六双波长分光光度法

典型实验教学案例简介

案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量

药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。

一、实验目的

1．掌握双波长分光光度法的测定原理。

2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。

二、实验原理

当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。

SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。

TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。

三、仪器与试剂

1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶

2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾

四、实验步骤

1．磺胺甲噁唑的含量测定

（1）平均片重测定：10片，精密称定。（2）供试品溶液配制：

图2 TMP 紫外吸收图谱

1. TMP(5.0μg/ml);

2.SMZ(25.0μg/ml);

3. SMZ+TMP;

4. 辅料

图l SMZ 紫外吸收图谱

1. TMP(0.2μg/ml);

2.SMZ(10.0μg/ml);

3. SMZ+TMP;

4. 辅料

精密称取片粉

(约50mg SMZ, 10mg TMP)

片剂乙醇

溶解、定容

过滤研磨

100m

（3）对照品溶液配制

（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm 为测定波长（λ2），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm ）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2

（2）

－A λ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶

液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。

2．甲氧苄啶的含量测定

（1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各5.00mL ，分别置于100mL 容量瓶中，各加HCl-KCl 溶液（0.1mol/LHCl 75mL + 6.9gKCl ，加水至1000mL ），稀释至刻度，摇匀。

（2）参比波长选定：取对照液(1)的稀释液，以239nm 为测定波长(λ2)，在295nm 附近（每间隔0.2nm ）选择等吸收点波长为参比波长(λ1) ，使ΔA=A λ2（1）－A λ1（1）= 0。

（3）双波长测定：在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。

3．结果计算

100???????标示量

平均片重被测药物标示量％＝W D Cs A A s

式中ΔA u 为供试液的ΔA 值，ΔA s 为对照液的ΔA 值，C s 为对照液浓度（mg/mL ），D 为稀释倍数，W 为取样量。

五、注意事项

乙醇

100mL

精称 105 ℃干至恒重

10mg TMP 对照品

50mg SMZ 对照品

乙醇

定容

定容对照液(1) 对照液(2) 2.00ml

0.4%NaOH

100mL

2.00ml L

0.4%NaOH

1.测定之前应先检查仪器波长是否准确。

2.仔细寻找等吸收点波长

3.注意供试品溶液和对照品溶液的准确配制

六、思考题

1．双波长分光光度法是如何消除干扰的？

2．应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长？

双波长法测定复方磺胺甲恶唑含量

双波长法测定复方磺胺甲噁唑含量一、目的 1.掌握复方制剂的分析特点及赋形剂的干扰与排除方法。 2.掌握双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中磺胺甲噁唑与甲氧苄啶含量的原理与方法。二、实验内容 1.供试品溶液的制备取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磺胺甲噁唑50mg （20片平均片重的8分之一）与甲氧苄啶10mg（20片平均片重的8分之一）)，置于100ml量瓶中，加乙醇适量，振摇15分钟磺胺甲口恶唑与甲氧苄啶溶解，加乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。 2.对照品溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的磺胺甲噁唑对照品50mg（按原料药95%含量计）与甲氧苄啶对照品10mg（按原料药95%含量计），分置100ml量瓶中，各加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别作为对照品溶液(1)与对照品溶液(2)。 3.磺胺甲噁唑的测定精密量取供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各2ml，分置100ml量瓶中，各加0.4％氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀。取对照品溶液(2)的稀释液；以257nm 为测定波长(λ2)，在304nm波长附近(每间隔0.5nm)选择等吸收点波长为参与波长(λ1)，要求△A=Aλ2－Aλ1=0。再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(1)的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值(△A)，计算，即得。 4.甲氧苄啶的测定精密量取上述供试品溶液与对照品溶液(1)(2)各5ml，分置100ml量瓶中，各加盐酸-氯化钾溶液[取盐酸液(0.1mol/L)75ml与氯化钾6.9g，加水至1000ml 摇匀] 稀释至刻度，摇匀。取对照品溶液(1)的稀释液，以239.0nm为测定波长(λ 2 )，在295nm波长附近(每间隔0.2nm)选择等吸收点波长为参比波长(λ1)，要求△A=Aλ2－Aλ1=0。再在λ2与λ1波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液(2)的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值(△A)，计算，即得。本品每片中含磺胺甲噁唑(C10H11N3O2S)应为0.360～0.440g，含甲氧苄啶(C14H12N4O3)应为72.0～88.0mg。三说明 1.磺胺甲噁唑与甲氧苄啶的结构分别为： NH2SO 2NH CH3 O N OC H3 CH3O CH3O CH2N N NH 2 NH2 (SMZ) (TMP) SMZ与TMP的紫外吸收图谱分别为：

