甘油含量测定

嗯。你都问到这个问题了，具体仪器、操作什么的我就不说了。就说一下思路。

强碱条件下甘油和二价铜的络合物显绛蓝色，所以利用甘油的这个特性就可以轻松搞定。

主要试剂是AR级的甘油、氢氧化钠、硫酸铜。

向氢氧化钠碱化的甘油溶液里加硫酸铜，一定要保证甘油被完全络合，并且保证多余的二价铜都以氢氧化铜沉淀形式存在，但是氢氧化钠也不要加太多。

甘油铜可见区最大吸收波长是在630nm。

先作个标准系列，绘出吸光度-浓度曲线，然后把待测试样吸光度测出来在标准曲线上一算，浓度就得到了。

氢氧化铜解离出来的铜离子在630nm处也有吸收，好在它是一个定值，测出来后从每个甘油的A里面扣掉就行了。

甘油含量化学方法有很多，比色法，滴定法．甘油在强碱性条件下，与Cu2+定量形成绛蓝色的甘油铜溶液。根据朗伯-比尔定律，溶液吸光度A与吸光物质浓度C成正比：A=kC。甘油配制浓度C1与衍生的分析甘油铜浓度C有如下关系：C=k1C1，k1为稀释系数，则吸光度值与甘油配制浓度有如下正比关系：

A=kk1C1+ε，k、k1为常数，ε为系统误差。

先根据吸光度与甘油配制浓度C1做出关系曲线:，然后确定最佳线性拟合范围，最终得出拟合线性方程，程序化后，用于甘油含量的快速测定。

[供应] 拜发甘油检测试剂盒

发布日期：2010-9-21

截止日期：2009-5-9

拜发甘油检测试剂盒

（酶学试剂盒）

订货号： 10148270035

产品名称：甘油（Glycerol ）

产品英文名称： Glycerol

包装： Ca.3 x 11 tests

产品介绍：如下

产品说明： Glycerol （用于检测食品中的甘油）

酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）

RIDASCREEN（产品编号：0 414 433） 30次检测

1. 简介

酶法分析试剂盒（紫外分光光度法）此法适用于检测食品（啤酒、葡萄汁、醋、蜂蜜、酒精、果酒）、化妆品、药品（溶液、栓剂）、纸板、烟草及生物制品中的甘油。

2. 原理

甘油在甘油激酶的催化下可被ATP磷酸化为3-磷酸甘油酯，ATP转化为ADP；反应式为

GK

Glycerol﹢ATP L-glycerol-3-phosphate﹢ADP

上式中形成的ADP在丙酮酸激酶的催化下可与PEP作用下生成ATP及丙酮酸酯；反应式为

PK

ADP﹢PEP ATP﹢Pyruvate

丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD；反应式为

L-LDH

Pyruvate﹢NADH﹢H﹢ L-lactate﹢NAD﹢

被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在334，340及365nm下测量。

3. 试剂盒内容物

－－－－瓶1共有3瓶，每瓶约有2g辅酶及缓冲液的混和物，包括：甘氨酰甘氨酸缓冲液， PH约7.4； N ADH约7mg；ATP约22mg；PEP-CHA约11mg；硫酸镁

－－－－瓶2约0.4ml悬浮物，包括：

丙酮酸激酶，约240U； L-乳酸酯脱氢酶，约220U

－－－－瓶3约0.4ml甘油激酶悬浮物，约34U

－－－－瓶4为甘油检测对照溶液（甘油检测对照溶液可不需要计算结果），此溶液使用时不需稀释。（效期见标签）

4. 检测溶液的制备（10次）

－－－－取出1瓶瓶1，用11ml重蒸水溶解，使用时此溶液需在20-25℃持续回温约10分钟

－－－－瓶 2不需稀释

－－－－瓶 3不需稀释

5. 操作者应该注意之事项

使用前请仔细阅读，中文翻译件仅供参考

－－－－瓶1约含500mg碳酸钠，应避免接触皮肤和呼吸器官，其他用于甘油检测的试剂不具有危险性－－－－实验之后，用过的试剂可作为实验室废料处理，但必须在当地法规允许的前提下

