急性有心衰竭动物模型设计 Word 文档
机能实验学实验设计大纲实验名称：急性右心衰竭动物模型设计
课题来源：自选
设计班级：2008级临床本科7班
设计人员：王超
设计日期：2011年3月25日
指导老师：荣成
成都医学院实验技术教研室
2011年制
标准差（
三、完成时间的条件：实验器械，实验动物，实验药品。
实验设备：兔手术台、哺乳类手术器械一套、中心静脉压测定装置、呼吸描记装置、心室插管、听诊器、注射器（1ml、2 ml、5 ml、20 ml）、输液瓶、胶管、螺旋夹、二道生理记录仪与电刺激器（或计算机实时分析系统）。
实验动物：
家兔（20只）
实验药品：
20％乌拉坦、生理盐水、液体石蜡、25％尼可刹米、0.5％肝素生理盐水。
紧密连接蛋白与急性肾损伤
紧密连接蛋白与急性肾损伤 发表时间：2016-05-24T13:37:47.577Z 来源：《健康世界》2015年12期作者：夏团红 [导读] 南华大学本文就cldns在急性肾损伤中相关研究进行综述。 南华大学 421001 摘要：紧密连接蛋白（Claudins，cldns）是构成紧密连接复合物的主要成分之一，维持机体内环境的稳定，保持上皮细胞的极性[1]。它的表达水平及分布情况与多种疾病关系密切，如家族性、伴发高尿钙和肾脏钙质沉着的低镁血症，鱼鳞病和肾囊肿有直接关系[2-4]，近年来发现与急性肾损伤的发生发展有着密切的关系，本文就cldns在急性肾损伤中相关研究进行综述。 关键词：紧密连接；Claudins；急性肾损伤 Cldns在肾脏组织中分布丰富，是肾小管上皮细胞间紧密连接的重要组成部分，对维持肾小管上皮细胞极性及调节离子渗透性发挥着重要的作用，如其结构及分布异常均可导致肾小管上皮细胞的生理功能失调，在疾病的发生发展中扮演着重要的角色[5]；Cldns在肾脏组织中分布不但丰富，约20种左右，而且在肾单位的不同节段表达的 Cldns不同，在不同疾病中，Cldns的表达程度不一样，有的表达水平上调，有的无明显改变，而有的则表达下调，还有的合并分布发生异常[6-7]。探讨Cldns在肾脏的表达及分布对疾病的认识有着非常重要的作用。 1 cldns家族成员的结构和功能 Cldns是一种四分子交联体蛋白，属于紧密连接蛋白家族，目前在哺乳动物细胞中共发现了27个成员，分子量在21~28kD之间。Cldns家族成员具有相同的分子结构，其肽链四次穿越细胞膜，NH2-和COOH-端位于细胞质中，细胞外的肽链形成两个跨膜的环，为细胞外1环和细胞外2环，细胞外1环在决定细胞间的跨上皮电荷抵抗和细胞外电荷的选择性[8-10]，细胞外2环则目前有研究认为其折叠成螺旋-转角-螺旋型，在Cldns之间形成二聚体，介导Cldns间联系[11]，并且也可充当产气荚膜梭状芽胞杆菌肠毒素受体，用于调节屏障功能和药物的运输[12]。 2 cldns在肾脏的分布及作用 Cldns在肾组织中分布丰富，约20种左右Cldns在肾组织中表达，且其在肾小管的不同节段的肾小管上皮细胞中表达不同，众所周知，肾单位的不同节段的功能不同，与Cldns的分布不同有很大关系[8]。在近曲小管，大量的盐和水重吸收，这部分主要以形成传导离子的孔隙的Cldns分布为主，如claudin-2、-17、-10等；在髓袢升支粗段最重要的功能是重吸收钙和镁，并调控钙敏受体，而这部分分布最丰富的则是 claudin-16和claudin-19[13]；在远端肾肾单位钠离子是被动吸收，而氯离子则是主要吸收，因此，紧密连接蛋白形成对促进氯离子重吸收的孔道蛋白，形成电负荷，促进钠的重收，钾、酸的分泌，因此，此部分以claudin-3、-4、-7 和 -8分布[14]。 3 cldns在急性肾损伤表达及意义 急性肾损伤（acute kidney injury,AKI）是目前临床上最常见的疾病之一，发生率和死亡率高[15]，目前有少量研究发现在缺血再灌注肾损伤、脓毒性导致的急性肾损伤等模型中发现紧密连接的结构不仅破坏，而且其蛋白质表达水平和mRNA表达水平发生了变化。 早期研究中，Kieran NE等[16]夹闭瑞士小鼠（重量在25至35g）双侧肾蒂30分钟后再灌注24小时杀死小鼠获取肾组织，微阵列基因芯片分析数据显示，在总共12488个表达的基因中，发现在cldns家族中claudin-1、-3、-7的表达水平发生了显著变化，并进一步进行RT -PCR检测，发现其分别上调了6.97、 4.71、9.24倍，并也验证了claudin-8和-6的表达水平无明显改变，其它claudin-2在微阵列基因芯片分析约下调1.9倍。Kieran NE等[16]同时建立了用叶酸（250 mg/kg）诱导小鼠急性肾小管坏死的模型，分别于应用叶酸后0，3，6，24和72小时杀死小鼠，微阵列基因芯片分析同样发现在cldns家族中claudin-1、-3、-7的表达水平发生了显著变化，同时应用RT -PCR检测验证，发现claudin-1随损伤时间的延长，mRNA表达水平逐渐上调，至6小时达到高峰，随后表达逐渐下调；claudin-3随损伤时间的推移，表达水平逐渐上调；claudin-7在6小时内无明显上调或下调，6小时后急剧上调，24小时后缓慢上调。在这两个实验中，虽未评价血清肌酐与各指标的相关性，但其血清肌酐水平均比基础值高出约在4至5倍以上。接着，Supavekin S等[17]夹闭小鼠单侧肾蒂45分钟后，分别于0、3、12或24小时再灌注的模型中，微阵列基因芯片分析中不仅发现了各凋亡基因的表达变化，而且同样也发现了claudin-7的表达水平发生了变化。 近期Eadon MT等[7]在内毒素诱导的急性肾损伤的动物模型中，进一步验证了cldns在急性肾损伤中的表达发生了变化（claudin-1、-3表达上调，Claudin-4 蛋白质表达水平下调，而其mRNA表达水平上调，Claudin-8蛋白质表达无明显改变，而mRNA表达水平下调），在急性肾损伤中，cldns的表达水平不仅发生了变化，而且其结构及分布发生了变化，从而导致肾单位的功能发生异常，导致蛋白尿，血清肌酐、尿素氮水平上长升，在Reyes JL等[18]在重金属导致的急性肾损伤的论述中，认为重金属是通过氧化应激导致的紧密连接蛋白的分布异常。