人表皮生长因子的纯化及浓度在线检测
人表皮生长因子的纯化及浓度在线检测
童望宇1, * ， 姚善泾2, *
， 朱自强2
（1上海市华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海市 200237；
2浙江省杭州市浙江大学化学工程与生物工程系，杭州 310027）
摘要 在分离纯化快速开拓系统（?KTA explorer 100）中用凝胶（Sephadex G-50 superfine ）纯化人表皮生长因子，并在优化条件下对其纯化过程中的hEGF 进行定量测定。用标准人表皮生长因子经离子交换柱、蛋白质扫描分析系统及SDS-PAGE 间相互印证，结果表明：在优化条件下，可得到在SDS-PAGE 上与标准样品hEGF 一样清晰的单条带，其产品纯度高于94%，回收率高于36%；其检测的灵敏度可达1μg/ml 。该法不仅对人表皮生长因子的在线检测行之有效，而且对其它蛋白质纯化的在线检测也具有参考价值。
关键词 人表皮生长因子，层析，检测，纯化
中图分类号 TQ0333 Q819
引言
人表皮生长因子（human epidermal growth factor ，hEGF ）是由53个氨基酸残基所组成
的多肽生长因子，分子量约为6200D [1]。人表皮生长因子具有在体内刺激皮肤组织、角膜、肺、气管上皮组织的生长繁殖及抑制胃酸分泌等多种生物学作用，因而可应用于外科伤口的愈合及溃疡病的治疗等医疗领域[2-5]。自1975年Cohen 等人[1]从尿液中首先分离纯化得到人表皮生长因子以来，有关研究的进展很快，除了继续研究从天然来源中分离纯化以外，基于基因工程菌发酵生产也已问世[6-7]，但是不管是从天然资源，还是来自基因工程菌发酵液，hEGF 的浓度总是偏低，需要经过较长时间的分离和纯化流程，才能得到相对较纯的产品。为了设计一个高效和可控的纯化过程，hEGF 的在线分析和检测就成为非常重要。
目前，hEGF 的定量检测方法主要有放射免疫分析（Radio immuno-assay, RIA ）[4]、放
射受体分析(Radio receptor assay, RRA) [8]、酶联免疫吸附分析（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA ）[9]、酶免疫分析（Enzyme immunoassay, EIA ）[10]、反相HPLC [11]和免疫荧光技术[12]等。以上各种方法均有其特点和不同的条件局限性，但均难用于过程的在线检测。
我们在使用?KTA explorer 100进行蛋白质纯化时发现，该系统通过本身带有的软件，
不仅可以与各种层析柱结合进行多种生物质的分离流程研究，而且还可以比较精确地通过出峰面积表示蛋白质量的多少。利用这种定量关系，就为定量确定生物质含量提供了基础。以此为依据，对hEGF 这个比较难于定量与分离的多肽，进行了凝胶层析中在线检测与纯化工艺的优化，达到了纯化与在线定量检测的目的。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
联系人：童望宇，姚善泾， E-mail: tongwy@https://www.360docs.net/doc/425268014.html, , yaosj@https://www.360docs.net/doc/425268014.html,
第一作者：童望宇，男，40岁，博士
* 国家自然科学基金资助项目(批准号：29736180)
_______________________________________________________________________________https://www.360docs.net/doc/425268014.html,
分离纯化快速开拓系统（?KTA explorer 100）、进样柱（Superloop TM 50）、层析柱（XK 16/20）、离子交换预装柱（RESOURCE Q6）、凝胶（Sephadex G-50 superfine）、蛋白质扫描分析系统（Image Master VDS Video Documentation System）购自Amersham Pharmacia Biotech AB. Sweden；电泳仪（Mini VE complete）购自Amersham Pharmacia Biotech Inc., USA；hEGF 标准品购自Pepro Tech EC Ltd, England。其它试剂均为市售的分析纯试剂。
平衡液：pH 7.0，0.02M的磷酸缓冲液（PBS）；
洗脱液：pH7.0 PBS+2 M NaCl的磷酸盐缓冲液。
1.2 样品的预处理
将含有hEGF的发酵液[13]经冷冻离心机进行离心（8000rpm，10min, 4 0C），收集上清液，取该上清液1000 ml，用1M浓度的盐酸小心调发酵液的pH于4.6左右，缓慢加入210 g硫酸铵（硫酸铵饱和度为：35%），搅拌溶解，4 0C下静置4～24小时，至沉淀彻底，人表皮生长因子进入沉淀中。虹吸去除700～850 ml上清液，剩余的150～300 ml于4 0C条件下8000 rpm、20 min离心，收集沉淀。用100 ml 平衡液搅拌溶解沉淀，形成悬浊液，4 0C下静置4～24小时，待溶解充分后，于4 0C下8000 rpm、20 min离心，收集上清液，于4 0C 下保存备用。
1.3 hEGF的定性分析
hEGF的定性分析用SDS-PAGE电泳[14]。
1.4 hEGF的定量分析
1.4.1 实验原理
在蛋白质及多肽分子中，酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等芳香氨基酸的苯环含有共轭双键，因而具有吸收紫外线的性质，吸收高峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量呈正比例关系（m =f ×A，式中m为蛋白质的含量，f 为比例系数，A为峰面积），由此可用作总蛋白质及被纯化蛋白质的定量测定。
1.4.2 实验设计
对待测浓度的目标蛋白，可先用标准样品在相同层析条件下确定其保留值，再用其它方法给予验证，为定量分析提供基础。不同样品的组成各不相同，实验中应尽可能优化层析条件，扩大目标产物与其它组成的保留值差距以提高检测的准确性。由于?KTA explorer 100能够提供相应正确的峰面积与蛋白质定量关系，因此在hEGF的纯化中，将其与凝胶柱结合，并在优化条件下，进行hEGF的纯化与在线检测，然后再配以SDS-PAGE及蛋白质扫描分析系统的进一步印证。使得分析的可信度大为提高。
2 结果与讨论
2.1 hEGF标准曲线的制定
为考察?KTA explorer 100紫外检测仪的灵敏度及紫外吸收峰面积与蛋白质浓度的关系。实验选用了RESOURCE Q6强阴离子预装柱，用Unicorn3.0所推荐的模板[15]经空柱(bypass)流程对多种标准蛋白质进行了多浓度水平反复验证，并用牛血清白蛋白标准品共进行了5次μg/ml级重复测定，其标准偏差为0.9948。在此基础上，采用了浓度为2μg/ml hEGF 的标准hEGF，分别用1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0ml的体积进样，测试其峰面积与进样量的关系，结果如图1、2所示。
A r e a (m A U ×m l )Standard hEGF (μg)
图 1 标准hEGF 层析图 图 2 hEGF 标准曲线
Figure 1 Chromatographic profile of standatrd hEGF Figure 2 Plot of peak area vs standard hEGF
由图1可见：随着进样量的增加，出峰明显变宽，峰面积增加，其峰面积的具体数据由
?KTA explorer 100自动给出，由此作成了由图2所示的峰面积与样品含量关系图，作为标准曲线。其关系可由下述方程给出：
4127.00971.2?=C A （1）
式中A 表示峰面积（mAU*ml ），C 表示hEGF 含量（μg ）。该方程的方差R 2为0.9995，表
明标准hEGF 样品的峰面积与样品含量呈良好的线性关系。
2.2 人表皮生长因子标准曲线的延伸
