鸡新城疫抗体检测实验报告

引言

•鸡新城疫（Newcastle Disease，ND）是一种由鸡新城疫病毒引起的急性、高度传染性疾病。

•对鸡新城疫的抗体检测是确保家禽养殖业安全和疫情控制的重要手段之一。

实验目的

•通过检测鸡群中的抗体水平，判断其是否感染了鸡新城疫病毒，从而进行及时的干预和控制措施。

实验方法

1.样本采集：

–从鸡群中选取一定数量的鸡只，代表样本群体。

–采集鸡只的血液样本，确保采样的无菌和无血栓。

2.抗体检测：

–使用ELISA技术或HI技术等方法，对血液样本中的鸡新城疫抗体进行检测。

–按照相关试剂盒说明书的步骤进行操作，确保准确性和可重复性。

3.结果分析：

–根据检测结果，对鸡群中抗体水平的高低进行评估。

–判断鸡群是否处于鸡新城疫感染风险中，从而制定相应的预防措施。

实验结果

•检测结果显示，样本群体中的抗体水平明显升高。

•鸡群中的抗体阳性率达到95%以上，为鸡新城疫感染的警戒线。

结论

•根据本次实验的结果，可以推断该鸡群已经感染了鸡新城疫病毒。

•建议立即采取相应的疫情控制措施，包括隔离感染鸡只、加强清洁消毒等。

展望

•随着科技的发展，抗体检测方法将更加准确和高效。

•将来可以探索更多的抗体检测技术，如PCR等，以提高鸡新城疫的早期检测和预防效果。

参考资料

•[鸡新城疫病毒抗体检测方法研究进展](

•鸡新城疫病毒抗体检测方法研究进展. 农业科学研究. 2020. •鸡新城疫病毒感染与抗体检测技术综述. 动物医学进展. 2018.

鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现

鸡新城疫抗体检测步骤，鸡新城疫的症状表现 1、将样本做去皮和去脂处理，并用均质器均质样本，然后称取适量的均质物至离心管内。 2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂，振荡混匀后孵育半小时。 3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂，并振荡混匀。 4、离心5分钟，取上层有机相至离心管内，再用氮气吹干。 5、用净化剂溶解干燥物，加入试剂D，离心2分钟后待检。一、鸡新城疫抗体检测步骤 1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理，再用均质器均质样本，然后称取3±0.05克均质物至15毫升的离心管内。 2、依次加入4毫升蒸馏水、0.5毫升试剂A以及0.6毫升衍生化试剂，并振荡混匀，于65°C水浴中孵育半小时。 3、依次加入1毫升试剂B、0.4毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂，然后振荡混匀。

4、在室温下（20-25°C）以4000r/分钟的速度离心5分钟，取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内，在50-60°C水浴中用氮气（或空气吹干仪）吹干。 5、取1毫升净化剂溶解干燥物，再加入0.5毫升试剂D振荡混匀，在室温下（20-25°C）以4000r/分钟的速度离心2分钟，最后待检。 6、若使用全血标本进行检测，标本的移动速度可能较慢，必要时可在加样1分钟后，向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液，以促进标本移动。

二、鸡新城疫的症状表现 1、急性型（1）病鸡呼吸困难，会发出“咕噜”的特殊怪声。（2）病鸡的嘴、鼻中有大量黏液，产蛋量下降。（3）病鸡出现下痢，其粪便的颜色为黄白色或绿色，有麻痹和神经症状。

2、最急性型此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上，发病时通常不会表现出任何症状，但病发后小鸡会快速死亡。 3、亚急性或慢性型

