人教版高中生物选修一5.3 血红蛋白的提取和分离人教版高中生物选修一练习

5.3 血红蛋白的提取和分离

学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________

一、单选题（本大题共30小题，共60.0分）

1.以下关于血红蛋白提纯的叙述，正确的是（）

A. 实验材料用鸡血比猪血好

B. 血红蛋白呈红色，有利于凝胶色谱分离过程中的监测

C. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得两条带，说明血红蛋白是由两条肽链构成的

D. 在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢

2.下列有关提取和分离猪血红蛋白的实验，叙述错误的是（）

A. 用生理盐水洗涤红细胞，以防止红细胞破裂

B. 用蒸馏水和甲苯处理红细胞，使其释放出血红蛋白

C. 用生理盐水透析血红蛋白溶液，以保持血红蛋白活性

D. 用磷酸缓冲液洗脱，有利于血红蛋白在凝胶柱中移动

3.样品的加入和洗脱的操作不正确的是（）

A. 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶

面的下面

B. 用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面

C. 加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内

D. 等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口

4.下列有关血红蛋白的提取的叙述，错误的是

A. 使用透析法可以去除样品中相对分子质量较大的杂质

B. 凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法

C. 血红蛋白的提取和分离一般按照样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定的顺序进

行

D. 装填色谱柱时要尽量紧密，减小颗粒间隙；避免出现气泡；洗脱液不能断流

5.将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min速度离心10 min后，离心管中溶液

分为4层，血红蛋白位于从下至上的

A. 第一层

B. 第二层

C. 第三层

D. 第四层

6.下图1是血红蛋白的提取和分离流程图，图2是为用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴

定某血浆蛋白的结果，下列叙述中错误的是

A. 图1中①②分别代表血红蛋白的释放、凝胶色谱柱的装填

B. 为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠

C. 凝胶色谱法能除去血红蛋白溶液中相对分子质量较大的杂质

D. 根据电泳结果，可得出“提取的血浆某白蛋白一定由两条肽链组成”的结论

7.在血红蛋白的提取和分离中，关于对样品处理过程的分析，不正确的是（）

A. 洗涤红细胞用0．9%的生理盐水，目的是去除杂蛋白

B. 洗涤红细胞和分离血红蛋白都要离心，离心速度可相同

C. 血红蛋白的释放要加蒸馏水和甲苯

D. 透析的目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质

8.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种物质，其分子大小、电荷的性质和数量

情况如下图所示。下列叙述正确的是（）

A. 若五种物质为蛋白质，则用凝胶色谱柱分离时，甲的移动速度最快

B. 将样品装入透析袋中透析12h，若分子乙保留在袋内，则分子甲也保留在袋内

C. 将样品以2000r/min的速度离心10min，若分子戊存在于沉淀中，则丙也存在于

沉淀中

D. 若五种物质为蛋白质，用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，

则分子丁和戊形成的电泳带相距最近

9.血红蛋白的提取和分离步骤依次是（）

A. 样品处理、纯化、SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳

B. 样品处理、纯化、粗分离

C. 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定

D. 样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定

10.下列关于血红蛋白的提取和分离的叙述中，错误的是（）

A. 红细胞的洗涤效果与洗涤次数、离心速度和离心时间有关

B. 凝胶柱中适量气泡的存在会提高分离的效果

C. 凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的方法

D. 判断纯化的蛋白质是否达到要求可以采用电泳法

11.下列关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述，正确的是（）

A. 为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠

B. 红细胞洗涤使用5倍体积的蒸馏水，直到离心后上清液不呈现黄色为止

C. 利用0.9%的NaCl对血红蛋白溶液透析12小时，可以去除小分子杂质

D. 在凝胶柱中加入蛋白样品后即可连接缓冲溶液洗脱瓶进行洗脱和收集样品

12.下图是用除去DNA的滤液进行血红蛋白的提取和分离实验的装置，下列有关叙述

不正确的是( )

