抗体实验方法

一、抗血清的制备

有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。

（一）用于免疫的动物

作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r -免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。

（二）免疫途径

免疫途径有多种多样，如静脉内、腹腔内、肌肉内、皮内、皮下、淋巴结内注射等，一般常用皮下或背部多点皮内注射，每点注射0.1 ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。

（三）佐剂

由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。

佐剂除了延长抗原在体内的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状内皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。

常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～2 0mg卡介苗就成为完全佐剂。

配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min内完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另一注射器装佐剂，二者以聚乙烯塑料管连接，然后二者来

回反复抽吸，约数十分钟后即能完全乳化。检查合格后即以其中一注射器作注射用。

（四）免疫方法

抗原剂量，首次剂量为300～500μg，加强免疫的剂量约为首次剂量为1/4左右。每2～3周加强免疫一次。加强免疫时用不完全佐剂，首次免疫时皮下注射百日咳疫苗0.5ml，加强免疫时不必注射百日咳疫苗。

在第2次加强免疫后2周，从耳缘静脉取2～3ml血，制备血清，检测抗体效价（见后）。如未达到预期效价，需再进行加强免疫，直到满意时为止（图2-3）。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。

图2-3 抗体反应

（五）抗血清的采集与保存

家兔是最常用以产生抗体的动物，因此这里主要讨论兔血的收集。羊等较大动物以颈静脉、动脉取血，鼠等小动物取血可参阅有关资料。取兔血有两种方法，一是耳缘静脉或耳动脉放血，一是颈动脉入血，也可心脏采血。取动脉或静脉放血时，将兔放入一个特造的木匣或笼内，耳露于箱（笼）外，也可由另一人捉住兔身。剪去耳缘的毛，用少许二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管扩张、充血。用手轻拉耳尖，以单面剃须刀或尖的手术刀片，快速切开动脉或静脉，血液即流出，每次可收集30～40ml 。然后用棉球压迫止血，凝血后洗去二甲苯。二星期后，可在另一耳放血。此法可反复多次放血。颈动脉放血时，将兔仰卧，固定于兔台，剪去颈部的毛，切开皮肤，暴露颈动脉，插管，放血。放血过程中要严格按无菌要求进行。

收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）析出血清，离心，4000rpm,10min。在无菌条件，吸出血清，分装（0.05～0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后贮存于4。C 冰箱保存。

（六）抗血清质量的评价

在免疫期间，不仅各个不同的动物，而且同一动物在不同的时间内抗血清效价、特异性、亲合力等都可能发生变化，因而必须经常地采血测试。只有在对抗血清的效价、特异性、亲合力等方面作彻底的评价后，才可使用所取得的抗血清。

1．效价抗血清的效价，就是指血清中所含抗体的浓度或含量。效价测定的方法常用的是放射免疫法，此法对所有的抗体均适用。某些由大分子（如蛋白类）抗原所产生的抗体，可用双扩散等方法测定。前者测定的效价极为精确。而后者则粗糙得多。

（1）放射免疫法：以不同稀释度的抗血清与优质标记抗原混合，孵育24h后，测定其结合率。通常以结合率为50%的血清稀度和为效价。如某抗血清的结合率为50%时的稀释度为1：15000，则该血清的效价就是1：15000。抗血清的效价，除由抗血清本身的性质决定外，还受标记抗原的质量、孵育时间，所用稀释液的成分及其pH等因素的影响，在工作中必须引起注意。（测定方法见第8章）（2）双向扩散法：利用大分子抗原和抗体在琼脂平板上扩散，两者在相交处产生沉淀线，以观察和判断抗血清中是否有抗体及其浓度。

球脂板的制备：100ml pH7.1 的磷酸盐缓冲液加到15g的琼脂内，于水浴中加温，搅拌，使琼脂完全溶解，趁热用纱布过滤，待溶液冷却到65℃左右时，加入叠氮钠（NaN3），使其在溶液中的浓度为0.1%。用移液管把琼脂放在干净平皿或玻片上，约3mm厚，待其冷却，完全凝固后，用打孔器打孔（图2-4）。中央孔内加适量抗原（容量为50μl），周围各孔内分别加入50μl 1：2、1：4、1：8、1：16、1：32及不稀释的抗血清，37℃下孵育24h，观察有无沉淀线产生，以判断血清的稀释度（图2-5）。

图2-4 双向扩散模型

图2-5 免疫扩散试验

2．特异性测定抗血清的特异性或称专一性是指抗血清对相应的抗原及近似的抗原物质的识别能力。特异性好就是抗血清的识别能力强。通常，特异性是以交叉反应率来表示的。交叉反应率低，表示抗血清的特异性好，反之则特异性差。交叉反应率一般是用竞争抑制曲线来判断的。以不同浓度的抗原和近似抗原物质分别做竞争抑制

