重组羧肽酶的性质
重组羧肽酶B的性质
关键词：羧肽酶B,carboxypeptidase B,碱性峰
来源：雅心生物
羧肽酶B(EC3.4.17.2)专一用于蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）的水解；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。分子量为35kD，等电点为6.0，最适pH为7-9。羧肽酶B是抗体碱性峰检测的特异酶，通过比较酶切前和酶切后的图谱来计算抗体碱性变体的比例，对于抗体的发酵工艺和纯化工艺稳定性的控制都具有重要的意义。
而在抗体碱性峰的检测中，没有完全统一的标准，如酶解缓冲液酶的用量，酶解时的温度和时间等。而这些与酶的性质密切相关。
可以选择的羧肽酶B有两种，一种是动物胰腺提取的羧肽酶B，一种是基因工程的重组羧肽酶B，前者由于胰腺中含有各种蛋白酶，如胰蛋白酶、糜蛋白酶等，常常不能彻底去除，在酶切时会有非特异的酶切杂峰出现，影响结果判断。后者为基因工程生产的，成分单一，无杂酶，比活高，应用上更有优势。
羧肽酶B的结构
天然存在的羧肽酶B是由前羧肽酶原B（preprocarboxypeptidase B，preproCPB）经酶解产生，后者N-末端包含108个氨基酸（其中13个氨基酸为信号肽序列，95个氨基酸组成前导肽部分）的多肽片段与CPB相连。前羧肽酶原B在转运到内质网的过程中，信号肽被切掉，得到无酶活性的羧肽酶原B （procarboxypeptiedase B,proCPB）并从细胞中分泌出来，最终在小肠中经胰蛋白酶在Arg-95处酶解，成为具蛋白酶活性的CPB。proCPB的分子量为46kD，由401个氨基酸组成；CPB分子量为35kD，由306个氨基酸组成（如图1）。在CPB中，前体的活化主要依赖胰蛋白酶在Arg95位的切割，半球形前导肽被切割后，它既不会抑制酶体，也不再与之结合，这使得酶体能迅速发挥功能，并对前导肽C-端的Arg进行切割。
图1羧肽酶原B的三维结构及其激活部位示意图
（上面暗红色部分代表前肽，下面蓝色部分代表羧肽酶B，箭头所指为胰蛋白酶酶切激活位点）
羧肽酶B的性质
取重组羧肽酶B冻干粉，纯度见图2。研究了重组羧肽酶B的最适pH，最适温度，pH稳定性及温度稳定性，对于CPB的使用起到指导作用。同时做了溶液的反复冻融稳定性，对于CPB酶液的储存和使用起到指导作用。
图2纯化后重组羧肽酶B的电泳分析
1、羧肽酶B的pH稳定性
将纯的重组羧肽酶B用纯水溶解为10mg/ml，之后用以下缓冲液稀释使酶液的终浓度为1mg/mL，pH分别为3.0、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、10.0、11.0、12.0，25℃孵育12h后测活。结果见图3（左）。
2、羧肽酶B的最适pH
测定rCPB纯酶液浓度为1mg/mL,在不同pH条件下的催化速率，底物浓度为0.1mM/L，pH分别为3.0、4.0、5.0、6.0、6.5、7.0、7.5、7.65、8.0、8.5、9.0、10.0、11.0、12.0，pH3.0-5.0用50mMNaAc-HAc缓冲液配制，pH6.0-7.0用50mM KPB磷酸盐缓冲液配制，pH7.5-8.5用50mM Tris-HCl缓冲液配制，pH9.0-12.0用50mM Gly-NaOH缓冲液配制。结果见图3（右）。
图3rCPB酶液的pH稳定性（左）和最适反应pH（右）
CPB在pH7.0-9.0缓冲液中稳定，25℃孵育12h无活性损失；最适pH表明，在pH7.6活性最大，在pH7.5-pH8.5活性均可以。在pH≤7和pH≥10时，基本无活性。
3、羧肽酶B的温度稳定性
将rCPB酶液配成浓度为1mg/mL，置于4℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃条件下，每个温度三个平行，时间定为15min、30min、1h、2h、4h、8h、20h分别取样测定其活性，以初始时酶活定为100%，以残余酶活百分比表示测
定结果。
4、羧肽酶B的最适催化温度
在不同温度下恒温水浴测活底物，使底物的温度分别为4℃、25℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃，取适量rCPB纯酶液，测定活力。以254nm吸光值OD254为纵坐标，时间为横坐标，结果表示见图4（右）。
图4rCPB酶液的温度稳定性（左）和最适催化温度（右）
