柔性环孢素纳米脂质体的制备及其变形性
中 国 药 科 大 学 学 报
Journal of China Pharmaceutical University 1999,30(3):187～191
柔性环孢素纳米脂质体的制备及其变形性Ξ
郭健新 平其能 黄罗生1
(中国药科大学药剂学教研室,南京210009;1中药研究所,南京210038)
摘 要 采用与普通纳米脂质体相比较的方法,首次研究了环孢素柔性纳米脂质体的制备方法,测定了粒径、多分散性指数、药物含量以及包封率等理化特性,并证实了其在外压作用下特定的变形性,表明表面活性剂胆酸钠的存在促进脂质体的变形,这种作用与胆酸钠在双分子层中所占比例以及外压有关。
关键词 柔性纳米脂质体;环孢素;胆酸钠;变形性
在脂质体双分子层中加入不同的附加剂可以显著影响脂质体的性质和功能。已有报道表明由磷脂和适当表面活性剂制备得到的纳米脂质体具有充分的柔性,与普通刚性脂质体不同,在作为亲水性蛋白质的透皮给药载体时,该类脂质体受角质层水合所产生的渗透压的影响能发生变形并被“挤入”角质层,因而显著增加药物的经皮渗透[1]。
由于环孢素具有强亲脂性、高分子量(分子量为1202)以及环状结构,经皮转运非常困难,即使转运至真皮以治疗银屑病也未取得令人满意的结果[2]。为了促进环孢素的经皮渗透,也为了对柔性纳米脂质体的形成、变形性以及亲脂性多肽与脂质体之间的相互作用进行探索,本文采用与普通纳米脂质体相比较的方法,首次研究了环孢素柔性纳米脂质体的制备方法、理化特性,并证实了其特定的变形性。此研究尚未见报道。
1 仪器与试剂
J Y292Ⅱ型超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所);0.15μm微孔滤膜(上海医药工业研究院);无油空气压缩机(上海复旦大学科教仪器厂); Zetamaster光子相关光谱仪(英国马尔文仪器公司);H27000型透射电镜(日本Hitachi公司);高效液相色谱仪(Shimadzu LC25A,日本);岛津SPD2 6A型紫外检测器。环孢素A(CyA,药用,浙江温州第二制药厂);注射级豆磷脂(上海浦江磷脂有限公司,批号961204);磷脂酰胆碱标准品(Sigma公司);胆酸钠(Serva进口分装,批号960426,上海化学试剂站分装厂)。其它试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 磷脂酰胆碱的提纯
根据文献方法[3]应用氧化铝柱对注射级豆磷脂提取纯化磷脂酰胆碱。
2.2 纳米脂质体的制备
2.2.1 脂质体混悬液的制备 定量称取磷脂酰胆碱、胆酸钠(磷脂酰胆碱和胆酸钠的总量为7.5%)和环孢素(37.5mg),加入氯仿2甲醇(1∶1)复合溶剂30ml,于37℃恒温水浴中旋转蒸发去除有机溶剂,使磷脂等成膜材料。在烧瓶壁形成均匀类脂薄膜。然后往圆底烧瓶中加入0.9%NaCl水合介质10ml,旋转洗膜2h得到柔性脂质体混悬液。
按相同比例制备处方中不含胆酸钠的普通脂质体混悬液。
2.2.2 探针式超声法制备纳米脂质体 分别将两种脂质体混悬液在冰水浴条件下探针式超声适当时间可得到纳米脂质体胶体溶液,室温放置,经0.15μm微孔滤膜过滤除去探头释放的钛颗粒等杂质。
2.2.3 微孔滤膜滤过法制备纳米脂质体 固定压力P=0.3MPa,在室温下将两种脂质体混悬液分别滤过0.15μm的微孔滤膜。
2.3 纳米脂质体理化性能表征
2.3.1 粒子大小测定 应用Zetamaster光子相关
781
Ξ收稿日期 1999203215 国家自然科学基金资助项目,项目号39770881。
光谱仪测定纳米脂质体的平均粒径和多分散性。
2.3.2 透射电镜观察 应用1%磷钼酸负染色制备样品,于透射电镜下观测并照相。
2.3.3 磷脂氧化产物丙二醛含量测定 磷脂酰胆碱分子中含有不饱和脂肪酸链,易氧化生成丙二醛(MDA)等。丙二醛在酸性条件下可与硫巴比妥酸(TBA)反应,生成的红色产物在535nm处有特异吸收,吸收系数为4780,测定其吸收值即可得出丙二醛的含量[4]。
称取三氯乙酸(TCA)75g,TBA1.875g,加0.25mol/L盐酸500ml,温热溶解过滤后制得TCA2TBA2HCl试液。然后精密量取纳米脂质体胶体溶液1ml,置10ml量瓶中,加入TCA2TBA2 HCl试液5ml,混匀,100℃水浴30min,放冷,加TCA2TBA2HCl试液至刻度,混匀后4000r/min离心5min,以TCA2TBA2HCl试液为空白,测定535 nm处的吸收值。
2.3.4 纳米脂质体胶体溶液中药物含量测定 采用反相HPLC法测定含量。精密移取10μl纳米脂质体于10ml量瓶中,加入无水乙醇,振摇,定容。色谱条件为:色谱柱,Spherisorb C85μm(150 mm×4.6mm,中科院大连化物所);流动相,甲醇2乙醚2水2磷酸(350∶10∶140∶1);柱温,70℃;流速, 1.2ml/min;柱压,60kg/cm2;检测波长,UV210 nm;进样体积为20μl。
2.3.5 包封率及载药量测定 分别采用上述HPLC法测定环孢素在0.9%NaCl水溶液中的溶解度C1及经探针式超声后的溶解度C2,在含1%胆酸钠的0.9%NaCl水溶液中的溶解度C3及经探针式超声后的溶解度C4。然后分别测定不同纳米脂质体胶体溶液中药物含量C0。所有溶液均经0.15μm微孔滤膜过滤。
探针式超声法制备的柔性纳米脂质体包封率:
EE%=[(C0-C4)/C0]×100%
普通纳米脂质体包封率:
EE%=[(C0-C2)/C0]×100%
微孔滤膜滤过法制备的纳米脂质体包封率:
EE%=[(C0-C3)/C0]×100%
载药量Loading%=(W t-W i)/W c×100%,其中W t为脂质体胶体溶液中药物量,W i为溶液中游离药物量,W c为载体材料量。
2.4 变形性考察
研究在外压作用下,脂质体混悬液变形透过孔径为0.15μm微孔滤膜的性能。首先记录5ml水透过微孔滤膜所需时间,然后记录脂质体混悬液5ml透过同一滤膜所需的时间,以此计算相对透过速率P=νliposome/νwater×100%。
根据胆酸钠与磷脂酰胆碱不同摩尔比制备得到的空白及含药脂质体混悬液,在相同的探针式超声(100W,2min)条件下制备得到的混悬液a1和a2(摩尔比为0∶1)、b1和b2(摩尔比为0.14)以及c1和c2(摩尔比为0.28)。考察在不同外压(0.05 MPa、0.1MPa、0.15MPa和0.3MPa)下,六种混悬液的相对透过速率。
3 结果与讨论
3.1 脂质体制备方法及其影响因素
应用薄膜分散法制备脂质体时首先在圆底烧瓶壁形成均匀的磷脂薄膜,水合后则形成乳白色不透明混悬液。应用探针式超声法,输出功率为40W,上述含胆酸钠的柔性脂质体只需2min即可将粒径减少到100nm以下,而制备大小相近仅含磷脂的普通纳米脂质体则需超声20min。同样,在外压P=0.3MPa的条件下,可将柔性脂质体混悬液滤过孔径为0.15μm的微孔滤膜得到平均粒径为153.9nm的柔性纳米脂质体,却不能应用该法滤过得到普通纳米脂质体。提示含有胆酸钠的脂质体具有充分柔性,只需提供较低外压或较低能量即可使大粒子破碎,减小粒径至纳米级别。与探针式超声法相比,微孔滤膜滤过法可在温和条件下使脂质膜破碎和重建,过程可控性较好,较适用于柔性纳米脂质体的制备。
3.2 粒径测定结果
经探针式超声法制备得到柔性纳米脂质体的平均粒径为74.0nm,多分散性指数为0.146;普通纳米脂质体的平均粒径为61.8nm,多分散性指数为0.506。微孔滤膜滤过法制得柔性纳米脂质体的平均粒径为153.9nm,多分散性指数为0. 287。柔性纳米脂质体虽然粒径比普通纳米脂质体大,但多分散性指数却较小,表明由于胆酸钠的加入使得大粒子具有较大变形性易于破裂,粒径分布变得均匀,从而形成近单分散微粒;而普通纳米脂质体具有较大的多分散性指数,表明粒子大小分布较宽,可能与其刚性较大不易破碎有关。
881 中国药科大学学报 30卷
3.3 透射电镜观察结果
图1为纳米脂质体的透射电镜图,可见清晰的指纹状螺旋,提示形成多分子层。柔性纳米脂质体和普通纳米脂质体在电镜下外观上无明显区别
。
