121℃高温蒸煮15～20分钟，此法是加温80℃以上使敌害微小生物的蛋白质凝固而死。
单细胞藻类的培养方法
单细胞藻类的培养方法 周德山1 胡希亮1 李茂才2 (1.连云港市海洋环境检测中心,江苏连云港 222042;2.连云港市海洋与渔业局,江苏连云港 222100) 单细胞藻类与我们的水产养殖息息相关,不同的单细胞藻类品种及组成使养殖水体表现出不同的颜色。单细胞藻类是鱼、虾、蟹、贝类等的直接或间接饵料;水体中单细胞藻类的优劣决定了鱼、虾、蟹、贝类等生态环境的好坏。在水体中培养单细胞藻类有多种方法,笔者将其总结如下: 1 培养单细胞藻采用不同的接种方式 1.1 在自然水域中直接培养单细胞藻 在目前的大部分池塘养成及部分鱼、虾、蟹、贝类等育苗过程中,直接利用自然淡水或海水培养单细胞藻。经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻;有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物;有多种小型底栖动物等,利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻,促进浮游动物、底栖动物等基础 ,是目前水产养殖过程中,较为常见的基础饵料生物的培养方法。 自然繁殖单细胞藻的时间要根据生产需要而定,其标准为鱼、虾、蟹、贝类等动物育苗开始后,或者其苗种投放池塘后,育苗幼体或投放的苗种要有适宜的生长发育环境,要有充足的生物饵料吃。虾、蟹、鱼、贝类等的池塘养成,一般在放养苗种半个月前,开始施肥繁殖单细胞藻,根据水色、透明度调节施肥量及施肥次数,一般将水色调节为黄色或黄褐色,透明度为30～50cm。水色及透明度不同,单细胞藻的品种组成及密度不同,不同的养殖品种及同一品种的不同发育阶段,对水色及透明度的要求不一样。在虾、蟹、鱼、贝类等的养殖过程中,要始终保持水质的肥、活、嫩、爽,使虾、蟹、鱼、贝类等水产养殖动物,生活在一个良好的生态环境中。 1.2 使用封闭或半封闭方式定向培养单细胞藻 在大部分的海产动物育苗及一些生态高效养成过程中,使用封闭或半封闭的纯种单细胞藻的三级培养。如近几年,河蟹土池育苗已兴起热潮,海水的鱼类、贝类、虾类等各种土池育苗也已开始,土池育苗的关键,就是在池塘里繁殖优质的充足的单细胞藻,促使以单细胞藻作为饵料的各种浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的大量生长繁殖。要想使池塘里的单细胞藻优质、稳产,目前最好的培养方法就是采用封闭或半封闭式的单细胞藻的三级培养,一级培养在单细胞藻的保种室里进行,多采用250～5000m L的三角烧瓶培养单细胞藻;二级培养采用塑料桶、塑料袋充气培养单细胞藻;三级培养在土池里培养单细胞藻。常用的单细胞藻品种有三角褐指藻、小球藻、扁藻、小硅藻、骨条藻等。 1.3 利用自然海水筛选培养生产性纯藻液 1.3.1 藻种的来源及品种特点 在自然海水12℃以下时,自然海水塘里原生动物少,单细胞藻纯度大,在海水塘里选择生产需要的、品种比较单一的藻液,进行筛选培养。通过这种方式筛选出的单细胞藻对当地的水环境适应性强,抗污染,培养技术容易掌握。这种培养方式是江苏沿海地区虾蟹育苗过程中,海洋单细胞藻培养经常使用的方式。 1.3.2 筛选培养生产性纯藻液的理论根据及方法 根据所培养的单细胞藻的生活习性,设法形成一个适宜海洋单细胞藻生长繁殖的水环境,快速培养单细胞藻,形成了一个良好的而又复杂的生态平衡系统,海洋单细胞藻作为优势种通过营养竞争和空间竞争抑制其他有害微生物的生长繁殖,当培养的藻液达到一定浓度时,某些微生物分泌抗生素或细菌素达到一定浓度,杀死某些有害微生物如一些原生动物等,以及微生物之间的寄生作用,消灭病原微生物如纤毛虫、丝状菌等;利用优势藻的拮抗作用,抑制优势单细胞藻中的其他单细胞藻的生长繁殖。通过停气,清理下沉池底的其它单细胞藻、受抑制单细胞藻、动物尸体。 - 54 -
贝类育苗中单细胞藻类培养技术_邹琰
