不同灭菌条件下植物激素对植物组培快繁的影响

甘蔗组培快繁技术实验报告

甘蔗组培快繁技术 生物08本尚丽萍 34号组员：陈洁程燕娜 甘蔗是禾本科甘蔗属植物，是世界上重要的糖料作物，也是中国蔗糖工业的重要支柱。在甘蔗栽培上，通常是以蔗茎节上的腋芽繁殖，或在每年砍伐后，利用残留在土中的茎基上的腋芽作宿根繁殖。茎段繁殖速度慢，用种量大，而且种茎在远途运输中颇为不便，每年秋植蔗种来源难以解决，这对快速繁殖良种甘蔗以满足甘蔗生产的需要极为不利，因此，采用组织培养的方法，规模化生产遗传性状整齐一致的种苗供生产上应用，现将甘蔗组培快繁技术介绍如下。 1材料与方法 1.1材料 甘蔗腋芽及茎尖 1.2方法 1.2.1 材料处理 将所取外植体腋芽（带少量茎节组织）、茎尖（带部分新叶包裹）用洗衣粉水洗净，清水冲洗半小 液处理15分钟，用无菌蒸时，在消过毒的接种间超净工作台上用75%酒精浸泡30秒，再用0.1%HgCl 2 馏水冲洗4-5次后待接种。 1.2.2 培养基 诱导外植体培养基：MS+BA 1mg/L+活性炭1g/L+2%蔗糖+琼脂8g/L。 诱导腋芽增殖培养基：MS+BA 5mg/L+活性炭0.5g/L+20g/L蔗糖；MS+BA 10mg/l+活性炭0.5g/L+2%蔗糖。 诱导生根增殖培养基：1/2MS+NAA 2mg/L+IBA0.4mg/L+多效唑2mg/L。 1.2.3培养过程 将处理好的材料接入诱导外植体培养基中进行培养，光照时间10-12小时/天，光照强度（自然散射或荧光灯照明）1500-2000lux，培养温度25-30℃。培养3-5天后，若培养基出现混浊，说明已污染，应立即清除。培养10-15天，芽转绿将边缘褐色部分剥除转入同样培养基中培养，芽长到2-3cm时，转入诱导腋芽增殖培养基中，如此重复进行，直到所需数量后转入诱导生根培养基中进行生根培养，根长至3-5cm后进入炼苗阶段。 将幼苗不开口移到自然光照下锻炼2-3d，让幼苗接受强光的照射，然后再开口练苗1-2d。从试管中取出发根的幼苗，用自来水洗掉根部粘着的培养基。但要轻轻除去，应避免造成伤根。栽植时用一个筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水。栽后轻浇薄水。再将苗移入高湿度的环境中。保证空气湿度达90%以上。 2关键技术

《植物组织培养》课程标准

《植物组织培养》课程标准 课程名称：《园林植物植物组织培养》 课程性质：职业能力必修课 学分：3分 计划学时：45 适用专业：园艺技术、园林技术、种子生产与经营专业 1.前言 1.1课程定位 《植物组织培养技术》是一门园艺技术、园林技术等专业的基础课，也是一门实践性很强的课程。通过本门课程学习，主要培养学生将来能从事相关工作，如能够独立设计组培方案、具备培养基制备、进行无菌操作、快繁、控制污染、褐化、玻璃化等不良现象发生和分析解决问题的能力，还能够独立从事植物组织培养经营管理的工作。该课程以化学、植物学、植物生理学、遗传学等学科为基础建立起来的，为适应时代发展，结合当前高职教育改革实际，压缩理论课时，精选教学内容，增加单位时间内的知识传授量，增加实验实训课的课时。培养技能型、应用型人才，使课程教学朝着高职院校校企合作的办学模式，工学结合的人才培养模式，教学做合一的教学模式方向发展。 1.2设计思路 本课程理论课时48学时。根据植物组织培养岗位对从业人员知识、能力和素质要求，以“应用”为主旨和特征，构建课程内容模块体系。课程内容打破传统的“老三段”模式，打破学科特性，理论知识要求“必需、够用”，实践教学突出能力培养，注重知识的应用性、实践性和针对性，并以此来构建组培课结构和内容体系。在实践教学上，以“项目教学法”为主导，强化实训项目的实用性。本课程一般按照“实验室设计与培养条件要求―培养基制备―无菌操作技术―器官培养―个体植物组织培养与园艺植物栽培”的顺序进行。 2．课程目标 2.1总体目标 通过理论学习和实践锻炼，掌握植物组织培养的基本理论，能识别常见的污染、褐变、玻璃化等现象，掌握组培培养方案设计程序和器官培养要求，掌握组培各流程环节与技术要求。通过参观组培实验室，掌握组培实验室的场地选择和厂房设计的原理和方法；通过配制母液、培养基的制作、使用无菌操作技术，能熟练掌握培养基母液和激素母液的配制，并且能够独立完成培养基的制作和高压灭菌锅的使用，还要掌握不通植物材料无菌接种技术。通过个体植物组织培养的