Fig1.Transmission electron photomicrographs of nano2liposomes with magnification of180,000.A.flexible nano2liposomes pre2
pared by rotary evaporation2sonication https://www.360docs.net/doc/b814277791.html,mon nano2liposomes.Bar is100nm
3.4 磷脂氧化产物丙二醛含量测定结果
应用探针式超声法制备纳米脂质体时,柔性纳
米脂质体中每毫克磷脂的氧化产物MDA的量为
0.035μg,普通纳米脂质体中每毫克磷脂的氧化产
物MDA的量为0.038μg。应用微孔滤膜滤过法
制备柔性纳米脂质体时,每毫克磷脂的氧化产物
MDA的量为0.031μg。豆磷脂原料中每毫克豆
磷脂的氧化产物MDA的量为0.024μg。根据文
献报道,每毫克磷脂中MDA的含量超过0.1μg
时,即发生溶血[4]。而上述各值不仅均低于0.1
μg,而且与磷脂酰胆碱原料的氧化产物值接近,说
明在制备条件下豆磷脂稳定性较好。应用微孔滤
膜滤过法条件温和,体系温度并不升高,而探针式
超声法虽在瞬时提供能量可能引起体系温度升高,
增加氧化产物的量,但由于采用冰水浴可以减少此
方面的不利影响。
3.5 环孢素含量及包封率测定结果
本色谱条件下磷脂和胆酸钠不影响环孢素的
测定(图2)。环孢素在0.1～4μg/ml浓度范围内
线性良好,回归方程为C=1.33×10-4A+9.93
×10-3(n=5,r=0.9999)。环孢素在不同溶液或
条件下的溶解度C1、C2、C3和C4分别为0.18±
0.02μg/ml,35.22±3.52μg/ml,34.25±2.93μg/
ml和112.3±6.84μg/ml(n=3)。可见环孢素在
水中几乎不溶,1%胆酸钠的加入及探针式超声对
溶解度的增加也很有限。表1列出三种纳米脂质
体中药物含量、脂质体载药量和包封率
。
Fig2.HPLC chromatogram
A.Blank nano2lipsomes.
B.nano2liposomes containing cy2
closporine. 1.Cyclosporine A.
Tab1.The C0,loadings and encapsulation efficiencies(EE%)of
nano2lipsomes(n=3)
Flexible
nano2liposomes1
Flexible
nano2liposomes2
Common
nano2liposmome
C0(mg/ml) 3.297±0.132 3.346±0.075 3.137±0.060
Loading(%) 4.40±0.18 4.46±0.10 4.18±0.08
EE(%)96.60±0.1898.95±0.0998.91±0.08
1prepared by rotary evaporation2sonication method.2prepared by rotary
evaporation2filtration method.
981 3期 郭健新等:柔性环孢素纳米脂质体的制备及其变形性
在包封率测定中,通常应用透析法、葡聚糖凝胶层析法和超速离心法等将脂质体与游离药物分离,测定脂质体混悬液中总药量和未包入脂质体中的药物量。但是由于在处方中加入胆酸钠,透析法和葡聚糖凝胶层析法都可能将胆酸钠从双分子层中移除,改变脂质体的性质。而且纳米脂质体必须在低温超速(20000g )离心1224h 才可能沉降[5]。因此上述的分离方法不适用于柔性纳米脂质体包封率的测定。由于环孢素强亲脂性且难溶于水,本文采用测定相同处方及工艺溶液中药物的溶解度,近似地认为未包裹的游离药物的量相当于药物的溶解度,而不溶的环孢素微晶可以完全被滤膜截留。本法结果表明环孢素脂质体包封率较高,提示磷脂双分子层可显著增溶疏水性环孢素。3.6 变形性在外压作用下,不同组分的脂质体混悬液相对透过速率如图3所示。结果表明,①不含胆酸钠的脂质体混悬液在0.05MPa ～0.3MPa 压力范围内均不能透过孔径为0.15μm 的微孔滤膜。两种含有胆酸钠的脂质体混悬液均能透过滤膜,且透过速率随压力增加而增大。②在相同压力下,脂质体b1、b2与脂质体c1、c2相比,随着胆酸钠用量增加,透过速率增加。胆酸钠引起脂质体变形性增加可能与其扰乱磷脂酰基链的顺序,引起顺序参数(
顺序参
Fig 3.The relative permeability of the lipos omes as a function of the driving
pressure difference across the artificial barrier (D pore =0.15μm )
—◇—lipos ome a1 —□—lipos ome a2 —△—lipos ome b1 —×—lipos ome b2 —Ξ—lipos ome c1 —●—lipos ome c2
数是反映脂质体中链重新定向和异构化的参数)的显著下降[6]等因素有关。相同组分的空白脂质体与含药脂质体相比,含药脂质体的透过速率大,可能与药物和脂质成分的相互作用有关,具体原因有待进一步研究。4 结 论
结合应用薄膜分散法和探针式超声法或固定孔径微孔滤膜滤过法均可制得由胆酸钠和磷脂组成的柔性纳米脂质体。同样应用薄膜分散法并延长探针式超声的时间,也可制得仅由磷脂酰胆碱组成的普通纳米脂质体,但由于刚性太大,不能应用固定孔径微孔滤膜滤过法制备。胆酸钠的存在促进脂质体的变形,随脂质体中胆酸钠用量增加,脂质体的变形性增加。在0.05MPa 外压作用下,柔性脂质体即容易变形通过比其粒径更小的滤膜,以粒径为60nm 计,单个脂质体所受压力为F =5×104πr 2=5.62×10-10N ,而当柔性脂质体混悬液非封闭性应用于皮肤表面时,失水后至少可对粒径为60nm 的脂质体产生10-9N 的压力[1],足以使其变形透过约为30nm 的角质层类脂间隙,因此柔性脂质体可能成为透皮转运的有效载体。
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091 中国药科大学学报 30卷
Studies on Preparation and Deformability of Flexible Nano 2Liposome
Containing Cyclosporine
Guo Jianxin ,Ping Qineng ,Huang Luosheng 1
Depart ment of Pharm aceutics ;1Instit ute of Chi nese T raditional Medici ne ,Chi na Pharm aceu 2tical U niversity ,N anji ng 210038
Abstract The preparation methods of flexible nano 2liposome were compared with common nano 2liposomes ,using cyclosporine A as a model drug.Physical properties including average diameter ,polydispersity ,drug content ,entrapment efficiency ,etc have been investigated.Liposomes with different cholate to lecithin molar ratios were compared by their respective permeability under an external pressure.Results showed that sodium cholate exerted impact on the flexibility of lecithin vesicles ,resulting in highly deformable vesicles.Such an effect was sodium cholate to lecithin molar ratio and stress dependent.
