白细胞、血小板显微镜计数法教学教材
白细胞、血小板显微
镜计数法
白细胞显微镜计数法
（一）原理
取稀释酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞，滴入计数池，计数一定范围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数。
（二）试剂
白细胞稀释液：冰乙酸1.0ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/l亚甲蓝（或结晶紫）1滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释
液。
（三）器材
1.显微镜：普通生物显微镜。
2.微量吸管：吸管上刻有10和20ul两个刻度（误差<+-1%）。微量吸管
由于生产厂家不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经
严格校正，且应做到每位患者1支。
3.细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数
池。在计数池两侧各有一条支柱，与计数池高度差是0.1mm。所以将一块平整的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离
为0.1mm。
目前国内通用的是改良Neubauer计数板。这类计数板中，每个计数池
的边线长宽各为3mm，并被精密地刻划成9个大方格，每个大方格长
宽各为1.0mm，其面积为1m㎡。加盖玻片后的容积为1m㎡×0.1mm.
其中四角上的大方格用单线划成16个中方格，作白细胞计数用；中央
1大方格则用双线划成25个小中方格，每个小中方格又用单线划成16
个小格，总计为400个小格。大方格每边长的误差是+-1%；盖片与计
数池面之距离误差为+-2%。
4.白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面
平整度为0.002mm以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起。其厚度应为0.4—0.7mm，通常大小为24×20×0.6mm。
盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定。其方法是：将盖片擦净
后，平整放在标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见
到的干涉条纹，判断其是否合格。盖片在使用前应当用干净、柔软的吸
水纤维制品拭净，特别注意勿让手接触使其污染，否则充液时易产生气
泡。
（四）操作
1.取小试管（12×75mm）一支，加白细胞稀释液0.38ml。
2.采指血20ul，吸入稀释液中，混匀。
3.用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止2—3min.
4.用低倍镜计数四角大方格的白细胞。计数时应按一定顺序，对压线的白
细胞应按数上不数下，数左不数右的原则计数。
（五）计算
白细胞/L=四大方格白细胞数（N）/4×10×10 6×20
=N×5/100×10 9
=N/20×10 9/L
式中：1/4标示平均一大方格中白细胞数。
×10表示10大方格内白细胞数。
血小板计数
血小板计数 实验目的 掌握血小板的显微镜目视计数方法 实验原理 血液经稀释按一定的比例稀释和破坏红细胞后，滴入血细胞计数板中，在一定的范围内计数血小板的数量，经过换算求出每一升血液中的血小板的数量。 实验器材 1.试管试管架 2.吸管洗耳球 3.微量吸管胶吸头干脱脂棉 4.玻棒 5.改良牛泡板盖玻片绸布
实验试剂 10g/L草酸安稀释液；草酸铵10g EDTA~Na0.12g溶于1000ml蒸馏水中，混匀 实验操作 1.吸取稀释溶液准确吸取10g/l草酸铵多的稀释液0。38ml于小试管里 2.采血加血常规消毒无名指，穿刺后，让血液自然流出，准确采取20ul置于含有草 酸铵的稀释液中，充分的混匀。 3.稀释待完全溶血后混匀1min 4.冲液静置去混匀的血小板混匀液充入计数池，静置10~15min，使血小板充分的下沉。 保持计数池的湿润， 5.计数用高倍镜计数中央大方格的五个角以及中央的共五个中方格内的血小板的数 量 6.计算血小板数量/L=N*5*10*20*1000000=N*100000000000 参考值 注意事项
1.稀释液的要求定期检查稀释液的质量，检测前要用稀释液空白计数，计数值为零时 方可以充液计数。草酸安要洁净，无细菌，没有尘埃污染 2.制备悬浮液时一定要混匀，不可有气泡，要摇动试管至少200次，不可以剧烈摇动 3.计数时光线要求计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃的鉴别，附 着在细胞旁的血小板也要计数在内。 4.器材要求器材要标准化。草酸安质量要达到AR或是GR的级别如使用CP级别溶血 的效果是差的 5.药物影响检测前患者要避免服用阿司匹林及其他的抗血小板药物。
