五种核酸提取仪的比较.doc
五种核酸自动提取仪的比较
厂家产品名称原理通量及工作效率配套耗材样品混匀模式得率及分析样本裂解单个样品样本是否需要预
方式提取成本处理
(人民币 )
BioTeke IAUTOMAG核酸磁珠法32 通道通用的毫升震荡混匀，底部高于离心柱方组织块直10-15 元不需要提取仪深孔板，可独立控温，紫外法接加入，不
以处理更高灭菌需要预先
容量样品研磨过夜
消化
ABI MAGMAX24 磁珠法24 通道毫升微孔无加热模块，低需要样品20-30 元预消化 5 小时或
板，不能处预先研磨者过夜
理体积大样过夜消化
品，专用耗
材价格昂贵
Eppendorf 5075 VAC 核酸分负压法不96 通道，只配套无加热模块，不负压法易导致需要样品20-30 元预消化 5 小时或
离纯化工作站适合提取Eppendorf 能自动提取组96 孔某些孔预先研磨者过夜
组织，会96 孔板及移织，粘稠样品，液体残留，洗过夜消化
堵液用枪头，所以叫分离纯脱不完全，洗
耗材成本高化工作站，而不脱效率低于离
是提取仪心法和磁珠法
Thermo Kingfisher 只有 8个24 通道（微孔板，容只配套专用加热模块单配，试剂需要手工需要样品20-30 元预消化 5 小时或固定的程量 200ul ）或者 15 通耗材，使用无法全自动提加，裂解需要预先研磨者过夜
序组，只道(微孔管，容量微孔板（酶取全血、组织等借助外部裂过夜消化
能通过电1000ul) ，只能处理少标板）微孔需要蛋白酶 K裂解，提取效果
脑编辑输体积样品，管，耗材成解的样品，所以低于离心柱法
入本太高叫磁珠分选纯
化仪，而不是核
酸自动提取仪，
选配加热模块
价格极高
QIAGEN QIAcube 多功能离心柱法12 通道只配套震荡加热模块离心柱法，粘组织需要20-30 元预消化 5 小时或核酸蛋白纯化工QIAGEN离心稠样品和组织预先研磨者过夜
作站柱相关试剂容易堵柱子过夜消化
盒，成本高
百泰克仪器如何避免样品交叉污染
1、百泰克仪器的设计使每个样本在提取过程中有独立的空间，整个过程中，带有DNA的磁棒只在规定的 6 个孔移动，不经过其他样本的上空，所以不会
产生滴液污染。
百泰克仪器相对于其他仪器的优势
1、百泰克仪器相对于其他仪器有明显的优势，从上述对比表格中很清楚的得出结论，最明显的优势是我们的仪器不管对于任何样本都可以提取，不会受
样本类型的影响，不会产生吸附柱堵住，移液器枪头堵住导致裂解不好等影响，纯度和得率高于对方一筹。
实验九-动物组织中核酸的提取和鉴定
实验七动物组织中核酸的提取和鉴定 【原理】 动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95％乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10％NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。 先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。 核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。 此三类化合物可用下列方法鉴定之。 1、磷酸：能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。还原成兰色的钼兰。常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。 H3PO4＋12H2MoO4→H3PO4·12MoO3 + 12H2O H3PO4·12MoO3H3PO4·6MoO3·3Mo2O5 2、嘌呤碱：能与苦 味酸作用形成针状结晶 3、戊糖： (1)核糖：经与强酸 (盐酸与硫酸)共热生成 糠醛，后者可与3;5二羟 甲基苯缩合成绿色化合 物。 (2)脱氧核糖：在强 酸中加热，可生成ω—羟 基γ—酮基戊醛，后者再 与二苯胺作用生成一蓝 色化合物。 上述二反应如下 【操作】
(一)核酸提取 l、用酚提取法： （1）取小白鼠一只，断头处死，剖腹取肝，置于研钵中，加入玻璃少许，研磨至糊状后，加入蒸馏水3ml，继续研磨约三分钟。 （2）于该研钵中再加酚液5ml，研磨约十分钟后，倒入—-圆底离心管中，离心5分钟（约2000转/分钟）。 （3）用毛细管将上液吸出，置于一圆底离心管中，加乙醚2ml，用拇指将管口按住，用力振摇1—2分钟(提出酚)，离心5分钟后，用毛细滴管吸取全部下层液于一圆底离心管中。 （4）于该管中加入95％乙醇2ml，用玻棒搅拌约2分钟，离心3分钟，取出．去上清液，沉淀部分即为核酸。 2、用三氯醋酸提取法 （1）杀兔；取肝，称重，按每克肝脏4ml比例加入1％三氯醋酸，制成肝匀浆。每组量取肝匀浆5ml于带塞离心管中，3000转／分离心5分钟。 （2）将离心后的上清液倾去，于沉淀中加95％乙醇5ml充分混匀，在水浴中加热至沸2分钟，注意酒精沸腾后将火关小，避免酒精蒸汽燃烧。冷却后离心。 （3）倾去上层乙醇液。于沉淀中再加入10％NaCI溶液4ml，置沸水浴中8分钟，并用玻棒不断搅拌，取出；冷却后再离心， （4）将上清液倾入另一离心管中，再离心一次，除去可能存在的微量残渣，将上清液倒入一试管。 取等量95％的乙醇，逐滴加入到上清液中，即可见白色沉淀逐渐出现，静置10分钟后。将其内容物摇匀后倒入一圆底离心管中，离心5分钟，将上液倾去，所得白色沉淀即为核酸钠。 (二)核酸的水解： 在有核酸沉淀的离心管中加入蒸馏水2ml。振摇至沉淀溶解后，加入10％H2SO42mL摇匀，于沸水浴中加热10分钟，即得核酸水解液，用流水冷却后进行下列定性试验。 (三)鉴定： l、嘌呤碱的鉴定： 取中试管一支，加入饱和苦味酸约2ml，再加入核酸水解液4—6滴，摇匀。静置于室温中，观察有无黄色针状结晶出现，。 2、脱氧核糖的鉴定：
