利用高效CaCl2转化法实现质粒的共转化

小学奥数解题方法例举(学生版)

1.小学奥数解题方法1——分类有长度分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11(单位：厘米)的木棒足够多，选其中三根作为三条边围成三角形。如果所围成的三角形的一条边长为11厘米，那么，共可围成多少个不同的三角形? 提示：要围成的三角形已经有一条边长度确定了，只需确定另外两条边的长度。设这两条边长度分别为a，b，那么a，b的取值必须受到两条限制： ①a、b只能取1～11的自然数; ②三角形任意两边之和大于第三边。 1、11 一种 2、11 2、10 二种 3、11 3、10 3、9 三种 4、11 4、10 4、9 4、8 四种 5、11 5、10 5、9 5、8 5、7 五种 6、11 6、10 6、9 6、8 6、7 6、6 六种 7、11 7、10 7、9 7、8 7、7 五种 8、11 8、10 8、9 8、8 四种 9、11 9、10 9、9 三种 10、11 10、10 二种 11、11 一种 1+2+3+4+5+6+5+4+3+2+1=36种小学奥数解题方法2——化大为小找规律 10条直线最多可把一个长方形分成多少块? ( 56 ) 小学奥数解题方法3——把未知量具体化幼儿园把一筐苹果平均分给大班和小班的小朋友，每个小朋友可分得6个。如果全部分给大班小朋友，那么平均每人可分10个。如果全部分给小班的小朋友，平均每人可分几个? (15)

将一根长为374厘米的铝合金管截成若干根长36厘米和24厘米的短管。问剩余部分的管子最少是多少厘米?(2) 小学奥数解题方法5——移多补少新光机器厂装配拖拉机，第一天装配50台，第二天比第一天多装配5台，第三、第四两天装配台数是第一天的2倍多3台，平均每天装配多少台?(52) 小学奥数解题方法6——等量代换百货商店运来300双球鞋，分别装在2个木箱、6个纸箱里。如果2个纸箱同1个木箱装的球鞋一样多，每个木箱和每个纸箱各装多少双球鞋? 用两台水泵抽水，小水泵抽6小时，大水泵抽8小时，一共抽水312立方米。小水泵5小时的抽水量等于大水泵2小时的抽水量，两种水泵每小时各抽水多少立方米?(12,30) 小学奥数解题方法7——画图 A、B、C、D与小青五位同学一起比赛象棋，每两人都要比赛一盘。到现在为止，A已经赛了4盘，B 赛了3盘，C赛了2盘，D赛了1盘。问小青已经赛了几盘?(2) 小学奥数解题方法8——反过来想用淘汰制比赛从200名乒乓球选手中产生一名冠军，问应进行多少场比赛?(199) 小学奥数解题方法9——分析因果关系用一个杯子向一个空瓶里倒水。如果倒进3杯水，连瓶共重440克。如果倒进5杯水，连瓶共重600克。一杯水和一个空瓶各重多少?(80,200)

一种用质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞的实用操作技巧

生物技术通报 BIOTECHNOLOGY BULLETIN ·研究报告· 2009年增刊收稿日期:2009-04-29 基金项目:西安市科技局科技攻关项目(GG06078) 作者简介:陈洪栋(1986-),女,硕士研究生,研究方向:西北大学生命科学学院细胞生物学方向;E-mail:huijie1022110@https://www.360docs.net/doc/d69797706.html, 通讯作者:李红民,E-mail :lihm2006@https://www.360docs.net/doc/d69797706.html, 引言质粒DNA 成功转化大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli )由Cohen 等首次报道[1].此后,多位研究者对影响质粒转化E.coli 的条件如温度、离子强度和种类、质粒分子质量大小等进行了优化和改进[2] ,最终形成一致认可的转化程序:. 细胞与DNA 在氯化钙存在下于0~4℃作用一定时间后于42℃短暂热激2~3min,冰浴2~3min ,随后在不含抗生素的液体培养基中于37℃恢复培养30~60min 后涂布选择性平板[3]。该方法被称为是E.coli 细胞的标准转化方法,在世界范围内的分子生物学实验室中广泛应用并不断被完善,最高转化效率可达107~ 109克隆/μg 质粒DNA [4]。然而,利用该方法完成质粒DNA 对大肠杆菌的转化,至少需要约2.5h ,对于一般的质粒转化实验而言,比较费时费力。文章作者尝试对这一标准转化程序进行简化,获得一种用质粒DNA 转化大肠杆菌感受态细胞的实用操作技巧陈洪栋董文博李红民（西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室植物生物技术研究室西北大学生命科学学院，西安710069）摘要:目的是建立一种简化、实用的用质粒DNA 转化大肠杆菌的操作方法。采用氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞。以质粒pUC18,pCSN44,pAN52-1Not,pETts,pANth 和植物双元表达载体pCAMBIA1301分别转化用于质粒扩增与保存的常用大肠杆菌菌株Top10和DH5α以及用于原核表达的常用大肠杆菌菌株BL21(DE3)和TB1。质粒与感受态细胞的混合液置冰上作用一定时间后，直接涂布含有筛选抗生素的LB 平板，于37℃培养12~16h 。结果表明，用不同大小的质粒DNA 转化不同的大肠杆菌菌株，都可以获得满足实验要求，转化效率可高达103~4阳性克隆/μg 。该方法较标准的转化流程更加简便、省时、实用。关键词：Escherichia coli 转化方法质粒 Doohickey for the Standard Transformation Protocol of Plasmids DNA Transfer into Competent Chen Hongdong Dong Wenbo Li Hongmin (Plant Biotechnology Research Unit,Key Laboratory of Resource Biology Biotechnology in Western China,Ministry of Education School of Life Science Northwest University,Xi ’an 710069) Abstract: The aim of this study was to introduce a doohickey for the transformation of competent cells with plasmid DNA. The competent cells of Escherichia coli strains were previously made using the calcium chloride method.The plasmids,pUC18,pCSN44,pAN52-1Not,pETts,pANth and pCAMBIA1301,were employed to transform the different E.coli strains Top10,DH5α,BL21(DE3)and TB1.The mixture of plasmid and competent cell was laid on ice for definite time before being cultured at 37℃degree on selected LB plate with relevant antibiotic for 12~16h.Perfect transformation rate up to 103~4colonies/μg plasmid DNA was obtained. Key words:Escherichia coli Transformation method Plasmid

