“血红蛋白的提取和分离”的解题指导
None
血红蛋白的提取和分离
专题5 DNA和蛋白质技术 课题3 血红蛋白的提取和分离 一、教学目标 （一）知识与技能 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白 2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理 （二）过程与方法 体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤 （三）情感、态度与价值观 初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神 二、课题重点与难点 课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。 课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 三、课题背景分析 课题背景通过当今生物科学在蛋白质研究领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，进而明确地提出课题目的：以血红蛋白为实验材料，学习蛋白质提取和分离的一些基本技术。可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让学生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法。 四、基础知识分析与教学 （一）教学方法：启发式教学 （二）教学工具：多媒体课件 （三）教学过程 引入新课 蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢？ 1、进行新课 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．1凝胶色谱法（分配色谱法）： 学习内容：1.凝胶色谱法的用途；2.凝胶色谱法分离蛋白质的原理。 凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 凝胶：所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，如葡聚糖或琼脂糖。 教学：在介绍凝胶色谱法的基本原理时，可以结合教科书提供的插图，让学生对凝胶色谱法分离蛋白质的过程有一个直观的认识。可以通过发动学生查阅资料，让学生了解有关凝胶色谱法的知识，如凝胶的种类、理化性质及凝胶的选择和保存，并结合实验操作，让学生分析实验中的注意事项。还可以向学生介绍凝胶色谱法的其他用途，如测定生物大分子的分子量、蛋白质的脱盐等。 （1）原理：（图5－13a） 在小球体内部有许多贯穿的通道，当相对分于质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的
血红蛋白的提取和分离
[基础全练] 1．分离不同种类的蛋白质依据的原理不包括() A．分子的形状和大小 B．所带电荷的性质和多少、吸附性质 C．对其他分子的亲和力 D．蛋白质分子的组成元素 解析：根据分离蛋白质的方法可以知道，分离不同种类的蛋白质依据的原理包括分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、吸附性质、对其他分子的亲和力和蛋白质分子的溶解度等。蛋白质分子的组成元素不是分离不同蛋白质的依据。答案：D 2．如图能正确表示相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程的是() 解析：相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢；相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，故B正确。 答案：B 3．凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是() A．改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B．吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C．将酶或细胞固定在凝胶中 D．与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 解析：凝胶的种类较多，但每种凝胶内部都有孔隙。当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质分子可以进入凝胶内部，通过的路程
较长，洗脱时从凝胶柱中出来得较晚；相对分子质量较大的蛋白质分子则可以较早地洗脱出来，从而达到分离蛋白质的目的。 答案：A 4．下列有关凝胶色谱操作的叙述，不正确的是() A．干的凝胶要用蒸馏水充分溶胀后，才能装填 B．在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡产生 C．在装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管先打开后关闭 D．在样品洗脱过程中，不能让洗脱液流干 解析：在装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应始终打开，C错误。 答案：C 5．下列关于DNA的粗提取实验和血红蛋白的提取实验，叙述正确的是() A．前者选择鸡血细胞作为实验材料较好，后者选择哺乳动物成熟的红细胞作为实验材料较好 B．样品预处理时，前者静置1天处理除去上清液；后者需要加入清水，反复低速短时间离心洗涤，至上清液无黄色 C．在DNA粗提取实验中，往2 mol/L氯化钠溶液中加入蒸馏水析出DNA时，应该缓慢加入，直到出现黏稠物即止 D．洗涤红细胞的目的是去除血浆中的葡萄糖、无机盐等 解析：鸡血细胞有细胞核，适于提取DNA；哺乳动物成熟红细胞无细胞核和众多细胞器，适用于提取血红蛋白。提取血红蛋白的实验中，洗涤红细胞时，不能加清水，应该加入生理盐水，否则细胞会提早释放出血红蛋白与杂质混合，加大提取难度。DNA初次析出时，加蒸馏水至黏稠物不再增加为止。洗涤红细胞的目的是去除杂质蛋白，以利于血红蛋白的分离和纯化。 答案：A 6．关于凝胶色谱柱的装填，除哪项外均为正确解释() A．交联葡聚糖凝胶(Sephadex G－75)“G”表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值
人教版生物选修一课下提能：专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 含解析
