白细胞、血小板显微镜计数法
白细胞显微镜计数法
（一）原理
取稀释酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞，滴入计数池，计数一定范围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数。
（二）试剂
白细胞稀释液：冰乙酸1.0ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/l亚甲蓝（或结晶紫）1滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释液。
（三）器材
1.显微镜：普通生物显微镜。
2.微量吸管：吸管上刻有10和20ul两个刻度（误差<+-1%）。微量吸管由于生产厂家
不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经严格校正，且应做到每位患者1支。
3.细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数池。在计数池
两侧各有一条支柱，与计数池高度差是0.1mm。所以将一块平整的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离为0.1mm。
目前国内通用的是改良Neubauer计数板。这类计数板中，每个计数池的边线长宽各为3mm，并被精密地刻划成9个大方格，每个大方格长宽各为1.0mm，其
面积为1m㎡。加盖玻片后的容积为1m㎡×0.1mm.其中四角上的大方格用单线划
成16个中方格，作白细胞计数用；中央1大方格则用双线划成25个小中方格，每
个小中方格又用单线划成16个小格，总计为400个小格。大方格每边长的误差是
+-1%；盖片与计数池面之距离误差为+-2%。
4.白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面平整度为
0.002mm以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起。其厚度应为0.4—0.7mm，通
常大小为24×20×0.6mm。
盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定。其方法是：将盖片擦净后，平整放在标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见到的干涉条纹，判断其是否合格。盖片在使用前应当用干净、柔软的吸水纤维制品拭净，特别注意勿让手接触使其污染，否则充液时易产生气泡。
（四）操作
1.取小试管（12×75mm）一支，加白细胞稀释液0.38ml。
2.采指血20ul，吸入稀释液中，混匀。
3.用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止2—3min.
4.用低倍镜计数四角大方格的白细胞。计数时应按一定顺序，对压线的白细胞应按数
上不数下，数左不数右的原则计数。
（五）计算
白细胞/L=四大方格白细胞数（N）/4×10×10 6×20
=N×5/100×10 9
=N/20×10 9/L
式中：1/4标示平均一大方格中白细胞数。
×10表示10大方格内白细胞数。
×10 6表示1升稀释液中白细胞数。
×20为稀释倍数。
血小板显微镜计数
（一）原理
利用能保护血小板的稀释液，将血液稀释一定倍数，滴入计数池，计数一定范围内血小板数，即可换算成每升血中血小板数。
（二）稀释液
1.草酸铵稀释液
草酸铵 1.0g
EDTA-Na2 0.012g
蒸馏水加至100.0ml
配好后用数层滤纸过滤，清亮后使用。此液对红细胞破坏力较强，血小板形态清楚。
但只加草酸铵，不加EDTA盐，则易产生草酸钙结晶。
2.许汝和式稀释液
尿素（AR或GR）10.0g
柠檬酸钠0.5g
甲醛溶液0.1ml
蒸馏水加至100.0ml
混合后过滤即可备用。
此稀释液破坏红细胞完全，视野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室温升高
和保存过久而失效。一般只能使用10d，4摄氏度冰箱中保存，可稍延长使用期。
一次配量不宜过多。
归纳血小板稀释液的成分包括抗凝剂，如柠檬酸盐、EDTA盐等；固定防腐剂，如甲醛等；溶血剂，如尿素、草酸铵等，以及等渗剂等。
一种好的稀释液应具备：（1）能有效地防止血液凝固；（2）迅速固定血小板，防止其聚集和形态改变；（3）要求红细胞破坏完全；（4）组成简单，易保存，不生长细菌。（三）操作
1.取稀释液0.38ml，采末梢血20ul加入稀释液中，混匀，静置10min左右。
2.混匀后取出少许滴入计数池，在温室中静置10—15min。
3.在显微镜下（低倍或高倍）计数中央大方格中5个小中方格（与红细胞同）的血小
板数。
（四）5小中方格血小板数（N）×5×10×20×10 6
=N×10 9/L
（五）注意事项
1.如血小板数过低，可计数25个中方格中的血小板数，结果×200.
