碱性磷酸酶染色
组织及血液碱性磷酸酶(AKP ALP)活性检测试剂盒说明书 微量法
组织及血液碱性磷酸酶（AKP/ALP）活性检测试剂盒说明书微量法 货号：BC1595 规格：100T/48S 产品说明： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP 广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算AKP活性。 自备仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品：液体×1支（EP管中），2μmol/mL酚标准液，4℃保存。 操作步骤： 一、粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂 一）进行冰浴匀浆，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。 2.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。 2.试剂三置于37℃水浴中预热30min以上。 3.空白管：取EP管，加入4μL蒸馏水，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；
加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A空白管。 4.标准管：取EP管，加入4μL标准品，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min； 加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂 四120μL，混匀；最后加入4μL上清液，混匀后于510nm测定吸光度，记为A对照管。 6.测定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL试剂二，40μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min； 加入试剂四120μL，混匀后于510nm测定吸光度，记为A测定管。 其中标准管和空白管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。 三、AKP/ALP活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1.血液中AKP/ALP活力计算 活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚定义为一个活性单位。 AKP/ALP活力(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷V样×V样总÷T=6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准品：2μmol/mL；V反总：反应体系总体积（mL），1020μL=1.02mL；V样：加入反应体系中上清液体积（mL），0.020mL；V样总：1mL；T：反应时间（min），15min。 2.组织中AKP/ALP活性计算 （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(Cpr×V样)÷T = 6.8×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr （2）按样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克样品每分钟催化产生1μmol酚。 AKP/ALP(U/g)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V反总]÷(V样÷V样总×W)÷T
组织及血液碱性磷酸酶试剂盒说明书
货号: QS2002 规格：50管/24样碱性磷酸酶（alkaline phosphatase ，AKP/ALP） 活性测定试剂盒说明书 可见分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： AKP/ALP是一种含锌的糖蛋白酶，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/ALP广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。 测定原理： 在碱性环境中，AKP/ALP催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510 nm吸光度增加速率，来计算AKP 活性。 自备仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂四：液体×1瓶，4℃避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。 标准品：液体×1支（EP管中），2 μ mol/mL酚标准液，4℃保存。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆，4℃、8000g离心10min，取上清液待测。 2.细菌或细胞：按照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建 议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3.血液可直接测定，或者适当稀释后测定。 测定步骤： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到510 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂三置于37℃水浴中预热30 min。 