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法摘要：本文使用了目镜测微尺和镜台测微尺来测量野生酵母的细胞大小，得到的结果是宽在5.78~11之间，长在8.25~20之间。然后用血细胞计数板对酵母菌进行计数，并绘制其生长曲线，有四个时期，分别是延滞期、对数期、稳定期和衰亡期。 关键词：细胞大小血细胞计数板酵母菌生长曲线 前言 生产生活中利用微生物时，需要了解微生物的一些基本物理属性，如菌体的大小形状等。本实验利用显微测微尺对野生酵母进行测量，并用血球计数板对酵母菌进行其生长曲线的测定，了解去生长规律。通过此综合性实验加深对无菌操作的印象，并将其掌握。 1实验材料与仪器 1．1实验材料与试剂 麦芽汁培养基、生理盐水、果汁（自制）、活化的酵母菌、酒精 1．2实验仪器 锥形瓶、试管、接种环、移液枪、显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、血细胞计数板、吸水纸、酒精灯 2实验方法 2．1预准备 2.1.1培养基的制备 麦芽汁培养基（130.1g/L）200ml*4瓶 麦芽汁琼脂培养基（145.1g/L）5ml*2支试管150ml*1瓶 生理盐水9ml*20支 （制备后高压蒸汽灭菌121℃，20min） 2.1.2酵母分离纯化 平板划线分离：先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释, 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少, 并逐步分散开
来。经培养后,可在平板表面形成分散的单 个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细 胞形成的，需再重复划线1-2次, 并结合显 微镜检测个体形态特征, 才可获得真正的 纯培养物。 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上 挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。点燃酒精灯。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。 简述如下：1)手持试管：将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞：先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。3)取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。4)拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。5)接种环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。6)取菌：待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。8)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
微生物大小测定和显微镜直接计数
实验五微生物大小测定和显微镜直接计数 一、实验目的： 1、了解显微测微尺的结构； 2、掌握显微测微尺用于测量菌体的方法； 3、学习使用血细胞计数板计算酵母细胞数的原理和方法； 4、了解微生物活体染色的原理的技术的方法。 二、实验原理： 1、显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。用于校正目镜测微尺没小哥的长度.目镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度,再以后作为测量微生物 细胞的长度.目镜测微尺每格长度/μm = 两条重合线间镜台测微尺的格数×10/两条重合线间目镜测微尺的格数 2、利用血球计数板直接在显微镜下计数微生物的细胞（或孢子）数目。优点：直观、快速、操作简便，其缺点为：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察 1ml菌液中的总菌数=（5个方格中的总菌数/5）×25×104×稀释倍数 本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右，即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中 三、实验步骤： （一）微生物大小的测定： 1、放置目镜测微尺：取出目镜，旋开目透镜，目镜测微尺放在光阑上，旋上目镜，将目镜插入镜筒 2、将镜台测微尺放在井台上，调焦看清镜台测微尺的刻度 3、低倍镜下使镜台测微尺与目镜测微尺刻度平行，一段起止线重合，分别数出格数并求出目镜测微尺每小格的实际长度，同样的方法在高倍镜下重复进行 4、按公式计算目镜测微尺每格的长度 5、测量菌体的大小：取下镜台测微尺，制作酵母菌涂片，分别在低倍镜、高倍镜下测量10个菌体的长宽，求其平均值，用长（μm)*宽（μm）表示 （二）显微镜直接计数 1、制备酵母菌的稀释液，将菌液稀释10倍 2、将计数板的盖玻片放在计数室上面的两边平台架上，混匀后酵母菌悬液吸取滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处，待菌液渗入计数室，菌体自然沉降与稳定后计数 3、在计数室移至视野中央，选取25中格（4觉与中央）计含菌数，重复计数2-4个计数室内的含菌量，求其平均值。 四、材料和器皿： 酵母菌液，显微镜，镜台测微尺，目镜测微尺，擦镜纸，二甲苯，血细胞计数板，配套的计数板厚盖玻片，试管，移液管，吸水纸。 五、实验结果：
显微镜直接计数法
实验九显微镜直接计数法 实验目的 1．明确血细胞计数板计数的原理。 2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 实验内容 1．酵母菌细胞数的测定。 2．酵母菌出芽率的测定。 实验原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 图9-1 血球计数板构造（一）图9-2血球计数板构造（二） 1 血细胞计数板；2盖玻片；3计数室 用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边的平台上各自刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大格，中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如下图。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。 计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均数，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。 实验器材
