CYP3A5基因多态性对中国肾移植受者他克莫司血药浓度和疗效的影响
第2卷第6期2011年11月器官移植
Organ Transplantation Vol.2No.6Nov.2011
DOI ：10.3969/j.issn.1674-7445.2011.06.008
基金项目：广东省自然科学基金博士启动资助项目（10451001002004935）；传感技术联合国家重点实验室基金资助项目（Skt1003）作者单位：510010广州军区广州总医院医学实验科中国科学院传感技术联合国家重点实验室（张海燕、吴小丽、陈钰、王捷）；广州军区广州总医院泌尿外科（张小明）
通讯作者：王捷，E-
mail ：jiew@https://www.360docs.net/doc/8f6742814.html, CYP3A5基因多态性对中国肾移植受者他克莫司血药浓度和疗效的影响
张海燕
张小明
吴小丽陈钰王捷
【摘要】目的
研究CYP3A5基因多态性对肾移植受者他克莫司（FK506）血药浓度/剂量比
（blood drug concentration /dose ，C /D ），术后急性排斥反应（AR ）及不良反应发生率的影响。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测肾移植受者CYP3A5基因型，并以直接测序法进行验证。比较不同基因型患者之间的FK506C /D 值，AR 、不良反应的发生率。结果
肾移植术后3
个月内，*3/*3基因型患者FK506的C /D 值为149?59，明显高于*1/*1基因型和*1/*3基因型患者的78?24和90?42（均为P ＜0.05）；移植术后3个月内*1/*1基因型患者的AR 发生率与*1/*3基因型和*3/*3基因型患者的AR 发生率比较差异无统计学意义。与*1/*1基因型和*1/*3基因型患者比较，*3/*3基因型患者术后肝功能异常、药物肾毒性不良反应的发生率较高（均为P ＜0.05）。结论CYP3A5基因多态性对服用FK506肾移植患者的C /D 值、肝功能异常、药物肾毒性
有一定影响。CYP3A5*3/*3基因型患者的FK506的C /D 值、肝功能异常和药物肾毒性不良反应的
发生率较高。
【关键词】
肾移植；他克莫司；细胞色素P450；基因多态性；血药浓度；不良反应
Effect of CYP3A5genetic polymorphism on blood drug concentration and efficacy of tacrolimus in Chinese renal transplant recipients ZHANG Hai-yan *，ZHANG Xiao-ming ，WU Xiao-li ，CHEN Yu ，
WANG Jie .
*
Department of Medical Research ，General Hospital of Guangzhou Military Command of PLA ，Guang-
zhou 510010，China
Corresponding author ：WANG Jie ，E-mail ：jiew @tom .com 【Abstract 】
Objective
To investigate the effect of CYP3A5genetic polymorphism on the blood drug
concentration /dose （C /D ）ratio ，incidence of acute rejection and adverse reaction of tacrolimus （FK506）in Chinese renal transplant recipients.Methods
The CYP3A5genotype of renal transplant recipients was detec-ted by polymerase chain reaction （PCR ）-restricted fragment length polymorphism （RFLP ）method and com-pared by direct sequencing.The FK506C /D ratio ，the incidence of acute rejection and adverse reaction were compared among all of the different genotype groups.Results
During the first 3months after transplantation ，
the C /D ratio of FK506in patients with *3/*3genotype was 149?59，which was higher than *1/*1geno-type group 78?24and *1/*3genotype 90?42（all in P ＜0.05）.Compared with *1/*3and *3/*3genotypes ，there was no significant difference in the incidence of acute rejection of *1/*1genotype during the first 3months after https://www.360docs.net/doc/8f6742814.html,pared with *1/*1and *1/*3genotypes ，the incidence of adverse reaction of liver dysfunction and nephrotoxicity was significantly higher in *3/*3genotype （all in P ＜0.05）.Conclusions
There is definite relation between CYP3A5genetic polymorphism and FK506C /D ratio ，adverse
reaction of liver dysfunction and nephrotoxicity of renal transplant recipients.The FK506C /D ratio ，the inci-dence of adverse reaction are high in patients of CYP3A5*3/*3genotype.
【Key words 】
Renal transplantation ；Tacrolimus ；Cytochrome P450；Genetic polymorphism ；
Blood drug concentration ；Adverse reaction
第6期张海燕等.CYP3A5基因多态性对中国肾移植受者他克莫司血药浓度和疗效的影响
他克莫司（FK506）属于钙调磷酸酶抑制剂（CNI），其免疫活性较强，已作为基础免疫抑制剂广泛应用于器官移植后抗排斥反应［1］。但是，FK506治疗窗狭窄，药代动力学参数变异范围大，临床需要采用监测血药浓度的方法调整用药剂量。FK506主要通过肝脏和胃肠道的转运蛋白和细胞色素P450（cytochrome P450，CYP）酶系代谢和分解。FK506吸收入血液后，主要通过CYP酶代谢，而参与代谢的CYP酶又以CYP3A4和CYP3A5为主。有研究表明，CYP3A5*3基因突变可导致翻译出的蛋白质失去功能［2］。因此，有必要研究CYP3A5基因多态性对FK506血药浓度/剂量比（blood drug concentration/dose，C/D）、排斥反应及不良反应的影响，以便为肾移植术后合理用药，提高用药的安全性和有效性提供依据。
材料与方法
一、研究对象
选择2008年8月至2010年10月在广州军区广州总医院首次接受肾移植术患者56例，男性41例，女性15例，年龄（39?12）岁，体重（59?9）kg。
二、免疫抑制方案
肾移植术后采用FK506+麦考酚吗乙酯（MMF）+肾上腺皮质激素（激素）三联免疫抑制方案治疗。FK506（爱尔兰藤泽药品有限公司生产），剂量为0.15 0.30mg/（kg·d），每日2次，饭前1h或饭后2h口服给药，首次剂量在肾移植术后24h内给予。MMF（上海罗氏制药有限公司生产），剂量为0.5 2.0g/d，每日2次，自术后第1日开始口服。激素用法为术后1次性静脉给予甲泼尼龙500mg，以后每日减少40mg直至40mg/d，次日起口服泼尼松20mg/d。
三、他克莫司血药浓度测定
测定仪器为全自动微粒子酶联免疫分析仪。采用酶联免疫吸附法（ELISA）监测FK506全血谷浓度，根据血药谷浓度值调整用药剂量，术后1个月内FK506血药谷浓度值维持在6 10ng/ml［3］。
四、CYP3A5基因的提取及分型