6. 储存条件

－－－－瓶 1在2-8℃下保存（见标签），溶液1在2-8℃下可保存4天，溶液1使用前需回温至20-2 5℃

－－－－瓶2及3在2-8℃下保存（见标签）

7. 样品处理

－－－－直接取用无色，透明，中性的溶液或按稀释表格稀释后进行检测，体积为2.000ml

－－－－过滤混浊溶液

－－－－除去样品溶液中的二氧化碳气体

－－－－加入氢氧化钠或氢氧化钾来调节酸溶液的PH值约为8

－－－－对于深颜色的样品溶液可不需稀释或者用PVPP或酰胺配成较高浓度的溶液如：1g/100ml

－－－－粉碎或均质固体和半固体样品，用水抽提或溶解，而后过滤，通过Carrez澄清液可脱去其中的混浊物或色素

－－－－用Carrez试剂可脱去样品中的蛋白质

－－－－用热水抽提样品中的脂肪（抽提温度需在脂肪的溶解度之上），冷却后可分离出脂肪，将余下物质转移至容量瓶中并加水至刻度，冰浴15分钟而后过滤，热水抽提后用Carrez溶液澄清

8. 过程

1. 波长：340nm，Hg365nm或Hg334nm

2. 比色杯：光径1.0cm

3. 温度：20-25℃

4. 最终体积：3.020ml

5. 对照空气（光路上无比色杯）或对照水读取读数

6. 样品溶液：1-40ug甘油/检测（体积为0.100-2.000ml样品体积）

7. 具体操作见如下表格

移液空白（ml）样品（ml）

溶液1

样品溶液

重蒸水

悬浮物2 1.000

-

2.000

0.010 1.000

0.100

1.900

0.010

混和，直至前反应完全反应后，约5-7分钟，读取吸光度值A1，而后加入下列物质：

悬浮物3 0.010 0.010

混和，等反应进行完全后（约5-10分钟），立即读取样品和空白的吸光度值A2

如果在15分钟后反应尚未停止，则在2分钟的间隔内继续读取读数，直至此值不再变化。

分别测样品与空白的吸光度值差，而后用样品吸光度值差减去空白吸光度值差可以得到如下公式

△A=（A1 ―A2）Sample―（A1 ―A2）blank

若想得到一个足够精确的结果，则测得的吸光度的单位至少为0.100单位。

如果吸光度值差△A在334及340nm下测得的值高于1.000或在365nm下测得的值高于0.500，如此则表

明样品溶液中甘油的浓度较高。

需根据稀释表格进行样品的稀释

9. 计算

根据以下公式计算浓度

V×MW

C=－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－-×△A（g/l）

ε×d×v×1000

V=最终体积（ml）

V=样品体积（ml）

MW=被检测物质的摩尔质量

D=光径（cm）

ε=NADH的消光系数

340nm=6.3（1×mmol-1×cm-1）

Hg365nm=3.4（1×mmol-1×cm-1）

Hg334nm=6.18（1×mmol-1×cm-1）

甘油含量计算遵循如下公式

3.020×92.1

C=－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－×△A

ε×1.00×0.100×1000

2.781

=－－－－－－－－－－－－－－－－×△A（g甘油/l样品溶液）

ε

如果样品溶液是稀释使用的，在计算结果时需乘以稀释系数F。

当分析固体或半固体时，测量前需称一定重量配制样品溶液，其结果需按下式计算

C 甘油（g/l样品溶液）

C甘油 =－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－×100（g/100g）

W 甘油（在样品溶液中）

10. 检测操作说明

被检样品中甘油含量在1ug至40ug之间。

为了得到一个足够的吸光度值差，样品溶液的浓度最好稀释在0.04g/L至0.4g/L之间。稀释表格

每升样品溶液中甘油估计量用水稀释稀释倍数

﹤0.4g

0.4-4g

4.0-40g

﹥40g -

1﹢9

1﹢99

1﹢999 1

10

100

1000

如果测得的吸光度值△A较低，例如低于0.100，则样品溶液需重新配制，可由下列几种解决方法

1. 可多称出些样品或不要过分稀释。

2. 加入到比色杯中的溶液体积可增加至2.000ml，当然为了得到相同的最终体积（样品和空白），加入的水的体积就要相应减少。所加入的新溶液的体积在计算时是要考虑进去的。