K ey w ords Flexible nano 2liposome ;Cyclosporine A ;Sodium cholate ;Flexibility
(上接第173页)
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1
913期 郭健新等:柔性环孢素纳米脂质体的制备及其变形性
纳米脂质体材料在肿瘤研究中的应用--综述
纳米脂质体材料在肿瘤研究中的应用 （注：自己总结的留着看的，没有发表过。只希望有这方面兴趣的人看看） 摘要：纳米材料作为药物载体，具有延长药物半衰期等特性，另外通过修饰的纳米材料具有高的生物靶向能力，在肿瘤研究中应用越来越广泛，本文通过对近年来国内国外利用载药纳米材料，特别是纳米脂质体，在肿瘤相关研究中的进展、热点及难点做一综述。 关键词：纳米材料；肿瘤治疗；纳米脂质体 癌症严重威胁着人类的健康和生命，过去30年里，肿瘤领域的研究取得了重大的进展，信号转导网络与调控在肿瘤的发生、发展、转移中起重要作用，而针对信号转导通路中的关键因素研发的各种药物在治疗肿瘤方面的进展也是突飞猛进。化学治疗是重要的癌症治疗手段之一, 许多化疗药物如5-氟脲嘧啶(5-Fu) 、阿霉素、顺铂、长春新碱等通过细胞凋亡的途径杀死肿瘤细胞, 但是这些药物由于对机体毒性大，分子量大难以到达病患处，限制了其在临床中应用。研发新的抗癌药物费用高昂且周期长, 无法满足临床需要。因此利用制剂新技术提高现有抗癌药物疗效, 减小或消除其毒副作用，增强药物靶向性显得尤为重要【1~2】。 纳米载体作为载药材料，一般需要制成球状或囊状即纳米球或纳米微囊，纳米球或微囊的粒径大小在10～1000 nm之间，其组成为天然或合成高分子物质。这些天然或合成高分子物质包括脂质体，壳聚糖，纳米金，氧化石墨烯等【3】。纳米材料是新型的药物和基因输运载体, 具有很多传统药物载体无法媲美的优点，在下面的文章中以纳米脂质体作为例子来做一综述。 一、纳米脂质体的组成结构 纳米脂质体即脂质体的纳米级结构，是磷脂依靠疏水缔合作用在水中自发形成的一种分子有序的组合体，为多层囊泡结构，每层均为类脂双分子膜，内外表面均为亲水性，双分子膜之间为亲脂性。脂质体膜主要由磷脂与胆固醇构成。脂质体按结构分为小单室脂质体（SUVs ）、大单室脂质体（LUVs）、多室脂质体(MLVs)、大多孔脂质体(MVVs)几类，见图一。纳米脂质体以纳米级小单室结构为主，经过修饰及载药处理后形成载药纳米脂质体，见图二。 图一按结构分类的脂质体图二经过修饰和载药的阿霉素纳米脂质体 二、纳米材料优点 纳米材料特别是纳米脂质体作为药物载体在肿瘤诊断、影像和治疗领域取得了令人瞩目的成就，主要原因归功于它的优点【4】。(1) 广泛的载药适应性,水溶性药物载入内水相,脂
8—甲氧补骨脂素柔性纳米脂质体治疗白癜风的临床疗效评价
8—甲氧补骨脂素柔性纳米脂质体治疗白癜风的临床疗效评价 目的观察8-甲氧补骨脂素（8-MOP）柔性纳米脂质体凝胶对白癜风的临床疗效。方法选择95例患者，随机分为治疗组46例和对照组49例，治疗组予以8-MOP柔性纳米脂质体凝胶外搽，对照组予以普通8-MOP凝胶外搽，均2次/d，疗程共4个月，每月门诊复诊1次，观察临床疗效、不良反应及相关生化检测指标血清抗氧化酶包括过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、谷胱甘肽还原酶（GR）及脂质过氧化物丙二醛（MDA），另选择10例健康志愿者。结果治疗组疗效显著优于对照组，相比较有统计学差异（χ2=5.76，P＜0.05）；生化指标方面，治疗后治疗组、对照组两组CAT、GR、GSH-Px指标与正常健康者相比，均P＜0.05，差异有统计学意义，MDA指标相比P>0.05，差异无统计学意义。两组不良反应发生率分别为10.87%、12.24%，未见系统性不良反应。结论8-MOP柔性纳米脂质体凝胶治疗白癜风临床疗效确切，安全性高。 标签：白癜风；抗氧化 白癜风（vtiligo）是一种常见的获得性、进行性发展的色素脱失性皮肤病，症状表现为局限性或泛发性的皮肤黏膜色素斑，病因复杂，发病机制尚未阐明，可能由遗传、环境、免疫等多种因素相互作用对黑素细胞产生直接抑制或损害而诱发白斑[1，2]。补骨脂素是一种较早应用于临床的药物，主要通过光敏反应发挥生物效应[3]，但是系统应用不良反应严重、局部使用对皮肤刺激性较强[4，5]。近年来，脂质体以其高渗透性、高度靶向性等特性引起人们的高度重视，而这些特性对白癜风的外用药物治疗非常有利。结合以往相关研究，本实验通过以柔性纳米脂质体为载体，包裹8-甲氧补骨脂素（8-MOP），将发挥纳米脂质体制剂的特殊优势，为治疗白癜风提供一个全新的思路。 1资料与方法 1.1 一般资料入选标准：①均符合白癜风诊断标准；②年龄12～65岁，男女性别不限；③在治疗前4w均未使用治疗白癜风的外用制剂或皮肤科其他外用药物；④在治疗前12周均未接受白癜风系统性药物治疗及其他光敏性药物治疗； ⑤无光敏性疾病，无合并糖尿病、甲亢、肿瘤等，无肝肾等重要器官功能障碍，女性患者无妊娠；⑥所有的患者均未接受相关光化学治疗；⑦自愿接受试验、能够严格遵循治疗方案要求、可定期复诊。排除标准：对研究药物中的任何成分过敏者；孕妇及哺乳期妇女；有重大系统性如心脏、肝肾等损害；未按规定用药，中途退出，无法判断疗效或资料不全等影响疗效或安全性判断。 所有入选病例均为南海中医院皮肤性病科门诊就诊患者，共95例。参照文献标准分型，局限型47例，散发型20例，肢端型11例，节段型11例，泛发型6例。80例患者为稳定期患者，15例为进展期患者。根据随机数字表将入选的患者随机分为治疗组、对照组两组，治疗组46例，对照组49例。对照组完成随访的患者49例，男22例、女27例，年龄15～55岁，平均（28.6±15.2）岁，病程6～36个月，平均（13.5±8.5）个月。治疗组完成随访的患者46例，男21例、
脂质体制备方法
微脂体(又称脂质体)及其制备方法一二 微脂体(又称脂质体) 微脂体起源于1960 年代中期，Bangham博士等人首先提出，在磷酸脂薄膜上加入含盐分的水溶液后，再加以摇晃，会使脂质形成具有通透性的小球；196 8年，Sessa 和Weissmann 等人正式将此小球状的物体命名为微脂体（liposo me）并做出明确的定义: 指出微脂体是由一到数层脂质双层膜(lipid bilayer) 所组成的微小的囊泡，有自行密合（self-closing）的特性。微脂体由脂双层膜包裹水溶液形成，由于构造的特性，可同时作为厌水性（hydrophobic）及亲水性（hydrophilic）药品的载体，厌水性药品可以嵌入脂双层中，而亲水性药品则可包覆在微脂体内的水溶液层中。如同细胞膜，微脂体的脂质膜为脂双层构造，由同时具有亲水性端及厌水性端的脂质所构成，脂双层由厌水性端相对向内而亲水性端面向水溶液构成，组成中的两性物质以磷酸脂质最为常见。微脂体的形成是两性物质在水溶液中，依照热力学原理，趋向最稳定的排列方式而自动形成。