为进一步检测样品中较高浓度的hEGF 与峰面积的关系，扩大上述方程的使用范围，我
们加大了被测样品的量，这里采用了我们自己纯化的hEGF （简称纯化hEGF ）样品，使图2的标准曲线得以延伸，结果如图3所示。
A r e a (m A U ×m l )Purified hEGF (μg)
图 3 纯化的hEGF 曲线
Figure 3 Plot of peak area vs purified hEGF
图3结果表明，在hEGF 的浓度放大了10倍以后，hEGF 含量与峰面积的曲线不仅保持
了良好的线性关系，而且还很好地与图2相连接。这种良好的线性就可为在较广的浓度范围内实现在线检测hEGF 提供依据。相应的回归方程是：
6989.10916.2?=C A
（2）
用上述方程回归，其方差R 2为0.9997，说明hEGF 样品的峰面积与样品含量呈良好的
线性关系。但值得注意的是，方程（2）中的系数与方程（1）的系数稍有差别，主要体现在方程的截距上，也就是说，用方程（2）计算低浓度时，误差会稍大些。但是用方程（1）外推到浓度较高时，精确度就相对较高。
2.3 人表皮生长因子的纯化及浓度在线检测
在实验中，我们发现发酵液中目标产物hEGF的分子量(~6200D)与其它蛋白质的最小分子量（~18000D）相距约10000D以上，故用凝胶Sephadex G-50 superfine进行hEGF的纯化。优化后的纯化条件为：柱床高度=16 cm，线性流速=6 cm/h，进样量=1 ml。此条件下的层析结果如图4所示。
图 4 样品纯化过程中的Sephadex G-50凝胶层析图
Figure 4 Gel chromatographic profile of the supernatant being purified
从图4可见，在两个大峰群中间所夹的一个小峰，其保留体积与我们在相同条件下所测到的标准hEGF样品的保留体积相一致，再用SDS－PAGE分析后，确认该小峰就是hEGF 峰。与其它杂质峰基本分离。经?KTA explorer 100检测，1 ml样品中总峰面积为11996 mAU*ml，hEGF峰面积为327 mAU*ml，计算得hEGF峰面积比值为2.73%，此即该盐析液中hEGF的含量（%）。由标准曲线回归方程（1）可得，hEGF的绝对含量为156.13 μg，于是其浓度就为156.13 μg/ml；如果用方程（2）计算，绝对含量为157.15 μg，浓度为157.15 μg/ml。由此可见，两方程的计算结果基本一致。故标准曲线可从20μg延伸至200μg不会造成很大误差。
2.4 纯化结果验证
上述纯化后的收集液经冷冻干燥后，得到了白色的hEGF粉末。随后我们对该产品用阴离子交换预装柱（RESOURCE Q6）在其推荐操作条件下进行了分析，得到了如图5-A所示的结果，同时也对标准品进行了检测，以作对比之用，结果如图5-B所示。
A （A purified hEGF）
B（Standard hEGF）
图 5 纯化hEGF与标准hEGF的RESOURCE Q6阴离子交换层析图
Figure 5 Anion exchange chromatographic profile of hEGF
?KTA explorer 100自动分析记录图5-A的hEGF保留体积与纯度（峰面积%）分别为25.17 ml和94.87%，图5-B中hEGF的保留体积与纯度（峰面积%）分别为24.99ml和94.88%，两者的纯度相当，说明采用了在线检测方法后，纯化产品的效果良好。事实上，由于过程中能随时给出产品的浓度与纯化条件的关系，使hEGF纯化过程的优化方便不少。
为进一步验证实验结果，用上面纯化得到的hEGF产品与标准hEGF样品经SDS-PAGE 检测，并将其图谱用蛋白质扫描分析系统（Image Master VDS Video Documentation System）进行分析。结果表明，两种hEGF样品在SDS-PAGE中，都呈现出一条色带（图6）；且用蛋白质扫描分析系统测得其纯化产品的纯度为94.68%，与用阴离子交换预装柱测得的纯度(94.87%)基本一致。
图6 纯化hEGF和标准hEGF的SDS-PAGE图谱
Figure 6 SDS-PAGE of purified and standard hEGF
Lanes 1 and 2 hEGF purified under the optimal conditions
Lane S Standard hEGF
3 结语
?KTA explorer 100结合层析柱可以同时实现hEGF纯化与在线定量检测的目标，其检测的准确度随目标产物浓度的提高而提高。这种在线检测的纯化方法，具有过程集成化的优势，如果再进行适当的放大，有希望将其用在hEGF较大规模的生产。这种具有检测方便、操作简单、条件温和、纯化周期短、纯度高及回收率大等优点的流程，对纯化其它高附加值的生物质同样具有参考价值。
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ON-LINE MEASUREMENT AND PURIFICATION IN GEL CHROMATOGRAPHY FOR
HUMAN EPIDERMAL GROWTH FACTOR
Tong Wangyu1,* Yao Shanjing2, * Zhu Ziqiang2
(1 State Key Laboratory of Bioreactor Engineering, East China University of Science and
Technology, Shanghai 200237, P.R.China; 2 Department of Chemical and Biochemical Engineering, Zhejiang University, Hangzhou 310027, P.R.China)
Abstract The on-line measurement and purification of recombinant human epidermal growth factor were carried out on ?KTA explorer 100 coupling with gel chromatographic columns. A high quality product of hEGF was purified by a gel chromatography with Sephadex G-50 superfine under the optimums. The purity of hEGF purified was more than 94% and the yield of hEGF was higher than 36% confirmed by anion exchange chromatography with Resource Q6 and an Image Master VDS Video Documentation System. SDS-PAGE analysis of the hEGF purified demonstrated a single band corresponding with the standard sample of hEGF. The sensitivity of the method with a higher veracity was up to 1μg/ml. The results indicated that the new method not only was practicable for the on-line measurement of purification of hEGF but also was valuable for the on-line measurement of separation of other proteins.
Key words chromatography, human epidermal growth factor, measurement, purification
* Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 29736180).
To whom correspondence should be addressed.