在环孢素诱导的急性肾损伤大鼠模型中[19]，环孢素通过氧化应激导致一些cldns的表达水平发生了变化，如claudin-2mRNA和蛋白质表达水平均下调，而claudin-5的表达水平无明显改变。 近期Gonzalez JE等[20]在体外应用过氧化氢诱导的肾小管上皮细胞损伤中，验证了部分（claudin-1、claudin-2）的表达水平及定位发生了变化，从而影响肾小管上皮细胞的功能状态。 结语 因此，在急性肾损伤中，cldns的表达水平及定位发生了变化，进而影响肾脏的功能状态，但是在急性肾损伤中并不是所有cldns的表达均发生了变化，因此，对cldns的进一步研究，有利于对急性肾损伤的机制深入探讨。 参考文献： [1]Krug SM, Schulzke JD, Fromm M.Tight junction, selective permeability, and related diseases[J].Semin Cell Dev Biol. 2014 Dec;36:166-76. [2]Hou J, Goodenough DA.Claudin-16 and claudin-19 function in the thick ascending limb[J].Curr Opin Nephrol Hypertens. 2010 Sep;19(5):483-8. [3]Hadj-Rabia S, Baala L, Vabres P, et al. Claudin-1 gene mutations in neonatal sclerosing cholangitis associated with ichthyosis: a tight
急性肝损伤模型的研究进展
急性肝损伤模型的研究进展 作者：刘彦双朱淑霞王永利作者单位：050200 河北省石家庄市卫生学校（刘彦双）;河北武警总队医院（朱淑霞）;河北医科大学药理教研室（王永利） 【关键词】急性肝损伤 肝损伤实验动物模型的复制是进行防治肝损伤药物研究的前提。目前，肝损伤动物模型的复制主要有生物性、免疫性、化学性等方法，生物学方法要求实验条件高且费用昂贵，限制了应用。免疫方法是造成免疫肝损伤，主要用于通过免疫机制而抗肝损伤的药物研究。化学方法则是通过化学性肝毒物质，如四氯化碳、氨基半乳糖、硫代乙酰胺、黄曲霉素等致肝损伤。在我国卫生部颁布的《中药药理实验指导原则》中明确指定应用四氯化碳和氨基半乳糖肝损伤动物模型进行保肝降酶新药的药理实验，应用四氯化碳和氨基半乳糖复制肝损伤动物模型，条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，是其他任何肝损伤模型无法比拟的，故目前研究抗肝损伤新药常采用四氯化碳和氨基半乳糖复制动物模型。 1 化学性肝损伤动物模型 1.1 四氯化碳性肝损伤四氯化碳（CCl4 ）溶于精致植物油，配制0.1%浓度，按10ml.kg小鼠腹腔注射，12～24h后处死动物。测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红质（TB）、总蛋白（TP）、白蛋白（A）、，肝匀浆脂质过氧化物（LPD）或丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）或还原性谷胱甘肽（GSH）等反映肝功能及脂质过氧化的指标，并进行组织病理学检查。 关于CCl 4 肝毒的作用机制，存在多种假设，但都一致公认，自由基的形成及引发的链式过氧化反应是其主要机制。CCl 4在体内可经肝微粒体细胞色素P450 代谢激活，生成两个活性自由基（CCl 3 O 2 和Cl）及一系列氧活性物，可与肝细胞质膜或亚细胞结构的膜脂质发生过氧化反应，膜磷脂大量降解，从而破坏细胞膜结构完整性，引起膜通透性增加，最终导致肝细胞死亡［1］。另外，CCl 4 的代谢产物能迅速与细胞成分如胞内脂质、蛋白、核脂质、核蛋白和DNA等多种大分子发生不可逆的共价结合而导致细胞死亡，特别是当自由基作用于DNA时，损伤核糖和碱基，使核酸直接破坏引起DNA链的断裂或DNA 链与蛋白间交联，影响其信息传递功能以及转录和复制特性。在CCl 4 代谢产物引起的脂质过氧化物和共价结合的双重作用下，导致膜脂质流动性降低、钙泵抑制、谷胱甘肽活性抑制、肝微粒和线粒体功能丧失、肝细胞内钙稳态失调及代谢紊乱，引起肝细胞损伤加剧［2］。 1.2 D-氨基半乳糖性肝损伤用生理盐水配制成100g.L的D-氨基半乳糖 （D-galactosanine，D-GalN）溶液，大鼠或小鼠腹腔注射600～900mg.kg，造成急性肝损伤模型，染毒24-48h后处死动物，检查肝功能、病理及脂质过氧化指标［3，4］。Keppler 首先于1968年应用D-GaLN制备大鼠肝损伤模型。D-GaLN在肝细胞内代谢，首先与尿苷酸（UDP）结合成尿苷二磷酸半乳糖（LIDP-GalN），并在肝细胞内聚集，由于这种结合的速度大大超过尿苷酸的生物合成速度，致使尿苷酸耗竭，进而导致依赖其进行生物合成的核酸、糖蛋白和糖脂等物质减少，限制了细胞器的再生及酶的生成和补充，使细胞器受损，肝细胞的结构和功能均出现异常，甚至死亡。另外D-GaLN还可以引起肝细胞内Ca 2+ 增多，
肝损伤动物模型的建立和应用
万方数据
万方数据