对应法解分数应用题

对应法解应用题一、知识点精析 1、解答分数应用题首先应从分率入手找出单位“1”的量，如果单位“1”的量已知则用乘法解，如果单位“1”的量未知，则用除法或方程解。然后确定分率和对应量之间的对应关系，这是解答分数应用题的关键。线段图可以化抽象为具体，在找分数应用题中分率和对应量之间的对应关系时具有特殊的作用。 2、在分数应用题中，常常会出现有几个单位“1”的分率，这时需要经过分析将它们转化成统一的单位“1”的分率，然后进行解答。二、典型例题分析例1、一袋面粉，第一次用去它的 51，第二次比第一次多用去5千克，还剩下25千克没有用。这袋面粉原有多少千克？试一试1、一袋面粉，第一次用去它的 51，第二次比第一次少用去5千克，还剩下35千克没用。这袋面粉原来有多少千克？例2、一条铁路，修完900千米后，剩余部分比全长的 43少300千米，这条铁路全长多少千米？试一试2、修一条铁路已修600千米，剩下的比全长的 43还多300千米，这条铁路全长多少千米？例3、有一堆苹果，吃了 43后又买来38千克，这时这堆苹果比原来多了51。问这堆苹果原来有多少千克？试一试3、有一堆苹果，吃了 43后又买来22千克，这时这堆苹果比原来少5 1，问这堆苹果原来有多少千克？

例4、玉龙粮食加工厂生产一批面粉，分三次运出，第一次运出的比总数的 41还多100袋，第二次运出的是第一次的 43，第三次运出95袋，这批面粉共有多少袋？试一试4、刘老师读一本书，第一天读了全书的 41多60页，第二天读了全书的31，第三天读的是第一天的 32，恰好看完，这本书多少页？例5、甲、乙、丙、丁四人共植树60棵。甲植树的棵数是其余三人的21，乙植树的棵数是其余三人的31，丙植树棵数是其余三人的4 1，丁植树多少棵？试一试5、甲、乙、丙、丁四人合钱捐给希望工程，结果甲捐了另外三人总数的一半，乙捐了另外三人总数的 31，丙捐了另外三人总数的41，丁捐了91元，问甲、乙、丙、丁四人共捐了多少元？例6、一群猴子吃筐里的桃子，第一天吃了总数的 21还多2个，第二天吃了余下的31少1个，第三天吃了这时余下的 41还多1个，这样还剩下20个没有吃完。求筐里桃子的总数。试一试6、一个工程队修一段路，第一周修全路的 21还多3千米，第二周修余下的31少1千米，第三周修余下的 4 1还多1千米，这样还剩下20千米没有修完。求路的全长。