植物组织培养技术

植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖

《植物组织培养技术》组培技术研发

《植物组织培养技术》组培技术研发 模块介绍 本模块针对组培研发岗位的工作职责与任职要求，编排了试验方案设计和数据调查与分析二个实训项目，主要内容包括组培的基本理论、提高组培苗遗传稳定性的措施、组培试验方案的制订等，重点阐述了组培快繁的程序与类型、组培研究的技术路线与试验设计方法、组培快繁的常见问题、组培数据调查与分析方法等。在理论学习的同时，开展项目实践活动，培养学生会设计组培试验、撰写试验方案、编制组培试验观察表和技术指标统计分析，具备组培研发工所要求的理论知识、技能水平和相应的职业素质。模块结构设计见表1。 表1 模块结构设计 项目1 组培试验方案设计 一、学习目标 （一）终极目标 能够根据培养对象和培养目的科学设计试验方案。 （二）促成目标 1.熟悉信息搜集途径和文献检索方法，提高信息搜集与处理能力； 2.清楚组培研究的内容与技术路线、试验方案的体例与撰写要求； 3.熟悉组培基本理论，清楚组培快繁程序、类型与试验设计方法； 4.熟悉组培苗遗传稳定的影响因素与提高措施； 5.培养团队精神、创新意识和科学思维方法。

二、学习内容 1.组培基本理论； 2.组培快繁程序； 3.组培快繁类型与再生途径； 4.提高组培苗遗传稳定性的措施； 5.信息搜集途径与方法； 6．组培研究内容（影响因素）； 7.组培研究的技术路线； 8.组培试验设计方法； 9.组培试验方案格式。 三、知识点 1.植物细胞全能性理论（植物细胞全能性理论、根芽激素理论）； 2.组培快繁程序（初代培养、继代培养、生根培养）； 3.组培快繁类型（无菌短枝型、丛生芽增殖型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎发生型）； 4.提高组培苗遗传稳定性的措施； 5.信息搜集途径与方法； 6．组培研究内容（影响因素）； 7.组培研究的技术路线； 8.组培试验设计方法（单因子试验设计、双因子试验设计、正交试验设计）； 9.组培试验方案格式。 四、技能点 1.组培信息搜集与处理能力； 2.组培试验方案设计能力。 五、教学重点 1.细胞全能性理论； 2.组培快繁程序与快繁类型（植株再生途径）； 3.组培研究的内容与技术路线；

花卉组培快繁技术及产业化运用

花卉组培快繁技术及产业化运用 一、组培快繁技术 组织培养的依据是植物细胞的全能性，即指具有完整细胞核的植物细胞，都具有形成完整植株所必须的全部遗传信息，从而具备发展成完整植株的能力，在适宜的培养条件下任何一个细胞都可以发育成一个新的个体。组织培养是在无菌条件下利用人工培养基培养植物的细胞、组织、器官等外植体，使其形成完整小植株的繁殖方法，根、茎、叶、花器官，甚至细胞及原生质体等均可作为组培的材料。 1.1 花卉组培概况 组培技术自20世纪60年代开始运用于生产以来，已经在农作物的脱毒、快繁、育种等各个方面取得了令人瞩目的成绩，我国20世纪70年嗲以后才开始快繁技术的研究，20世纪80年代以后开始运用。兰花是最早运用也是最成功花卉，通过原球茎的增殖，一个茎尖外植体一年可以繁殖种苗几十万株，形成了当时的“兰花工业”。之后此技术开始运用于月季、香石竹、菊花、唐菖蒲、非洲菊等许多花卉作物的种苗生产，此外在脱毒培养、种质保存、新品种培育等方面也开展了较多的工作。利用组培快繁技术能短时、高效的提供性状一致的优质种源这一特性，在加速选育种过程中获得的性状优良的品种、品系及生产过程中出现的芽变、名、优、新品种及有利用价值的野生花卉的迅速推广及运用上起到了积极的推动作用，各科研院校和企业着力于花卉的组培技术研究及生产开发，形成了一批集科研和开发于一体的大型花卉种苗企业，就云南来讲，有年产200万株以上组培室8-10家。对培养基、环境因子的影响进行了深入研究，探讨了玻璃化、畸形、黄化、变异的形成机理和防治措施，种苗快繁是组织培养技术在生产中运用最为广泛的一项技术，近几年在花卉种苗工厂化生产中广泛运用，对推动花卉产业的发展起到了积极的促进作用。 1.2 组培程序 1.2.1材料选择 首先在引种、试种及市场调查的基础上，选适栽的优良种品种，并在其中挑选花色纯正、健壮、无病虫害的优良单株作为取材母株，然后根据其组培特性取合适的部位作为外植体。 1.2.2材料消毒 将材料在洗涤剂溶液中清洗干净后，在0.1%-0.2%氯化汞中消毒10-20min，再在0.1%-0.2%次氯酸钠溶液中浸泡10min，用无菌水漂洗3次，在整个消毒过程中，要不断的摇动容器器，使其能够均匀全面的消毒。灭军剂种类和浓度是决定进种成功的关键。 1.2.3生长和分化 将外植体接种于含有各种营养物质和激素的培养基中，MS培养基是运用最为广泛和有效的培养基，它适于多数花卉作物组织培养，生长素和细胞分裂素的种类和浓度因花卉种类和品种以及诱导、增殖、生根等不同阶段而有所不同，经过愈伤组织和不定芽的诱导和分化及丛芽增添制，形成许多芽丛，最后将达到生根

