单细胞藻类的培养液汇总
第六节单细胞藻类的培养液
藻类的生长繁殖需要吸收各种营养元素，单细胞藻类的培养液必须具备这些营养元素,而且在营养成分和数量上都应该符合藻类的需要，
各种藻类对营养的需要有很多共同点，所以一些培养液配方，能应用于多种藻类的培养。然而，藻类的不同种类，对营养的要求是有差别的，各有其特殊性，不同种类的培养液配方，当然也应该不同。只有较好地符合培养种类需要的配方，才可能获得较理想的效果。一个培养液配方的提出，首先必须了解这种藻类对营养的要求，要达到这一点，进行一系列的试验是必要的。还必须在使用中验证配方的效果，并在实践过程中不断总结经验，加以改进，使配方达到更理想的水平。
本节内容分培养液成分、培养液配方和培养液的配制三部分。
一、培养液成分
单细胞藻类培养液的成分有下列七类。
(一)大量元素
1．氮(N) 单胞藻培养液常用的氮源有硝酸钾(KNO3)、硝酸钠(NaNO3)、尿素(NH2CONH2)、硝酸铵(NH4NO3)、硝酸钙[Ca(NO)3)2]、氯化铵(NH4C1)、硫酸铵[(NH4)2SO4]、发酵人尿……等。其中以硝酸钠和硝酸钾最常用。但不同的藻类对硝酸态氮和铵态氮的吸收利用情况是不同的，必须根据不同的藻类选择合适的氮源。
2．磷(P) 单胞藻培养液常用的磷源有磷酸二氢钾(KH2PO4)、磷酸二氢钠、(NaH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)4种。海水单胞藻培养液应用磷酸二氢钾，如用磷酸氢二钾所配培养液会产生大量沉淀。
3．铁(Fe) 单胞藻培养液常用的铁源有三氯化铁(FeCl3)、硫酸铁(FeSO4)、硫酸高铁[Fe2(SO4)3]、氧化铁(FeO)、柠檬酸铁(FeC6H5O7)、柠檬酸铁铵[Fe(NH4)3(C6H5O7)]等。其中最常用的是三氯化铁和柠檬酸铁。无机铁在水中容易形成一种胶体复合物，无可逆反应，不能为生物利用。铁也容易产生沉淀。所以尽管铁在数量上所需很少，但要满足藻类需要却很困难。要保持溶液中可利用态铁的数量，通常采用3种方法，这些方法都取得一定的成功，但都不够十分完善。
(1)在培养液内加入土壤抽出液：由于自然有机质(一般称为腐殖酸)的作用阻止了铁的沉淀和溶胶化(Pringsheim，1963)。
(2)在培养液内加入某种有机酸或其盐类以形成可溶性铁化合物：已证明较有效的有柠檬酸盐和酒石酸盐：迈尔(Myers，1947)证实应用硫酸铁和柠檬酸钠能使小球藻生长十分良好。
(3)应用络合剂：最常用的为乙二胺四乙酸(EDTA)，络合剂能防止铁和微量营养元素沉淀，并按照质量作用定律释放出足够数量的离子供藻细胞利用。
由于无机铁容易形成胶体复合物和沉淀，而有机铁，如柠檬酸铁、酒石酸铁等则是可溶性的，易为藻类细胞利用，在培养液配方中可使用有机态铁代替无机态铁。
因藻类对铁元素需要量不大，也有部分科学工作者，把铁列为微量元素。
4．钾(K) 单胞藻培养液中钾的来源常用的有氯化钾(KCl)、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢
钾(KH2PO4)、磷酸氢二钾(K2HPO4)等。一般培养液中由于氮、磷元素的加入，也附带加入了钾营养元素。除此以外，可再加入氯化钾。
5．镁(Mg) 培养液中镁的来源，常用的是硫酸镁(MgSO4)和氯化镁(MgCl2)两种。可以单独使用其中一种，也可两种同时使用。镁元素在天然海水中的含量很大(1 200mg/L以上)，一般是足够的。
①湛水101号培养液（湛江水产学院）：
NaNO30.03g维生素B1200μg
Co(NH2)2 0.03g 维生素B12 200mμg
KH2PO40.005g 人尿 1.5ml
FeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml 海水 1 000ml
培养绿藻类、金藻类、硅藻类……使用。在培养硅藻时应加入0.02g/L硅酸钠。
②ASP2培养液[Provasoli,L.;McLaughlin,J.J.A.;Droop,M.R.1957]:
NaCl 1.8g NnCl20.12mg
MgSO4·7H2O 0.5g CoCl20.3μg
KCl0.06g CuCl20.12μg
CaC1210.0mg H3BO30.6mg
NaNO3 5.0mg 维生素B120.1μg
K2HPO40.5mg 维生素溶液S3（参考
1.0ml
第70页）
Na2SiO3·10H2O 15mg
Na2EDTA 3.0mg 三[羟甲基]氨基甲烷0.1mg
FeCl30.08mg 纯水100ml
ZnCl315μg pH7.6~7.8
培养绿藻类、金藻类、蓝藻类、隐藻类、涡鞭藻类使用。
（2）绿藻培养液配方：
①海洋三号扁藻培养液（海洋研究所，1960）：
NaNO30.1g2Na3C6H5O7·11H2O 0.02g
KH2PO40.01g
Fe(SO4)3(1%溶液) 10滴海水 1 000ml
②亚心形扁藻培养液（湛江水产学院）：
NaNO30.05g维生素B12200mμg
KH2PO40.005g 人尿2ml
FeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml
维生素B1200μg海水 1 000ml 培养成亚心形扁藻及其他绿藻使用，多用于小型培养和中继培养，如能加入海泥抽出液20ml，效果更好。
③亚心形扁藻培养液（厦门水产学院）：
20ml
（NH4）2SO4200mg 海泥抽出液V
（参考第60页）
过磷酸钙
30mg
[Ca(H2PO4)2·H2O+2(CaSO4·H2O)]
FeC6H5O7(1%溶液) 0.5ml 海水 1 000ml
过磷酸钙溶液的配制：取含有效磷为16%的普通二级过磷酸钙配成3%的母液，过滤，使用时每1000ml海水加入1ml。培养过程中以追肥形式分2次加入0.2%人尿液效果更好。
④布彻（Butcher）培养液[Butcher，（1959）]：
NaNO30.1g 土壤抽出液50ml
K2HPO40.05g 海水1000ml
培养扁藻使用。
⑤盐藻培养液：
甲液：K2HPO40.05g
NaCl 5~10g FeC6H5O70.001g
海水500ml 海泥抽出液V（参考第60页）20~30ml
乙液：海水500ml
NaNO30.5g
使用时，将甲、乙两液混合。如果再加入0.2%~0.3%人尿，效果更好。
⑥赫特纳（Hutner）培养液[Hutner,S.H.(1950)]：
NaCl 0.25~4g K2HPO420mg
MgSO4·7H2O 0.25g 醋酸钾0.2g
Ca(NO3)2·4H2O 15mg 甘氨酸0.25g
EDTA 0.05g Zn 3.0mg
Fe 0.6mg Cu 0.5mg
Mn 1.0mg 纯水100ml
Mo 1.0mg pH7.5
培养盐藻使用。
⑦赖瑟（Ryther）培养液[Ryther，J.(1954)]:
NaCl 2.67g Na3HPO4·12H2O 2.0mg
MgCl2·6H2O 0.22g Na2SiO3·9H2O 2.0mg
MgSO4·7H2O 0.32g Na2C6H5O7·2H2O 0.02mg
KCl 73mg KBr 5.8mg
NaHCO320mg B 1.0mg
NH4Cl 5.3mg 纯水100ml
CaCl2150mg