CPB在40℃以下保温10h，均活性稳定。最适催化温度显示，在3min内，40℃以下均可保持良好的线性，其中，以25℃为最佳。
5、羧肽酶B酶液的反复冻融稳定性
将rCPB酶液反复冻融，测定每次冻融后的酶活，计算活力保留率，得到同一管rCPB反复冻融10次后的活力稳定性（如图5）。
图5rCPB酶液的反复冻融稳定性
结果表明重组羧肽酶B反复冻融稳定性好。经过10次的反复冻融，几无活性损失。
重组羧肽酶B
重组羧肽酶B Cat.No.：RCPB01 CAS:9025-24-5 EC:3.4.17.2 来源：基因工程生产，大肠杆菌表达 1.简介 羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。 2.优势 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。 纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。 稳定：冻干粉，易于储存和运输。3.特性 来源重组大肠杆菌 纯化HPLC 产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉 成分Tris，NaCl和糖类 蛋白含量35%-60% 电泳鉴定 （12.5%SDS-PAGE） 单一主条带 分子量33.8kD 比活≥170 u/mg pro 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于 10ppm 酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水 解的酶量为一个酶活单位。 4.用途 重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其 它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。
5.推荐使用方法 用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。6.储存和稳定性 重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。
牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范融资投资立项项目可行性研究报告(中撰咨询)
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目录 第一章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目概论 (1) 一、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目名称及承办单位 (1) 二、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目可行性研究报告委托编制单位 (1) 三、可行性研究的目的 (1) 四、可行性研究报告编制依据原则和范围 (2) （一）项目可行性报告编制依据 (2) （二）可行性研究报告编制原则 (2) （三）可行性研究报告编制范围 (4) 五、研究的主要过程 (5) 六、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范产品方案及建设规模 (6) 七、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目总投资估算.. 6 八、工艺技术装备方案的选择 (6) 九、项目实施进度建议 (6) 十、研究结论 (7) 十一、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目主要经济技术指标 (9) 项目主要经济技术指标一览表 (9) 第二章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范产品说明 (15) 第三章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目市场分析预测 (16) 第四章项目选址科学性分析 (16) 一、厂址的选择原则 (16)