植物无糖组培快繁技术

植物无糖组培快繁技术 一、无糖组培技术原理 无糖组培快繁技术是由日本千叶大学的古在丰树教授上世纪八十年代末发明。它是一种全新的植物组织培养技术，是环境控制技术和组织培养技术的有机结合。它以CO2代替糖作为植物体的碳源，利用工程技术手段调节组培微环境的空气、光照、温度、湿度等影响因子，促进植物光合作用，使组培植物由兼养型转变为自养型，从而促进植物的生长发育。 经大量实验研究证明，该项研究成果已成为世界领先技术。目前，中国、美国、英国、韩国等国家已将该项技术应用于种苗工业化生产中。该技术于1997年由国家外国专家局和昆明市科技局委托昆明市环境科学研究所从日本引进。 二、无糖组培技术优势 由于植物无糖组培以CO2代替糖作为植物体的碳源，对植物无糖组培微繁殖中的容器换气次数、光照强度、CO2浓度、培养基质、植物生长调节剂进行调节，并通过监测反馈结合植株生长特性建立符合植株生长要求的稳定供气系统和温度调控系统，从而解决了传统组织培养中存在的污染率高、植物生长发育不良、生长迟缓、生理功能紊乱、玻璃苗、畸形苗多等问题。据相关资料报道，无糖组培快繁技术与传统的植物组织培养技术相比，显著提高苗的质量和产苗率，可缩短培养周期，种苗生产综合成本降低。经大量实验研究证明，该项

研究成果已成为世界领先技术。 无糖组培生产工艺简单，流程缩短，技术和设备的集成度提高，降低了人工操作强度，更易于在规模化生产上推广应用。 三、无糖组培技术国内外研究进展 无糖组培快繁技术通过多年的试验研究和生产示范，在引进消化吸收国外先进技术的基础上，结合国情，昆明市环境科学研究所研制开发了无糖培养微繁殖生产的配套设施，获得三项专利。 目前，该项技术已初步应用于非洲菊、彩色马蹄莲、灯盏花、甘薯、葡萄、满天星等植物并获得成功。上述研究结果表明，无糖组培技术培育出的苗具有抽叶多、植株健壮、节间距短、根系发达、干物质积累多、光合自养能力强等优良的生物学性状。美国、韩国、英国、日本等国家已将该项技术应用于生产，并显示出了巨大的优势和良好的效果。 无糖组培快繁技术可解决传统组织培养中存在的诸多问题，显著提高种苗质量，缩短培养周期，提高产苗率，降低生产成本。但目前，该项技术在药用植物方面的应用研究，除云南农大王荔课题组报道外尚未见其它报道。

园林植物快繁技术试卷

园林植物快繁技术（2007.9） 一、单项选择题（本大题共17小题，每小题1分，共17分） 每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，请将其代码填写在题后的括号内。错选、多选或未选均无分。 1、将培养体转移到新的培养基的过程，称为 A. 初代培养 B.继代培养 C.固体培养 D.平板培养 2、固体培养基中，常加入的凝固剂是 A.琼脂 B.活性炭 C.蔗糖 D.抗生素 3、花药和花粉培养时，对多数植物而言，花粉最容易诱导成功时期为 A.单核中期至单核晚期 B.双核期至三核期 C.三核期 D.减数分裂前期至中期 4、1960年，在快速繁殖和脱病毒上有重要贡献的法国人是 A. Murashige B. Cocking C. Morel D. Haberlandt 5、对外植表面灭菌时，较难从外植体上去除的消毒剂是 A.次氯酸钾 B.升汞 C.乙醇 D.过氧化氢 6、花药培养中，染色体加倍常用的诱变剂是 A. KT B. 蔗糖 C.聚乙二醇 D.秋水仙素 7、植物组织培养的理论基础是 A.植物细胞全能性 B.植物细胞学 C.细胞学说 D.植物生理学 8、利用母液配制MS培养基1升时，需吸取100X微量元素母液、称取0.7%琼脂的量 分别为 A.5ml;7.0g B.10ml;7.0g C10ml;0.7g D.5ml;0.7g 9、对于热不稳定物质，如IAA，常采用灭菌方式为 A.表面消毒 B.高压蒸汽灭菌 C.干热灭菌 D.过滤灭菌 10、细胞分裂素的主要作用是 A.促进细胞分裂和分化 B.促进细胞伸长和分裂 C.促进脱落和衰老 D.加速细胞的伸长生长 11、花粉培养时，小孢子的第一次分裂从不均等分裂变为均等分裂，分裂后形成两个大 小、形态和染色深浅相同的细胞，而后再继续分裂发育为花粉胚，该雄核发育途 径是 A.营养细胞发育途径 B.营养细胞和生殖细胞同时发育类型 C.生殖细胞发育类型 D.花粉均等分裂途径 12、植物无糖组织培养中，植物体的碳源是 A.蔗糖 B.氨基酸 C.CO2 D.活性炭 13、悬浮培养时，细胞数目扩增生长曲线呈 A.Z形 B.S形 C.L形 D.W形 14、配制NAA母液时，需先用下列哪种溶液溶解，再进行定容？ A.蒸馏水 B.乙醇 C.盐酸 D.丙酮 15、培养基的湿热灭菌时，一般灭菌的温度是 A.75摄氏度 B.100摄氏度 C.121摄氏度 D.160摄氏度 16、植物组织培养实验室中，接种室最常用的装置是 A.摇床 B.电子平台 C.高压蒸汽灭菌锅 D.超净工作台