3. 空白管：取EP管，加入20μL蒸馏水，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A空白管。 4. 标准管：取EP管，加入20μL标准品，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A标准管。 5.对照管：取EP管，加入20μL上清液，200μL蒸馏水，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。 6. 测定管：取EP管，加入20μL上清液，200μL试剂二，200μL试剂三，混匀后置于37℃水浴中保温15min；加入试剂四600μL，混匀后于510 nm测定吸光度，记为A测定管。 第1页，共2页
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP微板法)
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法) 产品简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 Leagene 碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP 微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP 比色法，其检测原理是Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。在碱性条件下p -nitrophenol 转变成醌式结构，呈较深的黄色，产物黄色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 产品组成： 自备材料： 1、 水浴锅或恒温箱 2、 96孔板 3、 酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制显色工作液： 取出1支pNPP ，恢复至室温后溶解于ALP Assay buffer ，混匀， 冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6h 内用完。 2、 配制标准品工作液：取出p -nitrophenol(10mM)恢复至室温后，取10μl 溶解于190μ 编号 名称 TE0002 100T Storage 试剂(A): ALP Assay buffer 15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支 -20℃ 避光 试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)
碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) 简介： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase ，简称ALP 或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH 9.2~9.8。碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中, 碱性磷酸酶活性部位呈红色，位于胞桨。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP 固定液固定，水洗。 2、滴加配制好的ALP 孵育液，放入湿盒中，避光孵育，水洗。 3、Lea 苏木素染色液复染或甲基绿染色液复染。 4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。 染色结果： 临床意义： 1、 类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。 2、 急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。 3、 再生障碍性贫血积分常增高，PNH 、MDS 积分常减低。 编号 名称 DE0004 4×2ml DE0004 4×10ml DE0004 4×20ml Storage 试剂(A): ALP 固定液 2ml 10ml 20ml RT 避光 试剂(B): ALP 孵育液 B1: AS-BI 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 B2: FBB 染色液 1ml 5ml 10ml -20℃ 避光 临用前，按B1:B2=1:1比例混合，即为ALP 孵育液，即配即用。 试剂(C): Lea 苏木素染色液 2ml 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(D): 甲基绿染色液 2ml 10ml 20ml RT 避光 使用说明书 1份 ALP 活性部位 红色 细胞核 蓝色(苏木素)或绿色(甲基绿)
骨源性碱性磷酸酶