2.凡影响红白细胞计数的技术因素都应注意。
3.全部器材和稀释液应十分清洁。因为血小板形态不规则且细小，任何灰尘斑点都可
给计数造成困难，甚至误认。
4.刺入皮肤深度要适当（2—3mm）,血液应自然流出，避免挤压。动作要快，以防止
血小板聚集。
5.如和血常规一起做，应先采血小板计数用血。
6.因血小板易聚集，所以滴入计数池之前应充分混匀，但又不能用力过度，以防止破
坏血小板。
7.血小板在计数池中，完全下沉后方可计数。沉积时间短，结果偏低。但过长，计数
池中稀释液容易蒸发，尤其是夏季。所以最好将计数板放入温室中。
8.用尿素稀释液，一般应在1h内计数完毕，放置时间过长，计数结果偏低..
（六）质量控制
血小板计数质控较难，但应按操作规程，并认真参照注意事项，减少血小板聚集，破坏，排除干扰，切实辨认血小板形态，减少误认。此外，还可根据经验进行质控，即在血片上观察血小板与红细胞密度比例，估计血小板数量。根据陈缃介绍：梅10个油镜视野血小板之和乘以2000，约为每微升血中血小板数。
微生物的计数——血球计数板法
微生物得计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量得方法很多，有分光光度法、显微直接计数法与平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但就是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小.?显微计数法适用于各种含单细胞菌体得纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质，常不易分辨.菌体较大得酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetｒｏｆHausｓｅr)细菌计数板。两种计数板得原理与部件相同，只就是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜，计数板下部得细菌不易瞧清.本实验采用血球计数板法，主要目得就是了解血球计数板法得构造与使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目得与要求 １、了解微生物计数常用得三种方法：分光光度法;平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板得构造与使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，就是一种常用得微生物计数方法。此法得优点就是直观、快速.将经过适当稀释得菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间得计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室得容积就是一定得（０、1mｍ2），所以可以根据在显微镜下观察到得微生物数目来换算成单位体积内得微生物总数目。由于此法计得得就是活菌体与死菌体得总与，故又称为总菌计数法. 血球计数板,通常就是一块特制得载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间得平台又被一短横槽隔成两半，每一边得平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间得大方格即为计数室，微生物得计数就在计数室中进行。 计数室得刻度一般有两种规格,一种就是一个大方格分成１６个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种就是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论就是哪种规格得计数板,每一个大方格中
白细胞低血小板低是白血病吗
白细胞低血小板低是白血病吗 对于很多的患者对于白血病这一疾病来说并不是很了解，而是只知道因为体内白细胞低或者血小板低就认为是白血病，而因此感到恐慌，那么白血病和白细胸和血小板到底有着什么关系呢，下面就请专家给我们介绍一下有关白细胞低血小板低是白血病嘛，希望每一位患者都能够可以了解清楚这里面的缘由与病症，就让我们详细的了解一下吧! 首先简单了解一下白血病，白血病是造血组织的恶性疾病，又称“血癌”。其特点是骨髓及其它造血组织中有大量无核细胞 无限制地增生，并进入外周血液，将正常血细胞的内核被明显吸附，该病居年轻人恶性疾病中的首位，原生性病毒可能是神经性负感组织增生，还有许多因素如食物的矿物放射性化，毒化(苯等)或药物变异，遗传素质等可能是致病的辅因子。根据白血病 细胞不成熟的程度和白血病的自然病程，分为急性白血病和慢性白血病两大类。 白血病的临床症状。发热是白血病最常见的症状之一，可发生再疾病的不同阶段并有不同程度的发热和热型。发热的主要原因是感染，其中以咽峡炎，口腔炎，肛周炎最常见，肺炎，扁桃体炎，齿龈炎，肛周脓肿等也较常见。耳部发炎，肠炎，痈，肾
盂肾炎等也可见到，感染严重者还可发生败血症，脓毒血症等。感染的病原体以细菌多见，在发病初期，以革兰阳性球菌为主。病毒感染虽较少见但常较凶险，巨细胞病毒，麻疹或水痘病毒感染易并发肺炎，须注意。 出血亦是白血病的常见症状，出血部位可遍及全身，以皮肤，牙龈，鼻腔出血最常见，也可有视网膜，耳内出血和颅内，消化道，呼吸道等内脏大出血。女性月经过多也较常见并可是首发症状。 贫血早期即可出现，少数病例可在确诊前数月或数年先出现难治性贫血，以后在发展成白血病。病人往往伴有乏力，面色苍白，心悸，气短，下肢浮肿等症状。贫血可见于各类型的白血病，但更多见老年病人，不少病人常以贫血为首发症状。 白细胞高血小板低有以下可能：白血病等血液系统疾病。严重感染。具体要结合病人的症状及血常规，血涂片，骨髓检查来确定。只能说这种情况可能是白血病，但不一定是。建议行以上检查明确诊断后治疗。 以上就是专家给我们介绍的有关白细胞低血小板低是白血 病吗的介绍，希望每一位患者都可以有所了解，就让我们及时的