2019版HIV抗体检测实验室样品登记

HIV抗体检测中心实验室样品登记收样日期样本编号送检单位份数样本来源或类别样本性状初筛时间结果（详见报告） 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。 1.县CDC; 2.1.VCT；2.看守所； 3. 盲样；4. 1.全血采集 2.血清 3.血浆 4. 阴性份；可疑份；复试阴性份，复试阳性份；确证阴性份，确证阳性份。小结年月，共计份。其中， VCT 份；看守所份；HIV抗体阳性复试份；确证结果：阴性份，阳性份。年月，共计份。其中， VCT 份；看守所份；HIV抗体阳性复试份；确证结果：阴性份，阳性份。

常用的单克隆抗体检测方法

常用的单克隆抗体检测方法通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2

0.15ml。TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。g、抗体对照：以骨髓瘤细胞培养上清作为阴性对照，以免疫鼠血清作为阳性血清。h、抗原：可溶性抗原：尽量纯化，以获得高特异性。病毒感染的传代细胞或全菌抗原。淋巴细胞等悬液。i、酶标抗鼠抗体或酶标SPA或其他类似试剂。j、细胞固定液：-20℃丙酮；或丙酮-甲醛固定液：Na2HPO4 100mg，KH2PO4 500mg，蒸馏水150ml，丙酮225ml，甲醛125ml；或丙酮-甲醛溶液（1；1）；或-20℃甲醇。k、聚苯乙烯微孔板：40孔、96孔、或条孔；硬板或软板均可使用。l、酶联免疫阅读仪；或光镜。m、吸管、加样器及水浴箱、离心机等。②可溶性抗原的酶联免疫吸附试验（ELISA）a、纯化抗原用包被液稀释至1-20ug/ml。 b、以50-100ul/孔量加入酶标板孔中，置4℃过夜或37℃吸附2小时。 c、弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，拍干。 d、每孔加200ul封闭液4℃过夜或37℃封闭2小时；该步骤对于一些抗原，可省略。 e、洗涤液洗3次；此时包被板可-20℃或4℃保存备用。 f、每孔加50-100ul 待检杂交瘤细胞培养上清，同时设立阳性、阴性对照和空白对照；37℃孵育1-2小时；洗涤，拍干。 g、加酶标第二抗体，每孔50-100ul，37℃孵育1-2小时，洗涤，拍干。 h、加底物

抗核抗体谱17项检测项目收费标准及临床意义

抗核抗体谱（ANAs ）检测项目及项目物价收费: 注明：项目编号250402003-2抗核提取物抗体测定，其中包含检测抗体（抗SSA、抗SSB、

抗JO －1、抗Sm 、抗nRNP 、抗ScL-70 、抗着丝点抗体的测定）该表中湛江及附院收费是参考2011 年版的湛江物价局医疗收费及附院0212 年收费，请核对并完善。抗核抗体谱17s 亚辉龙中标编号：3179998 ，中标价：133.00/T, 优惠价：120.00/T ，抗核抗体谱12S 亚辉龙中标编号：3179999,中标价格：120.83/T,优惠价：96.00/T ，抗核抗体谱8S 亚辉龙中标编号：3180000，中标价格：99.00/T,优惠价：70.00/T 项目的临床意义如下： 1. 高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD ，夏普综合征）的标志，阳性率为95-100％，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40％的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。 2. 抗SmD1 抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA 抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10％。 3. 抗SS-A（Ro60）抗体最常见于干燥综合征（40-80 %）、也见于系统性红斑狼疮（30-40％）和原发性胆汁性肝硬化（20％）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100%的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A 抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。 4. 抗SS-A （RO52）抗体在自身免疫性疾病中是一个非特异性指标，与多种自身免疫性疾病都有相关性，在很多疾病处于稳定期、控制好的情况下会显示阴性；如果阳性会提示复发或者优先于其它指标预警，起到预防提示作用。此指标合并其它指标阳性，常会提示预后不好。 5. 抗SS-B 抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80%）和系统性红斑狼疮（10-20%）的女性患者中，男女比例为29:1。在干燥综合征中抗SS-A 抗体和抗SS-B 抗体常同时出现。 6. 抗Scl-70 抗体见于25-75%的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化症中不出现。 7. 抗Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为25-35 %。常与合并肺间质纤维化相关。 8. 1977 年，Wolfe 及其同事首先在多肌炎病人中描述了抗PM-Scl 抗体，并把该抗体叫做抗PM 抗体。在1984年，Reichlin 与其同事经过研究，发现了抗PM-1 抗体的更准确的特征和命名（抗PM-Scl 抗体）。在50-70%的所谓的重叠综合征患者中可检出这些抗体，在这些患者中可合并出现多肌炎（PM）、皮肌炎（DM ）和进行性系统性硬化症（Scl）。抗PM-Scl抗体在进行性系统性硬化症（弥散型）中的阳性率为3%，在多肌炎和皮肌炎中的阳性率为8%。 9. 抗着丝点抗体与局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征：钙质沉着、Raynaud's 病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。 10. 抗PCNA 抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性，但其阳性率仅为3% 11. 抗dsDNA 抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm 抗体外，抗dsDNA 抗体也可作为该病的一个血清学指标，阳性率为40-90% 。 12. 在系统性红斑狼疮患者血清中可检出抗核小体抗体，但是，由于用传统的核小体制品进行检

