易语言官方说明：“病毒误报”
易语言官方说明：“病毒误报”，让我们来一起消灭它！
1、落后陈腐的特征码查毒技术
目前杀毒软件基本上都采用“特征码”查毒技术，就是从病毒体中寻找一段“特征”数据，以后凡是看到其它文件具有这个“特征”，就认为是病毒。这种技术有着其天生的弊端：就是很难保证“特征码”的准确性和唯一性，如果正常的文件里面也碰巧有这种特征码，就会产生误报。对于易语言来说，这个弊端尤为突出。由于易语言功能强大，经常有一些不负责的用户使用它来写木马或者病毒，而杀软在这些文件里面采集特征码的时候，却采集到了易语言编译器本身所产生的正常代码上，这样就导致一产生误报，所有正常的易语言软件就会被误报！2、杀毒软件厂商的不负责任
按道理说，由于采用特征码查毒技术，偶尔产生一两次误报从技术上来讲还是有可能的，但是对于易语言，我们经常遇到这样的情况：刚刚通知杀软公司更正了误报，仅仅过了1星期甚至几天，又重新误报，这样一而再再而三地发生误报，能说明什么问题呢？说到底就是八个字：“不负责任、为所欲为”。
产生误报的根本原因就是因为某些杀毒软件厂商漠视作为杀毒软件这个特殊行业所应该遵循的基本行为准则和道德规范！
二、易语言深受其害
作为国内唯一成熟应用的中文编程语言，易语言自从诞生那天起，就经常被一些杀毒软件莫名其妙、反反复复地误报，可以说，如果没有这些杀毒软件时常不负责任的“污蔑”，易语言今天会被更多的人认可和使用。这些杀毒软件使用着落后陈腐的特征码查毒技术，干着“指鹿为马”的勾当！在国内，不仅仅是易语言，还有很多其它软件也深受其害，甚至连windows 系统都逃不过它们的魔爪。
三、我们为此作出的努力
我们为了处理病毒误报问题，作了大量的工作：
1、软件技术方面：
为了避免杀毒软件采集到错误的特征码，我们在易语言中加入了编译打乱、插入花指令等支持机制，但是我们很快发现，这一切都是徒劳的，杀毒软件很快就能找到新的误报特征码。非常可笑的是：经常我们更改了一下图标、修改了一下版本信息，甚至什么都不改就仅仅重新编译一下，就能够解除误报。由此可见这些杀毒软件的技术幼稚可笑到了何种地步！
2、外部交涉方面：
每次病毒误报发生，我们都是第一时间联系相应杀毒软件厂商，督促他们立即改正。但是有时候它们会反应迟钝，甚至不加理睬，对于那些让我们忍无可忍的，我们采取了法律手段，譬如卡巴斯基，就被我们两次告上法庭而且都成功胜诉。
四、我们需要大家的帮助
对于用户程序被误报病毒，我们是相当痛心的。我们知道每一份程序都是一份心血的积累，我们做了大量的努力避免这种情况，但是由于杀毒软件厂商的不负责任，我们一个公司的力量显得太过微小，在这个时候，我们希望能够得到来自广大用户的帮助：
当你使用易语言开发的应用软件被杀毒软件误报的时候，希望你不要沉默，举起双手，狠狠地给它一击耳光！你可以向消协投诉、向法院提起诉讼，哪怕仅仅是给杀软厂商打一个电话，发一封邮件提出抗议，都是对我们最大的支持！对于那些经常产生误报的，你可以告诉你的所有朋友，这个杀毒软件很垃圾！
我们会给予最大程度的支持和配合，所需要的资料和证据，可以随时联系我们索取或者在我们网站上下载。
易语言公司的力量是弱小的，但是无数易语言用户的力量聚合起来是巨大的，为了维护我们
共同的利益，为了让我们耗费巨大心血写出的程序能够安安心心交到客户手里面而不再被诬蔑为“病毒”，我们必须要告诉杀毒软件厂商怎样做人，怎样做事！
让我们一起来努力！
慢病毒包装、浓缩、纯化、滴度实验步骤
一、包装细胞293T 细胞的培养 一、293T 细胞的冻存 1. 随着传代的次数增加，293T 细胞会出现生长状态下降，出现突变等。所以要在细胞购进时就进行冻存。 2. 在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。 3. 倒去细胞上清液，加入D-Hank's 液洗去残留的培养基。 4. 加入0.25% 的胰酶，消化10-20s 后倒去。 5. 镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，加入新鲜培养基吹打混匀。 6. 细胞计数。 7. 将细胞离心，1000rpm ，2min 。 8. 根据计数结果加入细胞冻存液（70% 完全培养基+20%FBS+10% DMSO ）重悬细胞，密度为3X 10 6个/ml。 10. 第二天将细胞放入液氮灌，并记录。 二、293T 细胞的传代 1. 当细胞生长至汇合率达到80~90% 需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好的生长状态。 2. 消化细胞，方法同上。 3. 细胞离心结束后，加入完全培养基重悬。密度为 3 X10 5个/ml。 4. 分到10cm 培养皿中，10ml/ 皿。 三、293T 细胞的复苏 1. 当细胞传代次数过多（超过50 代），细胞状态变差时或细胞出现污染事故时，需要丢弃并对开始冻存的细胞进行复苏。 2. 打开水浴锅，设置温度为40 C。 3. 查看细胞库记录，根据记录从液氮灌中取出冻存的细胞（需戴上棉手套，防止被冻伤），迅速丢入水浴锅中并快速晃动，在1~2 min 内使细胞溶液完全溶解。 4. 将1ml 细胞溶液加入9 ml 完全培养基中并混匀后转入10cm 培养皿。 5. 放回37 C、3%CO 2和95%相对湿度的培养箱中培养。 6. 第二天观察细胞存活率。倒掉旧的培养基，加入10ml 新鲜培养基。 二、慢病毒的包装、浓缩和滴度测定 1. 所用病毒检测引物为WPRE 特异引物，序列如下 只供学习与交流
常见的易语言源码大集合
常见易语言源码 使用命令： 写到文件(取运行目录() ＋“1.skn”, #皮肤) 易皮肤_载入皮肤(取运行目录() ＋“1.skn”, ) 切记<易皮肤_载入皮肤>要用到（易语言皮肤支持库2.0.rar） （易语言皮肤支持库2.0.rar）路径：F:\易语言\软件\易语言皮肤支持库2[1].0.zip 注意：#皮肤)这个地方的名称一定要和你添加的资源名称一样否则不能使用 加载皮肤(7) 加载Aero特效() 这个一定要加33个皮肤模块 设置窗口透明度的命令： 设置窗口透明度(取窗口句柄(), 200) 注意：运行（）EXE文件的就直接输入路径！如果是记事本那么就在前面加一个
编辑框按下某键（） 如果（键代码＝＃CTRJ键＝真） 返回（假） .版本2 .子程序__启动窗口_创建完毕 时钟1.时钟周期＝1000 .子程序_时钟1_周期事件 标签1.标题＝到文本(到数值(标签1.标题) ＋1) 进度条： .版本2 .程序集窗口程序集1 .子程序_按钮1_被单击 时钟1.时钟周期＝10 .子程序_时钟1_周期事件 进度条1.位置＝进度条1.位置＋1 .如果真(进度条1.位置＝100) 载入(窗口1, , 真) 时钟1.时钟周期＝0 进度条1.位置＝0 .如果真结束