骨源性碱性磷酸酶 骨源性碱性磷酸酶即为NBAP. 骨碱性磷酸酶(NBAP)是成骨细胞的表型标志物之一，它可直接反映成骨细胞的活性或功能状况,是近年来主要用于小儿佝偻病早期诊断和亚临床鉴别的特异性参考指标,也是目前用于评价人体骨矿化障碍的最佳指标。 骨源性碱性磷酸酶是由骨质中分泌出来，当骨头中钙盐沉淀不足时，该酶分泌增多，骨中钙盐充足时就分泌减少，所以用来帮助检查有无钙吸收不足。 骨碱性磷酸酶参考值≤200单位/L 检测小儿血中骨源性碱性磷酸酶催化活性，籍以筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其他原因引起的代谢性骨病。 骨碱性磷酸酶参考值如下： 正常水平≤200u/L 预防水平 250u/L 医疗水平 300u/L 你好！骨源性碱性磷酸酶是用于检测佝偻病的一个指标，当缺少维生素D和钙时，骨头钙化不好时，它会升高，但一般明显升高才有诊断意义。你孩子的结果只比参考值的上限（200）高10，可以是实验误差造成，也可以是佝偻病的早期造成，是不必过度担心，补充维生素D和钙剂，过些日子再复查一次，很可能就正常了。 追问 昨天医生给我宝宝开了龙牡浸在壮骨颗粒和复方三维右酸钙糖浆，可是我的宝宝复方三维右酸钙糖浆吃不下，有没有什么别的药让他可以吃的 回答 你好!如果我没有记错的话，龙牡壮骨颗粒中已含有维生素D和钙，你的孩子缺维生素D和钙并不重，已经够了，两种都吃恐怕不是很必要。 补维生素d 最天然的方法是，多晒太阳，晒太阳可帮助身体合成维生素d ，可以说是没副作用的补VD方法 另外，就是吃含补维生素d 多的食物做成的粥或汤， 而通过食物摄取维生素D是不会引起中毒的。含量较多的食物有大马哈鱼、红鳟鱼、鳕鱼肝油、比目鱼肝油、奶油、鸡蛋、鸡鸭肝等动物肝脏以及牛奶等，或是买回维生素d的保健品进行补VD
碱性磷酸酶测定试剂盒注册技术审查指导原则(2016年修订版)
附件1 碱性磷酸酶测定试剂盒注册 技术审查指导原则 （2016年修订版） 本指导原则旨在指导注册申请人对碱性磷酸酶测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对碱性磷酸酶测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 碱性磷酸酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理对人血
清、血浆或其他体液中的碱性磷酸酶活性进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。 碱性磷酸酶活性的测定方法目前主要有连续监测法和比色法两类： 1.连续监测法（磷酸对硝基苯酚底物法） 碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚（4-NPP），生成对硝基苯酚（4-NP），在特定波长处监测吸光度变化速率，可计算碱性磷酸酶活性。 2.比色法（磷酸苯二钠底物法） 碱性磷酸酶催化水解磷酸苯二钠，生成游离酚，酚与4-氨基安替比林结合，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物，在特定波长处监测吸光度值，可计算碱性磷酸酶活性。 从方法学考虑，本文主要指以碱性磷酸酶水解底物引起特定产物的吸光度的改变对碱性磷酸酶活性进行定量测定的体外诊断试剂，不包括干化学和酶联免疫检测试剂。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），碱性磷酸酶检测试剂属于酶类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求
碱性磷酸酶米氏常数的测定
碱性磷酸酶米氏常数的测定 [目的与要求] 通过碱性磷酸酶米氏常数的测定，了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性，加深对酶促反应动力学的理解。 [原理] 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时，反应速度会达到一个极限值，即最大反应速度(V max)，如图37所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度，[S]为底物浓度，K m为米氏常数(Michaelis constant)，而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时，K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol／L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数，测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法，大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定，K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程，推导出如下方程式，即： 1/V = （K m +[S]）/ V max[S]或1/V = K m/ V max·（1/[S]）+1/ V max 此式为直线方程，以不同的底物浓度1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标，并将各点连成 一直线，向纵轴方向延长，此线与横轴相交的负截距为-1/ K m，由此可以正确求得该酶的K m 值，如图38所示。 图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法 本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同底物浓度的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多，底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性，也可以从标准曲线上查知酚的含量，进而算出酶活性的大小。反应式如下：
骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比
骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果对比 目的对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果。方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。结果80例佝偻病患儿经不同方法检测后，骨源性碱性磷酸酶检测结果准确率高达97.50%，显著高于血钙检测准确率73.75%，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。结论骨源性碱性磷酸酶与血钙检测结果均可作为佝偻病诊断依据，但血钙误诊率较高，而骨源性碱性磷酸酶检测准确率较高，临床医生应根据患儿实际情况进行综合判断，从而提高患儿诊断正确率及治疗效果，保障其预后及生活质量。 标签：骨源性碱性磷酸酶；血钙；对比 佝偻病是威胁儿童身心健康的严重疾病，发病原因主要为机体中钙营养严重丢失，目前主要通过临床实验室及影像学检查诊断此类疾病。本文将对我院自2013年1月1日～12月31日前来就诊的80例佝偻病患儿给予临床研究，从而对比分析骨源性碱性磷酸酶与血钙测定结果，为提高佝偻病患儿检出率提供可靠依据，现总结如下。 1资料与方法 1.1一般资料80例佝偻病患儿中男童49例、女童31例，年龄1～6岁，平均年龄（ 2.98±1.02）岁。 1.2方法 1.2.1纳入与排除标准①经临床检查符合世界卫生组织（WHO）制定的佝偻病诊断标准；②无肝脏、肾脏、心脏等机体重要器官严重器质性疾病；③无胃肠道疾病、血液系统疾病、恶性肿瘤疾病、精神类疾病、免疫系统疾病、内分泌系统疾病；④体温正常，无骨折、强直性骨关节炎等疾病；⑤对本次研究具有知情权。 1.2.2研究方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检查人员完成80例佝偻病患儿骨源性碱性磷酸酶及血钙检测，记录患儿两种检测结果，给予统计学分析后得出结论。抽取患儿静脉末梢血液2ml作为检测样本，骨源性碱性磷酸酶检测方法为碘硝基四氮唑紫法，由北京中生金域诊断技术有限公司提供ZS0iso APNB试剂盒，以检测结果不大于200U/L为阴性，反之为阳性；血钙采用偶氮砷法检测，由深圳迈瑞公司提供BS-800生化分析仪及其配套试剂，以检测结果不小于1.55mmol/L为阴性，反之为阳性。 1.3统计学方法使用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析，计量资料采用t检验（由x±s表示），计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
碱性磷酸酶-基因实验
编号 内蒙古大学生命科学学院生物系 基因工程实验室 本科基因工程实验论文开题报告 论文题目：碱性磷酸酶基因表达载体的 构建及在大肠杆菌中的表达 学生姓名： 年级： 专业： 指导教师： 二〇一三年八月十二日
学生姓名 论文题目 开题时间 项目来源本科生基因工程大实验课 一、立论依据 项目的研究意义，国内外研究现状及发展趋势分析，主要参考文献及出处：碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP, ALKP) (EC 3.1.3.1)属磷酸单脂酶族，底物专一性较低，广泛应用于表位连锁图谱，探针标记测序和免疫组织化学等领域。分子生物学中，ALP分解寡聚核甘酸的末端单酯化磷酸，是常用的遗传工程酶。1 产碱性磷酸酶的生物有很多，从细菌到高等哺乳动物均有分布。人血液中的碱性磷酸酶含量是重要的指标之一，其检验结果及异位表达对癌症等许多疾病有着指导意义。2，3目前商业碱性磷酸酶主要来源于动物（小牛肠碱性磷酸酶）、植物（麦芽）和微生物（细菌碱性磷酸酶）(Bacterial alkaline phosphatase, BAP)。 在革兰氏阴性细菌中，BAP表达于细胞膜外的周质空间。相比表达于胞内使其更机动和高效。BAP的功能已基本揭示，简单来说BAP是细菌产生摄取应用的自由磷酸基团的一种方式，4被大量的实验证据所支持。然而，缺乏BAP的E. coli 仍然能够存活，所以应该还存在相关的替代机制。5 目前，对BAP的研究热点主要由于其海洋有机磷利用的酶特性等集中于海洋微生物领域。海洋细菌碱性磷酸酶的亚细胞研究揭示了其相关合成基因及表达特性对于海洋有机磷循环及海洋生物多样性的贡献。研究人员证实了3733种BAP序列(包括PhoA, PhoD, and PhoX )，包含胞质分泌及胞外位于不同支载结构。大量的实验数据支持了细菌于海洋表面部分光耦合的磷摄取机制。6鉴于磷对于海洋维持初级产能的重要性，并且考虑到其最主要的来源之一－有机磷分解，海洋生物BAP
碱性磷酸酶显色剂使用方法
5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate (5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐), BCIP/NBT （四唑硝基蓝）是碱性磷酸酶底物, 产物为深蓝色, 在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP被水解, 水解产物与NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 使用方法 1. 在膜或组织切片，最后一次洗涤完毕后，加入适量BCIP/NBT染色工作液 2. 室温避光孵育5-30分钟或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深度. 3. 用蒸馏水洗涤1-2次即可终止显色反应 4. 