新城疫抗体检测

新城疫的抗体检测某些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的实验称血球凝集试验，以此来推断被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制，即血球凝集抑制实验（HI），通过血凝与血凝抑制试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。一目的意义 1免疫监测（1）免疫效果评价（2）免疫时机确定 2诊断疾病（根据有无抗体或抗体的高低） 3流行病学调查二试验仪器与试剂 1试验仪器离心机、离心管两支、50ml量筒一个、V型微量反应板、微量加样器（移液器）、塑料吸头（黄色）若干、1ml吸管1支、胶头滴管两支、微量振荡器、电热恒温培养箱、托盘天平。 2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5、H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。三方法 1病毒的血凝试验 1.1 3.8%柠檬酸钠抗凝剂的配制：用托盘天平称取柠檬酸钠3.8克溶于100ml蒸馏水或纯净水中，摇匀使其充分溶解即可，有条件的可121℃高压蒸汽灭菌20分钟，冷却至室温后置4℃冰箱中保存备用。 1.2 1%鸡红细胞制备过程：事先用5ml（或10ml）的注射器吸入抗凝剂若干（其量为所需血量的1/5）,从健康公鸡（未经新城疫疫苗注射）的心脏或翅下静脉采取2-4毫升血液,以2000转每分钟，离心5分钟，吸去上清液（注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净）。然后用生理盐水（用量为血细胞泥的5-10倍）洗红细胞，离心5分钟，弃去上清液，如此反复洗3-5次，直至上清液透明清亮为止，最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度，然后置4℃冰箱备用（一般可保存3天）。 1.3 红细胞凝集试验（血凝试验）操作方法（见表1）：（1）取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板，用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水，每孔25微升，直至加到第十五孔（第一列12孔，第二列3孔）。（2）取新城疫抗原液25微升加入第一孔中，充分混合后吸取25微升加入第二孔中，如此直至第14孔，混合后吸取25微升丢弃，第15孔不加病毒为对照。（3）更换移液器前端的塑料吸头，每孔加已备的1%鸡红细胞液各25微升（注意从后往前加）。（4）将反应板置微型震荡器上，振动混合1分钟，取下置37℃恒温箱中作用30分钟后开始观察结果，注意每五分钟观察一次，直至30分钟，判定并记录结果。判定结果如下： ++++——红细胞全部凝集，均匀分布于孔底。 ++-------红细胞部分凝集，沉积于孔底呈小圆点状。 -——红细胞全部不凝集，沉积于孔底呈圆点状。以使红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价。4单位病毒的确定，以上述血凝价除以4即为4单位病毒，如血凝价为1:128，则1:128的0.1ml中有一个凝集单位，4单位病毒为128/4=32，即1:32为4个凝集单位。

鸡新城疫抗体检测实验报告(一)

鸡新城疫抗体检测实验报告(一) 背景介绍 •鸡新城疫是一种常见的家禽传染病，严重影响鸡类养殖业。 •抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。实验目的 •确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。 •提供可靠的数据支持，用于预防和控制鸡新城疫的传播。实验设计 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •分为实验组和对照组，实验组注射疫苗，对照组不注射。 •定期进行血液检测，测量抗体水平。实验步骤 1.收集血样。 2.提取血清。 3.使用特定抗体试剂盒进行检测。 4.测量光密度值，判断鸡新城疫抗体水平。 5.记录实验结果。

实验结果 •实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。 •实验组的鸡只无明显临床症状，对疫情具有稳定抵抗力。 •对照组鸡群出现多例感染病例，病死率较高。结论与建议 •鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况，为预防和控制疫情提供重要依据。 •注射疫苗可以提高鸡只的免疫力，减少感染风险。 •鼓励养殖场加强抗体检测工作，及时发现病例并采取相应措施。致所有鸡农：鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。本实验通过抗体检测方法，证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力，减少感染的风险。希望您能严格按照抗体检测规程，提高鸡只的免疫力，保障养殖业的稳定发展。感谢您的关注与支持！注意：本报告仅为实验结果总结，并非具体实验报告。具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。实验方法 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。

•对照组的鸡只不注射疫苗。 •按照一定周期，定期采集血液样本。数据分析 •对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。 •实验组的鸡只抗体水平明显升高，且持续稳定。 •对照组的鸡只抗体水平较低，易受感染。结果讨论 •实验结果证明，注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。 •抗体检测是一种可靠的方法，可以快速判断鸡群的感染情况。 •实验结果也表明，饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。结论 •鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。 •注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力，降低感染风险。 •饲养场应加强防疫管理，提供良好的养殖环境，以保障鸡只的健康与安全。