蛋鸡抗体检测实验室建设方法

蛋鸡抗体检测实验室建设方法一、面积、台面、墙面面积至少要有6平方，放置一张操作台（桌子，面要平，长1.5米，宽1米），一张凳子，墙用彩钢板隔开，制作一个门，保持空间独立。二、器材 1、一台小高压锅，用于灭菌。 2、冰箱，用于盛放易耗品等。 3、离心机（5000转以下）一台，用于制作红细胞。 4、移液枪两把，一把为1毫升的，另一把为200微升的。 5、电子天平一台。三、耗材 1、枪头，1毫升的及200微升的，各500个。 2、盛放枪头的盒子，两种规格，各5个。 3、Ependorf管100个，Ependorf管架2个。 4、葡萄糖瓶子10各。 5、量筒2个。 6、记号笔一支。四、血凝试验(HA) 定义：某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HA) 血凝抑制试验(HI) 定义：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。原理：特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。阿氏（Alsevers）液配制

口蹄疫O型间接血凝抗体检测试验

口蹄疫O型间接血凝抗体检测试验一、原理：用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验（IHA）。抗原与其对应的抗体相遇，在一条件下形成抗原—抗体复合物。但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。将抗原吸附（致敏）在红细胞表面，制成口蹄疫血凝抗原，用于检测免疫动物血清中的口蹄疫抗体水平。这种经过口蹄疫抗原致敏的红细胞与口蹄疫抗体相遇，红细胞便出现清晰的凝集现象。二、主要组分： 1．口蹄疫O型血凝抗原5ml/瓶，5瓶/盒； 2．口蹄疫O型阳性对照血清0.5ml/管，1管/盒，阳性血清已1:4稀释； 3．口蹄疫O型阴性对照血清0.5ml/管，1管/盒； 4．稀释液50ml/瓶，2瓶/盒； 5．封板膜10张/盒。三、试验器材： 1．96孔110°V型医用血凝板； 2．8道或12道移液器； 3．微量振荡器。四、物理性状： 1．抗原摇匀呈棕红色（或咖啡色），静置后，血球逐渐沉入瓶底； 2．阴性对照血清淡黄色清亮稍带粘性的液体； 3．阳性对照血清微红或淡黄色稍浑浊带粘性的液体； 4．稀释液淡黄或无色透明液体，低温下放置，瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶，不影响使用。五、作用与用途：用于检测口蹄疫O型疫苗免疫动物血清抗体效价。六、用法与判定： 1、用法 1.1加稀释液在血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和第5～7孔；加稀释液50μl/孔。 1.2稀释待检血清待检血清使用前，需经过56℃水浴灭活30分钟，取待检灭活血清样品50μl，分别加入反应板1～6排的第1孔中，与稀释液混匀后，吸取50μl，加于第2孔中，依次作2倍系列稀释至第10孔，第10孔混匀后取出50μl弃去。 1.3稀释阳性对照血清在血凝板的第7排第1孔加阳性血清50μl，2倍系列稀释至第10孔，混匀后从该孔取出50μl丢弃。此时被检血清和阳性血清的稀释倍数依次为1:2～1:1024。

ELISA检测方法

ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。双抗夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。间接法间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

抗核抗体检测试剂注册技术审查指导原则

抗核抗体检测试剂注册技术审查指导原则 (征求意见稿) 本指导原则旨在指导注册申请人对抗核抗体( Antinuclear antibody ，ANA )检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是对抗核抗体检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围抗核抗体作为自身免疫病( autoimmune diseases ，AID ) 重要的生物学标志，是临床应用中最广泛、最基础的一组自身抗体。临床常见于系统性红斑狼疮 ( Systemic Lupus Erythematosus ，SLE )、干燥综合征、系统性硬化病、混合结缔组织病及多发性肌炎/皮肌炎等系统性(非器官特异性) AID 患者。同时，ANA 可见于器官特异性AID 患者，如自身免疫性肝病、自身免疫性甲状腺炎等。除此之外，ANA 也可见于慢性感染性疾病及健康人群中细胞核是ANA 靶抗原所在的最重要的结构部位，因此传统意义上的