c16全自动核酸提取仪操作说明
c16全自动核酸提取仪操作说明 仪器构造简介： 1 触控屏HID-Pro 320 2 仪器前门 3 样品盘适配器 4 LED指示灯 5 触摸感应器 1 带滤芯的枪头 2 收集管 3 枪头、洗脱管放置架 4 压板 5 样品槽（可直接放置试 剂板或加装适配器后放置 试剂条） 6 传送轨道 7 试剂条适配器
样品架穿孔工具 1 InnuPure接口 2 网络接口 3 USB接口 简易操作说明： 1.插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器前面LED指示灯显示红色，此时仪器 为待机状态。用手指轻触触摸感应器圆形键一秒钟（注意，不要使劲按），手指拿开后LED指示灯由红色变为绿色，此时仪器为工作状态。 开机后界面如下图所示：
Menu：菜单 Select protocol：选择程序 Tools：工具 Settings：一般设置 2.样品准备和纯化 1)样品盘放入样品架，打开夹板。 2)将试剂板放入样品槽。试剂板上的红线要 与样品槽上的红点对齐。 3)将条管适配器放入样品槽。同样适配器上 的红点要与样品槽上的红点对齐。
4)将试剂条放入样品槽。注意：有“AJ”字样的一头朝向样品盘上刻字的一边。 5)试剂条管放完后，放下压板。 6)放入枪头和收集管。注意：没放试剂条的位 置不要放。 7)将试剂条管第一和第三孔刺穿，可以使用穿 孔工具也可以使用干净的枪头。（“AJ”字样边为第一 孔） 8)将裂解后的样品加入第一孔。（具体操作详见 试剂盒说明） 9)准备好的样品盘放入仪器内，轻推，样品盘 会自动进入。
10) 根据起始样本选择合适的程序，点击开始即可。 11) 纯化完成后样品盘会自动退出，盖子盖好纯化产物放冰箱保存待用。 3. 软件功能介绍 ① 菜单： 设置新用户、设置开机密码等 ② 日期时间： 设置日期 时间 ③ 选择程序： 开始、导入、删除程序 ④ 工具： 自动校正、仪器初始化、磁力测试等仪器自检功能 ⑤ 一般设置： 用户管理、语言、更新等 ⑥ 版本信息
酵母RNA的提取及组份鉴定与核酸的定量测定
实验酵母RNA的提取及组份鉴定与核酸的定量测定 【课前预习】 1. 为什么用稀碱溶液可以使酵母细胞裂解？ 2．如何从酵母中提取到较纯的RNA? 3．干扰RNA的提取的物质有哪些并设计排除这些干扰的实验。 4．干扰紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度实验的物质有哪些？ 【目的要求】 1. 了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。 2. 了解核酸的组分并掌握其鉴定方法。 3. 学习紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理。 【基本原理】 由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3-4h，迅速冷却，提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。酵母含RNA达2. 67-10.0%，而DNA含量仅为0.03-0.516%，为此，提取RNA多以酵母为原料。RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。 核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质，其吸收高峰在260nm波长处。核酸的摩尔消光系数（或称吸收系数）用来表示。为每升溶液中含有1克
实验四 肝组织中核酸的提取和鉴定
实验四 肝组织中核酸的提取和鉴定 【目的】 验证核酸的三大组成成分。熟悉组织中核酸的提取与鉴定的基本操作方法。 【原理】 动物组织细胞中的核糖核酸（RNA ）与脱氧核糖核酸（DNA ）大部分与蛋白质结合而形成核蛋白。被三氯醋酸沉淀的核蛋白，先用95%的乙醇加热去除附着在沉淀上的脂类杂质，再用1.7mol/L NaCl 溶液提取出核酸的钠盐，然后加入乙醇即可使核酸钠盐沉淀析出。 RNA 与DNA 均可被硫酸水解产生磷酸、含氮碱基(嘌呤与嘧啶)及戊糖（RNA 为核糖，DNA 为脱氧核糖）。此三类物质分别可按照下述原理鉴定。 1.磷酸 磷酸与钼酸铵试剂作用生成黄色磷钼酸，磷钼酸中的钼在有还原剂（硫酸亚铁）存在时可被还原成蓝色的钼蓝。根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。 2.嘌呤碱 根据嘌呤碱能与硝酸银产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物而鉴定。 3.戊糖 根据核糖经浓盐酸或浓硫酸作用则生成糠醛，后者能与3，5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。 CHO C H C H C H CH 2OH OH OH OH O CHO O H CH 3 C O CH 3 O C H 3OH -H 2O 核糖 3，5-二羟甲苯 糠醛 绿色化合物 脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它和二苯胺作用生成蓝色化合物。 CHO C H C H C 2OH H H O -H 2O 浓酸脱氧核糖 蓝色化合物 CHO C H C H C H CH 2OH H OH OH ω-羟基-γ-酮基戊醛 二苯胺 【器材】 剪刀、镊子、玻棒、滤纸、试管、试管架、蒸发皿、匀浆器、离心机、沸水浴箱。 【试剂 1.生理盐水。
组织中核酸的提取与组分的鉴定