拉普拉斯变换及逆变换

第十二章拉普拉斯变换及逆变换拉普拉斯(Laplace)变换是分析和求解常系数线性微分方程的一种简便的方法，而且在自动控制系统的分析和综合中也起着重要的作用。我们经常应用拉普拉斯变换进行电路的复频域分析。本章将扼要地介绍拉普拉斯变换（以下简称拉氏变换）的基本概念、主要性质、逆变换以及它在解常系数线性微分方程中的应用。第一节拉普拉斯变换在代数中，直接计算是很复杂的，而引用对数后，可先把上式变换为然后通过查常用对数表和反对数表，就可算得原来要求的数N 。这是一种把复杂运算转化为简单运算的做法，而拉氏变换则是另一种化繁为简的做法。一、拉氏变换的基本概念定义12.1 设函数()f t 当0t ≥时有定义，若广义积分 ()pt f t e dt +∞ -? 在P 的某一区域内收敛，则此积分就确定了一个参量为P 的函数，记作()F P ，即 dt e t f P F pt ? ∞ +-= )()( （12.1）称（12.1）式为函数()f t 的拉氏变换式，用记号[()]()L f t F P =表示。函数()F P 称为() f t 的拉氏变换(Laplace) (或称为()f t 的象函数)。函数()f t 称为()F P 的拉氏逆变换（或称为()F P 象原函数），记作 )()]([1t f P F L =-，即)]([)(1P F L t f -=。关于拉氏变换的定义，在这里做两点说明：（1）在定义中，只要求()f t 在0t ≥时有定义。为了研究拉氏变换性质的方便，以后总假定在0t <时，()0f t =。（2）在较为深入的讨论中，拉氏变换式中的参数P 是在复数范围内取值。为了方便起见，本章我们把P 作为实数来讨论，这并不影响对拉氏变换性质的研究和应用。（3）拉氏变换是将给定的函数通过广义积分转换成一个新的函数，它是一种积分变换。一般来说，在科学技术中遇到的函数，它的拉氏变换总是存在的。例12.1 求斜坡函数()f t at = （0t ≥，a 为常数）的拉氏变换。解：00 00 []()[]pt pt pt pt a a a L at ate dt td e e e dt p p p +∞ +∞+∞---+∞-= =-=-+? ?? 二、单位脉冲函数及其拉氏变换在研究线性电路在脉冲电动势作用后所产生的电流时，要涉及到我们要介绍的脉冲函数，在原来电流为零的电路中，某一瞬时(设为0t =)进入一单位电量的脉冲，现要确定电路上的电流()i t ，以()Q t 表示上述电路中的电量，则

多层转换体系例题

三、多层体系的等效换算换算公式：多层体系的面层，其模量和厚度保持不变，路基的模量也保持不变，其间各层利用下式换算为模量为第二层相同的等效层。 4 .22 1 3 2E E h h H i n i i ∑ -=+ = 2.等效中层弯拉应力的结构层换算多层体系中，邻近路基的结构层作为中层，其上各层转换为等效的上层。中层的模量和厚度以及路基的模量保持不变，上面各层按邻近中层的结构层模量值进行等效换算： ∑ -=--+ =3 1 4 2 2n i n i i n E E h h h 3．等效上层底面弯拉应力的结构层换算：上层的等效层厚： 4 1 1 j i j i i j E E h h h ∑ -=+ = 中层的等效层厚： 9 .01 1 2 1+-+=+∑ + =j i n j i i j E E h h H 列1 现有一五层体系，各层的模量和厚度如下表所列，请转换成三层体系，以便计算路面弯沉值和第一、二、四层底面的弯拉应力。层位 ) (Mpa E i ) (cm h i 1 1500 6.5 2 800 10 3 500 10 4 250 20 5 35 解：1、表面弯沉第一层不变，第二、三、四转换为E2＝800MPa 的中层其厚度为： cm E E h h H i i i 54.30800 25020800 50010104 .24 .24 .22 4 3 2=++=+ =∑ = 2、第一层底面弯拉应力第一层不变，第二、三、四层转为 E2＝800 的中层，其厚度为

cm E E h h H i i i 42.21800 25020800 50010109 .09 .09 .02 4 3 2=++=+ =∑ = 3．第二层底面弯拉应力第一、第二层转换为 80021=='E E 的上层，第三、第四层转换为23'500E E m pa ==的中层，其相应厚度为则 cm E E h h h 61.17800 15005.6104 4 2 112=+=+= cm E E h h H 26.19500 25020109 .09 .03 443=+=+= 4、第四层底面弯拉应力第一、二、三层转换为 Mpa E E 5003=='的上层，其厚度为： cm E E h h H i i i 8.29500 80010500 15005.6104 4 4 3 2 1 3=++=+ =∑ =

小学奥数解题方法完整版

幻灯片1 小学奥数解题方法完整版幻灯片2 解题方法1--分?类分类是一种很重要的数学思考方法，特别是在计数、数个数的问题中，分类的方法是很常用的。幻灯片3 可分为这样几类：（1）以A为左端点的线段共4条，分别是： AB，AC，AD，AE；（2）以B为左端点的线段共3条，分别是： BC，BD，BE；（3）以C为左端点的线段共2条，分别是： CD，CE；（4）以D为左端点的线段有1条，即DE。一共有线段4+3+2+1=10（条）。幻灯片4 还可以把图中的线段按它们所包含基本线段的条数来分类。（1）只含1条基本线段的，共4条： AB，BC，CD，DE；（2）含有2条基本线段的，共3条： AC，BD，CE；（3）含有3条基本线段的，共2条：AD，BE；（4）含有4条基本线段的，有1条，即AE。幻灯片5 有长度分别为1、2、3、4、5、6、7、 8、9、10、11（单位：厘米）的木棒足够多，选其中三根作为三条边围成三角形。如果所围成的三角形的一条边长为11厘米，那么，共可围成多少个不同的三角形提示：要围成的三角形已经有一条边长度确定了，只需确定另外两条边的长度。设这两条边长度分别为a，b，那么a，b的取值必须受到两条限制： ①a、b只能取1～11的自然数； ②三角形任意两边之和大于第三边。幻灯片6 1、11 一种 2、11 2、10 二种 3、11 3、10 3、9 三种 4、11 4、10 4、9 4、8 四种 5、11 5、10 5、9 5、8 5、7 五种