肝损伤动物模型的建立和应用 作者：王福根， 孙静霞 作者单位：浙江杭州市第六人民医院,杭州市,310014 刊名： 中国药房 英文刊名：CHINA PHARMACY 年，卷(期)：2006,17(9) 被引用次数：12次 参考文献(10条) 1.Xu JQ;Lee G;Wang HM Limited role for CXC chemokines in the pathogenesis of a-naphthylisothiocyanate-induced liver injury[外文期刊] 2004(03) 2.黄正明;杨新波;曹文斌化学性及免疫性肝损伤模型的方法学研究[期刊论文]-解放军药学学报 2005(01) 3.Ayoub SS;Botting RM;Goorha S Acetaminophen-induced hypothermia in mice is mediated by a prostaglandin endoperoxide synthase 1 gene-derived protein[外文期刊] 2004(30) 4.Yasuda M;Okabe T;Itoh J Differentiation of necrotic cell death with or without lysosomal activation:application of acute liver injury models induced by carbon tetrachloride(CCl4) and dimethylnitrosamine(DMN)[外文期刊] 2000(10) 5.Horn TL;Bhattacharjee A;Schook LB Altered hepatis mrna expression of apoptotic genes during dimethylnitrosamine exposure[外文期刊] 2000(02) 6.Wang T;Shankar K;Ronis M Potentiation of thioacetamide liver injury in diabetic rat is due to induced CYP2E1[外文期刊] 2000(02) 7.Kin WH;Hong F;Radaeva S Statl plays an essential role in LPS/ D-galactosanine-induced liver apoptosis and injury 2003(06) 8.Kaneko Y;Harada M;Kawano T Angmentation of Va14NKT cell-mediated cytotexicity by interleukin4 in an autocrine mechanism resulting in the development of concanavalina-indued hepatitis[外文期刊] 2000(01) 9.赵冬梅;刘耕陶双环醇对刀豆蛋白A所致小鼠肝细胞核DNA损伤保护作用[期刊论文]-中华医学杂志 2001(14) 10.邱英锋;缪晓辉;蔡雄卡介苗加脂多糖建立的大鼠急性免疫性肝损伤模型的研究[期刊论文]-西北国防医学杂志2004(05) 本文读者也读过(4条) 1.王志彬药物性肝损害的特点分析-附70例报告[期刊论文]-医学信息（下旬刊）2010,23(9) 2.吴玉强.邓家刚.钟正贤.杨兴.WU Yu-qiang.DENG Jia-gang.ZHONG Zheng-xian.YANG Xing铁包金提取物抗肝损伤作用的研究[期刊论文]-时珍国医国药2009,20(4) 3.禄保平.白娟.江若霞.Lu Baoping.Bai Juan.Jiang Ruoxia以常用中西药物建立药物性肝损伤动物模型的分析与探讨[期刊论文]-河南中医学院学报2008,23(4) 4.马丽娜.华碧春药物性肝损伤动物模型研究进展[期刊论文]-亚太传统医药2011,07(2) 引证文献(12条) 1.徐伟.宋倩倩.苗双.刘宁宁.马健.王振勇青蒿素对CCl4致犬急性肝损伤模型抗氧化指标的时效影响[期刊论文]-兽药与饲料添加剂 2009(4)
慢性肾功能衰竭动物模型研究进展
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/e811997272.html, 慢性肾功能衰竭动物模型研究进展 作者：陶琦姚源璋 来源：《中国医药导报》2013年第16期 [摘要] 近年来，慢性肾功能衰竭（CRF）动物模型建立方法及评价指标不断完善，但仍存在一定的局限性。本文对近年来文献中建立CRF动物模型的操作方法、模型特点与临床运用进行归纳和总结，综述了CRF动物模型的研究进展，归纳出物理、化学、生物学三大类造模方法，为进一步规范动物模型的诊断标准，寻求统一、稳定、简便的动物模型提供依据。不同的CRF动物模型均有其各自的特点及运用范围，实际工作中应根据各自研究的侧重点来选用，以助于研究者更好地探讨肾脏病组织形态、生化指标的变化和临床表现的相互关系，阐述CRF的发病机制，筛选有效药物及阐明疗效机制。 [关键词] 慢性肾功能衰竭；动物模型；物理；化学；生物 [中图分类号] R692.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）06（a）-0031-03 慢性肾功能衰竭（CRF）是指慢性肾脏病引起的肾小球滤过率下降及与此相关的代谢紊乱和临床症状组成的综合征。运用动物模型有助于有效地认识CRF的发生、发展规律和研究防治措施。近年来随着实验研究的深入，CRF实验动物模型的造模方法有了更多的经验和进一步的发展。本文对近年来建立CRF实验动物模型的研究方法做一综述。 1 物理方法 1.1 肾大部分切除法 肾切除模型历史悠久，早在1952年Platt等[1]利用大鼠行5/6肾切除成功制作了CRF动物模型。我国沙朝晖等[2]报道的大鼠5/6肾切除法采用二期手术：大腿肌内注射麻醉大鼠，选取背左侧切口，暴露左肾，剥离肾包膜，将肾的上下极各1/3切除，明胶海绵压迫切面止血。一期手术后7 d，行二期手术，摘除右肾。术后90 d稳定于氮质血症期。王瑞强等[3]采用弧型切除2/3肾组织，主要切除皮质部分。1周后切除整个右肾，2次手术共切除肾脏80%左右，8周后造模成功。 5/6肾切除制备CRF模型符合肾小球高灌注、高滤过、高压力致肾衰的学说，本模型以肾小球肥大、硬化为主要特点，表现出与人类肾脏纤维化一致的过程，故模型表现接近临床，研究减轻肾组织灌注、高滤过及抑制系膜细胞增殖的药物可采用此模型。本模型到实验8周时可出现低钙高磷等一系列肾性骨病改变，提示本模型亦可作为一种肾性骨病的研究模型[3]。但 本模型需要做二期手术，手术操作复杂，需掌握切除肾组织技术，不应切到肾盂，以免尿液外漏。且该造模方法易引起出血、感染甚至死亡，模型制备时间长。另外亦有3/4、6/7、7/10等