酿酒酵母 血细胞计数平板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。 实验步骤 一、酵母菌细胞数的测定 1．菌悬液制备：以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。 3．加样品：将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。 4．显微镜计数：加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数； 如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格的菌数（即80个小格）； 如菌体位于中方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差； 如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。 计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 16×25型血细胞计数板的计算公式： 25×16型血细胞计数板的计算公式： 5．清洗血细胞计数板：使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 二、酵母菌出芽率的测定 1．方法步骤基本同上：观察酵母菌出芽率并计数时，如遇到菌体大小超过细胞本身50％时，不作芽体计数而作酵母细胞计数。 2．计算 实验结果及讨论 1．实验结果 (1) 酵母菌细胞数的测定
血小板计数
编写：伍海波 制定日期：2011.01.01 审核：周可成 核准：伍海波 修订日期：2012.06.01 1．项目名称: 血小板计数 2．测定原理： 用稀释液将血液稀释一定倍数，红细胞及白细胞在稀释液作用下破裂或溶解，剩下血小板。混匀后充入计数池中，计数一定体积内血小板，即可算得每升血液血小板数。 3．标本要求： 用含EDTA.K 2抗凝剂塑料管抽取静脉血1.5ml ，混匀，镜下无PLT 聚集 4．试剂： 4.1 1%草酸铵稀释液：草酸铵 1g 福尔马林（40％甲醛液）0.1ml 枸橼酸钠 0.5g 蒸馏水加至100ml 溶解后过滤即可 4.2 保存条件：2-8℃。放冰箱可保存稍长。 5．仪器和材料： 显微镜、计数板、试管、吸管 6．操作程序： 6.1 在试管中加血小板稀释液0.38ml ； 6.2 CBC 管充分混匀，取血标本20ul ，轻轻加入已盛稀释液试管底部，吸上清液洗吸管三次，轻轻混匀，置10-30分钟待红细胞溶解； 6.3 取干净计数板，试管轻轻振摇，用吸管吸悬液充池，避免产生气泡或溢出，充好液计数板放置10-15分钟； 6.4 低倍找到计数池中央大格，换高倍镜计数全部大方格（400小格）内血小板 6.5 注意事项： a. 全部用具和稀释液要特别清洁； b. 血小板易聚集，充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛； c. 一定要等血小板完全下沉后计数； d. 仪器计数高于300×103/ul 或低于60×103/ul 须做直接计数（排除试管内血小板聚集）。 7．计算和参考值 计算：1个大方格内所数血小板数×200=血小板数/ul 。 正常参考值：100×109～300×109/L 警示值：〈10×109/L 8. 参考文献 全国临床检验操作手册
微生物直接计数法及测微技术
微生物直接计数法及测微技术 实验类型：基础 学时：4(参考) 内容： 一、实验目的 1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。 2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 二、实验原理 显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为： lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N·M(个) 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。 三、试剂与器材 1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。 2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。 四、实验内容 1.微生物直接计数法 菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板 2.微生物测微技术 装目镜测微尺→校正→菌体大小测定 五、关键步骤及注意事项 1.防止加样空气泡产生。 2.调节显微镜光线的强弱适当。 六、思考题 1.根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、力求准确? 2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1～2种可行的检测方法。 3.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?