易语言-从入门到精通(零基础)
汉语编程工具易语言
目录 目录.......................................................................................................................... - 3 - 第一部分易语言入门.................................................................................................... - 4 - 第一课走进“易”世界........................................................................................ - 4 - 一、打开“易语言”设计窗口 ........................................................................ - 4 - 二、认识“易语言”........................................................................................ - 4 - 三、第一个易程序............................................................................................ - 6 - 四、小结............................................................................................................ - 7 - 第二课简单的人机交互........................................................................................ - 8 - 一、第一个交互程序........................................................................................ - 8 - 二、小结............................................................................................................ - 9 - 第三课按钮与标签的综合运用 .......................................................................... - 10 - 第四课图文并茂.................................................................................................. - 12 - 第五课看看计算机的计算能力 .......................................................................... - 15 - 第六课让世界丰富多彩...................................................................................... - 18 - 第七课顺序程序结构.......................................................................................... - 20 - 第八课猜数（选择程序结构） .......................................................................... - 23 - 第九课多分支控制结构语句 .............................................................................. - 28 - 第十课练习.......................................................................................................... - 30 - 一、选择题：.................................................................................................. - 30 - 二、编程题：.................................................................................................. - 30 - 第十一课循环程序结构...................................................................................... - 32 - 第十二课循环程序结构练习 .............................................................................. - 36 - 一、选择题...................................................................................................... - 36 - 二、编程题...................................................................................................... - 37 - 第十三课菜单的设计.......................................................................................... - 