双波长法测定安钠咖中组分含量

院系：医学检验系班级：11检验本科1班：**** 双波长法测定安钠咖中组分含量实验目的和要求 1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作； 2、掌握双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法； 3、掌握在物质中吸收曲线上寻找吸收点、测定波长、参比波长的方法； 4、掌握标准曲线绘制及应用； 5、了解双波长分光光度法在单光束分光光度计上的测定方式。实验原理每毫升安钠咖注射液中含0.12g无水咖啡因和0.13g苯甲酸钠，要求二组分的含量均应为标示量的93%~107%。在0.10mol/L盐酸溶液中，苯甲酸钠在230nm波长处有一较强吸收峰，咖啡因在272nm波长处有一较强吸收峰；二者吸收曲线重叠十分严重，直接采用吸光度进行定量测定时，相互之间有严重干扰。根据光吸收定律，溶液吸光度应为各个组分吸光度的加合。当在230nm波长处

测定苯甲酸钠（此时把咖啡因视为干扰组分）时，测定的吸光度为：咖啡因苯甲酸钠安钠咖230 230230A A A += 但是在咖啡因的吸收曲线可以发现，咖啡因在230nm 和257nm 两波长处得吸收相等（吸光度值相等，即等吸收点）：咖啡因咖啡因257 230A A = 因此，通过直接测定混合物溶液在230nm 和257nm 两波长处得吸光度值，再计算二吸光度的差值，可消除咖啡因对苯甲酸钠测定的干扰：）（）（咖啡因苯甲酸钠咖啡因苯甲酸钠安钠咖安钠咖257257230230257230A A -A A A -A A ++==? 苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠）（C b -b A -A 257230257 230εε== =KC 苯甲酸钠可以看出，混合物溶液在230nm 和257nm 两波长处得吸光度差值仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与咖啡因浓度无关，从而实现苯甲酸钠的定量分析。同理，当在272nm 波长处测定咖啡因（视苯甲酸钠为干扰组分）时，可选择272nm 和253nm 两个苯甲酸钠的等吸收点波长进行测定，混合物溶液在这两个波长处得吸光度差值仅与咖啡因浓度成正比，而与苯甲酸钠浓度无关，可消除苯甲酸钠对咖啡因测定的干扰，从而实现咖啡因的定量分析：咖啡因KC A =? 实验仪器与试剂 1.752Pro 型紫外可见分光光度计 2.标准咖啡因储备溶液（0.2500mg/ml ） 3.标准甲酸钠储备溶液（0.2500mg/ml ） 4.盐酸溶液（0.10mol/L ） 5.50ml 容量瓶12个 6.5ml 移液管4只

试验六双波长分光光度法

典型实验教学案例简介案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。一、实验目的 1．掌握双波长分光光度法的测定原理。 2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。二、实验原理当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。然后根据ΔA值计算b的含量。 SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。 TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。

三、仪器与试剂 1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶 2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾四、实验步骤 1．磺胺甲噁唑的含量测定（1）平均片重测定：10片，精密称定。（2）供试品溶液配制：图2 TMP 紫外吸收图谱 1. TMP(5.0μg/ml); 2.SMZ(25.0μg/ml); 3. SMZ+TMP; 4. 辅料图l SMZ 紫外吸收图谱 1. TMP(0.2μg/ml); 2.SMZ(10.0μg/ml); 3. SMZ+TMP; 4. 辅料精密称取片粉 (约50mg SMZ, 10mg TMP) 片剂乙醇溶解、定容过滤研磨 100m

栀子双波长融合高效液相色谱数字化指纹图谱研究

梔子双波长融合高效液相色谱数字化指纹图谱研究（作者： _________单位：____________ 邮编：___________ ）【摘要】目的采用双波长融合法建立梔子254 nm和326 nm波长下的融合HPLC指纹图谱。方法采用反相高效液相色谱法，使用CenturySIL C18 BDS 柱（20 cm >4.6mm , 5 町i）,以1%醋酸水-1%醋酸乙腈为流动相，低压线性梯度洗脱，柱温（30.0 士0.15 ）C，采用DAD检测器同时采集2个特征吸收波长下的信号，测定10批不同产地梔子HPLC指纹图谱。结果用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件建立了梔子254 nm和326 nm的双波长融合HPLC指纹图谱，以梔子苷为参照物，确定了41个共有峰，并对其进行了全面评价。结论所建立的双波长融合谱能有效控制梔子的质量，克服了单波长检测时信息量有限的缺点，能较全面、真实地揭示中药材的内在质量特征。【关键词】梔子；高效液相色谱数字化指纹图谱；双波长融合；超信息特征 Abstract : ObjectiveTo explore the HPLC-FPS of water extract

of Fructus Garde niae by dual-wavele ngth fusing method. MethodsThe chromatographic fin gerpri nts were obta ined by injecting the sample solution each time on a CenturySIL C18 BDS colu mn (20 cm X4.6 mm , 5 ^m) with the gradie nt eluti on solve nt system composed of 1% acetate acid -water and 1% acetate acid -acetonitrile. The flow rate was 1.0ml/min, the column temperature was maintained at (30.00 ±0.15) °C and the DAD detector was used. ResultsThe HPLC-FPS of water extract of Fructus Garde niae was established with dual-wavelength fusing method, acquired 41 com mon peaks by tak ing the peak of gen iposide as referen tial peak. The fin gerpri nts were comprehe nsively evaluated by The digitized evaluation system of the Traditional Chinese Medicine fingerprint with the super-information characteristics ” and the results were an alyzed and compared with that of the fin gerpri nts obta ined un der 265 nm. Con clusi on The dual-wavele ngth fusing method can effectively con trol the quality of Fructus Garde niae and overcome the low information of mono-wavelength detection. It offers guara ntee for the quality con trol of Fructus Garde niae and provides a new method for thoroughly and authentically revealing the characteristics of TCM. Key words : Fructus Gardeniae; Dual-wavelength fusing method; High performa nee liquid chromatography;F in gerpr ints;