A. 首先用图甲装置对滤液进行处理，其目的是去除相对分子质量较大的杂质

B. 图乙装置的试管中收集到的液体中最先得到的是相对分子质量较大的蛋白质

C. 用图乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集

流出液，每管收集5 mL，连续收集

D. 图丙装置中电泳法分离提纯血红蛋白的原理是血红蛋白带有一定量的电荷，在

电场的作用下向一极移动

13.下列对血红蛋白提取和分离的叙述，错误的是（）

A. 血红蛋白提取和分离一般按照“样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定”的顺序

进行

B. 纯化过程中要用生理盐水充分溶胀凝胶

C. 粗分离时透析的目的是去除相对分子质量较小的杂质

D. 可经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定

14.下列有关提取和分离血红蛋白的实验叙述错误的是

A. 破裂后的红细胞经离心后自上往下第二层为血红蛋白的水溶液

B. 通过透析法可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取

C. 凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质

D. 电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离

15.在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是（）

A. 防止血红蛋白被氧化

B. 血红蛋白是一种两性物质，需要酸中和

C. 磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程

D. 让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能

16.图为凝胶色谱法分离蛋白质示意图和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳示意图。据图分析

不正确的是

A. 在装填图甲中凝胶色谱柱时一旦发现柱内有气泡存在，就需要重装

B. 图甲中大分子蛋白质因阻力大而移动慢，所以最后从层析柱中流出来

C. 图乙中凝胶中加入的SDS可以使蛋白质迁移速率完全取决于分子大小

D. 已知凝胶中的SDS带负电，则应在电泳槽的①处接电源负极，②处接电源正极

17.通常用哺乳动物的血液来提取和分离血红蛋白，下列叙述中正确的是（）

A. 实验时向新鲜的血液中加入柠檬酸钠的目的是防止血红蛋白变性

B. 洗涤红细胞的目的是避免细胞粘连在一起

C. 分离红细胞时要进行较长时间的高速离心

D. 分离后血红蛋白还要通过凝胶色谱法将样品进一步纯化

18.已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，分子大小、电荷的性质和

数量情况如图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是

A. 若将样品以2000r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉

淀中

B. 若用凝胶色谱法分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快

C. 将样品装入透析袋中透析12 h，若丙保留在袋内，则乙也一定保留在袋内

D. 若用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子丁

形成的电泳带相距最远

19.下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中，正确的是（）

A. 用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白

B. 将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质

C. 血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂

D. 整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构

20.在血红蛋白分离过程中，如果红色区带歪曲、散乱、变宽，与其有关的是

A. 血红蛋白释放

B. 色谱柱的装填

C. 洗脱过程

D. 样品的处理

21.下列关于蛋白质提取和分离实验中样品处理步骤的描述，正确的是（）

A. 红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心

B. 血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌

C. 分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心，过滤后，用分液漏斗分离

D. 透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，然后置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析

12 h

22.分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min的速度离心

10min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层。下列描述正确的是

A. 第1层为无色透明的甲苯层

B. 第2层为红色透明层，含血红蛋白

C. 第3层为暗红色沉淀物，含未破裂的细胞

D. 第4层为白色薄层固体，是脂溶性沉淀物

23.下列有关血红蛋白的提取和分离，相关叙述正确的是（）

A. 血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分

离血红蛋白溶液和粗分离

B. 粗分离采用透析的方法，除去大分子杂质

C. 在洗脱过程中加入的磷酸缓冲液的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持

体外的pH和体内的一致．

D. 利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法来纯化血红蛋白。

24.下面说法不正确的是

A. 在一定范围内，缓冲溶液能抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本

不变

B. 缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成

C. 蛋白质通过凝胶时，相对分子量小的容易进入凝胶内部，路程较长，移动速度

较慢

D. 透析袋能使大分子自由进出，而将小分子保留在袋内

25.下列有关提取和分离血红蛋白的程序，叙述错误的是（）

A. 样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液

B. 通过透析可以去除样品中相对分子质量较大的杂质，此为样品的粗分离

C. 可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化

D. 可通过SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度

26.凝胶柱制作的顺序一般是( )