二、厂址选择方案 (17) 四、选址用地权属性质类别及占地面积 (17) 五、项目用地利用指标 (17) 项目占地及建筑工程投资一览表 (18) 六、项目选址综合评价 (19) 第五章项目建设内容与建设规模 (20) 一、建设内容 (20) （一）土建工程 (20) （二）设备购臵 (20) 二、建设规模 (21) 第六章原辅材料供应及基本生产条件 (21) 一、原辅材料供应条件 (21) （一）主要原辅材料供应 (21) （二）原辅材料来源 (21) 原辅材料及能源供应情况一览表 (22) 二、基本生产条件 (23) 第七章工程技术方案 (24) 一、工艺技术方案的选用原则 (24) 二、工艺技术方案 (25) （一）工艺技术来源及特点 (25) （二）技术保障措施 (25) （三）产品生产工艺流程 (26) 牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范生产工艺流程示意简图 (26) 三、设备的选择 (27) （一）设备配臵原则 (27) （二）设备配臵方案 (28)
羧肽酶研究进展
羧肽酶研究进展 摘要：羧肽酶（Ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ）是一类可水解肽链Ｃ末端氨基酸残基的蛋白酶，广泛存在于高等植物、动物组织及真菌中，主要分为丝氨酸羧肽酶、金属羧肽酶和半胱氨酸羧肽酶３个亚类。本文综述了羧肽酶的研究进展，主要包括羧肽酶的应用、性质、来源分布、克隆表达及研究意义，并对其研究前景进行了展望。 关键词：羧肽酶；应用；来源分布；性质 羧肽酶是一种专一性地从肽链的Ｃ端逐个降解、释放游离氨基酸的一类肽链外切酶。在动物、植物的组织器官中，羧肽酶发挥着重要的生理功能，如胰腺羧肽酶Ａ和Ｂ可用于消化食物，羧肽酶Ｍ（ＣＰＭ）选择性地参与肽类激素的加工，羧肽酶Ｄ（ＣＰＤ）和羧肽酶Ｎ（ＣＰＮ）参与肽和蛋白质加工等。如表１所示，羧肽酶广泛应用于医药、食品等工业领域。在医药领域，由于羧肽酶广泛参与机体的生化反应，可通过体内羧肽酶的检测达到诊断和治疗疾病的目的；此外，在医药上还可用于体内不良物质（毒素等）的降解。在食品工业，可用于制备高Ｆ值寡肽、食品和饲料中赭曲霉素的去除、用作脱苦味剂等。在生物技术领域，羧肽酶可用于多肽的合成及多肽氨基酸序列测定，也可作为模式酶，对其他酶的研究提供帮助。动物来源的羧肽酶主要存在于猪、牛等的胰脏中，如羧肽酶Ａ／Ｂ，其数量非常有限、价格昂贵、导致其应用受到限制；微生物来源的羧肽酶存在于酵母、曲霉等真菌的液泡中，具有广阔的应用前景。因此，借助基因工程策略采用微生物为宿主大量生产重组羧肽酶，有望克服羧肽酶生产过程所遇到的动植物原料来源限制等限制，进一步降低生产成本、提高产品质量、深化酶学性质研究、扩展应用范围。本文综述了羧肽酶的种类、特点以及羧肽酶基因工程表达策略，主要包括羧肽酶的性质、来源分布、克隆表达，并对其研究前景和热点进行了展望。 关键字：羧肽酶；应用；来源分布；性质 羧肽酶的种类及其特点 根据羧肽酶活性中心含有丝氨酸残基、金属离子和半胱氨酸残基的不同，将羧肽酶分，将羧肽酶分为丝氨酸羧肽酶（ＥＣ３．４．１６．－）、金属羧肽酶（ＥＣ３．４．１７．－）和半胱氨酸羧肽酶（ＥＣ３．４．１８．－）。 １．１丝氨酸羧肽酶 丝氨酸羧肽酶又称酸性羧肽酶，是一类真核生物蛋白水解酶，亚基相对分子质量４００００－７５０００，广泛存在于真菌、高等植物和动物组织中。在酸性环境，丝氨酸羧肽酶具有末端蛋白水解酶、酯酶和脱酰胺酶的活性，可同时参与多肽和蛋白质的加工、修饰与降解。由于位切点不同，丝氨酸羧肽酶又分溶酶体Ｐｒｏ－Ｘａａ羧肽酶（ＥＣ３．４．１６．２－ｌｙｓｏｓｏｍａｌＰｒｏ－Ｘａａｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、丝氨酸Ｄ－Ａｌａ－ＤＡｌａ羧肽酶（ＥＣ３．４．１６．４－ｓｅｒｉｎｅ－ｔｙｐｅＤ－Ａｌａ－ＤＡｌａｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ）、羧肽酶Ｃ（ＥＣ３．４．１６．５－ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅＣ）、羧肽酶Ｄ（ＥＣ３．４．１６．６－ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅＤ）。其中，羧肽酶Ｃ因可水解所有具有羧基末端的氨基酸（羟脯氨酸除外），已成为蛋白质多肽链Ｃ末端分析中常用工具酶；此外羧肽酶Ｃ还可通过转肽反应将其它氨基酸衍生物或亲核物质以取代肽链末端的氨基酸残基从而形成新肽。在所有丝氨酸羧肽酶的活性位点中，含有１个由Ｓｅｒ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ按独特顺序构成的具有催化功能的结构单元，其中Ｓｅｒ是亲核位点、Ａｓｐ是亲电子体、Ｈｉｓ是基底。这一结构单元可被异氟磷（ＤＦＰ）、甲苯磺酰丙氨酸和酮苯丙氨酸抑制［１０］。此外，丝氨酸羧肽酶活性被Ｃｕ２＋、Ｆｅ２＋、Ｆｅ３＋、Ｈｇ２＋等金属离子抑制，Ｍｇ２＋