采用聚合酶链反应（PCR）-限制性片段长度多态性技术检测肾移植受者CYP3A5基因型。
1.基因组脱氧核糖核酸的提取：抽取肾移植受者静脉血2 3ml置依地酸二钠抗凝管中低温（4?）保存，在1周内采用天根基因组提取试剂盒（DP318-02）完成全血的基因组脱氧核糖核酸（DNA）提取。用紫外分光光度法测定所提取基因组DNA的浓度及纯度。
2.PCR扩增：CYP3A5上游引物序列为5’-CATGACTTAGTAGACAGATGA-3’，下游引物序列为5’-GGTCCAAACAGGGAAGAAATA-3’。
PCR扩增体系置25μl薄壁管内，以提取的DNA（2μl）为模板，加入10?PCR缓冲液（2.5μl）、单脱氧核糖核酸（dNTP，2.5mmol/L）2μl、正向与反向引物（20mmol/L）各0.5μl及Taq DNA聚合酶（5U/μl）0.4μl，加去离子灭菌水至反应总体积25μl，混匀后进行PCR。
PCR扩增条件为94?预变性5min，变性、退火、延伸条件分别为94?60s，50?60s，72?60s，最后72?5min，共35个循环。
取PCR扩增产物7μl，以限制性内切酶SspI 于37?孵育酶切4h，酶切反应完毕，取2μl10?loading buffer终止反应，取5μl酶切产物于3%琼脂糖凝胶上电泳，电泳后判定结果。野生型纯合子（CYP3A5*1/*1）有148bp、125bp、20bp3个片段，突变型纯合子（CYP3A5*3/*3）有168bp、125bp2个片段，突变型杂合子（CYP3A5*1/*3）有168bp、148bp、125bp及20bp4个片段。采用DNA测序仪对随机抽取的PCR扩增产物进行测序，验证CYP3A5基因型及计算其突变率。
五、术后随访及观察指标
患者术后定期随访至少3个月，记录3个月内FK506用量、血药谷浓度、体重以及肝功能、肾功能、血糖、血脂等生化指标，记录有否发生急性排斥反应（AR），有否肝功能异常、肾功能异常、肺部感染等不良反应的发生。比较术后3个月不同CYP3A5基因型的FK506血药谷浓度（浓度）、FK506日剂量，计算C/D值，即以血药浓度除以每公斤体重的日剂量；并比较术后AR与不良反应发生率的差异。
六、统计学方法
采用SPSS13.0统计软件。正态计量资料采用均数?标准差表示，多组之间比较采用方差分析（One-way ANOVA）。非正态分布数据用全距（中位数）表示，比较用秩和检验。计数资料采用χ2检验分析。P＜0.05表示差异有统计学意义。
·
923
·
器官移植第2卷
结果
一、CYP3A5等位基因分析
1.凝胶电泳结果：CYP3A5PCR 扩增产物电泳结果见图1，CYP3A5限制性内切酶酶切电泳图谱见图2。
2.等位基因测序结果：随机抽取PCR 扩增产物进行测序的结果见图3。
3.等位基因发生频率：CYP3A5*1/*1型8例，CYP3A5*1/*3型17例，CYP3A5*3/*3型31例。其中CYP3A5*1等位基因总发生频率为29.4%（33/112），CYP3A5*3等位基因总发生频率（突变频率）为70.6%（79/112）。经Har-dy-Wein-berg 检验分析，结果显示P ＞0.05，各基因频率达到遗传平衡。
二、CYP3A5基因多态性与肾移植受者术后FK506的血药浓度/剂量比的关系
见表1。
三、CYP3A5基因多态性对肾移植术后急性排斥反应的影响
使用FK506三联免疫抑制方案的56
例肾移植
图1
CYP3A5PCR 扩增产物电泳结果
注：条带M 为DNA Marker ；条带1 7为CYP3A5PCR 产物（片段长度293bp ）
患者中，在移植术后3个月内共发生AR 6例，发生率为11%。不同类型的CYP3A5*3基因的AR 发生率比较差异无统计学意义。
四、CYP3A5基因多态性对肾移植术后不良反应的影响
术后3个月内，CYP3A5*3/*3型、*1/*3型和*1/*1型的患者分别有25例（81%）、8例（47%）和3例（3/8）患者发生不良反应。与*1/*1型比较，*1/*3型与*3/*3型患者的不良反应发生率较高（均为P ＜0.05），但后两者不良反应发生率比较差异无统计学意义（P ＞0.05）。与*1/*1基因型和*1/*3基因型患者比较，*3/*3基因型患者术后肝功能异常、药物肾毒性不良反应的发生率较高（均为P ＜0.05）。各组患者的不良反应及其发生率见表2
。
图2
CYP3A5限制性内切酶酶切电泳图谱
注：条带M 为DNA Marker ；条带6为CYP3A5*1/*1野生型纯合子；条带3、8为CYP3A5*1/*3突变型杂合子；条带1、2、4、5为CYP3A5*3/*3
突变型纯合子
图3CYP3A5等位基因测序结果
注：图3A 、3B 、3C 分别为CYP3A5*1/*1、CYP3A5*1/*3和CYP3A5*3/*3的测序结果
·
033·
第6期张海燕等.CYP3A5基因多态性对中国肾移植受者他克莫司血药浓度和疗效的影响
表1肾移植受者CYP3A5基因多态性与术后3个月
FK506的血药浓度/剂量比的关系（珋x?s）
基因型n FK506血药浓度
（ng/ml）
FK506日剂量
（mg/kg）
FK506
C/D值
*1/*18 6.20?1.22a0.083?0.019a78?24a *1/*317 6.93?1.37a0.079?0.027a90?42a *3/*3318.59?2.110.066?0.021149?59注：与CYP3A5*3/*3基因型比较，a P＜0.05
表2CYP3A5不同基因型患者的
不良反应发生率例（%）
基因型n 肝功能
异常
肾功能
异常
肺部
感染
白细胞
减少
*1/*1801（1/8）2（2/8）0
*1/*3171（6）a3（18）a3（18）1（6）
*3/*3314（13）a，b12（39）a，b7（23）2（6）
注：与CYP3A5*1/*1基因型比较，a P＜0.05；与* 1/*3基因型比较，b P＜0.05
讨论
药物基因组学是20世纪90年代末发展起来的基于功能基因组学与分子药理学的一门科学。遗传多态性是药物基因组学的基础，表现为药物代谢酶、转运体、受体及药物靶标的多态性等。这些多态性的存在可能导致许多药物治疗中出现药效和不良反应的个体间差异。药物基因组学从基因水平揭示这些差异的遗传特征，鉴别基因序列的差异，在基因水平研究药效的差异，并以药物效应及安全性为目标，研究各种基因突变与药效及安全性之间的关系［3-7］。它将基因多态性与药物效应个体多样性紧密联系在一起，以此为平台开发药，指导合理用药，提高用药的安全性和有效性。
CYP3A5基因有多个单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点，其中CYP3A5*3与CYP3A5基因及所产生的酶活性关系密切。研究表明CYP3A5*3可引起个体间CYP3A5表达差异［6］，CYP3A5*3/*3基因型是最常见的突变型，可导致CYP3A5翻译出无功能的蛋白质。一些研究认为，携带CYP3A5*1/*1基因型和CYP3A5*1/*3基因型患者的FK506达到目标血药谷浓度所需剂量明显高于携带CYP3A5*3/ *3基因型的患者，可能是突变型纯合子CYP3A5可使FK506代谢减缓，造成血药谷浓度处于较高水平［8-14］，也就是说当服用同等剂量的药物，携带CYP3A5*3/*3基因患者的血药浓度较高，而携带CYP3A5*1/*1基因型和CYP3A5*1/*3基因型患者的血药浓度明显偏低。
本文的研究结果也证实肾移植受者CYP3A5 *3/*3基因型患者的FK506的C/D值显著高于CYP3A5*1/*1基因型和CYP3A5*1/*3基因型患者，肾移植术后3个月内，3组基因型患者间FK506的C/D值比较差异有统计学意义。与*1/*1型和*1/*3型患者比较，*3/*3型患者术后肝功能异常、药物肾毒性不良反应的发生率较高（均为P＜0.05）。因此，建议在器官移植前对患者进行CYP3A5*3基因型分析，以帮助临床医师确定术后FK506的用药方案，达到用药剂量低、不良反应小与疗效佳的最优化，实现免疫抑制剂的个体化应用。
参考文献
［1］Anglicheau D，Legendre C，Beaune P，et al.Cytochrome P4503A polymorphisms and immunosuppressive drugs：an
update［J］.Pharmacogenomics，2007，8（7）：835-849.［2］Kuehl P，Zhang J，Lin Y，et al.Sequence diversity in CYP3A promoters and characterization of the genetic basis
of polymorphic CYP3A5expression［J］.Nat Genet，2001，27（4）：383-391.