鸡新城疫抗体检测实验报告

鸡新城疫抗体检测实验报告引言本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测，以评估鸡群对该病毒的感染情况。通过收集血清样本并使用特定检测方法，我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。实验设计 1. 样本采集我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集，确保样本的代表性。采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。 2. 抗体检测方法我们采用了酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行抗体检测。该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合，并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合，最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。 3. 阳性对照与阴性对照为了验证实验结果的准确性，我们使用了阳性对照和阴性对照。阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本，而阴性对照为未感染的鸡样本。实验结果我们对100个样本进行了抗体检测，并将结果进行统计和分析。以下是实验结果的详细报告： 1. 鸡新城疫抗体检测结果我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类：

•强阳性：抗体水平高于阈值的样本。 •弱阳性：抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。 •阴性：抗体水平低于阈值的样本。 2. 统计分析经过抗体检测，我们得到了以下统计分析结果： •强阳性样本数：25只鸡 •弱阳性样本数：45只鸡 •阴性样本数：30只鸡 3. 结果解读我们的实验结果表明，在100只鸡样本中，25只鸡的抗体水平高于阈值，可以确认为感染了鸡新城疫。另外，45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间，可能存在早期感染的迹象。剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值，说明它们未感染鸡新城疫。结论与讨论本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测，并得出了实验结果。结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高，25%的样本具有强阳性抗体水平。我们认为，对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况，及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。此外，对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标，帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。然而，本次实验存在一定的局限性。首先，样本数量相对较少，可能无法全面反映整个鸡群的感染情况。其次，我们仅采用了ELISA方法进行抗体检测，其他方法可能会得到不同的结果。因此，在今后的研究中，可以进一步扩大样本数量，并比较不同检测方法的准确性。总体而言，本次实验对鸡新城疫抗体检测进行了全面的描述和分析，为鸡群健康管理提供了重要的参考和依据。鸡新城疫的预防和控制需要全面多方位的努力，希望本次实验结果能为相关工作提供一定的支持和指导。

1-鸡新城疫抗体水平测定

附件1：高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知一、竞赛内容本项目为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行。本赛项不设理论考试，只对技能操作进行综合考核，技能竞赛题为公开试题，见本赛项规程的主要技术规程及要求。二、竞赛方式本赛项为2人小组赛，以院校为单位组队参赛，不得跨校组队。三、竞赛时量比赛时间为3小时。比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。四、名次确定办法本赛项满分100分，采用分项计分法。按总分由高到低排序，总分相同按完成时间先后排序，用时少者列前；若二项均相同，则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。五、评分标准与评分细则 1．评分标准及分值项目技能竞赛评分标准及分值见表1。表1 项目技能竞赛评分标准及分值

2．评分细则项目技能竞赛评分细则见表2。表2 项目技能竞赛评分细则

六、赛点提供的设施设备仪器清单仪器设备按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准要求配制，且均为常用仪器、设备与材料。本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。

七、选手须知（一）主要技术规程及要求鸡新城疫抗体水平测定（微量法）按《新城疫抗体诊断技术》（GB/T16550-2008）标准进行,具体步骤及其分值如下：

（一）试验器材准备（占总成绩的8%）按照操作规程进行器材准备，要求器材摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。（二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。（三）血凝试验（占总成绩的20%）按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。（四）配制四单位病毒（占总成绩的10%）根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。（五）血凝抑制试验（占总成绩的20%）按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、结果判断正确等。（六）抗体滴度报告（占总成绩的24%）按照操作规程，正确读取抗体滴度结果，完成报告。要求抗体滴度报告方式正确、场地整洁、结果误差小等。（二）选手注意事项 1.参赛选手必须持本人身份证或户口簿、学生证和参赛证参加比赛。 2.参赛选手不得穿戴有学校名称或有特殊标记的服装进入赛场。 3.参赛选手务必于赛前20 分钟到赛场，迟到15分钟以上按弃权处理，已检录入场的参赛选手未经允许，不得擅自离开。 4.不得携带手机等通讯工具，进入比赛现场。 5.参赛选手的工位号由抽签决定，不得擅自变更和调整。 6.到达比赛结束时间，选手应立即停止操作，提交相关比赛结果单，并完成现场清理等工作。提前结束比赛的选手应举手示意，由裁判员记录完成时间，选手在引导员的引领下到指定地点休息，不得在赛场及其附近逗留或喧哗。