高效液相色谱—紫外双波长法同时测定玄参配方颗粒中3种主要成分的含量

高效液相色谱—紫外双波长法同时测定玄参配方颗粒中3种主要成分的含量目的建立高效液相色谱-紫外双波长法同时测定玄参配方颗粒中3种主要成分哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸含量的方法。方法采用Ultimate AQ-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为1%冰醋酸水溶液和乙腈，梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长前13 min为210 nm，13 min后为278 nm，柱温30 ℃。结果哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸的线性范围分别为0.066 54～0.665 4 μg（r=1.000 0）、0.024 23～0.242 3 μg （r=0.999 9）、0.100 28～1.002 8 μg（r=0.999 9），平均加样回收率（n=6）分别为99.80%±1.22%、100.31%±1.30%、100.22%±1.24%。结论本法简单、灵敏度高、重复性好、准确可靠，可为玄参配方颗粒的质量控制以及标准研究提供参考依据。标签：玄参配方颗粒；哈巴苷；哈巴俄苷；肉桂酸；高效液相色谱-紫外双波长法中药玄参为玄参科植物玄参Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，始载于《神农本草经》，列为中品，为“浙八味”中药之一。玄参配方颗粒是在中医药理论指导下，采用现代生产工艺，以水作为提取溶媒，对单味玄参药材饮片进行煎煮、过滤、浓列检测器G1315D；ChemStation for LC 3D systems色谱工作站；Ultimate AQ-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Sartorius BP210S电子分析天平（德国）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。哈巴俄苷对照品（批号111730-201106，含量以96.0%计，中国食品药品检定研究院），哈巴苷对照品（批号111729-201204，含量以94.5%计，中国食品药品检定研究院），肉桂酸对照品（批号110786-200503，中国药品生物制品检定所）。玄参配方颗粒（批号A1301311、A120847、A120696），培力（南宁）药业有限公司。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱：Ultimate AQ-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：1%冰醋酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～10 min，5%～10%B；10～30 min，10%～30%B；30～35 min，30%～50%B；35～40 min，50%～60%B）；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：前13 min为210 nm，13 min后改为278 nm；进样量：10 μL。理论塔板数均≥5000，与相邻杂峰分离度均>1.5。色谱图见图1。

双波长法测定安钠咖中组分含量

院系：医学检验系班级：11检验本科1班姓名：**** 双波长法测定安钠咖中组分含量实验目的和要求 1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作； 2、掌握双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法； 3、掌握在物质中吸收曲线上寻找吸收点、测定波长、参比波长的方法； 4、掌握标准曲线绘制及应用； 5、了解双波长分光光度法在单光束分光光度计上的测定方式。实验原理每毫升安钠咖注射液中含0.12g 无水咖啡因和0.13g 苯甲酸钠，要求二组分的含量均应为标示量的93%~107%。在0.10mol/L 盐酸溶液中，苯甲酸钠在230nm 波长处有一较强吸收峰，咖啡因在272nm 波长处有一较强吸收峰；二者吸收曲线重叠十分严重，直接采用吸光度进行定量测定时，相互之间有严重干扰。根据光吸收定律，溶液吸光度应为各个组分吸光度的加合。当在230nm 波长处测定苯甲酸钠（此时把咖啡因视为干扰组分）时，测定的吸光度为：咖啡因苯甲酸钠安钠咖230 230230A A A += 但是在咖啡因的吸收曲线可以发现，咖啡因在230nm 和257nm 两波长处得吸收相等（吸光度值相等，即等吸收点）：吸光度波长 230nm

