一种优化的质粒转化简便方法
十进制数与十六进制数的转换方法
若十进制数23785转为十六进制，则用23785/16=1486余9,1486/16=92余14,92/16=5余12,5/16=0余5，十六进制中，10对应为a、11对应为b、。。。。。。、15对应为f，再将余数倒写为5ce9,则十进制23785=十六进制5ce9 十六进制数的第0位的权值为16的0次方，第1位的权值为16的1次方，第2位的权值为16的2次方…… 所以，在第N（N从0开始）位上，如果是是数X （X 大于等于0，并且X小于等于15，即：F）表示的大小为X * 16的N次方。 假设有一个十六进数2AF5, 那么如何换算成10进制呢？ 用竖式计算：2AF5换算成10进制: 第0位：5 * 16^0 = 5 第1位：F * 16^1 = 240 第2位：A * 16^2 = 2560 第3位：2 * 16^3 = 8192 ＋ ------------------------------------- 10997 直接计算就是： 5 * 16^0 + F * 16^1 + A * 16^2 + 2 * 16^3 = 10997 二进制的1101转化成十进制 1101（2）=1*2^0+0*2^1+1*2^2+1*2^3=1+0+4+8=13 转化成十进制要从右到左用二进制的每个数去乘以2的相应次方不过次方要从0开始 十进制转二进制：用2辗转相除至结果为1 将余数和最后的1从下向上倒序写就是结果例如302 302/2 = 151 余0 151/2 = 75 余1 75/2 = 37 余1 37/2 = 18 余1 18/2 = 9 余0 9/2 = 4 余1 4/2 = 2 余0 2/2 = 1 余0 1/2 = 0 余1 故二进制为100101110 二进制转八进制 在把二进制数转换为八进制表示形式时,对每三位二进制位进行分组,应该从小数点所在位置分别向左向右划分,若整数部分倍数不是3的倍数,可以在最高位前面补若干个0;对小数部分,当其位数不是的倍数时,在最低位后补若干个0.然后从左到右把每组的八进制码依次写出,即得转换结果. 你算一下就知道了啊比如110=2^2+2+0=6 二进制转十六进制 要将二进制转为16进制，只需将二进制的位数由右向左每四位一个单位分隔，分的不够的前边补零，用四位数的二进制数来代表一个16进制。转换表如下，括号内为十六进制 0000（0）0001 （1）0010 （2）0011 （3）0100 （4）0101 （5）0110 （6）0111 （7）1000 （8）1001 （9）1010（A）1011 （B）
一种用质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞的实用操作技巧
生物技术通报 BIOTECHNOLOGY BULLETIN ·研究报告· 2009年增刊 收稿日期:2009-04-29 基金项目:西安市科技局科技攻关项目(GG06078) 作者简介:陈洪栋(1986-),女,硕士研究生,研究方向:西北大学生命科学学院细胞生物学方向;E-mail:huijie1022110@https://www.360docs.net/doc/e03614260.html, 通讯作者:李红民,E-mail :lihm2006@https://www.360docs.net/doc/e03614260.html, 引言 质粒DNA 成功转化大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli )由Cohen 等首次报道[1].此后,多位研究者对 影响质粒转化E.coli 的条件如温度、离子强度和种类、质粒分子质量大小等进行了优化和改进[2] ,最 终形成一致认可的转化程序:. 细胞与DNA 在 氯化钙存在下于0~4℃作用一定时间后于42℃短暂热激2~3min,冰浴2~3min ,随后在不含抗生素 的液体培养基中于37℃恢复培养30~60min 后涂 布选择性平板[3]。该方法被称为是E.coli 细胞的标准转化方法,在世界范围内的分子生物学实验室中 广泛应用并不断被完善,最高转化效率可达107~ 109克隆/μg 质粒DNA [4]。然而,利用该方法完成质粒DNA 对大肠杆菌的转化,至少需要约2.5h ,对于一般的质粒转化实验而言,比较费时费力。文章作者尝试对这一标准转化程序进行简化,获得一种用质粒DNA 转化大肠杆菌感受态细胞的 实用操作技巧 陈洪栋董文博李红民 （西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室植物生物技术研究室西北大学生命科学学院，西安710069） 摘要:目的是建立一种简化、实用的用质粒DNA 转化大肠杆菌的操作方法。采用氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞。 以质粒pUC18,pCSN44,pAN52-1Not,pETts,pANth 和植物双元表达载体pCAMBIA1301分别转化用于质粒扩增与保存的常用大肠杆菌菌株Top10和DH5α以及用于原核表达的常用大肠杆菌菌株BL21(DE3)和TB1。质粒与感受态细胞的混合液置冰上作用一定时间后，直接涂布含有筛选抗生素的LB 平板，于37℃培养12~16h 。结果表明，用不同大小的质粒DNA 转化不同的大肠杆菌菌株，都可以获得满足实验要求，转化效率可高达103~4阳性克隆/μg 。该方法较标准的转化流程更加简便、省时、实用。 