羧肽酶B
SPHARG01.001 Page 1 of 3 Revised: 02/20/96 SIGMA QUALITY CONTROL TEST PROCEDURE Enzymatic Assay of CARBOXYPEPTIDASE B (EC 3.4.17.2) PRINCIPLE: Hippuryl-L-Arg + H 2O Carboxypeptidase B > Hippuric acid + L-Arginine Abbreviations used: Hippuryl-L-Arg = Hippuryl-L-Arginine CONDITIONS: T = 25°C, pH = 7.65, A 254nm , Light path = 1 cm METHOD: Continuous Spectrophotometric Rate Determination REAGENTS: A. 25 mM Tris HCl Buffer with 100 mM Sodium Chloride, pH 7.65 at 25°C (Prepare 100 ml in deionized water using Trizma Hydrochloride, Sigma Prod. No. T-3253, and Sodium Chloride, Sigma Prod. No. S-9625. Adjust to pH 7.65 at 25°C with 1 M NaOH.) B. 1.0 mM Hippuryl-L-Arginine Solution (Hippuryl-L-Arg) (Prepare 50 ml in Reagent A using Hippuryl-L-Arginine, Sigma Prod. No. H-2508. PREPARE FRESH.) C. Carboxypeptidase B Enzyme Solution (Immediately before use, prepare a solution containing 4 - 8 units/ml of Carboxypeptidase B in cold deionized water.) PROCEDURE: Pipette (in milliliters) the following reagents into suitable quartz cuvettes: Test Blank Reagent B (Hippuryl-L-Arg) 2.90 2.90
重组胰蛋白酶
重组胰蛋白酶 Cat.No.:RPT0201 CAS:9002-07-7 EC: 3.4.21.4 来源：重组猪胰蛋白酶，基因工程生产，大肠杆菌表达 1.简介 胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶，可于赖氨酸及精氨酸C末端剪切肽键。胰蛋白酶广泛用于各种生物技术过程中。如：蛋白质酶解生产多肽；各种组织的细胞分离；蛋白质的酶解、测序；重组胰岛素生产等等。重组猪胰蛋白酶是由重组大肠杆菌表达生产，氨基酸序列与猪胰腺来源的阳离子型胰蛋白酶完全一致。酶切特异性相同。分子量为24kD，最适pH为7-10。活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF等的抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。2.优势 无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。 纯度高：无其它杂酶污染；酶切反应无其它副反应。 稳定：冻干粉，易于储存和运输；批量生产，产品质量稳定。 3.特性 来源重组大肠杆菌 纯化HPLC 性状白色冻干粉 比活≥3800 USP u/mg pro 纯度(RP-HPLC) ≥70% β-胰蛋白酶, ≤20% α-胰蛋白酶 其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等污染