39 - 一、菜单的基本概念...................................................................................... - 39 - 二、菜单编辑器的打开 .................................................................................. - 39 - 三、设计下拉式菜单...................................................................................... - 40 - 第十四课对话框.................................................................................................. - 44 - 一、提示类对话框.......................................................................................... - 44 - 二、自定义对话框.......................................................................................... - 45 - 三、通用对话框.............................................................................................. - 46 - 附录实例应用荟萃.............................................................................................. - 48 -
慢病毒(过表达)包装步骤
. 慢病毒（过表达）包装步骤 秦超 1.转染 复苏293T细胞，传2-3代进行转染，转染推荐使用合元公司的慢病毒转染试剂。 转染步骤：（以10cm培养皿为例） ⑴最好在铺细胞后20h左右进行转染，控制转染前细胞密度70%-90%，保证细胞处于良好的状态，转染前一小时把一半培养基（约5ml）换成新的（含血清，因为此转染试剂不需换液）。 ⑵加psin 10ug，pspax2 10ug，pmd2.g 5ug于800ul opti-mem，混匀 ⑶加40ul慢病毒转染试剂于800ul opti-mem，混匀，室温静置5min ⑷将⑶所得的转染试剂稀释液滴加到⑵所得到的质粒稀释液中，边加边轻轻混匀，室温放置20min ⑸取出细胞培养皿，将⑷得到的质粒转染试剂复合体加入到细胞培养基中，前后轻轻推摇使混合均匀，放回培养箱。 2.收毒(36-48h) 收毒前如果质粒带有荧光标签可先看一下转染效率，一般达到60%即可。 ⑴将培养皿中的病毒上清液吸出到15cm离心管中，然后2000rpm离心10min，以沉淀细胞碎片。 ⑵取上清用0.22um滤清过滤到浓缩管（用蛋白质浓缩管即可）中。4000rpm离心至所需体积。 ⑶浓缩完毕后，吸出浓缩后的病毒液，按每次的接毒量分装，-80℃冻存。由于反复冻融会降低慢病毒滴度，因此避免反复冻融。 3.接毒 接毒前12-20h铺细胞，使接毒时细胞密度约为40%-50%，务必使用生长状态良好的细胞。将分装好的慢病毒滴加到细胞中，加polybrene使其终浓度为8ug/ml 细胞密度60%-70%时可以再接毒一次。 4.检测及培养细胞系(48h) 如果带有荧光标签可直接显微镜看一下感染效率，如需用药杀用puromycin杀三天（对照组完全杀死），剩下的即为基因整合进去的细胞。如需培养成细胞系，可继续培养。如果剩下的细胞较少可用高浓度血清，待细胞聚团时用胰酶消化一下，使细胞铺匀。 如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！ 精品
【新手必看】易语言各种错误及解决办法
您下载的易语言正式版,需要购买加密狗后才能正常编译。 在删除您当前版本后下载免费版、或者破解版 在调试或编译出现图中提示的（图中红色表示为命令） 在易语言的菜单栏上【工具 - 支持库配置 - 全选 - 确认】即可。 您打开的源码缺少了某些支持库(图中红色的是支持库名称及文件名 {}中的是支持库的数字签名) 打开官方论坛下载支持库或https://www.360docs.net/doc/a46570082.html,自行需找支持库安放在易语言目录下的lib文件夹内,如C:\易语言\lib\ 然后在易语言的菜单栏上【工具 - 支持库配置 - 全选 - 确认】即可。 此提示一般在Vista或更高的系统中出现。如：Vista/7/8 偶尔在XP中出现。向易语言程序发送内存代码时出现问题(跟Excel出现的错误一样) 很简单,在打开就可以了(偶尔打开会多次这样) 取消管理员权限就可以完美解决了
出现此提示的错误原因很多，各位要一个一个排除 1、要编译的程序正在运行,无法覆盖(关闭被编译的程序在编译一次) 2、杀毒软件搞的鬼(编译时杀毒软件拦截,关闭杀毒重新编译) 3、被编译的目录权限不够(换个目录重新编译) 4、版本问题(删除现在易语言重新下一个后编译) 5、调试文件在运行（打开任务管理器终止.tmp的临时程序然后在编译） 此问题有些答案来自互联网 有的时候重启也行 打开任务管理器终止.tmp的临时程序然后在编译这个给力了 重启 调试或编译运行时出现360提示(红色为随机文件名) 关闭您的360然后在试试 出现此提示一般是你复制过易语言目录或安装时安装包未写出link.ini的链接地址
打开易语言目录下\tools\link.ini文件 找到： ;linker="" 将“”的内容改为易语言安装目录+\VC98linker\Bin\LINK.EXE 如易语言安装 在C盘那么改为;linker="C:\易语言\VC98linker\Bin\LINK.EXE" 然后： Link.ini往下拉,最后有一个linker=和之前不一样的就是这个少了个;和两个分 号，然后把linker=后的地址也改为和上面地址一样 即可 通俗点： 打开易语言目录下\tools\link.ini 找到;linker=""和linker=把""和=后的内容改为易语言目录 +\VC98linker\Bin\LINK.EXE 这不是易语言本身的问题,这是Windows权限的问题 开始-运行-输入gpedit.msc会出现“组策略”然后依次打开【用户配置-管理模板-系统-不要运行指定的 Windows 应用程序】然后双击打开选择【已禁用】 提示：Windows7系统：Win+R键即可打开运行，然后操作和上面相同
