不同生境中稀有放线菌的研究进展
放线菌筛选的一般方法
放线菌筛选的一般方法 摘要：放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中（主要是链霉菌），其数量仅次于细菌。放线菌是革兰氏阳性细菌。因菌落呈放线状而的得名。常以孢子或菌丝状态存在，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖。由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。 关键词：放线菌筛选微生物 1 放线菌的情况 放线菌（Actinobacillus）是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。是一群革兰氏阳性、高(G+C)mol%含量(>55%)的细菌。放线菌因菌落呈放线状而的得名。 放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素（B12）和有机酸等。弗兰克菌属（Frankia）为非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的内共生菌。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。因此，放线菌与人类关系密切，在医药工业上有重要意义。 放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。放线菌只是
牛放线菌病的防治方法
牛放线菌病的防治方法 牛放线菌病是牛的一种慢性化脓性传染病，病原为牛放线菌和林氏放线杆菌，以病牛的头、颈、上下颌和舌发生放线菌肿为主要病理特征，在牛换牙、口腔黏膜或皮肤发生损伤时最易感染发病。本病初期不易察觉，而在牛咀嚼困难、营养不良后才被发现，常会造成重大经济损失。 放线菌病是人畜共患的一种慢性非接触性传染病，牛最为常见。病原为牛放线菌和林氏放线杆菌，其临诊病理特征主要为病牛头部硬组织（骨）和软组织形成放线菌肿。该肿胀通常进展较慢，一般看到骨体增厚甚至出现咀嚼困难时才被发现，治疗不及时常会造成重大经济损失。 一、病原 本病可由多种细菌引起，主要是牛放线菌和林氏放线杆菌。其他细菌如衣氏放线菌、金黄色葡萄球菌、化脓杆菌等也参与致病作用[1]。 1.牛放线菌主要侵害骨骼，其形态和染色特性随生长环境而异，在培养基上为杆状或棒状，而在病变组织中则形成肉眼可见的大小如别针头、外观似硫磺颗粒、颜色呈黄白色的小菌块，质地柔软或坚硬。菌块镜检呈菊花状，中心部为菌丝体，呈丝球状，革兰氏染色阳性；外围为放射状的棒状体，革兰氏染色阴性。 2.林氏放线杆菌主要侵害软组织器官，在组织中菌块的结构和牛放线菌相似，但中心不呈丝球状，而是许多细小的短杆菌，大小和巴氏杆菌接近；周围也有放射状的棒状体，但比牛放线菌的短，革兰氏染色均为阴性。 上述两种细菌虽在形态学和生物学方面有所不同，但在动物体内引起的病变相似。 二、流行病学 本病主要感染2-5岁幼龄牛，呈散发。在牛换牙、口腔黏膜或皮肤发生损伤时最易感染发病。病原菌在自然界分布甚广，常存在于被污染的土壤、饲料和饮水中，或寄生于牛的口腔和上呼吸道黏膜，有时也会存在于禾本科植物（小麦、大麦、青稞等）的穗芒上，使牛在采食时因芒刺扎破口腔和齿龈黏膜而感染[2]。因此，放牧于低湿地的动物较易感染本病，而且病变常见于口腔周围的组织器官。
放线菌分类-完整
一、酸微菌亚纲(Acidimicrobidae) 1 酸微菌目(Acidimicrobiales) 酸微菌亚目(Acidimicrobineae) 酸微菌科(Acidimicrobiaceae) 酸微菌属(Acidimicrobium) 典型种：氧化亚铁微酸菌（Acdimicrobium ferrooxidans） 二、红色杆菌亚纲(Rubrobacteridae) 1 红色杆菌目(Rubrobacterales) 红色杆菌亚目(Rubrobacterineae) 红色杆菌科(Rubrobacteraceae) 红色杆菌属(Rubrobacter) 2 土壤红杆菌目（Solirubrobacterales） 土壤红杆菌科（Solirubrobacteraceae） 扩展杆菌科（Patulibacteraceae） 康奈斯氏杆菌科（Conexibacteraceae）
康奈斯氏杆菌属(Conexibacter) 3 嗜热油菌目（Thermoleophilales） 嗜热油菌科（Thermoleophilacceae） 嗜热油菌属（Thermoleophilum） 三、红蝽杆菌亚纲（Coriobacteride） 1 红蝽杆菌目（Coriobacteriales） 红蝽杆菌科（Coriobacteriaceae） 红蝽杆菌属（Coriobacterium） 阿托波菌属（Atopobium） 扣林氏菌属（Collinsella） 神秘杆菌属(Cryptobacterium) 反硝化杆菌属(Denitrobacterium) 伊格尔兹氏菌属(Eggerthella) 欧陆森氏菌属(Olsenella) 斯莱克氏菌属(Slackia) 非消化糖杆菌属(Asccharobacter） 肠杆菌属（Enterorhabdus） 戈登氏杆菌属（Gordonibacter） 类伊格尔兹氏菌属（Paraeggerthella） 四、腈基降解菌亚纲（Nitriliruptoride）