［3］Nicholson JK，Wilson ID，Lindon JC.Pharmacometabo-nomics as an effector for personalized medicine［J］.Phar-
macogenomics，2011，12（1）：103-111.
［4］Johansson I，Ingelman-Sundberg M.Genetic polymorphism and toxicology———with emphasis on cytochrome p450
［J］.Toxicol Sci，2011，120（1）：1-13.
［5］Slanar O，Zima T.Pharmacogenetic aspects of current pharmacotherapy［J］.Cas Lek Cesk（捷克文），2010，
149（10）：472-475.
［6］Bultas J.Pharmacogenetics in cardiovascular diseases the-rapy———treatment according guidelines or according the
individual requirement？［J］Cas Lek Cesk（捷克文），2010，149（10）：476-481.
［7］Pharmacogenetic testing to predict serious toxicity from5-fluorouracil（5-FU）for patients administered5-FU-based
chemotherapy for cancer［J］.Technol Eval Cent Asses
Program Exec Summ，2010，24（13）：1-3.
［8］Zhang X，Liu ZH，Zheng JM，et al.Influence of CYP3A5 and MDR1polymorphisms on tacrolimus concentration in
the early stage after renal transplantation［J］.Clin Trans-
plant，2005，19（5）：638-643.
（下转第359页）
·
133
·
第6期刘宁等.肾移植术后新发自体肾、输尿管、膀胱多发性原发恶性肿瘤1例报告
参考文献
［1］Yildirim Y，Ozyilkan O，Emiroglu R，et al.Early diagnosis of cancer in renal transplant patients：a single
center experience［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2006，
7（2）：336-339.
［2］陈光耀，姚许平，陈跃英，等．肾移植后并发恶性肿瘤的临床分析［J］.临床泌尿外科杂志，2003，18
（3）：144-145.
［3］费继光，陈立中，赵纪强，等．肾移植患者恶性肿瘤发病特征和危险因素［J］.中国癌症杂志，2008，18
（3）：223-226.
［4］张彤，张亚琴，傅斌生，等.肝移植术后新发肺癌1例临床分析附文献复习［J］.器官移植，2010，1（5）：
281-286.
［5］董昌斌，朱有华，周梅生．肾移植术后并发恶性肿瘤的临床分析［J］.临床泌尿外科杂志，2004，19（2）：
67-68.
［6］Suthanthiran M，Hojo M，Maluccio M，et al.Post-trans-plantation malignancy：a cell autonomous mechanism with
implications for therapy［J］.Trans Am Clin Climatol
Assoc，2009，120：369-388.
［7］Herman M，Weinstein T，Korzets A，et al.Effect of cyclosporin A on DNA repair and cancer incidence in kid-
ney transplant recipients［J］.J Lab Clin Med，2001，137（1）：14-20.
［8］Shihab FS，Bennett WM，Isaac J，et al.Nitric oxide modulates vascular endothelial growth factor and receptors
in chronic cyclosporine nephrotoxicity［J］.Kidney Int，
2003，63（2）：522-533.
［9］Geetha D，Tong BC，Racusen L，et al.Bladder carcino-ma in a transplant recipient：evidence to implicate the BK
human polyomavirus as a causal transforming agent［J］.
Transplantation，2002，73（12）：1933-1936.
［10］Carpinito GA，Stadler WM，Briggman JV，et al.Urinary nuclear matrix protein as a marker for transitional cell car-
cinoma of the urinary tract［J］.J Urol，1996，156
（4）：1280-1285.
［11］Kibar Y，Goktas S，Kilic S，et al.Prognostic value of cytology，nuclear matrix protein22（NMP22）test，and
urinary bladder cancerⅡ（UBCⅡ）test in early recur-
rent transitional cell carcinoma of the bladder［J］.Ann
Clin Lab Sci，2006，36（1）：31-38.
［12］Penn I.Development of cancer as a complication of clini-cal transplantation［J］.Transplant Proc，1977，9
（1）：1121-1127.
（收稿日期：2011－09－07）
（本文编辑：朱佩玲）
（上接第331页）
［9］Ferraresso M，Tirelli A，Ghio L，et al.Influence of the CYP3A5genotype on tacrolimus pharmacokinetics and
pharmacodynamics in young kidney transplant recipients
［J］.Pediatr Transplant，2007，11（3）：296-300.［10］Choi JH，Lee YJ，Jang SB，et al.Influence of the CYP3A5and MDR1genetic polymorphisms on the phar-
macokinetics of tacrolimus in healthy Korean subjects
［J］.Br J Clin Pharmacol，2007，64（2）：185-191.［11］Haufroid V，Wallemacq P，VanKerckhove V，et al.
CYP3A5and ABCB1polymorphisms and tacrolimus
pharmacokinetics in renal transplant candidates：guide-
lines from an experimental study［J］.Am J Transplant，
2006，6（11）：2706-2713.
［12］Masuda S，Inui K.An up-date review on individualized
dosage adjustment of calcineurin inhibitors in organ trans-
plant patients［J］.Pharmacol Ther，2006，112（1）：
184-198.
［13］Op den Buijsch RA，Christiaans MH，Stolk LM，et al.