常见的微生物检测方法
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
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来。经培养后,可在平板表面形成分散的单 个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细 胞形成的，需再重复划线1-2次, 并结合显 微镜检测个体形态特征, 才可获得真正的 纯培养物。 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上 挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。点燃酒精灯。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。 简述如下：1)手持试管：将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞：先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。3)取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。4)拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。5)接种环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。6)取菌：待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。8)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
微生物计数方法
微生物的显微直接计数法 一、实验目的 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。 二、实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3 所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d） 三、实验器材 1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。 2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 四、实验方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
显微镜直接计数法
实验九显微镜直接计数法 实验目的 1．明确血细胞计数板计数的原理。 2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 实验内容 1．酵母菌细胞数的测定。 2．酵母菌出芽率的测定。 实验原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。 图9-1 血球计数板构造（一）图9-2血球计数板构造（二） 1 血细胞计数板；2盖玻片；3计数室 用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短槽隔成两半，每一边的平台上各自刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大格，中间的大方格即为计数室。血细胞计数板构造如下图。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；另一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。 计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均数，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。 实验器材
酿酒酵母 血细胞计数平板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。 实验步骤 一、酵母菌细胞数的测定 1．菌悬液制备：以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。 2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数。 3．加样品：将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，一般计数室均能充满菌液。 4．显微镜计数：加样后静止5min，然后将血细胞计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。 若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数； 如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格的菌数（即80个小格）； 如菌体位于中方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差； 如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数。 