11. 技术信息

加入悬浮物2（PK/L-LDH）后等待前反应进行完全后是非常必要的。

12. 特性

此法特异性适于甘油的检测。

13. 灵敏度和检测限

1. 最小的吸光分辨率为0.005个吸光单位，相应的最大样品体积为

2.000ml，340nm下测量，则样品的甘油浓度为0.1mg/L；若样品体积为0.100ml，则样品的甘油浓度为2mg/L。

2. 340nm下，吸光度值差为0.020可导出检测限为0.4mg/L，相应的最大体积为2.000ml。

14. 线性

从1ug甘油/检品（0.4mg甘油 /L样品溶液，样品溶液V=2.000ml）到40ug甘油/检品（0.4g甘油/L样品溶液，样品V=0.100ml）

15. 精确性

用同一样品溶液做平行测定时，其吸光度值差会有0.005至0.010的差异，样品体积为0.100ml，340nm 下测量，相应的甘油浓度约为2-5mg/L；若样品是经过稀释的，则在计算结果时需乘以稀释倍数。

16. 干扰\\信息来源

ATP和PEP的缓慢水解同NADH的缓慢氧化均可导致缓慢的蠕变反应；空白和样品的吸光度值可不必逐一立即检测。

17. 检测过程中的干扰

1. 根据过程中所给定的时间甘油若能转化完全，则可断定没有干扰发生。

2. 反应结束后，可加入一些甘油重新检测（定性或定量）：如果加入标准物质后，吸光度值会随之改变，则可断定没有干扰发生。

3. 操作过程中的错误和干扰可通过两个样品体积的平行实验测得（如0.100ml和0.200ml）：测得的吸光度值差应与样品体积成比例关系。

当测定固体样品时，可称取不同质量（如1g和2g）于同一100ml容量瓶中，测得的吸光度值差及样品的质量应与样品的体积成比例关系。

4. 样品所含物质带来的可能干扰可通过加入内标来控制：除去样品、空白及标准的检测外，样品加检测对照溶液也要检测的，测得的吸光度值差可计算干扰。

5. 通过回收试验可测定可能的损失：分别测定加入标准与不加入标准的样品，在误差范围之内可定量测定附加物。

18. Carrez试剂的澄清作用

－－－－移取液体样品于盛有60ml重蒸水的100ml容量瓶中或称取足够重量的样品于100ml容量瓶中

－－－－加入60ml重蒸水

－－－－仔细加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液（85mM，3.60gK4Fe（CN）6*3H2O/100ml）和5ml Carrez-Ⅱ-溶液（250mM，7.20gZNSO4*7H2O/100ml）