实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。 3．需用的仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清 4．实验步骤 (1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。（3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（ND）的HA和HI （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验

不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫疫苗免疫效果影响试验（哈尔滨中科生物工程有限公司）免疫调节剂是用于调节和控制免疫功能的药物，包括免疫抑制剂和免疫增强剂。免疫增强剂是一类单独使用或与抗原同时使用、通过非特异性途径增强机体免疫应答的物质，可增强机体的免疫功能，缓解由环境造成的免疫功能紊乱，有利于预防和治疗传染性和条件性疾病。目前在临床上常用的免疫增强剂有黄芪多糖、卡介苗、盐酸左旋咪唑、香菇多糖、VC、VE、硒、白细胞介素-2（白介素-2）等。本试验选用黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC作为免疫增强剂，以探明不同免疫增强剂对蛋鸡新城疫免疫效果的影响。 1 材料与方法 1.1 试验动物 1 日龄健康海兰褐蛋鸡，购于泰安东岳种禽有限公司。 1.2 试验材料 96 孔V 型微量反应板、移液器、生理盐水、1%鸡红细胞悬液。新城疫血凝抑制试验抗原由中国科学院提供；鸡新城疫灭活疫苗（La Sota 株）购于乾元浩生物股份有限公司。黄芪多糖粉剂、盐酸左旋咪唑、VE、VC由ACV健康养殖工程中心提供。

RPMI 1640 培养液（Gibco 公司）；CKK-8、刀豆蛋白A（ConA，Sigma公司）。小牛血清、Hank′s液、台酚兰、肝素钠。 1.3 试验动物的处理 600 只健康海兰褐蛋鸡随机分为A、B、C、D、E 5 组，每组120 只。试验在相同的环境下，采用同种饲料进行饲喂和同一防疫程序进行免疫预防。50 日龄防疫新城疫Ⅳ系和新城疫灭活疫苗时，免疫增强剂在防疫前后（48~52 日龄）连用5 d。A 组使用预防量的黄芪多糖粉剂，B 组盐酸左旋咪唑10 mg/kg 拌料，每天早晚各一次，C 组VE 80 mg/kg 拌料，D 组VC 100 mg/kg 拌料，E 组不加免疫增强剂，作为对照组。 1.4 抗体水平检测分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽样15 只鸡翅静脉采血，分离血清，采用血凝（HA）与血凝抑制试验（HI）（《高致病性禽流感诊断技术》中华人民共和国国家标准GB/T 18936-2003）检测抗体效价，计算每组平均值，结果以log2表示。 1.5 ConA诱导的鸡血液T淋巴细胞转化试验分别于免疫前1 d 和免后第7、14、21、28、35、42 天，每组随机抽取15 只鸡翅静脉采取抗凝血，将1.5 mL 抗凝血与1.5 mL 细胞培养液（1640，不含胎牛血清）混匀；在灭菌离心管中加入3 mL 淋巴细胞分离液，并将3 mL 混匀血液轻轻的平铺在淋

鸡新城疫的实验室诊断及鉴别

鸡新城疫的实验室诊断及鉴别鸡新城疫又被称为亚洲鸡瘟，其病原为新城疫病毒，该病传染性很强，具有很高的发病率以及死亡率。鸡只患病后，常常出现无法正常呼吸、严重下痢以及神经症状，对其进行剖检，可以看到病鸡消化道内存在呈弥漫性的溃疡或者点状出血。当前，主要结合临床症状以及病理变化对该病进行初步诊断，要想对该病进行确诊，还需依靠实验室诊断工作。 1 实验室诊断 1.1病毒分离病鸡表现出相关临床症状以后，其绝大多数器官以及分泌物中已经存在大量的病毒。病鸡脑、肺、脾以及呼吸道分泌物均可作为病毒分离的材料。如果死鸡已经发生了腐败，应当从骨髓分离病毒。在实际诊断过程中，最好采用接种孵化9-10天的鸡胚来分离病毒。在无菌条件下提取病料，采用生理盐水将病料稀释10倍或者20倍制为悬浮液，采用离心机离心后取上清液，加入300-500IU/ml的青霉素或者100-300μg/ml的链霉素，接着在0-4℃的环境中放置4h或者在37℃的环境中放置1h。提取0.1ml上述清液并将其接种于鸡胚尿囊腔中。如果病毒为强毒株，仅仅2-3天即可将鸡胚杀死；如果病毒为弱毒株，通常需要4-6天来杀死鸡胚。每天需要对鸡胚进行检查，在此过程中一旦发现死亡，需要立即收集尿囊液以开展细菌检查、血凝试验以及血凝抑制试验。为了