微脂体的性质深受组成脂质影响，脂质在水溶液的电性，决定微脂体是中性或带有负电荷、正电荷。此外，磷酸脂碳链部分的长短，不饱和键数目，会决定微脂体的临界温度(transition temperature, Tc)，影响膜的紧密度。一般来说，碳链长度越长临界温度越高，双键数越多则临界温度越低，常见的DPPC(dipalmitoylp hosphatidylcholine)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的临界温度分别是42℃与56℃，而Egg PC(egg phosphatidylcholine)与POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的Tc 则低于0℃。临界温度影响微脂体包裹及结合药物的紧密度，当外界温度高于Tc时，对膜有通透性的药物，较容易通过膜；此外，当外界温度处于临界温度时，微脂体脂质双层膜中的脂质，会因为流动性不一致而使微脂体表面产生裂缝，造成内部药物的释出。在磷脂质内加入胆固醇，会对微脂体性质产生下列影响：增加微脂体在血液中的安定性，较不易发生破裂；减少水溶性分子对微脂体脂膜的通透性；增加微脂体的安定性，使其在血液循环中存在的时间较长。 微脂体可依脂双层的层数或是粒子大小，加以命名或分类： (1) Multilamellar vesicle（MLV）是具有多层脂双层之微脂体，粒子大小介于100-1000 nm，特色是粒子内具多层脂质膜，一般而言，干燥后的脂质薄膜，
利多卡因柔性纳米脂质体的制备及质量评价
山西大学学报(自然科学版)31(1):80～84,2008 Journal of Shanxi U niversity(N at.Sci.Ed.) 文章编号:025322395(2008)0120080205 利多卡因柔性纳米脂质体的制备及质量评价Ξ 申玉坤1,2,张阳德1,潘一峰13 (1.中南大学湘雅医学院卫生部纳米生物技术重点实验室,湖南长沙410008; 2.长治医学院,山西长治046000) 摘 要:以磷脂、胆固醇为膜材,加入表面活性剂胆酸钠,采用真空旋转蒸发法制备利多卡因柔性纳米脂质体,以高效液相色谱法测定利多卡因含量,并对制剂的形态学、包封率进行研究.结果表明:利多卡因柔性纳米脂质体的平均粒径为(106±6.88)nm,利多卡因检测浓度线性范围为20Λg mL～500Λg mL(r=0.99995),平均回收率为(100.4±0.44)%(n=3),包封率为(80.1±1.02)%(n=5).结论:利多卡因柔性纳米脂质体制备工艺可行,质量控制方法简便、可靠. 关键词:利多卡因;柔性纳米脂质体;含量测定;高效液相色谱法 中图分类号:R927.2;R971+.2 文献标识码:A 利多卡因为酰胺类局麻药,通常以一水盐酸盐的形式存在,是临床麻醉与疼痛治疗中最常用的局麻药,也是公认的强效局麻药之一,具有物理化学性质稳定、起效快、局麻作用维持时间长、毒性小等优点[1].国内临床上主要使用盐酸利多卡因注射剂,还有5%的胶浆剂用于粘膜麻醉,由于注射剂众所周知的缺点使其应用受到一定限制,国外除此之外还有贴剂、喷雾剂、霜剂、软膏和凝胶剂等用于粘膜和皮肤的局部麻醉[2].目前脂质体已成为经皮给药体系的新的研究热点,经皮给药可提高局部的药物浓度,增强疗效,降低全身的药物不良反应,但表皮层的屏障作用使很多药物不易通过这种给药途径发挥疗效,特别是水溶性药物及大分子药物,脂质体由于其制备材料及特殊的结构,与传统软膏、乳膏、凝胶相比,不仅能增强药物的透皮效率,还可克服透皮贴剂长期使用对皮肤的刺激[3].用脂质体包药经皮给药研究的报道很多,但鲜见用柔性纳米脂质体包封利多卡因药物来达到局部麻醉方面研究的报道.柔性纳米脂质体对药物经皮渗透具有促进作用[4,5],为了方便用药,提高药物的透皮渗透速率来免去注射剂使用时造成的痛苦,本文进行了用柔性纳米脂质体包封利多卡因透皮达到麻醉的前期研究,本研究中在脂质体组分中加入少量适宜的表面活性剂可以形成柔性纳米脂质体,会改变脂质体的变形性和理化性质,相比较非柔性的脂质体,柔性纳米脂质体使药物的透过率大大增加[6].局部应用柔性纳米脂质体,具有延缓药物释放的作用[7],最终来达到延长局麻和镇痛时间的目的.因此,具有非常重要的研究意义及价值. 1 试药与仪器 卵磷脂(国药集团化学试剂有限公司);胆固醇(国药集团化学试剂有限公司);胆酸钠(国药集团化学试剂有限公司);盐酸利多卡因注射液(湖南洞庭药业股份有限公司);冰醋酸、三乙氨、氯仿、无水乙醇、甲醇等试剂均为A R(分析纯). 电子分析天平(日本岛津公司);激光粒度分析仪(上海爱建纳米科技发展有限公司);S IG M A超速冷冻离心机(德国S IG M A公司);SZ-97自动三重纯水蒸馏器(上海精科有限公司);P680A型高效液相色谱仪 Ξ收稿日期:2007203205;修回日期:2007208214 基金项目:国家“十五”863计划(2003AA217072) 作者简介:申玉坤(19822),女,山西长治人,硕士,研究方向:纳米药物载体.E2m ail:yukun shen@ch https://www.360docs.net/doc/b814277791.html,.3通讯作者
实验十五 脂质体的制备
实验十五 脂质体的制备 一、实验目的 1. 掌握注入法制备脂质体的工艺。 2. 掌握脂质体包封率的测定方法。 二、实验原理 60年代初Banghan等发现磷脂分散在水中可形成多层囊，并证明每层囊均为双分子脂质膜组成且被水相隔开，称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。197l年Ryman等人提出将脂质体作为药物载体，即将酶或药物包囊在脂质体中。近年来脂质体作为药物载体在传递给药系统中的研究有了迅速的发展。 脂质体系一种人工细胞膜，它具有封闭的球形结构，可使药物被保护在它的结构中，发挥定向作用。特别适于作为抗癌药物载体，以改善药物的治疗作用，降低毒副作用等。 脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂，卵磷脂等；合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱，二硬脂酰磷脂酰胆碱等。磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。当较多的磷脂加至水或水性溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层，并进一步形成椭圆形或球状结构——脂质体。常用的附加剂为胆固醇，它也是两亲性物质，与磷脂混合使用，可制备稳定的脂质体，其作用是调节双分子层流动性，减低脂质体膜的通透性。其它附加剂有十八胺，磷脂酸等，这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。 