①橡皮塞打孔②挖凹穴③装玻璃管④盖尼龙网⑤盖尼龙纱⑥将橡皮塞插

入玻璃管

⑦接尼龙管、装螺旋夹⑧柱顶插入安装玻璃管的橡皮塞

A. ①③④⑤⑥⑧⑦②

B. ①②③④⑤⑥⑦⑧

C. ①②③④⑥⑤⑧⑦

D. ①②③⑦⑥⑤⑧④

27.凝胶色谱法分离蛋白质中使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶（Sephadex G75）,其中G、

75的含义分别是（）

A. G表示凝胶的使用量,75表示加75 g水

B. G表示凝胶的交联程度,75表示需加热至75 ℃

C. G表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围,75表示每克凝胶及膨胀时吸水7.5

g

D. G表示凝胶的膨胀体积,75表示每克凝胶膨胀后体积可达75 cm3

28.蛋白质提取和分离依次经过哪几步

A. 样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

B. 样品处理、凝胶色谱操作、纯化

C. 样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定

D. 样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定

29.相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶色谱柱中的行进过程，可表示为图中哪一个

（）

【注：图中大圆点代表相对分子质量大的蛋白质】

A. B. C. D.

30.在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡存在的原因是

A. 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果

B. 气泡阻碍蛋白质的运动

C. 气泡能与蛋白质发生化学反应

D. 气泡会在装填凝胶的时候使凝胶不紧密

二、识图作答题（本大题共1小题，共8.0分）

31.（8分）回答下列“蛋白质提取与分离实验”的有关问题。

（1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤，洗涤时应使用生理盐水而不是蒸馏水，原因是___________________________；洗涤后的红细胞加

____________________搅拌离心，离心后可以明显看到试管中溶液分为4层，其中中间两层分别是_________________________________。

（2）若要去除血红蛋白中的小分子杂质，采用图1装置。透析液是________，一段时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液_______（出现/不出现）紫色。

（3）电泳法分离蛋白质的原理是

____________________________________________________，（2分）图2表示SDS-凝胶电泳的结果，相对分子质量较大的是蛋白质_________（填“a”或“b”）。

三、探究题（本大题共1小题，共9.0分）

32.（9分）对蛋白质进行研究时，首先要获得纯度较高的蛋白质。下图是某生物兴趣

小组在“蛋白质的提取和分离”实验中，准备从猪的血液中初步提取血红蛋白，设计的“血红蛋白提取、分离流程图”。

请回答下列有关问题：

（1）样品处理中红细胞的洗涤要用_____________反复冲洗、离心。向红细胞悬液中加入一定量的低浓度pH7.0的缓冲液并充分搅拌，可以破碎红细胞，破碎细胞的原理是__________

______________________________________________。

（2）血红蛋白粗分离阶段，透析的目的是__________________，若要尽快达到理想的透析效果，可以______________________________________（写出一种方法）。

（3）血红蛋白的纯化是通过________________法将相对分子质量大的杂质蛋白除去。

（4）电泳利用了待分离样品中各种分子的________________________________等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。

（5）一同学通过血红蛋白醋酸纤维薄膜电泳，观察到正常人和镰刀型细胞贫血症患者的血红蛋白电泳结果如图所示。由图可知携带者有_______种血红蛋白，从分子遗传学的角度作出的解释是

__________________________________________________________________。

四、实验题（本大题共3小题，共23.0分）

33.（7分）红细胞含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊的血液进行实验，来

提取和分离血红蛋白。根据材料回答下列问题：

(1)以哺乳动物的红细胞为实验材料的原因：________________________。

(2)提取血细胞时，首先进行红细胞的洗涤，洗涤次数、离心速度与离心时间十分重

要。洗涤次数过少，________；离心速度________和时间________会使血细胞等一同沉淀。

(3)蛋白质分离方法中常用凝胶色谱法，该方法是根据________分离蛋白质。

(4)同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术，将得到的蛋白质进行分离，在电泳过程中，影

响蛋白质迁移速度的因素包括蛋白质分子的_______、______以及分子本身的大小等。

34.（8分）血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O2或

CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

(1)将实验流程补充完整：A为________，B为________。凝胶色谱法是根据

____________而达到蛋白质分离的有效方法。

(2)洗涤红细胞的目的是去除______________，洗涤次数过少，无法除去杂质；离心

速度过高和时间过长会使_______一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是__________。在释放血红蛋白的过程中，需要加入的物质是______________。