奶牛放线菌病的诊断与治疗
奶牛放线菌病的治疗 摘要 奶牛放线菌病是由放线菌属的牛放线菌所致的一种亚急性、慢性增生性传染病。其特征是牛的面骨和颌骨组织增生．形成特殊的肉芽肿――放线菌肿。被侵害的骨骼呈骨质疏松性骨质炎、化脓、坏死。牛的颌骨是主要被侵害对象，常常首先侵害颌骨，使颌骨肿大，所以此病又称为大颌病。牛放线菌引起的一种人畜共患病.病原体存在于污染的土壤、饲料和饮水中,寄生于动物的口腔和上呼吸道中。2015年1月份辉山乳业青山牛场发现多例，临床上以面部、下颌部和颈部出现硬肿隆起，且肿胀部进展缓慢为主要症状的病牛，经实验室检查，诊断为奶牛放线菌病，经过一段时间的治疗，有一定好转。 关键词：奶牛；放线菌；诊断；治疗
目录 摘要.................................................................... I 目录................................................................... II 1 病历资料. (1) 1.1 病牛简介 (1) 1.2 既往病史 (1) 1.3 临床症状 (1) 2 实验室诊断 (1) 2.1 显微镜镜检 (1) 2.2 镜检结果 (2) 2.3 诊断结果 (2) 3 治疗 (2) 3.1治疗方法 (2) 3.1.1抗生素疗法： (2) 4 体会 (3) 参考文献 (4) 致谢................................................... 错误！未定义书签。
奶牛放线菌病的诊断与治疗 牛放线菌是牛骨骼的放线菌病的主要原因，是一种不运动，不形成芽胞的杆菌，有长成菌丝的倾向。此病主要侵害牛科动物，以2～5岁最为易感。受感染牛只常见下颌骨部肿大，界限不明显。肿胀部病初疼痛，晚期无痛觉。病牛呼吸、吞咽和咀嚼均感困难，后期奶牛产奶量下降，消瘦甚快。2015年1月，我场兽医人员在巡舍时发现数头患有下颌肿大症状的病牛经临床症状和实验室检验，确诊为奶牛放线菌病。具体情况如下。 1 病历资料 1.1 病牛简介 2015年1月我场兽医于娟姗奶牛群中发现数头下颌肿大病症的奶牛，经一段时间的临床观察，这些奶牛均有不同程度的消瘦，肿胀部位逐渐增大，触诊时初期有骨硬感，其后逐渐变软。病牛患病初期采食量正常其后逐渐减少，采食量少、咀嚼吞咽困难，机体消瘦直至卧地不起。 1.2 既往病史 据调查统计我场自投产以来并未出现类似症状。 1.3 临床症状 经临床观察记录。病牛多在颌骨部有一硬肿隆起，界限不明显，不可移动。有一例在下颌骨外侧肿大，蔓延到整个颈部，外形增大，明显变形。有的是侵害下颌骨内侧，周围组织肿胀，蔓延到下颌骨之间的颚下触诊时有疼痛，食欲和体温正常。有的因病菌侵害咽喉、颌骨等处发生肿胀的同时，舌苔肿胀，口张开，舌伸出口外，从口中流出透明、粘稠、黄色液体，带有腐臭味。侵害咽喉，咽喉部发硬，出现咳嗽，呼吸变粗，体温升高，口鼻有粘液流出，食团不易下咽。当病变部位发展到一定时期，肿胀部化脓破溃，流出浓汁，形成瘘管，有血色浓汁和血液伴发流出，迁延不愈。慢性病牛虽有食欲，由于吃草困难，常处于饥饿状态。日渐消瘦，经长期慢性消耗，病程长期不愈。 2 实验室诊断 2.1 显微镜镜检 除临床症状表现外，取病牛肿胀部位病料镜检。取病变部位的血液或浓汁定量，用氯化钠溶液稀释约5倍，用力摇晃2min，静置是指沉淀后倾去上清液，再重复以上操作
土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定
土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定 一、培养基 1 放线菌培养基 高氏一号液体培养基：可溶性淀粉20g，KNO3 1g，K2HPO4 0.5g，NaCl 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，H2O 1000mL，pH 7.2～7.4。 黄豆粉固体培养基：大豆粉20g（沸水煮30min，过滤保留滤液），蔗糖10g，可溶性淀粉5g，蛋白胨2g，酵母膏2g，NaCl 2g，CaCO31g，MgSO4·7H2O 0.5g，KH2PO40.5g，琼脂15g，H2O 1000mL，初始pH7.0。 放线菌发酵培养基：大豆粉20g（沸水煮30min，纱布过滤后保留滤液），蔗糖10g，可溶性淀粉5g，蛋白胨2g，酵母膏2g，NaCl2g，CaCO31g，MgSO4·7H2O 0.5g，KH2PO40.5g，H2O 1000mL，初始pH7.0。 2 放线菌形态及培养特征研究用培养基 察氏培养基（ISP1）：蔗糖30g，NaNO32.0g，K2HPO41.0g，MgSO4.7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，H2O 1000mL，pH 7.2～7.4。 麦芽膏－酵母膏培养基(ISP2)：酵母膏4.0g，葡萄糖4.0g，麦芽膏10.0g，微量盐溶液1mL，H2O 1000mL，琼脂20g，pH 7.0～7.4。 