小鼠急性酒精性肝损伤动物模型造模方法优化
小鼠急性酒精性肝损伤动物模型造模方法优化 【摘要】目的：探索急性酒精性肝损伤小鼠动物模型的造模方法。方法：通过三个实验比较不同剂量、不同灌酒方法、不同灌酒时间动物醉酒率、死亡率和血清转氨酶的不同情况。结果：一次灌酒0.28ml/10g体重小鼠可达中度醉酒，醉酒率70%，死亡率40%；采用小间隔分次灌服法后小鼠醉酒率60%，死亡率降为20%；连续灌酒时，较高剂量组第三天开始出现死亡现象并逐渐加重；血清转氨酶上升的高峰在第5天，此后逐渐下降。结论：白酒灌胃法造急性酒精性肝损伤模型时，采用中等剂量、分次灌胃法可降低死亡率，实验时间以5~7天比较适宜。 【关键词】急性酒精性肝损伤；小鼠；动物模型 随着人们对酒精性肝脏损害重视的提高以及相应实验研究的广泛开展，相关动物模型尤其是急性酒精性肝损伤动物模型在实际实验应用中的问题日益突出。我们在参考文献介绍的方法[1]制造急性酒精性肝损伤动物模型的实验中，对造模实际操作时的一些具体问题和检测指标的时间选择等有所比较和认识，现报告如下，以供同仁参考，在造模上少走弯路，节省经费。 1 实验材料 1.1 实验动物昆明种小鼠84只，体重24g~27g，合格证号分别为豫医动字第410115号，均由河南省实验动物中心提供。 1.2 实验试剂ALT试剂盒，迈克公司生产，批号100122；AST试剂盒，迈克公司生产，批号100103。 1.3 实验仪器雷勃微量移液器，芬兰雷勃集团中国区总部；DZKW型电子恒温水浴锅，余姚市亚星仪器仪表有限公司；752 N型分光光度计，上海第三分析仪器厂。 2实验方法 2.1 实验1普通级昆明种小鼠50只，21g~24g，雌雄各半。将50只小鼠按随机排列表分为5组，每组10只，雌雄各半。其中4组分四个剂量级 3.2灌酒时间与醉酒率、死亡率 实验1中，随着灌酒天数的增加，各组动物醉酒率变化不很大，但M3、M4两组的死亡情况日益严重，尤其是M4组，动物死亡数目过多。 3.3 灌酒方式与醉酒率、死亡率 实验2采用分次灌服的方式，仍观察醉酒情况，计算醉酒率和死亡率。结果
第十一章 慢性肾衰竭
第十一章 慢性肾衰竭 【定义、病因和发病机制】 （一）慢性肾脏病和慢性肾衰竭定义和分期 各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍（肾脏损伤病史＞3个月），包括GFR正常和不正常的病理损伤、血液或尿液成分异常，及影像学检查异常，或不明原因的GFR下降（GFR＜ 60ml/min）超过3个月，称为慢性肾脏病（chronic kidney diseases，CKD）。而广义的慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）则是指慢性肾脏病引起的肾小球滤过率（GFR）下降及与此相关的代谢紊乱和临床症状组成的综合征，简称慢性肾衰。 根据1992年黄山会议座谈会纪要，慢性肾衰竭可分为以下四个阶段：①肾功能代偿期；②肾功能失代偿期；③肾功能衰竭期（尿毒症前期）；④尿毒症期（表5-11-1）。 晚近美国肾脏病基金会K/DOQI专家组对慢性肾脏病（CKD）的分期方法提出了新的建议（表5-11-2）。该分期方法将GFR正常（≥90ml/min）的肾病视为1期CKD，其目的是为了加强对早期CKD的认知和CRF的早期防治；同时将终末期肾脏病（end stage renal disease，ESRD）的诊断放宽到GFR＜15ml/min，对晚期CRF的及时诊治有所帮助。显然，CKD和CRF的含义上有相当大的重叠，前者范围更广，而后者则主要代表CKD患者中的GFR下降的那一部分群体。 应当指出，单纯肾小球滤过率轻度下降（GFR60～89ml/min）而无肾损害其他表现者，不能认为有明确CKD存在；只有当GFR＜60ml/min时，才可按3期CKD对待。此外，在DKD5期患者中，当GFR为6～10ml/min并有明显尿毒症时，需进行透析治疗（糖尿病肾病透析治疗可适当提前）。 （二）慢性肾脏病与慢性肾衰的患病率与病因 慢性肾脏病的防治已经成为世界各国所面临的重要公共卫生问题之一。据有关发达国家统计，近30余年来慢性肾病的患病率有上升趋势。据有关统计，美国成人（总数约2亿）慢性肾脏病的患病率已高达10.9％，慢性肾衰的患病率为7.6％。据我国部分报告，慢性肾脏病的患病率约为8％～10％，其确切患病率尚待进一步调查。近20年来慢性肾衰在人类主要死亡原因中占第五位至第九位，是人类生存的重要威胁之一。 慢性肾衰的病因主要有糖尿病肾病、高血压。肾小动脉硬化、原发性与继发性肾小球肾炎、肾小管间质病变（慢性肾盂肾炎、慢性尿酸性肾病、梗阻性肾病、药物性肾病等）、肾血管病变、遗传性肾病（如多囊肾、遗传性肾炎）等。在发达国家，糖尿病肾病、高血压肾小动脉硬化已成为慢性肾衰的主要病因；包括中国在内的发展中国家，这两种疾病在CRF各种病因中仍位居原发性肾小球肾炎之后，但近年也有明显增高趋势。双侧肾动脉狭窄或闭塞所引起的“缺血性肾病”（ischemic nephropathy），在老年CRF的病因中占有一定地位。 （三）慢性肾衰进展的危险因素 从总体上讲，CRF病情进展有时缓慢而平稳（渐进性），也有时短期内急剧加重（进行性）；病程进展既有“不可逆”的一面，也有“可逆”（主要在早中期）的一面。因此，临床治疗中（尤其是早中期阶段）应抓住机会积极控制危险因素，争取病情好转。 1．慢性肾衰渐进性发展的危险因素 CRF病程渐进性发展的危险因素，包括高血糖控制不满意、高血压、蛋白尿（包括微量白蛋白尿）、低蛋白血症、吸烟等。此外，少量研究提示，贫血、高脂血症、高同型半胱氨酸血症、营养不良、老年、尿毒症毒素（如甲基胍、甲状旁腺激素、酚类）蓄积等，也可能在CRF的病程进展中起一定作用，有待于进一步研究。 2．慢性肾衰急性加重的危险因素 在CRF病程的某一阶段，肾功能可能出现急性加重，有时可