计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 16×25型血细胞计数板的计算公式： 25×16型血细胞计数板的计算公式： 5．清洗血细胞计数板：使用完毕后，将血细胞计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 二、酵母菌出芽率的测定 1．方法步骤基本同上：观察酵母菌出芽率并计数时，如遇到菌体大小超过细胞本身50％时，不作芽体计数而作酵母细胞计数。 2．计算 实验结果及讨论 1．实验结果 (1) 酵母菌细胞数的测定
土壤微生物计数法
土壤微生物计数法 土壤是最复杂、最丰富的微生物基因库，所含微生物不仅数量巨大，而且各类繁多，主要包括细菌、真菌和放线菌三大类，是土壤最活跃的成分。土壤微生物数量测定方法可分为三大类：一类是根据在培养基上生长的菌落数来计算土壤微生物的数量，统称为培养计数法，主要有稀释平板法和最大或然计数法；二类是将土壤微生物染色后，在显微镜下观察计数，称为直接镜检法，包括涂片法、琼脂薄片法和膜过滤法等；三类是直接将微生物从土壤中分离和提取出来后再进行测定，主要有离心分离法。 1.1培养计数法 1.1.1概要 在自然条件下，土壤中的大多数微生物处于休眠状态，一旦供给可利用的碳源（如培养基），一些微生物将快速生长繁殖。因此，根据在培养基上所生长的微生物数量，可以估算土壤中微生物的数量。这种土壤微生物数量测定方法称为培养计数法，主要包括稀释平板计数法（简称稀释平板法）和最大或然计数法。 稀释平板计数法的基本原理：土壤微生物经分散处理成为单个细胞后，在特殊的培养基上生长并形成一个菌落，根据形成的菌落数来计算微生物的数量。 最大或然计数法的基本原理：假设被测定的微生物在稀释液中均匀分布，并在试管或平板上全部存活，随着稀释倍数的加大，稀释液中微生物的数量将越来越少，直到将某一稀释度的土壤稀释液接种到培养基上培养后，没有或很少出现微生物菌落。根据没有出现菌落的最低稀释度和出现菌落的最高稀释度，再用最大或然计数法计算出样品中微生物的数量。 1.1.2稀释平板法 一、试剂配制
常用的培养基各类很多（见附录一），可根据需要测定的微生物种类选择培养基。按配方配制培养基后，先在121℃下灭菌15min，冷却至45～50℃使用。凝固后的培养基可加热溶解后使用。 二、仪器设备 广口瓶或三角瓶及配套的橡皮塞，移液管（1ml、10ml，吸口用棉花塞住后用牛皮纸包好灭菌）培养皿（9㎝，用牛皮纸包好后灭菌）和显微镜等。 三、操作步骤 （1）土壤系列稀释液制备 取新鲜土壤（＜2㎜）10.00g，放入经灭菌的装有70ml水的广口瓶中，塞上经灭菌的橡皮塞，在振荡机上振荡10min，此为10-1土壤稀释液。迅速用灭菌的移液管吸取10-1土壤稀释液10ml，放入灭菌的装有90ml水的广口瓶中，塞上橡皮塞，混合均匀，此为10-2土壤稀释液。再如此依次配制10-3、10-4、10-5和10-6系列土壤稀释液。上述操作均在无菌条件下进行，以避免污染。 （2）平板制备和培养 从两个稀释倍数的土壤稀释液中（细菌和放线菌通常用10-5和10-6土壤稀释液，真菌用10-2和10-3稀释液）吸取1.00ml（吸前摇匀），分别放入五套培养皿中（注意每变换一次浓度，须更换一支移液管）；再向培养皿内注入45～50℃的培养基10ml，立即混合均匀，静置凝固后，倒置放于培养箱中培养。细菌和放线菌在28℃下培养7～10d，真菌在25℃下培养3～5d。 （3）镜检计数
微生物大小测定和显微镜直接计数
实验五微生物大小测定和显微镜直接计数 一、实验目的： 1、了解显微测微尺的结构； 2、掌握显微测微尺用于测量菌体的方法； 3、学习使用血细胞计数板计算酵母细胞数的原理和方法； 4、了解微生物活体染色的原理的技术的方法。 二、实验原理： 1、显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。用于校正目镜测微尺没小哥的长度.目镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度,再以后作为测量微生物 细胞的长度.目镜测微尺每格长度/μm = 两条重合线间镜台测微尺的格数×10/两条重合线间目镜测微尺的格数 2、利用血球计数板直接在显微镜下计数微生物的细胞（或孢子）数目。优点：直观、快速、操作简便，其缺点为：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察 1ml菌液中的总菌数=（5个方格中的总菌数/5）×25×104×稀释倍数 本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右，即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中 三、实验步骤： （一）微生物大小的测定： 1、放置目镜测微尺：取出目镜，旋开目透镜，目镜测微尺放在光阑上，旋上目镜，将目镜插入镜筒 2、将镜台测微尺放在井台上，调焦看清镜台测微尺的刻度 3、低倍镜下使镜台测微尺与目镜测微尺刻度平行，一段起止线重合，分别数出格数并求出目镜测微尺每小格的实际长度，同样的方法在高倍镜下重复进行 4、按公式计算目镜测微尺每格的长度 5、测量菌体的大小：取下镜台测微尺，制作酵母菌涂片，分别在低倍镜、高倍镜下测量10个菌体的长宽，求其平均值，用长（μm)*宽（μm）表示 （二）显微镜直接计数 1、制备酵母菌的稀释液，将菌液稀释10倍 2、将计数板的盖玻片放在计数室上面的两边平台架上，混匀后酵母菌悬液吸取滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处，待菌液渗入计数室，菌体自然沉降与稳定后计数 3、在计数室移至视野中央，选取25中格（4觉与中央）计含菌数，重复计数2-4个计数室内的含菌量，求其平均值。 四、材料和器皿： 酵母菌液，显微镜，镜台测微尺，目镜测微尺，擦镜纸，二甲苯，血细胞计数板，配套的计数板厚盖玻片，试管，移液管，吸水纸。 五、实验结果：