培养微绿球藻和Stichococcus使用。
⑨屋岛改良培养液（平田八郎，1980）：
过磷酸钙[Ca(H2PO4)2·H2O]+2(CaSO4·H2O) 50g 硫酸铵（NH4）2SO4300g
海水1m3
大量培养海产小球藻使用。
（3）硅藻培养液配方：
①艾伦—内尔森（Allen-Nelson）培养液[Allen,E.J.et al(1910)]:
A.KNO320.2g 纯水100ml
B.Na2HPO4·12H2O 4.0g CaCl2·6H2O 4.0g
HCl(浓) 2.0ml 纯水80ml
FeCl3 2.0ml
B 液的配制法：先把氯化钙4g溶解于40ml纯水中。另外把磷酸氢二纳4g溶解40ml 纯水中，再把三氯化铁溶融液2ml，缓慢滴入，摇动，产生白色沉淀，加热，缓滴入浓盐酸2ml，沉淀的白色沉淀即重新溶解。把以上两溶液混合。
使用时，取A液2ml和B液1ml，加入1000ml海水中，充分混合后加热消毒，消后静置24h，然后将上层清液倒出使用。
②卢因（Lewin）培养液[Lewin,J.C.;Lewin,L.A.(1960)]:
Ca(NO3)2·4H2O 0.02g Zn 0.1mg
K2HPO40.05g B 0.1mg
Na2SiO3·9H2O 0.5mg Co 0.1mg
胰蛋白 1.0g Cu 0.1mg
维生素B12 1.0μg Mo 0.1mg
Fe 0.3mg 海水1000ml
③米奎尔（Miquel）培养液[Miquel,P.(1890~1893)]:
A.MgSO410g KI 0.2g
NaCl 10g 纯水100ml
Na2SO45g B.Na2HPO4·12H2O 4g
NH4NO31g CaCl2·6H2O 4g
KNO32g FeCl3(溶融) 2ml
NaNO32g HCL(浓) 2ml
KBr 0.2g 纯水80ml
每1000ml海水加入A液2ml，B液1ml。
④须藤培养液[须藤俊造（1959）]：
NaCl 24g NaHCO30.168g
MgSO4·7H2O 8g Na2SiO30.008g
KCl 0.7g P1（参考第70页）1ml
CaCl2·2H2O 0.37g 维生素B120.02μg
NaNO30.1g
Na2HPO4·12H2O 0.125g 纯水1000ml
培养中肋骨条藻使用。
⑤廖氏改良培养液（转引自张立言等，1989）：
KNO360mg NaSiO310mg
Na2HPO4·12H2O 10mg 海水1000ml
培养中胁骨条藻用。
⑥中胁骨条藻培养液（厦门大学）：
KNO30.4g NaSiO30.02g
Na2HPO4·12H2O 0.04g FeSO4·7H2O 0.014g
土壤抽出液15ml 4~5国际单位“920”植物生长刺激
海水1000ml
素
⑦硅藻培养液（湛江水产学院）：
NaNO30.08g 维生素B1200μg
K2HPO40.008g 维生素B12200mμg
FeC6H5O7(1%溶液) 0.2ml 人尿 1.5ml
Na2SiO30.02g 海水1000ml
培养三角褐指藻、小新月菱形藻、钙质角毛藻、牟氏角毛藻使用。
⑧牟氏角毛藻培养液（黄海水产研究所）：
NH4NO35~20mg FeC6H5O7·3H2O 0.5~2.0mg
KH2PO40.5~1.0mg 海水1000ml
⑨小新月菱形藻培养液（朱树屏等，1964）：
NO3—N 4g Fe(FeC6H5O7·3H2O) 0.04g
PO4—P 0.4g 海水1m3⑩赫特纳（Hutner）培养液[Hutner,S.H.(1948)]:
NaCl 0.2g Mn 0.05μg MgSO4·7H2O 0.25g Mo 5.0μg
NH4NO350mg Zn 5.0μg CaCO314mg Cu 5.0μg
K2HPO440mg B 0．05μg Na2SiO3·9H2O 5mg 纯水100ml
Na3C6H5O7·2H2O 100mg
Fe 0.5mg pH7.2~7.5 培养三角褐指藻使用。
（4）金藻培养液配方：
①E—S培养液（Allen,M.B.）:
50ml NaNO30.12g 土壤抽出液I（参
考第60页）
K2HPO40.001g 海水1000ml
培养等鞭藻Isochrysis galbana使用。
②F/2培养液（Guillard et al.,1962）:
1ml NaNO374.8mg F/2微量元素溶液
（参考第70页）
NaH2PO4 4.4mg F/2维生素溶液
1ml
（参考第71页）
Na2SiO3·9H2O 8.4~16.7mg 海水1000ml
小型培养金藻使用。
③F/2改良培养液（厦门水产学院）：
NaNO374.8mg 人尿 1.5ml NaH2PO4 4.4mg 海水1000ml
20~60ml
海泥抽出液V（参
考第60页）
生产性培养金藻使用。
④等鞭藻OA—3011培养液（陈椒芬等，1987）：
NaNO360mg 维生素B120.5~1.5μg KN2PO44mg 维生素B1100~500μg FeC6H5O70.5mg NaHCO31g
Na2SiO35mg 海水1000ml
⑤湛水107—13培养液（湛江水产学院）：
NaNO380mg 维生素B120.5~1.5μg K2HPO48mg NaHCO31g
FeC6H5O7（1%溶液）0.2mg
维生素B1200μg 海水1000ml
培养湛江等鞭藻、亚心形扁藻、钙质角毛藻使用。
⑥湛水107—18培养液（湛江水产学院）：
NaNO350mg 维生素B120.5~1.5μg
K2HPO45mg 人尿 1.5ml
FeC6H5O7（1%溶液）0.2ml NaHCO30.5g
维生素B1200μg 海水1000ml
培养湛江等鞭藻、亚心形扁藻、钙质角毛藻使用。
⑦等鞭藻9201培养液（周汝伦等，未发表）：
Co(NH2)230mg/L 维生素B10.2mg/L
NaNO330mg/L 维生素B120.0005mg/l
KH2PO48mg/L
FeC6H5O70.5mg/L 海水
培养等鞭藻9201品系使用。
⑧绿色巴夫藻培养液（陈椒芬，未发表）：
NaNO360g 维生素B1100mg
KH2PO44g 维生素B120.5mg
FeC6H5O70.5g
Na2SiO3·9H2O 5g 海水1m3
⑨异胶藻培养液Ⅰ（陈世杰，1979）：
（NH4）2SO410~20mg FeC6H5O70.1~0.2mg
KH2PO41~2mg 海水1000ml
⑩异胶藻培养液Ⅱ（陈世杰，1979）
人尿3~5ml 海水1000ml
大量培养使用。
2．淡水单胞藻培养液配方
（1）一般用培养液配方：
①朱氏10号培养液（朱树屏，1942）：
Ca(NO3)20.04g Na2SiO30.025g
K2HPO40.01~0.05g FeCl30.0008g
MgSO4·7H2O 0.025g
Na2CO30.02g 淡水1000ml
培养浮游藻类使用，以海水代替淡水可用于培养海产藻类。
②诺普（Knop）改良培养液[Pringsheim,E.G.(1949)]:
KNO3 1.0g MgSO4·7H2O 0.1g
Ca(NO3)20.1g FeCl30.001g
K2HPO40.2g 淡水1000ml
（2）绿藻培养液配方：
①水生4号培养液（黎尚豪等，1959）：
（NH4）2SO40.2g KCl 0.025g
0.03g FeSO4(1%溶液) 0.15ml 过磷酸钙