建立急性肝损伤模型
一、四氯化碳急性肝损伤模型 [造模原理] 四氯化碳(CCl4 )是无色透明液体,不溶于水.CCl4的毒性主要与其活性代谢产物有关.在肝内CCl4惊NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合,引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化,导致膜结构和功能完整性的破坏,肝细胞损伤坏死.三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上该泵的活性,食Ca2+内流增加,从而引起细胞中毒死亡;三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键,损害线粒体,使还原型辅酶Ⅰ(NADH)及ATP在肝内生成减少,脂肪酸氧化抑制,影响肝脏能量生成障碍,并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积. [实验动物] 体重18-22g的小鼠、体重150-180的大鼠或体重4-45kg的家兔. [操作方法] 用CCl4 在不同动物可以多种方法引起急性肝损伤.一般用花生油将CCl4 稀释为所需浓度. CCl4 致急性肝损伤所需剂量和用法见表8-1 [模型评价与注意事项] 1.( CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型,造模方法简单,成功率高,重复性 好，价格低廉。 2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。
3：CCl4是无色澄清的有毒液体，有特殊气味，难溶于水。CCl4 一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度，有时也可与矿物油(如液体石蜡)混合。以植物油为例，10％CCl4的配制方法是：取5ml植物油和5g阿拉伯胶，置于乳钵中研匀，再加lOml纯CCl4。研匀，然后加蒸馏水lO~15ml调成乳状，最后加蒸馏水至lOOml，用前摇匀。 4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是,不同动物个体肝损伤的程度差异较大. 还有研究表明，小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好。 5 CCl4 液体和蒸气可以从呼吸道、皮肤吸收,对人体有一定毒性，操作时应注意防护. 二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型 [造模原理] D-半乳糖胺(D-galactosamine)引起急性肝损伤的机制尚不完全清楚。D-半乳糖胺本身并无毒性,也不直接损伤肝细胞。它是肝细胞磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂,进入体内后与磷酸尿苷结合,形成磷酸尿苷一半乳糖胺复合物，致使磷酸尿苷耗竭。从而使依赖其生物合成的核酸、糖蛋白、脂糖等物质的合成受抑制，限制了细胞器及酶的生成和补充,细胞器、生物膜受损、钙离子内流，从而造成肝细胞损伤。另外，D-半乳糖胺引起细胞膜损伤可能与细胞膜中糖成分的改变有关，即己糖代替了中性糖介人细胞膜，导致膜分子结构发生变化。 [模型评价与注意事项] 1.本方法简便,成功率高,重复性好,其病变仅限于肝脏,在引起肝坏死的剂量下, 不引起其他脏器病变,对实验人员安全.因此D-半乳糖胺肝损伤模型是目前 公认的研究病毒性肝炎发病机制和药物治疗效果的较好模型. 2．造成机性肝损伤所需D-半乳糖胺的剂量.因实验动物的状态和实验要求的不同而有差异.一般使用200、400、500或850mg／kg体重，预实验时应摸索确定。 小鼠对D-半乳糖胺不甚敏感,腹腔和皮一卜注射的常用剂量均为800mg／kg体 重。 3．D-半乳糖胺与CCl4所致肝损伤的组织学改变明显不同。CCl4损伤主要表现在肝小叶中央静脉周围区大量肝细胞坏死和出血，脂肪变性十分明显；而D-半乳 糖胺引起的损伤则呈弥漫性、多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4明显，细 胞内有大量PAS染色阳性的毒性颗粒，嗜酸性小体较多见，与人类病毒性肝炎 的肝伤类似. 三、硫代乙酰胺急性肝损伤模型 [造模原理]
急性肾功能衰竭动物模型制作