2010.4 我国贝类资源丰富。近几年，随着自然海区环境的恶化，贝类野生资源不断遭到破坏，人工养殖规模不断扩大，对苗种的需求更是有增无减。作为贝类幼体的优质适口饵料，单胞藻饵料的好坏直接关系到贝类育苗的产量和质量。下面根据工作经验，简述一下贝类育苗中单细胞藻类培养中应注意的问题。 一、适宜藻种的选择 藻种的选择是育苗的基础。贝类育苗常用的单细胞藻类有：金藻、角毛藻、小新月菱形藻、扁藻等。金藻没有细胞壁，且个体微小、营养丰富，适于幼体摄食和消化，是贝类育苗中优质的开口饵料。而角毛藻耐高温，可养时间长，与扁藻一样具易于大规模培养的特点，使其可作为贝类育苗的中后期饵料。 在购买藻种时要选择生长旺盛、色泽鲜艳（硅藻类为黄褐色、绿藻类为鲜绿色）、无沉淀及无明显附壁的藻种。 二、培育设施 贝类育苗一般处在高温季节，饵料极易被污染，饵料培养车间应经常消毒，可用稀释漂白液冲洗走廊，用喷壶对顶棚进行消毒，以消灭寄生的原生动物孢子。 １．培育用水 单胞藻培育用水消毒彻底与否与受敌害生物污染程度关系密切。作为一级藻种培养用水，必须经过沉淀、砂滤和煮沸灭菌。二、三级藻类培养用水可用化学方法来消毒，如次氯酸钠消毒法等。 ２．培养器具 各级培养用的玻璃器皿、工具都需煮沸或酒精消毒。三级池可用高锰酸钾溶液由池壁顶部淋洒、泼洒池底、用刷子刷净的方法进行消毒，然后用消毒过的海水冲洗干净方可使用。 三、日常管理 １．接种比例 因贝类育苗大部分为高温期，饵料车间培育温度较高，不利于培养藻类的生长。可通过增大接种比例、常换水的方法来降低养殖池温度，促进单胞藻类的生长，同时也提高了浓度，抑制了敌害生物的繁殖。 ２．搅拌和充气 在单胞藻培养过程中，搅拌或充气必不可少。它不仅可以增加水与空气的接触面，补充培养液中的二氧化碳，还可帮助下沉的藻体上浮获得光 照，同时防止水面产生菌膜。搅拌时应注意不要用力太猛，以防藻液溅出，相互污染。 ３．光照 饵料生产上培养一般利用太阳光源，而太阳光源具有易变的特点，因此要根据天气情况随时进行调整。室内培养饵料应避免阳光直射，可采用活动白帆布篷来调节光照。阴雨天，可适当采用人工光源的办法。 ４．温度 温度也是影响单胞藻生长繁殖的重要因素之一。饵料只有在其适温范围内才能正常生长。有条件的应该安装控温设备，如空调等。温度过高可采取开窗通风的方法降温，但应注意加纱窗布遮盖，防止蚊虫及原生动物孢子随风而入。 四、日常观察 藻类生长情况的好坏直接决定了培养成败。在培养工作中，可采用肉眼观察藻液颜色、是否有附壁和沉淀等来了解大概情况。每天需用显微镜检测是否有敌害生物，以及时采取对策。 １．藻液颜色 不同藻类的藻液颜色不同，且藻液颜色会随着浓度的增加而变深。如金藻生长良好时呈现金褐色，接种后颜色会逐渐变深且有小气泡产生。而角毛藻正常生长时颜色为褐色，藻体悬浮于水中呈云雾状水团。如果出现黄色、乳白色和蓝色，说明被其他藻类或敌害生物污染。 ２．沉淀情况 具有运动能力的单胞藻在培养池中会有一定的分布特点，如条件不适，便会产生沉淀。扁藻在光线充足且发育良好的情况下会上浮，并在液面出现聚集缕状分布，如生长状态不好，则会出现沉淀。沉淀藻体如果保持原色，还可能恢复其生长，如果变成灰白色，则表明已经腐败，应及时进行处理。 ３．其他 如果藻类附壁，说明藻类生长不好。如水表面产生菌膜，证明有细菌或真菌存在。如水体清澈，则可能有敌害生物污染，需用显微镜观察，确定不正常的原因。 五、敌害生物的防治 敌害生物污染是目前单胞藻生产性培养不稳定的主要原因。因敌害生物具有分布广、繁殖快、易传播的特点，目前还没有彻底解决的办法，只能以防为主、防治 贝类育苗中单细胞藻类 培养技术
(完整版)实验一常用单细胞藻类的形态观察
实验一常用单细胞藻类的形态观察 一、实验目的： 观察并识别作为饵料生物的代表性单细胞藻类的种类，为后继单细胞藻类的分离和培养做准备。 二、实验器材： 1、藻种 绿藻门：Chlorophyta 绿藻门：Chlorophyta 小球藻 Chlorella sp. 盐藻 Dunaliella sp. 青岛大扁藻Platymonas helgolandica var. tsingtaoensis 亚心形扁藻 Platymonas subcodiformis 微绿球藻 Nannochloropsis oculata 硅藻门：Bacillariophyta 三角褐指藻 Phaeodactylum tricornutum 小新月菱形藻 Nitzschia closterium f. minutissima 中肋骨条藻 Skeletonema costatum
牟氏角毛藻 Chaetoceros muelleri 金藻门：Chrysophyta Pavlova viridis 球等鞭金藻 Isochrysis galbana 湛江等鞭金藻 Isochrysis zhanjiangensis 蓝藻门：Cyanophyta 钝顶螺旋藻 Spirulina platensis 黄藻门：Xanthophyta 异胶藻 Heterogloea sp. 2、实验器材 2、实验器材 2、实验器材 光学显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，鲁哥氏碘液，甲醛溶液，滴瓶，无菌水，擦镜纸，吸水纸 三、操作步骤及要求： 用胶头滴管吸取液体培养的各种藻类样品，滴到载玻片上（若藻种浓度大用无菌水稀释），用显微镜（低倍和高倍）观察细胞的形态大小，色素分布，运动方式，然后用碘液或甲醛固定样品，观察细胞的鞭毛着生情况（长度、数量），细胞的内部结构等。
