几种食用菌菌种保藏方法
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菌株保藏方法介绍
菌种保存方法 微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法大致可分为以下几种： 1．传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。 2．液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3．载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4．寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5．冷冻保藏法 可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6．冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。
有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 三、器材 细菌、酵母菌，放线菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油，五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸，无水氯化钙； 灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与 100目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。 四、操作步骤、各保藏法的应用范围及优缺点 下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。 1．斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。 此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。 2．液体石蜡保藏法 （1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。 （2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。
食用菌菌种保藏历史_现状及研究进展概述_孔维丽
DOI ：10.13629/https://www.360docs.net/doc/f21805215.html,ki.53-1054.2015.05.001 食用菌菌种保藏历史、现状及研究进展概述* 孔维丽，袁瑞奇，孔维威，张玉亭**，康源春，韩玉娥 （河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所，河南郑州450002） 摘要：从微生物菌种保藏的历史出发，简要介绍食用菌菌种现状、保藏现状、保藏任务等，重点介绍了食用菌菌株不同保藏方法的应用及研究进展，供广大读者参考借鉴。关键词：食用菌；保藏；研究进展 中图分类号：S646.9 文献标志码：A 文章编号：1003-8310（2015）05-0001-05 Research Progress,History and Current Situation of Spawn Preseration of Edible Fungus KONG Wei-li,YUAN Rui-qi,KONG Wei-wei,ZHANG Yu-ting,KANG Yuan-chun,HAN Yu-e (Institute of Plant Nutrition,Agricultural Resources and Environmental Science, Henan Academy of Agricultural Sciences,Zhengzhou 450002,China) Abstract:Base on the history of the microbial culture collection,the current situation and preservation,the task preservation of edible fungi were introduced.We focused on the research progress and application of edible fungus strains in different preser －vation methods,for reader ’s reference. Key words:edible fungus;preservation;research advance 世界各国非常重视微生物菌种的保藏工作，最早的菌种保藏工作从1890年开始，但直到1906年，各国才相继建立了菌种保藏机构。中国的菌种保藏机构始建于20世纪50年代，直到1979年正式成立 6个专业性保藏管理中心 [1] 。随着食用菌产业的快速 发展，中国已经成为世界食用菌种植和出口最大的国家之一，越来越重视对食用菌种质资源的收集与保藏工作。 1菌种保藏技术的发展历史 微生物菌种资源保藏机构缘起欧洲，1890年捷 克微生物学家Fran-tisek Kral 最早开始从事微生物菌种的公共性保藏[1]。菌种保藏的发展经历了两个大的阶段：微生物菌种保藏机构的兴起建设阶段和发展壮大阶段。20世纪初在巴黎、比利时、伦敦和日本等有关研究所相继建立了几个菌种保藏机构，延续至今的有1906年在荷兰建立的CBS （Centralbureau voor Schim-melcultures ），1925年在美国建立的ATCC （America Type Culture Collection ）。我国的菌种保藏机构始建于20世纪50年代。