千伏变电站工程检测试验项目计划
工程检测试验项目计划报审表 工程名称：************110kV变电站编号：SZLB6-SG01-001
**************110kV变电站工程检测试验项目计划 施工单位（章） 年月日
**************110kV变电站 检测试验项目计划 审批页 批准：年月日审核：年月日编写：年月日
批准：（项目总工）年月日审核：（项目质检员）年月日编写：（项目技术员）年月日
目录 1工程概况 2编制目的 3编制依据 4 检测试验组织及职责 5试验项目检测计划表
一、工程概况 1、新建********************************************110kV变电站工程位于位于******************************************************************************* **************站区地形开阔平坦，自然地面高程约米（1985年国家高程系），现为建设用地。 站区围墙内占地面积2806m2，合亩。本工程主要建筑物及构筑物包括：综合配电楼、事故油池一座、化粪池池一座、深井一座。其中综合配电楼为框架一层；本工程建筑物及构筑物主要技术经济指标：综合配电楼建筑面积约342m2 ，进站道路约12m，宽度。 2、工程规模： 主变压器：远期装设3台50MV A主变压器，本期安装1台； 无功补偿：远期每台主变10kV侧装设1组（+）Mvar并联电容器，本期#1主变10kV 侧装设1组（+）Mvar并联电容器组。 110kV出线：远期出线4回，本期1回； 10kV出线：远期出线30回，本期10回。 二、编制目的 确保达标投产，实现国家电网公司优质工程、行业优质工程；建筑和安装工程质量达到规定要求，严格控制中间环节争创国家级优质工程，全面实现工程质量目标。 三、编制依据 主要设备技术文件和新产品的工艺性试验资料 《建筑工程施工质量验收统一标准》GB50300-2013 《国网公司施工项目部标准化管理手册》2018版变电部分 《110k～1000kV变电（换流）站土建工程施工质量验收及评定规程》（Q/GDW 1183-2012）《输变电工程检测试验项目清单》 四、检测试验组织及职责 1检验试验的组织及职责 项目经理：负责进行项目检验试验工作的组织协调。
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再塑生命的人 微课教学设计
7 再塑生命的人 第一课时 一、走进新课 同学们，世界是美丽的，我们可以感觉到阳光的色彩斑斓，鸟鸣的婉转动人。但还有一种人，他们生活在没有色彩，没有声音的世界里，对于他们来说，能生存下来已需要足够的勇气，而要出类拔萃，有所成就，那简直便是一个奇迹。今天，我们便要走进一个奇迹，让我们共同走进海伦·凯勒的心灵世界。（板书文题、作者） 二、预习检测 1．交流课前搜集到的作者的资料 2．自由朗读课文，概括主要内容及文章的中心思想。 （课文主要叙述了莎莉文老师教“我”识字、认识各种事物的过程，赞扬了莎莉文老师高超的教育艺术，表达了“我”对莎莉文老师由衷的赞美和感激之情。） 三、走进文本，整体感知 1．学生自由读课文，准备复述课文内容： （要求用自己的话，能够引用原文的尽量引用原文，能概括主要事件。） 2．本文主要写了莎莉文老师对“我”做了哪些事情？ 1）莎莉文老师与“我”第一次亲密接触； 2）给“我”洋娃娃，教“我”拼写doll； 3）教“我”拼写简单单词； 4）教“我”认识和理解“水”的含义； 5）教“我”比较复杂的单词。 3．这些事表现了作者怎样的生活经历？表达了作者怎样的感情？ 这些事表现了作者求知的热望，以及艰辛而愉快的生活经历，更表达了作者对莎莉文老师无比的敬爱和感激，这种感情在《假如给我三天光明》中表达的更加明确。 四、速读课文，理清文章结构 通过阅读课文，同学们觉得应该分为几个部分？归纳各部分的段意。 层次结构： 第（1—5）段写“我”与莎莉文老师的第一次见面。 第（6—8）段写莎莉文老师教“我”拼写单词。 第（9—13）段写莎莉文老师向“我”开启了知识的大门，“我”有了求知的欲望。五、课堂小结 同学们，是莎莉文无私的爱重塑了海伦·凯勒的生命。爱，确是人类的宝贵精神财富，当它升华时，可以奔流不息，可以惊天动地。海伦说：“我要把别人眼睛所看见的光明当作我的光明，别人耳朵听见的音乐当成我的交响乐，别人嘴角的微笑当作我的幸福。”再塑后海伦的生命如歌，所延续传承的也是一个涵义丰富的爱的故事。 六、布置作业 1、抄写词语。 2、感受海伦·凯勒不屈不挠的奋斗精神和莎莉文老师的无私奉献精神,写一篇读后感。 1
2018年试验检测人员培训计划
2018年试验检测人员培训计划
xxxxx工地试验室2018年 培 训 学 习 计 划 xxxxxx工地试验室
2018年试验检测人员培训计划 试验室培训工作主要是针对试验员的工作问题进行培训，其主要目的是在于提高试验员的业务水平，提高对检测工作的认识。加强操作人员的技术等级培训，不断提高操作人员的技术理论水平，业务水平。其具体培训计划安排如下： 一、培训目标 为进一步加强对试验员的培训管理，提高业务水平，使每个从业人员更好的将理论知识运用到实际操作中，在母体试验室的指导下制定培训小组，坚持培训人员、培训内容、培训时间落实原则。 二、培训范围 试验室全体人员 三、培训计划及内容 ㈠理论学习 1、应学习相关国家标准、规范，试验室相关文件等。 ①检测、检验标准和规范； ②试验室程序文件、质量手册； ③各项检验、检测的原始记录及各试验报告的填写； ④试验室各种仪器、设备的操作规程。 2、明确各员工岗位责任制。 ①质量负责人应对各项检验、检测工作进行监督检查，严把质量
关； ②技术负责人应对取样和试验的各个环节进行指导，发现问题立即上报； ③提升个人科学文化水平，增强员工整体文化素质。 ㈡实践操作 1.由试验室主任、技术负责人、质量负责人带领试验员按照规范进行与混凝土有关的各种试验（砂、石、水泥、粉煤灰及外加剂）。 2.实践操作应严格执行试验仪器设备操作规程（压力机、振动台、筛分仪、负压筛等）。
四、培训计划表 月份培 训 形 式 培训 内容 培 训 地 点 培 训 时 间 培训方 法 培训目标 2018.03.15 内部 培训 质量手册、 程序文件、 作业指导书 办公 室 1课 时 讲授法 了解和熟悉试验检测各项程序、流程及方 法 2018.04.10 内部 培训 砼施工质量 控制管理办 法 办公 室 1课 时 讲授法、现场演 示配合实际操 作法、练习法 认识和熟悉混凝土配合比调控及管理制度 2018.05.20 内部 培训 公路工程集 料试验规程 办公 室 1课 时 讲授法、现场演 示配合实际操 作法、练习法 认识和熟悉公路工程集料的试验检测项 目：筛分、含水量、含泥量、泥块含量的 要求和步骤 2018.06.15 内部 培训 公路工程集 料试验规程 办公 室 1课 时 讲授法、现场演 示配合实际操 作法、练习法 认识和熟悉公路工程集料的试验检测项 目：针片状、压碎值、密度、表观密度、 吸水率的要求和步骤 2018.07.10 内部 培训 混凝土试块 取样、制作 及力学指标 办公 室 1课 时 讲授法、现场演 示配合实际操 作法、练习法 了解混凝土试件的取样及试件尺寸；熟悉 试件的制作及养护条件； 掌握试件各项力学性指标的试验方法及步 骤。 2018.08.25 内部 培训 无机结合料 稳定材料 办公 室 1课 时 讲授法、现场演 示配合实际操 作法、练习法 会配置各种标准溶液，了解滴定法原理