咖啡因咖啡因257 230A A = 因此，通过直接测定混合物溶液在230nm 和257nm 两波长处得吸光度值，再计算二吸光度的差值，可消除咖啡因对苯甲酸钠测定的干扰：）（）（咖啡因苯甲酸钠咖啡因苯甲酸钠安钠咖安钠咖257257230230257230A A -A A A -A A ++==? 苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠）（C b -b A -A 257 230257230εε== =KC 苯甲酸钠可以看出，混合物溶液在230nm 和257nm 两波长处得吸光度差值仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与咖啡因浓度无关，从而实现苯甲酸钠的定量分析。同理，当在272nm 波长处测定咖啡因（视苯甲酸钠为干扰组分）时，可选择272nm 和253nm 两个苯甲酸钠的等吸收点波长进行测定，混合物溶液在这两个波长处得吸光度差值仅与咖啡因浓度成正比，而与苯甲酸钠浓度无关，可消除苯甲酸钠对咖啡因测定的干扰，从而实现咖啡因的定量分析：咖啡因KC A =? 实验仪器与试剂 1.752Pro 型紫外可见分光光度计 2.标准咖啡因储备溶液（0.2500mg/ml ） 3.标准甲酸钠储备溶液（0.2500mg/ml ） 4.盐酸溶液（0.10mol/L ） 5.50ml 容量瓶12个 6.5ml 移液管4只 7.1cm 石英比色皿2个 8.安钠咖样品溶液实验步骤 1.咖啡因标准系列溶液配制按照下表配制咖啡因标准系列溶液编号咖1 咖2 咖3 咖4 咖5 移取0.25mg/ml 标准咖啡因储备溶液体积 1.00ml 2.00ml 3.00ml 4.00ml 5.00ml 系列标准咖啡因溶液浓度 5μg/ml 10μg/ml 15μg/ml 20μg/ml 25μg/ml 说明以上溶液均用移液管移取至50ml 容量瓶中，用0.10mol/L 盐酸溶液稀释至刻度并摇匀。 2.苯甲酸钠标准系列溶液配制按照下表配制苯甲酸钠标准系列溶液

栀子双波长融合高效液相色谱数字化指纹图谱研究

栀子双波长融合高效液相色谱数字化指纹图谱研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的采用双波长融合法建立栀子254 nm和326 nm波长下的融合HPLC指纹图谱。方法采用反相高效液相色谱法，使用CenturySIL C18 BDS柱(20 cm×4.6mm，5μm)，以1%醋酸水-1%醋酸乙腈为流动相，低压线性梯度洗脱，柱温（30.0±0.15）℃，采用DAD检测器同时采集2个特征吸收波长下的信号，测定10批不同产地栀子HPLC指纹图谱。结果用“中药色谱指纹图谱超信息特征数字化评价系统”软件建立了栀子254 nm和326 nm的双波长融合HPLC指纹图谱，以栀子苷为参照物，确定了41个共有峰，并对其进行了全面评价。结论所建立的双波长融合谱能有效控制栀子的质量，克服了单波长检测时信息量有限的缺点，能较全面、真实地揭示中药材的内在质量特征。【关键词】栀子；高效液相色谱数字化指纹图谱；双波长融合；超信息特征 Abstract：ObjectiveTo explore the HPLC-FPS of water extract

of Fructus Gardeniae by dual-wavelength fusing method. MethodsThe chromatographic fingerprints were obtained by injecting the sample solution each time on a CenturySIL C18 BDS column (20 cm×4.6 mm，5 μm) with the gradient elution solvent system composed of 1% acetate acid -water and 1% acetate acid -acetonitrile. The flow rate was 1.0ml/min, the column temperature was maintained at (30.00±0.15)℃and the DAD detector was used. ResultsThe HPLC-FPS of water extract of Fructus Gardeniae was established with dual-wavelength fusing method, acquired 41 common peaks by taking the peak of geniposide as referential peak. The fingerprints were comprehensively evaluated by “The digitized evaluation system of the Traditional Chinese Medicine fingerprint with the super-information characteristics”and the results were analyzed and compared with that of the fingerprints obtained under 265 nm. ConclusionThe dual-wavelength fusing method can effectively control the quality of Fructus Gardeniae and overcome the low information of mono-wavelength detection. It offers guarantee for the quality control of Fructus Gardeniae and provides a new method for thoroughly and authentically revealing the characteristics of TCM. Key words：Fructus Gardeniae; Dual-wavelength fusing method; High performance liquid chromatography;Fingerprints;

双波长分光光度法的基本原理及应用

双波长分光光度法的基本原理及应用应用分光光度法对共存组分进行不分离定量测定时，通常采用的方法有双波长法，三波长法，导数光谱法、差谱分析法及多组分分析法等方法，其快速，简便的优点使这些方法在实用分析中得到越来越广泛的应用。其中以双波长法的应用为最多，该法的准确度和精密度要高于其它方法，是对共存组分不分离定量测定的有效方法之一。实用中的双波长法主要采用等吸收波长法和系数倍增法两种分析方法，下面就其基本原理和应用作以介绍：一、等吸收波长法 1、基本原理图1是同一组分三个不同浓度供试液的吸收光谱图，经典分光光度法的定量测定通常是在被测组分的最大吸收波长处进行测定，根据兰伯一比耳定律，其吸光度值与被测组分的浓度C成正比，即：依（3）式测定被测组分a，则可完全消除b组分的干扰，达到共存组分不分离进行定量测定的目的。 2、影响因素（1）测定波长和组合波长的选择应使被测组分的△A值尽可能大，以增加测定的灵敏度和精确度。（2）测定波长和组合波长应尽可能选择在光谱曲线斜率变化较小的波长处，以减小波长变化对测定结果的影响。（3）干扰组分等吸收波长（组合波长）的选择必须精确，只有其△A值等于零时才能完全消除干扰，否则会引入测定误差。为此，在实用分析中，都是先配制一个干扰组分b的供试液，在仪器上准确找出等吸收波长，然后再对样品进行测定。 3 应用实例等吸收波长法的一个典型应用实例为收载于《中华人民共和国药典》中的抗菌消炎药复方磺胺甲噁唑片的含量测定。复方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑（SMZ）和甲氧苄（TMP）两个成分，其吸收光谱见图3。当测定SMZ时，选择其最大吸收波长257nm为测定波长，可以在干扰组分TMP的光谱曲线上304nm附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰；当测定TMP时，选择239nm为测定波长，可以在干扰组分SMZ的光谱曲线上295nm附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰，分别对SMZ和TMP进行含量测定。二、系数倍增法 1 基本原理