血小板计数
编写：伍海波 制定日期：2011.01.01 审核：周可成 核准：伍海波 修订日期：2012.06.01 1．项目名称: 血小板计数 2．测定原理： 用稀释液将血液稀释一定倍数，红细胞及白细胞在稀释液作用下破裂或溶解，剩下血小板。混匀后充入计数池中，计数一定体积内血小板，即可算得每升血液血小板数。 3．标本要求： 用含EDTA.K 2抗凝剂塑料管抽取静脉血1.5ml ，混匀，镜下无PLT 聚集 4．试剂： 4.1 1%草酸铵稀释液：草酸铵 1g 福尔马林（40％甲醛液）0.1ml 枸橼酸钠 0.5g 蒸馏水加至100ml 溶解后过滤即可 4.2 保存条件：2-8℃。放冰箱可保存稍长。 5．仪器和材料： 显微镜、计数板、试管、吸管 6．操作程序： 6.1 在试管中加血小板稀释液0.38ml ； 6.2 CBC 管充分混匀，取血标本20ul ，轻轻加入已盛稀释液试管底部，吸上清液洗吸管三次，轻轻混匀，置10-30分钟待红细胞溶解； 6.3 取干净计数板，试管轻轻振摇，用吸管吸悬液充池，避免产生气泡或溢出，充好液计数板放置10-15分钟； 6.4 低倍找到计数池中央大格，换高倍镜计数全部大方格（400小格）内血小板 6.5 注意事项： a. 全部用具和稀释液要特别清洁； b. 血小板易聚集，充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛； c. 一定要等血小板完全下沉后计数； d. 仪器计数高于300×103/ul 或低于60×103/ul 须做直接计数（排除试管内血小板聚集）。 7．计算和参考值 计算：1个大方格内所数血小板数×200=血小板数/ul 。 正常参考值：100×109～300×109/L 警示值：〈10×109/L 8. 参考文献 全国临床检验操作手册
红细胞,白细胞,血小板的临床意义
RBC：生理情况下，人体每天约有1/120红细胞衰亡，同时，又有1/120的红细胞产生，使红细胞的生成与衰亡保持动态平衡。多种原因可使这种平衡遭到破坏，导致红细胞和血红蛋白数量减少或增多。 【正常参考值】 【异常结果分析】 红细胞和血红蛋白增多： 1．相对性增多：由于某些原因使血浆中水分丢失，血液浓缩，使红细胞和血红蛋白含量相对增多。如连续剧烈呕吐、大面积烧伤、严重腹泻、大量出汗等；另见于慢性肾上腺皮质功能减退、尿崩症、甲状腺功能亢进等。 2．绝对性增多：由各种原因引起血液中红细胞和血红蛋白绝对值增多，多与机体循环及组织缺氧、血中促红细胞生成素水平升高、骨髓加速释放红细胞有关。 （1）生理性增多：见于高原居民、胎儿和新生儿、剧烈劳动、恐惧、冷水浴等。
（2）病理性增多：由于促红细胞生成素代偿性增多所致，见于严重的先天性及后天性心肺疾病和血管畸形，如法洛四联症、紫绀型先天性心脏病、阻塞性肺气肿、肺源性心脏病、肺动-静脉瘘以及携氧能力低的异常血红蛋白病等。 在另一些情况下，病人并无组织缺氧，促红细胞生医学教育网收集整理成素的增多并非机体需要，红细胞和血红蛋白增多亦无代偿意义，见于某些肿瘤或肾脏疾病，如肾癌、肝细胞癌、肾胚胎瘤以及肾盂积水、多囊肾等。 红细胞和血红蛋白减少： 一般成年男性血红蛋白＜120g/L,成年女性血红蛋白＜110g/L为贫血。根据血红蛋白减低的程度贫血可分为四级。轻度：血红蛋白<90g ／L、中度：血红蛋白90～60g／L、重度：血红蛋白60～30g／L、极度：血红蛋白＜30g/L。 1．生理性减少：3个月的婴儿至15岁以前的儿童，因生长发育迅速而致造血原料相对不足，红细胞和血红蛋白可较正常人低10％～20％。妊娠中、后期由于孕妇血容量增加使血液稀释，老年人由于骨髓造血功能逐渐减低，均可导致红细胞和血红蛋白含量减少。 2．病理性减少： （1）红细胞生成减少所致的贫血：
非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
湖南湘大兽药有限公司工作标准文件 一、目的：为规定非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法的检测方法和操作要求，特制定本操作规程。 二、引用标准：中华人民共和国兽药典（2015年版一部附录P179）。 三、适用范围：适用于本公司检品采用非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法的质量检测。 四、责任者：理化分析员对本标准的实施负责。 五、正文： 1简述： 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。 2.计数方法 计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN 法）。MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，