显微镜直接计数法
血球计数板计数法 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（㎜3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。 每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为㎜，所以计数室的容积为㎜3。其计算方法如下： 1．16×25的计数板计算公式 细胞数/ml=(100小格内的细胞数/100)×400×1000×稀释倍数 2．25×16的计数板计算公式 细胞数/ml=(80小格内的细胞数/80)×400×1000×稀释倍数 器材酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。 操作步骤 1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 3．加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置5—10分钟即可计数。 4．显微镜计数：将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。 5．清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 实验报告 将结果记录于下表中。A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物学实验报告 题目：微生物大小的测定及显微镜直接计数法 姓名：学号：年级班级：组别： 同组者：时间： 【目的要求】 1．学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。 2．了解血球计数板的构造、明确其计数原理。 3．学习并掌握使用血球计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法。 【基本原理】 l．测微尺的构造：显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm 刻尺上分50 份。目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。 镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为1mm 的直线等分成100 个小格，每格长10μm，专用于校正目镜测微尺。 2.球菌用直径表示大小；杆菌用宽和长来表示 图一：测微尺的校正 3．显微直接计数法：将小量待测样品悬浮液置于计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如酵母、细菌、霉菌孢子等。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板或Hawksley计数板。三种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区（大方格）分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。计数区由400个小方格组成。每个大方格边长为1mm，其面积为lmm2，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3。使用血球计数板计数时，通常测定五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以25或16，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则：
实验七 微生物数量的测定――――显微镜直接计数法
实验七微生物数量的测定――――显微镜直接计数法 一目的要求 了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算； 二实验原理 镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(Petroff Hausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网(图Ⅳ-2)。每个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成(图5)。 每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为l／4000mm3。使用血球计数板直接计数时，先要测定每个小方格(或中方格)中微生物的数量，再换算成每毫升菌液(或每克样品)中微生物细胞的数量。 图Ⅳ-2 血球计数板的构造 a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网)
b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙) 图Ⅳ-3 血球计数板计数网的分区和分格 三实验材料 1、菌种：酿酒酵母； 2、血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细滴管； 3、菌种：大肠杆菌菌悬液。 4、1ml无菌吸管，无菌平皿，无菌水，试管，恒温培养箱牛肉膏蛋白胨培养基。四实验内容与步骤 1．菌悬液制备以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当地菌悬液。 2．镜检计数室在加样前，先对计数板地计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能细菌计数。 3．加样品 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。 4．显微镜计数 加样后静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。如果是25中格计数板。除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。如菌体位于中格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。 凡酵母菌的芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复分数2-3次(每次数值不应招差过大，否则应重新操作)，取其平均值，按下述公式计算出每毫升菌液所含酵母菌细胞数。 每毫升菌液含菌数＝每小格酵母细胞数×4000×1000×稀释倍数 5．清洗血细胞计数 血球计数板用后，在水龙头上用水柱冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或吹风机吹干。 五实验报告