6、11 6、10 6、9 6、8 6、7 6、6 六种 7、11 7、10 7、9 7、8 7、7 五种 8、11 8、10 8、9 8、8 四种 9、11 9、10 9、9 三种 10、11 10、10 二种 11、11 一种 1+2+3+4+5+6+5+4+3+2+1=36种幻灯片7 解题方法2--化大为小找规律对于一些较复杂或数目较大的问题，如果一时感到无从下手，我们不妨把问题尽量简单化，在不改变问题性质的前提下，考虑问题最简单的情况（化大为小），从中分析探寻出问题的规律，以获得问题的答案。这就是解数学题常用的一种方法，叫做归纳，我们也可以叫做“化大为小找规律”。幻灯片8 10条直线最多可把一个长方形分成多少块提示：先不考虑10条直线，而是先看1条、2条、3条直线能把一个长方形分成几块幻灯片9 10条直线最多可把一个长方形分成多少块第一条直线：分成 2 块第二条直线：分成2+2=4 块第三条直线：分成2+2+3=7 块幻灯片10 10条直线最多可把一个长方形分成多少块我们发现这样的规律： =2+（2+3+4+5+6+7+8+9+10） =2+54 =56（块）这就是说，10条直线可把长方形分为56块。幻灯片11 解题方法3--把未知量具体化在减法中，被减数、减数、差相加的和，除以被减数，所得的商是多少一般情况下，题目中的未知量不可以随便假设。有时，问题中所求的未知量与其它相关的未知量具体是多少并没有关系。在这种情况下，可以把这些没有关系的未知量设为具体数。” 一项工程，甲队单独做12天完成，乙队单独做 15天完成，两队合做，几天可以完成幻灯片12 幼儿园把一筐苹果平均分给大班和小班的小朋友，每个小朋友可分得6个。如果全部分给大班小朋友，那么平均每人可分10个。如果全部分给小班的小朋友，平均每人可分几个●全部分给小班的小朋友，每人可分几个，与苹果的总个数有关系，而与人数（无论是两班人数，还是大班人数）都没有关系。 ●苹果总数=两班总人数×6????????? ●苹果总数=大班人数×10??????????

转染步骤及经验(精华)

转染步骤及经验（精华）一、基础理论转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养：取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL；轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基，或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS）抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血

六年级数学用转化法解分数应用题教学文稿

第3讲转化法解题（1）专题简析城西小学护林小队分成三组植树，第一组植树的棵数是其他两组植树棵数的一半，第二组植树的棵数是其他两组植树棵数的5 7 ，第三组植树51棵。三个组共植树多少棵？举一反三 1、红星小学一、二年级人数占全校学生总人数的1 4 ，三、四年级人数占其他年级总人数的1 3 ，五、六年级共240人，全校共有学生多少人？ 2、食堂买来土豆、茄子、青椒三种蔬菜。土豆的质量占其他两种蔬菜质量的1 3 ，茄子的质量占其他两种蔬菜质量的2 5 ，买来的青椒共26千克。食堂买来三种蔬菜共多少千克？

3、某幼儿园的小朋友做手工，红花的朵数占蓝花、黄花总朵数的2 3 ，蓝花的朵数占红花、蓝花总朵数的1 6 ，黄花做了16朵，这个幼儿园的小朋友一共做了多少朵？典型例题2（限时15分钟）某小学声乐组女生人数占总人数的5 8 ，增加了2名女生后，女生人数占总人数的2 3 ，该小学声乐组原来有多少名学生？举一反三 1、五（6）班男生人数占全班人数的5 11 ，本学期转进1名男同学后，男生人数占全班人数的13 28 。全班现在有学生多少人？

2、某小组同学一起做风车，小明做的风车数量占该小组风车总数的1 5 ，他又做了3个，这时他做的风车数量占该小组风车总数的2 7 ，该小组原来一共做了多少个风车？ 3、书架分为上、下两层，上层数的本书占总数的3 7 ，如果上层增加7本，则占总数的1 2 ，书架上原有多少本书？典型例题3（限时15分钟）有两堆煤共1764千克，用去第一堆的1 4 ，用去了第二堆的504千克后，两堆煤所剩下的质量相等，两堆煤原来各有多少千克？举一反三 1、新民小学毕业班有200名学生，选出24名女生和男生人数的1 6 去参加数学竞赛，剩下的男、女生人数相等，该校毕业班的男、女生各有多少名？

桥面连续体系转换施工方案(全).