专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 课下提能 一、选择题 1．(2019·平遥期中)下列关于电泳技术分离蛋白质原理的叙述，正确的是() A．蛋白质中含有游离的氨基，是碱性电解质 B．蛋白质中含有游离的羧基，是酸性电解质 C．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相同的电极方向移动 D．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动 [解析]选D氨基酸既有氨基也有羧基，是中性电解质，A、B错误；蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动，C错误、D正确。 2．相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程可表示为() [解析]选B用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量较大的蛋白质容易通过凝胶间隙，先被洗脱出来；相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部，后被洗脱出来。 3．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是() A．防止血红蛋白被氧气氧化 B．血红蛋白是一种碱性物质，需磷酸中和 C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能不变 [解析]选D磷酸缓冲液的作用是稳定pH，从而维持血红蛋白的结构和功能不变。
4．蛋白质的各种特性的差异，可以作为分离不同种类的蛋白质的依据。下列可作为分离依据的是() A．分子的形状、大小和溶解度 B．所带电荷的性质和多少、吸附性质 C．对其他分子的亲和力 D．以上三项都是 [解析]选D利用蛋白质的各种特性，可以采用不同的方法对蛋白质进行分离和提取。如蛋白质分子的形状和大小、在不同溶剂中的溶解度、所带电荷的性质和多少、吸附性质以及对其他分子的亲和力等，都可作为分离依据。 5．下面是血红蛋白提取和分离实验中对样品的处理措施，不正确的是() A．采集血样后要高速短时间离心获得血细胞 B．洗涤三次后如上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则血浆蛋白无法除净 C．在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白 D．释放血红蛋白后再经过离心，就可以使血红蛋白和其他杂质分离开来[解析]选A采集血样后要低速短时间离心获得血细胞，否则会使淋巴细胞、血小板等混杂在红细胞中。 6．下列有关血红蛋白的提取与分离的实验操作的叙述，正确的是() A．分离红细胞时采用低速长时间离心 B．红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水即可 C．分离血红蛋白溶液要低速短时间离心 D．透析时要用20 mmol/L的磷酸缓冲液，透析12 h [解析]选D分离红细胞应采用低速短时间离心，防止白细胞与红细胞一同沉淀；红细胞释放血红蛋白，需加入蒸馏水和40%的甲苯，再在磁力搅拌器上充分搅拌10 min；分离血红蛋白要高速长时间离心。 7．下列有关血红蛋白提取和分离的相关叙述，正确的是() A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白
【凝胶色谱法的原理和方法】血红蛋白的提取和分离
【课题】：课题6 血红蛋白的提取和分离【备课人】： 【备课时间】：【上课时间】： 【课型】：复习【课时数】：1课时 【复习目标】 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。 【复习重点与难点】 复习重点：凝胶色谱法的原理和方法。 复习难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【知识回顾】： 一、实验原理 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程： 混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （4）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。 2．缓冲溶液 （1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 （2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。 3．凝胶电泳法： （1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 （2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
高中生物人教版选修1教案-人教版-生物-高二-选修一第五章-第三节-血红蛋白的提取和分离-1课时-课件(001)
专题五第三节血红蛋白质的提取和分离 测试题 知识点：凝胶色谱法 1.使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中,相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程,可表示为图中（） 2.用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是（） A.相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质 B.相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质 C.相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质 D.二者根本无法比较 3.凝胶色谱分离法分离蛋白质时,凝胶的种类较多,但其作用都是（） A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B.吸附一部分蛋白质,从而影响蛋白质分子的移动速度 C.将酶或细胞固定在凝胶中 D.与蛋白质分子进行化学反应,从而影响其移动速度 4.用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质（） A.路程较长，移动速度较慢 B.路程较长，移动速度较快 C.路程较短，移动速度较慢 D.路程较短，移动速度较快 知识点：电泳法 5.电泳过程中,什么样的分子迁移速度最快?（） A.纤维状、大分子 B.纤维状、小分子 C.球状、大分子 D.球状、小分子 6.下列关于电泳的说法,不正确的是（） A.电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B.带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C.蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率完全取决于它所带净电荷的多少 D.用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质电泳迁移率完全取决于分子的大小 7.使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于（） A 电荷的多少 B 分子的大小