ANA 是指抗细胞核抗原成分的自身抗体总称。随着检测技术的改进，尤其是培养细胞抗原基质（如HEp-2 细胞）的广泛应用，ANA 的定义扩展到以真核细胞各种成分（包括细胞核、细胞浆、细胞骨架蛋白及细胞分裂周期蛋白等）为靶抗原的自身抗体的总称。目前，ANA 检测分成ANA 总抗体的检测和针对靶抗原的特异性自身抗体检测。其中，ANA 总抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence,IIF ）、酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay ，ELISA ）等。ANA特异性自身抗体检测方法主要包括ELISA法、线性免疫印迹法（line immunoassay,LIA ）、化学发光免疫分析法（c hemiluminescence immunoassay,CLIA ）等。本指导原则所述抗核抗体检测试剂是指利用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附法、化学发光法、线性免疫印迹法等基于抗原抗体反应原理，针对人血清、血浆样本中总抗核抗体或针对靶抗原的特异性自身抗体进行体外定性和/ 或半定量和/或定量检测的试剂。同时，本指导原则是针对抗核抗体检测试剂的通用指导原则，申请人应结合具体产品的特点进行申报。如果申报产品有具体指导原则，应参照执行。本指导原则适用于进行注册申请和相关许可事项变更的产品。依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5 号）（以下简称《办法》）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管 2013 〕242 号），抗核抗体及针对靶抗原的特异性自身抗体检测试剂属于自身抗体检测试剂，管理类别为□类6840。二、注册申报资料要求注册申报资料的撰写应符合《办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014 年第44 号）（以下简称44 号公告）

过敏原特异性IgE抗体检测试剂技术审查指导原则

附件2 过敏原特异性IgE抗体检测试剂技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对过敏原特异性IgE抗体（Allergen-specific IgE）检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。本指导原则是对过敏原特异性IgE抗体（Allergen-specific IgE）检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。如申请人认为有必要增加本指导原则不包含的研究内容，可自行补充。本指导原则是供申请人和审查人员的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、范围 I型过敏反应性疾病相当普遍，人群总发病率高达10%～30%，

是当前世界性的重大卫生学问题，被世界卫生组织（WHO）列为二十一世纪重点防治的三大疾病之一。过敏性疾病是患者吸入、食入或者注入含有致敏成分的物质（称为过敏原或变应原，Allergen）后触发机体的B细胞产生特异性免疫球蛋白E（Immunoglobulin E, IgE），IgE以其Fc 段与肥大细胞或嗜碱性粒细胞的表面相应的FcεRI结合，使机体处于对该过敏原的致敏状态。当相同过敏原再次或多次进入致敏机体时，可与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面的IgE发生特异性结合，当过敏原与致敏细胞表面的两个或两个以上相邻的IgE结合时，发生FcεRI 交联，使肥大细胞和嗜碱性粒细胞活化，导致细胞脱颗粒并释放储存在细胞浆颗粒里的炎性介质——组胺，并通过花生四烯酸途径合成新介质——白三烯、免疫反应性前列腺素和IL4、IL5等细胞因子及趋化因子，从而引发过敏反应（或称变态反应，Allergy）的疾病及相关症状，如过敏性哮喘、枯草热、荨麻疹、过敏性鼻炎、湿疹、结膜炎及胃肠道I型过敏性疾病及严重过敏反应等。上述过敏性疾病的发生，IgE抗体起关键作用。I型过敏反应性疾病的特征是患者体内循环血液中的过敏原特异性IgE抗体浓度较正常状况下高，且特异性IgE抗体浓度越高，诊断过敏性疾病的概率越高。本指导原则适用于过敏原特异性IgE抗体检测试剂，包括总IgE和特异性IgE，同时适用于不同的检测方法（原理）。本指导原则适用于申请产品注册和相关许可事项变更的产品。二、基本要求

实验一抗体的制备及效价检测

实验一抗体的制备及效价检测实验目的：本实验是单克隆抗体技术的免疫阶段的过程，为单克隆抗体技术提供免疫淋巴细胞。了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术，掌握双向免疫扩散法测定抗体的效价。一．实验原理机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫和细胞免疫的过程。一种抗原能否引发抗体反应，一方面取决于抗原分子表面有无特异性的化学结构---抗原决定簇，另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。当上述两个条件具备时，抗原进入机体经过一定的潜伏期，抗体效价逐步上升，达到高峰后，能维持一短暂的时期，以后又逐渐下降，但当第二次接触相同的抗原时，抗体的上升较前次为快，高峰时的效价也比前次为高。抗体持续的时间也较长，此也称为再次反应。完全福氏佐剂的使用能够延长抗原在体内的存留时间，增加可溶性抗原的免疫性。通常制备抗体时常用完全福氏佐剂加强免疫。抗原、抗体在合适的浓度和比例条件下，抗原和其相应的抗体在有固相支持的液相环境中各自发生扩散。分子双向扩散接触时形成肉眼可见的沉淀线反应。抗体的效价即时指与固定浓度的抗原发生沉淀反应时所需的最小抗体浓度。二．实验步骤 1．动物的选择：选择2-3个月以上的小鼠。免疫作好标号。分笼饲养。 2．抗原的选择：将抗原（纤维素酶）稀释为4 mg/ml，即可与佐剂混合制成乳剂用于动物免疫。 3．佐剂和抗原乳剂的制备佐剂完全福氏佐剂：轻矿物油（石腊油）8.5 ml；羊毛脂1.5 ml；灭活结核杆菌10 mg。抗原乳剂制备（1）油剂：矿物油和羊毛脂按比例混合，高压8磅20分钟灭菌后作为油剂，使用前微火融化。（2）水剂：灭活结核杆菌1 mg/ml + 抗原4 mg/ml （均为终浓度）。（3）油剂和水剂1：1混合。混合方式：研磨或者注射器混合。 4．免疫方法：小鼠背部皮下多点注射，每点0.1ml。第1次免疫：实验组小鼠加佐剂的抗原。 A组2只（1-2号）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml磷酸缓冲液。 B组4只（3-6号）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml加佐剂的抗原乳剂。第2次免疫：第3周实验组小鼠不加佐剂抗原。 A组：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml磷酸缓冲液。 B组：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml2mg/ml抗原液。第3次免疫：第二次免疫后1周，实验组小鼠不加佐剂抗原。 A组：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml磷酸缓冲液。 B组：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml2mg/ml抗原液。 5．抗血清的制备第3次免疫一周后，眼眶取血或心脏取血。收集的血液置于室温下1h左右，凝固后，置4℃下，过夜（切勿冰冻）析出血清，离心，4000rpm,10min。在无菌条件，吸出血清，分装（0.05～0.2ml），贮于-40℃以下冰箱，或冻干后贮存于4度冰箱保存。