华南紫萁组培快繁途径研究

2019年第14期现代园艺 华南紫萁（），又名贯众、大凤尾蕨，真蕨目紫萁科紫萁属蕨类植物，原产于亚热带湿润地区，常野生于山地、草丛或溪边。该种是薄囊蕨类中最原始的类群，也是现存厚囊蕨纲和薄囊蕨纲过渡的少数种类之一[1]。植株高1~2m，树形美观、姿态优雅、终冬不凋，可供庭园、绿化带栽植或室内盆栽观赏，在植物造景和生态绿化中的作用日益凸显。其嫩苗、根茎、叶柄髓部还可入药，具有清热解毒、止血生肌、健脾利湿、舒筋活络等功效。 华南紫萁普遍采用分株和孢子繁殖进行人工繁育，对环境条件要求高，且繁殖周期长，受季节限制，不能满足日益增长的市场需求。李杨介绍并提出蕨类组培存在的问题[2]；葛佳等以扇蕨茎尖为外植体，通过绿球体（GGB）途径获得了再生植株[3]；王淼等研究了不同培养基和激素配比对东北蕨菜组培快繁的影响[4]。本研究旨在探索出适宜华南紫萁离体诱导的快繁方法，为促进其高频、稳定、产业化生产提供参考依据，对缓解野生资源压力，满足市场需求，丰富生态内涵具有重要意义。 1外植体选择及预处理 以徐州生物工程职业技术学院琴湖基地成功引种的健康华南紫萁种苗为试验材料，采集带有幼孢子囊群，未完全展开的叶片作外植体。用软毛刷轻轻去除外植体表面污垢，流水冲洗30min后，转入75%乙醇浸泡20s，0.1%氯化汞振荡清洗4min，无菌水冲洗5~7次，得华南紫萁无菌幼叶孢子囊外植体。 2GGB诱导培养 将外植体首尾切除，剪成2cm小段，按照极性方向接种到B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA培养基中，培养基添加30g/L蔗糖和7.5g/L琼脂，每瓶1个外植体，共接种60瓶，置于光照度2000~3000Lx，14h/d，温度23~27℃，湿度75%~85%的环境下培养。10d后观察发现，培养基表面有许多散落下来的绿色小孢子，其渐渐膨大，从基部产生不规则的突起，形成绿色球状体（GGB）。培养30d，GGB诱导率可达66.67%。 3GGB的增殖与分化培养 将诱导出的GGB分割成直径为3~5mm的绿球体小块，重新接种到B5+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA培养基中继续培养。培养30d后发现，GGB增殖膨大明显，平均直径为2.15cm，增殖率达79.8%，但是未见有不定芽分化现象产生。将增殖后的GGB接种至1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭分化培养基中，培养过程中观察到有不定芽的分化，60d产生的平均芽数可达35个，分化率达58.3%，且叶平展健壮，生长速度较快。 4壮苗生根培养 当新生不定芽长到约2cm，带2~3片健康平展叶片时，切下单芽接种至生根培养基中进行不定根诱导。生根培养基为1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭。30d更换1次培养基，60d后观察有数条不定根产生，生长状况良好，生根率达100%，平均根数达3.5条。若将NAA浓度继续提高，不定芽基部有愈伤化趋势，生根的小苗长势缓慢、叶片发黄、状态不佳。 5炼苗移栽 将高3~4cm，具3~4根健康根系的组培苗置于温度为20~25℃、光强2000Lx，12h/d的条件下进行驯化炼苗。之后小心取出，去除根部培养基，用质量分数为0.125%多菌灵溶液清洗根部，种植于泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，用薄膜和透光率30%的遮阳网覆盖，30d后统计成活率达91.8%，小苗生长健壮。 我国蕨类植物资源丰富，种类繁多，约有2600多种，占全世界的1/5以上。多数蕨类因其高雅飘逸的体态、碧绿青翠的叶色、精美的羽片图案、精致的脉序以及别致的孢子囊群排列[5]，已成为现代园林绿化行业的一个重要组成部分。本研究提出了一种以幼孢子囊群诱导，GGB途径的华南紫萁组培繁殖方法，初步建立了其离体再生体系，有效解决了现有繁殖方法的弊端，为优质华南紫萁商品种苗生产提供了方法和途径。 GGB，又称绿色球状体（），是指由蕨类植物外植体诱导得到的绿色球状分生组织集合体，接种于分化培养基上，可以获得大量蕨类植物幼苗。通过GGB诱导再生获得优质种苗，已是蕨类植物组培一种常见的研究途径。本试验以华南紫萁幼孢子囊叶为外植体，在B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培养基上，成功诱导出GGB，继续培养可对GGB进行有效增殖，但未见不定芽分化。1/2MS配合1.0mg/L6-BA、0.1mg/L NAA及1.5g/L活性炭的情况下，分化率可达58.3%，说明低盐条件对不定芽分化的促进较明显。生根培养以1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭的培养基效果最好。在泥炭∶火山岩配比为3∶1的基质中，组培苗成活率达91.8%，是华南紫萁组培苗移栽驯化的最佳基质。 华南紫萁组培快繁途径研究 陶佩琳1马新永2高政平1 （1徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州221000；2徐州市铜山区大彭镇农机服务中心） 摘要:以华南紫萁幼孢子囊叶为外植体，研究不同培养基对GGB诱导、增殖、分化及组培苗生根移栽的影响，初步建立了华南紫萁离体快繁体系。 关键词:华南紫萁；组培；快繁 基金项目：2017年徐州市推动科技创新项目《观赏蕨类引种驯化和商品化繁殖技术研究》，（项目编号：KC17056）。 作者简介：陶佩琳（1984-），女，汉族，江苏南通人，硕士，副教授，研究方向：植物组织培养。 试验研究 7 --