教案与讲稿 一、教案 2005级医学心理，2005级临床动物组织中核酸的 课程名称授课专业和班级本科9班，2005级临床本科6提取与组分的鉴定 班，2005级药学专科授课学 授课内容纸层析鉴定转氨作用4学时时 2006.11.27， 6、7、 8、9节， 6、 2006.11.30， 7、8、9节， 1、2、授课地点分析实验室日期节次 2006.12.1， 3、4节， 1、2、 3、 2006.12.284节 教学目的熟悉苯酚法提取动物组织中核酸的原理和操作方法；了解核酸的组成，掌握核酸组分的鉴定方法。 教学重点动物组织中核酸提取的原理和操作方法；核酸组分的鉴定
教学难点核酸提取的操作；核酸组分的鉴定 教具黑板、粉笔、实验材料、实验仪器等。 教学方法小班讲课 动物组织中核酸提取的原理和操作方法10分钟 教学过程核酸组分的鉴定10分钟 学生实验操作130分钟实验结果观察及讨论分析10分钟 （1）刘粤梅朱怀荣主编《生物化学实验教程》（人民卫生出版社） （2）张文峰黄林邦主编《分析与实验检测技术》（江西高校出版社）思考题 课后总结影响本次实验的因素？ 参考书籍 二、讲稿 （一）实验原理： 核酸由磷酸、戊糖、含氮碱基化合物组成，根据戊糖的不同可分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。由于它们在组织细胞中大部分与蛋白质结合成核蛋白，因此，提取核酸时必须使核酸与蛋白质分离开并去掉蛋白质。核蛋白可用水从动物组织（实验中用肝）中提取，再用水饱和的酚去蛋白，释放出核酸，最后用乙醇沉淀出核酸。 核酸可被硫酸水解得到磷酸、戊糖、含氮碱基化合物，根据这三种物质的性质特点可用不同的方法加以鉴定： 1．磷酸： 可与钼酸试剂作用产生磷钼酸，后者在还原剂（如维生素C或氨基萘酚磺酸等）作用下可立即被还原成蓝色的钼蓝，其颜色的深浅与磷的含量成正比。
核酸提取常见试剂的作用原理复习课程
核酸提取常见试剂的 作用原理
异硫氰酸胍 强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，在通常使用的蛋白质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍，它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态。含有强力的阴离子和阳离子基团，它们可以形成较强的氢键。在还原剂存在的情况下，异硫氰酸胍可以断裂氢键，而去垢剂，如SDS存在的情况下，可以破坏疏水作用。 盐酸胍、尿素 盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，它并不是一种足够强的变性剂，可以允许完整的RNA从富含RNase的组织中提取出来。 4-8M可断裂氢键，有两种可能机制：1变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合，形成变性蛋白-变性剂复合物，当复合物被除去，从而引起N-D反应平衡向右移动，随着变性剂浓度增加，天然状态的蛋白不断转变为复合物，最终导致蛋白质完全变性；2盐酸胍、尿素对氨基酸的增溶作用，能形成氢键，当浓度高时，能破坏水的氢键结构，结果盐酸胍、尿素就称为非极性残基的较好溶剂，使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强，盐酸胍、尿素引起的变性往往是不可逆的。 高浓度尿素使蛋白质变性并抑制Rnase活性 十二烷基肌氨酸钠 使蛋白质解体变性 巯基试剂 1防止蛋白质或酶等（如辅酶A）分子中SH基团氧化成二硫键，2在某些酶反应过程中维持体系的还原环境。DTT，DDTE、巯基乙醇应用最广，谷胱甘肽也常应用，由于他是生物体内的还原剂，同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放。DNA提取中，常使用巯基乙醇，维持缓冲液的还原环境，防止多酚类氧化，由于具有一定的毒性，浓度不应高于2%。 巯基乙醇 β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键（肽和蛋白质分子中的半胱氨酸残基中的键）。
核酸提取仪
核酸提取仪 关键词：核酸提取、核酸提取仪、纳米生物磁珠、核酸提取试剂盒 洛阳惠尔纳米科技有限公司 狄光辉 QQ：625006192 目录
第1章核酸提取技术 (4) 1.1 核酸提取技术的发展 (4) 1.2 核酸提取方法 (6) 1.2.1 CTAB法 (6) 1.2.2 离心柱子法（质粒为例） (7) 1.2.3 碱裂解法（质粒为例） (8) 1.2.4 胍盐裂解法（植物为例） (10) 1.2.5 酚抽提法（全血为例） (12) 1.2.6 Trizol法（动物组织为例） (13) 1.2.7 磁珠法（植物为例） (16) 1.3 核酸提取下游实验 (17) 1.3.1 PCR (17) 1.3.2 转基因 (18) 1.3.3 构建基因文库 (18) 1.3.4 分子测序 (18) 1.3.5 分子诊断 (19) 1.3.6 亲子鉴定 (19) 1.3.7 法医鉴定 (19) 1.3.8 基因敲除 (20) 1.3.9 基因芯片 (20) 1.3.10 动植物资源保存鉴定 (20) 第2章核酸提取仪 (21) 2.1 核酸提取仪的应用领域 (21) 2.1.1 基因组学 (21) 2.1.2 CDC (21) 2.1.3 临床样品的分子诊断 (21) 2.1.4 畜牧兽医 (21) 2.1.5 法医学的应用 (22) 2.2 核酸提取仪的结构 (22) 2.2.1 磁棒式提取仪 (22) 2.2.2 工作站提取仪 (24) 2.3 核酸提取的步骤 (26) 2.4 国外核酸提取仪的巨头公司 (26) 2.4.1 美国贝克曼库尔特有限公司 (27) 2.4.2 雅培 (27) 2.4.3 罗氏 (27) 2.4.4 QIAGEN (27) 2.4.5 Thermo (28) 2.4.6 贝克曼 (28) 2.4.7 ABI (29) 2.4.8 Promega (31) 第3章国内核酸提取仪厂家及型号介绍 (33) 3.1 台灣圓點奈米技術股份有限公司 (33)