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岐江河环境整治工程二期- 东明桥至长江桥段都市生态滨水景观带及游艇会码头景观带工程 工 程 项 目 试 验 计 划 河南三建建设集团有限公司 二零一六年三月
录目 1 ................................................ 一、工程概况 .1 ................................................ 二、编制依据2 ................................... 三、试验检测规划及资源配备.............................................................................................. 23.1 试验规划 23.2 资源配备.............................................................................................. 3 四、主要试验项目检测计 划 ..................................... 3 五、试验管 理 ................................................ 5.1试验现场管理....................................................................................... 3 5.2 材料源管理.......................................................................................... 3 见证取样试验管理............................................................................... 45.3试验检测结果...................................................................................... 45.4
重组人表皮生长因子对鼻黏膜结构的影响
重组人表皮生长因子对鼻黏膜结构的影响 【摘要】目的：探讨重组人表皮生长因子（rhEGF）对鼻黏膜结构的影响。方法：对21例（42侧）经鼻内窥镜全鼻窦开放术患者进行同体对照实验，一侧直接将人表皮生长因子喷于纱条填于术后窦口鼻道复合体处，另一侧为止血纱条填塞术腔2日后对照，在用药后3天、1周、2周取双侧鼻黏膜进行透视电镜下观察鼻黏膜结构。结果：用药后3天上皮排列不整，细胞间连接松散，表层纤毛紊乱，大量脱落，1周时上皮、表层纤毛明显修复，2周时黏膜基本正常。结论：重组人表皮生长因子对鼻黏膜结构的损坏较小并可促其迅速恢复。 【关键词】重组人表皮生长因子；鼻黏膜；鼻内镜 重组人表皮生长因子（rhEGF）是可调节多类细胞生长的多肽，是极其重要的血管生成因子[1]。其通过控制具有调节上皮化、血管生成和胶原代谢的细胞增生和移行而帮助创面愈合[2]。rhEGF调节障碍将会导致修复延迟，乃至瘢痕的形成[3]。该药物是否会对鼻黏膜产生刺激或损害，以及损害的程度和损害后是否可逆，是该药物在鼻科临床能否应用的关键，本观察则是该药物对鼻黏膜结构的影响情况。 1 资料和方法 1.1 病例选择：选择双侧鼻息肉全鼻窦炎患者21例，男13例，女8例，年龄21~53岁，平均36.28岁，病程1~10年，患者均为初次手术并无明显变态反应病史，每例患者双侧鼻腔病变基本相同，按照鼻息肉慢性鼻窦炎诊疗评定标准（1997，海口）分类：Ⅱ型2期9例，Ⅱ型3期12例。手术前均作副鼻窦CT 扫描。 1.2 药物及使用方法：药品为重组人表皮生长因子（rhEGF），由深圳华生元基因工程发展有限公司提供（批号：19991201）。 21例均采用局麻鼻内窥镜下鼻息肉摘除全鼻窦开放术，术式为Messerklinger 术式，从前至后切除筛窦，再将上颌窦自然口扩大，酌情处理额窦和蝶窦，切除病变组织时尽量保留正常和病变较轻的黏膜，有利于术后功能的恢复，窦口鼻道复合体处经肾上腺素棉片压迫止血后，随机一侧直接将rhEGF喷于纱条填于该处，另一侧为止血纱条填塞术腔2日后对照，12例左侧做对照组，9例右侧做对照组，rhEGF隔日一换，共4~5次后按术后常规清洁处理。 1.3 组织病理学观察：术后用药3天、1周、2周取双侧窦口鼻道复合体处1
《再塑生命的人》三阶课堂训练参考答案与解析
《再塑生命的人》三阶课堂训练 A组：基础通关组 1.阅读下面的文字，完成（1）—（4）题。 朋友，你可曾在茫茫大雾中航行过，在雾中神情紧张地jià驶着一条大船，小心翼翼地缓慢地向对岸驶去?你的心砰砰直跳，唯恐意外发生。在接受教育之前，我正像大雾中的航船，既没有指南针也没有探测仪，无从知道海港已经临近。我心里无声地呼喊着∶"光明!光明!快给我光明!"恰恰在此时，爱的光明照到了我的身上。 （1）给加点字注音，根据拼音写出相应的汉字。 小心翼（）翼海港（）jià（）驶 （2）文段中有错别字的一个词是"____"，这个词的正确写法是"____"。 （3）文段中"唯恐"的"唯"的意思是____，"小心翼翼"的意思是______ （4）画线句子主要运用了的修辞手法 【参考答案】 （1）驾yìg?ng （2）砰砰怦怦 （3）单单;只形容举动十分谨慎，丝毫不敢疏忽 （4）比喻 2.下面是小明同学写的《再塑生命的人》的读后感，但其中一句有语病，一句标点符号使用不恰当，请找出来并修改。 ①在我读完《再塑生命的人》这篇课文后，被坚强的海伦深深地感动了。 ②我看不到海伦丝毫的恐惧、凄凉和悲哀，看到的是她那光明的内心世界、坚强的意志和对生命的爱。③我不禁感慨——只要你的心是坚强的，那么哪怕你永远生活在无边的黑暗中，你也能感受到满世界灿烂的阳光。 （1）第句有语病，修改意见∶ （2）第句标点符号使用不恰当，将改为。 【参考答案】 （1）①删去"在" （2）③——改为： 3.教师节快到了，请你仿照下面这条短信的修辞手法，给你的老师拟写一条教 师节短信。 例∶您是一把伞，为我遮风挡雨;您是一盏灯，为我照亮前程。衷心祝福您，我敬爱的老师! 【参考答案】 示例一∶您如春风拂过，催百花竞放;您如艳阳普照，使万木葱茏。辛勤的园丁，衷心祝福您! 示例二∶岁月在您脸上镌刻下苍老的年轮，您的身旁却崛起一片郁郁葱葱的森林。感谢恩师