膜标本可干燥后避光保存；组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可以用中性红复染染色 干细胞成骨诱导的常用染色方法有几种 碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 成骨细胞染色方法 以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2% CaCl2 10ml 2% MgSO4 1ml 【步骤】 （1）将无菌的玻片放入培养皿中，传代时加入适量的细胞悬液，作细胞爬片，呆细胞长满玻片后取出。 （2）PBS冲洗后用冷丙醇固定10min，蒸馏水冲洗数次。 （3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。自来水冲洗数次。 （4）2%硝酸钴中浸3-5min，蒸馏水洗数次。 （5）1%的硫化铵中2min，自来水冲洗，自然干燥，封固。 【结果】胞质中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状沉淀。 2偶氮偶联法： 【孵育液配制】 萘酚AS-BI磷酸盐20mg DMSO 0.5ml 0.2mol/L巴比妥醋酸缓冲液（PH 9.2）50ml 六偶氮副品红0.5ml
碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)产品技术要求beiken
碱性磷酸酶测定试剂盒（NPP底物-AMP缓冲液法） 适用范围：本品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。 1.1包装规格 1.2产品组成成分 试剂盒由试剂A 、试剂B 组成，各组分见表2。 表2 试剂组成 2.1外观 试剂为澄清、透明溶液，无沉淀及絮状悬浮物，外包装完整无破损。 2.2净含量 用通用量具量取，试剂的净含量应不少于标示量。 2.3试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度
用试剂盒测试生理盐水，在405nm的波长下测试，1cm光径下试剂吸光度值不大于0.80。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 用试剂盒测试生理盐水，试剂空白吸光度变化率ΔA/min，应不大于0.005。 2.4分析灵敏度 测试一定浓度的碱性磷酸酶，120U/L的碱性磷酸酶引起的吸光度变化率ΔA/min 大于0.024。 2.5线性区间 试剂线性在[25，750] U/L区间内，线性相关系数│r│应不小于0.990，当检测范围在[25，100）U/L区间内，绝对偏差不超过±10U/L；当检测范围在[100，750]U/L区间内，相对偏差不超过±10%。 2.6精密度 2.6.1重复性 用质控品重复测试所得结果的变异系数CV应不大于5%。 2.6.2批间差 用同一水平浓度的质控品分别测试3个不同批号的试剂盒，其相对偏差不大于10%。 2.7准确度 进行比对试验（与国内批准上市的试剂盒进行比对），用线性回归方法计算两组结果的相关系数（│r│应不小于0.990）及每个浓度点的偏差。当测试值在[25，40）U/L区间内，偏差不超过±4 U/L；当测试值在[40，750]U/L区间内，偏差不超过±10%。 2.8稳定性 试剂贮存在2℃～8℃条件下，有效期为18个月。有效期满后，分别检测2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7项，结果符合各项要求。
骨型碱性磷酸酶
骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用 文章来源：医学网发表时间：2007-07-04 09:51:00 关键字：磷酸酶 碱性磷酸酶(ALP，EC3. 1.3.1)是在碱性条件下水解多种磷酸酯并具有转磷酸基作用的一组酶，包括由不同结构基因编码的小肠、胎盘、生殖细胞和非特异型4种同工酶。前三者基因定位于染色体重2q34-37的相邻位点，后者基因定位于染色体的1q36-34之间，其中非特异性型碱性磷酸酶在基因表达后经过不同的修饰形成肝、肾、骨等次级同工酶。对这些同工酶的理化性质、分子生物等特性、作用机制的深入研究以及准确的定量测定将有助于其在临床上的应用。本文拟就年来国际上常用的骨型碱性磷酸酶(BAP)研究方法及其在临床上的应用研究进展作一综述。 1骨型碱性磷酸酶的特性 骨型碱性磷酸酶是成骨细胞的一种细胞外酶，为糖蛋白，分子量约为12000道尔顿。该酶在细胞内合成时新生的酶蛋白先在内质网糖基化，再通过高尔基体转运到细胞膜表面，通过多糖链与磷酯酰肌醇相连嵌合到细胞膜的外浆膜。在多糖-肌醇磷酸特异水解酶的作用下，骨型碱性磷酸酶能被释放到血循环中。骨型碱性磷酸酶在机体的生理功用主要是在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。骨型碱性磷酸酶在体内的其他生化功用有待进一步的阐明。 2骨型碱性磷酸酶的检测
人血清中含有的碱性磷酸酶同工酶分别来自骨骼、肝脏、小肠和胎盘组织(在妊娠时)。胎盘型和小肠型碱性磷酸酶同工酶的活性能相对容易被区分，而区别骨型和肝型这两种同工酶活性就相当困难，因为这两种同工酶来源于同一基因，其动力学性质、电泳迁移率和其他理化性质均十分相似，且相互间有交叉免疫反应，目前鉴别和定量测定骨型碱性磷酸酶的方法可以分为两大类：电泳法和非电泳法。 电泳法主要利不同的同工酶之间物理性状、分子大小及荷电量的不同而进行。根据所用的支持特和操作的方法可分为：醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电聚焦电泳和亲和电泳等。其中以等电聚焦电泳和亲和电泳的分辨效果较好。等电聚焦电泳分辨率高特别适合次级同工酶的分离。Sinaha等报告的一种固相pH梯度等电聚焦电泳以聚丙烯酰胺为载体，用两性电解质制成固定的pH梯度凝胶，避免了由于不稳定的pH梯度而引起的所谓“阴极漂移”现象。该法可将等电点准确到小数点后两位并把正常血清的10条酶带压缩在pH3.90～4.79范围。Rosalki等建立的亲和电泳法是利用麦胚植物血凝素(WGA)能特异地和骨型碱性磷酸酶结合形成WGA-骨型碱性磷酸酶复合物，该复合物在电场中不泳动或泳动很慢，从而将骨、肝型碱性磷酸酶清楚地分开。该方法简便，重复性好，骨型碱性磷酸酶的批内与批间CV分别为3.2％和5.2％。亲和电泳的分离效果与WGA的浓度有关，其最适浓度随电泳条件而异。因此，采用不同的电泳载体和不同的缓冲液时均应重新评价WGA的最适用量。