燕麦片培养基（ISP3）：燕麦片20g（加1000mL 水煮20 分钟，然后用离心或过滤得澄清滤液并补足1000mL），微量盐溶液1mL，pH 7.2（微量盐溶液：FeSO4.7H2O 0.1g，MnCl2.4H2O 0.1g，ZnSO4.7H2O 0.1g，H2O 100mL）。 甘油-天门冬酰胺培养基（ISP5）：L-天门冬酰胺1.0g，甘油10.0g，K2HPO41g，微量盐溶液1mL，琼脂20g，pH 7.0～7.4。 无机盐淀粉培养基：可溶性淀粉10g，K2HPO41.0g，MgSO4.7H2O 1.0g，CaCO32.0g，(NH4)2SO42.0g，微量盐溶液1mL，H2O 1000mL，pH 7.4。 马铃薯培养基：去皮马铃薯块200g（1000 毫升水，80℃煮１小时，然后离心或过滤得上清液），葡萄糖20g，pH 7.4。 营养琼脂培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5.0g，H2O 1000mL，pH 7.4（亦可补加葡萄糖10g）。 葡萄糖-天门冬酰胺培养基：葡萄糖10g，L-天门冬酰胺0.5g，K2HPO40.5g，牛肉膏2g，H2O 1000mL，pH 7.2。 3 测定生理生化特性供试培养基 淀粉水解测定培养基：可溶性淀粉10g，K2HPO45.65g，NaCl 0.5g，KNO31g，MgCO31g，琼脂15g，H2O 1000mL，pH 7.2~7.4。 纤维素水解培养基：MgSO4.7H2O 0.5g，NaCl 0.5g，K2HPO40.5g，KNO31g，H2O1000mL。滤纸条（5cm×0.8cm）灭菌20 分钟。（pH7.0～7.2） 明胶液化培养基：蛋白胨5g，葡萄糖20g，明胶200g，H2O 1000mL，明胶灭菌10min，pH7.0（灭菌3 次，每次20min，灭菌后立即浸入冷水中冷却。） 牛奶凝固与胨化培养基：脱脂牛奶1000mL，CaCO30.02g，pH 7.2~7.4，间歇灭菌三次（脱脂牛奶的制备：取新鲜牛奶，煮沸后冷却，经两次离心（3000r/min，10min）脱脂，除去上层油脂，即得脱脂牛奶）。 石蕊溶液配制：称取2.5g 石蕊浸泡在100ml 蒸馏水中过夜，使石蕊充分溶解，然后过滤备用。石蕊牛奶的制备：2.5％的石蕊液与脱脂牛奶以4：100（V/V）比例混合，牛奶呈紫丁香色，分装于试管中，灭菌备用。接种前抽检灭菌是否彻底。
放线菌形态的观察实验报告
山东大学实验报告2017年11月13日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：放线菌的形态观察姓名：丁志康 一、目的要求 ? 1.学习并初步掌握观察放线菌形态的基本方法。 ? 2.初步了解放线菌的形态特征。 二、基本原理 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能像空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。 有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。 在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持住放线菌自然生长状态下的形态特征。本试验介绍其中几种常用方法。 1.插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 2.玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。 3.印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等。方法简便、但形态特征可能有所改变。 （*本次试验采用插片法） 三、器材 1、菌种：青色链霉菌，弗氏链霉菌。 2、培养基：高氏I号培养基。 3、仪器及其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲， 石碳酸复红染液，显微镜等。
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集 1 目的 1.1 了解微生物分离和纯化的原理 1.2 掌握常用的分离纯化微生物的方法 2 原理 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 3 材料 3.1 培养基 淀粉琼脂培养基(高氏I号培养基)，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。 3.2 仪器或其它用具 取样铲、塑料袋、记号笔、 1．布点：按照土壤类型和作物种植品种分布，按土壤肥力高、中、低分别采样。一般150-300亩（不同地区可根据情况确定）采取一个耕层混合样，采样点以锯齿型或蛇型分布，要做到尽量均匀和随机。应用土壤底图确定采样地块和采样点，并在图上标出，确定调查采样路线和方案。 2．