[Ca(H2PO4)2·H2O+2(CaSO4·H2O)]
MgSO4·7H2O 0.08g 土壤抽出液Ⅳ
0.5ml
（参考第60页）
NaHCO30.10g 淡水1000ml 培养斜生栅藻（Scenodesmus obliquus）和蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）使用。
②水生6号培养液（黎尚豪等，1959）：
NH2CONH20.133g FeSO4(1%溶液) 0.200ml H2PO40.33ml CaCl20.030g
0.500ml MgSO4·7H2O 0.100g 土壤抽出液Ⅳ
（参考第60页）
NaHCO30.100g
KCl 0.033g 淡水1000ml
培养种类同水生成号，使用水生6号培养液培养，藻细胞生长繁殖比使用水生成号迅速。
③布里斯托尔（Bristol）培养液[Bristol,B.M.(1920)]:
NaNO30.5g NaCl 0.05g
KH2PO40.5g FeCl3·6H2O 0.01g
MgSO4·7H2O 0.15g
CaCl20.05g 淡水1000ml
培养绿藻类使用。
（3）硅藻培养液配方：
①水生硅1号培养液（水生生物研究所藻类研究室藻类应用组[76]，1975）：
NH4NO3120mg Na2SiO3100mg
MgSO4·7H2O 70mg CaCl220mg
K2HPO440mg NaCl 10mg
KH2PO480mg FeC6H5O75mg
MnSO42mg 淡水1000ml
培养泉生偏缝藻（Nitzschia fonticola Grun.），椿状偏缝藻（Nitzschia palea Smith）,双尖菱板藻（Hantzschia amphioxys Grun.），梅尼小环藻（Cyclotellameneghiniana Kutz.）使用。
②水生硅2号培养液（水生生物研究所藻类研究室藻类应用组[76]，1975）：
NH2CONH2150mg NaHCO3100mg
50mg MnSO43mg 过磷酸钙
[Ca(H2PO4)2·H2O+2
（CaSO4·H2O
MgSO4·7H2O 50mg EDTA-Fe 1ml
KCl 30mg 土壤抽出液Ⅳ
4ml
（参考第60页）
Na2SiO3100mg 淡水1000ml
培养种类同水生硅1号，大量培养使用。
③福格（Fogg）培养液[Fogg,M.B.,(1956)]:
Ca(NO3)20.8g Na2SiO30.025g
K2HPO40.01g FeC6H5O70.0008g
MgSO4·7H2O 0.025g 土壤抽出液Ⅰ（参考第60页）20ml
Na2CO30.02g 纯水1000ml
培养舟形藻(Nauicula pelliculosa使用)。
（4）蓝藻培养液配方：
①B.G.M.培养液（Allen,M.B.）:
KNO3 2.02g K2HPO40.35g
MgSO4·7H2O 2.46g A8（参考第70页） 3.0ml
NaCl 2.30g
CaCl20.07g 纯水1000ml
培养一般蓝藻用。
②扎鲁克（Zarrouk）培养液（Pinnan Soong,1980）:
NaHCO316.8g CaCl2·2H2O 0.04g
K2HPO40.5g FeSO4·7H2O 0.01g
NaNO30.2g EDTA 0.08g
K2SO4 1.0g A51ml
NaCl 1.0g B61ml
MgSO4·7H2O 0.2g 淡水1000ml
培养螺旋藻最广泛使用的配方。
③CFTRI培养液（转引自何连金，1988）：
NaHCO3 4.5g MgSO40.2g
NaNO3 1.5g CaCl20.04g
K2HPO40.5g FeSO40.01g
K2SO4 1.0g
NaCl 1.0g 淡水1000ml
培养螺旋藻使用。
④M—Ssl培养液（转引自何连金，1988）：
NaHCO34g FeCl3(0.1%溶液) 0.2ml
NH2CONH20.25g
KH2PO40.05g 海水1000ml
室内小水体培养螺旋藻使用。
NaHCO32~4g FeCl3(0.1%溶液) 0.2ml
NH2CONH20.214g
KH2PO40.042g 海水1000ml
室外大面积培养螺旋藻使用。
3．微量元素溶液配方
（1）A5-B6微量元素溶液[Holm-Hansen,O.,Gerloff,G.C.,Skoog,F.,(1954)]:
A5B6
H3BO3 2.86g NH4VO3229.6mg
MnCl2·4H2O 1.81g Cr2k2(SO4)4·24H2O 960.2mhg
ZnSO4·7H2O 0.22g NiSO4·6H2O 447.8mg
CuSO4·5H2O 0.08g Co(NO3)2·6H2O 493.8mg
Na2MoO40.021g Na2WO4·2H2O 179.4mg
纯水1000ml Ti溶液20ml
H2SO41滴1/20mol/L H2SO41000ml
A6-B6微量元素溶液使用很广泛，A5单独使用的例子很多。钛（Ti）溶液配法：把736.6g 草酸钛，溶解于小量纯水中，加入氢氧化铵使成碱性，发生沉淀。用离心法将沉淀集中，用/20mol/L的硫酸20ml溶解。用量：第1000ml培养液加入A5、B6溶液各1ml。
（2）普罗瓦索利的P8微量元素溶液（Provasoli et al.,1957）:
羟乙基替乙二胺三醋酸CO(Cl) 1mg
脂钠3g Cu(Cl) 2mg
Fe(Cl) 200mg B(H3BO3) 200mg
Zn(Cl) 50mg Mo(MoO3) 50mg
单细胞藻类
、单细胞藻类 单细胞藻是海洋植物中结构最简单、但在海洋生态系统中最具重要意义的一群生物，它们是许多水生动物的直接饵料。而那些不是直接摄食单细胞藻类为生的动物，也大都是间接地以它们作饵料，经过一次或多次转换才成长起来的。据初步估算，自然界要生产出一公斤的鱼肉，约需数百公斤至上千公斤的单细胞藻类。因此，可以说：海域单细胞藻类的丰富程度是该海域渔业丰歉的一重要决定因素。当然，这里也应指出，如果某海域有机污染严重，造成水体富营养化，那么，在温、盐等环境条件适宜的情况下，可能会形成‘赤潮’(有关‘赤潮’的问题将在第五章海洋灾害加以叙述)。此外，有些单细胞藻类在研究海流与水团的动态方面有重要意义；有些种类可附着于大型海藻体表，成为藻类养殖的害藻；有些还附生于船底，能降低船的航速。 单细胞藻类在硅藻门、甲藻门、裸藻门、金藻门、黄藻门、蓝藻门、红藻门、绿藻门中都有它们的存在。其中，种类最多、数量最大的是硅藻门和甲藻门。 福建海域地处台湾海峡西部，是东海和南海的过渡区，常年受南海暖流和闽浙沿岸流的交错影响，况且还接纳许多河川输入的大量营养盐，水体肥沃，单细胞藻类非常丰富，调查记载的种类近千种，数量常年平均每立方米水体有单细胞藻类1340万个左右。近岸、港湾区的数量还要大得多，如：厦门西港区1987年调查时，年平均竟高达每立方米水体1.8亿个。 (一)硅藻门(Bacillariophyta) 硅藻为单细胞生活或借助胶质连成群体。细胞具有特殊的壳壁，壳壁主要成分是由果胶质和硅质组成。壳壁由两瓣套合，分为上、下壳，上壳稍大、下壳较小。壳面有各种花纹。根据花纹排列，分为中心纲和羽纹纲。福建省沿海(包括台湾海峡)共已记录了784种，其中，中心纲308种，羽纹纲476种。现将最主要属种简介如下： 1.中心纲(亦称辐射纲)(Centricae)