－－－－用氢氧化钠调节溶液PH于7.5-8.5，加入每一溶液后需充分混和，加水至容量瓶刻度，混和并过滤

19. 应用举例

1.果汁中甘油的检测

－－－－稀释样品其浓度约在0.4g/L 以下（见稀释表格）

－－－－过滤混浊果汁，取用透明或淡色溶液用于检测

当分析深色果汁时（如：草莓汁和红葡萄汁）需要先脱色

具体操作

－－－－在10ml 果汁中加入0.1g 酰胺粉末或PVPP

－－－－搅拌1

分钟后过滤

－－－－取透明溶液用于检测，该溶液可带有轻微颜色

2.酒中甘油的检测

－－－－根据稀释表格将样品进行稀释

－－－－实际上红酒不需脱色也可进行检测

3.啤酒中甘油的检测

－－－－取5-10ml 啤酒用玻璃棒搅拌约1分钟，除去其中的二氧化碳气体

－－－－根据稀释表格稀释脱去二氧化碳气体后的样品

4.烟草制品中甘油的检测

－－－－充分混合并绞碎样品

－－－－精确称取1g 样品于100ml 容量瓶中

－－－－加入约70mL 水磁力搅拌约1小时20-25℃下，而后加水至刻度，混和并过滤

－－－－移取25ml 滤液于50ml 容量瓶中

－－－－加入5mlCarrez-Ⅰ-溶液，5ml Carrez-Ⅱ-溶液及10ml 氢氧化钠溶液，在加入每一溶液后均需充人混和

－－－－加水至刻度混和并过滤，取滤液用于检（0.100ml-0.500ml ）

5.化妆品中甘油的检测

6.发酵产品及生物培养基中甘油的检测

－－－－置样品（可先经过离心）于80℃水浴中15分钟以停止酶的反应

－－－－离心并取上层溶液（可根据稀释表格稀释）用于检测

－－－－另外可用高氯酸或Carrez 溶液脱除蛋白质

琼脂培养基需先均质，而后按以上方法进行操作。

名称：甘油检测试剂盒

编号：EK-GCROL

货号：100001001

Cas No ：70

购买：

Glycerol Assay Kit

(70 次测定)

简介:

甘油是一种非常重要的物质，广泛的应用于工业生产中，在食品工业中，常被作为保湿剂、增香剂和增色剂等使用，以改良食品的质量。甘油是酿酒酵母发酵过程中的副产物,也是灰质葡萄孢新陈代谢过程中的一个重要产物，甘油是高品质果酒的一个成分，高品质的葡萄汁中不含有(或只含有痕量或微量)甘油，浓度大约为1%(v/v)，若葡萄汁中含有甘油则意味着产品中使用了品质不好的原料。甘油也常常作为润滑剂用在洗涤液、乳酪和牙膏中，在制烟工业中，通过通常是预先向烟叶上喷洒甘油以保障不会粉碎的目的。

原理:

甘油在甘油激酶(GK)的作用下被磷酸化，消耗ATP转化成L-3磷酸甘油（L-glycerol-3-phosphate）。

(1) Glycerol + ATP (GK) L-glycerol-3-phosphate + ADP

上式中形成的ADP在丙酮酸激酶(PK)的催化下可与PEP作用，生成ATP及丙酮酸酯

(2) ADP + PEP (PK) ATP + pyruvate

丙酮酸酯在L-乳酸酯脱氢酶(L-LDH)的作用下可被NADH还原为L-乳酸酯，NADH被氧化为NAD

(3) Pyruvate + NADH + H+ (L-LDH) L-lactate + NAD+

被氧化的NADH的量取决于甘油的量，NADH的吸光度值可在340下测量。

特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度:

该实验方法是专门用于测定甘油含量的，对于纯甘油（水中的游离甘油）几乎可以100%检测到。

最小可调吸光光度为0.010个吸光单位，样品体积为2.00 mL，若在340nm下检测,此时的甘油浓度为0.171 mg/L。如果最小可调吸光光度为0.020吸光光度，样品体积为2.00 mL，在340nm下检测,此时的甘油检测线为0.342 mg/L。

该实验的测量范围为0.8ug-35ug甘油，同一样品分别进行两次测定，其吸光度值会有0.005-0.010吸光单位的变化，对于样品体积为2.00 mL，此时的甘油浓度大约在0.086-0.171 mg/L之间，如果样品是经过稀释的，在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数（F）,如果在样品制备阶段，样品的重量是被称量的，如：10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨。

干扰:

如果甘油在试验规定的时间内（大约5分钟）完成转化过程，通常认为没有干扰发生，然而，通过向已完成反应的试管中添加甘油（0.1mL中添加20ug），进一步的实验表明，吸光度值还会进一步降低。