C 肽链的多少 D 分子形状的差异 知识点：血红蛋白的提取和分离 8.一分子血红蛋白最多可携带的O2分子数或者CO2分子数分别是（） A.4、2 B.4、4 C.2、1 D.1、1 9.将人红细胞置于盛有下列液体的离心管中,10 min后离心,得到沉淀物和上清液,则上清液中K+含量最高的离心管内盛有（） A.质量分数为10%的氯化钠溶液 B.质量分数为20%的蔗糖溶液 C.质量分数为0.9%的氯化钠溶液 D.蒸馏水 10.下列有关提取和分离血红蛋白的实验叙述错误的是（） A.该实验的材料必须选用鸡血 B.通过透析法可以去除样品中分子质量较小的杂质,此为样品的粗提取 C.凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质 D.电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小和形状不同进行分离 11.在血红蛋白的整个提取过程中,不断用磷酸缓冲液处理的目的是（） A.防止血红蛋白被氧化 B.血红蛋白是一种两性物质,需要酸中和 C.磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D.让血红蛋白处在稳定的pH范围内,维持其结构和功能 12.在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是（） A.调节pH B.维持红细胞的能量供应 C.防止微生物生长 D.防止血液凝固 13.将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后,离心管中的溶液分为四层,从上到下的顺序依次是（） A.血红蛋白、甲苯层、脂溶性物质层、沉淀层 B.甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂溶性物质层 C.脂溶性物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层 D.甲苯层、脂溶性物质层、血红蛋白、沉淀层 14.下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述,正确的是（） A.红细胞的洗涤:加入蒸馏水,缓慢搅拌,低速短时间离心 B.血红蛋白的释放:加入生理盐水和甲苯,置于磁力搅拌器上充分搅拌 C.分离血红蛋白:将搅拌好的混合液离心、过滤后,用分液漏斗分离 D.透析:将血红蛋白溶液装入透析袋,置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12 h 15.蛋白质提取和分离分为哪几步（）
2018-2019学年高二生物人教版选修一课下能力提升：(十四) 血红蛋白的提取和分离含答案解析
课下能力提升（十四）血红蛋白的提取和分离 【基础题组】 1．下列有关凝胶色谱法的叙述，错误的是() A．凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法 B．目前经常使用的凝胶有交联葡聚糖、聚丙烯酰胺和琼脂糖等 C．大分子物质后被洗脱出来，小分子物质先被洗脱出来 D．凝胶色谱法的原理是不同大小的分子所经的路径不同而得以分离 解析：选C相对分子质量较小的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部而使其所经过的路程较长；相对分子质量较大的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。因此，大分子物质先被洗脱出来，小分子物质后被洗脱出来。 2．下列有关缓冲溶液的说法，错误的是() A．缓冲溶液能够抵制外界任何酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变 B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成 C．调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲溶液 D．生物体内的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的 解析：选A缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成；调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲溶液；在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，超过一定范围，缓冲溶液就起不到这样的作用了。 3．(2018·福建名校月考)下列有关提取和分离血红蛋白的叙述，错误的是() A．样品的处理就是通过一系列操作收集血红蛋白溶液的过程 B．通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗分离 C．可通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化 D．可通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度 解析：选B透析是通过半透膜使样品中较小的分子透过到膜外，因此通过透析可以去除样品中分子质量较小的杂质，此为样品的粗分离。 4．下列有关凝胶色谱操作的叙述，错误的是() A．干的凝胶要用蒸馏水充分溶胀后，才能装填 B．在装填凝胶色谱柱时，不得有气泡产生 C．在装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管先打开后关闭 D．在样品洗脱过程中，不能让洗脱液流干 解析：选C在装填凝胶色谱柱时，下端的尼龙管应始终打开。 5．下列关于血红蛋白提取和分离的过程及原理的叙述，正确的是() A．为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B．红细胞洗涤使用5倍体积的蒸馏水，直到离心后上清液不呈现黄色
人教版高中生物选修1教学案：专题五 课题3 血红蛋白的提取和分离 含答案(1)