关键词：Escherichia coli 转化方法质粒 Doohickey for the Standard Transformation Protocol of Plasmids DNA Transfer into Competent Chen Hongdong Dong Wenbo Li Hongmin (Plant Biotechnology Research Unit,Key Laboratory of Resource Biology Biotechnology in Western China,Ministry of Education School of Life Science Northwest University,Xi ’an 710069) Abstract: The aim of this study was to introduce a doohickey for the transformation of competent cells with plasmid DNA. The competent cells of Escherichia coli strains were previously made using the calcium chloride method.The plasmids,pUC18,pCSN44,pAN52-1Not,pETts,pANth and pCAMBIA1301,were employed to transform the different E.coli strains Top10,DH5α,BL21(DE3)and TB1.The mixture of plasmid and competent cell was laid on ice for definite time before being cultured at 37℃degree on selected LB plate with relevant antibiotic for 12~16h.Perfect transformation rate up to 103~4colonies/μg plasmid DNA was obtained. Key words:Escherichia coli Transformation method Plasmid
平水韵版
一东平声风中[zhōng，中间]空[kōng，空虚、空旷]红同翁东宫穷功雄工丛鸿蓬丰终蒙融童虹虫桐匆弓戎蒙忠珑崇隆笼[lóng lǒng]栊穹攻篷躬聋铜葱逢[详注1]筒聪骢衷充熊枫胧瞳嵩洪烘峒冲[chōng，直上、深远、淡泊]忡茸砻昽僮菘窿茏芃幪癃嵷仝恫[tōng]梦[详注2]冯讧曈璁瀜艟螽咙狨谼藭鬃烽潼谾沨侗[tóng]曚憧绒悤朦巃氃豅酆潨[cōng]翀玒种[chóng]拢[详注3]饛瞢[méng，目不明]崆霳葓罿懵潀芎爞螉髳穜沣緵嵏雺[méng]痌菶蝀烔艨盅蚣篵篊疯泷[lóng]髼涷漴鬷韸娀悾箜豵洚匑氋荭茺葼麷犝渱獞懜熜艐鼨庞[详注4]塳罞[音蒙]鯼蒙嗡朣蠪衕倥[倥侗]肜漎[cóng]囱硿摓柊哃珫狪酮茙涳眮稯靇駥檬憽烿鏓鸫檧魟猦倲蓪龓鍐茼霟惾蔠鲖靊蝬鉷菄鎓浺鵼碽叿釭[详注5]蕫鯟鹟愩碂繱瓨鴤餇襛棇赨靀腢篢焪鸗葻娂漨鬔膧勭堫幊岽錝徖屸娻揔堸熢樋寷汷嵡仹絧[tōng]翪埬猣仜偑囲曧埪杛硹泛[详注6]粠襱椶嘃灴闂漗疘湰鹲蕯鄸粡朡樥爜痋秱濍檒糿埄鑨焢熥艂詷 二冬平声峰龙容钟松重[chóng，重复]浓踪从[cóng，服从]封宗逢胸蓉冬农慵筇锋舂庸凶供[gōng，供给]侬恭蛩蜂溶茸雍悰墉缝[féng]秾冲[chōng，交通要道、冲击]醲邛忪镛镕烽纵[详注1]邕淙佣龚颙喁[yóng]琮笼[详注2]憧熔跫彤淞痈共[gōng]鬃饔瑽葑棕賨榕噰匈讻鳙汹艟嗈壅[与雍通。周礼壅氏，汉书沟洫志壅皆作雍。]痈咚枞摏脓憃[详注3]卭恟瞛瑢褣墉桻崶舼禺[通颙]槦哝橦苁蹱躘伀傛摓臃漨浵凇籦滽佟蚣妐蝩褈蕹搈犎彸媶徸蕽驡緃龏澭穁媀齈痋隀鰫緟鋊捀鸗郺衳襛縙銿鑫炵憹髶讻嵱锶赨庝銎傱榵檂暰桏孮堼夆锺刣嫆嫞倯倧欁蚒苳鉵灉鷛賩鉖慒篈蹖炂誴熧磫禯笗 三江平声江窗双邦降[xiáng，降伏]缸幢[chuáng]庞腔撞扛厖矼釭[gāng]泷[shu āng]淙杠艭桩尨[máng]摐鏦逄哤噇茳肛橦[chuáng]枞[通摐]羫痝椌狵[máng]憃[ch ōng]庬漎[cóng]洚蛖[máng]駹舽悾[详注1]鬃哝[详注2]梆啌囱跭豇涳胦栙魟堫漴
各种进制之间转换方法
各进制转换方法(转载) 一、计算机中数的表示： 首先，要搞清楚下面3个概念 ?数码：表示数的符号 ?基：数码的个数 ?权：每一位所具有的值 请看例子： 数制十进制二进制八进制十六进制 数码0~9 0~1 0~7 0~15 基10 2 8 16 权10o，101，102，…2o，21，22，…8o，81，82，…16o，161，162，…特点逢十进一逢二进一逢八进一逢十六进一 十进制4956= 4*103+9*102 +5*101+6*10o 二进制1011=1*23+0*22 +1*21+1*2o 八进制4275=4*83+2*82 +7*81+5*8o 十六进制81AE=8*163+1*162 +10*161+14*16o
二、各种进制的转换问题 1.二、八、十六进制转换成十进制 2.十进制转换成二、八、十六进制 3.二进制、八进制的互相转换 4.二进制、十六进制的互相转换 1、二、八、十六进制转换成十进制 方法：数码乘以相应权之和 2、十进制转换成二、八、十六进制 方法：连续除以基，直至商为0，从低到高记录余数