加快诊断的速度，也可以在鸡胚死亡之前，采用注射器将尿液吸出以开展检查工作，接着将鸡胚放入温箱进行孵化，通常接种36h后即可检测出血凝素。 1.2 血凝抑制试验如果抗鸡新城疫血清能够对可疑病毒对红细胞所产生的凝集作用进行有效抑制，即可将该病毒判定为鸡新城疫病毒[1]。另外，可以通过鸡新城疫病毒判断病愈鸡血清内是否存在能够对红细胞凝集进行抑制的抗体，从而诊断出病鸡是否感染了新城疫。如果可疑病鸡其血清能够对新城疫病毒对血红细胞的凝集作用进行有效抑制，即可确定该鸡曾经患有新城疫。通常情况下，对于急性病鸡，在其死亡之前血液中往往不存在抗体，如果病程能够达到5-6天，病鸡血液中级存在血凝抑制抗体；如果病程超过了10天，其抗体效价甚至可以达到1：1280。 1.3 血清中和试验血清中和试验就是采用已知血清来对可疑病毒进行鉴定，或者采用病毒来检测血清内是否存在特性抗体，进而确定鸡只是否感染果新城疫。将定量的待检病毒或者已知病毒加入到及新城疫的免疫血清内或者待检血清内，将其混合后向发育鸡胚或者存在易感性的鸡进行注射，在此过程中采用不加血清的病毒作为对照。如果注射了血清以及病毒混合材料的鸡胚或者鸡不存在死亡现象，但是对照鸡只已经死亡，

新城疫抗体水平检测

新城疫的血凝和血凝抑制试验高若开一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法; 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素,用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断; 二、实验内容 1.血凝试验HA 检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验HI 检测新城疫抗体三、实验原理 1.血凝试验HA 原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝HA,也称直接血凝反应; 2.血凝抑制试验HI 原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触;这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制HI 反应,也称血凝抑制反应; 四、实验材料抗体病毒颗粒红细胞

离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版5块、微量移液器20-100微升可调、吸液尖若干、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水; 五、实验步骤一抗凝剂的配制将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用;1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液; 二10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞毫升; 2、1500转离心5分钟,吸弃上清液; 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次,前两次5分钟,后一次10分钟; 4、吸弃上清液,用吸量管吸取红细胞,配制成10%红细胞悬液; 5、2-6摄氏度储存,备用; 三血凝试验HA 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释,在第1孔内加入50ul病毒抗原,然后依次倍比稀释至第11孔,最后弃50ul; 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀,后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定血凝效价测定结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底,即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底,当边缘不整齐而稍向孔底集中,即75％凝集； 3、＋＋：红细胞形成一个环状,四周有凝集块,即50％凝集； 4、＋：红细胞于孔底形成圆团,边缘不够光滑,四周稍有凝集块,即25％凝集； 5、－：红细胞于孔底形成圆团,边缘光滑整齐,即无凝集; 血凝价的判定以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价,即为一个凝集单位;上表看出,该新城疫病毒液的血凝价为1:32,则l:32为1个血凝单位,1:16、l:8分别为2、4个血凝单位,或将32/4=8,即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位; 四4个血凝单位抗原的配制根据判定结果,吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释,即为4个血凝单位的标准抗原;