目录一、编制依据 (1) 二、工程概况 (1) 1、K**+***石笋村高架大桥 (1) 2、K**+***窑脑上锦江大桥 (1) 3、I 匝道 IK*+***分离式立交桥 (2) 4、主要材料 (2) 三、施工准备 (2) 四、施工进度计划: (3) 五、机械设备及劳动力安排 (3) 六、施工工艺及施工方案 (4) (一施工工艺流程图 (4) (二施工方案 (4) 1、临时支座的安设 (4) 2、预制 T 梁安装 (5) 3、湿接缝施工 (5) 4、墩顶负弯矩钢束张拉、压浆 (6) 5、体系转换施工 (7)

6、施工中应注意的问题及措施 .............................................................. 7七、质量保证措施 (8) 1、建立质量岗位责任制 (8) 2、健全质量保证措施 .................................................................................... 8八、安全保证措施 (9) 1、组织保证措施 (9) 2、建立安全保证制度 .................................................................................... 9九、文明施工 . (10) 先简支后连续体系转换施工方案一、编制依据 1、**高速公路两阶段施工图设计;40mT 梁上部结构通用图,20mT 梁上部结构通用图。 2、**高速公路 B8合同段招投标文件。 3、《公路工程技术标准》(JTGB01-2014。 4、《公路桥涵施工技术规范》(JTG/TF50-2011。 5、《公路工程质量检验评定标准》(JTGF80/1-2004。 6、《公路施工技术安全技术规程》(JTGF50-2015。 7、施工现场踏勘及调查情况。 8、我单位现有的技术水平以及已经调进的施工队伍和机械设备及即将进入施工现场的施工机具。

《小学奥数解题方法大全》

第一讲观察法观察法，是通过观察题目中数字的变化规律及位置特点，条件与结论之间的关系，题目的结构特点及图形的特征，从而发现题目中的数量关系，把题目解答出来的一种解题方法。观察要有次序，要看得仔细、看得真切，在观察中要动脑，要想出道理、找出规律。第二册，第11页中的一道思考题。书中除图1-1的图形外没有文字说明。这道题旨在引导儿童观察、思考，初步培养他们的观察能力。这时儿童已经学过20以内的加减法，基于他们已有的知识，能够判断本题的意思是：在右边大正方形内的小方格中填入数字后，使大正方形中的每一横行，每一竖列，以及两条对角线上三个数字的和，都等于左边小正方形中的数字18。实质上，这是一种幻方，或者说是一种方阵。解：现在通过观察、思考，看小方格中应填入什么数字。从横中行10+6+□=18从竖右列7+2+□=18（图1-2）会想到，18-7-2=9，在竖右列下面的小方格中应填入9（图1-3）。从正方形对角线上的9+6+□=18（图1-3）会想到，18-9-6=3，在大正方形左上角的小方格中应填入3（图1-4）。从正方形对角线上的7+6+□=18（图1-3）会想到，18-7-6=5，在大正方形左下角的小方格中应填入5（图1-4）。

从横上行3+□+7=18（图1-4）会想到，18-3-7=8，在横上行中间的小方格中应填入8（图1-5）。又从横下行5+□+9=18（图1-4）会想到，18-5-9=4，在横下行中间的小方格中应填入4（图1-5）。图1-5是填完数字后的幻方。例2看每一行的前三个数，想一想接下去应该填什么数。（适于二年级程度） 6、16、26、____、____、____、____。 9、18、27、____、____、____、____。 80、73、66、____、____、____、____。解：观察6、16、26这三个数可发现，6、16、26的排列规律是：16比6 大10，26比16大10，即后面的每一个数都比它前面的那个数大10。观察9、18、27这三个数可发现，9、18、27的排列规律是：18比9大9，27比18大9，即后面的每一个数都比它前面的那个数大9。观察80、73、66这三个数可发现，80、73、66的排列规律是：73比80小7，66比73小7，即后面的每一个数都比它前面的那个数小7。这样可得到本题的答案是： 6、16、26、36、46、56、66。 9、18、27、36、45、54、63。 80、73、66、59、52、45、38。例3将1～9这九个数字填入图1-6的方框中，使图中所有的不等号均成立。（适于三年级程度）

氯化钙法质粒转化

氯化钙法进行质粒转化利用冰冷的CaCl2 制备competent cells,以传统方法进行质体的转形。仪器用具：37℃培养箱；42℃水浴；冰浴药品试剂： 0.1 M CaCl2置冰浴中 2 M glucose：取18 g glucose溶于水中，并调体积至50 mL，无菌过滤，分装后置-20℃贮存。 2 M Mg2+：取20.3 g MgCl2·6H2O及24.65 g MgSO4·7H2O溶于水中，并调体积至100mL，无菌过滤的，分装小瓶置-20℃贮存。亦可以MgCl2完全取代MgSO4. SOB 液体培养基： 32 Methods in Biotechnology Vol 1 2% Bacto tryptone, 0.5% yeast extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl,高压灭菌，使用前加入2 M Mg2+，使最终浓度为10 mM. SOB 固体培养基：

2% Bacto tryptone, 0.5% yeast extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1. 5% Bactoagar,高压灭菌，倒plate前加入2 M Mg2+ 使最终浓度为10 mM. SOC/Amp 固体培养基： SOB 中另外添加20 mM glucose 及100 μg/mL ampicillin. SOC 液体培养基：SOB 中加入20 mM glucose （使用前加入）。大肠杆菌菌株：JM109 #1~#5 接合反应液方法步骤： 1）进行转形实验前16~20 h,自-70℃取出贮存的菌种，以划单一菌落方式将菌株JM109 接种在SOB固体培养基上，在37℃培养。 2）取40 mL SOB培养基装入125 mL已灭过菌的三角瓶（请记得加入Mg 2+）。另取1 mL SOB加于微量离心管中。由SOB固体培养基上选4~6 个约2~3 mm大小的单一菌落接入1 mL SOB中，震荡将菌体打散后，加入40 mL S OB中，于37℃震荡培养约2~3 h,直至细胞数约为4~7×107/mL. 可于接菌2 h后每隔20~30 min测A600估计 3）收集菌液于离心管中，置冰浴中10~15 min. 4）以750~1,000 g 离心12~15 min （4℃）。