双波长法测淀粉含量

附录4 直链淀粉和支链淀粉的测定（双波长法） 1、目的淀粉一般都是直链淀粉和支链淀粉的混合物。直链淀粉和支链淀粉含量和比例因植物种类而不同，决定着谷物种子的出粉率和食物品质，并影响着谷物的贮藏加工。通过本实验学习掌握双波长测定谷物中直链淀粉和支链淀粉的含量。 2、原理根据双波长比色原理，如果溶液中某溶质在两个波长下均有吸收，则两个波长的吸收差值与溶质浓度成正比。直链淀粉与碘作用产生纯蓝色，支链淀粉与碘作用产生紫红色。如果用两种淀粉的标准溶液与碘反应，然后在同一个坐标系里进行扫描或做吸收曲线，即可达到实验目的。 3、仪器、试剂和材料 1、仪器（1）电子分析天平（2）分光光度计1台（3）ph计（4）容量瓶100mlx2，50mlx16 （5）吸管0.5mlx1，2mlx1，5mlx1 2、试剂（1）乙醚（2）无水乙醇（3）0.5mol/LKOH溶液（4）0.1mol/LHCL溶液（5）碘试剂：称取碘化钾2.0g，溶于少量蒸馏水，在加碘0.2g，待溶解后用蒸馏水稀释定容至100ml。（6）直链淀粉标准溶液：称取直链淀粉纯品0.1000g，放在100ml容量瓶中，加入0.5mol/LKOH10ml，在热水中待溶解后，取出加蒸馏水定容至100ml，即为1mg/ml直链淀粉标准溶液。 (7)支链淀粉标准溶液：用0.1000 g 支链淀粉按（6）法制备成1mg支链淀粉标准溶液。 3、材料小麦粉 4、操作步骤 1、选择支链、直链淀粉测定的波长参比波长。直链淀粉：取1mg/ml直链淀粉标准溶液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸

馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，用光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出直链淀粉吸收曲线。支链淀粉：取1mg/ml支链淀粉标准溶液1ml，放入50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，用光束分光光度计进行可见光全波段扫描或用普通比色法绘出支链淀粉吸收曲线。 2、制作双波长直链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml直链淀粉标准溶液0. 3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3ml分别放入6只不同的50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，比色，吸光差值为纵坐标，直链淀粉含量（mg）为横坐标制备双波长直链淀粉标准曲线。 3、制作双波长支链淀粉标准曲线：吸取1mg/ml支链淀粉标准溶液2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5ml分别放入6只不同的50ml容量瓶中，加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，加入碘试剂0.5ml，并以蒸馏水定容。静置20min，以蒸馏水为空白，比色，吸光差值为纵坐标，支链淀粉含量（mg）为横坐标制备双波长支链淀粉标准曲线。 4、样品中直链淀粉、支链淀粉及总淀粉的测定：样品粉碎过60目筛，用乙醚脱脂，称取脱脂样品0.1g左右（精确到1ml），置于50ml容量瓶中。加0.5mol/LKOH溶液10ml，在沸水浴中加热10min，取出，以蒸馏水定容至50ml，静置。吸取样品液2.5ml两份（即样品液和空白液），均加蒸馏水30ml，以0.1mol/LHCL溶液调至PH3.5左右，样品中加入碘试剂0.5ml，空白液不加碘试剂，然后定容至50ml。静置20min，以样品空白液为对照比色。五、结果处理直链淀粉（%）=（X1*50*100）/（2.5*m*1000）支链淀粉（%）=（X2*50*100）/（2.5*m*1000）式中， X1----查双波长直链淀粉标准曲线得样品中直链淀粉含量（mg） X2----查双波长支链淀粉标准曲线得样品中支链淀粉含量（mg） m-----样品质量（g）总淀粉（%）=直链淀粉（%）+支链淀粉（%）