利用附带的内部的标准质控可以对干扰物质进行鉴定。定量回收试验：通过向样品中添加标准质控，计算样品在处理和提取时的损失。如：在最初的提取步骤时添加一定量的甘油。

安全性:

甘油测定所使用的试剂没有有毒物质。然而浓缩缓冲液中含有作为防腐剂用的叠氮化钠(0.02 % w/v)，需

要按照实验室安全操作规程进行试验。

试剂盒:

Megazyme甘油含量测定试剂盒可以进行70次的测定试验，并提供有全部的试验方法：

瓶1: Tris/HCl 缓冲液 (30 mL, 1.0 M, pH 7.4) +氯化镁(30 mM)+叠氮化钠(0.02 % w/v)

稳定性> 2年，4°C保存。

瓶2: 药片(14个) 含有NADH+ATP +PEP

稳定性> 2年，4°C保存。

瓶3: 丙酮酸激酶(600 U/mL)+L-乳酸酯脱氢酶(550 U/mL)悬浮液1.5mL

稳定性> 2年，4°C保存。

瓶4: 甘油激酶悬浮液(1.5 mL, 85 U/mL)

稳定性> 2年，4°C保存。

瓶5: 甘油质控标准液(5 mL, 0.20 mg/mL)+ 0.02 % (w/v)叠氮化钠

稳定性> 2年，4°C保存。

试剂制备:

1. 使用瓶1作为稀释液。

2. 1.1 mL Tris/HCl缓冲液溶解瓶2中1片药片，大约1-2分钟，足够进行5次试验。一旦药片溶解，NADH 吸光度会随着时间的延长而降低，不过溶解的药片保存在4°C下大约可以使用4天，或保存于-20°C下大约可以使用4周的时间。

注意: 在打开瓶子前，首先需要将瓶子中的药片恢复到室温，避免潮气可能吸附到药片上，而影响药片的稳定性。

3 & 4. 准备瓶3和瓶4种的溶液，第一次打开前，需要充分晃动瓶子，不要让酶吸附在橡皮塞上，然后垂直存放好瓶子。每次使用前还需要充分混合其中的内溶物。

5. 准备瓶5溶液。

注意:当您怀疑分光光度计的准确性或怀疑样品中的物质抑制了试验，再使用甘油标准质控溶液进行测定，通过测量NADH的消光系数而计算甘油的浓度。

实验需要的设备:

1. 容量瓶(50 mL, 100 mL和500 mL).

2. 比色杯 (1 cm,

3.0 mL).

3. 微量移液器

4. 连续分配器

5. 分析天平

6. 分光光度计 340 nm.

7. 漩涡混合器

8. 定时钟

9. Whatman No.1 (9 cm)滤纸

操作步骤:

波长: 340 nm

比色杯: 1 cm light path (玻璃或塑料)

温度: 25°C

最终体积: 2.34 mL

样品溶液: 每个比色杯中含有0.8-35ug甘油（存在于0.10-2.0 mL样品溶液中）

空白调 0：相对于空气或者水

溶液空白管样品管

蒸馏水(~ 25°C)

样品

溶液2(NADH/ATP/PEP/Tris/HCl)

悬浮液3(PK/L-LDH) 2.10 mL

—

0.20 mL

0.02 mL 2.00 mL

0.10 mL

0.20 mL

0.02 mL

混合*，在反应大约4分钟后读取溶液(A1)的吸光度值（前反应完成**），在添加下列试剂后继续进行试验悬浮液4(GK) 0.02 mL 0.02 mL

混合*，在停止反应后（大约5分钟）读取溶液(A2)的吸光度值，如果反应没停止，在间隔2分钟后，再次测量，直到最终的吸光度值不再变化。

* 用塑料棒搅拌或用试管塞封闭严实后轻轻颠倒

** 必须在等到前反应完成后再添加悬浮液3(PK/L-LDH)

计算:

分别对空白管和样品管两次测得的吸光度值进行相减(A1-A2)，这样就获得了ΔAglycerol，按照常规ΔAglycerol 的数值至少要在0.100个吸光单位，才能获得满意的试验结果。