课题3血红蛋白的提取和分离 1．凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋 白质的方法，相对分子质量大的先洗脱出 来，相对分子质量小的后洗脱出来。 2．在电泳中，待分离样品中分子带电性质的差异 以及分子本身的大小、形状都会影响分子的 迁移速度。 3．SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于 分子的大小。 4．蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理及 粗分离、纯化和纯度鉴定。 5．透析法可除去相对分子质量较小的杂质。 6．在对蛋白质进行纯度鉴定时，使用最多的方法 是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。 一、蛋白质分离的原理和方法 1.分离原理 依据蛋白质各种特性的差异分离蛋白质，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等。 2.凝胶色谱法 (1)概念：也称为分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。 (2)凝胶：微小的多孔球体，大多数由多糖类化合物构成，内部有许多贯穿的通道。 (3)原理：[填表] 蛋白质类型能否进入 凝胶内部 移动路程 移动 速度 相对分子质量较小能较长较慢相对分子质量较大不能较短较快
3．缓冲溶液 (1)作用：在一定范围内，抑制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。 (2)配制：由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成，通过调节缓冲剂的使用比例就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。 4．电泳 (1)概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。 (2)原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 ④方法：常用的电泳方法有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 二、血红蛋白提取和分离的实验操作[填图] 1．凝胶色谱法中移动速度快的是() A．相对分子质量大的B．相对分子质量小的 C．溶解度高的D．溶解度低的 [解析]选A凝胶色谱法是根据相对分子质量大小分离蛋白质的有效方法。当不同蛋白质通过凝胶时，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。
血红蛋白的分离和提取
细胞为材料，学习初步分离血红蛋白的方法。 样品处理及粗分离 1.红细胞的洗涤 洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化。采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用低速短时间离心，如500 r/min离心2 min，然后用胶头吸管吸出上层透明的黄色血浆，将下层暗红色的红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积的生理盐水（质量分数为0.9%的NaCl溶液），缓慢搅拌10 min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。 ❖为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，比例是每100mL血液加入3.0g柠檬酸钠。 2.血红蛋白的释放 将洗涤好的红细胞倒入烧杯中，加蒸馏水到原血液的体积，再加40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10 min。在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 3.分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min的速度离心10min后，可以明显看到试管中的溶液分为4层（图5-18）。从上往下数，第1层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物。将试管中的液体用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体。
4.透析 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中（pH为7.0)，透析12h。 ❖透析袋一般是用硝酸纤维素（又称玻璃纸）制成的。透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内。透析可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液。 凝胶色谱操作 可以自己制作色谱柱，有条件的学校也可以直接购买商品色谱柱。 1.凝胶色谱柱的制作 取长40 cm，内径为1.6 cm的玻璃管，两端磨平。柱底部的制作方法如下（图5-19）。首先选择适合封堵玻璃管口的橡皮塞，中间打孔，孔径大小要能够紧密插入0.5 mL的移液管。将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴，将0.5mL的移液管头部切下5cm长的一段，插入橡皮塞孔内，插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。将尼龙网剪成与橡皮塞上部一样大小的圆片，覆盖在橡皮塞的凹穴上，再用大小合适的100目的尼龙纱将橡皮塞上部包好，插到玻璃管的一端。在色谱柱下端用移液管头部作出口部位，连接一细的尼龙管，并用螺旋夹控制尼龙管的打开与关闭，尼龙管的另一端放入收集色谱流出液的收集器内。柱顶部的制作只需在色谱柱的另一端插入安装了玻璃管的橡皮塞即可。
高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和分离