四种急性肾衰竭模型的制作与体会 摘要:介绍四种常用急性肾衰竭模型的操作方法、致病机制、病理改变与临床 病程。肾动脉钳闭引起的肾脏缺血再灌注以及甘油、庆大霉素、氯化汞均可致 实验动物急性肾衰竭 病理学上可见典型的急性肾小管坏死。不同模型其病因 、 病理改变与临床病程不尽相同 实际工作中可根据不同需要选用不同的模型。关键词:急性肾衰竭;急性肾小管坏死;动物模型 急性肾衰竭(a c u t e r e n a l f a i l u r e A R F)是以肾功能在数小时到几天之内急 剧变化 导致肾脏排出氮质代谢废物的能力及维持体内水、电解质稳定功能丧 失为特征的急性肾脏病变。以往国内外许多学者都曾应用动物模型对A R F的病因、发病机制及病理生理等方面进行了研究。本文将就四种常见的引起急性肾 小管坏死致 A R F模型的操作方法、 致病机制、病理改变与临床病程作一比较。1材料和方法 1．1实验动物 S D大鼠 8～9周龄 体重 190～210g;C57B L P6小鼠 体重18～20g由中山 大学医学实验动物中心提供 均为清洁级(动物合格证号:)。 1．2药物与试剂 氯化汞、 甘油、 多聚甲醛(广州化学试剂厂)庆大霉素(广东三才医药集团 有限公司)苏木素、 伊红、 无色品红(美国 S i g m a公司)乙醇、 二甲苯(广 州化学试剂厂)。 1．3实验仪器设备 普通光学显微镜(O l y m p u s B H22日本)显微镜及图像分析处理系统(德国 Z E I S S公司) 1．4方法 1．4．1缺血再灌注致A R F模型:选用大鼠(n=10)麻醉后 打开腹腔找到左肾 肾门 简单分离血管周围结缔组织 用无创伤动脉夹夹闭肾门约 45m i n后 松 开血管夹 结扎右肾并切除 缝合切口。于术后12h、 24h、 72h分别杀检3、3、 4只大鼠。 1．4．2甘油致A R F模型:可选用大鼠或小鼠 本实验选用小鼠(n=8)禁水 16 h～24h后 以甘油(50%)10m L P k g体重分别在两侧后肢肌肉注射 之后实 验动物自由进食和饮水。于注射甘油后 3d、7d分别杀检3、 5只小鼠。1．4．3庆大霉素致A R F模型:选用大鼠(n=10)每天腹腔注射庆大霉素 160 m g P k g体重 连续 7d。于注射后8d、 14d分别杀检2、 3只大鼠。 1．4．4氯化汞致A R F模型:选用大鼠(n=11)一次性腹腔注射 H g C l21 m g P k g～2m g P k g本次实验采用剂量2m g P k g(012%)。于注射后 24h、 7d分别杀检3、 4只大鼠。 1．4．5标本采集:10%水合氯醛肌注麻醉 每只大鼠从下腔静脉取全血 2m L 左右 4℃静置 6～8h7000r P m i n离心 6m i n分离血清 取约 300μ L 用以检测血清肌酐(S c r)、尿素氮(B U N)-20℃冻存。取部分肾脏新鲜组织 以4%多聚甲醛固定 石蜡包埋 切片。 1．4．6肾组织学染色和肾脏病理损害的评估:石蜡包埋组织切片2μm厚 二甲 苯脱腊和梯队酒精水化后行 H E和 P A S染色。H E染色:苏木素 8m i n流水冲洗1 m i n蒸馏水浸1m i n加伊红 5m i n流水冲洗30s烤干 透明后用中性树胶封片。P A S染色:高碘酸20m i n流水冲洗1m i n蒸馏水浸1m i n加无色品红20 m i n流水冲洗5m i n苏木素套染30s烤干 透明后用中性树胶封片。肾小管损 伤定义为小管坏死、 萎缩、 扩张、刷状缘脱落、管型形成、 炎症细胞浸润和细胞浊肿。损伤按照 0到 5分分级评分:没有损伤:0分;损伤面积
课题：变形与强调——动物图案设计(一)
课题：变形与强调——动物图案设计（一） 课业类别：工艺课 授课教师：格致中学洪艳娟 授课时间：2000.4.28 课时：1课时 授课班级：市教育学院附中初一（10）班 教学目标： 1．引导学生对动物的形象、动态。性格特征进行细致观察学习艺术创作中变形与强调的手法。 2．能力目标：观察能力、创作能力。 3．德育目标：通过欣赏我国古代动物图案设计的资料，了解我国古代灿烂文化，培养爱国主义情感；培养对动物观察与表现的兴趣，增强保护动物意识。 教学重点： 引导学生对动物的观察 动物图案设计变形与强调的基本方法 教学难点： 在图案设计中不失动物基本特征 设计形式新颖独特的动物图案 教具： 自然界中有关动物的形象的光盘 有关动物的形象的卡通片 同一动物不同的变化方法图案 动物照片 有关动物图案的花布（实物）、商标 部分中国古代有关动物图案的资料 多媒体 学具： 有关动物图案的资料、图案设计稿纸、铅笔、课本 教学方法； 讲授法、图例讲解法、谈话法、发现法、练习法 作业要求： 运用变形与强调的方法完成一幅自己所熟悉、喜爱的动物图案稿 教学过程： 一、组织教学 稳定学生情绪 检查学具准备情况 二、启发式导入新课： 问一下同学们，有没有哪位同学没去过动物园？（没有）看来同学们都很喜欢动物。下面请同学们跟老师一起到美国德州“化石边缘野生动物中心”浏览一下动物世界。 [播放（自然界）动物画面片断] 以上是我们所看到的生活中的部分动物的形象，那么运用到日常生活用品设计的动物形象又是如何的呢？ [展示动物图案生活用品] 动物图案在浴中的运用——这是动物图案的装饰美化功能
动物图案在商标中的运用——这是动物图案的传达信息功能 象征性功能如根据民间传说设计的龙、凤形象它象征吉祥，赋予人们理想，它是人们某种思想、情感的寄托。 动物和我们的关系实在是太密切了。早在原始社会，我们的祖先在最原始的日用工具上装饰以动物图形。 [展示有关图片] 这是仰韵时期刻有动物图案的石斧 这是青铜器的装饰（鱼纹） 在物质文明和精神文明发达的今天，更需要以动物图案装饰、点缀、丰富和美化我们的生活[问]同学们能辩别出这些动物图案中的动物吗？ （学生答：能） [问]：同学们怎么知道它是什么动物？ （学生答：具备这一动物基本特征） 生活中的动物形象与动物图案中的动物有很多相同之处，相同的是，它们都具备某一动物基本特征，不同的是动物图案中的动物形象应比生活中动物更典型更生动，更富艺术感染力 这种把动物形象通过构思设计变成艺术形象来美化人们的生活，这个过程就叫着动物图案设计。 [出示课题：变形与强调——动物图案设计（第一课时）授课教师：洪艳娟] 今天，我们就来当一回动物图案设计家。 请同学们翻开课本P13页。 