3、二进制、八进制的互相转换 方法： ?二进制转换成八进制：从右向左，每3位一组（不足3位左补0），转换成八进制 ?八进制转换成二进制：用3位二进制数代替每一位八进制数 例(1101001)2=(001,101,001)2=(151)8 例 (246)8=(010,100,110)2=(10100110)2 4、二进制、十六进制的互相转换 方法： ?二进制转换成十六进制：从右向左，每4位一组（不足4位左补0），转换成十六进制 ?十六进制转换成二进制：用4位二进制数代替每一位十六进制数 例(11010101111101)2=(0011,0101,0111,1101)2=(357D)16 例 (4B9E)16=(0100,1011,1001,1110)2=(100101110011110)2 三、各种进制数的运算
转染步骤及经验(精华)
转染步骤及经验（精华） 一、基础理论 转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分类：物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染方法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在一般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。需要指出的一点，无论采用哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞生长状态到转染方法的操作细节（见后文）。 二、转染操作流程（以常用的6孔板为例） (1) 细胞培养： 取6孔培养板，以3x104/cm2密度铺板，37℃5%CO2培养箱中培养至70%～90%汇合。(不同细胞略有不同，根据实验室优化的条件进行，汇合过分，转染后不利筛选细胞)。 (2) 转染液制备： 在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量) A液：用不含血清培养基稀释1-10μg DNA，终量100μL， B液：用不含血清培养基稀释对应量的转染试剂，终量100μL； 轻轻混合A、B液（1:1混匀），室温中置15分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染。 (3) 转染准备：用2mL不含血清培养液漂洗两次，再加入2mL不含血清及PS的培养液。 (4) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中（缓慢滴加），轻轻摇匀，37℃温箱置6～8小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。 三、转染注意事项 1. 血清 A. DNA-阳离子脂质体复合物形成时不能含血清，因为血清会影响复合物的形成。 B．一般细胞对无血清培养可以耐受几个小时没问题，转染用的培养液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加入血清需要对条件进行优化。 C. 对于对血清缺乏比较敏感的细胞，可以使用一种营养丰富的无血清培养基OPTI-MEMⅠ培养基， 或者在转染培养基中使用血清。对血清缺乏比较敏感的贴壁细胞，建议使用LIPOFECTAMINE 2000。无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。 2.抗生素（PS） 抗生素，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用抗生素，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外，为了保证无血
关于平水韵
【转中华诗词网站长张驰文章】 【关于平水韵】 ---------------------------- “韵”是构成诗歌音乐美的一个必不可少的因素。古人写诗、填词都离不开它，我们今 天在欣赏和创作旧体诗词时也同样需要掌握有关它的知识。 我们知道，世间万物都是在“时间”和“空间”的范围内不断运动的，语言也不例外，它的运动造成了同一时代的方音差别和同一地点的古今音差别。古时科举以诗赋取仕， 如果考生所操方音各不相同，那么他们写出来的诗赋韵脚当然也各不相同，这无疑地给 考官阅卷带来了很大的麻烦。为了建立一个全国统一的写诗用韵标准，唐朝以后出现了 一系列官方刊定的以“审音”为主要任务的字典，即所谓“官韵”。到了公元７３６年（唐开元二十四年），科举的事由礼部管理，所以后来经皇帝批准而由礼部颁行的官韵 就叫《礼部韵略》。《礼部韵略》在唐宋两朝又经过了几次修订，其中最著名的一个修 订本是公元１２５２年（宋淳祐壬子年）刊行的《壬子新刊礼部韵略》，由于编者刘渊 是平水人，所以这部书也称《平水韵》，后人说的“诗韵”都是指《平水韵》而言。 《平水韵》原书今虽不存，但我们还可以通过其它材料考知它的结构。这部书分为 “上平声”“下平声”、“上声”、“去声”、“入声”五卷，每卷中又按韵母的异同 把汉字分为若干类，全书共分一百零七类，即一百零七韵①。比如“东”“同”、“弓”、“空”、“彤”等字排在第一韵，就为它们起一个名字叫“一东”②；“元”、“繁”、“言”、“魂”、“门”等字排在第十三韵，就叫“十三元”，等等。写诗填 词时一般只许用同一个韵中的字，无论哪个时代的、操哪种方言的人们都必须严格地遵守，如果用错了韵就不行。