蓝莓组培快繁技术实例 · 附配方

蓝莓（Vaccinium corymbosum）属杜鹃花科，越橘属植物。起源于北美，多年生灌木小浆果果树。因果实呈蓝色，故称为蓝莓国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。 本试验以蓝莓半木质化茎段为外植体，并通过瓶外生根技术，建立起植株再生体系。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 高灌蓝莓半木质化茎段。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 剪取蓝莓半木质化枝条，立即去掉上部叶片带回室内，剪成带有一个叶芽2-3厘米长茎段，在流动自来水中冲洗20-30分钟，在超净工作台上用75%酒精消毒2-3分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水后在0.1%升汞中消毒5-8分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水分，剪去茎段两端约 0.5-1厘米，立即接种到初代培养基中。 1.1.3 培养条件 诱导培养基：改良WPM + ZT 1.0mg/L 增殖培养基：改良WPM + IAA 0.1mg/L + ZT 2.0mg/L 复壮培养基：改良WPM + IBA 0.1mg/L WPM具体改良为：以硝酸钙 684mg/L、硝酸钾 190mg/L、EDTA铁钠 73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L代替原WPM培养基中的硫酸钾、氯化钙、硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠。 以上培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH值5.2。 培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时长为12-16时/天。

2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 将处理好的外植体立即接种到诱导培养基中，5-6天叶芽开始萌动，10天开始展叶，20天腋芽长到1厘米长，30天腋芽长到1.5-2.5厘米长。 2.2 继代增殖培养 将初代培养长出的茎剪成1.5-2厘米长茎段转接到增殖培养基中。30-35天增殖5-7倍，增殖苗生长健壮。 2.3 复壮培养 将继代苗剪成1-1.5厘米茎段，转接到壮苗培养基，复壮培养30-40天，复壮苗高5-6厘米且粗壮。 2.4 瓶外生根培养

苹果树组培快繁技术实例 · 含配方

苹果的组织培养是采用无菌培养技术，将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、鳞片、块根和球茎等器官以及它们的组织切片进行离体培养，使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。由于离体技术处理严格，所以很容易脱除一些细菌病原及病毒，是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。苹果矮化砧、抗寒砧的组织培养也已成功。苹果脱毒组培技术流程具体如下。

一 外植体材料选择与处理 早春，将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移人温室，待新梢长出3～5片新叶时，放入热处理箱中，37℃恒温热处理30d或32℃与37℃每8h变换一次，变温热处理60d。脱毒率可达80％以上。热处理结束后，从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约2～3cm顶梢，流水冲洗10min，去掉小叶。70％乙醇浸泡30s，蒸馏水冲洗后放入0.1％HgCI。中消毒10min，无菌水冲洗3～5次，解剖镜下迅速剥取1.0mm的茎尖进行分离培养，接种于起始培养基上。