2019年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和别离查字典生物网的小编给各位考生整理了2019年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和别离 ,希望对大家有所帮助。更多的资讯请持续关注查字典生物网。 小编推荐：高考成绩不理想 ,专科成绩也能上本科 血红蛋白是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质(缩写为Hb或HGB)。是使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成 ,两条α链和两条β链 ,每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。氧气结合在铁原子上 ,被血液运输。血红蛋白的特性是：在氧含量高的地方 ,容易与氧结合;在氧含量低的地方 ,又容易与氧别离。血红蛋白的这一特性 ,使红细胞具有运输氧的功能。 一、蛋白质的提取和别离一般分为四步： 1、样品处理：包括洗涤红细胞;血红蛋白稀释;离心等操作收集到的血红蛋白溶液。 2、粗别离：透析除去分子较小的杂质。 3、纯化：通过凝胶色谱法将分子量较大的杂质蛋白质除去。 4、纯度鉴定：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 二、样品处理 1、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要参加柠檬酸钠防止血液凝固;离心将血液分层 ,用胶头吸管吸出黄色血浆;用生理盐水洗涤。 2、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下 ,红细胞破裂释放
3、别离血红蛋白溶液： 离心分层;滤纸过滤去除脂溶性沉淀层;分液漏斗分出红色透明液体。4、透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中(PH为7.0)透析。 以上内容就是小编为大家整理的?2019年高考生物必备知识点：血红蛋白的提取和别离 ? ,对于高考政治知识点了解是否更加加深了一点呢？更多学习相关材料 ,敬请关注查字典生物网 ,小编随时为大家更新更多有效的复读材料及方法！
人教版高中生物选修1专题5课题3血红蛋白的提取和分离
选择题 为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场取新鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是 A. 要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B. 取血回来后，马上进行高速长时间离心 C. 将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D. 重复洗涤直到上清液呈红色为止 【答案】A 【解析】为了防止血液凝固，要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，A正确；取血后，应进行低速短时间离心，B错误；离心后的血细胞加入蒸馏水和40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌，使红细胞破裂，C错误；红细胞重复洗涤直到上清液不再呈现黄色为止，D错误。 选择题 下列有关提取和分离血红蛋白实验的叙述，错误的是
A. 该实验的材料必须选用鸡血 B. 通过透析法可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，此为样品的粗提取 C. 凝胶色谱法是利用蛋白质的相对分子质量的大小分离蛋白质 D. 电泳法是利用各种分子带电性质的差异及分子的大小差异分离蛋白质 【答案】A 【解析】本题考查血红蛋白的提取与分离实验的相关知识。因为鸡血细胞中含有细胞核以及各种复杂的细胞器，会给提取和分离血红蛋白带来一定的难度，故提取血红蛋白一般选用哺乳动物成熟的红细胞，A错误；通过透析法可以去除样品中相对分子质量较小的杂质，而将大分子保留在袋内，此为样品的粗提取，B正确；凝胶色谱法是根据需要被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离，C正确；电泳法是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身大小、形状的不同产生不同的迁移速度，由此将各种分子分离，D正确。 选择题 以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是 A. 洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂
课题3血红蛋白的提取和分离答案
课题3血红蛋白的提取和分离 一、基础知识（一）凝胶色谱法 1、凝胶色谱法也称做 分配色谱法，是根据 相对分子质量大小 分离蛋白质的有效方法。 2、凝胶实际上是一些微小的 多孔球体,这些小球体大多数是由 多糖类化合物构成的,如葡 聚糖或琼脂糖。 3、在小球体内部有许多贯穿的通道， 相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同， 相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道, 路程坯，移动速度较慢;而相对分 子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道, 只能在凝胶外部移动,路程题里，移动速度 较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 （二）缓冲溶液 1、缓冲溶液的作用是 能够抵制外界酸或碱对溶液 PH 的影响，维持 PH 基本不变。 2、缓冲溶液通常由1〜2种缓冲剂 溶解于水中配制而成的。 3、生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的 pH 下进行的，为了能够在实验条件下准 确模拟生物体内的过程 ，必须保持体外的 pH 与体内的 基本一致。 （三）电泳：1、电泳是指 带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 2、许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的 团会带上 正电或负电。在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷 电泳利用了待分离样 品中各分子带电性质的差异以及分子本身的旦、也区的不同，使带电 分子产生不同的 迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 3、两种常用的电泳方法是 琼脂糖凝胶电泳 和聚丙烯酰胺凝胶电泳，在测定蛋白质分子量时 通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。电泳速率完全取决于分子大小。 二、实验操作：蛋白质的提取和分离一般分为四步： 样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定。 （一）样品处理 盯M 潘风 曲奏狗曲 由红芥白常旗 IUJ5-1H 南心行分，小尊用 1、红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是 去除杂蛋白， 采集的血样要及时分离红细胞，分离时采用 低速短时间 离心（ 500r/min 、离心2min ）,然后 用胶头吸管吸出上层透明的 黄色血浆，将下层暗红色的红细胞倒入烧杯,再加入五倍体积的 0.9%）,缓慢搅拌10min,低速短时间 离心,如此重复洗涤三次，直 表明红细胞 已洗涤干净。 在蒸储水和甲苯作用下,红细胞破裂释放出血红蛋白。 将搅拌好的混合溶液离心（2000r/ min 、离心10 min ）后，试管 中的溶液分为4层。第一层为无色透明的 甲的层，第2层为白色薄层固体， 是脂溶性物质的 沉淀层，第3层是红色透明液体，这是 血红蛋白的水溶液 pH 下，这些基 相反的电极移动。 生理盐水（质量分数为 至上清液中没有黄色， 2、血红蛋白的释放： 3、分离血红蛋白溶液: ,第4层是其他杂质的暗红色沉