这样一来，《平水韵》就成了中国古代知识分子的必读书， 从而在历史上产生了极大的影响。《红楼梦》第七十六回写黛玉和湘云联句，有这样一 段对话：“（黛玉：）‘……咱们两个都爱五言，就还是五言排律罢。’湘云道：‘什 么韵？’黛玉笑道：‘咱们数这个栏杆上的直棍，这头到那头为止，它是第几根，就是 第几韵。’湘云笑道：‘这倒别致！’于是二人起身，便从头数至尽头，止得十三根。 湘云道：‘偏又是十三元了！……’”可见人们都养成了“押官韵”的自觉性。 古人从小就背诵诗韵，自然能运用纯熟，但我们今天却往往容易搞错，这是由于时代 不同，语音发生了变化的缘故。例如从普通话的角度看，“神”、“沉”、“盆”三个 字的韵母都是éｎ，照理说应是一个韵的，可是它们在诗韵中却分属于“十一真”、“十二侵”和“十三元”这三个不同的韵，如果用这三个字作韵脚来写首七绝，在内行人看 来就是闹笑话了。又如杜牧的《山行》一诗：“远上寒山石径斜，白云深处有人家。停 车坐爱枫林晚，霜叶红于二月花。”用“斜”、“家”、“花”三字押韵，其中“斜” 的韵母今读ｉé，“家”的韵母今读ｉā，“花”的韵母今读ｕā，似乎不该押韵，读来也
十进制数与十六进制数的转换方法
一，十进制转换十六进制 若十进制数23785转为十六进制，则用 23785/16=1486余9, 1486/16=92余……14, 92/16=5余………….12, 5/16=0余……………..5，十六进制中，10对应为a、11对应为b、。。。。。。、15对应为f，再将余数倒写为5ce9,则十进制23785=十六进制5ce9 二，十六进制转换十进制 十六进制数的第0位的权值为16的0次方，第1位的权值为16的1次方，第2位的权值为16的2次方…… 所以，在第N（N从0开始）位上，如果是是数X （X 大于等于0，并且X小于等于15，即：F）表示的大小为X * 16的N次方。 假设有一个十六进数2AF5, 那么如何换算成10进制呢？ 用竖式计算：2AF5换算成10进制: 第0位：5 * 16^0 = 5 第1位：F * 16^1 = 240 第2位：A * 16^2 = 2560 第3位：2 * 16^3 = 8192 直接计算就是： 5 * 16^0 + F * 16^1 + A * 16^2 + 2 * 16^3 = 10997 三，二进制的1101转化成十进制 1101（2）=1*2^0+0*2^1+1*2^2+1*2^3=1+0+4+8=13 转化成十进制要从右到左用二进制的每个数去乘以2的相应次方不过次方要从0开始 十进制转二进制：用2辗转相除至结果为1 将余数和最后的1从下向上倒序写就是结果例如302 302/2 = 151 余0 151/2 = 75 余1 75/2 = 37 余1 37/2 = 18 余1 18/2 = 9 余0 9/2 = 4 余1 4/2 = 2 余0 2/2 = 1 余0 1/2 = 0 余1 故二进制为100101110 四，二进制转八进制 在把二进制数转换为八进制表示形式时,对每三位二进制位进行分组,应该从小数点所在位置分别向左向右划分,若整数部分倍数不是3的倍数,可以在最高位前面补若干个0;对小数部分,当其位数不是的倍数时,在最低位后补若干个0.然后从左到右把每组的八进制码依次写出,即得转换结果. 你算一下就知道了啊比如110=2^2+2+0=6 五，二进制转十六进制 要将二进制转为16进制，只需将二进制的位数由右向左每四位一个单位分隔，分的不够的前边补零，用四位数的二进制数来代表一个16进制。转换表如下，括号内为十六进制 0000（0）0001（1）0010（2）0011（3）0100（4）0101（5） 0110（6）0111（7）1000（8）1001（9）1010（A）1011（B） 1100（C）1101（D）1110（E）1111（F） 例如：10101011划分为1010 1011，根据转换表十六进制为AB
氯化钙法质粒转化
氯化钙法进行质粒转化 利用冰冷的CaCl2 制备competent cells,以传统方法进行质体的转形。 仪器用具：37℃培养箱；42℃水浴；冰浴 药品试剂： 0.1 M CaCl2置冰浴中 2 M glucose： 取18 g glucose溶于水中，并调体积至50 mL，无菌过滤，分装后置-20℃贮存。 2 M Mg2+： 取20.3 g MgCl2·6H2O及24.65 g MgSO4·7H2O溶于水中，并调体积至100mL，无菌过滤的，分装小瓶置-20℃贮存。亦可以MgCl2完全取代MgSO4. SOB 液体培养基： 32 Methods in Biotechnology Vol 1 2% Bacto tryptone, 0.5% yeast extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl,高压灭菌，使用前加入2 M Mg2+，使最终浓度为10 mM. SOB 固体培养基：