抗核抗体谱项检测项目收费标准及临床意义

抗核抗体谱（ANAs）检测项目及项目物价收费：注明：项目编号3-2抗核提取物抗体测定，其中包含检测抗体（抗SSA、抗SSB、抗JO

－1、抗Sm、抗nRNP、抗ScL-70、抗着丝点抗体的测定）该表中湛江及附院收费是参考2011年版的湛江物价局医疗收费及附院0212年收费，请核对并完善。抗核抗体谱17s亚辉龙中标编号：3179998，中标价：T, 优惠价：T ，抗核抗体谱12S亚辉龙中标编号：3179999, 中标价格：T, 优惠价：T，抗核抗体谱8S亚辉龙中标编号：3180000 ，中标价格：T, 优惠价：T 项目的临床意义如下： 1.高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率为95-100％，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40％的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。 2.抗SmD1抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10％。 3.抗SS-A（Ro60）抗体最常见于干燥综合征（40-80％）、也见于系统性红斑狼疮（30-40％）和原发性胆汁性肝硬化（20％）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在100％的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。 4.抗SS-A（Ro52）抗体在自身免疫性疾病中是一个非特异性指标，与多种自身免疫性疾病都有相关性，在很多疾病处于稳定期、控制好的情况下会显示阴性；如果阳性会提示复发或者优先于其它指标预警，起到预防提示作用。此指标合并其它指标阳性，常会提示预后不好。 5.抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80％）和系统性红斑狼疮（10-20％）的女性患者中，男女比例为29:1。在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现。 6.抗Scl-70抗体见于25-75％的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬化症中不出现。 7.抗Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为25-35％。常与合并肺间质纤维化相关。 8.1977年，Wolfe及其同事首先在多肌炎病人中描述了抗PM-Scl抗体，并把该抗体叫做抗PM抗体。在1984年，Reichlin与其同事经过研究，发现了抗PM-1抗体的更准确的特征和命名（抗PM-Scl抗体）。在50-70%的所谓的重叠综合征患者中可检出这些抗体，在这些患者中可合并出现多肌炎（PM）、皮肌炎（DM）和进行性系统性硬化症（Scl）。抗PM-Scl抗体在进行性系统性硬化症（弥散型）中的阳性率为3%，在多肌炎和皮肌炎中的阳性率为8%。 9.抗着丝点抗体与局限型进行性系统性硬化症（CREST综合征：钙质沉着、Raynaud’s 病、食管功能障碍、指硬皮病、远端血管扩张）有关，阳性率为70-90%。 10.抗PCNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性，但其阳性率仅为3％ 11.抗dsDNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗Sm抗体外，抗dsDNA 抗体也可作为该病的一个血清学指标，阳性率为40-90%。

艾滋病快速抗体检测标准操作规程

艾滋病快速抗体检测标准操作规程(sop) 编写日期：2012-7-4 报送日期：2012年7月生效日期：2012年7月审批人员：毕永章版本号: 1.0 批准日期:2012-7-4 审阅人:毕永章 1、目的 1.1本SOP规定本实验室HIV快速检测标准操作程序。 1.2本SOP为本院临床检验室HIV检测操作手册。 2、范围 2.1实用于本院临床检验室HIV1+2抗体快速检测。 3、责任和要求 3.1为保证HIV检测结果准确无误，实验室操作人员请按此标准操作程序要求操作。 3.2凡违反此SOP操作程序的检测，将视为无效检验。 4、试剂与方法 4.1试剂：人类免疫缺陷病毒（HIV1+2）抗体检测试剂盒。 4.2方法：胶体金法。 5、检测原理 5.1本检测采用基因工程制备的gP41、gP120、gP36抗原为包被和金标抗原，应用双抗原夹心法检测HIV抗体。当待检标本中含HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体—金标抗原复合物，在虹吸作用