动物图案设计需要我们了解动物的形体、动态、性格、特征，它们的特点是动物的生存环境和条件造成直接经济损失的。在动物图案设计中不能失掉动物的基本特征，基本方法是变形与强调，使动物的形象更符合艺术形式，满足人们对美的追求与情感的表现。 [展示（自然界）熊猫形象] 熊猫是大家很熟悉的动物它是我国的国宝。 [展示比较写实的熊猫画] [问]这幅画是否属于图案？ [答：不是。]。动物图案是通过现实生活中的各种动物加工改造成适应于各种工艺设计的图案。 自然界中的动物自身中存在着美的因素。但它不能代替艺术形象而要经过艺术创造“变”图案形象，这种图案形象应是生活中的动物更典型，更理想，更强烈，更有集中性。 [展示熊猫图案设计变化过程] 那么，为什么要进行变化？ 一是它符合工艺制作要求，便于加工生产。 二是艺术表现形式多样化，避免雷同 那么怎样进行变化？ 请同学们先看下面一段录像，在看的过程中仔细观察该动物的体形神态和独有的特征。 [播放（自然界）老虎录像] [展示（自然界）老虎图片] 请同学们谈谈虎的体形神态和独特的特征 [学生回答，教师补充]虎生活在深山老林中是一种猛兽，体形厚实、四腿很有力、行走起来非常稳健。虎的神态具有一般猛兽的神威，虎身上有斑纹。 虎的体形线条流畅可以从头部经劲、背、尾画出一条有韵律而流畅的线条。先抓住虎的
肝损伤动物模型研究进展
【关键词】肝疾病；毒物，四氯化碳；醋氨酚；疾病模型，动物 肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有重要的现实意义。现将近年来国内外对实验性肝损伤动物模型分类、作用原理、造模方法及其优缺点等研究进展作综述和探讨。 1 化学性肝损伤动物模型 1.1 四氯化碳（carbon tetrachloride, ccl4） ccl4导致肝损伤的主要机制目前认为与其自身和自由基代谢产物有关。ccl4代谢产生的自由基进入机体后，在肝脏经细胞色素p450激活，生成三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基，攻击肝脏细胞膜上的磷脂分子，使得细胞膜、内质网膜发生氯烷化和脂质过氧化，损伤细胞膜、细胞器；还能与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，影响蛋白质代谢，并且破坏膜结构和功能的完整性，钙离子内流增加，影响细胞正常生理功能，最终导致肝细胞胞质中的可溶性酶渗出，细胞死亡[1]。 ccl4所致肝损伤可分为急性和慢性。急性肝损伤：赖力英等应用4 ml/kg ccl4剂量灌胃可诱发sd大鼠急性肝功能衰竭，死亡率达85 %[2]。慢性肝损伤：zhang等采用2 ml/kg ccl4腹膜内注射sd大鼠，每周2次，持续9周可伴有肝细胞坏死和明显炎症的肝硬化[3]。ccl4导致肝损伤是经典模型之一，能准确反应肝细胞功能、代谢及形态学变化，重复性好且经济。但ccl4同时还损伤动物的心、脾、肺、肾、脑等器官，另外，蒸汽和液体可由呼吸道、皮肤吸收，对人体也有一定毒性，操作时应注意。 1.2 α 萘基异硫氰酸酯(α naphthylisot hiocyanate, anit) anit是一种间接肝毒剂，其主要损害是通过膜脂质过氧化反应，致使肝细胞变性、坏死、胞内血清谷丙转氨酶(alt）大量溢入血流，同时还导致胆管上皮细胞肿胀坏死，引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁淤积，并伴随以点状坏死为主的肝实质细胞损害，产生梗阻性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。 1.3 d 氨基半乳糖(d galactosamine, d galn ) d galn是一种肝细胞磷酸尿嘧啶核苷干扰剂，通过竞争生成二磷酸尿苷半乳糖使磷酸尿苷耗竭,导致肝细胞的rna和浆膜蛋白合成障碍，限制细胞器的再生及酶的生成和补充，使细胞器受损，引起肝细胞变性、坏死；另外d galn还可以与肝实质细胞膜特异性结合，影响其完整性，引起肝细胞内ca2+增多，mg2+减少，抑制线粒体功能，激活磷脂酶，加速氧化自由基的产生，因此mg2+/ca2+的比例失调也是d galn导致肝细胞不可逆损害的因素之一；加上使肝脏谷胱甘肽减少，并激活库普弗释放tnf α引起细胞凋亡[5]。 李梅等筛选d galn造模的最佳剂量，比较d galn造成的大、小鼠急性肝损伤模型的稳定性，发现d galn 500 mg/kg诱导的大鼠急性肝损伤模型肝组织形态变化显著且死亡率低，更适用于保肝新药的筛选与评价[6]。d galn形成的急性肝功能衰竭模型是研究病毒性肝炎的发病机制及有效治疗药物理想的实验动物模型，其优点是该模型的病变仅限于肝脏，不涉及其它器官，症状、生物化学、组织学表现接近人，给药方便，重复性好，终点明确，具有可逆性，不造成环境污染及人体伤害，不需特殊的实验操作保护措施，对肝衰竭、肝性脑病、人工肝支持系统的评价研究有重要价值，但价格昂贵导致应用受限。 1.4 二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,dmn) dmn是常见的致肝癌剂，它通过微粒体代谢，其中间产物与细胞核酸、蛋白质等结合可造成细胞内大分子损伤，诱发大鼠肝窦壁肝星状细胞的活化，导致过多增多和沉积，引起肝纤维化形成；同时促进窦内皮细胞形成肝窦毛细血管化，加重肝损伤，促进肝纤维化的发展 [7]。 1.5 硫代乙酰胺( thioacetamide，taa) taa具有直接肝毒性作用，摄入后可经肝细胞内细胞色素p450混合功能氧化酶代谢为taa硫氧化物，干扰细胞核内rna转移，影响蛋白质合成和酶活力，增加肝细胞核内dna合成及有丝分裂，促进肝硬化发展，同时激活肝细胞磷脂酶
动物图案设计(原稿)