血红蛋白的提取及分离
“血红蛋白的提取和分离”的实验分析及教学组织 人民教育出版社课程教材研究所吴成军 东北师范大学附属中学赵伟涛 “血红蛋白的提取和分离”是人教版选修模块《生物技术实践》中的实验内容，其目的是使学生体验从复杂细胞混合物体系中提取生物大分子的基本原理、过程和方法，该实验虽然操作难度较大，但原理清晰，动手机会较多，因此，学生的学习兴趣很高。下面结合人教版教材对该实验进行分析并提出相应的教学建议。 1.习得实验原理和方法 1．1 初步获取血红蛋白的原理和方法（样品的处理和粗分离） 实验步 骤 实验目的实验原理操作方法结果判断 ①洗涤红细胞获取较纯 净的红细 胞 通过离心将密度 不同的物质分离 低速离心，去除 上清液，反复加 生理盐水并离心 直到上清液 未呈现黄色 为止 ②释放血红蛋白破裂红细 胞，释放血 红蛋白 低渗溶液中红细 胞破裂；甲苯溶解 膜脂，加速细胞破 裂（相似相溶原 加蒸馏水，再加 甲苯，磁力搅拌 器充分搅拌 无明显现象
理） ③分离血红蛋白溶液初步得到 血红蛋白 溶液 通过离心将密度 不同的物质分离 离心（较高速）试管溶液分 为4层 ④透析去掉液体 中的小分 子物质 小分子物质 容易透出透析袋 透析（12小时）透析袋中物 质的颜色更 红 1．2 分离纯化蛋白质的原理与方法──凝胶色谱法（分子筛效应） 凝胶是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质直径小于凝胶网孔，由于静电吸附和扩散作用容易进入凝胶内部的通道，可以自由地进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动的过程中，它们从凝胶颗粒的网孔扩散到凝胶颗粒间的孔隙，再进入另一凝胶颗粒的网孔，如此不断地进出，使流程增长，而最后流出层析柱。而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒的网孔，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随着洗脱液流动，流程较短，因此首先流出层析柱。分子量介于二者之间的物质，虽然能够进入凝胶网孔，但比小分子难，因此进入凝胶网孔的几率比小分子小，向下移动的速度比小分子快，而比大分子慢。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 需要注意的是，有部分小分子蛋白质未进入凝胶内部，而在外部移动，因此，如果需要得到纯度更高的蛋白质分子，可将色谱柱中的凝胶溶液进行平衡后进行再次冼脱和分离。
人教版高中生物选修1同步训练+5.3血红蛋白的提取和分离(含答案)
10 血红蛋白的提取和分离 1、下列有关凝胶色谱法的叙述，不正确的是 A．凝胶色谱法是利用凝胶将相对分子质量不同的蛋白质分开的一种方法 B．在洗脱过程中，相对分子质量大的蛋白质不能进入凝胶内部，所以最先洗脱出来 C．凝胶内部有很多微细的多孔网状结构，其孔隙大小与被分离的蛋白质的大小无相应关系D．凝胶对要分离的物质没有吸附作用，所有 要分离的物质最终都能被洗脱出来 2、下列关于电泳的说法不正确的是( ） A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少 D．用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小 3、下列关于凝胶色谱柱的装填的说法不正确的是（） A.装填时，不能有气泡产生。因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，影响分离效果 B.在操作过程中，不能让洗脱液流干 C.样品洗脱结束后，及时倒掉色谱柱中的凝胶 D.干的凝胶要用蒸馏水充分溶胀后，才能装填 4、下列关于透析的叙述，正确的是（） A.可采集猪血作为实验材料 B.用蒸馏水重复洗涤红细胞 C.血红蛋白释放后应低速短时间离心 D.洗脱液接近色谱柱低端时开始收集流出液 5、下列关于物质提取、纯化原理的叙述中，不正确的是（） A．采用凝胶色谱法分离果胶酶的原理是蛋白质分子的相对分子质量不同，在色谱柱中的移动速度不同 B．使用透析法可以去除样品中相对分子质量较大的杂质 C．电泳法是利用样品中各种分子带电性质和数量以及样品分子大小不同，产生的迁移速度不同而实现样品中各种分子的分离 D．离心法分离蛋白质的依据是不同大小的分子离心时沉降速度不同 6、在血红蛋白的提取和分离过程中，下列有关在凝胶色谱柱上加入样品和洗脱的操作的叙述，不正确的是（） A.加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐 B．让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面 C．打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱 D．待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液 7、将经处理破裂后的红细胞混合液以2000r/min的速度离心10min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是（） ①脂溶性物质②沉淀层③甲苯层④血红蛋白溶液 A．①②③④ B．③②④① C．③①②④ D．③①④② 8、下列关于血红蛋白提取和分离实验中样品处理步骤的描述，正确的是（） A．红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心 B．血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌 C．分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心、过滤后，用分液漏斗分离 D．透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12h 9、下列关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述，正确的是 A.为了防止血液凝固，应在采血器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠
血红蛋白的提取和分离名师教案完整版