对虾养殖新技术
对虾养殖新技术 对虾精养健康养成技术要点 我们通常说的对虾一般是指对虾属和新对虾属中的对虾，分类上属于节肢动物门、甲壳纲、十足目。下将我国养殖的主要品种中国对虾（又名东方对虾）介绍如下： 中国对虾主要分布于我国的黄渤海，在东海、南海有时也能见到它的踪迹，但数量很少。 一、对虾的繁殖习性和生活史 雌，雄对虾的成熟期是不同时的。雄虾当年就可达性成熟，而雌虾需到翌年4、5月才能成熟。雄虾成熟后，约在10月中旬至11月初与雌虾交配。交配时是在雌虾退壳后新的甲壳未变硬前由雄虾将精类送入雌虾的纳精囊内。交配后的雌虾纳精囊由原先的平扁而透明变得饱满微凸而呈乳白色。 在交配后的第二年4－6月，雌虾性腺成熟并产卵，中国对虾在自然海区的产卵水温为13－18℃。人工饲养在控温的条件下可提前到3月份产卵。对虾具有多次（分批）产卵的习性。雌虾产卵时一边产卵，一边将纳精囊中的精子放出与卵结合。 中国对虾从产卵受精孵化到仔虾是要经过3个完全不同形状的阶段，9次脱壳，即无节幼体，蚤状幼体、糠虾幼体才到仔虾。仔虾再经过14一22次脱壳才达到性成熟进行交配繁殖后代。 二、对虾育苗的环境因子 对虾育苗在南方一般都是采在水泥池内进行，中国对虾育苗的适宜环境因子是： 1、水温：产卵及受精卵孵化最适宜水温为18－20℃，无节幼体阶段为20－22℃，蚤状幼体为22－24℃，糠虾幼体为23－25℃，但当培育到仔虾期时，虾苗准备出池前2－3天，要逐渐降到与养殖池水温相接近。以免出池后与养殖池温差过大而死亡。 2、pH值一般均为7.8-8.6之间。 3、盐度一般均为25‰左右。 4、溶解氧４毫米升以上。 三、对虾养成技术 l、清池除害。池塘建成或老塘修复后，在拟定放养20天前，要进行清塘、清塘包括清除淤泥，杂藻及动物性敌害生物。 清除敌害生物的方法是: 不积水的池塘，在对虾收获后将塘水排干，曝晒一冬，就能达到清除之目的。但不能排干曝晒的池塘，需用药物清除。常用的药物有茶籽饼，漂白粉、鱼藤精、生石灰等。 2、饵料生物培养。清除后，就可以进水培育生物饵料，它是对虾放养的基础饵类、具有方法简单，营养价值高，省力又能降低生产成本等优点。一口基础饵料培育好的虾塘，虾苗放养时可半月内不需报饵。 3、虾苗运输及注意事项。虾苗运输是否得当，对其成活率的影响很大。运输途中溶解氧和水质是主要因素。目前大多数都是采用聚乙烯袋充氧运输。这种方法轻便、安全、适应各种工具运送。在体积为10升的聚乙烯袋中，装入新鲜海水约1/4，虾苗约2万尾，再充入氧气约3/4，然后把袋口扎紧，运输时间在10小时以内不会有问题，如果将袋装放入纸盒内更为安全。 虾苗运输注意事项有：①装苗不能用育苗池中的育苗水，而应用新鲜海水，另外混浊或已被污染的海水不能用。③运苗时间最好安排在清晨或傍晚，避免中午日烈炎热，运输水温最好能控制在与育苗池水温相近，尽量避免超过20℃。
单细胞藻类
第二章单细胞藻类培养 第二章单细胞藻类培养 * 一、单细胞藻类的种类与生物特性 * （一）单细胞藻类培养的种类 * 常用的饵料微藻主要有： * 牟氏角毛藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体；* 三角褐指藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体、种贝； * 中肋骨条藻：虾、蟹幼体； * 底栖舟形藻：鲍、海参、海胆、埋栖贝类、舔食螺类的附着幼体； * 底栖卵形藻：同上； * 等鞭金藻：贝、虾、蟹、海参、海胆的幼体； * 亚心形四片藻：轮虫、卤虫、种贝及虾的后期幼体； * 海水小球藻：同上； * 钝顶螺旋藻：虾、蟹幼体及配合饲料的添加剂； （二）单细胞藻类的生物学 * 1、盐度：
* 大多数单胞藻盐度适应范围很宽。 * 10-40大多数单胞藻能适应。 * 如扁藻、盐藻、小球藻在10-80的盐度中能正常生长。 2、温度 * ①适温 * 绿色巴夫藻10-35℃； * 扁藻7-30 ℃； * 盐藻4-40 ℃。 * 因此大多数单细胞藻类适合在20-25 ℃下培养。 * 一些单胞藻适合在较高温度下生存；如钝顶螺旋藻生存最适为28-34 ℃。 ②低温 * 单胞藻一般忍耐性较强，在一定的低温条件下产生的形态和生理变化是可逆的。 * 利用其在低温环境下呈休眠状态的特点，可较长时间保存单细胞藻类。 * 如在-20 ℃温度下，冰冻20d的三角褐指藻浓缩藻液，解冻后，培养2d即可恢复正常生长。