慢病毒包装体系使用说明
慢病毒包装体系使用说明 本说明书适用于以下产品： 名称货号 慢病毒包装体系KLV3501 慢病毒包装体系（含293V细胞）KLV3502 慢病毒包装体系（含转染试剂）KLV3503 慢病毒包装体系（含293V细胞、转染试剂）KLV3504 北京英茂盛业生物科技有限公司 Web site：https://www.360docs.net/doc/a46570082.html,
1 北京英茂盛业生物科技有限公司 https://www.360docs.net/doc/a46570082.html,/ 产品内容 KLV3501 KLV3502 KLV3503 KLV3504 慢病毒载体（过表达或RNA 干扰载体任选一种） 3 3 3 3 辅助载体pH1 3 3 3 3 辅助载体pH2 3 3 3 3 HEK293V 细胞 3 3 Polyfect-V 转染试剂 3 3 载体采用质粒形式发货，请在收到质粒后放-20℃冻存，也可以直接转化大肠杆菌感受态进行质粒扩增。 HEK293V 细胞采用干冰或培养瓶发货。请在收到细胞后根据附带说明书进行复苏或传代。 慢病毒载体 慢病毒载体中含有病毒整合和表达所需原件及表达外源目的基因的元件。外源基因通过载体中的多克隆位点插入慢病毒载体中进行表达。 pLV-EGFP-C 的载体图谱见下，本公司的其它慢病毒载体结构与之基本相似。其它载体信息见本公司网站https://www.360docs.net/doc/a46570082.html, 或本说明书后面的附表。
慢病毒包装载体 慢病毒包装载体包括pH1和pH2，表达生产病毒颗粒所需的病毒蛋白。载体图谱见下：
HEK293V细胞 包装细胞的状态对病毒包装效果有直接影响。我公司保存的293V细胞为低次代293V细胞，细胞性状稳定。在高密度下生长3天仍可保持贴壁状态，持续产生病毒颗粒，因此可多次收获病毒，降低病毒包装实验成本。 Polyfect‐V转染试剂 Polyfect-V转染试剂专为293V细胞转染及慢病毒包装研制,可以在细胞铺板同时进行转染，缩短病毒包装时间；无需要求细胞处于生长对数期，细胞转染时密度可以很高；细胞毒性极低；质粒和转染试剂用量是普通转染试剂的1/3到1/2等显著优点；包装病毒时转染效率接近100%，能提高病毒产量3-5倍。 3 北京英茂盛业生物科技有限公司 https://www.360docs.net/doc/a46570082.html,/
慢病毒包装实验步骤
慢病毒包装实验的要点： 1：良好的293FT细胞状态是转染成功的首要因素，细胞代数不宜超过30代； 2：细胞铺板需均匀，避免细胞成团，影响转染效率；尽量多的细胞转入质粒，产生的病毒就越多； 3：细胞换液和共转染时，动作要轻柔避免细胞漂浮。尽量少的细胞死亡，产生的病毒就越多； 实验前要准备的试剂、耗材和仪器； 试剂准备：10%灭活胎牛血清+90%DMEM配好的完全培养基,0.25%胰酶，PBS,TRL转染试剂，包装质粒，目的质粒，无血清培养基。 耗材准备：10cm细胞培养皿，6孔细胞培养板，吸头规格1ml、200ul、10ul，10ml移液管，离心管规格15ml、5ml、1.5ml，0.22um PVDF滤膜和10ml无菌注射器，试管架。仪器准备：倒置荧光显微镜，普通光学倒置显微镜，电动移液器，吸引器，移液枪，二级生物安全柜，二氧化碳细胞培养箱。 第一天：上午（病毒包装质粒共转染前，293FT细胞复苏后至少让其传代两次以上，293FT 细胞能成倍的增长，确定细胞状态好）； 实验前准备： 安全柜开紫外灯照30分钟； 把培养基和试剂放置常温； 消化细胞： 从37 5%的co2细胞培养箱拿出细胞状态良好的293FT细胞，吸出原培养基，加入PBS 1ml略洗之后吸出，加入1ml胰酶消化1-2min，轻轻拍打培养皿，再加入3ml新鲜培养基终止消化，将培养皿中的细胞转移至15ml离心管内离心1000r /5min,吸出上清液，加入10ml PBS 吹打混匀后，离心1000r /5min, 吸出上清液。 细胞铺板： 在10cm细胞培养皿上标记细胞名称、细胞代数、时间和操作人，将计数好大约2.5×106个293FT细胞吸入15ml离心管，再加入完全培养基至10ml充分混匀，然后把混匀的293FT细胞移入10cm培养皿）。放置培养箱中培养48h。 插入铺板后图片
第二代和第三代慢病毒包装系统定稿版
第二代和第三代慢病毒包装系统精编W O R D 版 IBM system office room 【A0816H-A0912AAAHH-GX8Q8-GNTHHJ8】
第二代和第三代慢病毒包装系统 将HIV-1 基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列) 和编码反式作用蛋白的序列进行分离。载体系统包括包装成分和载体成分：包装成分由 HIV-1 基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白；载体成分与包装成分互补，含有包装、逆转录和整合所需的 HIV-1顺式作用序列。同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 第一代包装系统中，除vpu之外的辅助基因都被保留下来，Env包膜蛋白由VSV-G蛋白代替，应用 VSV-G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性。3质粒系统，包括包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒。其中包装质粒在 CMV 启动子的控制下，表达 HIV 21 复制所需的全部反式激活蛋白，但不产生病毒包膜蛋白及辅助蛋白vpu；包膜蛋白质粒编码水泡性口炎病毒G蛋白 (VSV 2G)，应用 VSV 2G 包膜的假构型慢病毒载体扩大了载体的靶细胞嗜性范围，而且增加了载体的稳定性，允许通过高速离心对载体进行浓缩，提高了滴度；转移质粒中除含有包装、逆转录及整合所需的顺式序列，还保留 350 bp 的 gag 和 RRE，并在其中插入目的基因或标志基因( 绿色荧光蛋白 GFP) 。 在第二代系统中辅助基因vif、vpr、nef被进一步剔除，这些辅助基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力，同时增加了载体的安全性。第二代系统中5’LTR 634bp，3' LTR 634bp，5’LTR前不需要强启动子。4质粒系统。 第三代系统中，tat调节基因也被剔除，对5’LTR进行了改造，换上了异源启动子，从而不需依赖tat基因（Tat 基因编码蛋白可与LTR结合，增加病毒所有基因转录率）；构建自身失活的慢病毒载体（SIN），即删除了U3区的3’LTR, 使载体失去HIV-1增强子及启动子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA；一些增强包装病毒滴