浅析血小板计数异常的原因及解决办法
浅析血小板计数异常的原因及解决办法 发表时间：2012-07-16T15:39:47.547Z 来源：《中外健康文摘》2012年第9期供稿作者：吴守义 [导读] 消除临床医务人员及患者对结果的质疑，而达到和谐的医患关系，促进科室健康发展。 吴守义 (甘肃省会宁县中医院检验科甘肃会宁 730700) 【中图分类号】R445【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）9-0166-02 【摘要】寻找血小板计数异常的各种原因，提高实验室对血小板计数检测的准确性，为临床医生提供可靠的诊断依据和疾病的治疗依据，确保用药的安全，需加强对标本的验收，仪器影响，治疗等过程中引导起变化进行分析，从主观和客观因素两方面进行严格要求，尽而减少分析异常，而得到准确结果，就必须对分析仪器进行监测、纠正系统误差、严把标本接收关，对治疗前后标本做好时间与用药的备注，及时与临床进行联系，确保结果真实可靠。 【关键词】血小板异常原因 随着现代检验医疗设备的飞速发展，血球分析仪已成为各医院进行血细胞计数的主要工具，已基本取代了过去传统的手工做法，具有快速、方便、准确、重复性好的优点。因此血小板计数的准确性也得到相应提高。但是在某些因素的影响下，血小板计数的结果出现较大的异常，仪器却无法直接体现。由于检验工作量大，实验室呈流水线形式报告，而个别标本的抽查和手工复查也未能完全防止异常结果的产生。因此，检验人员对仪器各种性能掌握，对血小板影响因素的了解就显得十分重要，只有掌握这些影响因素，才能对结果做出准确判断，查找原因，及时进行纠正，避免异常报告发出，确保临床诊断和治疗。多年来，笔者对住院及门诊病人就血小板结果出现较大异常进行原因查找，从中对患者的准备、标本质量、仪器本身、药物作物四方面进行了探讨，现做如下分析： 1 患者的准备 采血前患者应尽量减少运动保持平静。住院患者应在早晨卧床时取血，冬天门诊患者从室外进入室内，应等其暖和后采血。患者的精神状态、样本采集时间、吸烟、季节等因素，对血小板计数结果均有一定影响。 2 加强对标本的验收查对，是确保血小板计数准确的主要因素 2.1 抗凝剂的使用要求标本是否用EDTA-K2进行抗凝且抽取的血量是否符合抗凝剂比例要求，不适宜的抗凝剂以及血量过多直接影响血小板计数结果偏低。接收标本时要仔细查对。 2.2 正确的采血方法抽血时避免反复穿刺将组织液抽出或将气泡混入，抽血时要求流畅，避免在淤血、伤口、溃疡等附近采血，使用压脉带时间不宜过长，避免血小板总数结果不降，坚决杜绝输液侧进行抽血。对于预稀释血进行测定时，采血针刺应稍深，使血自然流流出，避免因挤压而产生结果异常。 2.3 标本的转运对于采集的标本要在半小时内送检，避免血小板因聚集、黏附破坏等因素而造成结果偏低，红细胞大量破坏，细细胞碎片增加，而使血小板计数结果假性升高，因此应避免不正确的抽血和标本时间过长导致红细胞破坏的主观因素。 3 由仪器因素引起血小板计数结果的异常 3.1 试剂要求对于使用的溶血素必须在有效期内，避免使用过期、失效、变质的溶血剂，对溶血素的加样必须准确。否则因红细胞的破坏不全，使红细胞碎片及小红细胞计入血小板总数而引起血小板假性增高，在血小板直方图20fl处出现上扬不与横坐标重合，而红细胞直方图左侧出现一小峰。此时应对仪器进行清洗维护并校标溶血素加样器，再进行标本测定，避免出现成批异常结果。 3.2 计数仪的安装及工作环境 血小板的测定是通过电压变化形成脉冲信号或光散射进行检测计数，因此，必须要求有稳压器并有良好的接地线，否则产生静电脉冲信号而使血小板的起点左偏，并有许多小峰形成。计数仪必须安装在干净清洁，避免阳光直射的地方，远离电滋波及噪音对仪器的干扰，确保计数准确可靠。 3.3 加强仪器维护保养，定期进行液路管道系统检查 科室要有专人对仪器进行维护保养，避免堵孔半堵孔现象。定期检查液路管道系统，对老化变形的管道及时清洗或更换，避免血小板因黏附和聚集而导致计数结果异常变化，影响计数准确性。 4 疾病在治疗中引起计数结果的异常变化 4.1 输血因素对于输血后的患者，其血小板出现大小不一，计数后结果常常现出错误提示（R）。表现为血小板直方图血小板宽度增大，重复测定时会出现很大差距，从而使结果极不可靠。对于多次输血的患者体内产生外源性抗原的同种免疫，再次输入后产生血小板特异性抗原—抗体复合物，使输入的血小板及自身血小板受到破坏，而使计数结果不够稳定。 4.2 脂肪乳的影响对于输入脂肪乳的患者，由于脂肪乳的颗粒很小，直径约为2-4微米，而血小板的测试范围为2-20微米，因此测定结果计入了脂肪乳颗料而使总数假性增高。过于输入脂肪乳患者如需进行血常规检测，建议在5—6小时后再进行采血检查，确保计数准确。 4.3 药物因素对于长期使用青霉素、地高辛、双氢克尿塞、甲基多巴等药物的患者，这些药物与血浆蛋白结合形成抗原，刺激机体产生血小板抗体，有的药物还可引导起血小板卫星现象，从而使血小板总数减少。 综上所述，做为一名检验人员不权要求具有扎实的专业理论基础知识和熟练的操作技能，更应该有丰富的实验经验，严谨细致的工作作风。在日常工作中随时观察和分析处理问题，不能盲目的进行操作测试和签发报告。只有对合格标本进行正确的测定，科学合理的检测结果，才能为病人提供真实可信的实验数据，满足临床诊断和治疗的需求，这就要求我们加强业务学习，随时结合临床实际，及时查找出现问题的原因，并加以分析解决。消除临床医务人员及患者对结果的质疑，而达到和谐的医患关系，促进科室健康发展。参考文献 [1]BC-5380血液细胞计数仪操作. [2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程. [3]钱敏，张杰、童明庆.病人输脂肪乳后血小板计数准确性的探讨[J].临床检验杂志.2011，19（4）:252-253.