3、光照 * 5000-10000lx，适合大多数单细胞藻类的培养。 * 某些藻类适合在弱光下培养： * 如中肋骨条藻：5000lx较适宜，而10000lx 产生抑制作用）； * 三角褐指藻：3000-5000lx * 某些单细胞藻适合较强的光照： * 等鞭藻：7000-9000lx * 角毛藻:10000-15000lx * 某些单细胞藻类适合在强光下培养： * 如钝顶螺旋藻：30000-35000lx 4、pH * 7.5-8.5是大多数藻类的适宜范围。 * 也有一些藻类适合碱性条件： * 如钝顶螺旋藻8.6-9.5。 5、繁殖 * 主要以二分裂繁殖为主。 * 可将培养过程分为：延缓期、对数（指数）生长期、相对生长下降期、静止期和衰亡期。 二、藻种的分离 * （一）采样
单细胞藻类培养液的成分
单细胞藻类培养液的成分 单细胞藻类培养液的成分有下列七类。 (一)大量元素 1．氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙[Ca(NO)3)2]、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵[(NH4)2SO4]、发酵人尿……等。其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。 2．磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。 3．铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁[Fe2(SO4)3]、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)]等。其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。铁也容易产生沉淀。所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。 在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化
(Pringsheim，1963)。 在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers，1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。 应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。 由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。 因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素。 4．钾(K) 单胞藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCl)、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)等。一般培养液中由于氮、磷元素的加入，也附带加入了钾营养元素。除此以外，可再加入氯化钾。 5．镁(Mg) 培养液中镁的来源，常用的是硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCl2)两种。可以单独使用其中一种，也可两种同时使用。镁元素在天然海水中的含量很大(1 200mg/L以上)，一般是足够的。 6．硫(S) 培养液中硫的来源一般是加入其他营养元素的硫酸盐类(如硫酸铵、硫酸镁、硫酸铁、硫酸高铁、硫酸锰、硫酸铜等)在获得其他营养元素的同时，也获得了硫元素。 7．钙(Ca) 培养液中钙的来源，常加入氯化钙(CaCl2)或硝酸钙[Ca(N03)2]。 8．硅(Si) 在硅藻培养液中一般都加入硅元素，硅元素的来源，常用的是硅酸钠(Na2SO3)和硅酸钾
单细胞藻类的培养液汇总