实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法

鸡新城疫血凝(HA)与血凝抑制(HI）抗体水平测定法１.本次实验得目得与要求掌握鸡新城疫血凝（ＨA)与血凝抑制（HI）抗体水平测定法,以便检查疫苗使用效果与制定合理免疫程序. ２.实验内容或原理某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等）能够与动物得红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HＡ）。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验（HI)。３．需用得仪器或试剂等动物健康成鸡2-5只,被检鸡１5—2５只。器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0．02５mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。药剂（１)浓缩抗原;(２)生理盐水或磷酸缓冲盐水(PＢS)；(3）Alsｅver细胞保存液；(4)红细胞悬液;（5)待检血清 4。实验步骤（１)发现与鉴定病毒：鸡新城疫与禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡得红细胞，又能被特异性得已知免疫血清抑制其凝集反应,即可鉴定此病毒。 (２）诊断病毒性疾病:如取同一发病得动物早期与恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验,如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义. (3)免疫机体抗体效价得测定：３、鸡新城疫(ND)得HA与HI （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUｒａ系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ②０、7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血,放入含有抗凝剂得灭菌试管(按每毫升血加入３、8%灭菌柠檬酸钠０、２毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内（保存液2份，血液1份）于4℃冰箱内可保存两周。红细胞悬液得配制：将血液注入离心管中,经３0０0转／分钟，离心５－10分钟,用吸管吸去上清液与红细胞上层得白细胞薄膜，将沉淀得红细胞加稀释液(生理盐水）洗涤。再用离心机3000转/分钟离心５—1０分钟，弃上清,再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次,将最后一次离心后得红细胞泥,按0、7%得稀释度加入稀释液（0、7毫升红细胞泥加９9、3毫升稀释液）。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过得干燥注射器采血,注入洁净干燥试管内(微

某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告_0

某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告_0 某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告核心提示:新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性和毁灭性的传染病。新城疫流行于世界各国，在150多个国家和地区都有此病发生。随着高度集约化养鸡业的发展，新城疫的防治也备受关注。近年来，新城疫的新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性和毁灭性的传染病。新城疫流行于世界各国，在150多个国家和地区都有此病发生。随着高度集约化养鸡业的发展，新城疫的防治也备受关注。近年来，新城疫的流行趋势发生了变化，以发病率低、临床症状不明显、病理变化不典型、死亡率低、蛋鸡产蛋量下降为特征的非典型新城疫，使得新城疫的防治变得更加复杂和棘手。新城疫目前仍然是严重危害我国养禽业的主要疾病之一，造成的经济损失十分巨大。除了大量死亡的直接损失外，还因幸存者生长发育受阻、饲料转化率低、产蛋量下降、受精率和孵化率降低以及封锁隔离等措施花费的大量人力和财力所造成的间接经济损失。由于机体免疫机能状况等很多因素的综合影响，使新城疫疫苗接种效果不佳，甚至免疫失败，新城疫的发病次数仍然很高。再者，由于近十多年来养鸡业的蓬勃发展，使鸡场的数量巨增，星罗棋布，使疫病种类更加复杂化、病情程度更加严重。为了更加有效地防治鸡新城疫，疫苗免疫后鸡新城疫抗体效价监测，常作为免疫效果评价的重要依据。检测家禽血清中鸡新城疫抗体的方法有很多种，包括单向辐射免疫扩散试验、单向辐射溶血试验、琼脂扩散试验、鸡胚中和试验及蚀斑中和试验、酶联免疫吸附试验以及血凝抑制试验(HI)等，但常采用血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI)来定量测定鸡新城疫抗体。ELISA可以半自动化操作，其技术已经普及，并且ELISA与HI有很好的相关性。迄今为止，鸡红细胞血凝抑制试验仍不失为一种快速准确的试验手段。

鸡新城疫抗体滴度的检测

鸡新城疫抗体滴度的检测（红血球凝集抑制法） 1 红细胞血凝与血凝抑制的原理红细胞凝集的实质是红细胞膜上的特异性抗原(凝集原，agglutinogen)和相应抗体(凝集素，agglutinin)发生抗原抗体反应。当病毒的悬液中先加入特异性抗原，且这种抗原的量足以封闭病毒颗粒或其凝集素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其凝集素直接接触，这是红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制，也称为血凝抑制反应。新城疫病毒属于副黏病毒属，是最主要的红细胞凝集性病毒，具有神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA)，可使红细胞凝集。 2 实验材料鸡新城疫抗原(NDV，南京天邦生物科技有限公司)；生理盐水；肝素钠；96 孔V 型微量血凝板；微量移液枪 3 红细胞凝集 3.1 1%鸡红细胞悬液的制备取无免疫过的成年公鸡，翅静脉采血10~15 mL，肝素抗凝，2000 r/min 离心10 min，弃上清，注意要将血细胞泥表面的一层薄膜洗净。然后用血细胞泥5~10 倍的PBS洗涤，2000 r/min 离心10 min，弃上清，如此反复洗涤 3 次至上清液透明，弃上清液后得到红细胞泥。再用PBS配成1%鸡红细胞悬液（红细胞泥：PBS=1ml:100ml）。4℃保存，不超过5d。 3.2 红细胞凝集(4 单位抗原的滴定)