紫外-可见分光光度法习题(答案与解析)18141

紫外-可见分光光度法 ●习题精选一、选择题（其中1~14题为单选，15~24题为多选） 1．以下四种化合物，能同时产生B吸收带、K吸收带和R吸收带的是（） A. CH2CHCH O B. CH C CH O C. C O CH3 D. CH CH2 2．在下列化合物中，*跃迁所需能量最大的化合物是（） A. 1,3丁二烯 B. 1,4戊二烯 C. 1,3环已二烯 D. 2,3二甲基1,3丁二烯 3．符合朗伯特-比耳定律的有色溶液稀释时，其最大吸收峰的波长位置（） A. 向短波方向移动 B. 向长波方向移动 C. 不移动，且吸光度值降低 D. 不移动，且吸光度值升高 4．双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于（） A. 光源的种类及个数 B. 单色器的个数 C. 吸收池的个数 D. 检测器的个数 5．在符合朗伯特-比尔定律的范围内，溶液的浓度、最大吸收波长、吸光度三者的关系是（） A. 增加、增加、增加 B. 减小、不变、减小 C. 减小、增加、减小 D. 增加、不变、减小 6．双波长分光光度计的输出信号是（） A. 样品吸收与参比吸收之差 B. 样品吸收与参比吸收之比 C. 样品在测定波长的吸收与参比波长的吸收之差 D. 样品在测定波长的吸收与参比波长的吸收之比 7．在紫外可见分光光度法测定中，使用参比溶液的作用是（） A. 调节仪器透光率的零点

B. 吸收入射光中测定所需要的光波 C. 调节入射光的光强度 D. 消除试剂等非测定物质对入射光吸收的影响 8．扫描K2Cr2O7硫酸溶液的紫外-可见吸收光谱时，一般选作参比溶液的是（） A. 蒸馏水 B. H2SO4溶液 C. K2Cr2O7的水溶液 D. K2Cr2O7的硫酸溶液 9．在比色法中，显色反应的显色剂选择原则错误的是（） A. 显色反应产物的值愈大愈好 B.显色剂的值愈大愈好 C. 显色剂的值愈小愈好 D. 显色反应产物和显色剂，在同一光波下的值相差愈大愈好 10．某分析工作者，在光度法测定前用参比溶液调节仪器时，只调至透光率为%，测得某有色溶液的透光率为%，此时溶液的真正透光率为（） A. % B. % C. % D. % 11．用分光光度法测定KCl中的微量I—时，可在酸性条件下，加入过量的KMnO4将I—氧化为I2，然后加入淀粉，生成I2-淀粉蓝色物质。测定时参比溶液应选择（） A. 蒸馏水 B. 试剂空白 C. 含KMnO4的试样溶液 D. 不含KMnO4的试样溶液 12．常用作光度计中获得单色光的组件是（） A. 光栅(或棱镜)+反射镜 B. 光栅(或棱镜)+狭缝 C. 光栅(或棱镜)+稳压器 D. 光栅(或棱镜)+准直镜 13．某物质的吸光系数与下列哪个因素有关（） A. 溶液浓度 B. 测定波长 C. 仪器型号 D. 吸收池厚度 14．假定ΔT=±％A= 则测定结果的相对误差为（） A. ±％ B. ±％ C. ±％ D. ±％ 15．今有A和B两种药物的复方制剂溶液，其吸收曲线相互不重叠，下列有关叙述正确的是（）

双波长法测定安钠咖中组分含量55

双波长法测定安钠咖中组分含量一、实验目的和要求 1、掌握紫外可见分光光度计的基本操作； 2、掌握双波长分光光度法测定二元混合物中待测组分含量的原理和方法； 3、掌握在物质中吸收曲线上寻找吸收点、测定波长、参比波长的方法； 4、掌握标准曲线绘制及应用； 5、了解双波长分光光度法在单光束分光光度计上的测定方式。二、实验原理每毫升安钠咖注射液中含0.12g无水咖啡因和0.13g苯甲酸钠，要求二组分的含量均应为标示量的93%~107%。在0.10mol/L盐酸溶液中，苯甲酸钠在230nm波长处有一较强吸收峰，咖啡因在272nm 波长处有一较强吸收峰；二者吸收曲线重叠十分严重，直接采用吸光度进行定量测定时，相互之间有严重干扰。根据光吸收定律，溶液吸光度应为各个组分吸光度的加合。当在230nm波长处测定苯甲酸钠（此时把咖啡因视为干扰组分）时，测定的吸光度为： A230安钠咖=A230苯甲酸钠+A230咖啡因但是在咖啡因的吸收曲线可以发现，咖啡因在230nm和257nm两波长处得吸收相等（吸光度值相等，即等吸收点）： A230咖啡因=A257咖啡因因此，通过直接测定混合物溶液在230nm和257nm两波长处得吸光度值，再计算二吸光度的差值，可消除咖啡因对苯甲酸钠测定的干扰： ΔA=A230安钠咖—A257安钠咖 =（A230苯甲酸钠+A230咖啡因）—（A257苯甲酸钠+A257咖啡因） =A230苯甲酸钠—A257苯甲酸钠 =（ε230苯甲酸钠b—ε257苯甲酸钠b）C苯甲酸钠 =KC苯甲酸钠可以看出，混合物溶液在230nm和257nm两波长处得吸光度差值仅与苯甲酸钠浓度成正比，而与咖啡因浓度无关，从而实现苯甲酸钠的定量分析。同理，当在272nm波长处测定咖啡因（视苯甲酸钠为干扰组分）时，可选择272nm和253nm两个苯甲酸钠的等吸收点波长进行测定，混合物溶液在这两个波长处得吸光度差值仅与咖啡因浓度成正比，而与苯甲酸钠浓度无关，可消除苯甲酸钠对咖啡因测定的干扰，从而实现咖啡因的定量分析： ΔA=KC咖啡因三、实验仪器与试剂 752型或UV-265型分光光度计；标准咖啡因储备溶液（0.2500mg/ml）；标准甲酸钠储备溶液（0.2500mg/ml）；盐酸溶液（0.10mol/L）；50ml容量瓶12个；5ml移液管4只；1cm石英比色皿2个；

