淀粉样物质染色液(改良Highman刚果红法)染色步骤及注意事项
淀粉样物质染色液(改良Highman刚果红法)染色步骤及注意事项
货号：G1534
规格：3×50ml
保存：室温，避光，6个月。
产品说明：
淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。后来经过Highman改良，染色效果更好。改良Highman刚果红染色又称甲醇刚果红染色，主要由刚果红染色液和Mayer苏木素染色液等组成。
操作说明：（仅供参考）
1、用10%的中性福尔马林常规固定，常规脱水包埋。
2、切片厚度4μm，常规脱蜡至水。
3、入改良Highman染色液浸染10min，弃余液。
4、Highman分化液分化2-5s，立即入水终止分化，水洗2次后镜下控制至恰当程度。
5、自来水冲洗5min。
6、入Mayer苏木素染色液浅染细胞核1-2min或更短时间。
7、自来水冲洗5min。
8、逐级常规乙醇脱水。二甲苯透明，中性树胶封固。
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、Highman分化液应密闭保存，一旦开启尽快用完。
3、改良Highman染色液染色时尽量采用浸染，如果滴染，应置于湿盒防止溶液挥发。
4、Highman分化液分化步骤很重要。分化时间较短，胶原纤维也被染成红色；分化过度，淀粉样物质也被脱色。如果脱色过度，可以将切片清洗后重新用刚果红染色液浸染。
5、脱水应迅速，避免脱色。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
革兰氏染色的实验原理
革兰氏染色的实验原理 ●G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 ●G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 涂片固定→结晶紫初染（碱性）→碘液媒染→乙醇（丙酮）脱色→番红复染（碱性）
◆◆◆原理： 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用酒精脱色时细胞壁脱水，使舦聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同，由于其细胞壁舦聚糖层较薄，类脂含量较高，，所以当脱色处理时，类脂质被酒精溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 ◆◆实验步骤： 1、制片 涂片——干燥——固定 2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟，水洗； 3、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟； 4、脱色 滴加95%酒精脱色，25-30秒，立即水洗； 5、复染 用番红液复染约2分钟，水洗； 6、镜检 干燥后，用油镜观察。 细菌：细菌是一种具有细胞壁的单细胞微生物，在适宜条件下，能进行无性二分裂繁殖，其形态和结构相对稳定。一般体积微小，通常需要借助光学显微镜才能看到，其测量单位用微米表示。
最优考马斯亮蓝染色Protocol
考马斯亮蓝染色 推荐选用前三种染色方法，另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验，染色效果不好，不推荐使用，仅供参考。（见后页比对照片） 操作步骤： 1、取出SDS-PAGE凝胶，经超纯水漂洗；（以下每步操作皆在摇床上进行。） 2、固定：将凝胶放入相应的固定液中，固定1小时； 3、染色：取出凝胶，放入相应的染色液中，过夜染色；（也可依实际情况缩短时间） 4、脱色（胶体法&改良法）：凝胶放入纯水中洗脱，换液数次； 脱色（Neuhoff法）：取出凝胶，用0.1 M Tris-H3PO4缓冲液（pH6.5）漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗＜1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。 试剂的配制： 1、胶体考马斯亮蓝染色法（colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：1.6%磷酸、8%硫酸铵、0.02% CBB-G250、20%乙醇 脱色液：H2O 2、改良考马斯亮蓝染色法（modified Coomassie brilliant blue，mCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、0.12% CBBG250、20%乙醇（着色1小时即可）。 脱色液：H2O 3、Neuhoff染色法： 固定液：12%三氯醋酸 染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、0.02% CBB-G250、使用前振摇。染色时，取一定体积的染色液，加入1/4体积的甲醇。 脱色所需：0.1 M Tris-磷酸缓冲液（pH6.5）、25%乙醇、10%醋酸
4、传统考马斯亮蓝染色法： 固定液：45.4%甲醇、4.6%乙酸 染色液：45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.1% CBB-G250 脱色液：5%甲醇、7.5%乙酸 5、网上方法： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：30%甲醇、10%乙酸、0.125% CBB-G250 脱色液：30％甲醇，10％乙酸 比对照片：每块胶左道是Marker（质量原因，未跑开( ˇ?ˇ )）上样量5μl，右道是BSA（分子量68kDa），上样量为3μg. Neuhoff法 传统法胶体法改良法网上法
刚果红染色PDCA
病理技术组特殊染色PDCA 循环 问题描述： 2018年4月诊断医师反应科室刚果红染色效果不佳影响疾病诊断，主要表现在淀粉样着色和纤维组织的着色不易区别，质控小组统计了上半年连续四个月特染结果数据（表一及图一 ），1-3月特染切片优良率统计均符合三级甲等医院要求（优秀率≥90%；优良率≥98%），而4月份统计数据显示该月特染质量明显下降且低于规范要求（优秀率84%；优良率90%），已经严重影响病理诊断的及时性和准确性。 表一 图一 75 80 85 90 95 100 一月 二月 三月 四月 优秀率 优良率
原因分析： 对2018年4月所有特染切片染色项目构成和评分结果为乙、丙、丁的染色项目进行统计，数据显示影响特染优良率的主要因素是刚果红染色和MASSON 染色（表二，图二），其中又主要是刚果红染色结果对优良率影响最大（表三，图三），因此最快时间内使优良率达到相关规范要求，可通过改进刚果红染色来实现。 表二. 图二 表三 图三 质控小组组织阅片医师及病理技师集体讨论和分析刚果红染色不合格的可能原因： 1.试剂原因：科室刚果红染色为手工染色法，所有试剂均为手工配制，由于标本量较小，染液用量不大且周期较长，很可能是刚果红染液近效期或过期导致试剂失效； 2.人员原因：该岗位人员是否依据SOP 操作；责任心；实践及理论培训是否合格； 3.方法学：本科室刚果红染色项目开展时间不长（2年），目前的方法学选择在当时并未经过严密的论证，且因为标本量很少，在阅片和染色两方面均没有积累太多经验，所以