核酸分离纯化及鉴定
[键入文字] 教学秘书 教研室主任 教学院长 制表日期 2015-2016学年第二学期 2013级临床医学八年制《基因工程实验技术》教学日历 教室安排:8号楼三楼 分子生物学实验室 （27学时） 116人 第一实验室: 喻红/杜芬 (39); 第二实验室: 张百芳/汪敏(39); 第三实验室: 苗丽霞/范成鹏(38) 2016年 课 程 内 容 学时 4月17日 周日 1. 概述基因工程基本流程及在医学中的应用（目的基因的获取；质粒载体在基因工程中的应用；重组体的连接(重 点：质粒PCR 定点突变及TA 克隆)、转化；筛选转化子的方法；原核表达体系及真核表达体系，外源基因的 表达和产物分离纯化；亚克隆；基因工程与医学实践的结合; PAGE 电泳和层析技术的介绍）； 2. 提供细菌A 液提取的质粒DNA 经PCR 定点诱变后的产物纯化溶液；提供T 载体Kit ，进行连接反应； 3. 制备含Amp 的LB 固体培养平皿； 4. 提供感受态DH5a ，将重组连接后的DNA 溶液转化、Amp 平板铺菌，培养过夜（<18h,下午开始做）（周一课 间来观察转化结果：Amp 筛选平板上的单菌落，或-4度密封保存平板至下周六） 5. 提供小量液体培养过夜的细菌B 液；转新锥形瓶，液体培养3-4h 后加IPTG 1mM 诱导表达（5h ），收集诱导 后的菌体沉淀（诱前0.5ml 两管，诱后1ml 两管和3-4ml 的若干管，用于目标蛋白的纯化） 6. 重组质粒DNA 的质粒提取及限制性内切酶双酶切图谱的鉴定（周日下午做，过夜，周一转存-20度冰箱）； 9 4月23日 周六 1. 原核表达体系中GST 融合蛋白的诱导表达及鉴定：先进行SDS-PAGE 的灌制凝胶；再将诱导前后的菌体蛋白， 进行SDS-PAGE 检测外源蛋白的诱导表达水平； 2. Western Blotting 鉴定特异蛋白的表达水平（SDS-PAGE （第一块胶）、转膜、封闭、I 抗（抗GST-Ab ）孵育过夜）； 3. 外源GST 融合蛋白的分离纯化（介绍层析技术；上午开始做）：诱导后的细菌沉淀采用溶菌酶法裂解细菌（>1h ）， Glu-Agarose beads 亲和层析法分离纯化GST 融合蛋白（提供50 ul beads ，Ep 管离心洗涤法，每班共10组）， 4. SDS-PAGE 鉴定GST 融合蛋白纯化（下午跑第二块胶，考马斯亮蓝染色>0.5h ，漂洗脱色过夜） 9 4月24日 周日 1. 酶切目的DNA 片段的非变性PAGE 鉴定 2. Western blotting （续）：洗膜、II 抗孵育1~2 h ，漂洗、DAB 显色。 3. SDS-PAGE 考马斯亮蓝染色后的脱色结果观察 4. 实验报告与总结，结果分析及讨论：（真核基因在原核生物中的表达策略） 9
abi自动核酸提取仪简明用户手册
MagMAX TM Express简明用户手册 Nov 2009
一、MagMAX Express TM 简介 MagMAX Express24用于在微孔板中自动转移和处理磁珠，依靠套有一次性使用、特别设计的磁头套的磁力棒和微孔条来完成。使用96孔板格式可以方便地与已有的液体操作工具相匹配。根据相应的试剂盒指导，样品、试剂、磁珠被放置在孔中。在提取过程中，仪器不需吸取液体。用户通过面板选用的操作流程预先储存在仪器中。 二、功能描述 1。结构（图2-1，图2-2，图2-3，图2-4） 图2-1 MME24前视图 图2-2 MME24前视图（开盖） 图2-3 MME24后视图 图2-4 MME24内视图 2。功能 MME24可同时操作两块96孔板和与磁头套相匹配的微孔条。运行时，托板不动，只有固定磁力棒和磁头套的部分移动。该部分由可上下移动的两个框架组成，一个用于固定磁力棒（12个× 2 开关 电源 风扇 串口RS-232C 托板 磁头套支架磁头套滑槽 磁力棒支架
组），另一个用于固定塑料磁头套（图2-5）。 一个样品板可容纳12条单独的微孔条；处理一个样品用一条带8个孔的微孔条。带12个头的一个磁头套用于在一块板上同时处理12个样品。 在开始仪器程序前，先把样品和试剂分配到不同的孔中（各成分在孔中的具体分配参考附录1），并把磁头套安装到滑槽上，然后把板子放到可移动的托板的相应位置并推回原位。在程序运行过程中，顶盖和前盖可以打开或关闭（图2-1，图2-2）。关闭盖板可以保护处理的样品不受环境污染。 提取基于反向磁珠处理（MPP ）技术（图2-6）。不同于一般的移动液体，而是把磁珠依次从含有不同试剂的一个微孔中移动到另一个。磁珠借助于包着一次性特殊设计的塑料磁头套的磁力棒来移动。 图2-5 MagMAX TM Express 图2-6 反向磁珠处理（MPP ）技术 磁力棒 磁头套 转移 收集前悬浮 磁珠 收集磁珠 磁珠附在 磁头套表面 磁珠释放
实验四 肝组织中核酸的提取和鉴定