Tacrolimus pharmacokinetics and pharmacogenetics：in-
fluence of adenosine triphosphate-binding cassette B1
（ABCB1）and cytochrome（CYP）3A polymorphisms
［J］.Fundam Clin Pharmacol，2007，21（4）：427-435.［14］李洋，张琪，姜楠，等.供受体CYP3A5基因多态性与肝移植患者术后他克莫司浓度/剂量比的关系［J］.
器官移植，2011，1（2）：4-8.
（收稿日期：2011－08－12）
（本文编辑：邬加佳朱佩玲）
·
953
·
基因多态性分析
. 人基因多态性分析 一、实验目的 1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。 2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。 二、实验原理 基因多态性（gene polymorphism）是指在一个生物群体中，同时存在两种及以上的变异型或基因型或等位基因，也称为遗传多态性（genetic polymorphism）。人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及遗传性疾病的分子机制有重大意义；与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病的诊断标记，并为分离克隆致病基因提供依据；病因未知的疾病与候选基因多态性的相关性分析，可用于辅助筛选致病易感基因。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction—Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)分析是一种常用的DNA分子标记。原理是通过PCR扩增获得目的基因。若目的基因存在等位变异（多态性），且变异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上，使酶切位点增加或者消失，则酶切结果就会产生大小不同的片段，即片段长度多态性，再利用琼脂糖凝胶电泳分离，可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性图谱比较，可确定是否变异。应用PCR-RFLP，可检测某一致病基因已知的点突变，进行直接基因诊断，也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。 三、器材与试剂 1. 器材 ⑴离心机。 ⑵DNA扩增仪。 ⑶电泳仪。 ⑷水平电泳槽。 ⑸紫外检测仪。 ⑹移液器。 2. 试剂 . . ⑴口腔拭子DNA抽提试剂盒。 ⑵琼脂糖。 ⑶1×TAE电泳缓冲液：980ml蒸馏水中加入50×TAE母液20ml。 ⑷50×TAE母液：Tris 121g，0.5M EDTA（pH8.0）50ml，冰醋酸28.55ml，定容至500ml。
基因多态性
基因多态性 多态性（polymorphism）是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或多种不连续的变异型或基因型（genotype）或等位基因（allele），亦称遗传多态性（genetic polymorphism）或基因多态性。从本质上来讲，多态性的产生在于基因水平上的变异，一般发生在基因序列中不编码蛋白的区域和没有重要调节功能的区域。对于一个体而言，基因多态性碱基顺序终生不变，并按孟德尔规律世代相传。 基因多态性分类生物群体基因多态性现象十分普遍，其中，人类基因的结构、表达和功能，研究比较深入。人类基因多态性既来源于基因组中重复序列拷贝数的不同，也来源于单拷贝序列的变异，以及双等位基因的转换或替换。按引起关注和研究的先后，通常分为3大类：DNA片段长度多态性、DNA重复序列多态性、单核苷酸多态性。 DNA片段长度多态性DNA片段长度多态性（FLP），即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性内切酶位点的变化，而导致DNA片段长度的变化。又称限制性片段长度多态性，这是一类比较普遍的多态性。 DNA重复序列多态性DNA重复序列的多态性（RSP），特别是短串联重复序列，如小卫星DNA和微卫星DNA，主要表现于重复序列拷贝数的变异。小卫星（minisatellite）DNA由15~65bp的基本单位串联而成，总长通常不超过20kb，重复次数在人群中是高度变异的。这种可变数目串联重复序列（VNTR）决定了小卫星DNA长度的多态性。微卫星（microsatellite）DNA 的基本序列只有1~8bp，而且通常只重复10~60次。 单核苷酸多态性单核苷酸多态性（SNP），即散在的单个碱基的不同，包括单个碱基的缺失和插入，但更多的是单个碱基的置换，在CG序列上频繁出现。这是目前倍受关注的一类多态性。 SNP通常是一种双等位基因的（biallelic），或二态的变异。SNP大多数为转换，作为一种碱基的替换，在基因组中数量巨大，分布频密，而且其检测易于自动化和批量化，因而被认为是新一代的遗传标记。 遗传背景知识遗传和变异各种生物都能通过生殖产生子代，子代和亲代之间，不论在形态构造或生理功能的特点上都很相似，这种现象称为遗传（heredity）。但是，亲代和子代之间，子代的各个体之间不会完全相同，总会有所差异，这种现象叫变异（variation）。遗传和变异是生命的特征。遗传和变异的现象是多样而复杂的，正因为如此，才导致生物界的多种多样性。
如何用PCR法检测基因的多态性
如何用PCR法检测基因的多态性 多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类，即DNA 位点多态性(site polymorphism)和长度多态性(longth polymorphism)。 基因多态性的主要检测方法简述如下： 1．限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）：由DNA 的多态性，致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变， 用限制酶切割基因组时， 钠 问 亢兔扛銎 蔚某ざ染筒煌 此 降南拗菩云 纬ざ榷嗵 裕 贾孪拗破 纬ざ确⑸ 谋涞拿盖形坏悖 殖莆 嗵 晕坏恪W钤缡怯肧outhern Blot/RFLP方法检测，后来采用聚合酶链反应（PCR）与限制酶酶切相结合的方法。现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。 2．单链构象多态性（SSCP）：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。相同长度的单链DNA如果顺序不同，甚至单个碱基不同，就会形成不同的构象。在电泳时泳动的速度不同。将PCR产物经变性后，进行单链DNA凝胶电泳时，靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时，就会出现泳动变位（mobility shift），多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变。 3．PCR-ASO探针法（PCR-allele specific oligonucleotide, ASO）：即等位基因特异性寡核苷酸探针法。在PCR扩增DNA片段后，直接与相应的寡核苷酸探杂交，即可明确诊断是否有突变及突变是纯合子还是杂合子。其原理是：用PCR扩增后，产物进行斑点杂交或狭缝杂交，针对每种突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针，其中一个具有正常序列，另一个则具有突变碱基。突变碱基及对应的正常碱基匀位于寡核苷酸片段的中央，严格控制杂交及洗脱条件，使只有与探针序列完全互补的等位基因片段才显示杂交信号，而与探针中央碱基不同的等位基因片段不显示杂交信号，如果正常和突变探针都可杂交，说明突变基因是杂合子，如只有突变探针可以杂交，说明突变基因为纯合子，若不能与含有突变序列的寡核苷探针杂交，但能与相应的正常的寡核苷探针杂交，则表示受检者不存在这种突变基因。若与已知的突变基因的寡核苷探针匀不能杂交，提示可能为一种新的突变类型。 4. PCR-SSO法：SSO技术即是顺序特异寡核苷酸法（Sequence Specific Oligonucleotide, SSO）。原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针，通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。探针与PCR产物在一定条件下杂交具有高度的特异性，严格遵循碱基互补的原则。探针可用放射性同位素