1979年在原国家科委的组织领导下，召开了第一届全国菌种保藏会议，成立了中国微生物菌种保藏管理委 *基金项目：河南省现代农业产业技术体系（S2013-09 ）；国家自然科学基金（31201670）；河南省自主创新基金（2013JC20）；河南省农业科学院科研发展专项（20137914）；河南省科研开放合作项目（14216000055）。 作者简介：孔维丽（1976-），女，硕士，助理研究员，主要从事食用菌栽培保藏技术研究工作。E-mail:kongweili2005@https://www.360docs.net/doc/f21805215.html, **通信作者：张玉亭（1964-），男，硕士，研究员，主要从事食用菌栽培产业开发研究工作。E-mail:kyc_2725@https://www.360docs.net/doc/f21805215.html, 收稿日期：2015-07-15 〈综述〉 中国食用菌2015，34（5 ）：1~5EDIBLE FUNGI OF CHINA CN53－1054/Q ISSN 1003－8310
枝条菌种制作
枝条菌种制作技术 一、什么是枝条菌种？ 枝条菌种是指用竹签、木条、雪糕棒等制作的食用菌菌种，通常枝条菌种用来制作三级种，也叫竹签菌种、小棒菌种。 在液体菌种没有普及之前，枝条菌种在杏鲍菇工厂化、黑木耳工厂化生产中广泛使用，随着液体菌种的普及，枝条菌种的使用逐渐减少，但是对于不具备液体菌种生产条件的小规模企业首选还是枝条菌种。 二、哪些品种可以使用枝条菌种？ 香菇、平菇、金针菇、杏鲍菇、黑木耳等常规品种都可以使用枝条菌种。 三、枝条菌种的优点和缺点 优点： 1、枝条菌种萌发较快，因为菌丝生长到枝条内部，不容易死亡和老化； 2、接种方便，速度快； 3、不需要打开全部袋口，培养基暴露的时间段，较少污染机会。 4、枝条可以深入培养基内部，发菌快。 缺点： 1、对制作技术要求相对较高；
2、对灭菌要求较高，最好采用高压灭菌的方式。 四、枝条菌种制作技术 1、材料准备 枝条：杨木、桑木、柞木、椴木、柳木等能够栽培食用菌的木材都可以制作枝条菌种，杨木的价格较低，较为常用。现在有专门生产食用菌专用枝条的厂家，也可以用雪糕棒，枝条长度一般12-15cm，宽0.5-0.7cm，厚0.5-0.7cm，枝条的规格要根据栽培袋的大小进行选择。 菌种：提前准备好二级种，二级种的纯度和活性直接影响到枝条菌种的质量，一定要做好。 菌袋：枝条菌种一般使用17cm×30cm，或者15cm×28cm的聚丙烯折角袋，聚丙烯的菌袋透明度好，便于观察菌丝长势和污染情况，如果采用高压灭菌则必须使用聚丙烯菌袋，可以用棉花封口，最好。 辅料准备：木屑、麦麸、白灰、石膏，用来填充枝条之间的空隙；白糖、磷酸二氢钾、硫酸镁，用来配置浸泡枝条的营养液。 2、浸泡枝条 营养液配置：白糖10g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁1g，水1000ml，按照比例配置配置适量营养液，将枝条整捆放入营养液中浸泡15小时，浸泡时间要根据枝条的规格、气温进行调整，目的是枝条要泡透，可以将枝条敲碎，观察是否有白芯，如果有说明没有泡透。
《食用菌生产技术》实训指导教材
《食用菌生产技术》实训指导教材 实训一食用菌形状结构观看 一、目的要求 观看食用菌菌丝体的生长状态，利用显微镜认识食用菌的营养体和繁育体的微观结构，利用徒手切片观看食用菌子实体的微观结构，通过对食用菌子实体形状特点的观看，让学生们了解和熟悉各种食用菌子实体的类型和特点，并能按照子实体的外形进行分类。 二、实训预备 1、材料平菇、香菇、双孢蘑菇、草菇、金针菇、木耳、银耳、猴头菇、灵芝、密环菌、羊肚菌、虫草、茯苓等食用菌子实体或菌核浸浸标本或干标本、鲜标本及部分食用菌的菌丝体，担孢子等。 2、仪器工具光学显微镜（100～600倍）、接种针、无菌水滴瓶、染色剂（石炭酸复红或美蓝等）、酒精灯、75%酒精瓶、火柴、载玻片、盖玻片、刀片、培养皿、绘图纸、铅笔等。 三、内容和方法步骤 （一）菌丝体形状特点观看 1、菌丝体宏观形状观看。①观看平菇、草菇、金针菇、木耳、银耳及香灰菌、蘑菇、猴头、灵芝等食用菌的试管斜面菌种或PDA平板上生长的菌落，比较其气生菌丝的生长状态，并观看菌落表面是否产生无性孢子。 ②观看菌丝体的专门分化组织：蘑菇菌柄基部的菌丝束；密环菌的菌索；茯苓的菌核；虫草等子囊菌的子座。 2、菌丝体微观形状观看。①菌丝水浸片的制作：取一载玻片，滴一滴无菌水于载片中央，用接种针挑取少量平菇菌丝于水滴中，用两根接种针将菌丝拔散。盖上盖玻片，幸免气泡产生。②显微观看：将水浸片置于显微镜的载物台上，先用10倍的物镜观看菌丝的分支状态，然后转到40 倍物镜下认真观看菌丝的细胞结构等特点，并辩认有无菌丝锁状联合的痕迹。 （二）子实体形状特点观看
1、子实体宏观形状观看。认真观看各种类型的食用菌子实体的外部形状特点，并比较各种子实体的要紧区不，专门注意菌盖、菌柄、菌褶（或菌孔、菌刺）、菌环、菌托的特点，并对之进行比较、分类。 2、子实体微观形状观看。①菌褶切片观看：取一片平菇菌褶置于左手，右手持刀片，横切菌褶若干薄片漂浮于培养皿的水中，用接种针先取最薄的一片制作水浸片，显微观看平菇担子及担孢子的形状特点。②有性、无性孢子的观看：灵芝担孢子水浸片观看；羊肚菌子囊及子囊孢子水浸片观看；草菇厚垣孢子水浸片观看；银耳芽孢子水浸片观看（以上各类孢子的观看可用标本片代替）。 四、作业 1、描述菌丝体的生长状态，并画出所观看菌丝、无性孢子、担子及担孢子的形状结构图。 2、列表讲明所观看各种类型的食用菌子实体的形状特点，如：伞状、头状、耳状、花絮状、肾状、扇状、蛋形、钟形等。 3、绘制一种食用菌子实体的形状图，用绘图笔或钢笔（黑）绘制生物图，要求图形真实、准确、自然，画面整洁。 实训二食用菌母种培养基的配制 一、目的要求 了解高压蒸汽灭菌锅的构造，了解食用菌母种培养基的配方，熟悉高压蒸汽灭菌锅的使用方法，把握母种培养基（PDA或PSA）的配制方法 二、实训预备 1、配制培养基材料马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、水等。 2、仪器用具高压蒸汽灭菌锅（手提式或立式）、可调式电炉、铝锅（20cm）、汤勺、切刀、切板、量杯、纱片、漏斗（带胶管和玻璃管）、止水夹、漏斗架、试管（18mm×180mm或20mm×200mm）、1cm厚的长形木条（摆放斜面时垫试管用）、棉花（未脱脂）、捆扎绳、标签、天平等。 三、内容和方法步骤