二 培养基制备 1.1 芽诱导 适宜苹果芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。诱导的芽生长正常可发育成新梢。 1.2 继代培养 选择诱导的芽丛切割成单芽茎段，转接于设计的继代培养基上。适宜的苹果继代培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖4％+琼脂0.36mg/L。培养条件：光照强度2000～ 2500lx，光照时间14～16h/d，适宜温度为25℃±2.0℃。40d后增殖6.1倍。 1.3 生根培养 选择生长正常的继代培养苗，剪成单芽茎段，插入生根培养基中，苹果适宜的生根培养基为：1／2MS+IAA1.5mg/L+蔗糖25％+琼脂0.36％。培养30d后，平均4～6条根／苗，长达0.5～1.0cm。根白且粗，多直接生于茎基部。

国内外植物组织培养技术的差距

国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05

摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking

植物组培快繁研究

（一）树型金银花组培快繁技术的研究 实验一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌 一、目的要求： 1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。 2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、材料用具： 高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、双筒解剖镜、酸度测定仪、空调机、控温仪、百分之一与万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。 三、说明： 在进行各类具体的组培实验前，首先了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。 植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 四、方法和步骤： 首先在老师带领下参观组培室，并听取讲解，然后配制洗液，称取工业用重铬酸钾40克，溶解在500ml在水中，然后徐徐加入450ml粗制浓硫酸（或废硫酸）配好的溶液呈红色，铬酸洗液是一种强氧化剂，去污能力强，但玻璃器皿上沾有油脂、凡士林、石蜡等则用此液无效，铬酸洗液可反复使用，直到溶液呈青褐色为止。此溶液腐蚀性强，洗涤时需注意。每人清洗部分玻璃器皿，方法：清水洗净→泡入洗衣粉水溶液中进行洗刷→清水反复冲洗→蒸馏水淋一遍→烘干备用。 然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。 带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。 对器皿和用具进行高压灭菌，即用手提式高压灭菌锅，在1.2个大气压下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具在接种前还要用百分之七十的酒精棉球擦一下，再用酒精灯的火焰灭菌，冷却后即可应用。 五、作业：试阐述为什么要对器皿和用具进行严格的洗涤和灭菌？ 实验二母液的制备及培养基的配制、灭菌 一、目的要求： 通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。 二、材料用具： 高压灭菌锅、冰箱、普通及精密天平、电炉、铝锅、玻璃器皿（烧杯、量微、容量瓶、移液管、试剂瓶、三角瓶、漏斗），化学试剂(CaCl2·2H2O，KNO3，MgSO4·7H2O， NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4·7H2O，MgSO4·4H2O，Zn SO4·7H2O，H3BO3，

康乃馨植物组织培养(1)

《植物组培快繁技术》 康乃馨植物组织培养 实 验 设 计 小组成员：陈梅20141641044 郑莉20141641002 雷雨田20141641043

康乃馨植物组织培养 一、实验目的 掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。 二、实验原理 香石竹（学名Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨，花色艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高经济价值。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵变小，花色产生斑点，退色甚至不开花，影响切花产 量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获得“无病毒”的健康植株，对于引 进的少而新的脱毒种苗，再进行一次茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通过组织培养的方法快速繁殖，在短期内，就可以获得大量的脱毒试管苗，使引入材料迅速在生产上推广应用，取得明显的经济效益。 三、实验仪器与材料 仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、接种盘、 纱布、记号笔、标签纸 试剂：75%乙醇、0.1%升汞、无菌水、MS培养基、IAA0.1mg/L、BA0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂 材料：康乃馨带芽外植体材料 四、实验步骤 （一）培养基的配方 1、康乃馨的生芽培养基 MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L) pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10~15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3~4瓶。纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。

2、康乃馨的继代培养基 MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10-15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3-4瓶。纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 3、康乃馨的生根培养基 MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)， pH5.8-6.0,配制0.3L，用培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水10瓶，每人3-4培养瓶、纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 （二）康乃馨的生芽培养 1、无菌操作准备 将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋，换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台。用纱布吸取75%酒精擦手、擦拭超净台、擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。 2、外植体消毒 选取康乃馨叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时，将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用解剖刀切取所需组织放入大烧杯中，用75%的酒精浸泡消毒30s，用无菌水冲洗3次，再将材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分钟,然后在超净台内用无菌水冲洗6次。材料消毒完成。 3、外植体的制备 将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份,然后在无菌超净工作台上的接种盘内，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0.3mm左右。以上操作均