2% Bacto tryptone, 0.5% yeast extract, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1. 5% Bactoagar,高压灭菌，倒plate前加入2 M Mg2+ 使最终浓度为10 mM. SOC/Amp 固体培养基： SOB 中另外添加20 mM glucose 及100 μg/mL ampicillin. SOC 液体培养基：SOB 中加入20 mM glucose （使用前加入）。 大肠杆菌菌株：JM109 #1~#5 接合反应液 方法步骤： 1）进行转形实验前16~20 h,自-70℃取出贮存的菌种，以划单一菌落方式将菌株JM109 接种在SOB固体培养基上，在37℃培养。 2）取40 mL SOB培养基装入125 mL已灭过菌的三角瓶（请记得加入Mg 2+）。另取1 mL SOB加于微量离心管中。由SOB固体培养基上选4~6 个约2~3 mm大小的单一菌落接入1 mL SOB中，震荡将菌体打散后，加入40 mL S OB中，于37℃震荡培养约2~3 h,直至细胞数约为4~7×107/mL. 可于接菌2 h后每隔20~30 min测A600估计 3）收集菌液于离心管中，置冰浴中10~15 min. 4）以750~1,000 g 离心12~15 min （4℃）。
押韵
押韵 把同韵的字有规律地配置在诗词等韵文的句尾。各句押韵的字叫做韵脚或韵字。押韵是诗词等韵文的语言特点之一。其主要作用是使声音和谐优美，吟诵顺口悦耳，便于记忆流传。“韵”和“韵母”是两个并不完全相同的概念，所谓同韵，指韵腹相同或相近的韵母，如有韵尾则韵尾相同，韵头可以不同。为了便于押韵，人们把同韵的、可以相押韵的字归纳为若干韵部，根据现代北京语音的音系归纳的韵部，最常见的有十八韵和十三辙（附：十八韵、十三辙跟普通话韵母对照表）①。 【简介】 所谓押韵（也叫压韵、叶韵），就是把相同韵部的字放在规定的位置上。 所谓韵部，就是将相同韵母的字归纳到一类，这种类别即为韵部。 同一韵部内的字都为同韵字。任何诗歌都要求押韵，古今中外概莫能外，所不同者，对于押韵的限制多与少、严与宽的不同而已。这也是诗歌同其它文学体裁的最大分别。比较常用的是【108部平水韵】②。 押韵是增强诗歌音乐性的重要手段，近体诗为了使声调和谐、容易记忆，对于押韵十分讲究。古人通常使用官方颁布的专门指导押韵的书，如《唐韵》、《广韵》、《礼部韵略》、《佩文诗韵》、《诗韵集成》、《诗韵合壁》等，以南宋王文郁撰的《新刊韵略》最为流行，即世人所谓之【108部平水韵】。 但是需要明白，并不值得为迁就押韵而破坏诗句的自然，除非是参加科举，否则即使偶尔一两句出韵，古人也是允许的。 【规则】 近体诗押韵有较严格的规定，总结如下：【首句可押可不押，下句必押平声韵】③ １、【偶句押韵】： 律诗是二四六八句押韵，绝句是二四句押韵，无论律诗还是绝句，首句均可以押韵或不押韵。例如： 寄扬州韩祚判官（杜牧） 青山隐隐水迢迢，秋尽江南草木凋。 二十四桥明月夜，玉人何处教吹箫。 第一二四句押韵。又如： 登乐游原（李商隐） 向晚意不适，驱车登古原。 夕阳无限好，只是近黄昏。 首句并不入韵，二四句押韵。一般来说，五言诗首句不入韵为常见，七言诗首句入韵为常见。关于首句押韵与否的平仄规律请参照【平仄简表】④ ２、【只押平声韵】： 近体诗规定，只能押平声韵，这几乎是一条死规矩，事实上以近体诗的体例假如
20170803 热激法转化质粒
20170803 热激法转化质粒 武汉大学Angelo 实验原理： 质粒的转化是指将质粒或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。将连接产物转化到感受态细胞中，实现重组克隆的增殖，便于后续分子操作。热激法：大肠杆菌在0℃、CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，与转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表达，在选择性培养基平板上可挑选所需的转化子 实验步骤： （1）从-80 ℃冰箱内取一管冻存的感受态大肠杆菌DH-5α于冰浴上融化复苏10min； （2）加入待转化的质粒0.5μL-1.5μL，轻轻吹打混匀，冰浴30 min； （3）在42 ℃恒温水浴锅中严格操作热激90 s，然后立即冰浴静置2 min； （4）在无菌操作台内，向感受态大肠杆菌中加入600 μL-1000μLLB液体培养基，在200 r/min 、37 ℃恒温摇床内摇30min-1 h 进行活化；
（5）在活化的时候，从4℃拿出含抗生素的固体细菌培养板放到37℃恒温培养箱中回温十分钟。 （6）活化结束后，在无菌操作台内，吸取菌液20μL-40μL涂板到含抗生素（50 mg/ml）的固体细菌培养板上； （7）置于37 ℃恒温培养箱内过夜培养（12h-16h）。 要点： 1，固体培养板的抗生素抗性（Amp，Kana） 2，转化质粒的量根据质粒浓度进行添加 3，涂板菌液的量根据活化加培养基的量进行选择 4，注意每项工作前都要进行充分准备，比如涂板棒进行灭菌，移液枪进行消毒等。 5，对刚连接的质粒进行转化，不同之处在于活化时间为1-2h。 活化后，将菌液2500 -3500rpm离心3 min，留下沉淀和200 μL菌液，充分混匀，涂板到含抗生素的固体培养基上。
各种进制之间转换方法
各进制转换方法（转载）一、计算机中数的表示: 首先，要搞清楚下面3个概念 ?数码：表示数的符号 ? 基：数码的个数 ?权：每一位所具有的值
、各种进制的转换问题 1. 二、八、十六进制转换成十进制 2. 十进制转换成二、八、十六进制 3. 二进制、八进制的互相转换 4. 二进制、十六进制的互相转换 1、二、八、十六进制转换成十进制 方法：数码乘以相应权之和 例(HloJ-l/25+lx24+l/23+0/22+ h2:+h20 -(59)10 例(136)8=lx82+3x8l+6x8°=(94)10 例(1F2^)1S=1X163+15X16S +2\16] + 10/16° = (7978)10 2、十进制转换成二、八、十六进制 方法：连续除以基，直至商为0,从低到高记录余数