采样部位和深度：用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样0.5-1kg，在采样过程中，采取的混合样一般都大于该重量，所以要去掉部分样品，将所有采样点的样品摊在塑料布上，除去动植物残体、石砾等杂质，将大块的样品整碎，混匀，摊成园形，中间划十字分成四份，然后对角线去掉两份，若样品还多，将样品再混合均匀，再反复进行四分法，直至样品最终重量要求0.5-1公斤（试验用的样品2公斤）为止。如下示意图。一用取土器或锄头直接挖入耕层取样。每个点切取的土块宽度、厚度应 基本一致。装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤干燥，可在10～30cm处取样。 3．采样方法、数量：1)面积小，地势平坦，肥力均匀的田块，采用对角采样法。2)面积中等，地势平整，有些肥力差异的田块采用棋盘式采样法。3)面积大，地势又不平坦，肥力不匀的田块采用蛇型线采样法。土样由20个样点组成。样点分布范围不少于3亩（各地可根据情况确定）。每个点的取土深度及重量应均匀一致，土样上层和下层的比例也要相同。采样器应垂直于地面，入土至规定的深度。采样使用不锈钢、木、竹或塑料器具。样品处理、储存等过程不要接触金属器具和橡胶制品，以防污染。每个混合样品一般取1kg左右，如果采集样品太多，可用“四分法”弃去多余土壤。 4．样品编号和档案纪录：做好采样记录：土样编号、采样地点及经纬度、土壤名称、采样深度、采样日期、采样人等。
植物根际土壤中稀有放线菌的选择分离及生物活性-厦门大学学报
doi:10.6043/j.issn.0438-0479.201604056 鹭宁两地植物根际土壤中放线菌的多样性分析及抗菌等生物活性评估 王霏1，黎丹1，黄耀坚1，邓贤明1，吴莹莹2* （1.厦门大学生命科学学院天然产物源靶向药物国家地方联合工程实验室，福建厦门361005；2. 上海市农业科学院食用菌研究所，上海2 01406） 摘要：为探究不同地区植物根际土壤中可培养放线菌的多样性，筛选具有抗菌及抗肿瘤活性的药源菌株，本研究采用改良聚乳酸-明胶和海藻糖-脯氨酸两种培养基，选择分离采自厦门市翔安区香山风景区、南京中山植物园及南京玄武湖公园的17份植物根际土壤样品中的放线菌，并进行16S rRNA基因鉴定、系统发育分析及抗菌、抗肿瘤生物活性测定. 共分离到178株放线菌，其中链霉菌151株，其余27株为稀有放线菌，占总数的15.2%. 稀有放线菌包含9个属：微杆菌属（Microbacterium）、拟无枝菌酸菌属（Amycolatopsis）、韩国生工菌属（Kribbella）、野野村氏菌属（Nonomuraea）、小单孢菌属（Micromonospora）、链孢囊菌属（Streptosporangium）、拟孢囊菌属（Kibdelosporangium）、纤维微菌属（Cellulosimicrobium）和栖白蚁菌属（Isoptericola），包含2株新种. 对分离得到的所有放线菌进行液体小量发酵，并测定其发酵粗提物的抗菌和抗肿瘤活性. 结果显示，所测定的178株放线菌中，有82株对一种或多种指示菌表现出抗菌活性，占供测菌株的46.1%；有60株对一种或多种肿瘤细胞具有抑制作用，占供测菌株的33.7%. 研究结果表明植物根际土壤中放线菌资源丰富，其中抗菌和抗肿瘤活性显著的菌株可为后续微生物药物研发提供有利资源. 关键词：放线菌；选择分离；系统分析；活性测定 中图分类号：Q 939 文献标志码：A 放线菌是天然药物的重要来源，目前临床及农业上使用的抗生素中，超过60%是放线菌产生的[1]. 自1944年美国放线菌学家Walksman[2]从灰色链霉菌（Streptomyces griseus）中发现链霉素以来，大量新型抗生素被陆续从放线菌中分离得到，其中大部来自链霉菌，约占自然界来源抗生素总数的45%，另有16% 来自非链霉菌属的放线菌[3]. 随着对链霉菌资源的
放线菌的形态观察
【实验题目】 放线菌的形态观察 【实验目的】 1、掌握放线菌观察方法—插片法 2、了解放线菌的基本形态 【实验器材】 1、菌种： 青色链霉菌、弗氏链霉菌 2、培养基： 灭菌的高氏Ⅰ号琼脂培养基 3、仪器和用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、培养皿等 【实验原理】 1．高氏I号培养基 高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素，如高氏I号培养基中，需要加入FeSO4。 2．放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。在显微镜下直接观察时，气生菌丝在上层、基内菌丝在下层，且气生菌丝较暗，基内菌丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
图1：链霉菌一般形态和构造（模式图） 1-直形，交叉分枝 2-丛生，波曲 3-顶端形成大螺旋 4-松螺旋 5,6-紧螺旋 7-短而直，轮生 图2：链霉菌属孢子丝的主要类型 3．插片法 将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 1-盖玻片 2-琼脂层 图3 【实验内容及步骤】 1、高氏I号培养基的制备（100ml） 1)根据配方按照一定比例称取可溶性溶粉、及其他成分溶解。 2)待将所有药品溶解后，补充水分到所需的总体积，进行pH调节到7.2～7.4 3)材料灭菌：将所配溶液装在三角烧瓶中并加棉塞，棉塞外包一层牛皮纸，并用麻绳捆好，