第一节 植物组培快繁工厂的设计

第一节植物组培快繁工厂的设计 第一节植物组培快繁工厂的设计 一、组培苗生产规模的确定 生产规模的确定首先应根据市场需求、生长的植物种类和经济实力来确定，例如，木本植物比草本植物的培养周期长，设计时必须比草本植物多增30%的空间、设备。植物种苗无糖微繁殖工厂化生产程序包括①入选品种外植体的筛选及获取; ②外植体灭菌诱导培养; ③快速 繁殖; ④生根培养; ⑤出瓶过渡炼苗; ⑥包装进入市场等工艺。一般一个熟练的接种工人根据繁殖品种的不同，年生产量可达15―20万苗。即规划一个年生产量达500万株的组培室，需设25―30个无菌操作位置。当无菌操作位置数量确定后，即可计算出接种室的需求面积。按日生产组培苗的数量及培养周期计算需要的培养架数量，以此为基础很容易就可计算出培养室的需求面积，一般为1台无菌工作台或者说一个无菌操作位置，需配备净培养面积（放置培养物的面积）7-10平方米，无菌操作室与培养室的面积比例为1：2，围绕组培工厂建设，其它必备的配套设施设备及操作用具购置的数量，应以每个无菌工作台的需求量计算，解剖刀、镊子、刀片等常用工具还要有充足的备用量。室外应有相应的温室配套，生产品种栽培展示区等，其面积的大小应根据不同的植物种类来确定。因此组培工厂的建设，需要认真规划、仔细计算、合理投资，使之既有系统性又适用，才能充分发挥最大的生产潜力。在市场竞争中，尽量降低生产成本，提高产品质量和确保品种的可靠性。 二、组培种苗工厂的设计 植物组培育苗工厂应选址在安静、清洁、可避开各种环境污染源的地方，以减少污染，降低生产成本确保工作的顺利进行。根据已确定的生产规模，设计组培生产车间时，要全面了解组培工作中所需的最基本的条件，以便因地制宜地利用现有房屋改建或新建组培工厂，尽量做到合理布局。通常按工作程序先后，安排成一条连续的生产线，避免环节错位，增加日后工作的负担或引起混乱。组织培养的生产线主要包括培养器皿清洗；培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌；无菌操作材料的表面灭菌和接种；进入培养室培养；试管苗出瓶、移栽等。各个房间的面积要合理安排，做到大小适中，工作方便，减少污染，节省能源，使用安全。图5.1所示的是一种组培生产车间设计的平面布置图： 图5.1组培生产车间的设计

植物组织培养技术

楚雄师范学院化学与生命科学系 生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲 一、课程基本信息 课程代码：031106014 课程中文名称：植物组织培养技术 课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology 课程性质：专业选修课 使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业 开课学期：第7学期 总学时：36+27 总学分：3 预修课程：植物学、植物生理学 课程简介 植物组织培养技术是将植物的离体材料(器官、组织、细胞、原生质体等)无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。 教材建议 《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。 参考书 《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。 《植物组织培养(第三版)》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。 《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。

多肉植物玉露的组培快繁技术研究

龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/e514409117.html, 多肉植物玉露的组培快繁技术研究 作者：王莉 来源：《乡村科技》2017年第24期 [摘要] 为了提高多肉植物玉露的繁殖效率，满足多肉植物玉露产业快速发展的需求，以 多肉植物草玉露叶片为试验材料进行组织培养与快速繁殖的研究。结果表明：玉露不定芽诱导培养的最佳培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽分化率最高（达到95%）；不定芽增殖培养的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，不定芽增殖分化率最高（达到380%）；生根诱导效果最佳的培养基是1/2MS+IBA 2 mg/L，生根率最高，达到95%以上。 [关键词] 玉露；组织培养；快速繁殖 [中图分类号] S682.33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909（2017）24-56-2 植物组织培养也称离体培养，是指将植物体各部分组织，如叶肉组织、胚乳、薄壁组织等进行培养，从而获得再生植株；也指在培养过程中从各组织上得到愈伤组织，愈伤组织经过再分化形成再生的完整植株。 1 材料与方法 1.1 试验材料 草玉露作为原材料，以草玉露幼嫩的叶片为外植体进行诱导分化不定芽试验，以2 cm左右的组培苗进行生根试验。 1.2 试验方法 1.2.1 外植体的取得和灭菌处理。用剪刀剪取草玉露幼嫩的叶片作为外植体，放入烧杯 中，再将其放在水龙头下流水冲洗30 min，然后在洗衣粉水中浸泡7～10 min，最后用自来水冲洗干净。在无菌室内的超净工作台上，外植体先用75%酒精进行表面消毒2～5 s，再用无菌水冲洗一两次，然后放入2%次氯酸钠溶液中消毒5～10 min，再用无菌水漂洗两三次，用无菌滤纸吸干表面水分。将灭菌后的叶片切成0.5 cm切段，分别接种于预先灭菌的培养基上。为 了减少出现杂菌，要在火焰旁进行接种。 1.2.2 培养基及培养条件。以MS培养基作为基本培养基，外加蔗糖30 g/L、琼脂6 g/L，再根据试验要求加入不同量的植物激素制成试验所需的培养基，调节pH值到5.8。 培养温度为（25±2）℃，恒温，培养光照为2 000 Lx，每天光照时间不少于10 h。丛生 芽的快速增殖和生根培养条件与此相同。