基因多态性的检测方法
基因多态性的检测方法 多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类，即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性(longth polymorphism)。 基因多态性的主要检测方法简述如下： 1．限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism，RFLP）：由DNA 的多态性，致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变，用限制酶切割基因组时，所产生的片段数目和每个片段的长度就不同，即所谓的限制性片段长度多态性，导致限制片段长度发生改变的酶切位点，又称为多态性位点。最早是用Southern Blot/RFLP方法检测，后来采用聚合酶链反应（PCR）与限制酶酶切相结合的方法。现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。 2．单链构象多态性（SSCP）：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。相同长度的单链DNA如果顺序不同，甚至单个碱基不同，就会形成不同的构象。在电泳时泳动的速度不同。将PCR产物经变性后，进行单链DNA凝胶电泳时，靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时，就会出现泳动变位（mobility shift），多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变。 3．PCR-ASO探针法（PCR-allele specific oligonucleotide, ASO）：即等位基因特异性寡核苷酸探针法。在PCR扩增DNA片段后，直接与相应的寡核苷酸探杂交，即可明确诊断是否有突变及突变是纯合子还是杂合子。其原理是：用PCR扩增后，产物进行斑点杂交或狭缝杂交，针对每种突变分别合成一对寡核苷酸片段作为探针，其中一个具有正常序列，另一个则具有突变碱基。突变碱基及对应的正常碱基匀位于寡核苷酸片段的中央，严格控制杂交及洗脱条件，使只有与探针序列完全互补的等位基因片段才显示杂交信号，而与探针中央碱基不同的等位基因片段不显示杂交信号，如果正常和突变探针都可杂交，说明突变基因是杂合子，如只有突变探针可以杂交，说明突变基因为纯合子，若不能与含有突变序列的寡核苷探针杂交，但能与相应的正常的寡核苷探针杂交，则表示受检者不存在这种突变基因。若与已知的突变基因的寡核苷探针匀不能杂交，提示可能为一种新的突变类型。 4. PCR-SSO法：SSO技术即是顺序特异寡核苷酸法（Sequence Specific Oligonucleotide, SSO）。原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针，通过杂交的方法进行
基因多态性分析
人基因多态性分析 一、实验目的 1. 了解基因多态性在阐明人体对疾病、毒物的易感性与耐受性、疾病临床表现的多样性以及对药物治疗的反应性中的重要作用。 2. 了解分析基因多态性的基本原理和研究方法。 二、实验原理 基因多态性（gene polymorphism）是指在一个生物群体中，同时存在两种及以上的变异型或基因型或等位基因，也称为遗传多态性（genetic polymorphism）。人类基因多态性对于阐明人体对疾病的易感性、毒物的耐受性、药物代谢差异及遗传性疾病的分子机制有重大意义；与致病基因连锁的多态性位点可作为遗传病的诊断标记，并为分离克隆致病基因提供依据；病因未知的疾病与候选基因多态性的相关性分析，可用于辅助筛选致病易感基因。 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction—Restriction Fragment Length Polymorphism，PCR-RFLP)分析是一种常用的DNA分子标记。原理是通过PCR扩增获得目的基因。若目的基因存在等位变异（多态性），且变异正好发生在某种限制性内切酶识别位点上，使酶切位点增加或者消失，则酶切结果就会产生大小不同的片段，即片段长度多态性，再利用琼脂糖凝胶电泳分离，可呈现出多态性电泳图谱。若将患者与正常的多态性图谱比较，可确定是否变异。应用PCR-RFLP，可检测某一致病基因已知的点突变，进行直接基因诊断，也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。 三、器材与试剂 1. 器材 ⑴离心机。 ⑵DNA扩增仪。 ⑶电泳仪。 ⑷水平电泳槽。 ⑸紫外检测仪。 ⑹移液器。 2. 试剂
CYP2C19基因多态性检测
CYP2C19基因多态性检测 项目简介：CYP2C19是CYP450酶第二亚家族中的重要成员，是人体重要的药物代谢 酶，在肝脏中有很多表达。CYP2C19基因座位于染色体区10q24.2上，由9个外显子构成。CYP2C19具有很多SNP位点，最常见的是CYP2C19*2和CYP2C19*3。CYP2C19*2会导致转录蛋白的剪切突变失活，而CYP2C19*3能构成一个终止子，破坏转录蛋白的活性。据统计，CYP2C19*2和CYP2C19*3两个突变位点能解释几乎100%的东亚人和85%的高加索人种的相关弱代谢遗传缺陷，而其他两种等位基因CYP2C19*4和CYP2C19*5主要在高加索人种中分布。大量证据证实，不同人种在CYP2C19的底物的代谢能力有很大差异；2–5%高加索人是弱代谢者，而13–23%的亚洲人是弱代谢者。这是由于在亚洲人口中CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因的高频率造成的。通过CYP2C19基因检测，判断患者对相关药物的代谢能力，可以指导临床用方案的制定，实现个体化用药治疗。 临床上常用的经由CYP2C19酶代谢的药物： 1、治疗胃酸相关性疾病：如质子泵抑制剂：奥美拉唑（omeprazole）、兰索拉唑（lansoprazole）、泮托拉唑（pantoprazole）、 雷贝拉唑（rabeprazole）、埃索美拉唑 （Esomeprazole）。 2、治疗心血管疾病：Clopidogrel、氯吡格雷、抗凝血药物。 3、抗真菌药物：Voriconazole、伏立康唑、广谱抗真菌药物。 4、神经类药物：①S-美芬妥英mephenytoin为乙内酰脲类抗癫痫药，在体内的羟化代谢主要由单基因CYP2C19编码表达的CYP2C19酶蛋白介导，由羟化酶CYP2C19氧化生成4’-羟基美芬妥英；②地西泮diazepam，一种长效的镇静、安眠药；③丙米嗪imipramine ，抗抑郁药，N-去甲基化和2-羟化；④苯巴比妥phenobarbital，传统的抗癫痫药；⑤抗心律失常药,抗抑郁药,抗精神病药，β受体阻断剂,抗高血压药和止痛剂。 5、抗肿瘤药：环磷酰胺。 6、抗结核药：利福平。 7、孕激素：黄体酮。 8、抗疟疾药：氯胍。 9、HIV蛋白酶抑制剂。 10、抗移植排斥药物：他克莫司、兰索拉唑。 CYP2C19基因多态性检测标本采集及出报告时间：病人抽静脉血2ml（用 EDTA-K2抗凝）送检验科分子生物诊断室，4个工作日出报告。 电话：8801063 手机：余宗涛65327 高波 64444 CYP2C19基因多态性检测临床意义： 1、基因剂量效应。 2、CYP2C19基因多态性，导致了个体间酶活性的多样性。等位基因的突变使酶活性降低，对药物代谢的能力随着等位基因的不同组合而呈现出一定的规律性，表现出正常基因纯合子>正常基因与突变基因杂合子> 突变基因纯合子或杂合子的变化趋势。 3、对于不同代谢能力的个体，运用不同的药物剂量等策略是非常必要的，可达到更好的治疗效果。 4、根据CYP2C19基因型给予个性化的药物和剂量可以降低副作用发生率-安全性；提高治
SNP单核苷酸多态性检测技术