脂质体可分为三类：小单室(层)脂质体，粒径在20～50nm，凡经超声波处理的脂质体混悬液，绝大部分为小单室脂质体；多室(层)脂质休，粒径约在400～1000nm；大单室脂质，粒径约为200～1000nm，用乙醚注入法制备的脂质体多属这—类。 脂质体包封率的测定 包封率的定义可用下式表示： 包封率％ =（W总 - W游离）/ W总 x 100 式中W总——脂质体混悬液中总的药物量。W游离——未包入脂质体中的药物量。 影响脂质体包封率的因素有多种，如磷脂质的种类，组成比例，制备方法及介质的离子强度等。 包封率的测定方法有凝胶过滤法（常用凝胶为Sephadex G50、Gl00或Sephrous4B、6B）、超速离心法、透析法、超滤膜过滤法等，根据条件加以选择。 脂质体的制法有多种，可按药物性质或需要进行选择。薄膜分散法是一种经典的制备方法，它可形成多室脂质体，经超声处理，可得到小单室脂质体。此法特点是操作简便，但包封率较低。注入法，根据所用溶解磷脂质的溶剂，可分为乙醚注入法和乙醇注入法。乙醚注入法是将磷脂，胆固醇和脂溶性药物及抗氧剂等溶于适量的乙醚中，在搅拌下慢慢滴入50～65°C水性溶液中，蒸去乙醚，即可形成脂质体。此法适于实验室小量制备脂质体。乙醇注入法制备脂质体，脂质体混悬液一般可保留10％乙醇。反相蒸发法，是制备大单室脂质体的方法，此法包封率高。冷冻千燥法，适于在水中不稳定的药物制备脂质体。熔融法，此法适于制备多相脂质体，制得的脂质体稳定，可加热灭菌。本实验乙醚注入法制备安定脂质体，用薄膜分散法制备钙黄绿素脂质体。
脂质体及其制备方法的选择
脂质体及其制备方法的 选择 SANY标准化小组 #QS8QHH-HHGX8Q8-GNHHJ8-HHMHGN#
脂质体及其制备方法的选择 1.脂质体概述 1965年，英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现了脂质体。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为４纳米。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。此两位学者曾获得过诺贝尔奖提名。 某些磷脂分散在过量的水中形成了脂质体，该脂分子本身排成双分子层，在磷脂的主要相变温度(Tm)以上，瞬间形成泡囊，且泡囊包围水液，根据磷脂种类及制备时所用温度，双分子层可以是凝胶或液晶状态。在凝胶态时磷脂烃链是一种有规律的结构，在液态时烃链是无规律的，每一种用来制备脂质体的纯磷脂由凝胶状态过渡到液晶状态时均具有特征的相变温度。这种相变温度(Tin)是根据磷脂性质而变(见下表)，它可在-20～+90℃之间变化，双分子层的不同成分混合物可引起相变温度的变化或相变完全消 都明显影响脂质体的稳定性和它们在生物体系中的行为。 脂质体根据其脂质膜的层数和腔室的数量，可以分为单层脂质体，多层脂质体和多囊脂质体，单层脂质体。不同类型的脂质体其结构特点各不相同，见下图表。 1971年，英国Rymen等人开始将脂质体用作药物载体。所谓载体，可以是一组分子，包蔽于药物外，通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶类分解而释放药物，从而发挥作用。它具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。脂质体技术是被喻为“生物导弹”的第四代靶向给药技术，也是目前国际上最热门的制药技术。
柔性环孢素纳米脂质体的制备及其变形性
中 国 药 科 大 学 学 报 Journal of China Pharmaceutical University 1999,30(3):187～191 柔性环孢素纳米脂质体的制备及其变形性Ξ 郭健新 平其能 黄罗生1 (中国药科大学药剂学教研室,南京210009;1中药研究所,南京210038) 摘 要 采用与普通纳米脂质体相比较的方法,首次研究了环孢素柔性纳米脂质体的制备方法,测定了粒径、多分散性指数、药物含量以及包封率等理化特性,并证实了其在外压作用下特定的变形性,表明表面活性剂胆酸钠的存在促进脂质体的变形,这种作用与胆酸钠在双分子层中所占比例以及外压有关。 关键词 柔性纳米脂质体;环孢素;胆酸钠;变形性 在脂质体双分子层中加入不同的附加剂可以显著影响脂质体的性质和功能。已有报道表明由磷脂和适当表面活性剂制备得到的纳米脂质体具有充分的柔性,与普通刚性脂质体不同,在作为亲水性蛋白质的透皮给药载体时,该类脂质体受角质层水合所产生的渗透压的影响能发生变形并被“挤入”角质层,因而显著增加药物的经皮渗透[1]。 由于环孢素具有强亲脂性、高分子量(分子量为1202)以及环状结构,经皮转运非常困难,即使转运至真皮以治疗银屑病也未取得令人满意的结果[2]。为了促进环孢素的经皮渗透,也为了对柔性纳米脂质体的形成、变形性以及亲脂性多肽与脂质体之间的相互作用进行探索,本文采用与普通纳米脂质体相比较的方法,首次研究了环孢素柔性纳米脂质体的制备方法、理化特性,并证实了其特定的变形性。此研究尚未见报道。 1 仪器与试剂 J Y292Ⅱ型超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所);0.15μm微孔滤膜(上海医药工业研究院);无油空气压缩机(上海复旦大学科教仪器厂); Zetamaster光子相关光谱仪(英国马尔文仪器公司);H27000型透射电镜(日本Hitachi公司);高效液相色谱仪(Shimadzu LC25A,日本);岛津SPD2 6A型紫外检测器。环孢素A(CyA,药用,浙江温州第二制药厂);注射级豆磷脂(上海浦江磷脂有限公司,批号961204);磷脂酰胆碱标准品(Sigma公司);胆酸钠(Serva进口分装,批号960426,上海化学试剂站分装厂)。其它试剂均为分析纯。 2 实验方法 2.1 磷脂酰胆碱的提纯 根据文献方法[3]应用氧化铝柱对注射级豆磷脂提取纯化磷脂酰胆碱。 2.2 纳米脂质体的制备 2.2.1 脂质体混悬液的制备 定量称取磷脂酰胆碱、胆酸钠(磷脂酰胆碱和胆酸钠的总量为7.5%)和环孢素(37.5mg),加入氯仿2甲醇(1∶1)复合溶剂30ml,于37℃恒温水浴中旋转蒸发去除有机溶剂,使磷脂等成膜材料。在烧瓶壁形成均匀类脂薄膜。然后往圆底烧瓶中加入0.9%NaCl水合介质10ml,旋转洗膜2h得到柔性脂质体混悬液。 按相同比例制备处方中不含胆酸钠的普通脂质体混悬液。 2.2.2 探针式超声法制备纳米脂质体 分别将两种脂质体混悬液在冰水浴条件下探针式超声适当时间可得到纳米脂质体胶体溶液,室温放置,经0.15μm微孔滤膜过滤除去探头释放的钛颗粒等杂质。 2.2.3 微孔滤膜滤过法制备纳米脂质体 固定压力P=0.3MPa,在室温下将两种脂质体混悬液分别滤过0.15μm的微孔滤膜。 2.3 纳米脂质体理化性能表征 2.3.1 粒子大小测定 应用Zetamaster光子相关 781 Ξ收稿日期 1999203215 国家自然科学基金资助项目,项目号39770881。
实验十五 脂质体的制备.