培养基制备的基本方法和注意事项
培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录 每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化 培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。 待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整 培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
各种培养基配方
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
培养基的制备程序
培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。 （一）配料 按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。 （二）溶化 将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕，补足失去的水分。 （三）矫正pH 1.pH测定 取与标准管同口径的试管（通常用华氏试管）3支，于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g／L的酚红0.25ml作为测定管，混匀；于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管。 2.pH的校正 若测定管过酸或过碱可用0.1mol／L氢氧化钠或0.1mol／L盐酸溶液矫正，直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混匀，比色后再加第2滴（有时仅加半滴）准确记录加入的量。 3.计算 设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol／L氢氧化钠0.15ml，现有培养基4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算：5∶4990＝0.15∶X X＝0.15×4990/5＝149.7（ml） 如将此0.1mol／L的氢氧化钠改用1mol／L的氢氧化钠时，则需14.9ml即可。 （四）过滤澄清 培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用，常用的过滤方法如下： 1.液体培养基 液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白（1000ml培养基用1个鸡蛋白）在100℃加热后保持60～70℃40～ 60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。 2.固体培养基
单细胞藻类
单细胞藻类之--微绿球藻 微绿球藻（Nannochloropsis oculata），或叫眼状微绿球藻。本属还有其它几种培养作为水产动物的活饵料的。在分类上属于绿藻门，绿藻属，四胞藻目，胶球藻科。 一、形态特 征：细胞为 球形，直径 为2—4微 米，单独或 集合，色素 体一个，淡 绿色，侧生， 仅占着周 围的一部 分，眼点圆 形，淡橘红 色。在活泼 生长的情 况下，色素 体颜色很 深，不容易 观察到眼点，在氮缺乏的培养中，色素体变淡，眼点明显。没有蛋白核。有淀粉粒1—3个，明显，侧生。细胞壁极薄，幼年细胞看不到，在分裂之前才变得明显。分裂进行时，细胞壁扩大，与细胞之间形成空隙。 二、繁殖方式：微绿球藻进行二分裂繁殖，细胞分裂成为2个子细胞，细胞分裂后，子细胞由母细胞的细胞壁裂开处脱出，子细胞附着在细胞壁上，互相连结成为一个松散的树枝状群体。 三、生态条件： 1、盐度：微绿球藻对盐度的适应范围很广，在盐度为4—36的范围内均能正常生长繁殖，并可保养在2—54的盐度范围内。江西省宜春高新技术专利产品开发中心提供光合细菌培养基配方技术。 2、温度：微绿球藻在10--36℃的温度范围内都能比较迅速的繁殖，最适温度为25--30℃。 3、光照：在适温条件下，最适光照强度为10000勒克斯。 4、酸碱度：适宜的酸碱度范围为：PH7.5—8.5。 微绿球藻在有机质多，特别是氮肥多，氨盐丰富的水体中，生长特别繁茂。 单细胞藻类之--塔胞藻 塔胞藻（Pyramimonas sp.）分类上属于绿藻门，绿藻纲，团藻目，衣藻科，塔胞藻属。可以用于海湾扇贝幼体的饵料。 一、形态特征：单细胞，不具细胞壁，多数呈梨形、侧卵形，少数呈半球形。细胞长12—16
细胞培养基及其配制方法
细胞培养基及其配制方 法 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
D M E M(A)细胞培养基（粉末型）成分
●所用器皿应严格消毒。 ●配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 ●液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证 无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 DMEM各种成分都有什么作用 一般的基础培养基包括四大类物质：无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物。 （1）无机盐：对调节细胞渗透压、某些酶的活性及溶液的酸碱度都是必须的。 （2）氨基酸：缬氨酸、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精氨酸、胱氨酸(L型)都是细胞用以合成蛋白质的必需氨基酸，不能由其他氨基酸或糖类转化合成。除此之外，还需要谷氨酰胺(glutamine)。谷氨酰胺具有特殊的作用，对细胞的培养特别重要，能促进各种氨基酸进入细胞膜；它所含的氮是核酸中嘌呤和嘧啶的来源，还是合成—磷酸腺苷、二磷酸腺甘和三磷酸腺苷的原料。细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，谷氨酰胺缺乏可导致细胞生长不良甚至死亡。在配制各种培养液中都应补加一定量的谷氨酰胺。值得注意的是：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，故4℃下放置1周可分解50%，使用中最好单独配制，置-20℃冰箱中保存，用前加入培养液中。 （3）维生素：是维持细胞生长的一种生物活性物质，在细胞中大多形成酶的辅基或辅酶，对细胞代谢有重大影响。 （4）碳水化合物：是细胞生命的能量来源，有的是合成蛋白质和核酸的成分。体外培养动物细胞时，几乎所有培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。 （5）葡萄糖和谷胺酰胺：体外培养条件下，葡萄糖主要经糖酵解降解，产生过量的乳酸。减少乳酸生产最常用的方法是限制培养基中葡萄糖的含量，但葡萄糖含量过低可造
几种培养基的配方