菌种传代与复苏修订稿
菌种传代与复苏 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-
菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种、微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种传代与保藏是一项重要的基础工作。 菌种代号 国内药品微生物检验所用的菌种代号是CMCC(F)或CMCC(B)，CMCC--中国医学菌种保藏中心，、，B——代表细菌，F——代表真菌。 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003大肠杆菌CMCC(B)44102 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501 白色念珠菌CMCC(F)98001 黑曲霉CMCC(F)98003 传代和接种 菌种冻干粉复苏 把冻干菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化台。 先用砂轮将冻干菌种安瓿瓶颈部挫出挫痕，再将冻干菌种管外壁用75%酒精擦洗消毒，稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴在灼热的菌种管封口一端，是骤冷而炸裂。 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，领取一只灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。 菌种斜面传代操作
培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上注明菌种名及菌种编号。至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。 点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手无名指，小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环深入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种环，并将菌种管口移至火焰旁。 堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面一支，照上述操作打开棉塞，将接种环深入管内至琼脂斜面的底部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。 取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。菌种的培养与保存 大肠杆菌35-37摄氏度培养48小时金黄色葡萄球菌30-35摄氏度培养48小时枯草芽孢杆菌30-35摄氏度培养48小时白色念珠菌23-28摄氏度培养7天黑曲霉23-28摄氏度培养7天 将培养物管自培养箱取出后放入冰箱（2-8摄氏度）保存，一般2个月转种一次。菌悬液的制备 取上述培养好的菌种斜面移入接种室或净化工作台，放置室温后，用接种环取菌苔少许接种至营养肉汤中（10ml/支，已灭菌），将已接种毕的细菌管置35-37摄氏度培养18-24小时，取出备用。一般于冰箱中保存可用两周。
食用菌生产技术 食用菌的菌种保藏
实验六食用菌菌种保藏 一,实验目的和内容 目的:了解并掌握菌种保藏的常用方法及其优缺点. 内容:1,学习斜面传代保藏方法. 2,学习液体石蜡保藏方法. 二,实验材料和用具 斜面菌种;原种；栽培种；老化菌种；干缩菌种；污染菌种 无菌水,液体石蜡,; 无菌试管,无菌滴管,接种环,干燥器,冰箱等, 三, 操作步骤 下列各方法可根据实验室具体条件与需要选做. (一)斜面传代保藏法 l.贴标签取各种无菌斜面试管数支,将注有菌株名称和接种日期的标签贴上,贴在试管斜面的正上方,距试管口2～3cm处. 2.斜面接种将待保藏的菌种用接种环以无菌操作法移接至相应的试管斜面上,； 3.培养：将菌种置于20℃-28℃培养5～7d. 4.保藏斜面长好后,可直接放入4℃冰箱保藏.为防止棉塞受潮长杂 菌,管口棉花应用牛皮纸包扎,或换上无菌胶塞,亦可用熔化的固体石蜡熔封棉塞或胶塞. 保藏时间依种类而不同，可保存2～6个月,移种一次;.此法的缺点是容易变异,污染杂菌的机会较多. (二)液体石蜡保藏法 l.液体石蜡灭菌在250mL三角烧瓶中装入100mL液体石蜡,塞上棉塞,并用牛皮纸包扎,12l℃湿热灭菌30min,然后于40℃温箱中放置l4d(或置于105～110℃烘箱中lh),以除去石蜡中的水分,备用. 2.接种培养同斜面传代保藏法. 3.加液体石蜡用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌 种斜面上,加入量以高出斜面顶端约1cm为宜.
4.保藏棉塞外包牛皮纸,将试管直立放置于4℃冰箱中保存. 利用这种保藏方法,可保藏1～2年. 5. 活化恢复培养用接种环从液体石蜡下挑取少量菌种,在试管壁上 轻靠几下,尽量使油滴净,再接种于新鲜培养基中培养.由于菌体表面粘有液体石蜡,生长较慢且有粘性,故一般须转接2次才能获得良好菌种. (三) 原种保藏法 l. 原种制作按原种操作步骤制作谷粒原种或短枝条原种； 2. 贴标签将注有菌株名称和接种日期的标签贴在菌种瓶或袋上, 3. 培养：将菌种置于适宜温度下培养20～60d. 4.保藏：挑选生长健壮的,可直接放入4℃冰箱保藏.为防止棉塞受潮长杂菌,瓶口棉花应用牛皮纸包扎,或用熔化的固体石蜡熔封棉塞。 保藏时间依种类而不同，可保存6～12个月,移种一次;.此法的缺点是容易老化,四问题和思考 1.如何防止菌种管棉塞受潮和杂菌污染 2. 你选用什么方法保存菌种试设计一个实验方案. 3.试述各种菌种保藏方法的优,缺点.