例把十进制数159转换成八进制数 8| 19 8辽 (159)IO =(237)8 例把十进制数59转换成二进制数 (59)IO =(111O11)2 2 余余余余余余 8 159
例把十进制数459转换成十六进制数 u | 1| C| B (459)io=(1CB)ib ' 3、二进制、八进制的互相转换 方法： *二进制转换成八进制：从右向左，每3位一组(不足3位左补0),转换成八进制*八进制转换成二进制：用3位二进制数代替每一位八进制数 例(1101001)2=(001,101,001)2=(151)8 例(246)8=(010,100,110)2=(10100110)2 4、二进制、十六进制的互相转换 方法： 二进制转换成十六进制：从右向左，每4位一组(不足4位左补0)，转换成十六进制 *十六进制转换成二进制：用4位二进制数代替每一位十六进制数 例(11010101111101)2=(0011,0101,0111,1101)2=(357D)16 例(4B9E)16=(0100,1011,1001,1110)2=(100101110011110)2 三、各种进制数的运算 方法：逢满进具体计算与平时十进制的计算类似，以十六进制为例: 加法：
质粒DNA的转化实验原理、仪器试剂和操作步骤
质粒DNA的转化实验原理、仪器试剂和操作步骤 【原理】 转化是将外源DNA 分子导入到受体细胞，使之获得新的遗传特性的一种方法。转化所用的受体细胞一般是限制- 修饰系统缺陷变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶（R- ，M- ）。将对数生长期的细菌（受体细胞）经理化方法处理后，细胞膜、的通透性发生暂时性改变，成为能允许外源DNA 分子进入的感受态细胞。进入受体细胞的DNA 分子通过复制和表达实现信息的转移，使受体细胞具有了新的遗传性状。将经过转化的细胞在筛选培养基上培养，即可筛选出转化子（带有异源DNA 分子的细胞）。 本实验采用CaCl2 法制备感受态细胞。其原理是细胞处于0 ～4 ℃，CaCl2 低渗溶液中，大肠杆菌细胞膨胀成球状。转化混合物中的DNA 形成抗DNA 酶的羟基- 钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃90 秒热激处理，促进细胞吸收DNA 得合物。将细菌放置在非选择性培养基中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型，如氨苄青霉素耐药（Amp r ）得到表达，然后将此细菌培养物涂在含Amp 的选择性培养基上，倒置培养过夜，即可获得细菌菌落。 本实验是将人Bcl-2 重组质粒转化DH5 α扩增菌，转化后在含Amp 的培养基上进行筛选，生长的菌落即为含重组质粒的工程菌。 含人Bcl-2 重组质粒的DH5 α菌用于质粒DNA 的扩增，获得的质粒将作为限制性内切酶的酶切底物DNA 。 【试剂与器材】 1 ．LB 液体培养基10g 胰蛋白胨、5g 酵母提取物、10gNaCl 加水至1L ，高压灭菌消毒。 2 ．LB 固体培养基LB 液体培养基中加1.5% 琼脂粉，高压灭菌消毒，待泠却至不烫手背时铺培养皿。 3 ．0.1mol/L CaCl2 高压灭菌消毒或过滤除菌。 4 ．氨苄青霉素用无菌水或生理盐水配制成100mg/ml 溶液，置-20 ℃保存。 5 ．人Bcl-2 重组质粒它是Eco R Ⅰ单酶切的pBluescript ⅡKS(-) 载体与EcoR Ⅰ单酶切的人Bcl-2 cDNA 重组而成的，大小为4 861bp ，前者是一种由pUC19 质粒衍生而来的具有 2 961bp 的质粒载体。因此用Eco R Ⅰ酶切则应到空载pBluescript ⅡKS(-) 载体(2.96kb) 和人Bcl-2 cDNA 片段(1.9kb) 。配制成2g/1 μl 。 6 ．大肠杆菌DH5 α此为DNA 扩增菌 7 ．恒温水浴箱
平水韵里的多韵部字(多音字)
一、平声韵部里意义相同的多韵部字 1、般——上平十四寒；上平十五删 2、掺——下平十二侵；下平十五咸 3、车——上平六鱼；下平六麻 4、呱——上平七虞；下平六麻 5、槐——上平九佳；上平十灰 6、饥——上平四支；上平五微 7、瞢——上平一东；下平十蒸 8、蛩——上平二冬；上平三江 9、坛——上平十四寒；下平十三覃 10、推——上平四支；上平十灰 11、崖——上平四支；上平九佳 12、涯——上平四支；下平六麻；上平九佳 二、仄声韵部里意义相同的多韵部字 13、懊——上声十九皓；去声二十号 14、伴——上声十四旱；去声十五翰 15、北——入声十三职；入声二沃 16、悖——去声十一队；入声六月 17、炳——上声二十三梗；去声二十四敬 18、簸——上声二十哿；去声二十一个 19、刺——去声四寘；入声十一陌 20、打——上声二十一马；上声二十三梗 21、大——去声九泰；去声二十一个 22、但——上声十四旱；去声十五翰 23、啖——上声二十七感；去声二十八勘 24、澹——上声二十七感；去声二十八勘 25、祷——上声十九皓；去声二十号 26、纛——去声二十号；入声二沃 27、弟——上声八荠；去声八霁 28、娣——上声八荠；去声八霁 29、递——上声八荠；去声八霁 30、掉——去声十八啸；上声十七筱 31、耋——入声四质；入声九屑 