教学案例：动物图案设计 教学目标： 1、知识与技能：欣赏理解动物图案在生活中的广泛作用，学习动物图案设计的基本方法， 学会设计动物图案。 2、过程与方法：欣赏与创作相结合。 3、情感态度与价值观：有保护野生动物的意识；提高学生的设计和审美能力。 教学重点：动物图案设计的基本方法。 教学难点：丹顶鹤图案设计。 教学关键：动物特征的准确把握。 教学方法：讲授法、引导法、练习法 导言：在自然界动物中，你们有自己喜欢的动物吗？这些动物有的看似凶狠，充满了野性，但它们也有活泼可爱的一面，给我们的生活增添了很多情趣，不信哪！请看下面的小话剧：感谢两位同学的精彩表演，从刚才的小话剧中，你们是不是也受到了很多启迪？——保护动物也是我们青少年责无旁贷的责任。 如果我们把这些动物形象通过构思设计，变成艺术形象来美化和装饰我们的生活，那么这个过程就是——动物图案设计。我们的衣食住行都离不开图案艺术，很多生活用品上都印有精美的动物图案。那么怎样把生活中的动物形象设计成图案呢？今天我们就来学习这个内容。 新课： 一、设计的方法：写实→变化（概括整理） （一）写生：目的是为图案设计提供素材。 1、通过写生认识自然界的动物，熟悉动物的特征。（途径：写生、电视、报刊图片） 2、抓住动物的形态，动态、神态、习性的主要特征和能引起人们美感的那一部分去画， 如鸡、牛、狐狸、虎的特征。 （二）、变化：目的是为了突出主题，也称变形。即对写生搜集到的素材通过夸张变形等方法，进行艺术提炼和加工，创作生动形象的动物图案，这是一个从自然美到艺术美 的过程。 1、省略法：（毕加索：牛的变形） 删繁就简，省略细节，保留必不可少的部分，使图案的形象更加概括简洁。
动物图案设计 文档(新、选)
课题：变形与强调——动物图案设计 教学目的： 1、提高学生的观察能力和创作能力。 2、学会动物图案设计的方法，能对自然界动物的夸张变形的手法在图案设计中 恰当应用。 3、运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。 教学重点： 1．能用动物图案设计的方法，对自然界动物的夸张变形进行图案设计。 2．运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。 教学难点： 在设计中不失动物特征，运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。 教学方法：演示、讲授、观察、谈话、分组合作探究等 教具：色卡图片、电视机、VCD、色彩工具、动物图案资料等 课时：1课时 教学过程： 一、复习旧知识：（3分钟） 同学们：过去我们学习过那些色彩对比知识？师展示色卡图片（色相对比、明度对比、纯度对比） 二、启发式导入新课（12分钟） 1、展示印有动物图案的生活用品，播放动物世界录象，仔细观察。 2、展示运用强调与变形后的动物图案形象。实物与图案对比。 3、结合自己的动物图案设计稿谈你用什么方法设计动物图案？板书：变形与强 调——动物图案设计 4、学习动物图案设计的基础和动物图案设计的方法：勾线法、影绘法、线面结合、空线法。（展示范画） 5、学习涂色方法。
师强调：在色彩的应用上，无论是从哪种方法都要注意色彩的明度、冷暖对比效果。有主次分明的效果。同时告诉学生打破动物的色彩局限，大量使用装饰色，达到自己理想的装饰效果。为使大面积色彩涂的均匀，可加入白色，既调整了色彩的明度、纯度和覆盖力又比较强，效果好。 三、出示教师范画，指导学生运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。作业要求：运用色彩对比知识完成一幅动物图案设计效果图。（配乐） 学生完成作业，教师巡视指导。（25分钟） 五、课堂小结：在设计大师作品展中，展示评价学生作业，复习巩固动物图案设计方法及色彩知识的应用。（4分钟） 板书设计
动物图案设计 文档
课题:变形与强调——动物图案设计 教学目的： 1、提高学生的观察能力和创作能力。 2、学会动物图案设计的方法，能对自然界动物的夸张变形的手法在图案设计中 恰当应用。 3、运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。 教学重点: 1．能用动物图案设计的方法，对自然界动物的夸张变形进行图案设计。 2.运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。 教学难点: 在设计中不失动物特征，运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。 教学方法：演示、讲授、观察、谈话、分组合作探究等 教具：色卡图片、电视机、VCＤ、色彩工具、动物图案资料等 课时:１课时 教学过程： 一、复习旧知识：(3分钟） 同学们：过去我们学习过那些色彩对比知识?师展示色卡图片(色相对比、明度对比、纯度对比） 二、启发式导入新课（1２分钟) 1、展示印有动物图案的生活用品,播放动物世界录象，仔细观察。 2、展示运用强调与变形后的动物图案形象。实物与图案对比。 ３、结合自己的动物图案设计稿谈你用什么方法设计动物图案?板书:变形与强调——动物图案设计 4、学习动物图案设计的基础和动物图案设计的方法：勾线法、影绘法、线面结合、空线法。（展示范画） 5、学习涂色方法。
师强调：在色彩的应用上，无论是从哪种方法都要注意色彩的明度、冷暖对比效果。有主次分明的效果。同时告诉学生打破动物的色彩局限,大量使用装饰色,达到自己理想的装饰效果。为使大面积色彩涂的均匀,可加入白色,既调整了色彩的明度、纯度和覆盖力又比较强，效果好。 三、出示教师范画,指导学生运用色彩对比的知识对自己设计动物图案进行着色。作业要求：运用色彩对比知识完成一幅动物图案设计效果图。(配乐) 学生完成作业，教师巡视指导。（25分钟) 五、课堂小结：在设计大师作品展中,展示评价学生作业，复习巩固动物图案设计方法及色彩知识的应用。（４分钟) 板书设计