血小板检查
第三节血小板检查 一、选择题 【A题型】 1.血小板计数的适应证不包括· A.不明原因的出血 B.排除血友病 C.监测病人的化疗和放疗过程 D.疑为骨髓增生 E.疑为血小板破坏增加 2.血小板计数首选的稀释液是 A.高铁氰化钾 B.复方碘 C.草酸钱 D.复方尿素 E.稀盐酸 3.血小板计数的参考方法为 A.普通光学显微镜直接计数法 B.普通光学显微镜间接计数法 C.免疫法 D.血细胞分析仪法 E.相差显微镜直接计数法 4.血小板计数的稀释液必须具备的条件不包括 A.能有效抑制血液凝固 B.能防止血小板形态变化 C.能完全破坏红细胞 D.组成复杂并易于保存 E.不利于细菌生长 5.可导致血小板假性减少的是 A.巨大血小板 B.小红细胞 C.红细胞碎片 D.淋巴细胞核碎片 E.细胞质碎片 6.可导致血小板假性增多的是 A.卫星现象 B.红细胞碎片 C.巨大血小板 D.异常蛋白血症 E.血小板聚集或凝集 7.血小板计数规范化操作不包括 A.充液前必须轻轻摇动血小板悬液2分钟 B.显微镜下观察光线要亮 C.器材必须洁净、干燥 D.灌人计数池后静置15分钟再计数 E.采血1小时后完成计数 8.血小板计数生理性变化正确的是 A.午后低，早晨高 B.春季低，冬季高 C.月经后低，月经前高 D.静脉血低，毛细血管血高 E.妊娠中晚期低，分娩后高 9.可引起自发性出血的血小板计数小于 A. 400 X 109/L B.200 X 109/L C. 100 X 109/L D.60 X 109/L E. 10 X 109/L 10.常有血栓形成危险的血小板计数大于 A. 1000 X 109/L B.400 X 109/L C. 300 X 109/L D.100 X 109/L E. 60 X 109/L 11.血小板增多常见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.血栓性血小板减少性紫癜 C.脾功能亢进 D.急性白血病 E.放射性损伤 12.血小板反应性增多见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.原发性血小板增多症 C.急性化脓性感染 D.真性红细胞增多症 E.脾切除 13.不能导致血小板生成障碍的是 A.急性白血病 B.系统性红斑狼疮 C.再生障碍性贫血D巨幼细胞性贫血 E.恶性肿瘤骨髓转移 .14.导致血小板消耗过多的是 A.脾肿大 B.血液被稀释C一巨大血小板综合征 D.脾功能亢进 E.弥漫性血管内凝血 15.不是原发性血小板增多的是 A.常见脾肿大 B.为干细胞缺陷 C.血小板功能减低 D.并发症少 E.血小板常大于1000 X 109 /L 16.不是继发性血小板增多的是 A.多为反应性 B.脾肿大罕见 C.并发症多见 D.血小板功能正常 E.血小板常小于1000 X 109 /L 17.血小板计数质量保证的主要原则是 A.可选用尿素稀释液 B.避免血小板被激活一和破坏 C.准确辨认血小板 D.可用肝素抗凝血 E.血标本可以低温保存 18.普通光镜直接计数血小板，首选的是 A.生理盐水 B.复方尿素稀释液 C.草酸按稀释液 D.高铁氰化钾稀释液 E.自动血细胞分析仪稀释液 19.关于血小板的主要功能，错误的是 A.粘附功能 B.聚集功能 C.促进血块收缩 D.维持血管内皮完整 E.抗凝血功能 二、问答题 1.血小板计数的稀释液必备的条件有哪些? 2.如何鉴别原发性血小板增多和继发性血小板增多? 3.如何评价普通显微镜直接计数血小板的方法?