实验十五脂质体的制备 一、实验目的 1. 掌握注入法制备脂质体的工艺。 2. 掌握脂质体包封率的测定方法。 二、实验原理 60年代初 Banghan 等发现磷脂分散在水中可形成多层囊,并证明每层囊均为双分子脂质膜组成且被水相隔开,称这种具有生物膜结构的囊为脂质体。197l 年Ryman 等人提出将脂质体作为药物载体, 即将酶或药物包囊在脂质体中。近年来脂质体作为药物载体在传递给药系统中的研究有了迅速的发展。 脂质体系一种人工细胞膜, 它具有封闭的球形结构, 可使药物被保护在它的结构中, 发挥定向作用。特别适于作为抗癌药物载体,以改善药物的治疗作用,降低毒副作用等。脂质体系由磷脂为骨架膜材及附加剂组成。用于制备脂质体的磷脂有天然磷脂, 如豆磷脂,卵磷脂等;合成磷脂,如二棕榈酰磷脂酰胆碱,二硬脂酰磷脂酰胆碱等。磷脂在水中能形成脂质体是由其结构决定的。磷脂具有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团。当较多的磷脂加至水或水性溶液中, 磷脂分子定向排列, 其亲水基团面向两侧的水相, 疏水的烃链彼此对向缔合形成双分子层, 并进一步形成椭圆形或球状结构——脂质体。常用的附加剂为胆固醇,它也是两亲性物质,与磷脂混合使用,可制备稳定的脂质体,其作用是调节双分子层流动性,减低脂质体膜的通透性。其它附加剂有十八胺,磷脂酸等,这两种附加剂可改变脂质体表面电荷的性质。 脂质体可分为三类:小单室(层脂质体,粒径在 20~50nm,凡经超声波处理的脂质体混悬液, 绝大部分为小单室脂质体; 多室(层脂质休, 粒径约在 400~1000nm; 大单室脂质, 粒径约为 200~1000nm,用乙醚注入法制备的脂质体多属这—类。 脂质体包封率的测定包封率的定义可用下式表示: 包封率% =(W总 - W游离 / W总 x 100
脂质体磁性复合纳米颗粒的制备与发展 杨文清123513
脂质体磁性复合纳米颗粒的制备与应用 杨文清123513 摘要：造影剂辅助的核磁共振成像是目前肿瘤诊断的最好方法之一。但是由于核磁共振成像内在的低灵敏性以及造影剂的非特异性，导致肿瘤早期诊断较为困难。文章将一种新的肿瘤靶向核磁造影剂纳米粒子应用于早期肿瘤的影像诊断。这种新的肿瘤靶向核磁造影剂纳米粒子由配体转铁蛋白(Tf)、纳米水平的正电脂质体(Lip)载体和临床常用的造影剂Magnevist (Tf NIR-Lip NBD-Magnevist)三部分构成。另外转铁蛋白和脂质体粒子上，亦标记了荧光物质用于确定转铁蛋白．脂质体．造影荆纳米粒子的靶向性，以及肿瘤的光学影像诊断。 关键词：肿瘤诊断；脂质体；纳米颗粒；磁性；靶向 一、引言 在科学技术飞速发展的时代，新的技术和新的理论不断涌现和完善。这些技术和理论快速地向各个领域渗透，给人类社会带来新的生机，推动社会向前发展。21世纪对社会发展最具影响力的技术是生物技术、信息技术和纳米技术。率先发展起来的生物技术和信息技术已渗透到人们生活的各个领域，为大众所熟悉；而上世纪90年代才发展起来的纳米技术却仍然披着神秘的面纱，等待着人们去探索、去完善。 纳米技术(nanotectmology)是指在纳米尺度空间内操纵原子和分子，对材料进行加工，制造出具有特定功能的产品或对物质及其结构进行研究，掌握其原子和分子运动规律和特性的一门综合性的技术体系。Eric Drexler教授在1986年首次正式提出纳米技术一词，对纳米技术的发展起了指导性作用。目前纳米技术已涉及从农业到医药，从基础到临床，从诊断到治疗，从纳米生物材料到人工器官、机器人各个方面，进而向诊断和治疗的微创、微型、微量、快速、实时、遥距、动态、智能化方向发展。 纳米医学是纳米科技的一个新分支，是运用纳米科技的理论与方法，在传统医学和现代医学的基础上，开展医学研究与实践的新兴边缘学科。在医学领域中，纳米科技已经得到成功的应用，最引人注目的是作为药物载体和传感器载体。 纳米药物载体研究始于30多年前，但一直受制于基础研究进度，产业化基础不成熟，到了上世纪90年代后才逐步走向市场，现在正呈加速发展状态。目前中国的纳米药物载体技术的产业化进程比较快，不久的将来就可有纳米医药产品问世。而其中最具有发展潜力和市场前景的是以纳米脂质材料制成的药物载体。 脂质纳米粒用作药物载体具有下述显著优点：(1)载药脂质纳米粒作为异物而被巨噬细胞吞噬，到达网状内皮系统分布集中的肝、脾、肺、骨髓、淋巴等靶部位；连接有配基、抗体、酶底物所在的靶部位。(2)到达靶部位的载药脂质纳米粒，可有载体材料的种类或配比不同而具有不同的释药速度。调整载体材料种类或配比，可投资药物的释放速度，制备出具有缓释特性的载药脂质纳米粒。(3)由于载药脂质纳米粒的粘附性及小的粒径，即有利于局部用药时滞留性的增加，也有利于药物与肠壁的接触时间与接触面积，提高药物口服吸收的生物利用度。(4)可防止药物在胃酸性条件下水解，并能大大降低药物与胃蛋白酶等消化酶接触的机会，从而提高药物在胃肠道中的稳定性。(5)载药脂质纳米粒可以改变膜运转机制，增加药物对生物膜的透过性，有利于药物透皮吸收与细胞内药效发挥。 随着靶向药物的不断发展，科学家希望通过特异性生物分子介导，合成出一类具有肿瘤靶向性的造影剂，以进一步降低核磁共振成像技术的检测极限，用于肿瘤的早期诊断。肿瘤靶向造影剂主要由配体、造影剂载体和造影剂三部分构成。从理论上讲，由于肿瘤表面抗原过度表达，肿瘤靶向造影剂可以特异性地聚集在肿瘤细胞表面，从而增强微小肿瘤病灶的核磁信号，实现肿瘤早期诊断。文献报道，纳米尺度的阳离子脂质体(Lip)可被用作药物或基因治疗的载体。在脂质体的表面修饰上如叶酸、转铁蛋白（tf）或抗肿瘤表面抗原抗体等靶向配体，就可以特异性引导造影剂到达癌细胞。用于肿瘤靶向的靶向基团一般需要具有体积
脂质体及其制备方法的选择
脂质体及其制备方法的选择 1.脂质体概述 1965年，英国学者Bangham和Standish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现了脂质体。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均为脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为４纳米。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。此两位学者曾获得过诺贝尔奖提名。 某些磷脂分散在过量的水中形成了脂质体，该脂分子本身排成双分子层，在磷脂的主要相变温度(Tm)以上，瞬间形成泡囊，且泡囊包围水液，根据磷脂种类及制备时所用温度，双分子层可以是凝胶或液晶状态。在凝胶态时磷脂烃链是一种有规律的结构，在液态时烃链是无规律的，每一种用来制备脂质体的纯磷脂由凝胶状态过渡到液晶状态时均具有特征的相变温度。这种相变温度(Tin)是根据磷脂性质而变(见下表)，它可在-20～+90℃之间变化，双分子层的不同成分混合物可引起相变温度的变化或相变完全消失，当双分子层通过相变温度时，被封闭的 所有这些都明显影响脂质体的稳定性和它们在生物体系中的行为。 脂质体根据其脂质膜的层数和腔室的数量，可以分为单层脂质体，多层脂质体和多囊脂质体，单层脂质体。不同类型的脂质体其结构特点各不相同，见下图表。 1971年，英国Rymen等人开始将脂质体用作药物载体。所谓载体，可以是一组分子，包蔽于药物外，通过渗透或被巨嗜细胞吞噬后载体被酶类分解而释放药物，从而发挥作用。它具有类细胞结构，进入动物体内主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。脂质体技术是被喻为“生物导弹”的第四代靶向给药技术，也是目前国际上最热门的制药技术。至于药物在脂质体中的负载定位，其取决于所载药物的性质，见下图。
虾青素纳米脂质体及其设备制作方法和应用与相关技术