MPN 法可能是更适合的方法。 供试品检查时,应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适用性须经确认。 3.计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。 供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。 若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。 表 1 试验菌液的制备和使用
微生物直接计数法及测微技术
微生物直接计数法及测微技术 实验类型：基础 学时：4(参考) 内容： 一、实验目的 1.了解血球计数板计数原理，并掌握计数方法。 2.掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 二、实验原理 显微镜直接计数法是将一定稀释的菌体或孢子悬液注入血球计数板的计数室中，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。因为计数板是一块特别的载玻片。其上由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格(见图2—3—44)；另一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格，无论哪种每个大方格中的小方格都是400个。每一个大方格边长为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。计数时，通常只用5个中格内的菌体(孢子)数即可。然后求出每个中方格的平均值，再乘上25或16，得出一个大方格中的总茵数，再换算成lml菌液中的总菌数。若设5个中方格中总菌数为N，菌液稀释倍数为M，如果是25个中方格计数板，则计算方法为： lml菌液中的总菌数=平均每个中格中菌的个数×25×104×M=50000N·M(个) 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0．01mm(即10pm)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。 三、试剂与器材 1.材料酿酒酵母、藤黄微球菌和大肠杆菌的染色标本片、酿酒酵母24h马铃薯斜面培养物。 2.实验器材细胞计数板、显微镜、盖玻片、无菌毛细滴管、目镜测微尺、镜台测微尺、载玻片、盖玻片、显微镜等。 四、实验内容 1.微生物直接计数法 菌悬液制备→镜检计数室→加样品→显微镜计数→清洗血细胞计数板 2.微生物测微技术 装目镜测微尺→校正→菌体大小测定 五、关键步骤及注意事项 1.防止加样空气泡产生。 2.调节显微镜光线的强弱适当。 六、思考题 1.根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面?应如何尽量减少误差、力求准确? 2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1～2种可行的检测方法。 3.为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?
临床诊断全面讲稿白细胞和血小板
临床诊断全面讲稿白细胞和血小板嗜中性粒细胞 1、生成 骨髓生成，释放入血，短暂循环（10小时）后转移至各组织间隙或呼吸道、消化道、泌尿道的上皮表面。 其生成是持续不断的，生成时间需要4-6天，骨髓储存的的成熟中性粒细胞可供应5天；组织损伤或者细菌入侵都会导致集落刺激因子（CSFs）的生成和释放，调控骨髓不成熟的中性粒细胞的增殖和成熟。 粒细胞的生成是指连续的细胞分裂、分化、成熟（图5-1） ★干细胞分化的原粒细胞是最早的可识别粒细胞； ★原粒细胞分裂分化，形成早幼粒细胞和中幼粒细胞； ★继续分裂生成晚幼粒细胞、杆状嗜中性粒细胞、分叶嗜中性粒细胞，细胞核以及细胞浆已发生改变，具有了吞噬能力和杀菌能力。 嗜中性粒细胞在血液中的循环可以分为循环池和边缘池 ★循环池的中性粒细胞与其他血细胞一起循环，可在全血计数中测定； ★边缘池是指附着于血管皮（尤其是小静脉和毛细血管皮），不能被全血计数测定； ★循环池和边缘池中中性粒细胞的比例为：犬为1：1猫为1：3。 嗜中性粒细胞转移进组织是随机的而且是单向的 ★在组织存活1-4天，最终发生程序性凋亡或者死亡； ★还会被脾脏、肝脏、骨髓的巨噬细胞吞噬。 影响嗜中性粒细胞循环数量的因素有： ★骨髓生成和释放的速度； ★循环池与边缘池的交换速度； ★转移进入组织的速度。 2、功能 主要功能是防御微生物入侵组织，可杀死细菌，还能破坏或者参与破环霉菌、藻类、病毒。 中性粒细胞通过定向转移和趋化作用，在炎症或细菌感染部位聚集： ★细胞和分子炎症介质产生趋化物质，刺激骨髓释放中性粒细胞，促进其朝炎症部位的血管皮转移和黏附； ★离开血液，通过血管皮转移入组织，到达炎性部位后具有吞噬作用和杀菌活性。 3、数量 指全血细胞计数中测得的嗜中性粒细胞的数量。巨血小板、血小板团块以及海因茨小体
显微镜直接计数法