血红蛋白的提取和分离 名师教案 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】
专题5D N A与蛋白质技术 课题5.3血红蛋白的提取和分离 辉县市第二高级中学李艳琴一、【课题目标】 知识与能力目标 1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白。 2、说出色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理。 学科素养 1、基础知识（从血液中提取和分离血红蛋白；色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理）； 2、基本技能（通过体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤，培养学生理论联系实际的能力）； 3、基本思想（通过体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神）； 4、基本活动经验（通过色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理的学习，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野）。 二、【课题重点】 凝胶色谱法的原理和方法 三、【课题难点】 样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填 四、【教学方法】 启发式教学 五、【教学工具】 多媒体课件 六、【教学过程】 （一）引入新课 蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化合物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢？ （二）进行新课 1．基础知识 蛋白质的理化性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1.1凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程：（图5－13b） 混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 1.2缓冲溶液
专项5课题3血红蛋白的提取和分离
专项5课题3血红蛋白的提取和分离课题3 血红蛋白的提取和分离 1．下列试剂可用于血红蛋白开释的是() ①0.9%的生理盐水②甲苯③磷酸缓冲液④蒸馏水⑤柠檬酸钠 A．②④ B．①④ C．④⑤D．①③ 解析：0.9%的生理盐水是洗涤红细胞是应用的试剂，不能用于血红蛋白开释；甲苯的作用是溶解细胞膜的磷脂，加速血红蛋白的开释；磷酸缓冲液用于粗分离蛋白质，不能用于开释血红蛋白；蒸馏水作用是使红细胞吸水胀破，开释其中的血红蛋白；柠檬酸钠的作用是采血时，防止血液凝固，不能用于血红蛋白的开释。 答案：A 2．在血红蛋白分离过程中假如红色带区歪曲、散乱、变宽，与其有关的是() A．凝胶色谱柱的制作B．色谱柱的装填 C．洗脱过程 D．样品的处理 解析：在血红蛋白分离过程中假如红色带区歪曲、散乱、变宽，说明色谱柱制作不成功，可能是凝胶装填不紧密、不平均，或者存在气泡，打乱了洗脱次序所致。 答案：B 3．下列有关“血红蛋白提取和分离”实验的正确叙述是() A．用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除细胞表面的杂蛋白 B．将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质C．血红蛋白开释时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂D．整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了坚持血红蛋白的结构[来源:学*科*网] 解析：对红细胞洗涤时应该用生理盐水，不能用蒸馏水，A错误；将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的杂质，B错误；血红蛋白开释时加入有机溶剂，其目的是溶解磷脂，加速血红蛋白的开释，
C错误；整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了坚持pH相对稳固，防止和血红蛋白的结构发生改变，D正确。 答案：D 4．凝胶色谱柱取长为40 cm，内径为1.6 cm，有关说法中，不正确的是() A．一样凝胶色谱柱直径的大小可不能阻碍分离的成效 B．凝胶色谱柱过高，超过1 m，不阻碍分离的成效 C．凝胶色谱柱过矮，则阻碍混合物的分离度 D．凝胶色谱柱直径过大会耗用过多洗脱液，样品的稀释度过大 解析：一样凝胶色谱柱直径的大小不阻碍分离的成效，然而直径过大会造成洗脱液体积增大，样品的稀释度过大，因此应选择直径不超过2 cm 的色谱柱。凝胶色谱柱的高度与分离度有关，一样不超过1 m。 答案：B 5．下图表示血红蛋白提取和分离的部分实验装置，请据图分析回答下列问题： (1)血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的要紧组成成分，其在红细胞中的作用表达了蛋白质具有________功能。 (2)甲装置用于________，目的是去除样品中__________的杂质，图中A是__________。B是__________溶液。 (3)用乙装置分离蛋白质的方法叫________________，是依照________ ________分离蛋白质的有效方法。 (4)乙装置中，C是____________，其作用是_______________。 (5)用乙装置分离血红蛋白时，待__________________________时，用试管收集流出液，每5 mL收集一管，连续收集6管，图中试管序号表示收集的先后。经检测发觉，试管②和试管⑤中蛋白质含量最高，则试管⑤中的蛋白质相对分子质量比血红蛋白________(填“大”或“小”)。 解析：(1)血红蛋白能携带氧气，表达了蛋白质具有运输功能。(2)甲装置为透析装置，目的是去除样品中相对分子质量较小的杂质。其中A是磷酸缓冲液，B是血红蛋白溶液。(3)乙装置分离蛋白质的方法叫凝胶色谱法，
DNA的粗提取与鉴定和血红蛋白的提取和分离