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒使用说明
碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法) 货号：G5610 有效期：6个月有效。 产品内容： 产品规格 试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml 试剂(B):ALP显色液 2.5ml 试剂(C):显色基液7.5ml 试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml 试剂(E):ddH2O1ml 产品说明： 碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。 碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。该试
剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 自备材料： 96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪 操作步骤(仅供参考)： 1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。按照下表稀释系列标准品溶液。 012345 010******** Phenol(0.05mg/ml)(μ l) ddH2O(μl)55453525155 相当于金氏单位(U/L)010******** 2、准备样品： （1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。 （2）血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-80℃冻存，但为了消除样品本身颜色的干扰，需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。 （3）高活性样品：如果样品中含有较高活性的碱性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或PBS 等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。
BCIP NBT碱性磷酸酶显色试剂盒
仅供科研使用版本号：180718 BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒 【产品组成】 【保存条件】 4℃,避光,12个月。 【产品概述】 BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit)是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物，在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。 BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit可用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测\细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。 【使用方法】 1、对于组织切片或细胞样品或膜，在与碱性磷酸酯酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗 涤液洗涤3～5次，每次3～5min。 2、对于检测内源性碱性磷酸酯酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3～5次，每 次3～5min。 3、按照如下比例依次加入各溶液，混匀后即配制成BCIP/NBT染色工作液： 4、洗涤完毕后，去除洗涤液。 5、加入适量BCIP/NBT染色工作液，确保能充分覆盖样品。 5、室温避光孵育5～30min或更长时间(可长达24小时)，直至显色至预期深浅。 6、去除BCIP/NBT染色工作液，用蒸馏水洗涤1～2次即可终止显色反应。 7、对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，如有必要可以用中性红染色液(neutral red staining solution)染色，以便于观察。对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。
血清骨型碱性磷酸酶质量的测定