甘油的含量可以依照下列公式计算:

C = V x MW x ΔAglycerol [g/L]

εx d x v

注释:

V = 最终体积 [mL]

MW = 甘油分子量 [g/mol]

ε = NADH在340 nm下的消光系数

= 6300 [l x mol-1 x cm-1]

d = 比色管管径 [cm]

v = 样品体积 [mL]

简化公式:

C = 2.34 x 92.1 x ΔAglycerol [g/L]

6300 x 1 x 0.10

= 0.3421 x ΔAglycerol [g/L]

如果样品在制备过程中被稀释了，计算结果还必须乘以稀释系数F。

当被分析的物质为固体或半固体时，甘油含量(g/100 g)依照下列公式计算：

甘油含量

= C甘油 [g/L 样品溶液] x 100 [g/100 g]

样品重量 [g/L 样品溶液]

注意: 使用Mega-CalcTM，该计算方法可以被简化。

制备样品:

1. 稀释样品.

比色杯中（如：分析0.1 mL的样品）的甘油总含量必须在0.8-25ug之间，因此样品溶液必须被充分的稀释到浓度在0.008 -0.35 g/L之间。

估计浓度(g/L) 蒸馏水稀释稀释系数F

< 0.35

0.35-3.5

3.5-35

> 35 不用稀释

1 + 9

1 + 99

1 + 999 1

10

100

1000

如果ΔAglycerol 的数值太低(如< 0.100)，可以增加称量的样品量或不要进行过分稀释，也可以增加比色管中的样品量到2.00 mL，只要确保样品和蒸馏水的总量在2.10 mL即可。

2. 净化样品.

a. 溶液:

Carrez I溶液：溶解3.60 g亚铁氰化钾{K4[Fe(CN)6].3H2O} (Sigma cat. no. P-9387)到100 mL的蒸馏水中，室温保存。

Carrez II溶液：溶解7.20 g硫酸锌(ZnSO4.7H2O) (Sigma cat. no. Z-4750) 到100 mL的蒸馏水中，室温保存。

氢氧化钠(NaOH, 100 mM)：溶解4 g NaOH到1 mL的蒸馏水中，室温保存。

b. 步骤:

吸取液体样品到含有大约60 mL蒸馏水的100 mL容量瓶中，或称取足够量的样品到含有大约60 mL蒸馏水的100 mL容量瓶中，缓慢的加入5mL Carrez I 溶液和10mL NaOH溶液(100 mM)，然后充分混合，补液至刻度线，混合并过滤。

3. 总则.

(a) 液体样品: 清澈的或稍有些颜色的，pH大约为中性的液体样品可以直接检测。

(b) 酸性样品: 如果样品为> 0.1 mL的未被稀释的酸性样品（如葡萄酒或果汁），必须用2 M NaOH调节pH到大约7.4，然后在室温中孵育30分钟。

(c) 含二氧化碳样品: 样品中含有大量的二氧化碳，如：啤酒，必须用2 M NaOH调节pH到大约7.4，并缓慢的用玻璃棒搅拌。

(d) 有颜色的样品: 测试中附加样品空白，如：样品中不含有GK，在这种情况下，样品必须附加样品空白。

(e) 重颜色的样品: 如果未经稀释的样品颜色非常深，需要向每10mL的样品中加入0.2g聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP），充分混合5分钟，然后用Whatman No. 1滤纸过滤。

(f) 固体样品: 均质或粉碎固体样品，然后加入到蒸馏水中，并过滤。

(g) 样品含有脂肪: 需要用超过脂肪沸点的水进行提取，如：将100mL容量瓶加热到60°C，然后恢复至室温，并补液至刻度线，放置冷藏箱中15-30分钟，过滤，弃去最初的几mL滤液，选择澄清的或稍有些乳白色的悬浮液进行测试。也可以选择使用Carrez 溶液进行澄清。

(h) 样品中含有蛋白: 使用Carrez 溶液去除样品中的蛋白。

样品处理事例:

(a) 测定葡萄酒中的甘油.