32、缎——上声十四旱；去声十五翰 33、盾——上声十一轸；上声十三阮 34、遁——上声十三阮；去声十四愿 35、咄——入声六月；入声七曷 36、掇——入声七曷；入声九屑 37、忿——上声十二吻；去声十三问 38、缶——上声七麌；上声二十五有 39、匐——入声一屋；入声十三职40、妇——去声七遇；上声二十五有 41、副——去声二十六宥；入声一屋 42、富——去声七遇；去声二十六宥 43、缚——去声二十一个；入声十药 44、溉——去声五未；去声十一队 45、鹘——入声六月；入声八黠 46、馆——去声十五翰；上声十四旱 47、盥——去声十五翰；上声十四旱 48、犷——上声二十二养；上声二十三梗 49、鳜——去声八霁；入声六月 50、国——入声十三职；入声一屋 51、核——入声六月；入声十一陌 52、卉——上声五尾；去声五未 53、唧——入声四质；入声十三职 54、笈——入声十六叶；入声十四缉 55、楫——入声十六叶；入声十四缉 56、蹇——上声十三阮；上声十六铣 57、饯——上声十六铣；去声十七霰 58、揭——入声六月；入声九屑 59、碣——入声六月；入声九屑 60、掘——入声六月；入声五物 61、厥——入声五物；入声六月 62、侃——上声十四旱；去声十五翰 63、扣——上声二十五有；去声二十六宥 64、块——上声十贿；去声十卦；去声十一队 65、蒉——去声四寘；去声十卦 66、篑——去声四寘；去声十卦 67、轹——入声十药；入声十二锡 68、敛——去声二十九艳；上声二十八俭 69、篓——上声七麌；上声二十五有 70、卵——上声十四旱；上声二十哿 71、莽——上声二十二养；上声七麌 72、泌——去声四寘；入声四质 73、陌——入声十一陌；入声十药 74、某——上声七麌；上声二十五有 75、母——上声七麌；上声二十五有 76、亩——上声七麌；上声二十五有 77、牡——上声七麌；上声二十五有 78、昵——上声八荠；入声四质 79、睨——上声八荠；去声八霁 80、怒——去声七遇；上声七麌 81、帕——去声二十二祃；入声八黠 82、堑——上声二十八俭；去声二十九艳 83、悄——上声十七筱；去声十八啸
实验七 感受态细胞的制备和重组质粒的转化
实验七感受态细胞的制备和重组质粒的转化 【实验目的】 1.掌握用CaCl2法制备感受态细胞的原理和方法。 2.学习和掌握质粒DNA的转化和重组质粒的筛选方法。 【实验原理】 质粒在不同的细菌之间转移是微生物世界中一种普遍的现象，一个细菌品系通过吸收另一个细菌品系的质粒DNA而发生了遗传性状的改变，这种现象叫做转化，获得了外源DNA的细胞称为转化子。 在基因克隆技术中，所谓转化是指质粒或重组质粒被导入受体细胞，表达相应的选择标记基因，并在一定的培养条件下，在选择性培养基上长出转化子的过程。质粒必须通过转化进入细菌细胞内，才能进行扩增和表达，从而获得大量的克隆基因,使我们能够进行进一步的DNA操作，如亚克隆等；或者获得其表达产物。转化效率的高低与受体菌的生理状态有关。细菌吸收外源DNA的能力最高时的状态被称为感受态细胞（competent cell）。有些种类的细菌在其生长的任一阶段都处于感受态，而另一些细菌只有处于某个生长时期时（一般为对数生长早、中期），才会处于感受态,如本实验所用的大肠杆菌。用一定浓度的CaCl2 处理对数生长早中期的细菌可以大大提高细菌吸收周围环境中的DNA分子的能力。对这种现象的一种解释是CaCl2能使细菌细胞壁的通透性增强，从而提高转化率。这种转化方法称为“化学法”。目前还可以使用电激的方法，通过瞬间的高压电流，在细胞上形成孔洞，使外源DNA进入胞内，从而实现细胞的转化。电激转化的效率往往比化学法高出1到2个数量级，达到1 x 108转化子/μg DNA，甚至1 x 109转化子/μg DNA，所以常用于文库构建时的转化或遗传筛选。 微生物转化是基因工程的常用技术，大肠杆菌是基因工程中最常用的受体菌，本实验即是用前面实验获得的重组质粒转化大肠杆菌细胞。 【试剂与器材】 〈一〉试剂 1．LB液体培养基: 参见附录 每组配200mL, 其中100mL分装于500mL三角瓶中，另各取3mL装于2只大试管中，其余装于装于500mL三角瓶中，121℃高压蒸汽灭菌20分钟。 2．LB/Amp/IPTG/X-Gal平板（1）: 配1L LB液体培养基，加入20g琼脂粉和1支搅拌棒，同上高压灭菌，趁热取出置搅拌器上冷却，待冷至55℃左右, 加氨苄青霉素(Ampicillin)至终浓度100μg/ml (Amp储存液一般为100mg/mL), 倒平板，每皿倒约15 mL，室温放置过夜至冷凝水挥发干净。使用前半小时在培养基表面加20μL 50mg/mL X-gal 和100μL 0.1mol/L IPTG，涂匀，待这两种化合物渗入琼脂后，即可用于转化菌的涂布。 每组制备LB平板2个，LB/Amp 平板5个，LB/Amp/IPTG/X-Gal平板6个。 3．IPTG储存液(0.1mol/L)：1.2g IPTG加水至50ml，过滤除菌，4℃储存。 4．X-gal储存液：50mg/ml溶于二甲基甲酰胺溶剂中，过滤除菌，4℃储存。 5．1 mol/L CaCl2储存液，使用浓度为0.1mol/L，CaCl2应使用分析纯，配100mL，高压灭菌，全班用。6．甘油(灭菌)，全班50mL，同上高压灭菌。 7．酸洗无菌玻璃珠，涂布平板用，用50mL三角瓶分装，同上高压灭菌，烘干备用。 〈二〉器材 1. 37℃温箱、水浴锅、恒温振荡器等 2. 高速冷冻离心机 3. 微量移液器等
平水韵(下载无需分数)