食用菌复习题及答案
《食用菌生产技术》试卷一 一、名词解释：（每个4分，共20分） 1、菌种： 2、初生菌丝： 3、代料栽培： 4、无菌操作： 5、灭菌： 二、填空：（每空1分，共16分） 1、按食用菌的生活方式不同，可将其分为_____、______、______，三种类型，大部分食用菌属于_____。 2、菌种保藏在生产中应用最多的是_____保藏法，保藏温度为_____度。 3、食用菌的营养物质种类繁多，根据其作用和性质可能分为_____、_____、_____、_____。 4、食用菌菌丝体，生长阶段和子实体生长阶段对环境条件要求呈现出一定规律性，对温度要求一般是前_____后_____，对湿度、光线、氧气要求一般是前_____后_____。 5、在菌种分离过程中多采用_____法，对菌肉肥厚的子实体多采用_____组织进行分离进行接种； 三、判断题：（每个２分，共16分） 1、一般来说，食用菌是属于耐高温，怕低温的生物。（）
2、食用菌菌丝体阶段和子实体阶段适宜温度相同。（） 3、人们通常所指的菌种，实际上就是指经过人工方法培养的纯菌丝体。（） 4、食用菌菌丝体生长阶段在黑暗或弱光下均可生长良好，而子实体形成阶段必需有散射光的刺激。（） 5、利用紫外线杀菌时在黑暗条件下使用比白天使用杀菌效果好。（） 6、鸡腿菇菌丝体具有不覆土不出菇的特点。（） 7、在灭菌的时为防止高温季节培养料发酵变酸无论是常压还是高压灭菌在开始烧火时都应旺火猛攻。（） 8、食用菌生产中，只有双核菌丝才具有结实性。（） 四、问答题：（48分） 1、食用菌菌种保藏原理、目的和方法？（8分） 2、试述金针菇的栽培技术要点？（10分） 3、试述堆料、发酵的机理、方法及注意事项？（10分） 4、香菇袋料栽培的主要步骤？（10分） 5、生料栽培平菇在气温较高季节如何进行发菌管理？以防出现杂菌污染？（10分） 《食用菌生产技术》试卷一答案 一、名词解释：（每个4分，共20分） 1、菌种：是指能够进一步繁殖的纯的菌丝体。 2、初生菌丝：是由孢子萌发形成的单核菌丝，又称一级菌丝。 3、代料栽培：在食用菌生产中，用农作物秸杆、废料等代替段木进行栽培的一种食用菌栽 培形式，如袋料、畦床栽培。 4、无菌操作：采用物理、化学的方法，将环境、用具中的杂菌彻底杀灭，使之形成无菌的
食用菌液体菌种生产方法(发酵罐法)
食用菌液体菌种生产方法（发酵罐法） 传统菌种生产工艺，一般是由试管母种扩繁成二级种、三级种，生产周期长、污染率高、成本高、需大量人工、管理困难。液体菌种生产具有纯度高、活力强、繁殖快的特点，接种到培养料内有流动性好、萌发点多，发菌迅速等特种点。应用于生产与固体菌种相比有以下优点： 1．菌种生产周期短。固体种一般需25—40天，而液体种仅需3—7天。 2．接种后，萌发点多萌发点多、发菌快、出菇周期短。接种24小时菌丝布满料面，3—15天长满菌袋，一般品种10天左右可出菇。 3．接种方便、成本低。用液体菌种接种一般每袋成本是1—3分，每人每小时可接800袋以上，提高效益4—5倍。 4．适宜工厂化生产。可直接用于栽培料进行出菇，大批量生产菌袋。为食用菌集约化、标准化生产创造了条件。因此，适宜我国国情的液体菌种设备的出现，必将在食用菌生产领域引发一场新的革命。 液体菌种具有固体（颗粒）菌种无可比拟的优势，但是液体菌种生产设备是近几年刚发展起来并逐渐成熟的，因此很多人对此很陌生。在这里我们对此进行简单介绍 一、液体菌种设备基本原理 任何一种食用菌自身的生长必须满足其对温度、湿度、需氧量、养分等的需要，同时必须避免杂菌感染。在深层发酵技术上称之为选
择性发酵技术，如啤酒生产技术当属此例，而白酒生产则是生物菌群发酵技术。 液体菌种发酵设备（包括四大系统，温控系统由控制器、电热管等组成；供气系统由空气压缩机、输送管道、空气过滤器等组成；冷却系统由热交换器、进出水管道组成；搅拌系统由射流器、提升管等组成。 二、液体菌种生产的关键技术 1、溶氧量 液体菌种生产中最关键的是培养液中氧的溶解量，因为在菌丝生长过程中，必须不断的吸收溶解其中的氧气来维持自身的新陈代谢，氧气在液体（水）中的溶解量与压力、温度有关，同时与培养液的接触面积、渗透压有很大的关系。因此我们设计发酵设备时有效地解决了这些问题，如安装射流器使气泡细碎度增加等。 2、空气过滤 技术的关键就是保证进入的空气无菌度高，因此必须选择孔径小、材料先进的过滤膜。一般细菌直径在0.5-5um,酵母菌在1-10um，病毒一般在20-400mu，所以选择过滤膜时应综合考虑以上因素。当然如果选的太小，成本将大幅度提高。另外环境对于空气影响很大,在空气压缩机房、制种车间必须保持环境清洁。 3、培养液 培养液是菌丝生长发育的营养源，要求营养全面均衡。不同的菌种对营养要求偏重不同。配制原料有糖、麸皮、磷酸二氢钾、硫酸镁、
菌种保藏的方法