三、例题 例1： 关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料。请据图回答问题： （1）鸡血细胞中红细胞， 家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而 血液中细胞的数目较多， 可以提供丰富的。 （2）实验前由老师制备血细胞液提供 给同学们做实验材料，而不用鸡全血， 主要原因是 。 （3）生活在牧羊区的人们，采取牛、羊号和马血较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是，这是因为这些动物和人类一样。但若改用动物的肝脏做实验材料，实验能顺利进行，这是因为。（4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加程序，使组织细胞更易分离。 答案：⑴有细胞核红 DNA ⑵鸡血细胞液中DNA相对含量高⑶很难提取到DNA 红细胞无细胞核肝细胞有细胞核⑷研磨 例2： 红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带氧气或二氧化碳，我们可以选用猪、牛、羊或其化脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题： （1）血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：、、和。 （2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ①加入柠檬酸钠的目的是 ②以上所述的过程即是样吕处理，它包括、、收集血红蛋白溶液。 （3）收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗他离。 ①透析的目的是。 ②透析的原理是。 （4）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。 ①样品纯化的目的是。 ②血红蛋白有什么特点？。 这一特点对进行蛋白质的他离有什么意义？ 。 答案：⑴样品处理粗分离纯化纯度鉴定⑵①防止血液凝固②红细胞洗涤血红蛋白释放⑶①去除相对分子质量较小的杂质②透析袋能使小分子自由进出，而大分子则保
血红蛋白的提取和分离
高考第一轮复习讲学稿二二 DNA的粗提取与鉴定（选修IP54） 一、实验目的：初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。 二、实验原理： 1．DNA的溶解性： 思考题1：DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点？对此有什么应用？ 思考题2：利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开？ 2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：蛋白酶能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 3．细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂，据此可得到含有核DNA的溶液。4．DNA的鉴定： 思考题3：依据什么原理来鉴定DNA？ 三、实验材料：鸡血细胞液 思考题4：生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，他们能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？ 四、实验步骤： 1．制备鸡血细胞液：在鸡血中加入质量浓度为0．1g/mL的柠檬酸钠溶液，离心处理；2．提取鸡血细胞的细胞核物质：向鸡血细胞液中加入蒸馏水，搅拌、过滤； 思考题5：加入蒸馏水的目的是什么？为什么能达到此目的？ 3．溶解细胞核内的DNA：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态； 4．析出含DNA的黏稠物：加入蒸馏水，用玻璃棒搅拌； 思考题6：此时加入蒸馏水的目的是什么？ 5．滤取含DNA的黏稠物：过滤； 思考题7：这次过滤与上次过滤的目的一样吗？为什么？ 6．将DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化钠溶液，搅拌，使DNA呈溶解状态；7．过滤含有DNA的氯化钠溶液：过滤； 思考题8：这一步骤的目的是什么？ 思考题9：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 8．提取含杂质较少的DNA：加入冷却的95%的酒精，搅拌； 思考题10：这一步骤的目的是什么？ 思考题11：为什么加入的酒精需要冷却的？
血红蛋白的提取和分离习题带答案
课题3 血红蛋白的提取和分离 【学习目标】 1、简述蛋白质提取和分离的基本原理 2、理解蛋白质提取与分离的实验操作过程 【重点与难点】 重点：蛋白质提取和分离的基本原理 难点：蛋白质提取与分离的实验操作（凝胶色谱操作）过程 【知识链接】 1.血红蛋白存在于何种细胞？其特性和作用分别是什么？ 2.为何不选用鸡血做实验材料？ 3.分离不同种类蛋白质的依据是什么？ 【自主学习内容一】基础知识（记忆） 1．凝胶色谱法：凝胶色谱法也称做，是根据分离蛋白质的有效方法。凝胶实际上是一些由构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时的速度不同，相对分子质量较小的蛋白质由于能够路程较，移动速度；而相对分子质量较大的的蛋白质，只能在移动，路程，移动速度。 2．缓冲液缓冲液通常是由1～2种缓冲剂（如NaHCO3、（NH4）2SO4）溶解于水中配制而成；其作用是。 3．电泳：电泳是指电泳利用了待分离样品中各分子以及，使带电分子产生不同的，从而实现样品中各种分子的分离。两种常用的电泳方法是和。在测定蛋白质分子量时通常使用，其中SDS的作用是，。蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率取决于它以及等因素。 【自主学习内容二】实验操作（凝胶色谱法） 1.蛋白质的提取和分离一般分四步：、、和。 2.样品处理 （1）红细胞的洗涤：洗涤红细胞的目的是采集的血样要及时通过采用的方法使红液分层，用胶头吸管吸出上层透明的黄色
，将下层红细胞倒入烧杯，再加入，缓慢搅拌低速离心，如此重复三次，直到，表明红细胞忆洗涤干净。注意：离心转速及离心时间不能过长，否则，达不到分离效果。 （2）血红蛋白的释放：原理是当外界溶液浓度低于细胞内液浓度时，细胞，红细胞由于没有的保护，而，释放出血红蛋白；使用的试剂是。 （3）分离血红蛋白溶液：将搅拌好的混合溶液离心后，试管中的溶液分为4层。第一层为无色透明的，第2层为白色薄层固体，是，第3层是红色透明的液体，这是，第4层是红细胞破碎物沉淀物（其他杂质，呈色）。将试管中的液体用滤纸过滤，除去，于分液漏斗中静置片刻后，分出层的红色透明液体。 （4）透析：取2mL的血红蛋白溶液装入中，将透析袋放入盛有300mL的物质量浓度为中（pH为），透析12h。透析可以去除样品中的杂质，或用于。 3．凝胶色谱操作 首先要；第二步是，因为，因此装柱前需要根据色谱柱的内体积计算所需的凝胶量。在装填凝胶柱时，不得有，避免影响分离效果；第三步是。【合作探究】 1．凝胶色谱分离蛋白质的原理是怎样的？ 2.根据凝胶色谱分离的原理分析，在装填凝胶时要紧密、均匀的原因。