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 血清骨型碱性磷酸酶质量的测定 导语：当大人们带着自己的小孩子去体检的时候总有一项检测是血清骨型碱性磷酸酶质量的测定，很多家长们啊看到一长串读不通顺的字肯定是不懂得这个 当大人们带着自己的小孩子去体检的时候总有一项检测是血清骨型碱性磷酸酶质量的测定，很多家长们啊看到一长串读不通顺的字肯定是不懂得这个到底是测量什么的，事实上呢，这个血清骨型碱性磷酸酶质量啊是看看小孩子有没有佝偻病的，下面来具体的讲一讲吧。 你好，碱性磷酸酶是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。单独升高一点并没有关系，要结合其他的检察才能确诊。 碱性磷酸酶升高主要见于： 1.肝胆疾病：阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等。 2.由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松等血清碱性磷酸酶会升高。 3.白血病、甲状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升高。 如果有条件可以做一下碱性磷酸酶同功酶，或者要求医院用热稳定试验鉴别是来自肝脏还是来自骨骼. 维生素D缺乏病(vitamin D deficiency)是由于日晒少(皮肤经紫外线照射后，可使维生素D前体转变为有效的维生素D)、摄入不足(奶、蛋、肝、鱼等食物)、吸收障碍(小肠疾病)及需要量增加(小儿、孕妇、乳母)等因素，使体内维生素D不足而引起的全身性钙、磷代谢失常和骨骼改变。同时影响神经、肌肉、造血、免疫等组织器官的功能，严重影响儿童的生长发育。 现在的食物什么的都有那么多的毒素农药什么的，小孩子们因为缺少了应该的要得到的营养元素很容易就会得上佝偻病的，很多家长们 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒
货号: QS2902 规格：50管/48样 土壤碱性磷酸酶活性测定试剂盒 分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响。通常按照其最适pH范围，分为碱性、中性和酸性三种类型磷酸酶。 测定原理： 碱性环境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-AKP/ALP活性。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。 试剂三：液体×1瓶，4℃保存。 试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48 μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用） 标准品：液体1.5mL×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。 催化反应： 称取风干混匀土壤约0.1g，加入50μL甲苯（自备），轻摇15min；加400μL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。 显色反应： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。 2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL蒸馏水，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 空白管。 3. 标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL标准液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 标准管。 4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50 μL上清液，100 μL试剂三，20 μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830 μL，混匀后25℃静置30 min，于660 nm测定吸光度，记为A 测定管。 注意：空白管和标准管只需测定一次。 第1页，共2页
碱性磷酸酶测定
碱性磷酸酶测定 一、试剂配制 1、甲苯 2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液：称取20g纯氯化铵，溶于 少量水（我配200ml，用一百多毫升水溶40g氯化铵）， 然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml，用pH试纸测 pH，pH为10即可，不用刻意调pH。（氨水很臭，需要带 口罩在通风橱配） 3、8%铁氰化钾溶液（只能用一周，放冰箱保存）：取8g铁氰 化钾，用水定容至100ml。 4、2%4-氨基安替比林（只能用一周，放冰箱保存）：取2g4- 氨基安替比林，用水定容至100ml。 5、0.5%磷酸苯二钠溶液（用pH9.4硼酸缓冲液配） （1）先配制pH9.4硼酸盐缓冲液：称取4.768g硼砂（十 水合四硼酸钠）和0.44g纯氢氧化钠，用蒸馏水定容至 1000ml。（硼砂需要用电炉加热配制，硼砂用称量纸称量， 氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH，pH试纸测为9） （2）称取5.05g磷酸苯二钠，用pH9.4硼酸缓冲液定容 至1000ml。 6、酚标准溶液： 酚溶液：称取1g苯酚用水溶至1L，保存于暗色瓶中。（苯酚还是需要水浴加热，详细配法看脲酶测定，但由于1g很难准确称量，