下向前移动，遇到包被抗原形成抗原—抗体—金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。 6、样本要求及实验条件 6.1样本为血清或血浆，无明显溶血、污染、混浊及脂质。 6.2样本在2小时内完成HIV快速检测，注意无菌操作。 6.3检测在8——30℃下进行，多余试剂存冰箱2——8℃保存，检测前需要与室温平衡。 6.4样本冷冻保存一年以上，申请上报经领导批复后方能作消毒消毁处理。 7、检测流程 7.1以发现更多的HIV感染者为目的，本实验室只做初筛检测。 7.2阳性结果报送CDC复检，附HIV检测流程图。 8、检测方法 8.1撕开HIV1+2检测板包装袋，取出检测板水平放置于实验台。8.2在S加样孔中滴2——3滴血清或血浆，不再加稀释液。 8.3在15——30分钟内观察结果，超时需重新检测。 9、检测结果判断 9.1阳性：出现质控线和任意一条或两反应线均为阳性。 9.2阴性：仅在质控区出现一条红线，则实验结果为阴性。 9.3无效：无质控红线，或只有反应线，检测无效。须重新检测。 10、结果解释与咨询 10.1阳性结果解释为可疑或待复查，填HIV抗体复检表（HIV抗体

药敏试验及抗体检测试验方法

药物敏感性试验一试验前的准备工作 1高压灭菌平皿、棉签，灭菌后放入培养箱中烘干。 2按照营养琼脂上的说明来配制固体培养基，115℃高压灭菌15分钟。 3 将试验台进行紫外灯消毒15~30分钟。二试验方法 1 先用酒精棉球擦拭试验台面然后再点燃酒精灯。 2 用酒精棉球消毒双手，将高压灭菌后的营养琼脂倒入玻璃平皿的三分之一高度。 3 将倒好琼脂的平皿水平放置在试验台上，让琼脂冷却凝固同时打开紫外灯消毒15分钟。 4 将采集好的病料如带菌棉签、肝脏、肠道、脾脏等直接涂于培养基上，涂抹均匀后直接贴药敏片。 5 将贴好药敏片的平皿放入恒温培养箱中37℃培养16~18小时。 6 观察试验结果测量抑菌直径。三结果判定

血凝试验与血凝抑制试验一试验材料离心机及离心管、冰箱、微量振荡器、96孔v型板、微量移液器、一次性吸头、注射器、天平二试验用试剂 1 抗凝剂用天平称量3.8g柠檬酸钠，溶入100ml生理盐水中，待溶解完全后即可使用。 2 生理盐水 3 标准抗原 4 1%红细胞悬液由鸡心脏采血或翅静脉采血，放入加有抗凝剂的离心管中（抗凝剂：全血=1:2的比例）。2500转离心8分钟。用吸管吸去上清液和红细胞沉淀上层白色沉淀层，将沉淀的红细胞用生理盐水混匀后离心，如此反复离心4~5次。若要配制10ml的1%红细胞悬液需取0.1ml红细胞沉淀，加入9.9ml的生理盐水中混匀即可。 5 被检血清由鸡心脏或翅静脉采血0.5ml静置或离心，待血清析出后备用。 6 被检卵黄收集鸡蛋，用清水洗净蛋壳外表，取卵黄液1ml ，加生理盐水1ml，充分混匀后备用。三实验方法（一）血凝试验

实验一免疫抗体的制备及效价检测.

实验一免疫抗体的制备及效价检测一．教学目标：本实验是单克隆抗体技术的免疫阶段的过程，为单克隆抗体技术提供免疫淋巴细胞。了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术，掌握双向免疫扩散法测定抗体的效价。二．重点难点：给小鼠注射抗原的实验操作，小鼠心脏取血的实验操作。载玻片琼脂凝胶板打孔实验操作。三．授课方式与教学方法：讲解原理、实验操作示范或具体指导。四．教学内容: 实验原理机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产生体液免疫和细胞免疫的过程。一种抗原能否引发抗体反应，一方面取决于抗原分子表面有无特异性的化学结构---抗原决定簇，另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。当上述两个条件具备时，抗原进入机体经过一定的潜伏期，抗体效价逐步上升，达到高峰后，能维持一短暂的时期，以后又逐渐下降，但当第二次接触相同的抗原时，抗体的上升较前次为快，高峰时的效价也比前次为高。抗体持续的时间也较长，此也称为再次反应。完全福氏佐剂的使用能够延长抗原在体内的存留时间，增加可溶性抗原的免疫性。通常制备抗体时常用完全福氏佐剂加强免疫。抗原、抗体在合适的浓度和比例条件下，抗原和其相应的抗体在有固相支持的液相环境中各自发生扩散。分子双向扩散接触时形成肉眼可见的沉淀线反应。抗体的效价即时指与固定浓度的抗原发生沉淀反应时所需的最小抗体浓度。实验步骤 1．动物的选择：选择2-3个月以上的小鼠。免疫作好标号。分笼饲养。 2．抗原的选择：将抗原（纤维素酶）稀释为4 mg/ml，即可与佐剂混合制成乳剂用于动物免疫。 3．佐剂和抗原乳剂的制备佐剂完全福氏佐剂：轻矿物油（石腊油）8.5 ml；羊毛脂1.5 ml；灭活结核杆菌10 mg。抗原乳剂制备（1）油剂：矿物油和羊毛脂按比例混合，高压8磅20分钟灭菌后作为油剂，使用前微火融化。（2）水剂：灭活结核杆菌1 mg/ml + 抗原4 mg/ml （均为终浓度）。（3）油剂和水剂1：1混合。混合方式：研磨或者注射器混合。 4．免疫方法：小鼠背部皮下多点注射，每点0.1ml。第一次免疫：实验组小鼠加佐剂的抗原。 A组3只（头部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml磷酸缓冲液。 B组3只（尾部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml 2mg/ml纤维素酶液。 C组6只（中部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml加佐剂的抗原乳剂。第二次免疫：第3周实验组小鼠不加佐剂抗原。 A组3只（头部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml磷酸缓冲液。 B组3只（尾部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml 2mg/ml纤维素酶液。 C组3只（中部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml2mg/ml纤维素酶液。第三次免疫：第二次免疫后1周，实验组小鼠不加佐剂抗原。 A组3只（头部有黄色）：每只小鼠背部、腋下多点注射，共计0.4 ml磷酸缓冲液。