不排除方法学本身的不足导致染色失败。 图四 预期改进目标： 制定改进计划措施并实施，在本年度5月底使特殊染色优良率≥98%，优秀率≥90。改进计划（PLAN）： 专业组全体人员就解决方案进行分析和讨论，针对不同的原因给出针对性的解决方案并明确责任人和实施时间表： 1.制度和规范因素排查：5月3-4日，实验室主任和专业组长一起核查刚果红染色所涉及的方法学及仪器设备SOP的书写和操作步骤规定是否存在错误和不当，如有不当和错误则进行全员讨论并进行更正（XX、XX、XX）。 2.试剂因素排查：5月3-11日由XX、XX、XX通过查阅试剂配制记录表及现场查看对刚果红染色所涉及的试剂有效期进行确认； 3.环境及仪器因素排查：5月7-9日，XX、XX、XX通过查阅室内温湿度记录表排除环境因素；对试剂配制中用到的玻璃器皿，试管等按规范进行彻底清洗。 4.人员因素排查：5月14-18日由XX替代当班特染操作者XX进行刚果红染色；如结果无变化则重新更换所有液体两人同时对标本进行染色。 5.方法学因素排查：如以上各因素均排查完毕但染色结果无改进则应该考虑方法学本身的问题，5月14-18日，XX、XX、XX分别通过查阅电子文献、纸质版文献书籍及同行求教等方式确定新的刚果红染色方法并进行方法学验证。 计划实施(DO)： 1.人员因素：XX代替XX对标本进行刚果红染色，染色结果与之前相比没有改进，因
考马斯亮蓝染色套装使用说明
考马斯亮蓝染色套装使用说明 货号：P1305 保存：室温保存，至少一年有效。 规格：100ml+500ml 产品简介： 本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的 考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 产品内容： 考马斯亮蓝染色液100ml 考马斯亮蓝脱色液500ml 说明书1份 使用方法： 1、电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积)，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动，室温染色至少2小时，低丰度蛋白染 色需4小时以上。 3、染色结束后移除染色液，染色液通常可重复利用2-3次，但染色效
果会略有影响。 4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中，摇床上脱色4-8小时，期间更换3-5次脱色液。 注意事项： 1.染色时间4小时以上效果最佳。 2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止，或延长脱色时间。 3.脱色越彻底，检测的蛋白量越低，脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。 4.脱色后，将凝胶保存在水中，拍照或扫描保存图像。或制成干胶保存。 相关试剂： P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液 PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒 PR1400低分子量蛋白MARKER PR1700预染次高分子量蛋白MARKER I1020IPTG溶液(50mg/ml) A101030%丙烯酰胺(29:1) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
考马斯亮蓝染色法
蛋白质浓度的测定──考马斯亮蓝染色法 目的要求 学习考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度的原理和方法。 实验原理 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。 考马斯亮蓝G―250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’s law）。此染料与蛋白质结合后颜色有红色形式和蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。 蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1h，之后，蛋白质―染料复合物发生聚合并沉淀出来。蛋白质―染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，在测定溶液中含蛋白质5μL/ml时就有0.275光吸收值的变化，比Lowry法灵敏4倍，测定范围为10－100μg蛋白质，微量测定法测定范围是1－10μg蛋白质。此反应重复性好，精确度高，线性关系好。标准曲线在蛋白质浓度较大时稍有弯曲，这是由于染料本身的两种颜色形式光谱有重叠，试剂背景值随更多染料与蛋白质结合而不断降低，但直线弯曲程度很轻，不影响测定。 此方法干扰物少，研究表明：NaCl，KCl，MgCl2，乙醇，（NH4）2SO4无干扰。强碱缓冲液在测定中有一些颜色干扰，这可以用适当的缓冲液对照扣除其影响。Tris，乙酸，2―巯基乙醇，蔗糖，甘油，EDTA及微量的去污剂如Triton X―100，SDS，玻璃去污剂有少量颜色干扰，用适当的缓冲液对照很容易除掉。但是，大量去污剂的存在对颜色影响太大而不易消除。 试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G―250 100mg溶于50ml95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G―250，4.7%(W/V)乙醇。 二、标准和待测蛋白质溶液 1．标准蛋白质溶液 结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用0.15mol/LNaCl配制成1mg/ml，0.1mg/ml蛋白溶液。 2．未知蛋白质溶液。 三、器材 试管及试管架，移液管（0.1ml及5ml），UV－2000型分光光度计。 操作方法
染色方法总结
mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00 AgNOR染色法: 1、试剂配制： （1）AgNOR染色液： 甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。 乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。 （2）AgNOR工作液 取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。 2、步骤： （1）切片脱蜡至水 （2）双蒸水洗2次 （3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次 （5）脱水,透明,封固 3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。 B 鞭毛染色法: １．试剂配制： 甲液：丹宁酸５克 氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克 福尔马林（１５％）２．０毫升 氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升 乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克 蒸馏水１００毫升 制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。 ２．染色方法： （１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。 （２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。 （３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。 （４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