分数百分数应用题典型解法的和复习

一桶油第一次用去5 1 ，第二次比第一次多用去20千克，还剩下22千克。原来这桶油有多少千克 [分析与解] 从图中可以清楚地看出：这桶油的千克数×（1－51－5 1 ）=20+22 则这桶油的千克数为：（20+22）÷（1－51－5 1 ）=70（千克）一堆煤，第一次用去这堆煤的20%，第二次用去290千克，这时剩下的煤比原来这堆煤的一半还多10千克，求原来这堆煤共有多少千克 [分析与解] 显然，这堆煤的千克数×（1－20%－50%）=290+10 则这堆煤的千克数为：（290+10）÷（1－20%－50%）=1000（千克）量率对应是解答分数应用题的根本思想，量率对应是通过题中具体数量与抽象分率之间的对应关系来分析问题和解决问题的思想。（量率对应常常和画线段图结合使用，效果极佳。）练习题 ※一堆煤，第一次用去这堆煤的20%，第二次用去290千克，这时剩下的煤比原来这堆煤的一半还少10千克，求原来这堆煤共有多少千克缝纫机厂女职工占全厂职工人数的 20 7 ，比男职工少144人，缝纫机厂共有职工多少人解题的关键是找到与具体数量144人的相对应的分率。从线段图上可以清楚地看出女职工占 207，男职工占1－207=20 13，女职工比男职工少占全厂职工人数的2013－207=103，也就是144人与全厂人数的10 3 相对应。全厂的人数为： 144÷（1－207－20 7 ）=480（人）菜农张大伯卖一批大白菜，第一天卖出这批大白菜的31，第二天卖出余下的5 2 ，这时还剩下240 千克大白菜未卖，这批大白菜共有多少千克 [分析与解] 从线段图上可以清楚地看出240千克的对应分率是第一天卖出31后余下的（1－5 2 ）。则第一天卖出后余下的大白菜千克数为： 240÷（1－ 5 2 ）=400（千克）同理400千克的对应分率为这批大白菜的（1－3 1 ），则这批大白菜的千克数为： 400÷（1－3 1 ）=600（千克）

合龙段及体系转换施工工艺工法

合龙段及体系转换施工工艺工法（QB/ZTYJGYGF-QL-0507-2011）桥梁工程有限公司廖文华刘涛 1 前言 1.1 工艺工法概况预应力混凝土连续梁(刚构)被划分为0#段、悬臂浇筑段、边跨现浇段及边(中)跨合龙段，其中的合龙段施工方案、施工工艺及体系转换是连续梁(刚构)施工的重难点之一，其施工质量将直接影响全桥的施工质量和结构安全。结构体系转换由施工过程的悬臂静定结构转换成连续的超静定结构，桥梁转换成超静定结构后，除了因合龙的顺序不同而产生不同的施工内力外，梁体内力将重新分布。 1.2 工艺原理对于悬臂浇筑的桥梁结构，按照一定的顺序施工合龙和解除支座、0#段临时固结措施，将悬臂施工的静力结构转换成桥状态的连续梁（刚构）。即桥梁由施工过程中的悬臂静定结构转换成连续的超静定结构。 2 工艺特点 2.1 充分考虑了合龙段和体系转换阶段桥梁结构的受力特点，合龙段劲性骨架和临时预应力索、临时支座设计合理，施工质量可靠。 2.2 合龙段施工支架可考虑利用挂篮或搭设落地支架方案，根据现场实际情况灵和选择，施工方便。 2.3 模板可利用悬灌段施工的外侧模和底模，仅内模可能受横隔板的影响需另行加工模板，施工费用低。 3 适用范围本标准工艺适用于所有预应力混凝土连续梁(刚构)的施工；其他类型桥梁合龙施工亦可参照本工法。 4 主要技术标准《公路桥涵施工技术规范》（JTJ 041）《铁路桥涵施工规范》（TB 10203）《铁路桥涵工程施工质量验收标准》（TB 10415）《城市桥梁工程施工与质量验收标准》（CJJ 2）《钢结构设计规范》（GB 50017）

《公路桥涵施工技术规范》（JTG/T F50） 5 施工方法合龙前应观测连日的昼夜温度变化与合龙高程及合龙口长度变化的关系，选定适当的合龙浇注时间。连续梁(刚构)合龙段及体系转换施工顺序一般是：先边跨、后中跨，最后进行体系转换；体系转换施工主要包括确定劲性骨架、临时预应力索施工、劲性骨架锁定、劲性骨架约束解除、合龙段混凝土浇筑预应力张拉及管道压浆、合龙段混凝土养护等内容。 6 工艺流程及操作要点 6.1 施工工艺流程施工顺序应严格按照设计文件规定进行。边跨、中跨合龙段施工工艺流程见图1：