EGF表皮生长因子
表皮生长因子(EGF) 系于公元1962年由意大利女科学家Mantalcini教授和美国博士Cohen在实验中发现的，并因而获得1986年诺贝尔生 理奬与医学奬，是在小老鼠的颔下腺发现了一种可以促使新生小鼠眼睑早开，牙齿早萌的活性成分，而将这活性成分加入培养皮肤表皮细胞的基质后，发现可以促进皮肤表皮细胞的生长，因此将此活性成分命名为EGF(Epidermal Growth Factor)中文为"表皮细胞生长因子，并证实这种活性蛋白具有免疫和自我调节的能力，并能加速表皮组织的新陈代谢，更新已老死及受损的细胞，原来人体器官和发肤的自我修补功能是由一组称为细胞因子(cytokines)的活性蛋白互相协调而成，而EGF是其中的一种因子。主要作用是促进皮肤细胞的增殖、分化，加速新陈代谢，提高新细胞在皮肤中所占的比例，从而使皮肤变得年轻，微量的EGF可赋予衰老细胞全新的生命力，促使各种受损皮肤修复和再生，它还能刺激细胞外一些大分子（如透明质酸、糖蛋白等）的合成与分泌，滋润皮肤，是决定肌肤活力和健康的源泉。EGF又被称为"美丽因子"，人体EGF的含量决定着皮肤年轻的程度。 表皮细胞生长因子(EGF)是由53个氨基酸组成的小分子多 肽，分子量约6000道顿，分子内有三对二硫键结构，因此对酸、热等物理化学因素均很稳定。生长因子是一种蛋白质，主要作用是与细胞表面的接受器结合后，刺激细胞产生一连串的细胞增殖与分化，正常细胞要增殖非有生长因子的刺激不可，皮肤的细胞需要生长因子的刺激来加速更新与再生。EGF是一个相当特殊的3D结构，主要的动作是刺激纤维母细胞上的接受器，结合后，开始制造合成各类纤维和细胞间基质，它的重点在激化细胞的新生、活化纤维母细胞，也就
工程材料检验试验计划专项方案定稿版
工程材料检验试验计划 专项方案 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】
某项目 材料检验试验 施 工 方 案 编制： 审核： 批准： 某建设集团有限公司 某某工程项目部编制
目录 一、编制依据 (2) 二、工程概况 (2) 三、检验试验管理 (3) 四、检验试验计划 (4)
一、编制依据 1、设计施工图。 2、工程施工组织设计 3、《建筑工程施工质量验收统一标准》（GB50300-2013） 4、《混凝土结构工程施工质量验收规范》（GB50666-2015） 5、《建筑地基基础工程施工质量验收规范》（GB50202-2002） 6、《地下防水工程质量验收规范》（GB50208-2011） 7、《钢筋混凝土用热轧带肋钢筋》（GB1499-2008） 8、《混凝土质量控制标准》（GB50164-2011） 9、《普通混凝土力学性能试验方法标准》（GB/T50081-2002） 10、《钢筋焊接及验收规范》（JGJ18-2012） 11、《钢筋焊接接头试验方法标准》（JGJ/T27-2001） 12、《钢筋机械连接通用技术规程》（JGJ107-2010） 13、《砌体工程施工质量验收规范》（GB50203-2011） 14、《通风与空调工程施工质量验收规范》（GB50243-2002） 15、《建筑节能工程施工质量验收规范》（GB50411-2007）
16、《建筑电气工程施工质量验收规范》（GB50303-2002） 17、《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》（GB50242-2002） 18、《给排水管道工程施工及验收规范》(GB50268-2008) 19、其他现行规范、规定 二、工程概况 本工程为某市某小区，位于河北省某市某地，由某市某房地产开发有限公司开发，河北博科工程咨询有限公司设计，某市泰信达工程项目管理有限公司监理，主要有地上住宅，地下一层车库组成。
重组人表皮生长因子凝胶(酵母) (新增)
重组人表皮生长因子凝胶（酵母） Chongzu Ren Biaopi Shengzhangyinzi Ningjiao (Jiaomu) Recombinant Human Epidermal Growth Factor Gel（Yeast） 本品系由高效表达人表皮生长因子基因的酵母，经发酵、分离和高度纯化后,加入凝胶基质制成。含适宜稳定剂，防腐剂，不含抗生素。 1 基本要求 生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。 2 制造 2.1 工程菌菌种 2.1.1 名称及来源 重组人表皮生长因子工程菌株，系由带有人工合成的人表皮生长因子基因的DNA片段整合到酵母菌染色体基因组中构建而成。 2.1.2 种子批的建立 应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 2.1.3 菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 2.1. 3.1 划种BMG1琼脂平板 应呈典型酵母菌菌落形态，无其他杂菌生长。 2.1. 3.2 染色镜检 在光学显微镜下观察，应形状规则，用次甲兰染色，无死亡细胞。 2.1. 3.3 筛选标志检查 应符合该基因表型特征。 2.1. 3.4 人表皮生长因子表达量 在摇床中培养，应不低于原始菌种的表达量。 2.1. 3.5 人表皮生长因子基因稳定性检查 涂BMG1琼脂平板，挑选至少50个克隆，用PCR检测人表皮生长因子基因，阳性率应不低于95％。 2.2 原液 2.2.1 种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（可含适量抗生素）中培养，供发酵罐接种用。 2.2.2 发酵用培养基 采用适宜的不含任何抗生素的培养基。 2.2.3 种子液接种及发酵培养
10 再塑生命的人课堂作业