放线菌属的分类及描述
放线菌手册汇编 放线菌科概述Actinomycetaceae 描述：放线菌科是由Buchanan 在1918年创立的该科的一般特征是：革兰氏染色阳性，分支，偏直条状，大多数成员是属于球杆状或者类球形。细胞长度一般小于0.5μm,平均长度在1.7μm 到2,9μm 之间。群落可能形成丝状体形成类似菌丝体的外形，但是大多数菌落不分枝，而且主要是白色或者灰色，有一些特殊的菌 落会形成深红色、淡红色、棕色、 粉色、淡粉或淡黄色。 现在该科根据16s RNA 的核酸序 列划分出包括五个不同的属： Actinomyces,Actionobaculum,Arca nobacterium,Aobiluncus,Aaribacul um. 放线霉菌属Actinomyces 该属包括的种有 A. bovis A. bowdenii A. canis A. cardiffensis A. catuli A. coleocanis A. dentalis A. denticolens A. europaeus Figure 1Scanning electron micrograph of Actinomyces israelii
A. funkei A. georgiae A. gerencseriae A. graevenitzii A. hongkongensis A. hordeovulneris A. howellii A. humiferus A. hyovaginalis A. israelii A. marimammalium A. meyeri A. naeslundii A. nasicola A. neuii A. odontolyticus A. oricola A. radicidentis A. radingae A. slackii A. streptomycini A. suimastitidis A. suis A. turicensis A. urogenitalis A. vaccimaxillae A. viscosus 一、Actinomyces bovis Actinomyces bovis is a gram-positive, rod-shaped bacterium of the genus Actinomyces. It is the causative agent of Lumpy jaw in cattle, and occasionally causes infections in humans History Actinomyces bovis was first described in 1877 by C. O. Harz, as a microbe within the jaw tissue of cows with lumpy jaw. It was thought to be identical to Actinomyces israelii until 1940, when D. Erikson showed these to be two separate organisms.
放线菌的观察
微生物学实验报告 题目：放线菌的形态观察 姓名：学号：年级班级：组别： 同组者：时间： 【实验器材】 1．.菌种：青色链霉菌( S. glaucus )，弗氏链霉菌( S. fradiae )。 2．培养基：高氏I号培养基。 3．仪器或其他用具：培养皿，盖玻片，载玻片，盖玻片，接种环，镊子，显微镜等。 【目的要求】 1．掌握配制合成培养基的一般方法。 2．学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。 3．初步了解放线菌的形态特征。 【基本原理】 1．高氏I号培养基 高氏I号培养基是用来培养和观察放线菌形态特征的合成培养基。此合成培养基的主要特点是含有多种化学成分已知的无机盐，这些无机盐可能相互作用而产生沉淀。因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分，甚至有时还需要将二种或多种成分分别灭菌，使用时再按比例混合。此外，合成培养基有的还要补加微量元素。 2．放线菌 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基内菌丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。有的放线菌只产生基内菌丝而无气生菌丝。 在显微镜下直接观察时，气生菌丝色暗，基内菌丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验应用插片法。 3．插片法 将放线菌接种在平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 【操作步骤】 1．配制高氏I号培养基（200mL）。 按配方称取高氏培养基各组分，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至200mL，调节pH，121℃灭菌20min。
放线菌的形态观察.