12、小学奥数——转换法

小学奥数——转换法解答应用题时，通过转换（即转化）题中的情节，分析问题的角度、数据……从而较快找到解题思路，或简化解题过程的解题方法叫做转换法。（一）转换题中的情节转换题中的情节是运用联想改变原题的某个情节，使题目变得易于解答。 1、一堆煤，上午运走它的72，上午运走它的72，下午运走余下的3 1还多6吨，最后剩下14吨。这堆煤原来有多少吨？解：题中“下午运走余下的31还多6吨”，我们把这一情节变换为，下午正好运走余下的3 1，则最后剩下的煤是：14+6=20（吨）这20吨正好是余下的32，所以余下的的煤是：20÷3 2=30（吨） 30吨所对应的分率是：1-72=7 5 这堆煤原来的吨数是：30÷7 5=42（吨）答略。 2、一项工程，甲、乙两队合做要用12天完成。如果甲队先独做16天，余下的再由乙队独做6天完成。如果全部工程由甲队独做，要用几天完成？解：求甲队独做要用几天完成全部工程，得先求出甲队的工作效率。可是题中已知的是甲、乙合做要用的时间，和甲、乙一前一后独做的时间，很难求出甲的工作效率。如果将“一前一后独做”这一情节变换为“先合做，后独做”就便于解题了。可这样设想，从甲队的工作量中划出6天的工作量与乙队6天的工作量合并起来，也就是假定两队曾经合做了6天。情节这样变动后，原题就变换成：一项工程，甲、乙两队合做要用12天完成，这项工程先由甲乙两队合做6天后，余下的工程由甲队单独做10天完成。如果全部工程由甲队独做要用几天完成？这样就很容易求出甲队的工作效率是：（1-121×6）÷10=21÷10=20 1 甲队独做完成的时间是：1÷20 1=20（天）答略。（二）转换看问题的角度解应用题时，如果看问题的角度不适当就很难解出题。如果转换看问题的角度，把原来从正面看问题转换为从侧面看或从反面看，把这一数量转换为另一数量进行分析，就可能找到解题思路。 1、某厂有工人1120名，其中女工占73，后来又招进一批女工，这时女工占总人数的15 7，求后来招进女工多少名？

20170803 热激法转化质粒

20170803 热激法转化质粒武汉大学Angelo 实验原理：质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作。热激法：大肠杆菌在0℃、CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，与转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子实验步骤：（1）从-80 ℃冰箱内取一管冻存的感受态大肠杆菌DH-5α于冰浴上融化复苏10min；（2）加入待转化的质粒0.5μL-1.5μL，轻轻吹打混匀，冰浴30 min；（3）在42 ℃恒温水浴锅中严格操作热激90 s，然后立即冰浴静置2 min；（4）在无菌操作台内，向感受态大肠杆菌中加入600 μL-1000μLLB液体培养基，在200 r/min 、37 ℃恒温摇床内摇30min-1 h 进行活化；

（5）在活化的时候，从4℃拿出含抗生素的固体细菌培养板放到37℃恒温培养箱中回温十分钟。（6）活化结束后，在无菌操作台内，吸取菌液20μL-40μL涂板到含抗生素（50 mg/ml）的固体细菌培养板上；（7）置于37 ℃恒温培养箱内过夜培养（12h-16h）。要点： 1，固体培养板的抗生素抗性（Amp，Kana） 2，转化质粒的量根据质粒浓度进行添加 3，涂板菌液的量根据活化加培养基的量进行选择 4，注意每项工作前都要进行充分准备，比如涂板棒进行灭菌，移液枪进行消毒等。 5，对刚连接的质粒进行转化，不同之处在于活化时间为1-2h。活化后，将菌液2500 -3500rpm离心3 min，留下沉淀和200 μL菌液，充分混匀，涂板到含抗生素的固体培养基上。