菌种保藏的方法 菌种是国家重要的生物资源，鉴于其自身的遗传性和变异性，在菌种保藏过程中，如何降低菌种的衰亡速度，防止杂菌污染，保持菌种遗传性状不变异，使优良高产菌株长期在生产中应用，成为食用菌领域一项重要的课题。为适应群众性生产的需要，为适应群众性生产的需要，本文介绍了几种简单易行、实用效果好的菌种保藏方法。 一、菌种保藏基本原理 通过低温、干燥、缺氧和饥饿等手段来达到最大限度降低菌丝体的生理代谢。首先要挑选优良纯菌种，包括菌丝体和它们的孢子；其次，根据其生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧等条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降低到极低的程度或处于休眠状态，从而延长菌种生命以及使菌种保持原有的性状，防止变异。 二、菌种保藏的方法 试管斜面菌种系列保存方法 1低温定期移植保藏法 将需要保藏的菌种接种在适宜的斜面培养基上，适温培养，当菌丝健壮地长满斜面时取出，放在3~5℃低温干燥处或4℃冰箱中保藏，每隔3~6个月移植转管1次，具体应根据菌种特性决定。保藏时要注意环境湿度不能太高，以防霉菌通过棉塞进入管内。因此，若用棉塞，可用干净的塑料薄膜或牛皮纸包扎棉塞，也可用无菌的白胶塞，并用石蜡涂封，即可减少污染的机会，也可防止培养基干燥。除草菇外，大多食用菌菌种都能采用此法保藏。 2液体石蜡保藏法
取化学纯液体石蜡装于三角瓶中高压灭菌后，放入40℃恒温箱中，蒸发其中水分，至石蜡油完全透明为止。将处理好的石蜡油移接在空白斜面上，28～30℃下培养2～3d，证明无杂菌生长方可使用。然后将母种接在斜面培养基上，当菌丝在斜面上生长丰满后，将液体石蜡注在斜面上，注入量以高出斜面1cm为宜，使菌种与空气隔绝，降低其新陈代谢能力。管口用灭过菌的白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，直立放在室内干燥处或冰箱内保藏。一般可保存1年以上，在低温下保藏时间还可延长。使用时从斜面上挑取菌丝少许，移接到新鲜斜面培养基上，经培养即可。由于菌丝体沾有液体石蜡而影响其生长，需再经1次移接才能恢复正常生长。 3白胶塞封口保存法 选择与试管口径相符的白胶塞，用%煤酚皂溶液洗涤，浸泡在酒精内待用。当试管斜面长满菌丝后，在无菌条件下拔去棉塞，取浸泡的白胶塞1个，通过火焰迅速塞入试管口内，并用石蜡熔封。此法能达到与石蜡油封存相似的效果。用该法保存菌种可存活1～3年，但以每年移植1次为好。 4蒸馏水保藏法 将8成熟试管菌种放在接种箱内，注入蒸馏水，将培养基斜面全部淹没至管口2cm。管口用白胶塞塞紧，并用石蜡涂封，常温下置于阴凉处立放，可以保藏1年左右。 非斜面固体菌种系列保存法 1麦麸保藏法 将麦麸和水按∶1充分拌匀后，装入试管高压灭菌，经无菌检查合格后接种，适温下培养至菌丝体发育好后，将试管放入真空干燥器内，用真空泵将麦麸培养基内水分抽干，然后移入盛有硅胶的干燥器内，用凡士林密封在常温下保存，可保藏3～5年。
羊肚菌菌种制作技术
羊肚菌菌种制作技术 羊肚菌是世界上珍贵的稀有食用菌之一，属高级营养品。它富含蛋白质、碳水化合物、多种维生素及20多种氨基酸，特别是有机锗含量高，具有补肾、壮阳、补脑、提神的功能；主治精肾亏损、阳痿不举、性欲冷淡；对头晕失眠、肠胃炎症、脾胃虚弱、消化不良、饮食不振有良好的辅助治疗作用；还可以防癌抗癌、预防感冒、增强人体免疫力，在医学上有重要的开发价值。由于它功能齐全，香味独特，食疗效果显著，目前国内每千克售价800～1000元，尤其在西欧国家供应十分紧俏，价格更昂贵。 因羊肚菌与其它食用菌不同，栽培适应性较差，特别是在异地栽培稳定性差。因此，利用当地的羊肚菌品种分离制出的菌种，能适应当地环境，可避免异地购种的地区性差异和邮寄途中的影响，建议种植户最好分离当地的品种。它能适应当地环境，但也要注意羊肚菌的菌种隔年使用效果不好，有变异现象。这就给大面积栽培和推广带来了困难。所以羊肚菌的菌种最好每年分离、驯化。这是迄今尚未实现商品化栽培的原因之一，加上栽培管理或环境达不到要求就会不出菇。这就是羊肚菌人工栽培困难的奥秘。 一、制种注意事项 羊肚菌的菌种性能与其它食用菌不同，菌种分离方法和育种手段及栽培管理技术与其它食用菌也有很大差异。最大的缺点就是容易退化、变异、生霉。这对栽培羊肚菌带来很大困难。对此，首先要控制菌种传代，无论母种、原种、栽培种，若违反技术要求，多传一代就会出现上述不良反应或不长子实体。母种只能经过原种栽培种，到栽培中的一次流程和3次破菌愈合才能保住质量；若超过3次菌丝断裂而重新萌发的新菌丝，会失去或降低酶的分解作用，以致抗病力差，易生杂菌，不出菇。 二、母种制作 （一）培养基配方 ①黄豆芽500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，羊肚菌基脚～50克，水1升。 ②黄豆芽500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，水1升。 ③栎木屑500克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，水1升。 ④马铃薯200克（煮汁），白糖20克，琼脂20克，蛋白胨0.5克，牛肉膏0.5克，水1升。 ⑤蛋白胨1克，葡萄糖20克，琼脂20克，酵母膏1克，磷酸二氢钾1克，硫酸镁1克，维生素B1，1克，水1升。pH值自然。 上述配方任选一组。将木屑或豆芽加水1升煮30分钟，过滤取汁，并将余下的水补足1升，加入其它原料，煮至溶化后，按母种制作常规方法，分装于18毫米×180毫米或20毫米×200毫米试管的1/5，塞上棉塞，使用高压灭菌锅彻底灭菌；在0.68千克压力下维持60分钟，自然冷却至指针回到原位才可打开，放成斜面备用。 （二）菌种分离 首先要具有食用菌专业基础知识、多年的菌种分离经验及菌丝鉴别能力，其次要购置母种培养基、无菌接种箱、恒温培养箱、冰箱、高倍显微镜等必要设备。根据当地羊肚菌生长季节，趁羊肚菌生长旺盛时做菌种分离工作。 1.分离方法。羊肚菌的分离方法与其它食用菌大不相同。它需要一种助生菌与羊肚菌菌丝共生时才能出菇。这种助生菌长期活动在土壤中，有时以芽孢菌形式出现，有时以菌丝形式出现。它为羊肚菌的原基形成和子实体生长发育起着至关重要的作用。因此，从土壤中分离该菌比其它任何方式分离要好些。但从土壤分离难度太大，成功率不到万分之一，并