实验四放线菌的形态观察 一、目的要求 1. 学习并掌握观察放线菌形态的基本方法。 2. 了解放线菌的形态特征和繁殖方式。 二、基本原理 放线菌是由纤细的有分枝的菌丝构成，菌丝体为单细胞原核微生物。大多数放线菌的菌丝分化为营养菌丝和气生菌丝两部分。营养菌丝深入培养基中生长，气生菌丝则生长在培养基的表面，并向空中伸展。因此用普通方法制片，往往很难观察到放线菌的整体形态。必须采用适当的培养方法，以便将自然生长的放线菌直接置于显微镜下观察。通常采用的方法有玻璃纸培养法、插片法和印片法。 三、材料及器材 1. 菌种：细黄链霉菌(5406放线菌) 2. 溶液和试剂：吕氏美蓝染液 3. 仪器及其他用具：盖玻片，载玻片，擦镜纸，接种环，显微镜，剪刀，镊子，吸管，玻璃涂布棒，玻璃纸等。 四、方法与步骤 （一）插片法 1. 取一淀粉琼脂培养基平板，用接种环将菌种在琼脂平板上划线接种，然后用无菌镊子将灭菌的盖玻片以大约45°角插人琼脂内(插在接种线上，插片数量可根据需要而定。 2. 倒置培养，28℃，3～5天。 3. 用镊子小心取出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。 （二）玻璃纸法 1. 以无菌操作用镊子将已灭菌的小块玻璃纸片铺在琼脂淀粉培养基表面，
用无菌涂布棒将玻璃纸压平，使其紧贴在琼脂表面，不留气泡，每个平板可铺5～10块玻璃纸。 2. 用接种环挑取菌种斜面培养物在玻璃纸上划线接种。 3. 平板倒置，28℃，培养3～5天。 4. 镜检在载玻片上加一小滴水，用镊子小心取下玻璃纸片，菌面朝上放在玻片的水滴上，使玻璃纸平贴在玻片上，中间不要有气泡，直接镜检。 （三）印片法 用一洁净盖玻片，平放在培养皿中放线菌的培养物上，轻轻按压一下，取出盖玻片，将印有放线菌的一面朝下，放置在加有一滴美蓝染液的载玻片上，观察孢子丝和孢子。 五、实验作业及实验报告 （一）结果绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。 （二）思考题 1. 试比较3种培养和观察放线菌方法的优缺点。 2. 玻璃纸法是否适用于其他类群微生物的培养和观察?为什么? 3. 放线菌的菌体为何不易挑取？ 六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室
放线菌的分离
实验五：土壤中放线菌的分离 实验学时：5学时 实验类型：验证性实验、综合性实验 实验要求：必修 一、实验目的 从土壤中分离、纯化放线菌；初步掌握药用微生物的分离纯化方法和操作技术。了解不同生境条件中土壤放线菌的种类与数量。 二、实验内容 筛选放线菌永远是新抗生素研究的课题之一。迄今为止，已发现的抗生素约有80%来自于放线菌。土壤中放线菌最丰富，品种齐全。通常情况下，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣中可分离到大量的嗜热放线菌，从淡水和海洋环境中可分离到嗜碱性的和嗜酸性的菌种。土壤中含有的放线菌主要是链霉菌，人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌，如小单孢菌、游动放线菌、诺卡氏菌等，它们是生物活性物质重要的产生菌。但往往由于样品中稀有放线菌的数量太少，常规的分离方法很难得到。 对样品进行风干、干热处理、培养基添加重铬酸钾等方法可以减少细菌和真菌的数量，以提高放线菌的获得率。用干热和苯酚处理可减少链霉菌数量和比例的方法，可以分离得到更多种类的放线菌。 土壤中分离放线菌的方法很多，其中包括稀释法、弹土法、混土法和喷土法等，本实验主要采用稀释法来获得放线菌。 注：从土壤中分出的放线菌要进一步鉴别是否为抗生菌。首先应根据筛选目的确定试验模型，然后利用培养基平板进行拮抗性测定。常用的方法有琼脂块法和滤纸片法。其主要依据是扩散原理，即观察在抗生菌周围是否会出现明显的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度则表明了该菌株抗菌活性的强弱。 三、实验原理、方法和手段 原理一：稀释涂布平板法；如图1。 原理二：对样品进行风干、干热处理以减少细菌和真菌的数量； 原理三：向培养基添加适量的重铬酸钾能抑制其他细菌、真菌的生长，但不
放线菌
放线菌 放线菌是介于细菌与丝状真菌之间而又接近于细菌的一类丝状原核生物(有人认为它是细菌中的一类)，因菌落呈放射状而得名。1877年由合兹(Harz)首先发现一种寄生于牛体的厌气性牛型放线菌，从此便引用了Actinomyces这个属名，后来又发现了好气性腐生的种类，也叫放线菌。1984年，美国学者是瓦克斯曼(Waksman)把好气性腐生放线菌另立为链霉菌属，以与放线菌属相区别，而将厌气性寄生的种类仍保留原名--放线菌属(Actinomyces)。我国现在也采用此分类系统。苏联学者在拉西里尼科夫则将二者均归入放线菌属，这种系统只苏联和东欧一些国家采用。 放线菌多为腐生，少数寄生，与人类关系十分密切。腐生型在自然界物质循环中起着相当重要的作用，而寄生型可引起人、动物、植物的疾病。