慢病毒载体包装构建过程
慢病毒载体包装构建过程 原理：慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等，使用慢病毒载体，能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率，且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。 概念：慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。 辅助成分：慢病毒载体辅助成分包括：慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。 基本原理：慢病毒载体系统由两部分组成，即包装成分和载体成分。
包装成分：由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白。包装成分通常被分开构建到两个质粒上，一个质粒表达Gag和Pol蛋白，另一个质粒表达Env蛋白，其目的也是降低恢复成野生型病毒的可能。将包装成分与载体成分的3个质粒共转染细胞(如人肾293T细胞)，即可在细胞上清中收获只有一次性感染能力而无复制能力的、携带目的基因的HIV-1载体颗粒。 载体成分：与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的HIV顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。 为降低两种成分同源重组恢复成野生型病毒的可能，需尽量减少二者的同源性，如将包装成分上5′LTR换成巨细胞病毒(CMV)立即早期启动子、3′LTR换成SV40 polyA等。 一、实验流程（1和2为并列步骤） 1.慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。 2.慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体 3. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养24和48h后，分别收集富含
慢病毒包装操作方案
慢病毒包装操作流程 一、材料 1 细胞培养试剂 试剂名称终浓度试剂品牌DMEM/High glucose基础培养基90%Invitrogen 胎牛血清10%Invitrogen/Gibco 丙酮酸钠1mM Invitrogen DMSO（冻存用）10% 2 慢病毒包装试剂 试剂名称浓度试剂品牌Lipofectamine 2000Invitrogen Opti-MEM基础培养基Invitrogen PEG6000溶液50%Wako NaCl溶液40 mM HBSS溶液Invitrogen 3 耗材 50 mL离心管 15 mL离心管 10 cm细胞培养皿 μm过滤器 2 mL EP管 二、操作流程
1细胞培养 1.1293T/293FT细胞的复苏 1)将完全培养液从4°C中取出放置到室温预热30 min左右。在超净台内，用吸管吸取6~7mL 完全培养液至15 mL离心管中； 2)快速将冻存的细胞从液氮中取出，并迅速用镊子夹住盖子放入37°C水浴中快速晃动（水不 要没到盖子），使其在1~2分钟内完全融化； 3)在超净台内，用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，用吸管吸取所有融化的细胞悬液至装准备好的 完全培养液中，轻轻吹打混匀，使冻存液分散开（目的是让DMSO分散，降低恢复室温的DMSO 对细胞造成的毒性作用）。 4)在室温条件下，250 g离心4分钟。 5)离心后，在超净台内小心倒去上清，用吸管吸取 2 mL新鲜完全培养液重悬细胞至单细胞悬液， 再转移已经加好培养基的培养瓶/培养皿中，写上细胞名称、日期，放置 37°C、5% CO2饱和 湿度培养箱内培养。（首次复苏细胞时，离心重悬后需取样计数，根据细胞数选择面积合适的 培养容器。） 6)复苏翌日，给复苏的293T细胞更换新鲜的完全培养基。 7) 1.2293T/293FT细胞传代 1)待细胞长至60%-70%融合度即可传代。将培养瓶里的所有培养液全部移去，用1×PBS洗涤细 胞两次（洗涤速度要快，避免细胞干涸时间过长），以去除残余的培养液和血清（血清含有胰 酶的抑制因子）； 2)加入适当的胰酶溶液，能使其完全浸过细胞即可，室温孵育1-2分钟。在显微镜下观察，可看 到大部分细胞变圆不贴壁，拍打培养瓶两侧会有大量细胞脱离，此时应立即终止消化，若细胞 仍然有大部分贴壁，可适当延长孵育时间； 3)加入等体积完全培养液终止消化，并用吸管吹打培养瓶底2-3次使所有细胞彻底脱壁。用吸管
慢病毒包装操作说明