一. 土壤样品的采集 第一种: 选择植被群落具有代表性的固定样方,除去地面植被和地表覆盖物,每样方采用土壤剖面法和多点混合取样法采样,将土样混匀,用四分法弃去多余样品,取500g装入灭菌信封, 带回实验室后立即进行土壤微生物分离（4℃保存）、计数。 第二种: 在小区内机械抽取 6 株样木，距树干基部0.5 m 呈梅花形分布挖取根系周围0～20 cm、20～40 cm 和40～60 cm 土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。同时采集各层直径小于0.2～0.5 cm 细根上粘附的土壤，分层充分混合作为根际土壤。供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带入实验室。 二. 三大类土壤微生物分离与数量测定 1. 细菌的分离与数量测定 (1)以平板表面涂抹法计数。称取土壤鲜样10g在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液，取稀释度为10-3，10-4，10-5，10-6，10-7土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复，恒温(28 ℃) 培养3d，选取每皿菌落数为15-150的1个稀释度统计菌落数，按下列公式计算细菌数量： 菌数(cfu/ g) = （菌落平均数×稀释倍数）÷干土% （Ⅰ） 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，配方如下： 牛肉膏3.0 g 琼脂18 g 蛋白胨5.0 g 蒸馏水1000mL pH7.0 —7.2 2. 真菌的分离与数量测定 以平板表面涂抹法计数。即称取土壤鲜样10 g ,在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液,取稀释度为10-2，10-3，10-4的土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的马丁- 孟加拉红培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复,恒温(25 ℃) 培养5～7 d，选取每皿菌落数为15～150 的1个稀释度统计菌落数计算真菌数量公式同公式（Ⅰ）。 马丁- 孟加拉红培养基，配方如下： 葡萄糖10.0 g MgSO4.7H2O 1.0 g KH2PO41.0 g 琼脂15 g 蛋白胨 5.0 g 孟加拉红(Rose Bangal) 每升加1%溶液0.33mL 1% 链霉素3 mL 蒸馏水1000 mL pH自然 临用前再加入1% 链霉素3 mL
培养基的配制及使用记录
培养基的配制及使用记录 序号操作指导操作参数记录数据签名 1 检查天平是否在校验有效期 内；检查天平是否正常、完好； 使用前对天平进行调零。 天平编号 是否在校验有效期内 是否正常、完好 是否调零 口是/ 口否 口是/ 口否 口是/ 口否 操作者 ______ 2 按右表配方比例，在天平上分 别称取培养基于洁净的烧杯 中，并记录称重与批号，将纯 化水加入上述烧杯中并搅 拌均匀，再定容至规定体积。 名称比例称重批号操作者 ______ 复核者 ______ 3 平板培养基的配制： 将上述定容好的培养基，分装 于500ml规格的三角瓶中或者 小试管中，塞上硅胶塞，用牛 皮纸包扎紧。 配制量ml 操作者 ______ 复核者 ______ 4 将包扎好的培养基，温度 121～125℃湿热灭菌15--20 分钟。待压力和温度下降后取 出，适当冷却。 灭菌锅编号 设定温度 灭菌时间 ℃ 操作者 _______ 5 进无菌室时，按要求更换上无 菌服，更衣穿戴完毕。 着装是否符合规范口是/ 口否操作者 ______ 6 将上述已灭菌的培养基经传递 窗转移至无菌室。在净化操作 台上，无菌操作下倒平板 （15--20ml/90mm皿）。 倒平皿数 试管斜面 副 个 操作者 ______ 7 空白培养实验 将已经冷却的培养基放入培养 箱中空白培养48小时。检测是 否无菌。 培养箱编号 培养箱温度 培养时间 是否无菌 ℃ 口是/ 口否 操作者 ______
8 废弃培养基及培养物在锅内加 热煮沸灭活，收集于废液桶中 定期处理。 煮沸、灭活口是/ 口否 操作者 _______ 复核者 _______ 附：培养基使用记录 使用日期使用去处使用数量(副) 使用者
细胞培养基种类与基本成分
细胞培养基种类与基本成分 是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下： 1、BME细胞培养基 基础Eagle 培养基 (Basal Medium Eagle)，1955 年Eagle 设计，BSS+ 12 种氨基酸+谷氨酰胺+ 8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。 2、MEM细胞培养基 又称低限量Eagle 培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959 年在Eagle's基础培养基 (BME )上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 3、DMEM细胞培养基 DMEM 是由Dulbecco 改良的Eagle 培养基, 起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L, 这就是大家常说的低糖和高糖了。 低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 4、IMDM细胞培养基 Guilber 和Iscove 将Dulbecco' Medium 改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞 和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES o并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM 还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS 刺激的
培养基的配制方法