实验四 肝组织中核酸的提取与鉴定 【目的】 验证核酸的三大组成成分。熟悉组织中核酸的提取与鉴定的基本操作方法。 【原理】 动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖核酸(DNA)大部分与蛋白质结合而形成核蛋白。被三氯醋酸沉淀的核蛋白,先用95%的乙醇加热去除附着在沉淀上的脂类杂质,再用1、7mol/L NaCl 溶液提取出核酸的钠盐,然后加入乙醇即可使核酸钠盐沉淀析出。 RNA 与DNA 均可被硫酸水解产生磷酸、含氮碱基(嘌呤与嘧啶)及戊糖(RNA 为核糖,DNA 为脱氧核糖)。此三类物质分别可按照下述原理鉴定。 1、磷酸 磷酸与钼酸铵试剂作用生成黄色磷钼酸,磷钼酸中的钼在有还原剂(硫酸亚铁)存在时可被还原成蓝色的钼蓝。根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。 2、嘌呤碱 根据嘌呤碱能与硝酸银产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物而鉴定。 3、戊糖 根据核糖经浓盐酸或浓硫酸作用则生成糠醛,后者能与3,5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。 CHO C H C H C H 2OH OH OH OH O CHO O H CH 3 C O CH 3 O C H 3OH -H 2O 核糖 3，5-二羟甲苯 糠醛 绿色化合物 脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛,它与二苯胺作用生成蓝色化合物。 CHO C H C H C 2OH H H O -H 2O 脱氧核糖 蓝色化合物 CHO C H C H C H CH 2OH H OH OH ω-羟基-γ-酮基戊醛 【器材】 剪刀、镊子、玻棒、滤纸、试管、试管架、蒸发皿、匀浆器、离心机、沸水浴箱。 【试剂 1、生理盐水。
2、 0、12 mol/L三氯醋酸溶液。 3、 95% 乙醇。 4、 10% NaCl溶液 NaCl 10g溶于蒸馏水中,加至100ml。 5、 0、92 mol/L H2SO4 取浓H2SO4(比重1、84,含量98%)5ml加入蒸馏水中,加水至100ml 。 6、钼酸铵试剂 钼酸铵3g,溶于70ml蒸馏水中,逐渐加入浓 H2SO4 14ml ,冷却后再加至100ml,混匀备用。 7、硫酸亚铁试剂 硫酸亚铁10、6g,硫脲5g,加蒸馏水溶解并加水至500ml,冰箱内保存备用。 8、浓氨水。 9、 0、29mol/L AgNO3 取AgNO3 5g加蒸馏水溶解并稀释至100ml,于棕色瓶避光保存。 10、 3,5二羟甲苯试剂 取浓盐酸100ml,加入FeCl3·6H2O 100mg 及二羟甲苯100mg混匀溶解后,置于棕色瓶中。临用前配制,冰箱保存。(市售3,5二羟甲苯不能直接使用,必须用苯重结晶1～2次,并用活性碳脱色后方可使用)。 11、二苯胺试剂 取1g纯的二苯胺溶于100ml冰乙酸中,加入2、75ml浓硫酸,盛于棕色瓶中,临用前配制。 【操作】 1、核酸的提取与分离: (1)将新鲜猪肝剪碎置于匀浆器中,加入等量的生理盐水,制成匀浆。 (2)将5ml肝匀浆置于离心管内,立即加入0、12mol/L三氯醋酸5ml,用玻棒搅匀,静置8分钟后离心。 (3)倾去上清液,加95% 乙醇5ml,用玻棒搅匀,再用带有长玻管的木塞塞紧离心管口,在水浴中煮沸2分钟,冷却后离心。 (4)将离心管倒置于滤纸上,使滤纸吸干乙醇。沉淀中再加入10% NaCl溶液4ml,置于沸水浴中加热8分钟,并用玻棒不断搅拌,取出冷却后再离心。 (5)将上清液倾入另一离心管内,再离心一次,去除可能存在的微量残渣。将上清液倒
A包全自动核酸提取仪技术参数要求如下
A包全自动核酸提取仪技术参数要求如下： 主要技术参数： ★1、移液针数≥8通道。 2、可自动一次性连续处理≥32个样本。单个样品可独立进行处理。 3、针对病毒样本，同时处理1—32个内参样本。 4、配有枪头缺失和凝块感应系统。 ★5、可以从动植物、昆虫、血清、血浆、组织、粪便、培养细胞等样本中纯化病原体（包括细菌和病毒）基因组DNA/RNA、mRNA，可以从痕量样本中纯化基因组DNA； 6、系统具有后处理功能，能按照用户设定程序完成，稀释、分装、配试剂等操作无需手工、避免污染。 7、试剂盒未完全使用，可暂时封存，有效期内仍可正常使用，避免多余试剂的浪费。 8、可兼容多种上样方式，包括1.5/2.0ml离心管、IC毛细管、离心适配器、1—4块96孔板等。 9、可以快速、灵活地对各种格式的样品条形码进行自动识别与纪录，并自动生成信息文件。可以兼容整合进入实验室信息管理系统。 ★10、上样体积最小为10ul。洗脱体积可选择。 11、洗脱方式可分装至1.5/2.0ml离心管、96孔板、毛细管等多种实验室常用耗材中。 12、配有加热位，样本裂解步骤在机内完成。 13、配备有冷却洗脱位，保证纯化得到的核酸不致降解。 一般技术参数： 1.应用程序可永久免费在线升级。 2.内置USB接口以及100M网卡接口，可直接网络连通。 3.高通量组织研磨仪，配以适当的适配器，可以在3分钟同时完成48-192个样本的研磨前处理。可处理样本种类包括动植物、昆虫组织等，研磨频率10-30Hz。 4、有紫外消毒装置，可对全仪器进行消毒杀菌。 5、有防滴液装置，防止液体滴落污染台面；全封闭仪器设计。 6、软件自动计算所需实验试剂的体积。 配置要求： 1.主机一台，电脑一台。 2.样品前处理：高通量组织研磨仪一台；冷冻研磨附件。 B包SPR生物检测仪技术参数要求如下： 主要技术参数： ★1. 检测通道：矩阵式多通道检测，最多可同时检测≥300个以上相互作用。 2. 分析物与探针矩阵作用方式: 分析物与矩阵内所有生物探针同时作用。 3. 检测样品范围：样品无需标记，可检测任何生物大分子，包括核酸、蛋白质、多糖及其他化合物。 ★4. 检测灵敏度：≥8 pg/mm2。 ★5.线性检测范围: 0.05%-10% 反射变化 6. 数据采集方式：实时数据－图像采集，监控动力学曲线；可选择连续或断续收集数据。同时采集所有作用点的图像数据. 7. 检测模式：高敏感度近红外CCD摄像机。 8. 偏振控制模式：S-偏振光反应。 一般技术参数： 1.光源波长：750nm－850nm 2.最小静止样品量：≤8.5μL。 3.最小流动样品量：≤ 95μL。 4.循环样品流速：0-650μL 可调。 5.样品池温度可调：最高≥60°C.