这些疾病可分为两大类，一类是放线菌病，由一些放线菌所引起，如马铃薯疮痂病、动物皮肤病、肺部感染、脑膜炎等；另一类为诺卡氏菌病，由诺卡氏菌引起的人畜疾病，如皮肤病、肺部感染、足菌病等。此外，放线菌具有特殊的土霉味，易使水和食品变味。有的能破坏棉毛织品、纸张等，给人类造成经济损失。只要掌握了有关放线菌的知识，充分了解其特性，就可控制、利用和改造它们，使之更好地为人类服务。 放线菌最突出的特性之一是能产生大量的、种类繁多的抗生素。人们在寻找、生产抗生素的过程中，逐步积累了有关放线菌的生态、形态、分类、生理特性及其代谢等方面的知识。据估计，全世界共发现4，000多种抗生素，其中绝大多数由放线菌产生。这是其他生物难以比拟的。抗生素是主要的化学疗剂，现在临床所用的抗生素种类占井冈霉素、庆丰霉素、我国用的菌肥"5406"也是由泾阳链霉菌制成；有的放线菌还用于生产维生素、酶制剂；此外，在甾体转化、石油脱蜡、烃类发酵、污水处理等方面也有应用。在理论研究中也有重要意义。因此，近30多年来，放线菌在微生物中特别受到重视。 一、放线菌的分布 放线菌常以孢子或菌丝状态极其广泛地存在于自然界。不论数量和种类，以土壤中最多。据测定，每克土壤可含数万乃至数百万个孢子，但受土壤性质、季节、作物种类等条件的影响。一般情况下，肥土较瘦土多，农田土比森林土多，中性或偏碱性土壤中也较多。土壤环境因子如有机质、水分、温度、通气状况等也影响其数量。它适宜在含水量较低的土壤内生长。而厩肥和堆肥中仅限于高温放线菌活动。放线菌所产生的代谢产物往往使土壤具有特殊的泥腥味。 河流和湖泊中，放线菌数量不多，大多为小单孢菌、游动放线菌和孢囊链霉菌，还有少数链霉菌。海洋中的放线菌多半来自土壤或生存在漂浮海面的藻体上。海水中还存在耐盐放线菌。 大气中也存在着大量的放线菌菌丝和孢子，它们并非原生的微生物区系，而是由于土壤、动植物、食品甚至衣物等表面均有大量的放线菌存在，由于它们耐干燥，常随尘埃、水滴，借助风力飞入大气所致。 食品上常常生长放线菌，尤其在比较干燥、温暖的条件下易于大量繁殖，使食品发出刺鼻的霉味。 健康动物，特别是反刍动物的肠道内有着大量的放线菌，它们可有是肠道内定居的微生物，堆肥中的高温放线菌可能来源于此。在动物和植物体表有大量的腐生性放线菌，偶尔也有寄生性放线菌存在。 了解放线菌的分布，对于进一步开发放线菌资源，发现和筛选新的抗生素，无疑是很重要的。
放线菌形态及菌落特征的观察.
实验三放线菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。 二、基本原理 和细菌的单染色一样，放线菌也可用石炭酸复红或碱性美蓝等染料着色后，在显微镜下观察其形态。放线菌的孢子丝形状和孢子排列情况是放线菌分类的重要依据，为了不打乱孢子的排列情况，常用印片染色法和胶带纸粘菌染色法进行制片观察。 放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。三、器材 1.活材料：放线菌培养物，酵母菌斜面培养物； 2.染色液：复红染色液（或结晶紫，美兰）； 3.器材：载玻片，胶带纸，小刀，接种环，吸水纸，擦镜纸，酒精灯，香柏油，乙醚-乙醇混合液，显微镜。 四、操作步骤 1．印片法：放线菌自然生长状态的观察 印片：取干净载玻片一块，用小刀切取放线菌培养体一块，放在载玻片上，用另一块载玻片对准菌块的气生菌丝轻轻按压，然后将载玻片垂直拿起。注意不要使培养体在玻片上滑动，否则会打乱孢子丝的自然形态； 微热固定：将印有放线菌的涂面朝上，通过酒精灯火焰2-3次加热固定；染色:石炭酸复红染色1min； 水洗：水洗后晾干； 镜检：先用低倍镜后用高倍镜，最后用油镜观察孢子丝、孢子的形态及孢子排列情况。 2．胶带纸法 粘菌：用胶带纸在放线菌培养体上粘取菌体，注意，压取时从菌落边顺着菌体生长方向，避免从菌落上面压取，以免取得的全是孢子。 染色：将粘有菌体的胶带纸压在事先准备好的滴油染液的载玻片上。将多余染色液用滤纸吸掉。 镜检：同上。 五、实验报告 绘图说明你所观察到的放线菌的形态特征。
主要的放线菌类型
主要的放线菌类型 放线菌是具有菌丝、以孢子进行繁殖、革兰氏染色阳性的一类原核微生物。因其具有分枝状菌丝、菌落形态与霉菌相似，过去曾认为放线菌是"介于细菌与真菌之间的微生物"。然而，用近代生物学技术所进行的研究结果表明，放线菌实际上是属于细菌范畴内的原核微生物，只不过其细胞形态为分枝状菌丝。从系统发育上看，放线菌（除高温放线菌外）与全部G+细菌一起同属于这一大分支中的高G+C/mol％（60-72）群。 多腔孢囊放线菌 这类放线菌包括嗜皮菌属、地嗜皮菌属和弗兰克氏菌属，其共同特征是：菌丝进行纵向和横向分裂，直接产生孢子，菌丝形成细胞群或孢子簇，细胞壁含有内消旋二氨基庚二酸(meso―Diaminopimelic acid,m―DAP)。嗜皮菌属（Dermatophilum）：菌丝在不同的平面上形成横隔，构成砖格状细胞堆，产生直角侧向分枝。寄生在哺乳动物体上，侵害未角质化的表皮，引起渗出性皮炎。弗兰克氏菌属（Frankia）：该属放线菌最显著的特征是能与非豆科木本植物共生固氮。