10 《再塑生命的人》课堂作业 班级：姓名： 1、注音、书写汉字 绽．开（）搓捻．（）小心yìyì（）惭槐．（）觅．食（）繁衍．（）花团锦cù（）预兆．（）迁xǐ（）穿梭．（）煎熬．（）冥．思（） 2．下列书写正确的一项是（） A．惭愧困惑不解搓捻不可名状 B．迁徒繁花似锦觅食疲倦不堪 C．企盼美不胜收截然花团锦族 D．繁衍恍然大悟绽开风云凸变 3．下面句子没有语病的一项是（） A．王刚和李明在路上遇见了，他告诉他昨天他买了一套《初三总复习》。 B．对提高教学质量问题，大家广泛地交换了意见。 C．江边垂柳，袅娜多姿，令许多游人不禁停下脚步驻足观赏。 D．我们坚决执行《教育法》，认真学习《教育法》。 4．选出下列句子中成语使用正确的一项（） A．面对这道难题，他漫不经心 ．．．．地做，最后还是没有解出来。 B．这两本成语词典各得其所 ．．．．，一本重视溯源，一本例句丰富，特色却很鲜明。 C．这位老革命家的正直、善良与真挚的爱国情怀，让每一位参观者受益匪浅 ．．．．。 D．他们同学三年，关系一直很好，两人相敬如宾 ．．．．，互相尊重。 5．下列对本文主旨的理解，恰当的一项是（） A．莎莉文小姐是一位充满智慧的老师。 B．一位好的老师能决定自己的成长道路，甚至影响自己的一生。 C．莎莉文小姐把爱和欢乐带给了“我”，给“我”的生活增添了绚丽的色彩。 D．由于莎莉文小姐的教育，“我”最终成功地掌握了学习语言的钥匙，也最终成为了一个作家。 6．下面句子标点符号使用有误的一项是（） A．朋友，你可曾在茫茫大雾中航行过？在雾中神情紧张地驾驶着一条大船，小心翼翼地缓慢地向对岸驶去。 B．我心里无声地呼喊着：“光明！光明！快给我光明！” C．她就是那个来对我启示世间的真理、给我深切的爱的人——安妮·莎莉文老师。 D．那一天，我学会了不少字，譬如“父亲”，“母亲”，“妹妹”，“老师” 等。
试验检测人员培训计划
工地试验室问题及分析 1?前言 工地试验室承担了工程项目大量的试验检测工作，大量反映工程建设质量的数据均是通过工 地试验检测得来的。然而，工地试验检测往往受到工程资金、进度、施工形象要求等方面的影响而不能很好地开展，甚至有的工程项目工地试验室形同虚设，试验检测工作流于形式。 2工地试验检测普遍存在的问题 近年来，工地试验检测工作存在的问题得到了国家相关部门的高度重视。2007年的全国工作会议明确提出了“严禁试验数据造假”的工作要求，交通部决定在全国范围内组织开展为期 3年以保证数据真实性为重点的公路、水运工程试验检测专项治理活动，明确治理的重点是试验检测数据及报告的造假行为和试验检测人员无证上岗现象等。实际上，工地试验检测数据造假现象具有一定的普遍性。 2.1人员 工地试验室应依据合同文件配置相应的试验检测人员，并得到公路质检站批准。 2.1.1试验检测人员基本组成 （1）正规学校毕业的本科、专科大学生 （2）具有一定知识水平的高中毕业生 （3 ）其他人员 2.1.2试验检测人员的资质要求 （1 ）持有交通部颁发的试验检测工程师资格证书 （2）持有各省公路质检站颁发的试验检测员资格证书 （3）持有各省公路质检站颁发有限资格试验检测员资格证书 2.1.3工地试验室存在问题 人员持证率严重不足 2.2试验检测人员登记 工地试验室的试验检测人员应为母体试验检测机构的注册人员，大部分工地试验室的试验检测人员没有在母体检测机构进行注册。 2.3试验检测人员数量 工地试验室的试验检测人员数量必须依据合同要求进行配置，不许擅自减少试验检测人员数量。 许多工地试验室配置的试验检测人员数量低于合同要求。 2.34试验检测人员变更 2.4.1试验检测人员变更必须执行合同文件或工程项目相关文件。 2.4.2试验检测人员变更要求按照同等资质原则。 2.4.3试验室主任变更必须报公里质检站批复备案。 2.4.4试验工程师变更必须报项目管理部门批复备案。 2.4.5试验员变更一般须报中心试验室批复。
项目工程试验检测计划
试验检测计划
审批页 编制人： 审核人： 审批人： 监理单位：
目录 第一章编制依据2 第二章工程简况3 第三章现场实验管理保证体系及管理措施4 1.建立实验管理台帐5 2.实验质量保证措施5 3.资料管理措施5 4.实验安全管理5 5.实验检测设备及工具管理6 第四章实验工程检测的内容、方法、频率 (7) （一）路基填土 (7) （二）原材料 (7) （四）水质分析实验 (11) （五）水泥混凝土、水泥砂浆、水泥净浆配合比 (11) （六）水泥混凝土检验 (13) （七）砂浆、水泥净浆抗压强度检验 (15) （八）混凝土实体检测 (15) （九）地基承载力检验 (16) （十）路面质量检测 (17) 第五章实验检测工程与检测计划 (20) （一）原材料、成品、半成品及构配件综合检验计划表 (21) （二）路基、路面工程实验检测工程计划表 (24) （三）给排水工程实验检测工程计划表 (29) 一、编制依据 依据施工合同、施工设计图纸、地勘资料、施工组织设计及相关资料。 依据国家、住房和城乡建设部、交通部部相关规范、标准、规程。 公路路基施工技术规范(JTJ 033-95) 钢结构工程施工质量验收规范（GB50205-2001) 给水排水管道工程施工技术及验收规范(GB 50268-976) 混凝土结构工程施工质量验收规范（GB 50204-2015） 地下防水工程质量验收规范（GB50208-2011) 公路土工实验规程(JTG E40-2007) 公路工程水泥及水泥混凝土实验规程(JTG E30-2005) 公路工程石料实验规程（JTJ054-94) 公路工程集料实验规程(JTG E42-2005) 公路路基路面现场测试规程(JTG E60-2008)
易孚(重组人表皮生长因子凝胶)
易孚(重组人表皮生长因子凝胶) 【药品名称】 商品名称：易孚 通用名称：重组人表皮生长因子凝胶 英文名称：Recombinant Human Epidermal Growth Factor Gel 【成份】 重组人表皮生长因子。 【适应症】 本品适用于皮肤烧烫伤创面(浅Π度至深Ⅱ度烧烫伤创面)、残余创面、供皮区创面及慢性溃疡创面的治疗。 【用法用量】 常规清创后，用生理氯化钠溶液清洗创面，取本品适量，均匀涂于患处。需要包扎者，同时将本品均匀涂于适当大小的内层消毒纱布，覆盖于创面，常规包扎，一日一次或遵医嘱。推荐剂量为每lOOcm2创面使用本品10g(以凝胶重量计)。 【不良反应】 未见严重不良反应。 【禁忌】 对本品过敏者 【注意事项】 本品为无菌包装，用后请即旋紧管口，以防污染。本品无抗菌作用，但不会增加创面感染机会。对感染创面，在进行创面清创的前提下，可考虑联合使用抗菌药物控制感染。对于各种慢性创面，如溃疡、褥疮等，在应用本品前，应先行彻底清创去除坏死组织，有利于本品与