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验七 动物组织中核酸的提取和鉴定 【原 理】 动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95％乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10％NaCl 溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。 先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。 核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。此三类化合物可用下列方法鉴定之。 1、磷酸：能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。还原成兰色的钼兰。常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C 等。 H 3PO 4＋12H 2MoO 4→H 3PO 4·12MoO 3+12H 2O H 3PO 4·12MoO 3 H 3PO 4·6MoO 3·3Mo 2O 5 2、嘌呤碱：能与苦味酸作用形成针状结晶 3、戊糖： (1)核糖：经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。 (2)脱氧核糖：在强酸中加热，可生成ω—羟基γ—酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。上述二反应如下 【操 作】(一)核酸提取l、用酚提取法：（1）取小白鼠一只，断头处死，剖腹取肝，置于研钵中，加入玻璃少许，研磨至糊状后，加入蒸馏水3ml，继续研磨约三分钟。 （2）于该研钵中再加酚液5ml，研磨约十分钟后，倒入—-圆底离心管中，离心5分钟（约2000转/分钟）。 （3）用毛细管将上液吸出，置于一圆底离心管中，加乙醚2ml，用拇指将管口按住，用力振摇1—2分钟(提出酚)，离心5分钟后，用毛细滴管 吸取全部下层液于一圆底离心管中。 （4）于该管中加入95％乙醇2ml，用玻棒搅拌约2分钟，离心3分钟，取出．去上清液，沉淀部分即为核酸。2、用三氯醋酸提取法 （1）杀兔；取肝，称重，按每克肝脏4ml 比例加入1％三氯醋酸，制成肝匀浆。每组量取肝匀浆5ml 于带塞离心管中，3000转／分离心5分钟。 （2）将离心后的上清液倾去，于沉淀中加95％乙醇5ml 充分混匀，在水浴中加热至沸2分钟，注意酒精沸腾
QIAcube全自动核酸提取仪技术参数
QIAcube技术参数 1、主要用途： 1）可从动物，植物组织，全血中的白细胞组分及以下法医特殊检材中纯化总DNA（基因组DNA和线粒体DNA）：表面和口腔拭子，FTA和Guthrie，体液斑，口香糖，烟蒂，指甲和毛发，纸质材料，小体积血液或唾液，组织，激光显微切割标本，骨头和牙齿，性侵犯样品等； *2）可对性侵犯混合样本进行精子细胞和女性上皮成分全自动化差异洗涤，得到单一男性组分； 3）可对STR产物进行净化，达到纯化和浓缩STR产物的目的，进而大幅度提高毛细管电泳步骤中检测的信噪比。 2、工件条件: 温度：18-28℃，湿度：15-75%，电压：220-240V。 3、技术指标： 1、*基于硅胶膜离心法的全自动样品制备装置。可实现样品裂解、裂解液转移、离心柱清洗、洗脱液回收等实验步骤的全自动操作，无需人工介入； 2、无需专用的自动化试剂盒，只需普通手工试剂盒即可实现自动化； 3、*有专门应用于法医领域的体液和血液、法医案件、FTA及Guthrie卡、表面及口腔拭子等检材纯化程序； 4、*有专门针对性侵犯混合斑检材的全自动化处理程序，无需手工进行女性成分洗涤去除工作； 5、每次可对1-12个样品进行纯化，样品数目可按需设置； 6、内置控制系统，无需电脑； 7、程序的选择和设置通过触摸屏完成； 8、*配备自动裂解模块，具有加热和震荡功能，最高加热温70℃，兼容圆底离心管和锥形底离心管； 9、配备自动离心模块，离心机安全盖可自动开合； 10、配备自动液体转移机械臂，可使用一次性带滤芯枪头进行液体转移；配备离心柱转移机械臂，可对离心柱进行夹放、旋转、丢弃操作； 11、*配备光学感应器和超声液面探测器，能够自动感应检查样品数目、移液枪头数目、移液枪头类型、离心管数目及摆放状态、试剂液面高度等，防止人为摆放错误； 12、预装有各种应用的纯化程序，并可通过网络免费下载不断开发的新程序，使用USB接
核酸自动提取仪
核算提取仪 北京贝尔生物工程有限公司 PCR室 一．核酸提取技术
随着近年来分子生物学技术的高速发展，核酸扩增，核酸杂交将成为进行病原菌微生物检测，物种鉴定，物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统计划等常用研究手段之一。这样的分子检测和分子诊断技术在人体健康体检、视频法医等领域中具有至关重要的作用。而在所有的现代分子生物学检测技术首先面临的问题就是如何从样品中快速有效的分离提取所需的基因组核酸，并且大规模高质量的提取核酸分子也成为了一个挑战。 自1869年人类首次发现核酸分为脱氧核当核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），核酸的提取方法包括各种实验材料和试剂都一直在进行着改进，柠檬酸钠、RNase、SDS、硫氰酸胍等先后应用于核酸的提取。现今核酸的提取方法中主要有一些传统的方法比如CTAB法、Trizol法、氯化锂法、以及一些新兴的方法比如旋转离心柱提取法、玻璃粉吸附法、二氧化硅基质法、阴离子交换法、纳米磁珠提取法。总的来讲，不管采用什么样的方式方法进行核酸的提取以及纯化，主要可以分为以下三步： 第一步为利用物理或化学的方式促进细胞破裂，使细胞中的核酸释放出来。 第二步是初步的将核酸与细胞内部的蛋白质、多糖、脂类分离。新兴的方法比如旋转离心柱提取法是利用特定的载体，将释放的核酸吸附在特定的载体上，这种载体有且仅对于核酸具有较强的亲和力和吸附力。 第三步则是将核酸进行最后的洗脱与富集。 虽然具有相通的原理，对比传统的核酸提取法与新兴的核酸提取法，传统的核酸提取技术中包含的沉淀和离心等操作需要用到大量的生物样本，而且传统提取步骤较为繁杂，费时长，效率低下，很难实现自动化以及规模化，大部分方法涉及到有机试剂的使用，对于操作人员具有潜在的威胁，其应用的范围受到了明显的局限。因此，随着时间的推移，传统的从液相系统中分离提取核酸的方式逐步的被以固相吸附物载体为基础的新方法所取代。 二、磁珠核酸提取法 20世纪90年代，磁珠提取核酸的方法是为了适应现代分子生物学检测实验高通量、高灵敏度、自动化的操作需要所打造的方法。该方法是纳米技术与生物