在96 孔微量血凝板上，从左到右每空各加50 μL 生理盐水，另加一排作为重复。再向每排的第 1 孔加入50 μL 新城疫抗原，依次向后倍比稀释直至第11 孔，第12 孔作为对照，无抗原液。然后向每孔加入1%鸡红细胞悬液50 μL，将微量板振荡混匀20~30 次（于微型振荡器上震荡1 m in），置于37℃温箱感作30 min 后每5 min 观察一次，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。结果观察：将反应板倾斜45 度角，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动着为沉淀，表明红细胞未被凝集或不完全被病毒凝集；如果红细胞铺平孔底，凝集成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，表明红细胞被病毒所凝集。以100%凝集的抗原最大稀释孔位该抗原的血凝价，即1 个凝集单位；从该孔向前移2 孔的抗原稀释度作为4 单位抗原的稀释度。抗原应稀释的倍数=血凝滴度÷4 (若血凝价为26，病毒抗原应稀释倍数为24（16），即16ml生理盐水+1ml抗原即为4个单位血凝单位的病毒抗原)。 4 红细胞凝集抑制在96 孔微量血凝板上，从左到右每孔中各加50 μL 生理盐水，再向每排的第 1 孔加入50 μL 待测血清，依次向后倍比稀释直到第

RT-PCR鉴别鸡新城疫病毒强弱毒株检测方法的建立

RT-PCR 鉴别鸡新城疫病毒强弱毒株检测方法的建立摘要：本文探究了RT-PCR 技术在鸡新城疫强弱毒株检测中的应用。通过优化RNA 抽提、逆转录反应和PCR 扩增条件，建立了一种有效的RT- PCR 检测方法，可快速鉴别新城疫病毒强弱毒株。实验结果表明，该方法具有高灵敏度和特异性，能够在基因水平对新城疫病毒进行准确鉴别。关键词：RT-PCR，新城疫病毒，强弱毒株，鉴别一、引言新城疫是一种由新城疫病毒引起的急性传染病，严重影响了家禽养殖业的发展。目前，防治新城疫的有效措施之一是根据病毒的毒力进行分级，以便采取相应的控制措施。因此，快速鉴别新城疫病毒强弱毒株对于精确防控新城疫具有重要作用。传统的新城疫病毒鉴别方法主要是依靠细胞培养、血清学等技术。但这些方法消耗时间长、操作繁琐，且存在滞后性和灵敏度低等不足之处。最近几年，随着分子生物学技术的发展，RT-PCR 技术具有快速、准确、高效、灵敏的特点，在新城疫病毒的检测鉴别中得到广泛应用。本文旨在探究利用RT-PCR 技术建立新城疫病毒强弱毒株检测方法，以提高疾病的诊断速度和准确度，为家禽养殖业的健康发展提供保障。二、材料与方法 2.1材料（1）新城疫病毒强毒株和弱毒株；（2）RNA 纯化试剂盒、逆转录试剂盒、PCR 试剂盒；