血球计数板计数法 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（㎜3），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格，共400小格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格，总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。 每一个大方格边长为1㎜，则每一大方格的面积为1㎜2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为㎜，所以计数室的容积为㎜3。其计算方法如下： 1．16×25的计数板计算公式 细胞数/ml=(100小格内的细胞数/100)×400×1000×稀释倍数 2．25×16的计数板计算公式 细胞数/ml=(80小格内的细胞数/80)×400×1000×稀释倍数 器材酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。 操作步骤 1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 3．加样品：将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置5—10分钟即可计数。 4．显微镜计数：将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜。若选用25×16规格的计数板则每个计数室选5个中方格，可选4个角和中央的中格（即80个小格），若选用16×25规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即100小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。 5．清洗血球计数板：使用完毕后，将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。 实验报告 将结果记录于下表中。A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数。
实验四 微生物平板菌落计数法
实验四微生物平板菌落计数法 一、实验目的 学习并掌握平板菌落计数的基本原理和方法。 二、实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低，为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水（包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。 三、实验器材 1 ．菌种：酵母菌。 2 ．培养基：YEB培养基。 3 ．仪器或其他用具： 1ml 无菌吸管，无菌平皿，盛有 4.5ml 无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。 四、实验步骤 1 ．编号 取无菌平皿 9 套，分别用记号笔标明 10-4、 10-5、 10-6（稀释度）各 2 套，另取 6 支盛有 4.5ml 无菌水的试管，依次标是 10-1、 10-2、 10-3、 10-4、 10-5、 10-6。 2 ．稀释 用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液（待测样品），精确地放0.5ml 至 10-1的试管中，此即为 10 倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。
白细胞、红细胞与血小板检测
白细胞计数 参考范围： 成人:４×109~１0×10９/L 儿童:5×10９～12×１09/L 新生儿：１5×１09～２0０×109/L 临床评价: 1.白细胞是无色有核细胞,正常外周血中常见白细胞有中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞等五种,各种白细胞的功能不同，主要是通过吞噬和免疫功能防御感染。白细胞有结实柔韧的细胞膜,适于伸展和变形，能通过微血管及其内皮间孔到达各组织。 中性粒细胞是血中主要的吞噬细胞，在防御急性感染中起重要作用。它们在血液中停留时间不长,主要是进入组织中起吞噬作用。吞噬过程主要是粒细胞向被吞噬物伸出伪足，将其包裹。血清中免疫球蛋白和补体系统对细菌表面起调理作用,使其易粘附于粒细胞。粒细胞包裹被吞噬物后，随即摄人胞浆,形成吞噬泡。粒细胞胞浆颗粒的溶酶体中含有许多酶(如蛋白水解酶等)和杀菌物质。从而能对吞噬体进行消化、分解，起杀菌等作用。 粒细胞起源于粒-巨噬祖细胞，从增殖动力学上可分为以下几个部份： (1）分裂-增殖池; (2)成熟-贮存池； (3)循环-边缘池； (4)组织池。 血液白细胞计数只能测知循环池中的白细胞,注射肾上腺素可动员边缘池的粒细胞人循环池。注射肾上腺皮质激素或还原尿睾酮可动员骨髓粒细胞人血引起血液粒细胞多，用此方法测定骨髓粒细胞贮备量。粒细胞从原始到成熟所需的时间约１0天。 嗜酸性粒细胞也具有变形运动和吞噬功能,能吞噬抗原抗体复合物。在抗原抗体反应的部位对嗜酸性粒细胞具有很强的趋化性，特别是对速发性过敏反应和蠕虫感染的免疫反应。嗜酸性粒细胞可释放组织胺酶,抑制嗜酸性粒细胞及肥大细胞中活性物质（如组胺、５-羟色胺等)的合成和释放,或灭活这些活性物质。另外嗜酸性粒细胞膜上的Fｃ和C受体可与经IgG 调理的蠕虫粘着,再通过酶的作用杀伤蠕虫。 嗜碱性粒细胞无吞噬功能，颗粒中有许多生物活性物质,其中主要有肝素、组胺、慢反应物质和血小板激活因子等。在免疫反应中与ＩgE具有较强的结合力。结合了IgＥ的嗜碱性粒细胞再次接触相应的过敏原时，发生抗原抗体反应,细胞发生脱颗粒现象。继而引起毛细血管扩张,通透性增加，平滑肌收缩、腺体分泌增加等变态反应。 淋巴细胞在机体免疫过程中具有重要作用。B淋巴细胞在抗原的刺激下转化为浆细胞，分泌特异性抗体,参与体液免疫；Ｔ淋巴细胞接受抗原刺激被致敏后，在抗原作用下分化、增殖成具各种功能的致敏T淋巴细胞，直接杀伤抗原物质和带有抗原的靶细胞。同时合成多种免疫活性物质，在巨噬细胞协同下,参与细胞免疫。 单核细胞具有活跃的变形运动和强大的吞噬功能，它穿出血管进入组织,逐渐转化为巨
血小板检查