实验一培养基的配制 生科三班李林40608143 2008.9.16 周二上午 一.实验目的： 1.明确配制微生物培养基的原理； 2.掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤； 3.掌握是湿热灭菌法的原理和操作。 二.实验原理： 膏蛋白胨培养基是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经过蛋白酶水解后，中间产物，含有胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，再加入的NaCl为细菌所需的无机盐，加入的自来水可提供微量元素。 配置好的培养基用湿热灭菌法进行灭菌。 三.材料和仪器： 1.试剂：牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，1mol/L NaOH,1mol/L HCl 2.器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，沙漏，试管，玻棒等 3.其他：PH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，沙绳，灭菌锅等。 四.实验步骤： 1.配方及配量：牛肉膏0.9g蛋白胨3g，氯化钠 1.5g，琼脂条 4.5g,水 300mL,PH7.2~7.4。 2.称取药品：按培养基配方及配量分别称取各药品，取少量水于烧杯中，将各 培养基成分（除琼脂）逐一加入水中待溶。 3.加热溶解：将搪瓷杯放到电热炉上，用文火加热，病不断搅拌，促使各药品 快速溶解，然后补充水分至所需培养基的量。 4.调节PH:初配好的牛肉膏蛋白胨，培养液是微酸性的，故需用1mol/L NaOH 调PH7.2~7.4。 5.加琼脂：向调好的培养基中加入琼脂条。 6.加棉塞：用8层纱布纸杯成通气塞，灭菌前将方形纱布盖在瓶口，将其中间 部位用手指塞入瓶口内，再将四角折叠成塞子状后加纸套包扎好，然后灭菌。 7.包扎：在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放 中防止尘埃等污染。 8.灭菌：将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，于121℃灭菌20min. 五.实验结果： 按照实验方法配制的培养基透明但有些发黄，说明说有物质均完全溶解，基本符合实验要求，颜色有些发黄可能是因为加入牛肉膏，也可能是因为加入牛肉膏的时候所用火温较高，使牛肉膏粘底了，稍有烧糊或烧焦了，致使培养基较黄。一周以后观察, 配制的无菌牛肉膏蛋白胨固体培养基中,无菌落生成,说明配制的培养基符合要求. 六.思考题：配制牛肉膏蛋白胨斜面培养基有哪些操作步骤，哪几步易出差错?如何防止 答：配方及配量，称取药品，加热溶解，调PH，加琼脂，加棉塞，包扎，灭菌。易出差错的步骤： （1）称药品的牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖，瓶盖切莫张冠李戴，
146种常见培养基的配方
146种常用培养基配方 THE COMPOSITION OF MEDIA 培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml
培养基配制标准操作规程【新版】
培养基配制标准操作规程 1.0目的 本规程规范了微生物实验室培养基的配制操作规程。 2.0范围 本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基 3.0职责 微生物检验员对本标准的实施负责，品管部经理负责监督。 4.0内容 4.1培养基定义 指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。通常指干粉培养基和配制好的琼脂、肉汤、稀释液等等。
4.2培养基制备前准备工作 制备培养基所用的玻璃器皿，如吸管、试管、三角瓶和平皿等，新的玻璃器皿(首次使用)和再次使用的玻璃器皿分别按各自批准的规程洗涤、干燥。 4.3培养基的制备 4.3.1检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制记录》， 配制记录上注明所用培养基的批号;盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标 签》，标签应注明:名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。 4.3.2配制好的培养基依据说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。 4.3.3必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值
的测定以确保符合药典及生产厂家 的规定。 4.3.4倒平板用培养基温度应控制在50度。 4.3. 5.培养基的制备和使用应由专人进行。 4.3.6.培养基的使用尽量做到现配现用，剩余的培养基应放在冰箱中保存。 4.4培养基的保存 4.4.1环境条件:应在洁净的普通冰箱内冷藏保存，温度控制在2-25度。否则，融化后常 因理化条件改变而不能再用。 4.4.2按时检查培养基的外观，如失水、沉淀、过期等异常情况应及时处理。
4.5培养基配制清单 5.0附件 《培养基配制记录》《灭菌记录》 6.0修改历史
培养基配制的基本过程
培养基配制的基本过程 1.配制溶液 向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。 配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。 2.调节pH值 用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。 3.过滤 用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。 4.分装 已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。 分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。 装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。 5.加棉塞 分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。 6.制作斜面培养基和平板培养基 培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。 (1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。 (2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。
16种培养基配方
1．营养肉汤 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH7.4。 制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，121℃高压灭菌15min。 2．营养琼脂培养基 成分：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000mL，pH7.2。 制法：将除琼脂外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，分装于烧瓶内，121℃，15min高压灭菌备用。 3．MRS培养基 成分：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉5g，K2HPO4 2g，柠檬酸二铵2g，乙酸钠5g，葡萄 （琼脂15~20g），蒸馏水1000mL。糖20g，吐温80 1mL，MgSO4 .7H2O 0.58g，MnSO4 4H2O 0.25g， 制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.2~6.4，分装于三角瓶中，121℃,灭菌15min。 