并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚，但测量后不影响标线的准确程度，R值为三个9） 酚工作液：取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL) 二、测定过程 1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶（每个样需要3个 重复，前两个重复和第三个重复分开放，第三个重复为 无基质重复，每天做两个无土样重复，此重复加甲苯、 磷酸苯二钠溶液），加5滴甲苯（用滴管加5滴），盖盖 盖子后用震荡机低速震荡15min（我选择160的速度）， 然后给第三个重复加入20ml蒸馏水，给前两个重复加入 20ml磷酸苯二钠，盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒 温箱培养2小时。 2、培养结束后过滤，过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶（用 5ml枪加，由于过滤液体没那么多，每加一个样用两遍蒸 馏水润洗枪），加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢 氧化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾 溶液（用1ml枪加），每加一种都要充分摇匀。立即显色， 立即定容。 3、标准液是吸取1,3,5,7,9,11,13ml氮的工作液，移至50ml容 量瓶，加水加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢氧 化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾溶 液。（和第二条同步）
骨型碱性磷酸酶的检测方法和临床应用
检验科开展骨型碱性磷酸酶（BALP）测定骨型碱性磷酸酶(BALP)是成骨细胞分泌的一种糖蛋白，在成骨过程中水解磷酸酯，为羟磷灰石的沉积提供必须的磷酸；同时，水解焦磷酸盐，解除其对骨盐形成的抑制作用，有利于成骨过程。 临床应用: 1.用于亚临床佝偻病、骨代谢障碍及高转化骨质疏松的诊断。 2.指导补钙或维生素D治疗：易患低钙人群或疾病主要包括儿童、孕产妇、老年人、佝偻病、骨质疏松、肝肾甲状腺疾病等，当人体缺钙或维生素D时，血钙下降，甲状旁腺激素分泌，促进肾脏合成大量1,25(OH)2维生素D3生成，后者可使静止的成骨细胞转化成活跃的成骨细胞，合成大量的BALP释放入血，BALP活性与活性成骨细胞的数量成正比，是反映成骨细胞活性和数量的专一标志物。补钙或维生素D治疗后4周后复查BALP，发现BALP活性无变化应更换钙剂和避免长期服用导致的维生素D中毒。 3．BALP活性的检测以及动态观察可为骨代谢异常疾病早诊、疗效监测、病情预后等提供有效依据：骨密度的改变太慢不能作为临床监测骨代谢异常疾病（骨质疏松、骨软化症、佝偻病、Paget病、早期甲亢、慢性肾衰、肾移植病人等）治疗效果的早期反应。BALP参与成骨过程并且其活性在血清中稳定没有昼夜变化，因此可作为观察骨形成变化率，为临床提供有效治疗的监测手段。 4.生长激素缺乏的儿童，使用生长激素后生长速率加速，BALP活性增加，并且与生长激素治疗所诱导的高SD分数正相关，能有效地监测对生长激素治疗的反应性。 5.慢性肾功能衰竭病人在接受肾移植后，常发生持续性的甲状旁腺机能亢进，BALP活力与甲状旁腺激素呈明显正相关，与骨皮质的密度呈负相关。 标本采集：抽静脉血2ml置红色盖非抗凝管送检，或安排患者来检验科取手指血。 项目信息：血清骨型碱性磷酸酶（BALP）编码250305013-1，参考值<200U/L，收费50元/次。 检验科2008.4.10
碱性磷酸酶(ALP)
International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC) Scientific Division Committee on Reference Systems for Enzymes (C-RSE) IFCC Primary Reference Procedures for the Measurement of Catalytic Activity Concentrations of Enzymes at 37 °C Part 9. Reference Procedure for the Measurement of Catalytic Concentration of Alkaline Phosphatase [Orthophosphoric-Monoester Phosphohydrolase, Alkaline Optimum, EC 3.1.3.1] Gerhard Schumann1, Rainer Klauke1, Francesca Canalias2, Steffen Bossert-Reuther3, Paul F.H. Franck4, F.-Javier Gella5, Poul J. J?rgensen6, Dongchon Kang7, Jean-Marc Lessinger8, Mauro Panteghini9, Ferruccio Ceriotti10 1Medizinische Hochschule Hannover, Institut für Klinische Chemie, Hannover, Germany 2Departament de Bioquímica i Biologia Molecular, Laboratori de Referència d'Enzimologia Clínica, Universitat Autònoma de Barcelona, Cerdanyola del Vallès, Spain 3 Roche Diagnostics GmbH, Research & Development Department, Mannheim, Germany 4Klinisch Chemisch en Hematologisch Laboratorium, HagaZiekenhuis, Den Haag, The Netherlands 5BioSystems S.A., Barcelona, Spain 6Department of Clinical Chemistry, Kolding Hospital, Kolding, Denmark