Clontech-Lenti-X? Lentiviral Expression Systems User ManualProtocol No. PT5135-1慢病毒包装操作说明 A.用Lenti-X HTX Packaging System生产慢病毒悬浮物为了获得最高效价的病毒悬液，用Lenti-X 293T细胞系，严格尊守以下说明，尤其尊守（1）培养体系和培养量（2）DNA的量和转染质量（3）无四环素血清（4）孵育时间。 所有的Xfect?转染成份，量和条件最好用Lenti-XVectors，Lenti-XHTX包装混合物，Lenti-X293T细胞。 用10cm组织培养板并确保血清无四环素，四环素污染的血清对表达包装成份是有害的。 所有的实验步骤均在无菌组织培养器血中完成。 包装病毒需要有微生物安全等级2的生物安全柜中进行，注意重组的假性慢病毒包装颗粒能够感染人。 6 1.转染24小时前，在10cm培养板接种4-5×10个293T细胞，添加10ml的生长培养基。 在37℃，5%CO2℃条件下过夜。 在进行第7步前确保培养血有80-90%的覆盖率。 2.充分混均Xfect Polymer。 3.每个转染样品需准备两个离心管，按顺序添加如下试剂Tube 1(Plasmid DNA) Tube 2(Polymer)557μlXfectReaction Buffer 592.5μl Xfect ReactionBuffer36μl Lenti-X HTX Packaging Mix 7.5μl Xfect Polymer7μl Lenti-X Vector DNA(1μg/μl)600μl 总量600μl 总量注意： Xfect Polymer不要在室温下搁置长于30min
《易语言中文编程从入门到精通》
绍兴县教研室试点教材 汉语编程工具易语言 汉语编程工具易语言 汉语编程工具易语言
易语言教程――初级版 目录 目录..........................................................................................................................- 2 - 第一部分 易语言入门....................................................................................................- 3 - 第一课 走进“易”世界........................................................................................- 3 - 一、打开“易语言”设计窗口........................................................................- 3 - 二、认识“易语言”........................................................................................- 3 - 三、第一个易程序............................................................................................- 5 - 四、小结............................................................................................................- 6 - 第二课 简单的人机交互........................................................................................- 7 - 一、第一个交互程序........................................................................................- 7 - 二、小结............................................................................................................- 9 - 第三课 按钮与标签的综合运用..........................................................................- 10 - 第四课 图文并茂..................................................................................................- 12 - 第五课 看看计算机的计算能力..........................................................................- 14 - 第六课 让世界丰富多彩......................................................................................- 16 - 第七课 顺序程序结构..........................................................................................- 18 - 第八课 猜数（选择程序结构）..........................................................................- 21 - 第九课 多分支控制结构语句..............................................................................- 25 - 第十课 练习..........................................................................................................- 27 - 一、选择题：..................................................................................................- 27 - 二、编程题：..................................................................................................- 27 - 第十一课 循环程序结构......................................................................................- 29 - 第十二课 循环程序结构练习..............................................................................