(3)在洗脱过程中，如果红色区带____________，说明色谱柱制作成功。

35.（8分）（1）红细胞含有大量血红蛋白,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物

的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白，该过程中对采集到的新鲜血液要进行洗涤和粗分离,洗涤红细胞用的试剂是_______，其目的是______________。红细胞破裂后,需用离心的方法分离血红蛋白溶液,离心后位于第______层的液体是血红蛋白水溶液。血红蛋白提取液的纯化过程是采用________方法。

（2）下图1表示制备固定化酵母细胞的有关操作，图中的X溶液的作用是_________。

在制备海藻酸钠与酵母细胞的混合液时,应将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温,才能加入已活化的酵母细胞，目的是防止___________________________________。

（3）为了探究某加酶洗衣粉中碱性蛋白酶含量与洗涤效果的关系，某同学通过实验获得如图2所示的结果。由图可知,加酶洗衣粉中碱性蛋白酶的最适含量是

________% ,本实验的自变量是______________________.

答案和解析

1.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查蛋白质的提取和分离的相关知识，属选修部分，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

【解答】

A.猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，所以用猪血比鸡血好，A 错误；

B.血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时，可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液(如果操作都正确，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出)，B正确；

C.两条带说明血红蛋白由两种肽链构成，但不一定是两条肽链，因为相对分子质量相同的肽链处于一条带的位置，C错误；

D.在凝胶色谱法分离过程中，相对分子质量大的移动速度较快，路程较短，先洗脱出来，D错误。

故选B。

2.【答案】C

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取和分离，意在考查考生对知识点的识记、理解和掌握程度。【解答】

AC.生理盐水与红细胞内液为等渗溶液，用其洗涤红细胞主要是防止红细胞吸水涨裂，A正确；C错误；

B.利用蒸馏水和甲苯的低渗，使得红细胞破裂释放出血红蛋白，B正确；

D.移动磷酸缓冲液能够准确模拟生物体内的生理环境，用其洗脱，有利于血红蛋白在凝胶柱中，随着洗脱液缓慢流出，D正确。

故选C。

3.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取和分离相关知识，意在考查考生对知识点的识记掌握程度。【解答】

加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面平齐（而不是下面），关闭出口。用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，注意不要破坏凝胶面。加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内。等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口，综上所述，A错误，BCD正确。

故选A。

4.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查蛋白质的提取和分离，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的材料、实验步骤等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。

【解答】

A.通过透析法可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取，A错误；

B.凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，B正确；

C.血红蛋白的提取和分离一般按照样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定的顺序进行，C 正确；

D.装填色谱柱时要尽量紧密，减小颗粒间隙；避免出现气泡；洗脱液不能断流，D正确。故选A。

5.【答案】C

【解析】【分析】

本题考查蛋白质的提取和分离，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的试剂及试剂的作用、实验操作步骤等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。

【解答】

分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层。综上分析，C正确，ABD错误。故选C。

6.【答案】D

【解析】略

7.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查的是血红蛋白的提取和分离的内容，意在考查学生的识记和操作能力。

【解答】

A.洗涤红细胞用0.9%的生理盐水，目的是去除杂蛋白，A正确；

B.洗涤红细胞的离心是慢速离心，分离血红蛋白的离心是快速离心，B错误；

C.在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白，加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离，C正确；

D.洗涤过程利用小分子易通过半透膜的特点，去除样品中相对分子质量较小的杂质，D 正确。

故选B。

8.【答案】C

【解析】【分析】

本题考查实验数据分析能力，对于差速离心法、电泳法、凝胶色谱法分离大分子物质的

原理的掌握是本题考查的重点。

分析题图可知，甲、乙、丙带电的性质相同，丁、戊带电的性质相同；甲、乙、丙、丁、戊的分子量大小依次是甲＜戊＜乙＜丁＜丙。

【解答】

A.由于甲蛋白质分子量最小，最容易进入凝胶内部的通道，路程最长，移动的速度最慢，A错误；

B.分子量大小是甲＜乙，透析时分子乙保留在袋内，则分子甲不一定保留在袋内，B错误；

C.由于丙的分子量大于戊，将样品以2000r/min的速度离心10min，若分子戊存在于沉淀中，则分子丙也存在于沉淀中，C正确；

D.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移速率完全取决于分子本身的大小，由于甲和丙的分子量差距最大，因此二者之间的电泳带相距最远，D错误。