传统文化的流失已经非常严重，百度文库下载个平水韵还要收分，这和发国难财有什么区别？ 平水韵共一百零六韵，分为平声三十韵（其中上平声十五韵，下平声十五韵），上声二十九韵，去声三十韵，入声十七韵。所谓上平声、下平声，是平声上卷、平声下卷的意思，没有别的意思。 【上平】 一东：东同铜桐筒童僮瞳中衷忠虫终戎崇嵩弓躬宫融雄熊穹穷冯风枫丰充隆空公功工攻蒙笼聋珑洪红鸿虹丛翁聪通蓬烘潼胧砻峒 螽梦讧冻忡酆恫总侗窿懵庞种盅芎倥艨绒葱匆骢 二冬：冬农宗钟龙舂松冲容蓉庸封胸雍浓重从逢缝踪茸峰锋烽蛩慵恭供淙侬松凶墉镛佣溶邛共憧喁邕壅纵龚枞脓淞匈汹禺蚣榕彤三江：江扛窗邦缸降双庞逄腔撞幢桩淙豇 四支：支枝移为垂吹陂碑奇宜仪皮儿离施知驰池规危夷师姿迟眉悲之芝时诗棋旗辞词期祠基疑姬丝司葵医帷思滋持随痴维卮麋螭 麾墀弥慈遗肌脂雌披嬉尸狸炊篱兹差疲茨卑亏蕤陲骑曦歧岐 谁斯私窥熙欺疵赀笞羁彝颐资糜饥衰锥姨楣夔涯伊蓍追 四支：缁箕椎罴篪萎匙脾坻嶷治骊尸綦怡尼漪累牺饴而鸱推縻璃祁绥逵羲羸肢骐訾狮奇嗤咨堕其睢漓蠡噫馗辎胝鳍蛇陴淇淄丽筛 厮氏痍貔比僖贻祺嘻鹂瓷琦嵋怩熹孜台蚩罹魑丕琪耆衰惟剂 提禧居栀戏畸椅磁痿离佳虽仔寅委崎隋逶倭黎犁郦
五微：微薇晖徽挥韦围帏违霏菲妃绯飞非扉肥腓威畿机几讥矶稀希?衣依沂巍归诽痱欷葳颀圻 六鱼：鱼渔初书舒居裾车渠余予誉舆胥狙锄疏蔬梳虚嘘徐猪闾庐驴诸除储如墟与畲疽苴于茹蛆且沮祛蜍榈淤好雎纾躇趄滁屠据匹 咀衙涂虑 七虞：虞愚娱隅刍无芜巫于盂衢儒濡襦须株诛蛛殊瑜榆谀愉腴区驱躯朱珠趋扶符凫雏敷夫肤纡输枢厨俱驹模谟蒲胡湖瑚乎壶狐弧 孤辜姑觚菰徒途涂荼图屠奴呼吾 七虞：梧吴租卢鲈苏酥乌枯都铺禺诬竽吁瞿劬需俞逾觎揄萸臾渝岖镂娄夫孚桴俘迂姝拘摹糊鸪沽呱蛄驽逋舻垆徂孥泸栌嚅蚨诹扶 母毋芙喁颅轳句邾洙麸机膜瓠恶芋呕驺喻枸侏龉葫懦帑拊 八齐：齐蛴脐黎犁梨黧妻萋凄堤低氐诋题提荑缔折篦鸡稽兮奚嵇蹊倪霓西栖犀嘶撕梯鼙批挤迷泥溪圭闺睽奎携畦骊鹂儿 九佳：佳街鞋牌柴钗差涯阶偕谐骸排乖怀淮豺侪埋霾斋娲蜗娃哇皆喈揩蛙楷槐俳 十灰：灰恢魁隈回徊枚梅媒煤瑰雷催摧堆陪杯醅嵬推开哀埃台苔该才材财裁来莱栽哉灾猜胎孩虺崔裴培坏垓陔徕皑傀崃诙煨桅唉 颏能茴酶偎隗咳 十一真：真因茵辛新薪晨辰臣人仁神亲申伸绅身宾滨邻鳞麟珍尘陈春津秦频苹颦银垠筠巾民珉缗贫淳醇纯唇伦纶轮沦匀旬巡驯钧 均臻榛姻寅彬鹑皴遵循振甄岷谆椿询恂峋莘堙屯呻粼磷辚濒 闽豳逡填狺泯洵溱夤荀竣娠纫鄞抡畛嶙斌氤
多种质粒提取方法
从细菌中分离质粒 DNA 的具体操作 材料、设备及试剂 一、材料 含PBS的E.coliDH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管（又称eppendorf管），离心管架。 二、设备 微量取液器（20μl，200μl，1000μl），台式高速离心机，恒温振荡摇床，高压蒸汽消毒器（灭菌锅），涡旋振荡器，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置和恒温水浴锅等。 三、试剂 1、LB液体培养基（Luria-Bertani）：称取蛋白胨（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeastextract）5g，NaCl10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH 调pH至7.5，加去离子水至总体积1升，高压下蒸气灭菌20分钟。 2、LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉，高压灭菌。 3、氨苄青霉素（Ampicillin，Amp）母液：配成50mg/ml水溶液，-20℃保存备用。 4、溶菌酶溶液：用10mmol/LTris?Cl（pH8.0）溶液配制成10mg/ml，并分装成小份（如1.5ml）保存于-20℃，每一小份一经使用后便予丢弃。 5、3mol/lNaAc（pH5.2）：50ml水中溶解40.81gNaAc?3H2O，用冰醋酸调pH至5.2，加水定容至100ml，分装后高压灭菌，储存于4℃冰箱。 6、溶液1:50mmol/L葡萄糖，25mmol/ L T r i s. Cl（pH8.0）， 10mmol/LEDTA（pH8.0）。溶液Ⅰ可成批配制，每瓶100ml，高压灭菌15分钟，储存于4℃冰箱。 7、溶液Ⅱ：0.2mol/LNaOH（临用前用10mol/LNaOH母液稀释），1％SDS。 8、溶液Ⅲ：5mol/LKAc60ml，冰醋酸11.5ml，H2O28.5ml，定容至100ml，并高压灭菌。溶液终浓度为：K+3mol/L，A cˉ5mol/L。 9、RNA酶A母液：将RNA酶A溶于10mmol/LTris?Cl（pH7.5）， 15mmol/LNaCl中，配成10mg/ml 的溶液，于100℃加热15分钟，使混有的DNA酶失活。冷却后用 1.5mleppendorf管分装成小份保存于-20℃。 10、饱和酚：市售酚中含有醌等氧化物，这些产物可引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联，应在160℃用冷凝管进行重蒸。重蒸酚加入0.1％的8-羟基喹啉（作为抗氧化剂），并用等体积的0.5mol/LTris?Cl （pH8.0）和0.1mol/LTris?Cl（pH8.0）缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到7.6以上，因为酸性条件下DNA会分配于有机相。