第三节血小板检查 一、选择题 【A题型】 1.血小板计数的适应证不包括· A.不明原因的出血 B.排除血友病 C.监测病人的化疗和放疗过程 D.疑为骨髓增生 E.疑为血小板破坏增加 2.血小板计数首选的稀释液是 A.高铁氰化钾 B.复方碘 C.草酸钱 D.复方尿素 E.稀盐酸 3.血小板计数的参考方法为 A.普通光学显微镜直接计数法 B.普通光学显微镜间接计数法 C.免疫法 D.血细胞分析仪法 E.相差显微镜直接计数法 4.血小板计数的稀释液必须具备的条件不包括 A.能有效抑制血液凝固 B.能防止血小板形态变化 C.能完全破坏红细胞 D.组成复杂并易于保存 E.不利于细菌生长 5.可导致血小板假性减少的是 A.巨大血小板 B.小红细胞 C.红细胞碎片 D.淋巴细胞核碎片 E.细胞质碎片 6.可导致血小板假性增多的是 A.卫星现象 B.红细胞碎片 C.巨大血小板 D.异常蛋白血症 E.血小板聚集或凝集 7.血小板计数规范化操作不包括 A.充液前必须轻轻摇动血小板悬液2分钟 B.显微镜下观察光线要亮 C.器材必须洁净、干燥 D.灌人计数池后静置15分钟再计数 E.采血1小时后完成计数 8.血小板计数生理性变化正确的是 A.午后低，早晨高 B.春季低，冬季高 C.月经后低，月经前高 D.静脉血低，毛细血管血高 E.妊娠中晚期低，分娩后高 9.可引起自发性出血的血小板计数小于 A. 400 X 109/L B.200 X 109/L C. 100 X 109/L D.60 X 109/L E. 10 X 109/L 10.常有血栓形成危险的血小板计数大于 A. 1000 X 109/L B.400 X 109/L C. 300 X 109/L D.100 X 109/L E. 60 X 109/L 11.血小板增多常见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.血栓性血小板减少性紫癜 C.脾功能亢进 D.急性白血病 E.放射性损伤 12.血小板反应性增多见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.原发性血小板增多症 C.急性化脓性感染 D.真性红细胞增多症 E.脾切除 13.不能导致血小板生成障碍的是 A.急性白血病 B.系统性红斑狼疮 C.再生障碍性贫血D巨幼细胞性贫血 E.恶性肿瘤骨髓转移 .14.导致血小板消耗过多的是 A.脾肿大 B.血液被稀释C一巨大血小板综合征 D.脾功能亢进 E.弥漫性血管内凝血 15.不是原发性血小板增多的是 A.常见脾肿大 B.为干细胞缺陷 C.血小板功能减低 D.并发症少 E.血小板常大于1000 X 109 /L 16.不是继发性血小板增多的是 A.多为反应性 B.脾肿大罕见 C.并发症多见 D.血小板功能正常 E.血小板常小于1000 X 109 /L 17.血小板计数质量保证的主要原则是 A.可选用尿素稀释液 B.避免血小板被激活一和破坏 C.准确辨认血小板 D.可用肝素抗凝血 E.血标本可以低温保存 18.普通光镜直接计数血小板，首选的是 A.生理盐水 B.复方尿素稀释液 C.草酸按稀释液 D.高铁氰化钾稀释液 E.自动血细胞分析仪稀释液 19.关于血小板的主要功能，错误的是 A.粘附功能 B.聚集功能 C.促进血块收缩 D.维持血管内皮完整 E.抗凝血功能 二、问答题 1.血小板计数的稀释液必备的条件有哪些? 2.如何鉴别原发性血小板增多和继发性血小板增多? 3.如何评价普通显微镜直接计数血小板的方法?
微生物计数方法
1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他 稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制 成1：10的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。 另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。 2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。 操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。 3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。 4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。 在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免 吸管外部粘附的检液溶于其内。 为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。 5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1%蛋白 胨水），后者对食品中已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。 倾注培养 1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。 将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养 琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。 2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝 因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。