在木麻黄和杨梅上可形成具有向上生长小根的根瘤；而在桤木、鼠李科和蔷薇科植物上形成的根瘤成簇，每簇由许多裂片状的小根瘤组成。在有隔、分枝的菌丝体顶端的泡囊柄上，形成泡囊，泡囊具有固氮功能。弗兰克氏菌属可利用的最适碳源是短链脂肪酸和有机酸，能利用吐温是该属独特的特征。 孢囊放线菌 这类放线菌以孢囊孢子进行繁殖为突出特征。孢子的分裂和排列方式用于区分不同的属。 （1）游动放线菌属（Actinoplanes） 孢囊球状、棒状或不规则状，产生圆形或近圆形具丛生鞭毛的游动孢子。多分布在腐烂植物和土壤中。 （2）指孢囊菌属（Dactylosporangium） 孢囊指状或棒状，其内可产生规则的球形孢子，排列成单一行列。16SrRNA 寡核苷酸编目表明该属在系统发育上与游动放线菌菌属、小单孢菌属的关系密切。 （3）游动单孢菌属（Planomonospora） 产生梭形、具周生鞭毛的游动孢子是该属的特征。多分布在温带和热带的土壤中。
放线菌分类-完整讲课教案
放线菌分类-完整
放线菌分类 一、酸微菌亚纲(Acidimicrobidae) 1 酸微菌目(Acidimicrobiales) 酸微菌亚目(Acidimicrobineae) 酸微菌科(Acidimicrobiaceae) 酸微菌属(Acidimicrobium) 典型种：氧化亚铁微酸菌（Acdimicrobium ferrooxidans） 二、红色杆菌亚纲(Rubrobacteridae) 1 红色杆菌目(Rubrobacterales) 红色杆菌亚目(Rubrobacterineae) 红色杆菌科(Rubrobacteraceae) 红色杆菌属(Rubrobacter) 2 土壤红杆菌目（Solirubrobacterales） 土壤红杆菌科（Solirubrobacteraceae） 扩展杆菌科（Patulibacteraceae）
康奈斯氏杆菌科（Conexibacteraceae） 康奈斯氏杆菌属(Conexibacter) 3 嗜热油菌目（Thermoleophilales） 嗜热油菌科（Thermoleophilacceae） 嗜热油菌属（Thermoleophilum） 三、红蝽杆菌亚纲（Coriobacteride） 1 红蝽杆菌目（Coriobacteriales） 红蝽杆菌科（Coriobacteriaceae） 红蝽杆菌属（Coriobacterium） 阿托波菌属（Atopobium） 扣林氏菌属（Collinsella） 神秘杆菌属(Cryptobacterium) 反硝化杆菌属(Denitrobacterium) 伊格尔兹氏菌属(Eggerthella) 欧陆森氏菌属(Olsenella) 斯莱克氏菌属(Slackia) 非消化糖杆菌属(Asccharobacter） 肠杆菌属（Enterorhabdus） 戈登氏杆菌属（Gordonibacter） 类伊格尔兹氏菌属（Paraeggerthella）
放线菌形态的观察实验报告
山东大学实验报告2017年11月13日 _________________________________________________________________ 科目：微生物学实验题目：放线菌的形态观察姓名：丁志康 一、目的要求 ? 1.学习并初步掌握观察放线菌形态的基本方法。 ? 2.初步了解放线菌的形态特征。 二、基本原理 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能像空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。 有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。 在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持住放线菌自然生长状态下的形态特征。本试验介绍其中几种常用方法。 1.插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面 与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 2.玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌 接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。 3.印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要 用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等。方法简便、但形态特征可能有所改变。 （*本次试验采用插片法） 三、器材 1、菌种：青色链霉菌，弗氏链霉菌。 2、培养基：高氏I号培养基。 3、仪器及其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲， 石碳酸复红染液，显微镜等。