通常情况下，测定白/红葡萄酒中的甘油含量都不需要对样品进行处理，只需要依照稀释表格进行稀释即可。如：按照1:20倍稀释0.1mL的样品。

(b) 测定啤酒中的甘油含量.

使用玻璃棒进行充分的搅拌，去除样品中的二氧化碳，然后进行稀释即可测定。如：按照1:5倍稀释0.1mL 的样品。

(c) 测定果汁和相关饮料中的甘油含量

稀释样品中的甘油含量至少到0.35 g/L，澄清的、中性的样液可以直接进行测试，不需要进行特殊处理。浑浊的液体稀释前首先需要进行过滤。

有颜色的样品溶液通常在稀释到适当的甘油浓度即可测定。然而，如果要测定不经稀释的样品液中的甘油浓度，需要依照下列步骤进行脱色：

用1 M NaOH调节25mL样品溶液的pH大约至7.4，然后用蒸馏水补液至50 mL，加入0.5g PVPP，充分搅拌5分钟，然后用Whatman No. 1滤纸过滤。使用澄清的或稍有些颜色的提取液进行测试。没有必要进一步稀释，可以直接进行测定。

(d) 测定烟草制品中的甘油含量.

将样品粉碎成大约0.2 mm的小颗粒，准确的称量1g样品，放入到100 mL容量瓶中，加入大约60 mL蒸馏水，用磁力搅拌器在20-25°C下充分搅拌1小时，然后用蒸馏水补液至刻度线，混合并过滤。移取25 mL 滤液到50mL容量瓶中，继续加入5 mL Carrez I 溶液、5 mL Carrez II 溶液和10 mL NaOH溶液(100 mM)，每加一种溶液都要充分混合，然后补液至刻度线，混合并用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤，没有必要进一步稀释，可以直接进行测定。

(e) 测定肥皂中的甘油含量.

准确称取1 g粉碎的肥皂粉末，加入50mL 0.1M HCl ，用热磁力搅拌器充分搅拌至沸腾，将溶液转移至100 mL容量瓶中，然后添加30mL 0.1M HCl继续搅拌提取，待温度降至20-25°C后用蒸馏水补液至刻度线，

将容量瓶放置于冷藏室15分钟，用Whatman GF/A玻璃纤维滤纸过滤，取25 mL滤液，加入2 mL 2 M Tris/HCl 缓冲液（pH 7.4，自备），用1M NaOH调解pH大约至7.4，补液至50 mL，直接对该溶液（或进一步稀释）进行测定。

(f) 测定牙膏中的甘油含量.

准确称取1 g牙膏样品，加入70 mL蒸馏水，在70°C下充分搅拌30分钟，然后离心(~ 3,000g 10分钟)，再次洗涤悬浮液中的小球2次—加入50 mL蒸馏水，重复搅拌和离心步骤，补液至250 mL并过滤，可以按照1:3倍稀释0.1 mL滤液，进行测定。

参考文献:

1. Spinella, C. I. (1966). Modified enzymatic procedure for the routine determination of glycerol and triglycerides in plasma. J. Lipid Res. 7,167-169.

2. Klopper,W. J.,Angelino, S.A. G. F.,Tuning, B. & Vermeire, H.A. (1986). Organic acids and glycerol in beer. J. Inst. Brew. 92, 225-228.

3. Michal, G. (1976). Enzymatische analyse in der pharmazie. Acta Pharmaceutica Technologica, Suppl. 1,S, 151-162.

4. Pfandl,A. & Menschig, D. (1984). Ein beitrag zur enzymatischen glycerinund ethanol-bestimmung. Pharm. Ind. 46, 403-407.

5. Wieland, O. H. (1988). Glycerol. In Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H. U., ed.), 3rd ed., Vol.VI, pp. 504-510,VCH Publishers (UK) Ltd., Cambridge, UK.