- 33 - 一、选择题......................................................................................................- 33 - 二、编程题......................................................................................................- 34 - 第十三课 菜单的设计..........................................................................................- 36 - 一、菜单的基本概念......................................................................................- 36 - 二、菜单编辑器的打开..................................................................................- 36 - 三、设计下拉式菜单......................................................................................- 37 - 第十四课 对话框..................................................................................................- 41 - 一、提示类对话框..........................................................................................- 41 - 二、自定义对话框..........................................................................................- 42 - 三、通用对话框..............................................................................................- 43 - 附录 实例应用荟萃..............................................................................................- 45 -
慢病毒生产及使用操作手册
慢病毒生产及使用操作手册 一、实验流程 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。以下容由汉恒生物科技（上海）有限公司精心整理总结。 二、实验材料 （一）慢病毒载体、包装细胞和菌株 该病毒包装系统为三质粒系统，组成为pspax2, pMD2G, pHBLV TM系列质粒。 1、载体信息（见附录） 2、细胞株293T，慢病毒的包装细胞，为贴壁依赖型成上皮样细胞，生长培养基为DMEM(含10% FBS)。贴壁细胞经培养生长增殖形成单层细胞。 3、菌株大肠杆菌菌株DH5α。用于扩增慢病毒载体和辅助包装载体质粒。 三、包装细胞293T细胞的培养 （一）293T细胞的冻存 随着传代的次数增加，293T细胞会出现生长状态下降、突变等。为了防止此类现象的出现，我们需要在开始就对细胞进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。在细胞对数生长期进行冻存，增加细胞复苏成活率。 1、去掉上清液，加入PBS洗去残留的培养基； 2、加入0.25%的胰酶，消化1～2min后，镜下观察细胞变圆，细胞间间隙加大时，去除胰酶，加入新鲜培养基吹打混匀，移入离心管中。 3、细胞计数，将细胞全部晃下，加入3mL 37 ℃预热的10％DMEM，用10mL 移液管进行吹打，较大力吹打6～8 次即可，不留死角，之后，将所有细胞吸出，置于15mL 离心管中，取50ul 混匀后的细胞于1.5mL eppendorf 管中，加入450ul 10％DMEM，即为10 倍稀释，混匀，取10ul 细胞于计数板中计数。计数板上共4 大格，每大格16 小格。计数时，4 大格均计数，总数除以4（得每大格细胞数），再乘以10（10 倍稀释），即为实际n万/mL 细胞浓度。
易语言中文编程,从入门到精通【菜鸟基础教程】
绍兴县教研室试点教材汉语编程工具易语言
易语言教程――初级版 目录 目录.......................................................................................................................... - 2 - 第一部分易语言入门.................................................................................................... - 3 - 第一课走进“易”世界........................................................................................ - 3 - 一、打开“易语言”设计窗口 ........................................................................ - 3 - 二、认识“易语言”........................................................................................ - 3 - 三、第一个易程序............................................................................................ - 5 - 四、小结............................................................................................................ - 6 - 第二课简单的人机交互........................................................................................ - 7 - 一、第一个交互程序........................................................................................ - 7 - 二、小结............................................................................................................ - 9 - 第三课按钮与标签的综合运用 .......................................................................... - 10 - 第四课图文并茂.................................................................................................. - 12 - 第五课看看计算机的计算能力 .......................................................................... - 14 - 第六课让世界丰富多彩...................................................................................... - 16 - 第七课顺序程序结构.......................................................................................... - 18 - 第八课猜数（选择程序结构） .......................................................................... - 21 - 第九课多分支控制结构语句 .............................................................................. - 25 - 第十课练习.......................................................................................................... - 27 - 一、选择题：.................................................................................................. - 27 - 二、编程题：.................................................................................................. - 27 - 第十一课循环程序结构...................................................................................... - 29 - 第十二课循环程序结构练习 .............................................................................. - 33 - 一、选择题...................................................................................................... - 33 - 二、编程题...................................................................................................... - 34 - 第十三课菜单的设计.......................................................................................... - 36 - 一、菜单的基本概念...................................................................................... - 36 - 二、菜单编辑器的打开 .................................................................................. - 36 - 三、设计下拉式菜单...................................................................................... - 37 - 第十四课对话框.................................................................................................. - 41 - 一、提示类对话框.......................................................................................... - 41 - 二、自定义对话框.......................................................................................... - 42 - 三、通用对话框.............................................................................................. - 43 - 附录实例应用荟萃.............................................................................................. - 45 -