食用菌复习题及答案
1、菌种：是指能够进一步繁殖的纯的菌丝体。 2、初生菌丝：是由孢子萌发形成的单核菌丝，又称一级菌丝。 3、代料栽培：在食用菌生产中，用农作物秸杆、废料等代替段木进行栽培的一种食用菌栽培形式，如袋 料、畦床栽培。 4、无菌操作：采用物理、化学的方法，将环境、用具中的杂菌彻底杀灭，使之形成无菌的状态，在这种 无菌的条件下进行食用菌生产操作称无菌操作。 5、灭菌：采用物理或化学的方法杀灭所有微生物（杂菌）的操作。 6、大型真菌：真核细胞型微生物，有典型的细胞核和完善的细胞器，不含叶绿素，无根、茎、叶的分化 的菌类。 7、杂菌：指含有对真菌生长有害的其他微生物，如（放线菌、细菌等）。 8、发菌期：从接种到菌丝长满瓶或袋的时间。 3、发菌期：从接种到菌丝长满菌袋或菌瓶的时间。 9、排冷气：在利用高压锅灭菌前更将锅内的冷气排出，可以一次性排气，当气压上升至时当排气阀打开； 也可在先打开排气阀，当温度上升至一定时，再关闭排气阀。 10、常压灭菌：即在常压下，利用常压灭菌锅将培养基内部及表面微生物杀死的一种灭菌方法，一般是 100℃蒸汽蒸制8-12小时。 1、锁状联合:在双核菌丝上的横隔膜处产生的一个具有特征性的侧生突起，它往往发生在菌丝顶部双核细 胞的两核之间。 2、担子果:高等担子菌承载担子及担孢子的一种高度组织化的结构。 3、菌环:内菌幕遗留在菌柄上的环状物，常在菌柄的上部。 4、初生菌丝:担孢子萌发后先形成芽管，继而伸长，生长成为管状的菌丝，并形成隔膜，对于多数食用菌 来说，隔膜使其成为单核的多细胞菌丝，这种单核菌丝就称为初生菌丝。 5、食用菌菌种:在适宜基质上生长良好并已充分蔓延，可用作食用菌生产的种源菌丝体。 6、栽培种:由原种移植到固体或液体培养基上扩大繁殖的菌丝体。 7、代料栽培:利用木屑以及棉籽壳、甘蔗渣、玉米芯、麦麸等农副产品代替段木，以塑料袋、菌种瓶等为 容器栽培食用菌的技术。 8、灭菌:用物理或化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物（包括细菌的芽孢），使之达到无菌状态。 9、食用菌的驯化:野生大型可食用真菌经人类引种栽培并不断选择，逐渐成为人类所需的栽培品种的过程。 10、非病原病害:食用菌生长过程中由于受到不适宜的环境条件的刺激而引起的病害。 4.堆料发酵——把料拌好键堆，依靠微生物似的活动发酵，使料堆温度升至60~ 65℃达到杀菌灭虫的目的 5.次生菌丝——由单核菌丝培养转化而成又称双核菌丝 2、母种：用组织分离法得到的第一代菌丝体，又称一级种或试管斜面母种。 4、代料栽培：用锯末、棉子壳、秸杆等代替段木栽培的方法。 5、反季节栽培：不按正常季节进行的栽培。 1、按食用菌的生活方式不同，可将其分为寄生型、腐生型、共生型，三种类型，大部分食用菌属于腐生型。 2、菌种保藏在生产中应用最多的是低温保藏法，保藏温度为0～4 ℃度。 3、食用菌的营养物质种类繁多，根据其作用和性质可能分为碳源，氮源，无机盐，生长因子。 4、食用菌菌丝体，生长阶段和子实体生长阶段对环境条件要求呈现出一定规律性，对温度要求一般是前__高__后__低_，对湿度、光线、氧气要求一般是前__少___后__多___。 5、在菌种分离过程中多采用__组织分离法___法，对菌肉肥厚的子实体多采用___子实体（菌内）__组织进行分离进行接种； 1、食用菌菌种的生产，一般需要经过母种、原种和栽培种三级培养过程。 2、在无菌条件下____，进行的菌种移植操作称为无菌操作。 3、食用菌都是__异养型的生物，绝大数为___腐_生，少数为___寄_生或共_生。 4、平菇栽培不需灭菌，这种栽培方式称生料栽培_ 5、菌盖下面片层状的结构称___菌褶 6、营养液中加入%~2%琼脂制成的培养基称____固体培养基_。 7、能够满足食用菌生长、繁殖和完成各种生理活动所需的物质称_营养物质。
菌种保藏大全
菌种保藏 一、菌种的含义： 菌种：菌种是指食用菌、工业菌、农用菌菌丝及其生长基质组成的繁殖材料。分为母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级种）三级，也可以理解为保存着的、具有活性的菌株。 微生物工业对菌种的要求 1.原料廉价，生长迅速、目标产物高。 2.易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期较短。 3.抗杂菌和噬菌体的能力强。 4.菌种遗传性能稳定，不易变化和退化，不产生任何有害的生物活性物质和毒素，保证安全生产。 5.对放大设备的适应强。 二、菌种保藏的重要意义： 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产，如抗生素、氨基酸、酿造等工业，都离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。 其任务首先是使菌种不死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来，而不致向坏的方面转化。 菌种是一种极其重要和珍贵的生物资源，1980年我国成立了中国微生物菌种保藏委员会。 