创面肉牙组织的充分接触，提高疗效。当本品的外观、性状发生改变，如出现霉变、变质等现象时，应禁止使用。 【特殊人群用药】 儿童注意事项： 无禁忌。 妊娠与哺乳期注意事项： 尚不明确。 老人注意事项： 无禁忌。 【药物相互作用】 本品遇酒精、碘酒等，可能会使EGF变性，而使活性降低。因此使用酒精、碘酒等消毒后，应再用生理氯化钠溶液清洗创面，然后使用本品。 【药理作用】 1.药理作用：本品为外用重组人表皮生长因子(rhEGF)。可促进动物皮肤创面组织修复过程中的DNA、RNA和羟脯氨酸的合成，加速创面肉芽组织的生成和上皮细胞的增殖，从而缩短创面的愈合时间。 2.毒理研究：(1)重复给药毒性：家兔背部破损皮肤涂抹本品(6g凝胶/次，每日1次，浓度200μg/g，相当于临床用药浓度的20倍)，连续36天，给药局部皮肤及各脏器均未见明显毒性反应。本品较长时间局部应用对愈合后创面的远期影响不清楚。 (2)遗传毒性和生殖毒性：尚无动物研究资料。(3)致癌性：研究文献提示，EGF有促进某些肿瘤细胞生长的作用，但也有一些动物和体外研究文献提示，EGF作为一种具有多种功能的细胞因子，可以抑制某些肿瘤细胞的生长。对于烧伤患者(尤其是较大面积烧伤时)局部较长时间使用本品的影响尚不清楚。临床药代动力学研究结果提示患者烧伤面积达5～10％时，
《 再塑生命的人》教案 公开课 获奖教学设计
10再塑生命的人 一、导入新课 一个一岁半就失聪失明、生活在无声无语无光的世界里、连爸爸妈妈都不能认识的孩子，她几乎丧失了生活的能力和勇气，她坠入了一个黑暗而沉寂的世界，陷入了痛苦的深渊。但她顽强地生活了下来，考进了著名的哈佛大学，长大后又成为一名作家，用自己的生花妙笔激励别人给人生存的勇气。这一奇迹的创造，当然与她自身的努力分不开；但在那段困难的日子里，她能走出心灵的障碍，重新塑造生命，却不能不归功于一位伟大的女性——她的老师莎莉文女士。今天我们要学习海伦·凯勒的《再塑生命的人》。 二、教学新课 目标导学一：初读课文，整体感知 1．理一理文章的写作思路。 明确：第一部分(1—5)：写“我”初识莎莉文老师。 第二部分(6—13)：莎莉文老师用她特有的教育方式开启了“我”智慧和情感的大门。 2．课文写了哪几件事？请你用简洁的语言加以概括。 明确：主要写了三件事： (1)老师教“我”认识具体事物。 (2)老师教“我”认识和理解大自然。 (3)老师教“我”理解“爱”的含义。 3．找出文中表示“我”感情变化的词语。 明确：安静地等待、陌生、自豪、模仿、争执、发脾气、恍然大悟、求知的欲望油然而生。 4．找出文章的纲领句。 明确：她就是那个来对我启示世间的真理、给我深切的爱的人——安妮·莎莉文老师。目标导学二：理解内容，探究主旨 1．莎莉文老师是怎样教育海伦认识具体事物的？试举例说明。 明确：(1)莎莉文老师作为一个陌生人第一次搂抱海伦，有意识地给海伦玩具，并在她手上拼写“doll”。这种用手指拼字的方式使海伦很感兴趣，在不断模仿老师的做法后，她也学会了拼字。 (2)莎莉文让海伦一只手接触水流，然后在海伦另一只手手心写出“water”这个词，引导海伦从能触摸的东西中获得思维的提升，使她马上领悟到“水”这个词指的是流过手上的凉凉的东西。从此，海伦开始大量认识具体事物。 2．如何理解“水唤醒了我的灵魂，并给予我光明、希望、快乐和自由”这句话。 明确：学会“水”之后，作者理解了语言文字跟宇宙万物的对应联系，每一样事物都有独特的生命内容，互相不可替代。这不仅激起她的求知欲望，而且使她明白了对任何事物都要有爱心。这是她思想的一个大飞跃，所以她有这样的评价。
2018年试验检测人员培训计划
F o r p e r s o n a l u s e o n l y i n s t u d y a n d r e s a r c h;n o t f r c o m me r c i a l u s e F o r p e r s o n a l u s e o n l y i n s t u d y a n d r e s a r c h;n o t f r c o m me r c i a l u s e xxxxx工地试验室2018年 培 训 学 习
计 划 xxxxxx工地试验室 2018年试验检测人员培训计划
试验室培训工作主要是针对试验员的工作问题进行培训，其主要目的是在于提高试验员的业务水平，提高对检测工作的认识。加强操作人员的技术等级培训，不断提高操作人员的技术理论水平，业务水平。其具体培训计划安排如下： 一、培训目标 为进一步加强对试验员的培训管理，提高业务水平，使每个从业人员更好的将理论知识运用到实际操作中，在母体试验室的指导下制定培训小组，坚持培训人员、培训内容、培训时间落实原则。 二、培训范围 试验室全体人员 三、培训计划及内容 ㈠理论学习 1、应学习相关国家标准、规范，试验室相关文件等。
①检测、检验标准和规范； ②试验室程序文件、质量手册； ③各项检验、检测的原始记录及各试验报告的填写； ④试验室各种仪器、设备的操作规程。 2、明确各员工岗位责任制。 ①质量负责人应对各项检验、检测工作进行监督检查，严把质量关； ②技术负责人应对取样和试验的各个环节进行指导，发现问题立即上报； ③提升个人科学文化水平，增强员工整体文化素质。 ㈡实践操作 1.由试验室主任、技术负责人、质量负责人带领试验员按照规范
大鼠表皮生长因子(EGF)说明书
大鼠表皮生长因子(EGF)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中表皮生长因子(EGF)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的大鼠表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入表皮生长因子(EGF)再与HRP标记抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的表皮生长因子(EGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠表皮生长因子(EGF)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：5400ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
工程试验检测计划
工程试验检测计划
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前海自贸大厦公共空间部分 精装修工程试验检测计划 编制人：朱贵 审核人：刘耀军 批准人：崔峥 深圳市奇信建设集团股份有限公司 2017年7月
目录 1.编制依据 (5) 2.工程概况 (5) 3.本工程进行试验检测预控的材料及相关项目 (6) 4.试验检测准备工作 (6) 5.试验检测计划 (7) 6.建立试验检测管理台帐 (10) 7.试验检测质量保证措施 (10)
试验检测计划 1.编制依据： 1.1、前海自贸大厦公共空间部分室内精装修工程施工图纸。 1.2、前海自贸大厦公共空间部分室内精装修工程施工组织设计。 1.3、建筑工程资料管理规程：DB11/T695-2009。 2.工程概况： 2.1基本概况 序号项目内容 1 工程名称前海自贸大厦公共空间部分精装修工程 2 工程地址深圳市前海深港现代服务业合作区妈湾片19单元 03街坊01地块 3 建筑面积装修面积约28000㎡ 4 建设单位前海开发区投资控股有限公司 5 设计单位深圳市杰恩创意设计股份有限公司 6 总包单位中建三局 7 监理单位深圳市京圳工程咨询有限公司 8 施工单位深圳市奇信建设集团股份有限公司 9 合同质量目标合格 10 合同工期计划开工日期：2017年5月20日 计划竣工日期：2017年12月30日 总工期215天 2.2 建筑设计概况 序号项目内容 1 建筑功能办公型 2 建筑面积81405㎡