故选C。

9.【答案】C

【解析】【分析】

本题考查了蛋白质的提取和分离的相关知识。难度较小，熟记蛋白质提取和分离的方法是解题的关键。

【解答】

血红蛋白的提取和分离步骤依次是样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定，故C符合题意，A、B、D均不符合题意。

故选C。

10.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取和分离相关知识，意在考查学生对知识的理解和记忆能力。【解答】

A.洗涤次数、离心速度和离心时间都会影响红细胞的洗涤效果，A正确；

B.如果凝胶柱中产生了气泡，将会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，B错误；

C.凝胶色谱法是一种根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的方法，C正确；

D.判断纯化的蛋白质是否达到要求可以采用电泳法，D正确。

故选B。

11.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取与分离的实验，答题关键是理解实验原理，熟悉实验步骤。血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤(低速短时间离心)，②血红蛋白的释放(需要加入蒸馏水和甲苯)，③分离血红蛋白(中速长时间离心)。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。（4)纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

【解答】

A、为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，A正确；

B、红细胞的洗涤过程应该用生理盐水洗涤，不能用蒸馏水洗涤，B错误；

C、将血红蛋白溶液通过透析进行粗分离时应该选用磷酸缓冲液，不是质量分数为0.9%的NaCl溶液，C错误；

D、凝胶柱中加入蛋白样品后要使样品完全进入凝胶层后，小心加入缓冲液到适当高度后才可连接缓冲溶液洗脱瓶进行洗脱和收集样品，D错误。

故选A。

12.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取和分离的实验的知识点，要求学生掌握血红蛋白的提取和分离的实验的过程、原理和方法是解决问题的关键。

【解答】

A.甲图为透析装置，目的是除去样品中相对分子质量较小的杂质，A错误；

B.图乙装置的试管中收集到的液体中最先出现的是相对分子质量较大的蛋白质，B正确；

C.用图乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每管收集5mL，连续收集，C正确；

D.电泳法分离分子的原理是依据各种分子的带电性质的差异，以及分子本身的大小、形状不同，图丙装置中电泳法分离提纯血红蛋白的原理是血红蛋白带有一定量的电荷，在电场的作用下向一极移动，D正确。

故选A。

13.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取和分离，意在考查考生对知识点的识记、理解和掌握程度。【解答】

A.血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定的顺序进行，A正确；

B.纯化过程中要用缓冲液充分溶胀凝胶来配制凝胶悬浮液，B错误；

C.血红蛋白溶液的粗分离采用的方法是透析，即将集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，去掉分子量较小的杂质，C正确；

D.通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定，D正确。

故选B。

14.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查蛋白质的提取和分离，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的材料、实验步骤等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。

【解答】

A.分离血红蛋白溶液时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，经过中速长时离心后，可明显看到试管中溶液分为4层，从上往下数，第1层为甲苯层，第2层为脂溶性物质的

沉淀层，第3层为血红蛋白水溶液，第4层为杂质沉淀层，A错误；

B.通过透析法可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取，B正确；

C.凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质，C正确；

D.电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离，D正确。故选A。

15.【答案】D

【解析】一【分析】

本题主要考查血红蛋白的提取和分离过程，意在强化学生对相关实验操作流程的识记、理解与运用，试题难度一般。

1、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白。（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析。（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质。（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。

2、磷酸缓冲液（pH为7.0）能够准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致。

【解答】

在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持PH相对稳定，防止血红蛋白的结构发生改变，故D符合题意。

故选D。

16.【答案】B

【解析】【分析】

本题主要考查蛋白质的提取与分离的原理即操作流程，意在强化学生对相关实验的原理及流程的识记、理解与运用。

蛋白质的提取与分离的原理是根据蛋白质的理化性质，即：蛋白质的形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等的千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。胶色谱法的原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