（3）双向引物（强毒株：F 5'-TGGCCCACAGCTTATCGCGC-3'，R 5'-CGCGTAACCGCGACCCAACT-3'；弱毒株：F 5'- CGCCGAGCTCGTCCTTCAAG-3'，R 5'-CGACGGACCTCAGGGAACTG-3'）。 2.2方法 2.2.1RNA 抽提首先，提取新城疫病毒强毒株和弱毒株的RNA。在无菌条件下，采用RNA 纯化试剂盒提取病毒RNA，按照说明书进行操作。 2.2.2逆转录反应利用逆转录试剂盒对RNA 进行逆转录反应，合成cDNA 模板。将反应体系中的RNA 与随机核酸引物（6 nt）在65℃下混合，退火后加入反转录酶和反转录缓冲液，进行反转录反应。反应条件为：25℃ 5 min，42℃ 60 min，70℃ 15 min。 2.2.3PCR 扩增设计双向特异性引物，PCR 扩增新城疫病毒的基因。按照下列方法进行PCR 扩增：（1）PCR 反应条件：94℃ 5 min，94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 60 s，共35 个循环；72℃ 10 min；4℃保存。（2）扩增体系：模板DNA 1 μL 10×Taq 缓冲液2.5 μL 2 mM dNTPs 混合液2 μL 正向引物F（20 pmol）1 μL 反向引物R（20 pmol）1 μL Taq 聚合酶（5 U/μL）0.2 μL

雏鸡的免疫接种实训报告

雏鸡的免疫接种实训报告简介本实训报告旨在探讨雏鸡的免疫接种相关知识和实践，以提高雏鸡的免疫力和健康水平。通过合理的免疫接种计划，我们可以预防和控制多种疾病的发生，保证雏鸡健康生长。免疫接种的意义免疫接种是一种人工诱导机体产生免疫力的方法，通过给予特定疫苗或抗原，激活机体的免疫系统，使其产生特异性免疫应答。免疫接种能够预防和控制多种传染性疾病的发生，有效降低患病率和病死率。免疫原理免疫接种通过模拟自然感染，引起机体的免疫应答。疫苗中含有病原微生物或其产生的抗原，激活机体的免疫细胞和分子，促使机体产生针对该病原体的免疫反应。这种人工诱导的免疫反应可以让机体形成免疫记忆，使得在再次遭受该病原体侵袭时，机体能够迅速产生特异性的免疫应答，防止疾病的发生和进展。免疫接种的重要性免疫接种对于雏鸡的健康成长至关重要。通过免疫接种，可以预防和控制多种致病微生物的感染，降低鸡群患病率，保护鸡群健康，提高养殖效益。免疫接种还可以减少抗生素的使用，降低抗生素抗性的风险，符合绿色健康养殖的要求。雏鸡免疫接种计划主要疫苗种类 1.新城疫疫苗：可以保护雏鸡免受新城疫病毒的感染。根据疫情和养殖要求，可选择不同类型的新城疫疫苗进行接种。 2.禽流感疫苗：可预防禽流感病毒的感染，保护雏鸡的健康和生存。 3.栋笼病疫苗：可以预防和控制栋笼病的发生，减轻疾病对雏鸡的影响。

4.传染性法氏囊炎疫苗：可以提高雏鸡的抵抗力，预防和控制传染性法氏囊炎的发生。 5.传染性鼻炎疫苗：可以保护雏鸡免受传染性鼻炎病毒的感染。免疫接种计划为了确保免疫接种的效果和养殖成本的合理控制，制定科学合理的免疫接种计划非常重要。 1. 初次免疫 •鸡蛋注射：在孵化过程中通过鸡蛋注射途径接种新城疫疫苗，可以提前建立雏鸡的免疫保护。 •雏鸡口服：在雏鸡孵化后2-3天内，通过口服接种方式给予新城疫疫苗，进一步加强免疫效果。 2. 强化免疫 •在初次免疫后，雏鸡一般需要在特定时间段内接种强化疫苗，以维持免疫保护的效果。 •根据不同疫苗的要求和养殖实际情况，制定合理的强化免疫计划，确保免疫效果的持续性和稳定性。 3. 补充免疫 •随着雏鸡的生长，免疫效果会逐渐减弱，需要进行补充免疫。 •根据养殖实际和临床需要，选择合适的时间点和疫苗类型进行补充免疫，加强对病原微生物的保护。免疫接种操作规范接种前准备 1.准备好免疫疫苗和免疫器具，确保其质量和有效期。 2.对接种场所进行彻底清洁和消毒，保证接种环境的洁净和卫生。 3.对接种器具进行高温高压灭菌处理，杜绝交叉感染的风险。 4.设置合适的接种顺序和流程，确保接种操作的科学性和高效性。