再塑生命人---课堂实录
《再塑生命的人》教学实录 一、导入新课 师：同学们，这节课我和大家一起走进《再塑生命的人》，了解认识一位创造了生命奇迹的女子——海伦?凯勒。（教师板书课题） 师：请大家打开书快速默读课文。（学生自主默读课文） 二、整体感知 师：请同学们来谈一下你的阅读感受。 生1：我感受到了沙利文老师的和蔼。 生2：我感受到了海伦?凯勒的孤独和无奈。 生3：我感受到了沙利文对海伦?凯勒的重要性。 生4：我感受到了海伦?凯勒在无声世界里的寂寞。 师：最后她还寂寞吗？她是一种什么精神状态？ 生：最终有老师的陪伴，海伦?凯勒也不寂寞。 生：海伦?凯勒学会了写字，心中便充满了喜悦，期盼着明天。 三、感悟海伦·凯勒对生命的理解 师：你说的真好，请大家找出海伦?凯勒关于生命“喜悦、企盼、快乐”的句子。你找的那一句呢？ 生1：这些字使整个世界在我面前变得花团锦簇，美不胜收。记得那个美好的夜晚，我独自躺在床上，心中充满了喜悦，企盼着新的一天快些来到。 师：有个字读的不够准确，应该是“qǐ pàn”，要读出“企盼”的感情来。您来读。 生2：记得那个美好的夜晚，我独自躺在床上，心中充满喜悦，企盼着新的一天快些来到。 师：还找到了哪些生命喜悦的句子？ 生3：那些经历使我的求知的欲望油然而生，啊，原来宇宙万物都各有名称，每个名称都能启发我新的思想。我开始以充满欣喜的眼光看待每一样东西。 师：你说你读出了什么啊？你感受到了什么？ 生1：我感到作者有了浓厚的学习的兴趣。 师：这才是成长的重要的力量。 生2：我读的是这篇课文最后一句话，“啊！世界上还有比我更幸福的孩子吗？” 师：很好，相信你是幸福的孩子。 生3：我找到的是，水唤醒了我的灵魂，并给予我光明、希望、快乐和自由。 师：同学们，老师把这些句子精简了一下，给出了停顿，请一位男同学和一位女同学有感情的朗读一下。那位声音洪亮的男同学，你来读。这位女同学，你来。 （音乐起，男女生朗诵）
试验检测项目计划
一、工程概况 郑州豫能热电工程项目总体规划为2×660MW供热机组，本次工程建设2×660MW机组。本工程由郑州豫能热电有限公司投资建设。 建设单位：郑州豫能热电有限公司 设计单位：中国机械第六设计院 监理单位：上海斯耐迪工程咨询有限公司 质量监督单位：“河南省”电力建设工程质量监督中心站 试验检测单位：河南省豫电土建试验检测中心 勘察单位：河南省电力勘测设计院 本电厂厂址位于荥阳市贾峪镇鲁庄村，本标段施工主要包括检修楼及辅助办公楼。检修楼和辅助办公楼总建筑面积5106.04㎡，采用框架结构，钢筋混凝土独立基础，建筑物主体各三层，建筑面层女儿墙最高1.5m。 二、编制依据 （1）技术规程、规范 《电力建设施工质量验收及评定标准》（土建工程篇DL/T5210.1-2012） 《电力工程地基处理技术规程》（DL/T5024-2005） 《混凝土结构工程施工质量验收规范》（GB50204-2015） 《混凝土外加剂应用技术规范》（GBJ50119-2013） 《建筑工程施工质量验收统一标准》（GB50300-2013） 《钢筋机械连接通用技术规程》（JGJ107-2010） 《工程测量规范》（GB50026-2007） 《混凝土泵送施工技术规程》（JGJ/T10-2011） 《建筑地基基础工程施工质量验收规范》（GB50202-2002） 《砌体工程施工质量验收规范》（GB50203-2015） 《钢结构工程施工质量验收规范》（GB50205-2001） 《屋面工程施工质量验收规范》（GB50207-2012） 《建筑地面工程施工质量验收规范》（GB50209-2010） 《建筑装饰装修工程质量验收规范》（GB50210-2001） 《建筑给水排水及采暖工程施工质量验收规范》（GB50242-2002） 《通风与空调工程施工质量验收规范》（GB50243-2002） 《建筑电气工程施工质量验收规范》（GB50303-2002）
重组人表皮生长因子生物学活性测定法
重组人表皮生长因子生物学活性测定法 （细胞增殖法/MTT比色法） 本法系依据重组人表皮生长因子对小鼠胚胎成纤维细胞（Balb/c3T3细胞）的生长具有刺激作用，Balb/c3T3细胞的生长状况因重组人表皮生长因子生物学活性的不同而异，以此检测重组人表皮生长因子的生物学活性。 试剂： （1）RPMI 1640培养液： RPMI 1640培养基粉末1袋（规格为1L），加水溶解并稀释到1000ml，加青霉素105U/ml（1ml），链霉素105mg/ml(1ml),再加碳酸氢钠2.1g，溶解后，混匀，除菌过滤，4℃保存。 （2）维持培养液: 量取新生牛血清4ml，加RPMI 1640培养液到1000ml。 （3）完全培养液： 量取新生牛血清100ml，加RPMI 1640培养液到1000ml。 （4）PBS： 量取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.44g、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解并稀释到1000ml的溶液，经121℃，15分钟灭菌。
(5)噻唑蓝（MTT）溶液： 取MTT粉末0.10g，加PBS20ml使溶解，经0.22um滤膜过滤除菌。4℃避光保存。 标准品沉沦的制备： 取理组人表皮生长因子标准品按说明书复溶后，用维持培养液稀释至每1ml 含50 IU。在96孔细胞培养板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个浓度做2个孔。以上操作在无菌条件下进行。 供试品溶液的制备： 将供试品按标示量复溶后，用维持培养液稀释成每1ml约含50 IU。在96孔板中，做4倍系列稀释，共8个稀释度，每个浓度做2个孔。以上操作在无菌条件下进行。 测定方法： Balb/c3T3细胞株用完全培养液于37℃、5%二氧化碳培养，控制细胞浓度为每1ml含1.0 X 105 --5.0 X 106个细胞，传代后24—36小时用于生物学活性测定。弃去培养瓶中的培养液，消化和收集细胞用完全培养液配成每1ml含5.0 X 104 --8.0 X 104个细胞的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100ul，于37℃、5%二氧化碳条件下培养。24小时后换成维持培养液。置37℃、5%二氧化碳培