蛋白质的提取与分离的步骤为：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。【解答】

A.在装填图甲中凝胶色谱柱时一旦发现柱内有气泡存在，就需要重装，A正确；

B.分子量小的蛋白质穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢，从凝胶色谱柱中最后分离出来，B错误；

C.图乙中凝胶中加入的SDS可以使蛋白质迁移速率完全取决于分子大小，C正确；

D.已知凝胶中的SDS带负电，则应在电泳槽的①处接电源负极，②处接电源正极，D 正确。

故选B。

17.【答案】D

【解析】【分析】

本题考查提取和分离血红蛋白，意在考查学生对知识的理解和记忆能力。

【解答】

A.实验时向新鲜的血液中加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固，A错误；

B.洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，B错误；

C.分离红细胞时要低速短时间离心，C错误；

D.分离后血红蛋白还要通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，D正确。

故选D。

18.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查凝胶色谱法等知识点，考查学生识记能力、理解能力及实验分析能力。解题的关键是正确理解题意。

【解答】

A.分子丙比分子戊的相对分子质量大，若将样品以2000r/min的速度离心10 min，分子戊在沉淀中，则丙也一定在沉淀中，A正确；

B.分子甲的相对分子质量最小，会进入凝胶内部通道而移动速度慢，B错误；

C.若分子乙留在透析袋内，说明其相对分子质量比较大，分子丙比分子乙相对分子质量大，所以分子丙也留在袋内，C错误；

D.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中的样品，其电泳迁移率完全取决于分子的大小，相对分子质量相差越大，形成的电泳带相距越远，故分子甲和分子丙形成的电泳带相距最远，D 错误。

故选A

19.【答案】D

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白提取和分离。本题难度中等，意在考查考生对血红蛋白提取和分离的过程的理解。血红蛋白的提取和分离一般的一般步骤是样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。样品处理，它包括红细胞洗涤、血红蛋白释放、分离血红蛋白溶液；透析即是血红蛋白的粗分离，透析的目的是除去分子量较小的杂蛋白；血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解磷脂，加速血红蛋白的释放；样品的纯化是通过胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去；用电泳鉴定血红蛋白的纯度。

【解答】A.红细胞的洗涤应用生理盐水，其目的是去除血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化，而不是洗去细胞表面的杂蛋白，A项不正确;

B.将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，B项不正确；

C.血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放，而不是溶解血红蛋白，C项不正确；

D.整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构，D项正确。

故选D。

20.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查蛋白质的提取和分离，意在考查学生的理解和应用能力，对于凝胶色谱柱装填是否成功的评价和对失败原因的分析的本题考查的重点。

【解答】

如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装填有关。综上，B正确，ACD错误。

故选B。

21.【答案】C

【解析】【分析】本题考查蛋白质提取和分离实验中样品处理步骤的分析，难度一般。考查学生的识记、理解和分析能力，要求一般。解答关键是理解蛋白质提取和分离实验中样品处理步骤。

【解答】血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液和透析四步，回忆红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液和透析的过程，然后分析选项进行解答。

A.红细胞洗涤过程中应该用生理盐水，不能用蒸馏水，A错误；

B.血红蛋白的释放应该加入蒸馏水，使红细胞吸水涨破，释放其中的血红蛋白，B错误；

C.将搅拌好的混合液通过离心、过滤后，用分液漏斗分离出血红蛋白溶液，C正确；

D.透析所用的磷酸缓冲液的PH为7，D错误。

故选C。

22.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白的提取和分离，对分离血红蛋白溶液的操作步骤的记忆是解题的关键。【解答】

分离血红蛋白时，将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min的速度离心10min 后，可以明显看到试管中的溶液分为4层，从上往下数，第1层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层为红色透明液体，是血红蛋白水溶液，第4层为暗红色杂质沉淀层。

综上所述，A正确，BCD错误。

故选A。

23.【答案】C

【解析】[分析]

本题考查了血红蛋白的分离和提取实验，要求学生了解血红蛋白的分离和提取过程，并熟练运用相应的技术。

[解答]