血小板计数的参考方法
WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 244—2005 ___________________________________________________ 血小板计数的参考方法 Reference method for platelet counting 2005-5-16发布2005-12-1实施 ___________________________________________________________中华人民共和国卫生部发布
WS/T 244-2005 前言 为了保证血小板的计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。 本标准从2005年5月16日起实施。 本标准由卫生部医政司提出。 本标准起草单位：卫生部临床检验中心 本标准主要起草人：彭明婷、申子瑜、陆红、谷小林、杨振华。 本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。
中华人民共和国卫生行业标准 血小板计数的参考方法WS/T 244—2005 Reference method for platelet counting _____________________________________________________________________ 1 范围 本标准规定了血小板计数参考方法的技术要求。 本标准适用于建立血小板计数参考方法的实验室。 2 规范性引用文件 国际血液学标准化委员会（ICSH）-2001 血小板计数的参考方法 3 定义 参考方法（Reference method） 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。 4 总则 4．1本标准采用间接法计数血小板（Platelet，PLT）。即用荧光标记PLT后，用流式细胞仪检测红细胞（Red blood cell，RBC）和PLT的比值，同时用单通道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC，用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。 4. 2 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。 5 血小板计数参考方法的原理 首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释，再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。溶液中已染色的血小板被稀释成计数浓度，用流式细胞仪检测血小板和红细胞，根据荧光强度和散射光强度将阈值设在可从RBC中区分PLT的
死活细胞的鉴定和显微镜直接计数
死活细胞的鉴定和显微镜直接计数 学院：生命科学专业：生物科学年级：2010级姓名：王亚军 指导老师：张琪白璐陈勇 摘要：酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。其细胞的大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过结合产生子囊孢子。通过美蓝染液水浸片和水—碘液水浸片可在显微镜下观察到啤酒酵母的形态和出芽生殖方式。用美蓝对啤酒酵母的活细胞进行染色，可对啤酒酵母的死细胞和活细胞进行鉴别。 测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法等。显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载片上，在显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 关键词：啤酒酵母菌美蓝染料血细胞计数板 引言：酵母菌的繁殖方式包括无性繁殖和有性繁殖。无性繁殖方式包括芽殖和裂殖。芽殖是酵母菌最普遍的繁殖方式。其过程是：成熟的母细胞在其形成芽体的部位长出芽细胞，芽细胞脱离母体，成为新的个体细胞。如果不脱离母细胞，又长出新芽，子细胞就和母细胞连接在一起，形成藕节状或竹节状的细胞串，称为假菌丝或真菌丝。少数酵母以裂殖方式进行繁殖，当母细胞长到一定大小时，细胞核开始分裂，之后，在细胞中间产生一隔膜，将细胞一分为二。还有些酵母菌可形成一些无性孢子如节孢子、掷孢子、厚垣孢子等。有性繁殖则是通过形成子囊和子囊孢子。 常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们都可用于酵母菌、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。其中用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。 实验内容： 实验原理： 美兰是一种无毒性染液，有两种形态还原型：无色氧化型：蓝色。活细胞因新陈代谢而有强还原力，使美兰从氧化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽构成3个平台.中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种：一种是25×16：计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是16×25：一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。技术时，通常数五个中方个的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘以25或16，就得出一个大方格中德总菌数，再换算成一毫升菌液中的总菌数。 实验材料 1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 三、实验步骤 （一）酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定 1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液，盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）
血小板计数方法-血涂片法不容忽视