五种核酸提取仪的比较.doc
五种核酸自动提取仪的比较 厂家产品名称原理通量及工作效率配套耗材样品混匀模式得率及分析样本裂解单个样品样本是否需要预 方式提取成本处理 (人民币 ) BioTeke IAUTOMAG核酸磁珠法32 通道通用的毫升震荡混匀，底部高于离心柱方组织块直10-15 元不需要提取仪深孔板，可独立控温，紫外法接加入，不 以处理更高灭菌需要预先 容量样品研磨过夜 消化 ABI MAGMAX24 磁珠法24 通道毫升微孔无加热模块，低需要样品20-30 元预消化 5 小时或 板，不能处预先研磨者过夜 理体积大样过夜消化 品，专用耗 材价格昂贵 Eppendorf 5075 VAC 核酸分负压法不96 通道，只配套无加热模块，不负压法易导致需要样品20-30 元预消化 5 小时或
离纯化工作站适合提取Eppendorf 能自动提取组96 孔某些孔预先研磨者过夜 组织，会96 孔板及移织，粘稠样品，液体残留，洗过夜消化 堵液用枪头，所以叫分离纯脱不完全，洗 耗材成本高化工作站，而不脱效率低于离 是提取仪心法和磁珠法 Thermo Kingfisher 只有 8个24 通道（微孔板，容只配套专用加热模块单配，试剂需要手工需要样品20-30 元预消化 5 小时或固定的程量 200ul ）或者 15 通耗材，使用无法全自动提加，裂解需要预先研磨者过夜 序组，只道(微孔管，容量微孔板（酶取全血、组织等借助外部裂过夜消化 能通过电1000ul) ，只能处理少标板）微孔需要蛋白酶 K裂解，提取效果 脑编辑输体积样品，管，耗材成解的样品，所以低于离心柱法 入本太高叫磁珠分选纯 化仪，而不是核 酸自动提取仪， 选配加热模块 价格极高
动物组织中的核酸提取与鉴定
动物组织中核酸的提取与鉴定 一、原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离，然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白，使核酸释放出来，再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出，达到分离提纯的目的。 二、试剂 1.地衣酚（orcinol）试剂： 称取100mg地衣酚溶于100ml 浓盐酸中，再加入100mgFeCl3·6H2O，该溶液应在使用前新鲜配制。 2.二苯胺试剂： 称取1g二苯胺（经重结晶）溶入100ml冰醋酸中，再加入2.75ml浓H2SO4摇匀，冰箱内保存备用。 3. 0.14mol/L氯化钠溶液（内含0.01mol/L柠檬酸），250ml； 4. 1mol/L氯化钠溶液，250ml； 5. 95%乙醇（冷）； 6. 氯仿； 7. 异戊醇 三、器材 a)冷冻离心机（3000rpm） b)组织捣碎机或组织匀浆器 c)不锈钢剪刀 d)冰浴 e)试管、试管夹 f)量筒、吸管 g)带塞比色管、带塞离心管
h)玻棒、烧杯 i)电炉等 三、方法 1. 制匀浆 将新鲜肝脏或冷冻肝脏称重后用冷的0.14mol/L氯化钠溶液（内含0.01mol/L柠檬酸）洗去血水，用不锈钢剪刀将肝脏剪成碎块，放入组织捣碎机中加入2倍体积的0.14mol/LNaCl 溶液（内含0.01mol/L柠檬酸）制备匀浆。 将匀浆置离心机中离心20min（3000rpm）。上层液倾出留待抽提RNA ，下层用二倍体积冷的1mol/LNaCl溶液抽提1h，待分离DNA核蛋白。 2. 核酸的抽提 2.1RNA的提取 0.14mol/L的NaCl抽提液（内含RNA核蛋白）加入等体积的氯仿和1/40体积的异戊醇，置带塞离心管中，振摇30min，此时提取液为乳白色混悬液，以3000rpm离心15min，离心物呈三层。 用滴管吸出上层清液，在低温下加入1.5~2倍的冷95%乙醇，并轻轻搅拌。低温放置15min，3000rpm离心10min，弃去上清液，即得RNA颗粒状沉淀，待定性。 2.2DNA的抽提 将抽提1h的1mol/LNaCl匀浆悬液以3000rpm离心20min，弃去沉淀，将其上清液倒入带塞的离心管中，加入等体积的氯仿及1/40体积的异戊醇振摇30min，离心20min。将其上清液加入2倍体积的冷95%乙醇，边加边摇，抽出玻棒，纤维状DNA就缠绕在玻棒上待定性。 每次都需采用冷冻离心。 3. 定性试验 3.1RNA的呈色反应
核酸自动提取仪
北京贝尔生物工程有限公司 核算提取仪 北京贝尔生物工程有限公司 PCR室 1
北京贝尔生物工程有限公司 一．核酸提取技术 随着近年来分子生物学技术的高速发展，核酸扩增，核酸杂交将成为进行病原菌微生物检测，物种鉴定，物种起源、多样性评估及其亲缘关系、系统计划等常用研究手段之一。这样的分子检测和分子诊断技术在人体健康体检、视频法医等领域中具有至关重要的作用。而在所有的现代分子生物学检测技术首先面临的问题就是如何从样品中快速有效的分离提取所需的基因组核酸，并且大规模高质量的提取核酸分子也成为了一个挑战。 自1869年人类首次发现核酸分为脱氧核当核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），核酸的提取方法包括各种实验材料和试剂都一直在进行着改进，柠檬酸钠、RNase、SDS、硫氰酸胍等先后应用于核酸的提取。现今核酸的提取方法中主要有一些传统的方法比如CTAB法、Trizol法、氯化锂法、以及一些新兴的方法比如旋转离心柱提取法、玻璃粉吸附法、二氧化硅基质法、阴离子交换法、纳米磁珠提取法。总的来讲，不管采用什么样的方式方法进行核酸的提取以及纯化，主要可以分为以下三步： 第一步为利用物理或化学的方式促进细胞破裂，使细胞中的核酸释放出来。 第二步是初步的将核酸与细胞内部的蛋白质、多糖、脂类分离。新兴的方法比如旋转离心柱提取法是利用特定的载体，将释放的核酸吸附在特定的载体上，这种载体有且仅对于核酸具有较强的亲和力和吸附力。 第三步则是将核酸进行最后的洗脱与富集。 虽然具有相通的原理，对比传统的核酸提取法与新兴的核酸提取法，传统的核酸提取技术中包含的沉淀和离心等操作需要用到大量的生物样本，而且传统提取步骤较为繁杂，费时长，效率低下，很难实现自动化以及规模化，大部分方法涉及到有机试剂的使用，对于操作人员具有潜在的威胁，其应用的范围受到了明显的局限。因此，随着时间的推移，传统的从液相系统中分离提取核酸的方式逐步的被以固相吸附物载体为基础的新方法所取代。 二、磁珠核酸提取法 20世纪90年代，磁珠提取核酸的方法是为了适应现代分子生物学检测实验高通量、高灵敏度、自动化的操作需要所打造的方法。该方法是纳米技术与生物 2
动物组织中核酸的提取与鉴定(DNA&RNA)