A.血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定，A错误；

B.粗分离采用透析的方法，除去小分子杂质，B错误；

C.在洗脱过程中加入的磷酸缓冲液的目的是准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致，C正确；

D.利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳法对血红蛋白进行纯度鉴定，D错误；

故选C。

24.【答案】D

【解析】略

25.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白提取和分离中的两种方法：透析法和凝胶色谱法，首先要掌握其原理和操作步骤，并记住实验中需要注意的事项。

【解答】A.样品的处理就是通过红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等操作后收集到血红蛋白溶液，A正确；

B.透析可以除去样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液，此为样品的处理，B错误；

C.凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，当蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，不同相对分子质量的蛋白质分子因此得以分离，C正确；

D.判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定，在鉴定的方法中，使用最多的是SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，D正确。

故选B。

26.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查凝胶色谱法知识点，考查学生识记能力和理解能力。解题的关键是正确理解凝胶柱制作的一般流程是：选择玻璃管→选择合适的橡皮塞→打孔→挖凹穴→装玻璃管→盖尼龙网→盖尼龙纱→将橡皮塞插入玻璃管→接尼龙管→装螺旋夹→柱顶插入安装了

玻璃管的橡皮塞。

【解答】

凝胶柱制作的一般流程是：选择玻璃管→选择合适的橡皮塞→打孔→挖凹穴→装玻璃管→盖尼龙网→盖尼龙纱→将橡皮塞插入玻璃管→接尼龙管→装螺旋夹→柱顶插入安装

了玻璃管的橡皮塞。综上所述，ACD错误，B正确。

故选B。

27.【答案】C

【解析】【分析】

本题考查凝胶色谱法分离蛋白质的实验，意在考查学生的识记与理解能力。

【解答】

“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围；“75”表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5g。综上所述，C符合题意，ABD不符合题意。

故选C。

28.【答案】C

【解析】【分析】

本题考查了蛋白质的提取和分离的相关知识。难度较小，熟记蛋白质提取和分离的方法是解题的关键。

【解答】

蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。凝胶色谱操作是分离蛋白质的方法，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳是纯化蛋白质的方法。综上所述，C符合题意，A、B、D均不符合题意。

故选C。

29.【答案】B

【解析】【分析】

本题考查蛋白质的提取和分离实验，难度一般。考查考生的识记、识图和理解与分析能力，要求一般。解答关键是对实验的理解掌握程度及识图能力。

【解答】

相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动速度慢；相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动速度快，如图B。综上所述，B正确，ACD错误。

故选B。

30.【答案】A

【解析】【分析】

本题考查了血红蛋白的提取和分离实验，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。

凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离。

【解答】

装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，因为气泡会扰乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，使得到的红色带区歪曲、散乱，降低分离效果。

综上所述，A正确，BCD错误。

故选A。

31.【答案】（1）防止红细胞吸水破裂；蒸馏水和甲苯；脂类物质和血红蛋白溶液（2）（磷酸）缓冲液；出现

（3）不同蛋白质所带电荷性质、分子大小和形状不同，导致电泳时迁移速度不同；b

【解析】【分析】

本题考查血红蛋白提前和分离的知识点，熟知血红蛋白提取和分离过程是解题的关键，题目难度适中。

【解答】

（1）为了提取和分离血红蛋白，首先对红细胞进行洗涤，洗涤时应使用生理盐水而不

是蒸馏水，原因是防止红细胞吸水破裂；洗涤后的红细胞加蒸馏水和甲苯搅拌离心，离心后可以明显看到试管中溶液分为4层，其中中间两层分别是脂类物质和血红蛋白溶液。

（2）若要去除血红蛋白中的小分子杂质，采用图1装置。透析液是磷酸缓冲液，一段

时间后，若向烧杯中加入双缩脲试剂，透析袋内溶液出现紫色。

（3）电泳法分离蛋白质的原理是不同蛋白质所带电荷性质、分子大小和形状不同，导

致电泳时迁移速度不同；相对分子质量越大，移动距离越远，所以图2表示SDS-凝胶

电泳的结果，相对分子质量较大的是蛋白质b。