病理学技术—特殊染色最最全总结
结缔组织染色法 Mallory三色染色法 蓝色：胶原和网状纤维 淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质 红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒 橘红色：髓鞘、红细胞 图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则 . Masson三色染色法 绿色：胶原纤维 红色：肌纤维 橘红色：红细胞 图表 B Mssson三色法 图表 C 三色染色胃癌组织中血管平滑肌 . 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法 红色：胶原纤维 黑色：网状纤维 绿色：弹性纤维 淡黄色：肌肉、红细胞
二、胶原纤维染色法 . Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法 鲜红色：胶原纤维 黄色：肌纤维、细胞质、红细胞 蓝褐色：胞核 图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法 图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)
黄色：其他 三、网状纤维染色 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）
黄棕色：胶原纤维 淡红色：细胞质（红液复染） 图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 Gomori氏银氨液配制法 图表 G Gomori氏银氨液配制法 四、弹性纤维染色 Gomori醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳 图表 H 醛复红染色法 五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法 蓝绿色：弹性纤维 红色：胶原纤维 黄色：背景
六、肌肉组织染色 △横纹肌组织染色 Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH） 蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨 微紫色：粗弹性纤维（有时） 紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌 图表 J .磷钨酸苏木素法 图表 K .磷钨酸苏木素染色液 △早期心肌病变组织染色 染色法（1974年）
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
微生实验报告 姓名： xx 专业年级：2011级生物技术 学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔
径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种： 金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂： 草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚： 乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材： 废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片： 取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干： 让涂片自然晾干。 3．固定：
革兰氏染色法的步骤
革兰氏染色法的步骤 详细阐叙革兰氏染色法的步骤 浏览次数:174次悬赏分:0 |解决时间:2011-5-25 17:44 |提问者:肖箫 2011shaw 最佳答案 革兰氏染色 一、目的:在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。 二、原理: 通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。 三、实验用品准备: 灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器 四、操作: 1 涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2 干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3 固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 5 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6 媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min。
常规考马斯亮蓝染色液
常规考马斯亮蓝染色液 简介： 考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的常规染色或Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。采用常规染色方法需至少1h ，采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)常规染色脱色方法 1、PAGE 电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用次。 4、加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。Leagene 推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸馏水。 5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色。期间更换脱色液2～4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1～2h 后即可出现。 6、完成脱色后把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 (二)快速染色脱色方法 1、PAGE 电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 2、随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用2～3次。 编号 名称 PT0018 PT0018 Storage Commassie Blue Staining Solution 100ml 500ml RT 使用说明书 1份
最优考马斯亮蓝染色Protocol
最优考马斯亮蓝染色 P r o t o c o l Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】