实验一动物组织和细胞中核酸的提取和测定 第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取 【实验目的】 学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法 【实验原理】 1.从动物组织和细胞中提取DNA DNA存在于细胞核中。提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR 反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。 2.从动物组织和细胞中提取RNA RNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA酶失活，使释放出的RNA不被降解。细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。 【实验材料】 1.实验器材 材料：小牛胸腺或动物肝脏；研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋等。 2.实验试剂 (1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl (PH8.0)，0.1mol/L EDTA (PH8.0)，0.5%(m/V) SDS，20μg/mg无Dnase的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。RNase在用前适量加入。(2)溶液D(变性液)：4 mol/L 硫氰酸胍，25mmol/L 柠檬酸钠. 2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V )月桂基肌酸钠溶于293 ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。室温贮存溶液D,每次使用前加入14.4 mol/L的β-巯基乙醇,每50ml溶液D加0.36ml。溶液D可在室温下避光保存数月。 (3)平衡酚：用0.5mol/L Tris-Cl (PH8.0)平衡的苯酚 (4)TBS：在800 ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱、加入0.015g酚红并用HCl调节溶液的PH值至7.4,加水定容至1L,分装后在15 lbf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟。保存于室温。 (5)PBS：在800 ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4, 用HCl调节溶液的PH值至7.4, 加水定容至1L, 在15 lbf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟。保存于室温。 (6)TE（PH8.0）：10mmol/L Tris.Cl（PH8.0），1 mmol/LEDTA（PH8.0） (7) 蛋白酶K（20mg/ml），10mol／L醋酸铵，2mol／L的醋酸钠(pH4.0)，0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯） (8)无水乙醇，70％乙醇，氯仿—异戊醇(49:1,V/V)，异丙醇，酚 (9) 液氮
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验七动物组织中核酸的提取与鉴定 【原理】 动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。核蛋白可被三氯醋酸沉淀,再用95％乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质,然后用10％NaCl溶液提取出核酸的钠盐,加入醇可使核酸钠沉淀析出。 先用水由动物肝中提出核蛋白,再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂,并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质,最后用乙醇将核酸沉淀。 核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。有机碱(嘌岭、嘧啶)与戊糖(核糖、脱氧核糖)。 此三类化合物可用下列方法鉴定之。 1、磷酸:能与钼酸试剂作用生成磷钼酸,后者在还原剂的作用下。还原成兰色的钼兰。常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡,维生素C等。 H3PO4＋12H2MoO4→H3PO4·12MoO3 + 12H2O H3PO4·12MoO3H3PO4·6MoO3·3Mo2O5 2、嘌呤碱:能与苦味酸作用形成针状结晶 3、戊糖: (1)核糖:经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛,后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。 (2)脱氧核糖:在强酸中加热,可生成ω—羟基γ—酮基戊醛,后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。 上述二反应如下 【操作】 (一)核酸提取 l、用酚提取法: (1)取小白鼠一只,断头 处死,剖腹取肝,置于研钵中, 加入玻璃少许,研磨至糊状后, 加入蒸馏水3ml,继续研磨约 三分钟。 (2)于该研钵中再加酚液 5ml,研磨约十分钟后,倒入— -圆底离心管中,离心5分钟 (约2000转/分钟)。 (3)用毛细管将上液吸出, 置于一圆底离心管中,加乙醚 2ml,用拇指将管口按住,用力 振摇1—2分钟(提出酚),离 心5分钟后,用毛细滴管吸取 全部下层液于一圆底离心管 中。 (4)于该管中加入95％乙醇2ml,用玻棒搅拌约2分钟,离心3分钟,取出.去上清液,沉淀部分即为核酸。 2、用三氯醋酸提取法 (1)杀兔;取肝,称重,按每克肝脏4ml比例加入1％三氯醋酸,制成肝匀浆。每组量取肝匀浆5ml于带塞离心管中,3000转／分离心5分钟。 (2)将离心后的上清液倾去,于沉淀中加95％乙醇5ml充分混匀,在水浴中加热至沸2分钟,注意酒精沸腾后将火关小,避免酒精蒸汽燃烧。冷却后离心。 (3)倾去上层乙醇液。于沉淀中再加入10％NaCI溶液4ml,置沸水浴中8分钟,并用玻棒不断搅拌,取出;冷却后再离