1定义： 单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。SNP所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换（transition）或颠换（transversion）所引起，也可由碱基的插入或缺失所致。但通常所说的SNP并不包括后两种情况。单核苷酸多态性（SNP）是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括置换、颠换、缺失和插入。所谓转换是指同型碱基之间的转换,如嘌呤与嘌呤( G2A) 、嘧啶与嘧啶( T2C) 间的替换;所谓颠换是指发生在嘌呤与嘧啶(A2T、A2C、C2G、G2T) 之间的替换。从理论上来看每一个SNP 位点都可以有4 种不同的变异形式，但实际上发生的只有两种，即转换和颠换，二者之比为2：1。SNP 在CG序列上出现最为频繁，而且多是C转换为T ，原因是CG中的C 常为甲基化的，自发地脱氨后即成为胸腺嘧啶。一般而言，SNP 是指变异频率大于1 %的单核苷酸变异。在人类基因组中大概每1000 个碱基就有一个SNP ，人类基因组上的SNP 总量大概是3 ×106个。依据排列组合原理,SNP 一共可以有6种替换情况,即A/ G、A/ T、A/ C、C/ G、C/ T 和G/ T ,但事实上,转换的发生频率占多数,而且是C2T 转换为主,其原因是Cp G的C 是甲基化的,容易自发脱氨基形成胸腺嘧啶T , Cp G 也因此变为突变热点。理论
应用TaqMan探针技术检测MTHFR基因的C677T和A1298C多态性
应用TaqMan探针技术检测MTHFR基因的C677T和A1298C多态 性 目的探讨一种快速、准确运用于临床检测MTHFR基因多态性的方法。方法提取43例胃癌患者的外周血基因组DNA，用TaqMan探针技术对MTHFR 基因的C677T和A1298C两个多态性位点进行分型，并采用直接测序法对TaqMan探针分型结果进行验证。结果43例样本的MTHFR C677T基因型分别为14例CC、23例CT和6例TT；A1298C基因型为24例AA、18例AC、1例CC，两种分型方法结果一致。结论本研究选用的TaqMan探针分型方法结果准确可靠，能够用于MTHFR的C677T和A1298C两个多态性位点分析。 标签：TaqMan探针；MTHFR；多态性；DNA测序；胃癌 胃癌（Gastric cancer）是世界范围内的高发肿瘤之一[1]。近年研究表明，低叶酸水平可增加包括胃癌在内的许多肿瘤发生的危险性[2]。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）是叶酸代谢途径中的一关键酶，MTHFR参与的体内同型半胱氨酸（Hcy）和甲硫氨酸之间的循环反应，反应中生成的S腺苷甲硫氨酸（SAM）是体内代谢唯一的甲基供体，涉及DNA 的修复与合成，影响DNA代谢，与许多肿瘤化疗药物的疗效相关。 MTHFR的活性很大程度上可能受基因多态性的影响，从而影响疾病的发生和药物的疗效。MTHFR基因C677T和A1298C为两个常见的多态性位点，有研究表明该位点的基因多态性会导致MTHFR酶活性的改变[3]，可能导致患者之间出现较大的个体差异。因此，测定MTHFR的基因型对疾病的预防和合理用药有重要的意义。现已有的MTHFR基因多态性的研究，大多数采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）技术，该技术不仅费时，且易污染造成假阳性。不适宜用于临床检测。本研究旨在探讨一种可用于临床快速准确检测MTHFR基因型的方法，故选用TaqMan探针技术对MTHFR的C677T和A1298C 两个多态性位点进行分型。 1资料与方法 1.1一般资料经CT、MRI或病理组织学活检确诊的胃癌患者43例，来源于昆明医科大学第一附属医院，收集样本人群的外周静脉血2 mL。采用Genomic DNA Purification Kit（PROMEGA公司）对基因组DNA进行提取，使用Nanodrop 2000测定DNA的浓度和纯度。 1.2 TaqMan探针技术检测MTHFR基因C677T和A1298C位点的多态性TaqMan探针试剂由ABI公司为MTHFR基因C677T（SNP ID：rs1801133），A1298C（SNP ID：rs1801131）多态性设计的TaqMan SNP分析试剂，每个位点的TaqMan SNP基因分型试剂中，含有两条MGB探针。MTHFR C677T一条以VIC荧光标记碱基G，对应样本基因突变位点C；一条以FAM荧光标记碱基A，
检测基因多态性的方法
检测基因多态性的方法 一种用于快速检测基因多态性的方法，具有如下特征：(a)根据所测样本靶序列设计两对引物，其中一对为锚定引物；(b)将上述两对引物及一个与锚定引物的锚定部分序列相同的引物加入到含有底物及其它PCR扩增反应试剂的溶液中，进行PCR扩增反应；(c)以适当的方法检测扩增产物中链长不同的DNA片断；(d)根据反应产物中DNA片断的多少及其长短判断基因多态性的类型。本发明涉及一种基因多态性检测方法，可用于单碱基多态性、基因突变、单碱基插入或缺失、微卫星分析等。本方法是首先设计两对引物，其中一对为通常PCR引物，用于扩增含有基因多态性位点的DNA片段；另一对为锚定引物，用于判断基因多态性的类型。再将上述两对引物及一个与锚定引物的锚定部分序列相同的引物加入到含有底物及其它PCR扩增反应试剂的溶液中，在单管中进行PCR扩增反应，并使扩增反应产生与基因多态性相对应的DNA扩增产物，然后以凝胶电泳法、或毛细管电泳法、或微流控芯片法，或高效液相色谱法等分离技术检测，根据扩增产物中DNA片段的多少及链长判断基因多态性的类型。为提高延伸反应的特异性，在锚定引物的3’端区域人为地引入一个与模板不互补的碱基。 用于检测遗传多态性的方法，包括：生成寡核苷酸探针和／或寡核苷酸引物，使得该寡核苷酸探针和／或引物包含在编码受体的基因或与其互补的序列中存在的多态位点，或者，当编码受体的所述基因和与其互补的所述序列至少其中之一得到扩增时，使得多态位点包含在扩增片段中；并使用由此生成的寡核苷酸探针和／或寡核苷酸引物检测编码靶受体的基因中的至少一种遗传多态性。 多态性是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因的多态性。这种多态性可以分为两类，即DNA 位点多态性和长度多态性。 基因多态性的主要检测方法： 1，限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism）:由DNA的多态性，致使DNA分子的限制酶切位点及数目发生改变，现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性。 2，单链构象多态性：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法。 3，PCR-ASO探针法：即等位基因特异性寡核苷酸探针法。 4，PCR-SSO法：原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针，通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。 5，PCR-SSP法：SSP（序列特异性引物）只能与某一等位基因特异性片段的碱基序列互补性结合，通过PCR特异性地扩增该基因片段，从而达到分析基因多态性的目的。 6，PCR-荧光法： 7，PCR-DNA测序：是诊断未知突变基因最直接的方法。 8，PCR指纹图法：实用于快速的同种异性DR/DW配型。 9，基因芯片法：又称为DNA微探针阵列。它是集成了大量的密集排列的大量已知的序列探针，通过与被标记的若干靶核苷酸序列互不匹配，与芯片特定位点上的探针杂交，利用基因芯片杂交图像，确定杂交探针的位置，便可根据碱基互补匹配的，与芯片特定位点上的探针杂交，利用基因芯片杂交图像，确定杂交探针的位置，便可根据碱基互补匹
遗传病及遗传多态性
遗传病及遗传多态性 遗传病（hereditary disease）由基因突变或染色体畸变引起的疾病。已知的遗传病约有5000种，可分为3大类： 单基因遗传病由某一基因突变而引起，又分为：（1）常染色体显性遗传病，致病基因位于1～22号常染色体中的某一对上，且呈显性。如并指、多指、视网膜母细胞瘤、遗传性小脑性运动失调、先天性肌强直、多发性肠胃息肉、遗传性卟啉病等。（2）常染色体隐性遗传病，致病基因位于1～22号常染色体中的某一对上，且呈隐性。如白化病、先天性聋哑症、苯丙酮尿症、半乳糖血症、先天性鳞皮病等。（3）伴性遗传病，由性染色体上的基因发生突变而引起。包括X连锁隐性遗传病（致病基因位于X染色体上且呈隐性），如红绿色盲、血友病、先天性白内障、先天性丙种球蛋白缺乏症等；X连锁显性遗传病（致病基因位于X 染色体上且呈显性），如抗维生素D佝偻病、遗传性肾炎等。 多基因遗传病受多对微效基因控制并易受环境因素影响的遗传病。如唇裂、腭裂、先天性巨结肠、先天性幽门狭窄、早发性糖尿病、各种先天性心脏病等。 染色体异常病由先天性的染色体数目异常或结构异常而引起。又分为：（1）常染色体病，由1～22号常染色体发生畸变而引起。