考马斯亮蓝染色 推荐选用前三种染色方法，另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验，染色效果不好，不推荐使用，仅供参考。（见后页比对照片） 操作步骤： 1、取出SDS-PAGE凝胶，经超纯水漂洗；（以下每步操作皆在摇床上进行。） 2、固定：将凝胶放入相应的固定液中，固定1小时； 3、染色：取出凝胶，放入相应的染色液中，过夜染色；（也可依实际情况缩短时间） 4、脱色（胶体法&改良法）：凝胶放入纯水中洗脱，换液数次； 脱色（Neuhoff法）：取出凝胶，用 M Tris-H3PO4缓冲液（）漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗＜1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。 试剂的配制： 1、胶体考马斯亮蓝染色法（colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇 脱色液：H2O 2、改良考马斯亮蓝染色法（modified Coomassie brilliant blue，mCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇（着色1小时即可）。 脱色液：H2O 3、Neuhoff染色法： 固定液：12%三氯醋酸
染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇。染色时，取一定体积的染色液，加入1/4体积的甲醇。 脱色所需： M Tris-磷酸缓冲液（）、25%乙醇、10%醋酸 4、传统考马斯亮蓝染色法： 固定液：%甲醇、%乙酸 染色液：%甲醇、%乙酸、% CBB-G250 脱色液：5%甲醇、%乙酸 5、网上方法： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250 脱色液：30％甲醇，10％乙酸 比对照片：每块胶左道是Marker（质量原因，未跑开( ˇˇ )）上样量5μl，右道是BSA（分子量68kDa），上样量为3μg.
革兰氏染色实验
革兰氏染色实验 革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。(这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明)。 未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。 阳性紫色，阴性红色 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌： 革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要的病原菌。
革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆 菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎 双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克 雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢 疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜 血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍 乱弧菌、阴沟肠杆菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细菌感染中 占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐药，产生“新德里金 属酶”（NDM-1）的绝大多数细菌都是革兰氏阴性菌（主要是大肠 杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌）。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌是利用革兰氏染色法来鉴别的两大类细菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。 细胞形态和结构 细胞的基本结构包括细胞壁和原生质体两部分。原生质体位于细胞壁内，包括细胞膜（细胞质膜）、细胞质、核质和内含物。另外细胞还含有有些特殊结构，主要有荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛等4种。 1.细胞壁
一种简便的考马斯亮蓝G250蛋白质染色方法_江南
经验交流 一种简便的考马斯亮蓝G250蛋白质染色方法* 江南1)吴开力黄强潘苏华 (中山医科大学中山眼科中心,广州510060) 摘要介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G250(CBB G250)染色方法.该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBB G250,CBB G250的工作浓度为010015%,灵敏度达0102L g/带,染色2h达70%,4h以上或染色过夜即可充分染色.与以往的考马斯亮蓝染色方法相比,该方法有经济方便、灵敏度高、几乎无背景等优点,便于推广应用. 关键词电泳,染色方法,考马斯亮蓝G250 学科分类号Q5-33 蛋白质电泳后染色方法有多种:氨基黑染色、考马斯亮蓝染色和银染色等.其中考马斯亮蓝染色克服了氨基黑染色灵敏度较低,和银染法操作复杂、假阳性率高的缺点,是最常用的染色方法.但它仍然存在一些问题,如考马斯亮蓝R250 (CBB R250)背景深、耗时长;CBB G250灵敏度不高;二者所耗试剂均较多.近几年,人们对考马斯亮蓝染色法作了许多改进,不同程度地改善了某些方面的问题,但仍未尽善.本文介绍一种经济快速,灵敏度高,几乎无背景的CBB G250染色方法. 1材料和方法 111材料 11111蛋白质样品:牛血清白蛋白(BSA)购自Bio-Rad公司;小牛晶状体的alpha晶体蛋白由Sephadex G200sf两次柱层析(100cm@116cm和40cm@116cm)分离获得. 11112染色液配制:1mol/L盐酸溶液(A), 1g/L CBB G250溶液(B);应用时用1ml A液和15ml B液混合加水至1L,搅拌混匀. 11113仪器:Bio-Rad Model1000/500电泳仪; Bio-Rad(M in-i Proteanò)电泳槽.DY-1500A型高压电泳仪;Pharmacia Biotech(M ultiphorò)电泳槽. 112方法 11211电泳:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、等电聚焦(IEF)参照郭尧君等[1]方法操作. 11212染色程序:a1电泳完毕,取出凝胶浸于5mmol/L盐酸溶液中,振荡1h;b1弃去盐酸溶液,重复步骤a;c1将胶置于染色液中,染色2~ 16h,连续振荡;d1弃去染色液,将胶置于1mmol/L盐酸溶液中脱色数小时(换液3~5次).最后对凝胶进行观察和照相,并将凝胶保存于1mmol/L盐酸溶液中. 11213凝胶染色图象分析:在染色和漂洗过程中应用Alphaimag e2000Documentation&Analysis System对凝胶照相(同一照相条件及参数)并作蛋白质条带染色强度分析;观察染色的强度变化时,以同一参照点分别测定蛋白质条带和凝胶背景的染色强度;测定漂洗时染色强度变化则以蛋白质条带的强度减去背景强度后作为该蛋白质条带的染色强度;染色强度和加样量的相关性分析采用Video DensitometeròSystem(USA Biomed Instrument.Inc),扫描每条蛋白质条带的染色强度并计算其与加样量的依存关系;染色的灵敏度通过加样不同浓度(\10ng)的BSA,染色后以肉眼能观察到的最低浓度的条带为标准. *广东省自然科学基金项目(970084)部分工作. 1)通讯联系人. Tel:(020)87330395,E-mail:yunj uyan@https://www.360docs.net/doc/a95045131.html, 收稿日期:1999-08-15,修回日期:2000-01-04 # 560 #生物化学与生物物理进展Prog.Biochem.Biophys.2000;27(5)