活力单位：25℃，pH7.6，反应体系3.0ml (1cm 光路)，每分钟酶解BAEE使253nm下的吸收值 增加0.003定义为一个USP单位。 4.用途 重组猪胰蛋白酶具有与动物源性猪胰蛋白酶相同的酶学性质，可替代猪胰腺来源胰蛋白酶应用于各种生物技术过程中，如：重组胰岛素生产；细胞培养、细胞发酵；蛋白质的酶解、测序；各种组织的细胞分离等。 5.推荐使用方法 使用1mMHCl溶解，重组胰蛋白酶浓度为1-10mg/ml 。使用时，酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。 6.相关产品 重组羧肽酶B
羧基肽酶A的催化机理的结构基础 大分子作业
羧基肽酶A催化机理的结构基础 羧基肽酶A，是一个由307个氨基酸残基组成的单肽链蛋白质，他紧密结合着一个锌离子，这个锌离子是酶活性必须的。 羧基肽酶A最容易水解底物分子中C-末端具有芳香和大的脂肪侧链的肽键，它催化除了碱性氨基酸和脯氨酸为羧基端氨基酸的的C-末端肽键。1967年人们获得了0.2nm分辨率的羧基肽酶A的三级结构，发现了羧基肽酶A分子中紧密地结合着一个锌离子，这个锌离子对酶的催化作用有着关键的作用。这个锌离子位于接近分子表面的沟槽中，他以配位键与成四面体排列的两个组氨酸（His60、His196），一个谷氨酸（Glu72），和一个水分子相连，靠近锌离子有一个裂缝，允许底物末端的侧链伸进来。他的活性部位就是由两个组氨酸（His 196和His69）以及一个谷氨酸（Glu 72）构成的。 羧基肽酶A是一个外肽酶，它催化肽链C-末端的肽键水解，为了研究清楚这个酶的作用历程，人们曾经设计过一个很差的底物，叫“钝化底物”，这个底物就是甘氨酰酪氨酸（Gly-Tyr）。在这个酶的催化反应中，酶跟底物结合的时候，底物便进入酶分子表面的“裂缝”当中，并且诱导酶活性部位的构象发生巨大的变化，酶活性中心功能基团，包括Tyr248、Arg145、Glu270和锌离子形成正确的催化部位，将底物分子定位在酶活性中心。底物分子的羧基上的氧负离子和Arg残基的氨基侧链会有氢键相互作用。 羧基肽酶A的催化机理，主要认为有两个因素在起作用：第一，在底物的诱导下，酶活性中心的结构发生了巨大的变化，Arg145的胍基和Glu270的羧基都移动了0.2nm，Tyr248的酚羟基移动了1.2nm。底物的靠近和定向效应十分显著。二，酶的Glu270使得底物敏感键发生了电子张力，结果敏感肽键变得很容易断裂。 羧基肽酶A的催化历程： 1.底物的结合：底物羧基端羧基上的负电荷与酶的活性中心Arg145残基的正电荷相互吸 引，促进底物和酶的活性中心的结合。底物肽链C-末端的芳香族或者较大的非极性侧链伸进非极性的口袋。这里的较大的疏水侧链会产生疏水相互作用，稳定芳香族和疏水侧链的与口袋内部的基团的结合。 2.酶分子中Tyr248的酚羟基上的H与底物中敏感肽键的亚氨基上的N形成氢键。这个氢 键的形成对后面羰基氧和锌离子配位体的形成很重要。 3.底物敏感键上的羰基氧取代了与锌离子配位的水分子，羰基氧和锌离子配位。形成了配 位体，使得电子进一步离域化，方便电子和亲电试剂发生各种反应。这就是底物和酶形成的一个反应性很高的，容易变成过渡态的共价中间物，可以使得反应的活化能大大降低，底物可以越过能垒而迅速生成产物，这种催化方式可以称为共价催化。 4.因为底物敏感键的羰基和锌离子配位，受到锌离子的吸电子作用，使得底物的羰基碳原 子在亲核进攻面前更加脆弱，Glu270的羧基本身作为亲核试剂或者通过激活水分子而以水分子作为亲核试剂进攻敏感键的羰基碳原子。与此同时，Tyr248向该肽键的亚氨基提供一个质子，最后肽键断开，生成第一个产物，胺。 5.酶的复原：Glu270上的羧基作为亲核基团和底物羰基共价结合，形成酐。最后，水分子 使得酐水解，生成另一个产物，酸，酶恢复原状，完成了一个反应的循环。 这个酶的酶促反应属于乒乓反应机理，但是也有一种观点认为，这个酶的反应机理是属于有序双双反应，在这个反应下，酶分子的Glu270先激活水分子，用水分子中的OH-来直接进攻敏感肽键的羰基，与此同时，Tyr248提供一个质子，肽键直接水解，不经过形成酸酐的中
重组kex2蛋白酶