紫外-分光光度法原理

紫外分光光度计的使用原理和方法紫外-可见分光光度法(ultraviolet-visible spectrophotometry, UV-VIS) 1定义：它是利用物质的分子或离子对某一波长范围的光的吸收作用，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析, 所依据的光谱是分子或离子吸收入射光中特定波长的光而产生的吸收光谱。 2分类：按所吸收光的波长区域不同：分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称为紫外-可见分光光度法。 3、紫外-可见分光光度法的特点：（1) 其仪器设备和操作都比较简单，费用少，分析速度快;（与其它光谱分析方法相比）（2）灵敏度高; （3）选择性好; （4）精密度和准确度较高; （5）用途广泛。 §1. 紫外-可见吸收光谱 1. 物质对光的选择性吸收物质对光的吸收是选择性的，利用被测物质对某波长的光的吸收来了解物质的特性，这就是光谱法的基础。通过测定被测物质对不同波长的光的吸收强度（吸光度），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得出该物质在测定波长范围的吸收曲线。在吸收曲线中，通常选用最大吸收波长λmax进行物质含量的测定。 2.有机化合物的紫外-可见吸收光谱 2.1 有机化合物的电子跃迁与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三种，即形成单键的σ电子、形成双键的π电子以及未参与成键的n电子。跃迁类型有：σ→σ*、n→σ* 、π→π*、n→π* 四种。饱合有机化合物的电子跃迁类型为σ→σ*，n→σ*跃迁，吸收峰一般出现在真空紫外区，吸收峰低于200nm，实际应用价值不大。不饱合机化合物的电子跃迁类型为n→π*，π→π*跃迁，吸收峰一般大于200nm。生色团：是指分子中可以吸收光子而产生电子跃迁的原子基团。人们通常将能吸收紫外、可见光的原子团或结构系统定义为生色团。助色团：是指带有非键电子对的基团，如-OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I等，它们本身不能吸收大于200nm的光，但是当它们与生色团相连时，会使生色团的吸收峰向长波方向移动，

分光光度计

第六章吸光光度法例6-1 铁(Ⅱ)-邻菲罗啉的摩尔吸光系数，计算桑德尔灵敏度。解例6-2 一种含有、的未知试液，经氧化处理后得，试液，分别在440nm，545nm测得吸光度为0.385，0.653，b=1cm，求试液中，浓度。 (已知) 解对于吸收曲线有重叠的混合物试样、混浊样品或其他北京吸收较大的试样，由于存在很强的散射和非特征吸收，难以找到一个合适的参比消除其影响。利用双波长技术可以从分析波长的信号中减去来自参比波长的信号，以消除散射以在测定波长时吸收的其它物质的干扰，从而提高选择性灵敏度，并简化了分析混合物的手续，扩大了光度分析的应用范围。双波长分光光度计测得值为两波长下吸光度差值定量测定依据为标准曲线曲线表示，试样溶液在两个波长，处的吸光度差值与试样溶液中待测物质浓度呈正比。用双波长测定时，作为参比的不是另外参比液而是试液本身对某一波长的吸光度，这样抵消了样品混浊与基本不一致的误差，提高了灵敏度及选择性。例6-3 某有色溶液在2.00cm吸收池中，测得百分透光率T=50%，若改用(1)1cm，(2)3cm厚的吸收池时，其T和A各为多少？解先求有色溶液在2cm吸收池中吸光度A，由公式可得由吸光度与液层厚度成正比，可求得厚度为1cm和3cm时有色溶液的吸光度，又据公式可求各自的T： (1) b=1cm， T=71% （2）b=3cm， T=35% 例6-4 某有色溶液置于1cm吸收池中，测得吸光度为0.30，则入射光强度减弱了多少？若置于3cm吸收池中，入射光强度又减弱了多少？解求入射光强度减弱了多少，即求光通过溶液后，吸收光强度与入射光强度的比值。已知当b=1cm时，A=0.30，由入射光强度、透过光强度I及吸收光强度三者之间的关系，以及吸光度与透光率的关系，即可