2021年革兰氏染色实验步骤
革兰氏染色 欧阳光明（2021.03.07） 一．实验流程： 1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。 2、涂片： 液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。 固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。 3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。 4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。 5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。 6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。 7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。 8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s至流出液
无紫色，立即水洗。 9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束。 二．染色结果：革兰氏阳性菌都呈紫色，革兰氏阴性菌都呈红色。 备注： 1.革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要等病原菌。 2.革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍乱弧菌、阴沟肠杆菌等。
考马斯亮蓝染色
考马斯亮蓝染色 一产品简介： 本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。 本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。二保存条件：室温保存，至少一年有效。 注意事项： 可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。 本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 三使用说明： 1. 常规染色脱色方法： a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。 注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 c. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。 注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 f．完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保 存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。 2. 快速染色脱色方法： a. 电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。 b. 随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5-10分钟。 c. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 e. 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 f. 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。 g. 更换新鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达到预期。
实验二 革兰氏染色法
实验二革兰氏染色法 【实验目的】 1.学习并初步掌握革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 3.巩固显微镜油镜的使用方法。 【实验仪器、材料】 1.菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。 2.染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复红染液）。 3.仪器及其他物品： 显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。 【实验内容】 革兰氏染色法 一、染色标本制备 1.涂片取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴加菌液的相应位置做好标记） 2.干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥。(温度不宜过高) 3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常
用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 二、染色 l.初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。 2.媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。 3.脱色滴加95%乙醇数滴，20s~30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩去积水。 4.复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤纸吸干。 三、镜检 待染色片充分干燥后，用油镜观察。 【实验结果】 葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌； 大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。 注：绘图展示染色结果 【结果分析、讨论（结论与评价）】 注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因。
淀粉样物质染色液(Bennhold刚果红法)
淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法) 简介： 淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官，导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝，大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold 发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片。 Leagene 淀粉样物质染色液(Bennhold 刚果红法)主要由刚果红染色液、苏木素染色液等组成。其染色原理在于淀粉样物质对刚果红比其他的组织结构具有更大的亲和力，其羟基与刚果红的氨基结合，从而使淀粉样物质染成红色。该染色法性能稳定，是非常经典的淀粉样物质染色的方法。 组成： 自备材料： 1、10%中性福尔马林固定液 2、蒸馏水 3、系列乙醇 操作步骤(仅供参考)： 1、常规固定，常采用中性福尔马林，常规脱水包埋。 2、切片厚度，常规脱蜡至水。 3、入Bennhold 苏木素，浸染。 4、酸性乙醇分化，立即入水终止分化，水洗后镜下控制至恰当程度。 编号 名称 DG0021 5×50ml Storage 试剂(A): Bennhold 苏木素染色液 50ml RT 避光 试剂(B): 酸性乙醇分化液 50ml RT 试剂(C): Scott 蓝化液 50ml RT 试剂(D): 刚果红染色液 50ml RT 避光 使用说明书 1份
实验四 细菌的革兰氏染色与芽孢染色
实验四细菌的革兰氏染色与芽孢染色 一、目的要求 1.学习并初步掌握细菌的革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 二、实验材料 1.菌种：金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）大肠杆菌（E.coli） 2.试剂：草酸铵结晶紫、路哥氏碘液、95%乙醇、番红液 3.其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌水、香柏油、二甲苯等。 三、实验原理 革染氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的。通过革兰氏染色可把细菌区分为两大类。 革染氏染色的基本步骤：先用结晶紫初染、次经碘液媒染、再用95%乙醇脱色、最后用蕃红复染。经过此法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的细菌为革染氏阳性菌；如果细胞染上复染的红色的细菌为革染氏阴性菌。大肠杆菌是标准的革染氏阴性菌，金黄色葡萄球菌是标准的革染氏阳性菌。 革染氏染色的机理，与细菌细胞壁的化学组成和结构有关。经结晶紫初染以后，所用的细菌都被染成蓝紫色。碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合形成复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用乙醇脱色时，两类细菌的脱色效果是不同的，革染氏阳性细菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成、壁厚、类脂含量低，用乙醇脱色处理时细胞壁脱水、使肽聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内；革染氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖层在内层且较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂被乙醇溶解、细胞壁透性增加，使结晶紫-碘的复合物被洗脱出来。用蕃红复染时染上红色。 四、操作步骤 1.细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养约24h。 2.制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 3.初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 4.媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 5.脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载 玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显的紫色时，立即水洗。酒精的浓度、用量及涂片厚度都会影响脱色速度。脱色是革兰氏染色中最关键的一步。 6.复染：滴加番红液，染色2min，水洗。 7.用滤纸吸干，油镜镜检。 五、注意事项 为了保证革染氏染色结果的正确性，制片过程中要注意：要选用活跃生长的幼培养物作革染氏染色，涂片不宜过厚，火焰固定不已过热，脱色时间的控制。另外，可选用标准的革染氏阳性菌和革染氏阴性菌和未知菌一起混合涂片和染色。 六、实验内容 1.分别对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌进行革兰氏染色 2.对上述两种菌进行混合涂片，再进行革兰氏染色。 七、实验报告
考马斯亮蓝快速染色液
考马斯亮蓝快速染色液 简介： 考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考马斯亮蓝G250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的快速染色，亦可用于Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。 Leagene 考马斯亮蓝快速染色液采用Leagene 自主研发的技术，在传统考马斯亮蓝快速染色液的基础上进行改良，是一种无毒的染色液，快速染色液，可以检测低达蛋白电泳条带。其核心优点在于：无需对凝胶进行固定，无需煮沸，无需脱色，染色时间短，操作更加简单。 组成： 自备材料： 1、 水平摇床或侧摆摇床 2、 蒸馏水 3、 (可选)加热装置 4、 20%甘油水溶液 操作步骤(仅供参考)： 1、PAGE 电泳结束后取凝胶放入约蒸馏水中，在摇床上摇动，弃液，重复上述步骤1次。 2、弃蒸馏水，加入Commassie Blue Fast staining solution ，使染色液能盖住凝胶。 3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中，在水浴锅或微波炉内加热至95～100℃，立即从加热装置中取出。(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程，亦可省略。) 4、在摇床上摇动染色，蛋白量大的条带10～15min 左右会出现，大部分蛋白条带会在30～60min 左右出现。一般情况下，5h 能获得极佳效果。 5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色，弃染色液。 6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。亦可以在摇床上摇动脱色，以便减少背景干扰。 7、把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 编号 名称 PT0013 PT0013 Storage 考马斯亮蓝快速染色液 100ml 500ml 4℃ 使用说明书 1份