菌种保藏的原理与方法 微生物菌种保藏的概念：收集实验室和生产用微生物（菌种、菌株、病毒毒株等，也包括动、植物的细胞株和微生物质粒），运用适当方法和措施使其长期存活并保持原种的生物学性状稳定不变，使之不死、不衰、不乱，以达到便于研究、交换和使用等目的的措施。 微生物个体微小、代谢活跃、生长繁殖快，很容易发生变异，或被其他微生物污染，甚至死亡。因此根据实际情况选择合适的保藏方法十分重要。 一、菌种保藏的原理： 菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性，人工创条件使其生长代谢处于最低或几乎停止的状态，以减少其变异和保持生物性状。 保藏时，一般利用菌种的休眠体（孢子、芽孢等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，以降低菌种的代谢活动，减少菌种变异，使菌种处于“休眠”状态，抑制其繁殖能力，达到长期保存的目的。 一个好的菌种保藏方法，应能保持原菌种的优良特性和较高的存活率，同时也应考虑到方法本身的经济、简便。 国内外主要菌种保藏机构介绍 国外 （1）ATCC 美国标准菌种收藏所，美国，马里兰州，罗克维尔市. （2）CSH 冷泉港研究室，美国. （3）IFO 日本大阪发酵研究所，日本大阪. （4）NRRL 美国北部地区研究实验会
菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程
菌种管理制度 1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。 2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。 3、定义 标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。 传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。 工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。 菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。 4、职责 4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。 4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。 5、规程 5.1菌种的申购 部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。 5.2菌种的接收 菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。 5.3菌种的保存 5.3.1工作用菌种的保存 工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而
ATCC菌种保藏方法
ATCC菌种保藏方法 微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡，因而常常造成菌种的衰退，并有可能使优良菌种丢失。菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。菌种保藏的方法有哪些呢? 传代保存法 有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。 传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。 一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。 传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传性状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。 液体石蜡覆盖保存法 该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行菌种保藏。 悬液保存法 即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有： ① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。
实验室菌种保存方法
实验室菌种保存方法 1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。 传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。 一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。 传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉；②菌株的遗传性状容易发生变异；③反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；④需要定期转种，工作量大；⑤杂菌的污染机会较多。 2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。 3、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如： ①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