本技术公开了一种虾青素纳米脂质体及其制备方法和应用。所述制备方法，包括以下步骤：S1.将虾青素、胆固醇与磷脂溶解于二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液中，振荡充分混合后，减压蒸发除去有机溶剂使溶液形成一层均匀薄膜后，真空干燥；S2.向薄膜中加入缓冲液，将薄膜洗脱并旋转溶解分散均匀，得到虾青素脂质体混悬液；S3.将混悬液避光密封20～30℃放置6～24h后，再用脂质体挤出仪器过膜，即得。所述虾青素纳米脂质体具有表征特性优良、包封率高、粒径均一、分散性好、稳定性好和抗氧化活性强的特征，显著提高了 对虾特定生长率和成活率、总抗氧化能力和免疫能力，且合成率较高，工艺简单，易于工业化。 权利要求书 1.一种虾青素纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1.将虾青素、胆固醇与磷脂溶解于二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液中，振荡充分混合后，减压蒸发除去有机溶剂使溶液形成一层均匀薄膜后，真空干燥； S2.向薄膜中加入缓冲液，将薄膜洗脱并溶解分散均匀，得到虾青素脂质体混悬液； S3.将混悬液避光密封20～30℃放置6～24h后，再用脂质体挤出仪器过膜，即得。 2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1所述胆固醇与磷脂的质量比为1：4～8，优
选为1：5～7，更优选为1：6。 3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，S1所述虾青素的质量占胆固醇与磷脂总质量的比例为0.5～2.5：210，优选为1：210。 4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液；控制缓冲液pH 为6.0～8.0，优选缓冲液pH为7.0～7.5。 5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述磷脂为大豆卵磷脂。 6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S2得到虾青素脂质体混悬液后，还对混悬液进行超声处理。 7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述超声的条件为：超声功率50～70KHZ，超声温度25～30℃，超声时间20～40min。 8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1控制减压蒸发的条件为：真空度0.08～0.1MPa，温度-10～-13℃；S2控制溶解分散均匀的条件为：温度37～40℃，转速100～ 200r/min，时间1～2h。 9.权利要求1～8任一所述制备方法制得的虾青素纳米脂质体，其特征在于，所述脂质体的包封率为83％～95％；粒径大小为100～188nm；分散指数为0.02～0.04。 10.权利要求1～8任一所述制备方法制得的虾青素纳米脂质体在制备虾饲料中的应用。 技术说明书
脂质体的制备概要
实验十五 脂质体的制备
一实验目的 1.了解脂质体（liposome）在细胞 工程技术中的应用及其制备方法。 2.掌握采用超声波法、冰冻干燥法 和冻融法三种不同的方法制备脂 质体的方法并了解该技术在细胞 工程中的应用。
二实验原理 脂质体（liposome）的制备技术，一般采用超声波法、振荡法、乙醚蒸发法、去污剂透析法、冰 冻干燥法和冻融法等。制备方法 不同，所得脂质体结构、大小不 同，性质和用途也就不同（表15-1）。
种类制备方法大小(m) 特性 多层大脂质体(MLV) 乙醚蒸发法、醇醚水 法、振荡法、液相快 速混合振荡法 0.1~50 易制备，包被物释放 速度慢 单层小脂质体(SUV) 直接超声波法、溶剂 超声波法、乙醚注射 法 0.02~0.05 体积小，适合包被离 子、小分子药物等 单层大脂质体(LUV) 递相蒸发法、去污剂 （胆酸纳等）透析法、 冰冻干燥法 0.05~0.5 适合包被蛋白质、 RNA、DNA片段、 大分子药物及细胞融 合 单层巨大脂质体(GUV) 冻融法5~30 适合包被蛋白质、 RNA、DNA片段， 除菌处理较难
本实验采用超声波法、冻融法、冰冻干燥 法三种不同类型的方法，超声波法的原理是：在超声波作用下，磷脂类双亲媒性分子被打碎为分子或分子团，并自动重新排布成类似生物膜的双分子层囊泡。冻融法是在超声波法形成的小脂质体基础上，通过冷冻和融解过程使其破裂，重组为大体积脂质体，在通过透析时膜内外渗透压的变化而膨胀为更大体积的脂质体。冰冻干燥法语原理与冻融法基本一致，只在处理条件上有所不同。
三实验用品 1.器材 超声波清洗机、光学显微镜、荧光显微镜、荧光 分光光度计、漩涡混合器、核酸蛋白检测仪、柱层析装置、冰冻干燥机。 2.试剂 １）磷脂液：100mg经丙酮-乙醚法纯化的卵磷 脂，57.2mg胆固醇，溶于1ml氯仿。 ２）荧光液：钙黄绿素（calcein）47mg溶于 100ml Tris缓冲液。 ３）Tris 缓冲液：称取Tris 0.12g，EDTA 0.288mg，溶于80ml去离子水中，用0.1 mol/L 盐酸调Ph7.2，再加水至100ml。
固体脂质纳米粒的制备及在化妆品领域的应用
Material Sciences 材料科学, 2020, 10(4), 192-200 Published Online April 2020 in Hans. https://www.360docs.net/doc/b814277791.html,/journal/ms https://https://www.360docs.net/doc/b814277791.html,/10.12677/ms.2020.104025 Preparation of Solid Lipid Nanoparticles and Its Applications in Cosmetics Mingjiao Cheng, Chenguang Liu* Ocean University of China, Qingdao Shandong Received: Mar. 26th, 2020; accepted: Apr. 10th, 2020; published: Apr. 17th, 2020 Abstract Solid lipid nanoparticles (SLNs) are particulate colloidal systems comprised of solid core lipids, which are stabilized by surfactants. SLNs show various distinctive features such as prolonged drug release, drug targeting, low toxicity, excellent biocompatibility, biodegradability and enhancing bioavailability and stability of drugs. Some of the delivery systems based on SLNs have been used in the development of cosmetics. This literature review describes the preparation techniques of SLNs, the applications and prospects of SLNs in cosmetics. Keywords Solid Lipid Nanoparticles, Delivery Systems, Preparation Techniques, Application 固体脂质纳米粒的制备及在化妆品领域的应用 程明娇，刘晨光* 中国海洋大学，山东青岛 收稿日期：2020年3月26日；录用日期：2020年4月10日；发布日期：2020年4月17日 摘要 固体脂质纳米粒(SLNs)是由表面活性剂所稳定的以固态的形式存在的胶体系统，具有缓释、靶向性、低毒性、良好的生物相容性、生物可降解性以及可以提高药物生物利用度和稳定性等特点。SLNs作为一种递送载体，目前已开始被用于化妆品的制造。本文总结了SLNs常用的制备方法，介绍了SLNs在化妆品领域的应用，并对其应用前景进行了展望。 *通讯作者。