HIVELISA法抗体检测细则

HIV(ELISA法抗体检测细则 1. 目的根据《全国艾滋病检测技术规范》（2004年版），对艾滋病病毒抗体检测作必要的细化和补充，以规范本实验室对艾滋病病毒抗体的检测方法。 2. 适用范围本检测细则适用于对人体血液中艾滋病病毒抗体检测。 3. 职责 3.1 检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测； 3.2 复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核； 3.3 科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。 4. 检测依据 GB16000－1995艾滋病诊断标准及处理原则。 5. 方法原理在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1+2)型抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，同时加入HRP标记HIV(1+2)型抗原，然后用TMB底物作用显色，加入终止液终止反应，有颜色变化的微孔板变为黄色，颜色的深浅与血清中HIV抗体含量呈正比，通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。 6. 检测仪器设备名称、型号和材料 6.1美国宝特ELX800型酶标仪； 6.2 水浴箱37℃±1℃； 6.3 (新鲜的)蒸馏水或去离子水； 6.4 容量器(用于准备洗涤液)； 6.5 一次性隔离衣、手套、帽子、鞋套。 6.6 计时器； 6.7 84消毒液、75%乙醇； 6.8 适用于盛装有可能受污染的物品的容器； 6.9 吸水纸；

6.10 微板振荡器（用于溶解及混匀结合物与样品，速度约为900r/min）； 6.11 KHB ST-36W洗板机； 6.12 加样器(20～100μL)，准确度±2%及一次性加样头。第1页共7页 7. 检测环境条件所有的实验应20℃～25℃室温中进行 8. 检测步骤 8.1 检测前准备 8.1.1 样品收集和准备 a. 不需要特殊准备，不需要病人禁食； b. 血清和血浆都可使用，柠檬酸，肝素和EDTA等抗凝剂不会产生影响，但不能与其他药物并用； c. 血液应以一般法收集，并要小心处理； d. 自血清中去除纤维蛋白，自血浆中去除红血球，避免溶血； e. 标本中若含氮化钠或微粒物质会产生错误结果； f. 高胆红素血、高溶血、乳糜血或高蛋白血标本通常会影响实验结果； g. 标本中应无微生物，在2℃～8℃温度下，可保存一周，新鲜血液标本可长期保存在-20℃，标本要避免反复冻融； h. 经一个冷冻/融化周期处理或在56℃30分钟的热灭活标本不会影响实验结果； i. 标本上应有与其它标本分开产，并有明显标记(如HIV检测、姓名、编号或时间)。 8.1.2 检测试剂：本实验室采用珠海丽珠和英科新创两种人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型艾滋病病毒抗体酶联免疫检测试剂(双抗原夹心法) 珠海丽珠英科新创 a. 微量酶标板12×8孔；微量酶标板12×8孔 b. 1瓶HIV阳性对照（1ml）， 1瓶HIV阳性对照（1ml） c. 1瓶HIV阴性对照（1ml）； 1瓶HIV阴性对照（1ml） d. 1瓶(50mL/瓶)浓缩洗涤液(20×)； 2瓶(25mL/瓶)浓缩洗涤液(20×)