菌种科学保藏常用方法
菌种科学保藏常用方法 中华保健食品商务网https://www.360docs.net/doc/f21805215.html, 2004-5-31 生产母种通常用PDA培养基，选用180×18毫米试管，制成斜面试管接种而成。PDA培养基配方： 土豆（去皮、去芽）200克（也可用淀粉，用量为6克/1000毫升） 葡萄糖20克 琼脂20克 磷酸二氢钾2克 复合维生素B 2克 旦白胨5克 硫酸镁0.3克 加水1300毫升 本刊记者高级农艺师丁湖广
菌种是国家重要的生物资源，是以微生物为对象的研究和生产所必不可少的材料。因此，世界各国对菌种的保藏极为重视，有55个国家专门设菌种保藏机构。国际微生物学会设有世界菌种保藏机构，简称WFCC，编写有《世界菌种保藏名录》。我国菌种保藏机构，有中国微生物菌种保藏管理委员会（设在北京），共保藏有8000多个菌株，其任务是收藏、供应各种优良菌种。 菌种保藏的目的是：使菌种长期保藏之后，仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、形态特征，以及不污染杂菌和不发生虫害。菌种保藏的原理是通过低温、干燥、隔绝空气（真空）和断绝营养等手段，以达到最大限度地降低菌种的代谢强度，抑制菌丝的生长的繁殖。由于菌种的代谢相对静止，生命活动将处休眠状态，所以能够保藏较长时间。 现将菌种保藏的几种主要方法介绍如下。 一、斜面低温保藏这是一种常用最简便的保藏方法。首先将需要保藏的菌种移接到PDA培养基上。为了减少培养基水分散发，延长保藏时间，在配制时琼脂用量加到2.5％，再加入0.2％磷酸氢二钾、磷酸二氢钾及碳酸钙等缓冲剂，以中和保藏过程中产生的有机酸。如果是保藏香菇和木耳菌种，应把配方中的葡萄糖换成麦芽糖，培养基装入量不少于12毫升。菌种接种后置于用适宜温度下培养至菌丝长满斜面，然后选择菌丝生长健壮的试管，先用硫酸纸包扎好管口棉塞，再将若干支试管用牛皮纸包好。也可以用无菌胶塞代替棉塞，既能防止污染，又可隔绝氧气，避免斜面干燥。 具体做法是：选择大小合适的橡皮胶塞，洗净晾干，在75％酒精液中消毒1小时后，用无菌纱布吸去酒精，在火焰上方烧去残留的酒精液；于无菌条件下，将试管口在火焰上灼烧灭菌，拔出棉塞，换上胶塞，再用石蜡密封，放入4℃左右的电冰箱内保存。每隔3～4个月转管一次。如果用胶塞石蜡封口，转管期可延迟至6个月。 斜面低温保藏过程，冰箱内相对湿度应控制在40％～50％，尽量少启用冰箱，以免产生冷凝水而引起污染；若必须启用应边开、边取、边关，做到快速、短暂、熟练。对于个别不耐低温的菌种，如草菇菌丝在5℃下易于死亡，一般置10～12℃条件下保藏，或加质量分数0.1无菌甘油作防冻剂，然后置于4～6℃冰箱贮藏。低温贮藏法简单易行，适用于所有食用菌，是最实用贮藏方法，已得广泛应用。在冰箱较普及的情况下，食用菌专业户、菇农等均可采用。缺点是贮藏时间短，需经常继代培养，不但费时费工，而且传代多，易引起污染、衰退或造成差错。 二、液体石蜡保藏液体石蜡又名矿油，所以该法又称矿油保藏法。这种方法操作简便，只要在菌苔上灌注一层无菌的液体石蜡，即可使菌种与外界空气隔绝，达到防止培养基水分散失，抑制菌丝新陈代谢，推迟菌种老化，延长菌种生命和保存时间的目的。所以此种方法也称为隔绝空气保藏法。 具体操作：选用化学纯液体石蜡100毫升，装入250毫升锥形瓶内，瓶口加棉塞，置于0.103兆帕（1.055千克/厘米2）灭菌30～60分钟；然后置于160℃烘箱中处理1～2小时；或置40℃温箱内3天左右，见瓶内液体石蜡呈澄清透明，液层中无白色雾状物时即可。其目的是使灭菌时进入瓶内的水分得到蒸发。然后在无菌条件下，将液体石蜡倾注或用无菌吸管移入生长健壮、丰满的斜面菌种上，使液体石蜡高出斜面顶端1厘米左右；最后直立放置在洁净的室温下贮藏，转管时直接用刀切取1小块菌种，移接到新的斜面培养基中央，适温培养，余下的菌种仍在原液体石蜡中贮藏。 因经贮藏后的菌丝沾有石蜡，生长慢而弱，需再继代转接1次方可使用。贮藏场所应干燥，防止棉塞受潮发霉；定期观察，凡斜面暴露出液面，应及时补加液体石蜡。也可用无菌橡皮塞代替棉塞：或将棉塞外露部分用刀片切除，蘸取融化的固体石蜡封口，以减慢蒸发。此法贮藏时间可达1年以上，有的可达10年，效果好。 三、悬液保藏此法是将需要保种的菇类菌丝球或孢子保藏在适当的媒液中。现介绍3种媒液的保藏方法： 1、生理盐水保藏法：本法适合保藏深层培养的菌丝球，以无菌生理盐水作为媒液进行保藏。首先制备生理盐水，按常规法制备0.85％的生理盐水，健壮试管每管装约5毫升，经高压灭菌。将保藏的菌种接入马铃署、葡萄糖液体培养基中，250毫升三角瓶装入60毫升，振荡培养5～7天（27～28℃，180转/分）。然后吸取菌丝球4～5个放入上述试管中，管中加上无菌橡皮塞，并用固体石蜡封好，置于4℃下保藏。据黑龙江应用微生物研究所报道，用此法保藏香菇、紫芝菌种，可存活18个月：保藏双孢蘑菇、木耳、银耳、金针菇、茯苓、假蜜环菌、金顶磨、糙皮侧耳、猴头菌等菌种、可存活2年。 2、蒸馏水保藏法：这是保存斜面菌种和孢子最简单的方法，有效期可达1年以上。斜面蒸馏水贮藏：在锥形瓶内装入容量1/3左右的蒸馏水，加棉塞，在0.103兆帕（1.055千克/厘米2）121℃灭菌30分钟，冷却。在无菌条件下，将蒸馏水倾注入需保藏的斜面菌种内。加水量需高出斜面顶端1～2厘米，更换无菌橡皮塞，