血小板计数方法-血涂片法不容忽视 摘要】目的探讨血涂片血小板计数方法的意义。方法取抗凝静脉血制成血涂片，经瑞氏染色后普通光学显微镜下间接数血小板，将其结果血细胞分析仪上测出血 小板计数和手工法计数进行比较。结果配对t检验比较，血小板降低组血涂片法 与血细胞分析仪计数进行比较，差异有统计学意义（P＜0.01），与手工法计数血 小板结果相比较，差异无统计学意义（P＞0.05），血小板正常组和增高组用血涂 片法分别与血细胞分析仪计数和手工法计数进行比较，各方法间差异无统计学意 义（P＞0.05）。结论结果显示，对血小板正常或升高的标本，血细胞分析仪计 数结果比较准确，但对血小板降低的标本，计数结果准确性较差。血涂片法间接 计数血小板直观、准确，具有一定的临床应用价值，对血细胞分析仪有复核作用。【关键词】血小板计数血涂片法血细胞分析仪手工法 作为血常规检查项目之一的血小板计数，临床医生和患者都越来越关心其检 查结果的准确性。因此，迫切要求准确计数血小板，保证实验室所测得的血小板 数是患者体内血小板数的真实体现。另一方面引起人们对血小板计数结果关注的 原因是目前所有的血小板计数方法都存在不少缺陷。迄今为止，所有计数血小板 的方法对于血小板减少的标本的准确性都比较差，亟需研究改进。本文采用两种 血涂片间接计数血小板的方法，将其结果与自动血细胞分析仪和手工法计数结果 进行比较，探讨血涂片法计数血小板的临床意义。 1 材料与方法 1.1标本采集收集2006年10月至2009年10月在本院住院及门诊患者标本 共150例。以同期血细胞分析仪所做质控结果为标准，根据血小板数量将患者标 本分成3组：血小板降低组（血小数小于100×109/L）50例；血小板正常组[血小 板数（100-300）×109/L]50例；血小板增高组（血小板数大于300×109/L）50例，所有标本均为乙二胺四乙酸抗凝静脉血。 1.2仪器与试剂日立牌CA-800型血细胞分析仪、普通显微镜、血细胞计数板。瑞氏染液、10g/L草酸铵稀释液。 1.3方法 1.3.1血涂片法取抗凝血10uL涂片，经瑞氏染色后分别用两种方法计数血涂 片中的血小板数。（1）血涂片A法：选择血涂片上细胞分布均匀的区域，在计 数1000个红细胞的同时计数血小板数，求得血小板与红细胞比值，将此比值乘 以同一份标本经血细胞分析仪测定所得的红细胞数，得到该血涂片法计数的血小 板数[3]。（2）血涂片B法：计数血涂片上100个白细胞的同时计数血小板数， 求得血小板与白细胞数，得到该血涂片法计数的血小板数[4]。 1.3.2血细胞分析仪法采用CA-800型血细胞分析仪测定标本的血小板、红细胞、白细胞数，所有标本采集后于1h内完成检测。 1.3.3手工法计数采用草酸铵稀释法同时计数血小板数。 1.4统计学方法数据处理、采用配对t检验比较和P值判断。 2 结果 结果见表1。由表1可见，血小板降低组4种方法两两比较，血涂片A、B法 及手工法分别与血细胞分析仪法比较，差异有统计学意义（P＜0.01），血涂片A、B法与手工法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；血小板升高组4种方法两两 比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；血小板正常组4种方法两两比较，差异 统计学意义（P＞0.05）。
白细胞、血小板显微镜计数法教学教材
白细胞、血小板显微 镜计数法
白细胞显微镜计数法 （一）原理 取稀释酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞，滴入计数池，计数一定范围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数。 （二）试剂 白细胞稀释液：冰乙酸1.0ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/l亚甲蓝（或结晶紫）1滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释 液。 （三）器材 1.显微镜：普通生物显微镜。 2.微量吸管：吸管上刻有10和20ul两个刻度（误差<+-1%）。微量吸管 由于生产厂家不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经 严格校正，且应做到每位患者1支。 3.细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数 池。在计数池两侧各有一条支柱，与计数池高度差是0.1mm。所以将一块平整的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离 为0.1mm。 目前国内通用的是改良Neubauer计数板。这类计数板中，每个计数池 的边线长宽各为3mm，并被精密地刻划成9个大方格，每个大方格长 宽各为1.0mm，其面积为1m㎡。加盖玻片后的容积为1m㎡×0.1mm. 其中四角上的大方格用单线划成16个中方格，作白细胞计数用；中央 1大方格则用双线划成25个小中方格，每个小中方格又用单线划成16
个小格，总计为400个小格。大方格每边长的误差是+-1%；盖片与计 数池面之距离误差为+-2%。 4.白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面 平整度为0.002mm以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起。其厚度应为0.4—0.7mm，通常大小为24×20×0.6mm。 盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定。其方法是：将盖片擦净 后，平整放在标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见 到的干涉条纹，判断其是否合格。盖片在使用前应当用干净、柔软的吸 水纤维制品拭净，特别注意勿让手接触使其污染，否则充液时易产生气 泡。 （四）操作 1.取小试管（12×75mm）一支，加白细胞稀释液0.38ml。 2.采指血20ul，吸入稀释液中，混匀。 3.用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止2—3min. 4.用低倍镜计数四角大方格的白细胞。计数时应按一定顺序，对压线的白 细胞应按数上不数下，数左不数右的原则计数。 （五）计算 白细胞/L=四大方格白细胞数（N）/4×10×10 6×20 =N×5/100×10 9 =N/20×10 9/L 式中：1/4标示平均一大方格中白细胞数。 ×10表示10大方格内白细胞数。