双波长分光光度法同时测定电镀液中的钴和镍

第37卷第2期辽宁化工Vol.37,No.2 2008年2月L iaoning Che m ical I ndustry February,2008双波长分光光度法同时测定电镀液中的钴和镍王　宏 (沈阳理工大学环境与化工学院,辽宁沈阳110168) 摘要:　考察了以4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚(P AR)作为显色剂,用双波长分光光度法同时测定电镀液中的钴和镍的最佳实验条件。在pH=8.0的氯化铵-氨水缓冲溶液中,以λ max,Co =512n m, λ 参比,Co =482n m为测定钴的波长对,Co的线性方程为y=0.0907x-0.0162,线性范围为8.00～22.00 μg/25mL;以λ max,N i =496n m,λ参比,N i=526n m为测定镍的波长对,N i的线性方程为y=0.3632x+0. 0197,线性范围为4.00～14.00μg/25mL。对电镀液进行加标回收实验结果表明,该方法精密度高,结果准确,令人满意。关　键　词:　双波长分光光度法;钴;镍;P AR 中图分类号:　O657.32 文献标识码:　A 文章编号:　100420935(2008)022******* 电镀液中主成分金属离子的比例是影响镀层性能的主要因素,所以镀液中金属离子含量的测定成为控制镀层质量的主要手段之一,而镀液中镍和钴金属离子含量的测定大多采用光度法等[1-3],但由于金属离子及其络合物的吸收光谱重叠,相互干扰难以消除,本文采用双波长分光光度法同时测定电镀液中钴和镍,取得良好效果。 1　实验部分 1.1　仪器与试剂 723分光光度计;钴、镍标准液:10mg/L; P AR乙醇溶液:0.5g/L;pH=8.0NH4Cl-NH3缓冲溶液。 1.2　实验方法取一定量待测液于25mL的比色管中,加入显色剂1.5mL,再加入缓冲溶液2mL,加蒸馏水定容并摇匀。10m in后,用1.0c m的比色皿,试剂空白为参比,在选定波长对处测定其吸光度值,然后按回归方程计算钴和镍的含量。 2　结果与讨论 2.1　波长对选择分别移取钴、镍标准溶液1.5mL,按实验方法显色,测得其吸收光谱。选择最大吸收波长为测量波长,利用等吸收点法选择参比波长,得λ max,Co =512n m,λ参比,Co=482nm,λmax,N i=496n m, λ 参比,N i =526nm。 2.2　显色条件的选择 2.2.1　pH值的影响试验表明,钴和镍的吸光度值随pH值增加而增加,当pH在8～11时吸光度值稳定大且稳定。选用pH=8.0的缓冲溶液,用量在1.0～4.0 mL时,吸光度值大且稳定,本实验选用2.0mL。 2.2.2　显色剂用量实验表明,显色剂用量在0.5～2.0mL时吸光度值大且稳定,故选择用量为1.5mL。 2.2.3　显色时间的影响实验表明,络合物吸光度在10m in后吸光度值达到最大值,并可稳定3h。本实验选用10 m in显色。 2.2.4　表面活性剂的影响考察了OP、CPC、聚乙烯醇等表面活性剂,加入表面活性剂对吸光度值A的影响不大,故本实验不加入表面活性剂,以降低成本。收稿日期:　2007209219 作者简介:　王　宏(1970-),女,工程师。

双波长差吸光度法及后分光技术的应用和发展前景(精)

双波长差吸光度法及后分光技术的应用和发展前景李雪志 (本文 1996年发表建立在 Lambert—beer 定律基础上的单波长分光光度分析技术,应用极为广泛, 但由于单波长法存在混浊试样对光的散射和比色杯背景吸收等难以克服的缺点,它在高精度测量中的应用受到一定的限制。为了解决浑浊试样对分光光度测定的干扰问题,美国的 B.Chance 于 1951年制成了用振动镜使两束不同波长的单色光交替通过待测溶液的双波长分光光度计(Double Wavelength Spectrophotometer ,从而奠定了双波长分光光度法的基础。随着科学技术的发展,双波长分光光度分析技术已日臻完善,与先进的后分光技术相结合,在生化自动化分析中得到了广泛的应用并显示出了光明的发展前景。 1 双波长分光光度法的原理双波长分光光度法是在传统分光光度法的基础上发展起来的,它的理论基础是差吸光度和等吸收波长。它与传统分光光度法的不同之处,在于它采用了两个不同的波长即测量波长(又叫主波长λp, Primary Wavelength 和参比波长 (又叫次波长λs, Second Wavelength 同时测定一个样品溶液 [1,2],以克服单波长测定的缺点,提高了测定结果的精密度和准确度。早期的双波长分光光度计在测定时, 两束不同波长的单色光经斩光器 (Chopper , 一种用于双波长分光光度计中使光束按一定周期反射,遮断或通过的装置处理后,以一定的时间间隔交替照射 [1]比色杯,经待测溶液吸收后,再照到光电管上,产生两个不同的吸光度,再将这两个吸光度相减,就得到了差吸光度ΔA 。根据 Lamber-Beer 定律 , 得: A λ p = ελpLC + Ap (1 A λs = ελsLC + As (2 式中:A λ p 、A λs 分别为待测溶液在主波长和次波长处的吸光度