包括单体综合征，某一号染色体为单体，如21单体和22单体，这类病人极少见，大都于胎儿期死亡；三体综合征，某一号同源染色体不是两个而是三个，如21三体（又称先天愚型或唐氏综合征，核型为47XX或XY；＋21）、18三体（Edward氏综合征）和13三体（Patan氏综合征）等；部分三体综合征（由某一片段有三份而引起）如9p部分三体综合征（9号染色体的短臂有三份）；部分单体综合征（由某一常染色体的部分缺失而引起），如猫叫综合征（婴儿期哭声类似猫叫）就是5号染色体短臂部分缺失引起的。（2）性染色体病，由X和Y性染色体数目或结构变异而引起。如女性的特纳氏综合征（45，XO），男性的克氏综合征（47，XXY）等。遗传病目前尚难根治，故应积极预防。预防的措施有检出致病基因的携带者与禁止近亲结婚，推行计划生育，开展遗传咨询，进行产前检查与中止有病胎儿的妊娠等。 遗传多态性（genetic polymorphism）在一个群体内存在两种或两种以上非连续变异类型，而其中最罕见类型的频率不小于0.01（或0.05）的现象。常见的不同水平上的遗传多态性有：（1）基因多态性（gene polymorphism）。经调查人类大多数群体的ABO血型系统的三种复等位基因I A、I B和i的频率，最高的不超过0.55，最低的不小于0.2，所以，ABO血型系统的基因座为多态基因座。据研究，大多数生物的多态基因座约占总数基因座的15%～50%，即约有1/4～1/2的基因座存在两种或两种以上的等位基因。（2）染色体多态性（chromosome polymorphism）。在一群体中的同一染色体上可以发生不同的倒位或易位。例如拟暗果蝇（Drosophila pseudoobscura）的第三染色体上存在多种倒位，其自然群体中的倒位类型竟多达20余种。植物群体中的倒位多态性比动物的更普遍。在一些动植物群体中（如蟑螂、直果曼陀罗）还观察到易位多态性。此外，随着研究的深入，在分子水平上还发现核酸有限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism，RFLP），例如，在群体中用同一限制性内切酶“切割”DNA，可得到不同长度的DNA片段。 现在一般用自然选择理论来解释遗传多态性产生的原因，主要有杂合优势说和依赖 选择说。杂合优势说认为，杂合体（如Aa）在适应能力上要优于纯合体（如AA和aa），因此群体中的等位基因A和a的频率就会维持在一个既不过高也不过低的水平上。依赖选
基因多态性与髋关节发育不良的相关性研究进展_侯华成
caloric restriction on the gene expression of Foxo13，and4 （FKHR，FKHRL1，and AFX）in the rat skeletal muscles［J］．Mi- crosc Res Tech，2002，59（4）：331-334． ［7］Liu CM，Yang Z，Liu CW，et al．Effect of RNA oligonucleotide tar-geting Foxo-1on muscle growth in normal and cancer cachexia mice［J］．Cancer Gene Ther，2007，14（12）：945-952． ［8］Kim HJ，Kobayashi M，Sasaki T，et al．Overexpression of FoxO1in the hypothalamus and pancreas causes obesity and glucose intoler- ance［J］．Endocrinology，2012，153（2）：659-671． ［9］Waddell DS，Baehr LM，van den Brandt J，et al．The glucocorticoid receptor and FOXO1synergistically activate the skeletal muscle at- rophy-associated MuRF1gene［J］．Am J Physiol Endocrinol Metab，2008，295（4）：E785-E797． ［10］Sandri M，Lin J，Handschin C，et al．PGC-1alpha protects skeletal muscle from atrophy by suppressing FoxO3action and atrophy-spe- cific gene transcription［J］．Proc Natl Acad Sci U S A，2006，103 （44）：16260-16265． ［11］Yang H，Wei W，Menconi M，et al．Dexamethasone-induced protein degradation in cultured myotubes is p300/HAT dependent［J］．Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol，2007，292（1）：R337-R344．［12］Smith IJ，Alamdari N，O'Neal P，et al．Sepsis increases the expres-sion and activity of the transcription factor forkhead box O1 （FOXO1）in skeletal muscle by a glucocorticoid-dependent mecha- nism［J］．Int J Biochem Cell Biol，2010，42（5）：701-711． ［13］Sandri M，Sandri C，Gilbert A，et al．Foxo Transcription factors in-duce the atrophy-related ubiquitin ligase atragin and cause skeletal muscle atrophy［J］．Cell，2004，117（3）：399-412． ［14］Mammucari C，Milan G，Romanello V，et al．FoxO3controls auto-phagy in skeletal muscle in vivo［J］．Cell Metab，2007，6（6）：458- 471． ［15］Frost RA，Nystrom GJ，Jefferson LS，et al．Hormone，cytokine，and nutritional regulation of sepsis-induced increase in atrogin-1and MuRF1in skeletal muscle［J］．Am J Physiol Endocrinol Metab， 2007，292（2）：E501-E512．［16］Crossland H，Constantin-Teodosin D，Gardiner SM，et al．A poten-tial role for Akt/FOXO signalling in both protein loss and the im- pairment of muscle carbohydrate oxidation during sepsis in rodent skeletal muscle［J］．J Physiol，2008，586（Pt22）：5589-5600．［17］Alamdari N，Constantin-Teodosin D，Murton AJ，et al．Temporal changes in the involvement of pyruvate dehydrogenase complex in muscle lactate accumulation during lipopolysaccharide infusion in rats［J］．J Physiol，2008，586（6）：1767-1775． ［18］Yachi K，Inoue K，Tanaka H，et al．Localization of glucocorticoid-induced leucine zipper（GILZ）expressing neurons in the central nervous system and its relationship to the stress response［J］．Brain Res，2007，1159：141-147． ［19］Krzysiek R．Role of glucocorticoid-induced leucine zipper（GILZ）expression by dendritic cells in tolerance induction［J］．Transplant Proc，2010，42（8）：3331-3332． ［20］He L，Yang N，Isales CM，et al．