抗原或抗体的检测方法概述

抗原或抗体的检测方法概述一、检测的原理借助抗原和抗体在体外特异结合后出现的各种现象，对样品中的抗原或抗体进行定性、定量、定位的检测。 1．抗原与抗体的亲和力(affinity)抗原抗体的结合就像酶与底物的结合，激素与其受体的结合一样不是化学的反应，而是非共价键的可逆的结合。抗原决定簇和抗体分子可变区互补构型，造成两分子间有较强的亲和力。空间构型互补程度不同，抗原和抗体分子之间结合力强弱也不同。互补程度高，则亲和力强。此外，反应温度、酸碱度和离子浓度对抗原和抗体分子上各基因的解离性和电荷特性也有重要的影响，抗体与抗原决定簇之间的结合力大小可用亲合力来表示。高亲合力的抗体与抗原的结合力强，即使抗原浓度很低时也有较多的抗体结合抗原形成免疫复合物。 2．抗原或抗体外检测原理根据抗原抗体结合形成免疫复合物的性状与活性特点，对标本中的抗原或抗体进行定性、定位或定量的检测。定性和定位检测比较简单，即用已知的抗体和待检样品混合，经过一段时间，若有免疫复合物形成的现象发生，就说明待检样品中有相应的抗原存在。若无预期的现象发生，则说明样品中无相应的抗原存在。同理也可用已知的抗原检测样品中是否有相应抗体。对抗原或抗体进行定量检测时，以反应中加入抗原和抗体的浓度与形成免疫复物的浓度呈函数关系。https://www.360docs.net/doc/f516510982.html, （1）根据免疫复合物产生的多少来推算样品中抗原（或抗体）的含量：在一定的反应条件下，加入的已知抗体（或抗原）的浓度一定，反应产生的免疫复合物多少与待检样品中含有相应抗原（或抗体）量成正比。也就是抗体浓度一定时，免疫复合物越多则样品中的抗原量也越多。可用实验性标准曲线推算出样品中抗原（或抗体）的含量。如免疫单向扩散试验、免疫比浊试验和酶联免疫检测等都属于这类方法。（2）抗原或抗体效价滴定的原理：当抗原抗体复合物形成多少不能反应抗原抗体反应强弱时，就不能以检测反应强度来对抗原或抗体进行定量。在实际工作中，把浓度低的反应成分（抗原或抗体）的浓度固定，把浓度高的另一种反应成分作一系列稀释。例如用人血清作抗原免疫3只家兔，比较3只家兔产生抗体的多少，即滴定3只兔血清抗体效价，可用双向琼脂扩散法来滴定，例如将抗体浓度固定，将抗原作不同的稀释度，分别将抗原或抗体滴入琼脂的相应小孔中，观察免疫兔血清与不同稀释度的抗原出现明显沉淀浅的抗原稀释度（如甲兔的抗体效价为1/2000，而丙免的是1/8000则可比较出后者比前者产生抗体的效价要高）。也就是表示效价的稀释度越高，样品中所含待检成分越多。因人血清（抗原）和抗体（免疫兔血清）相比，浓度高，故应稀释抗原。二、抗原或抗体检测的实用意义 1．抗体检测的意义检测抗体可用于评价人和动物免疫功能的指标。抗体用于临床治疗或实验研究时也需做纯度分析和定量测定。临床上检测病人的抗病原生物的抗体、抗过敏原的抗体、抗HLA抗原的抗体、血型抗体及各种自身抗体，对有关疾病的诊断有重要意义。

His抗体实验大全

His抗体推荐—Abbkine全系列His标签抗体 His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小，并且较容易分离和纯化，His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。His 抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。然而，目前商品化His-tag的单克隆抗体(mAb)种类不多, 且价格也十分昂贵。如何选择合适的His标签抗体？我们在选择His抗体时，主要根据自己的需要，特别是实验应用上的需要。其中需要考虑的因素包括了，His抗体的应用检测类型、His抗体的克隆性及制备来源等。比如该His抗体是否能用于Western Bloting的检测？是否可以用于免疫荧光IF实验？我是否需要特异性更好的单克隆His标签抗体？我是否需要考虑下是选择小鼠来源的还是兔来源的His抗体？之前有使用SSS（一家著名品牌的His标签抗体，名称隐去）的His标签抗体，一开始还好，过了半年后，就发现产品质量不稳定，做IF实验不行了，后来试用了下Abbkine的，IF结果很漂亮，顺带还买了他们的DyLight荧光二抗——广州南方医科大学一客户一般来说，应用类型越多，在使用过程中的选择余地就越大，而小鼠源的单克隆抗体一般在特异性、稳定性以及效价都要优于多克隆抗体。另外，抗体的效价也是考察该抗体性价比的重要方面，也即相当于实际应用时的稀释比率。一个效价高的100μl His 抗体（假如其WB检测的稀释比率是1:5,000，最终使用液相当于500ml），要比效价低的1ml的His抗体（假如WB检测的稀释比率是1:200，最终使用液相当于2ml）性价比更高。因此在选择抗体的时候，不但需要考虑抗体的量，还需要考虑抗体的效价，即不同应用的建议稀释比率。供应His抗体的进口品牌有很多，包括Sigma、Novagen、Qiagen、Abcam等，其中Abcam有一款值得推荐的His抗体，品名为6X His tag? antibody [HIS.H8] (货号为：ab18184)，该抗体是Abcam推荐的唯一5星级His