植物快繁技术

植物快繁技术/植物克隆技术/植物傻瓜克隆技术/植物非试管高效快 繁技术 减小字体增大字体作者：本站来源：本站整理发布时间： 2008-1-1 18:33:32 植物快繁技术简介 所谓植物非试管高效快繁技术也就是植物克隆技术，也有人称之为植物非试管快繁技术、植物快繁技术、植物全光照喷雾育苗技术、全光雾插技术、微材料或微组织扦插育苗技术，喷雾育苗技术、喷雾扦插育苗技术、傻瓜克隆。无论叫做植物快繁还是植物克隆其原理和方法是一样的。 植物克隆技术（植物快繁技术）的关键是喷雾，十几年前就有权威单位推广全光照喷雾育苗技术，实际上也就是后来有人称之为植物非试管高效快繁技术，而现今更多被称为植物克隆、傻瓜克隆等时髦词汇。过去开发的喷雾全套设备是机械式，成本高达数万元，且容易锈蚀和损坏，一段时间后就没人再使用，而自从引进以色列微喷（头）技术后，微喷雾问题顺利以低成本形式解决，于是植物克隆技术（植物快繁技术）得以在全国迅速推广普及。 植物快繁技术（植物克隆技术）的推广的另一障碍就是自动控制仪的问题，进口的温湿控制设备好用但价格高，所谓的农业智能化计算机系统除了价格更高之外还总是不能成熟，使用起来问题百出，经常造成育苗的失败，笔者使用两年后才不得已开发了国产育苗仪，其低廉

的价格和丰富实用的功能很快被全国同行赏识。 植物克隆技术（植物非试管高效快繁技术）现在的投入只需2000余元，大力推广植物克隆技术、植物快繁技术利国利民。 植物非试管高效快繁技术的起源、应用和进展 植物傻瓜克隆技术是20年前从国外引进，又经过我国众多农业专家花费二十余年时间，逐步完善并成熟运用于规模生产一个系统配套，用于多种经济植物大规模无性快繁产业化生产的实用技术，又称非试管快繁技术、喷雾快繁技术等。此技术是一项崭新经济植物苗木快繁技术体系，它将植物组织培养快繁苗从试管培养基中解放到田间大地，是一场无性繁殖快速育苗的革命！是现代农业生物技术研究的一大创举！ 该技术育苗生产成本低，适用于国内外苗木交易市场和经济植物种苗繁殖工程。绿色快繁产业是一个永久性高效益产业，它可以带动制药产业、林纸产业、林草产业、园林绿化等其它产业，进而促进农业产业化、林业产业化、制药产业化和农业现代化的快速发展。还有利于生态城市、园林城市、森林公园、自然保护区的建设、生态环境改善、城市生态系统的改变、无性系造林、天然林保护工程、城市绿化工程以及与人们生活息息相关的如粮食作物、花卉、蔬菜、无公害蔬菜、野生蔬菜、濒危野生植物、果树、山野菜、药用植物、珍稀植物等高效经济植物以及新经济资源的开发利用。 植物快繁技术是古今中外人们十分关注的问题。从传统的扦插繁

植物非试管高效快繁技术

植物非试管高效快繁技术 植物非试管高效快繁技术的特点总结 植物非试管高效快繁技术(TERNPC)与植物组培快繁(plant tissue culture)和传统育苗技术相比的先进性，及其在技术生产运用中的特点总结如下: 一、用植物0.3-1.0厘米长的微小外植体作为繁殖单位材料，极大的节约了种质材料，所用外植体繁殖单位材料用量比常规育苗用量少3-8倍;接种速度极快，是组织培养的3-5倍。直接接种在大田沙床或营养袋中，一次成苗直至供应生产，不需任何移动，成活率高。完全离开组培大楼和全部试管快繁的条件，育苗设施简易比组织培养快繁投入低几十倍，比常规育苗也低。 二、在独创的简易条件下，无论南方北方、不同纬度、不同土壤、不同气候，一年四季(包括极端温度:低温-35度和高温42度)都可用此法连续快繁，多数品种均可达6--12代。该技术育苗较少受季节影响，一年365天均可接种繁殖。实现每代在原种植物基数上按几何级数高效增殖。一年中任何一天都可用此快繁技术启动生产。极大的拓展了技术应用的时间和空间。 三、普及率高。普通人员每天(8小时)可接种3000-5000个单位材料。一个培养四个月的生产技术工人每月可成功培育单一植物品种30,000-10,0000株纯种苗。对人才素质要求适应性极广，生产技术易于推广;二是个人操作速度比组织培养快繁和常规育苗快得多，当达到一定育苗规模以上时，生产投资效益比可达 1:5-1:10以上。它非常节约植物种质材料，一天就可以接种数十万株至上百万株(这是组织培养在世界范围内难以想象的事)，易于大面积快繁各种苗木。，易于大面积育苗产业化规模快繁各种种苗。 四、操作步骤少，生产技术工艺简单，经特殊培训较容易掌握，可广泛应用于生产。适宜大规模工厂化育苗。普通人员可参加快繁全部生产操作，且速度极快，