4．脱脂乳培养基 成分：牛奶，蒸馏水。 制法：将适量的牛奶加热煮沸20~30min，过夜冷却，脂肪即可上浮。除去上层乳脂即得脱脂乳。将脱脂乳盛在试管及三角瓶中，封口后置于灭菌锅中在108℃条件下蒸汽灭菌10~15min，即得脱脂乳培养基。 5．培养基A 成分：蛋白胨10.0g，酵母提取物1.0g，葡萄糖10.0g，NaCL5.0g，琼脂15.0g，水1000mL。制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至7.0~7.2，分装于三角瓶中，121℃，灭菌15min。 6．PTYG培养基 成分：胰胨Tryptone（Oxoid）5g，大豆蛋白胨5g，酵母粉（Oxoid）10g，葡萄糖10g，吐温80 0 1mL，琼脂15~20g，L-半胱氨酸盐酸盐0.05g，盐溶液4mL。 制法：将以上成分加入到蒸馏水中，加热使完全溶解，调pH至6.8~7.0，分装于三角瓶中，115℃灭菌30min。 盐溶液制备：无水氯化钙0.2g，K2HPO4 1.0g，KH2PO4 1.0g，MgSO4 。7H2O 0.48g，NaCO3
培养基配制及适用性检查标准操作规程
目的： 建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。范围： 适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。 依据： 《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部 职责： 1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。 2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。 内容 1 培养基的申购 根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。
2 培养基的验收 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 3 培养基的贮藏 未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。 4 培养基的配制 培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。 培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01）培养基配制方法 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每
培养基的制备实验报告
培养基的制备实验报告 篇一：《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告 《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告 实验目的 1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法和原理。 2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。 实验原理 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中．微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌．如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。 高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内
的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。 由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0 g NaCl 5.0g 水1000ml pH7.4—7.6 实验仪器与药品 1.溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／L NaOH、1mol／L HCl。 2.仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH 5.5-9.0）、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。
常见食用菌液体菌种培养基配方大全
常见食用菌液体菌种培养基配方大全 大家对食用菌的培养基配方都非常熟悉，但是却没有将培养基配方统一归纳出来，在此跟大家一起分享常见的10种食用菌液体菌种培养基配方。 (1)平菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸30克，蛋白胨1.5克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.75克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (2)金针菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (3)白灵菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (4)香菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (5)杏鲍菇培养基配方
马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (6)鸡腿菇培养基配方 马铃薯100克，红糖12克，葡萄糖12克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (7)黑木耳培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸40克，蛋白胨2.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (8)猴头菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸45克，蛋白胨2.5克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然; (9)双孢菇培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖10克，麦麸50克，蛋白胨2.0克，酵母膏1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH 值自然; (10)灰树花培养基配方 马铃薯100克，红糖15克，葡萄糖15克，麦麸45克，蛋白胨3.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁1.0克，维生素B11片，聚氧丙稀甘油0.3毫升，pH值自然;