纳米脂质体材料在肿瘤研究中的应用
纳米脂质体材料在肿瘤研究中的应用 摘要：纳米材料作为药物载体，具有延长药物半衰期等特性，另外通过修饰的纳米材料具有高的生物靶向能力，在肿瘤研究中应用越来越广泛，本文通过对近年来国内国外利用载药纳米材料，特别是纳米脂质体，在肿瘤相关研究中的进展、热点及难点做一综述。 关键词：纳米材料；肿瘤治疗；纳米脂质体 癌症严重威胁着人类的健康和生命，过去30年里，肿瘤领域的研究取得了重大的进展，信号转导网络与调控在肿瘤的发生、发展、转移中起重要作用，而针对信号转导通路中的关键因素研发的各种药物在治疗肿瘤方面的进展也是突飞猛进。化学治疗是重要的癌症治疗手段之一, 许多化疗药物如5-氟脲嘧(5-Fu) 、阿霉素、顺铂、长春新碱等通过细胞凋亡的途径杀死肿瘤细胞, 但是这些药物由于对机体毒性大，分子量大难以到达病患处，限制了其在临床中应用。研发新的抗癌药物费用高昂且周期长, 无法满足临床需要。因此利用制剂新技术提高现有抗癌药物疗效, 减小或消除其毒副作用，增强药物靶向性显得尤为的重要【1~2】。 纳米载体作为载药材料，一般需要制成球状或囊状即纳米球或纳米微囊，纳米球或微囊的粒径大小在10～1000 nm之间，其组成为天然或合成高分子物质。这些天然或合成高分子物质包括脂质体，壳聚糖，纳米金，氧化石墨烯等【3】。纳米材料是新型的药物和基因输运载体, 具有很多传统药物载体无法媲美的优点，在下面的文章中以纳米脂质体作为例子来做一综述。 一、纳米脂质体的组成结构 纳米脂质体即脂质体的纳米级结构，是磷脂依靠疏水缔合作用在水中自发形成的一种分子有序的组合体，为多层囊泡结构，每层均为类脂双分子膜，内外表面均为亲水性，双分子膜之间为亲脂性。脂质体膜主要由磷脂与胆固醇构成。脂质体按结构分为小单室脂质体（SUVs ）、大单室脂质体（LUVs）、多室脂质体(MLVs)、大多孔脂质体(MVVs)几类，见图一。纳米脂质体以纳米级小单室结构为主，经过修饰及载药处理后形成载药纳米脂质体，见图二。 图一按结构分类的脂质体图二经过修饰和载药的阿霉素纳米脂质体 二、纳米材料优点 纳米材料特别是纳米脂质体作为药物载体在肿瘤诊断、影像和治疗领域取得了令人瞩目的成就，主要原因归功于它的优点【4】。(1) 广泛的载药适应性,水溶
纳米脂质靶向载药体的合成及应用
纳米脂质靶向载药体的合成及应用 摘要纳米脂质体是一种靶向药物载体，能克服药物在体内输送过程中所遇到的多种生理障碍，提高药物的靶向性。目前，纳米脂质体的制备主要包括主动载药法和被动载药发等，由于其结构与生物体的结构相似，从而被广泛用于肿瘤药物载体，基因和激素等药物载体方面，大幅提高了药物靶向性能。 关键词纳米脂质体，靶向载药，药物控制系统 1 前言 癌症在威胁着全球人类的健康和生命，如今由于恶性肿瘤而死亡的人数占所有死亡人数的13%，而我们却仍然对其没有很好治疗办法。临床上大多还是采用化学药物治疗，其给药生物利用率低，毒副作用大，药物很难到达指定的地点，发挥出应有的治疗作用[1]。 因此，利用具有特异性的药物载体将药物传递至感染了肿瘤的目标器官、组织和细胞，开发出新型的药物载体和给药技术及传递系统具有重要的药学价值和重大的临床意义，对于早日克服肿瘤这一世界难题具有重大的作用。 新型的药物载体主要有微胶囊、脂质体、β-环糊精包含物、微球剂与磁性微球、琼脂聚糖小珠等[2]。其中，脂质体是一种研究的最为成熟且备受推崇的药物载体，可以将药物粉末或溶液包埋在具有类细胞结构的微粒中，改变药物的体内分布，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。脂质体纳米化能克服药物在体内输送过程中所遇到的各种生理屏障，将药物送到特定的靶位，提高药物的靶向性。 2 纳米脂质体载药系统 现代药物治疗学不但要求药物能够以一定的速率释放出来，而且要求药物尽可能的集中到所需的靶向部位，从而提高药物的利用率和疗效，减少药物的毒副作用。 载药纳米颗粒由于药物载体材料的种类和配比不同而具有不同的药物释放速度，调整药物载体的材料种类和配比，可以调节药物的释放速度，制备出具有缓释特性的载药纳米粒。载药纳米颗粒一般具有：粒径较小；稳定；较高的载药量和包封率；一定的释放药物的速度；体内循环时间较长；有符合临床要求的粘度、渗透性等优点[3]。 纳米脂质体颗粒粒径一般在几十纳米到数微米之间，具有很高的稳定性。脂质体载药体系可缓释药物，增加药物在体内外的稳定性，降低药物的毒性，提高药物的治疗系数，并且具有一定的靶向性。纳米脂质体载药具有很多的优点：①纳米微粒小的尺寸效应，在生物体内的分布具有特异性；②修饰的药物载体脂质体可以延长在血液中的半衰期；③载药纳米微粒可以缓释药物，延长药物的作用时间；④纳米药物具有稳定性，这
脂质体载药纳米粒的研究与制备结题报告 徐晟
脂质体载药纳米粒的研究与制备 摘要：目的：应用单因素考察法优化茶多酚柔性脂质体的制备工艺参数，筛选出最佳处方。方法：本研究采用逆想蒸发法制备包裹茶多酚的脂质体，以卵磷脂（EPC）和胆固醇（CH）作为膜材，以胆酸钠作为柔软剂，采用逆向薄膜蒸发法制备茶多酚柔性脂质体，并用离心法测其包封率。以脂质体的包封率为考察指标，采用单因素考察脂质体膜材料中水油相之比，卵磷脂（EPC）与胆酸钠的质量比，超声时间对茶多酚柔性脂质体包封率的影响，并优化处方，得到最优结果并进行验证。结果与结论：确定最佳工艺条件为：卵磷脂与胆酸钠比例为8：1，水相与油相比为1:4，超声时间为2分钟。单因素考察用于茶多酚柔性脂质体处方的优化筛选是可行的，具有很好的预测性，此处方工艺稳定，重现性好，能制得较高包封率的茶多酚柔性脂质体。 关键词：脂质体茶多酚柔性逆相蒸发 1.绪论 1.1前言 茶多酚(tea polyphenol, TP) ,是茶叶中所含的一类多羟基酚类化合物的总称,大多属缩合单宁,因其大部分溶解于水,所以又称为水溶性单宁,是茶叶的主要有效成分,占茶叶干质量的20%～30%[1]。茶多酚具有清除自由基、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射、降血脂、降血压等药理功能,还有消炎利尿、解酒等功效[2]。但茶多酚脂溶性较差,生物利用度低,易被氧化,从而限制了它在医药和食品等行业中应用。[3]脂质体作为药物载体,是一种相对较新的微胶囊化技术,具有有效防止被包裹药物氧化、提高稳定性、提高生物利用度、使被包裹药物具有靶向性、天然无毒、生物可降解、无免疫抑制作用等优点[4-5]。本试验利用脂质体将茶多酚进行包覆,采用逆相蒸发法制备茶多酚脂质体，研究得出其最佳工艺配方。 1.2脂质体的概述 脂质体是人工制备的由磷脂双分子定向排列而成的微型囊泡(vesicles)，脂质体的组成：类脂质（磷脂）及附加剂。 1.1.1磷脂类：包括天然磷脂和合成磷脂二类。磷脂的结构特点为一个磷酸基和一个季铵盐基组成的亲水性基团，以及由两个较长的烃基组成的亲脂性基团。天然磷脂以卵磷脂（磷脂酰胆碱，PC）为主，来源于蛋黄和大豆，显中性。合成磷脂主要有DPPC（二棕榈酰磷脂酰胆碱）、DPPE（二棕榈酰磷脂酰乙醇胺）、DSPC （二硬脂酰磷脂酰胆碱）等，其均属氢化磷脂类，具有性质稳定，抗氧化性强，成品稳定等特点，是国外首选的辅料。 1.1.2胆固醇:胆固醇与磷脂是共同构成细胞膜和脂质体的基础物质。胆固醇具有调节膜流动性的作用，故可称为脂质体“流动性缓冲剂”。自1965年由英国的Bangham首先发现磷脂在水中可以自发形成脂质体（liposomes）以来，对其实验研究日渐广泛，其应用性已遍及很多领域。特别是在医药工程方面，脂质体作为药物载体具有提高药物疗效、减轻药物不良反应及靶向作用的特点。其被动载药制备方法包括物理分散法、两相分散法及表面活性剂增溶法，逆相蒸发法是两相分散法中常用的一种；包封率和渗漏率是评价脂质体质量的两个重要指标[7]。