第六节单细胞藻类的培养液 藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要， 各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养。然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同。只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果。一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的。还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平。 本节内容分培养液成分、培养液配方和培养液的配制三部分。 一、培养液成分 单细胞藻类培养液的成分有下列七类。 (一)大量元素 1．氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙[Ca(NO)3)2]、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵[(NH4)2SO4]、发酵人尿……等。其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。 2．磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。 3．铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁[Fe2(SO4)3]、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)]等。其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。铁也容易产生沉淀。所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。 (1)在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim，1963)。 (2)在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers，1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。 (3)应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。 由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。 因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素。 4．钾(K) 单胞藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCl)、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢
微生物学教案 第二章 微生物的纯培养和显微技术
第二章微生物的纯培养和显微技术 大多数动物植物的研究、利用都能以个体为单位进行，而微生物由于个体微小，在绝大多数情况下都是利用群体来研究其属性，微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存。在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物（culture），而只有一种微生物的培养物称为纯培养物（pure culture）。由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。相应的，微生物个体微小的特点也决定了显微技术是进行微生物研究的另一项重要技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能通过显微镜才能进行观察和研究。显微技术包括显微标本的制作、观察、测定、分析及记录等方面的内容。实际上，正是由于显微技术及微生物纯培养技术的建立才使我们得以认识丰富多彩的微生物世界，并真正使对微生物的研究发展成为一门科学。 第一节微生物的分离和纯培养 一、无菌技术 微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术（aseptic technique），它是保证微生物学研究正常进行的关键。 1.微生物培养的常用器具及其灭菌 试管、玻璃烧瓶、平皿（culture dish，Petri dish）等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不含任何生物。培养微生物的营养物质（称为培养基（culture medium））可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 图2-1 无菌操作转接培养物