Glucocorticoid-induced leucine zipper（GILZ）antagonizes TNF-αinhibition of mesenchymal stem cell osteogenic differentiation［J］．PLoS One，2012，7（3）：e31717．［21］Bruscoli S，Donato V，Velardi E，et al．Glucocorticoid-induced leu-cine zipper（GILZ）and long GILZ inhibit myogenic differentiation and mediate anti-myogenic effects of glucocorticoids［J］．J Biol Chem，2010，285（14）：10385-10396． ［22］Sun X，Fischer DR，Pritts TA，et al．Expression and binding activity of the glucocorticoid recepter are upregulated in septic muscle［J］． Physiol Regul Integr Comp Physiol，2002，282（2）：R509-R518．［23］Sun X，Nlammen Jnl，Tian X．Sepsis induces the transcription of the glucocorticoid recepter in skeletal muscle cell［J］．Clin Sci （Lond），2003，105（3）：383-391 ［24］Peruchi BB，Petronilho F，Rojas HA，et al．Skeletal muscle electron transport chain dysfunction after sepsis in rats［J］．J Surg Res， 2011，167（2）：e333-338． ［25］Mirza KA，Wyke SM，Tisdale MJ．Attenuation of muscle atrophy by an N-terminal peptide of the receptor for proteolysis-inducing factor （PIF）［J］．Br J Cancer，2011，105（1）：83-88． 收稿日期：2012-05-14修回日期：2012-08-22编辑：刘劲 基因多态性与髋关节发育不良的相关性研究进展 侯华成1，2△，史冬泉2（综述），蒋青2※（审校） （1．南京大学医学院，南京210093；2．南京大学医学院附属鼓楼医院关节中心，南京210008） 中图分类号：R684．2文献标识码：A文章编号：1006-2084（2013）02-0252-04 doi：10．3969/j．issn．1006-2084．2013．02．020 摘要：髋关节发育不良（DDH）是婴幼儿时期一种常见的骨科疾病，发病率为1? 2?。其是由股骨头和（或）髋臼的大小、形态、取向和（或）组织构成异常导致，通常指关节囊松弛和（或）髋臼太浅。DDH可导致膝关节不稳定、关节疼痛、步态异常及早发型骨性关节炎，因此早期预防、早期诊断和早期治疗显得尤为重要。预防该病必须了解病因，而遗传因素是DDH的重要病因之一。 关键词：髋关节发育不良；基因多态性；病例对照研究 Research Progress in the Association between Gene Polymorphism and Developmental Dysplasia of the Hip HOU Hua-cheng1，2，SHI Dong-quan2，JIANG Qing2．（1．Medical School of Nanjing University，Nanjing210093，China；2．The Center of Diagnosis and Treatment for Joint Disease，Nanjing Drum Tower Hospital Affiliated to Medical School of Nanjing University，Nanjing210008，China） Abstract：Developmental dysplasia of the hip（DDH）is a common skeletal disease during the period of infant and child，and its morbidity is nearly1?-2?．Hip dysplasia refers to an anomaly in the size，shape，o-rientation，or organization of the femoral head，acetabulum，or both．This disease usually comprises shallow ac-etabulum and/or lax joint capsule．Hip instability，joint pain，gait abnormalities and premature arthritis are common clinical signs．It is important to prevent，diagnose and treat DDH as early as possible．More about the etiopathogenesis should be learned for the prevention，and genetic factor is one of the most important etiologi-cal factors of the disease． Key words：Developmental dysplasia of the hip；Gene polymorphism；Case-control study 髋关节发育不良（devel-opmental dysplasia of the hip，DDH）表现为股骨头与髋臼的相对位置异常，主要原因为关节囊松弛和（或）髋臼太浅［1］。危险因素很多，包括臀先露、女性、巨大儿、多胎妊娠、首次妊娠、羊水过少、襁褓的使用［2］和遗传因素［3］。遗传学研究发现，DDH呈家族聚集倾向，双生子研究表明单卵双生同时发病率为41%，而双卵双生仅 · 252 ·医学综述2013年1月第19卷第2期Medical Recapitulate，Jan．2013，Vol．19，No．2
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要：通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词：环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅1989年至今文献现做综述如下： 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P
基因多态性及其生物学作用和医学意义doc资料
基因多态性及其生物学作用和医学意义
基因多态性及其生物学作用和医学意义 一、基因多态性： 多态性（polymorphism）是指处于随机婚配的群体中，同一基因位点可存在2 种以上的基因型。在人群中，个体间基因的核苷酸序列存在着差异性称为基因（DNA）的多态性(gene polymorphism)。这种多态性可以分为两类，即DNA位点多态性(site polymorphism)和长度多态性 (longth polymorphism)。 1.位点多态性：是由于等位基因之间在特定的位点上DNA序列存在差异，也就是基因组中散在的碱基的不同，包括点突变（转换和颠换），单个碱基的置换、缺失和插入。突变是基因多态性的一种特殊形式，单个碱基的置换又称为单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP), SNP通常是一种二等位基因（biallelic）或二态的变异。据估计，单碱基变异的频率在1/1000-2/1000。SNP在基因组中数量巨大，分布频密，检测易于自动化和批量化，被认为是新一代的遗传标记。 2. 长度多态性：一类为可变数目***重复序列（variable number of tandem repeats, VNTRS），它是由于相同的重复顺序重复次数不同所致，它决定了小卫星 DNA（minisatellite）长度的多态性。小卫星是由15-65 bp的基本单位***而 成，总长通常不超过20bp，重复次数在人群中是高度变异的。另一类长度多态性是由于基因的某一片段的缺失或插入所致，如微卫星DNA （microsatellite），它们是由重复序列***构成，基本序列只有1-8bp,如(TA)n及