Cat No.:Re15 EC:3.4.21.61 全名:重组Kex2蛋白酶 别名:重组双碱基内切酶；YSCF蛋白酶；Kex2蛋白酶 储存温度：2-8℃ 来源：基因工程生产，毕赤酵母表达。 1.产品简介 Kex2蛋白酶是钙离子依赖性蛋白水解酶，能特异性识别和切割Arg-Arg、Lys-Arg等双碱基氨基酸羧基端肽键，与胰蛋白酶不同，Kex2不能识别和切割单一碱性氨基酸即精氨酸或赖氨酸的羧基端肽键。在酵母体内Kex2蛋白酶负责加工killer toxin和α-factor的前体。Kex2蛋白酶活性不受常规的丝氨酸蛋白酶抑制剂如抑肽酶、PMSF、TPCK所抑制。雅心重组Kex2蛋白酶是由毕赤酵母表达生产，与天然的酿酒酵母Kex2酶具有相同的酶特异性。最适作用pH为pH9.0，稳定储存的pH为pH5.0-6.0。 2.产品特性 来源毕赤酵母表达 性状白色，类白色粉末 比活≥10.0units/mg pro. 纯度（蛋白电泳）单一主条带 分子量（蛋白电泳）67.0±6.7kD 酶活单位：在25℃，50mM Tris-HCl，2mM CaCl2，pH8.0的3ml反应体系中，每分钟催化底物Boc-QRR-pNA 释放出1μmol对硝基苯胺（4-nitroaniline）的酶量定义为一个酶活单位（Unit）。 3.推荐使用方法 推荐反应缓冲液：pH7.0-9.0，50mM Tris-HCl，2mM Ca2+或者HEPES，5mM Ca2+。 若溶解后不马上使用，建议使用20mM(pH5.2)NaAc-HAc，2mM Ca2+缓冲液溶解冻干粉， 溶解后酶的终浓度约为1-10mg/ml，按照需要分装后储存-20℃以下储存。 反应时，用pH7.0-9.0，50mM Tris-HCl，2mM Ca2+或HEPES，5mM Ca2+作为反应稀释液。 注：酶的最适反应pH为pH9.0，稳定pH为5.0-6.0。 4.储存和运输稳定性 冻干粉储存稳定性：2-8℃，避光，防潮保存。 溶解保存缓冲液（20mM NaAc-HAc，pH5.2，2mM Ca2+），溶解后存于-20℃以下，6个月稳定。 反复冻融5次，无活性损失。 运输稳定性：蓝冰保温运输，活性稳定。 5.产品优势 1）无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，生产过程不使用任何动物源原料。 2）质量稳定：批量生产，可保证稳定连续的批次生产；产品批次间无差异，质量稳定。 3）纯度高：比活高；宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。 4）冻干粉：易于储存和运输。
重组羧肽酶的性质
重组羧肽酶B的性质 关键词：羧肽酶B,carboxypeptidase B,碱性峰 来源：雅心生物 羧肽酶B(EC3.4.17.2)专一用于蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）的水解；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。分子量为35kD，等电点为6.0，最适pH为7-9。羧肽酶B是抗体碱性峰检测的特异酶，通过比较酶切前和酶切后的图谱来计算抗体碱性变体的比例，对于抗体的发酵工艺和纯化工艺稳定性的控制都具有重要的意义。 而在抗体碱性峰的检测中，没有完全统一的标准，如酶解缓冲液酶的用量，酶解时的温度和时间等。而这些与酶的性质密切相关。 可以选择的羧肽酶B有两种，一种是动物胰腺提取的羧肽酶B，一种是基因工程的重组羧肽酶B，前者由于胰腺中含有各种蛋白酶，如胰蛋白酶、糜蛋白酶等，常常不能彻底去除，在酶切时会有非特异的酶切杂峰出现，影响结果判断。后者为基因工程生产的，成分单一，无杂酶，比活高，应用上更有优势。 羧肽酶B的结构 天然存在的羧肽酶B是由前羧肽酶原B（preprocarboxypeptidase B，preproCPB）经酶解产生，后者N-末端包含108个氨基酸（其中13个氨基酸为信号肽序列，95个氨基酸组成前导肽部分）的多肽片段与CPB相连。前羧肽酶原B在转运到内质网的过程中，信号肽被切掉，得到无酶活性的羧肽酶原B （procarboxypeptiedase B,proCPB）并从细胞中分泌出来，最终在小肠中经胰蛋白酶在Arg-95处酶解，成为具蛋白酶活性的CPB。proCPB的分子量为46kD，由401个氨基酸组成；CPB分子量为35kD，由306个氨基酸组成（如图1）。在CPB中，前体的活化主要依赖胰蛋白酶在Arg95位的切割，半球形前导肽被切割后，它既不会抑制酶体，也不再与之结合，这使得酶体能迅速发挥功能，并对前导肽C-端的Arg进行切割。 图1羧肽酶原B的三维结构及其激活部位示意图 （上面暗红色部分代表前肽，下面蓝色部分代表羧肽酶B，箭头所指为胰蛋白酶酶切激活位点）