句式变换教案

句式变换学习目标 1、句式变换的类型 2、掌握句式变换的各种技巧和方法句式转换的类型 1、长句与短句的变换 2、整句与散句的变换 3、语句的重组 4、不同语气间的变换一、长短句互换例1：把下面这个长句改成几个较短的句子，可以改变语序，增删词语，但不得改变原意。（5分）巴黎之行让我对法国作家和诗人维克多?雨果为建立法国文学创作者的着作权保护机构——法国文学家协会所做的工作，为促成制定保护文学艺术作品着作权的国际公约——伯尔尼公约做出的杰出贡献有了更深的了解解析：抓住句子主干并单列为一个分句，然后按照一定的顺序排列句中的定语或状语。注意使用“润滑剂”——介词、副词和关联词。长句变短句要抓住最难于理解的成分，使变后的文段语序合理，意思明了，前后通顺。答案：巴黎之行让我对法国作家和诗人维克多?雨果有了更深的了解。他在着作权保护方面作出了杰出的贡献。他促成了法国文学创作者的着作权保护机构——法国文学家协会的建立，促成了保护文学艺术作品着作权的国际公约——伯尔尼公约的制定。例2：将下面的四个短句整合成一个长单句。（可调整语序，适当增删词语，不能改变愿意）（4分） ①莫言生于山东高密县，中国当代着名作家。 ②诺贝尔文学奖评审委员会认为他的作品具有魔幻现实主义的特点。 ③莫言曾凭借长篇小说《蛙》获第八届茅盾文学奖。 ④2012年10月11日，莫言获得诺贝尔文学奖。答案：生于山东高密县的凭借长篇小说《蛙》获第八届茅盾文学奖的作品被认为具有魔幻现实主义特点的中国当代着名作家莫言于2012年10月11日获得了诺贝尔文学奖。或：莫言是生于山东高密县的凭借长篇小说《蛙》获第八届茅盾文学奖的作品被认为具有魔幻现实主义特点并于2012年10月11日获得了诺贝尔文学奖的中国当代着名作家。 2012年10月11日获得诺贝尔文学奖的作家是生于山东高密县的作品被认为具有魔幻现实主义特点并曾凭借长篇小说《蛙》获第八届茅盾文学奖的中国当代着名作家莫言。（不是单句不得分，信息遗漏一点扣一分）方法与技巧一、长变短 1、先筛选出句子的主干，明确句子的中心意思。如例题巴黎之行让我对法国作家和诗人维多克雨果有了更深的了解 2、然后抽出附加成分，将它们变成按一定顺序排列的短句。 3、整体审视所变换的几个句子，按逻辑排定顺序，可添加“连词”“代词”等以满足简洁连贯的要求。

体系转换作业指导书

体系转换作业指导书一、工程概况：平胜大桥是佛山市和顺至北滘公路主干线工程的重要工程，跨越东平水道，起点桩号里程为K9+781.88,终点桩号里程为K10+462.08,桥梁中心里程为K10+227.00,全桥长680.2m，主桥为独塔单跨自锚式悬索桥，设计为双向10车道按双幅布置，主跨采用钢加劲梁，单幅桥面宽26.1m，桥面横向布置为：3.0m（人行道）+1.0m（吊索区、风嘴）+20.5m（车行道）+1.6m（吊索区、检修道），两幅桥间距3.8m，桥梁总宽56.0m。本桥主缆由四跨组成，边跨理论跨径224m，主跨理论跨径350m，主跨的理论垂跨比约为1：12.5，边跨垂跨比为1：114，主缆施工采用预制平行钢丝索股逐根架设的施工方法（PPWS），主缆共四根，每根主缆中含48股平行钢丝索股，每股含127丝ф5.1mm镀锌高强钢丝，主缆直径挤紧后索夹处约440.0mm。索股锚具采用套筒式热铸锚，主缆中心设计无应力总长度为670.56507m,全桥主缆钢丝总重量2622t。全桥索夹共三大类：1、连接主缆与吊索的吊索索夹；2、用于主缆定型的紧箍索夹；3、主索鞍及散索鞍出口处防护密封的封闭索夹。本桥只在主跨设置吊索，边跨不设吊索。主跨顺桥向设27对吊索，吊索标准间距为12m，塔侧1#吊索与塔中心线的间距为19m，和顺岸27#吊索与M9号墩中心线的间距为19m。临近和顺岸锚跨的26#、

27#吊索为上下带铰的刚性吊索，为40CrNiMoA的钢棒，全桥共8根；其余25对吊索为顺桥向间距0.4m的73φ5.1的镀锌平行高强钢丝双吊索，外包6mm厚PE进行防护，为全桥共200根。其中最长吊索为1号吊索107.65m，重约1.8t，最短为27号吊索2.99m，重约1.68t。所有柔性吊索的上接头采用铰销接头，铰销均配有SF-1聚四氟乙烯衬套，下接头采用锚头直接锚固在主梁的锚箱上，且设置球面锚垫板,该垫板与吊杆锚垫板之间还设置了楔形垫板，以便于适应吊索的变形。刚性吊索分两节，上面一节上下均采用铰销接头，下面一节上端为叉形耳板与上一节连接，下端采用螺母锚固在锚垫板上，且设置球面锚垫板。吊索锚头：吊索上下锚头均采用冷铸锚，上锚头由锚杯与连接板螺纹连接，下锚头采用张拉端锚具与主梁锚箱连接。主缆架设完，通过对主缆实际线形，钢箱梁吊索点标高、里程的测量，重新计算吊索无应力长度，在浦江缆索厂加工吊索，后运至工地，同时索夹的位置亦按照此空缆线形确定，在吊索张拉前所有索夹必须安装、紧固完。通过吊索的挂设、张拉，完成整个桥的体系转换，钢箱梁会抬高，钢箱梁重量由临时墩支撑转换到主缆上，继而传给主梁形成大压杆，期间各构件应力、线形均发生变化，如：1、主缆由低应力状态过渡到高应力状态、由自由悬链线过渡到成桥抛物线形；2、吊杆通过接长杆逐步张拉就位，其受力也逐步增大，最大单根吊杆为120t，远大于成桥时吊索索力50t；3、整个主梁压力逐步增大到12000t，钢箱梁下支撑临时墩逐步脱离，主梁线形不断变化，主跨跨中标高上抬