培养基配制及适用性检查标准操作规程
目得: 建立培养基配制及适用性检查得标准操作规程,规范实验人员得操作流程。 范围: 适用于微生物检验人员对培养基得规范管理。 依据: 《药品生产质量管理规范(20１0年修订）》、《中华人民共与国药典》2015年版?第四部 职责: １、微生物检验员:负责实验室所需求得培养基管理工作,使日常检验可以顺利进行。 ２、微生物检验主管:负责对日常配制培养基得规范操作进行监督。 内容 １培养基得申购 根据检验项目、工作量与工作进度得需求,提前一个月进行所需得培养基申购。申购时需指定培养基供应商,必要时进行供应商审计。 2 培养基得验收 ２、1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装就就是否完整、产品就就是否在有效期内。 2、2 验收合格后,登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SＭP-10－QC-０
09-02(00))。 ３培养基得贮藏 3、１未开封得脱水培养基贮存于阴凉室,使培养基处于低温、干燥、与避光条件下。已开封得脱水培养基应盖紧,贮存于阴凉库。 3、2灭菌好得培养基应进行预培养７2h检查无菌后，置4~８℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为７天。 ４培养基得配制 4、1培养基得配制与使用应填写《培养基配制及使用记录》(附记录文件编号：ＳMP-10-QＣ-0０9-０2(00））。 4、2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如２011年１月1日配制得培养基,培养基干粉批号0０0０00,配制批号为:０00０00－１10101。配制好得培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-１0－ＱC－009-０3)。(注:同一天同一培养基配置多次得,在原批号后加“-”加“数字”表示,如00０0００－1１０101-０１) ４、3培养基配制方法 4、3、1 使用商品化脱水合成培养基时,应严格按照厂商提供得使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件与操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时,应按照配方准确配制,并记录相关信息如:培养基名称与类型及试剂级别,每个成分物质含量、制造商、批号,pH值,培养基体积／分装体积,灭菌条件(灭菌方式、温度及时间)，配制日期、人员等,以便溯源。 4、３、2 水、容器具要求:培养基配制均采用纯化水,特殊说明时采用去离子水与蒸馏水。培养基配制所用容器与配套器具应洁净。对热敏感得培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌,以保证培养基得无菌性。 4、３、3 称量与分装: 快速称量所需量得脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质得培养基粉末)。以免吸潮。先加入适量得水,充分混合。注意避免培养基结块,然后加水至所需得量。根据说明书要求选择就就是否加热。分装体积不超过容器体积得2/３。配制斜面等含琼脂得培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。 4、4 pH 值得测定与调整 pＨ值采用pH计进行检测,温度25±２℃。取配后培养基10ml进行灭前ｐH测定。另取２0ml于５０ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至25±2℃检测灭后PＨ。灭菌前后pH应按下表进行控制。灭菌前可使用浓度约为40g/L(约1mｏl/L）得氢氧化
常用培养基概念及配方
PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。 MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO417 mg／L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／L+FeC13·6H2O
PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法 一、目的要求 1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。 2．学习并掌握棉塞的制作方法。 二、培养基的配制原理 培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训 和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不 同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。 三、实训材料和用具 琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布， 四、操作方法与步骤 (一) 培养基的配制 PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。 (1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小 块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁 热在量杯上过滤，滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。 (2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放 在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再 补充水分至所需量。 (3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用 三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超 过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。 (4) 加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试 管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。 (5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防 止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 (二) 棉塞的制作 棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基