鸡新城疫抗体水平测定

2017年安徽省职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”项目文件(2017年安徽省职业院校技能大赛高职组赛事筹备组制,2017年1月)2017年安徽省职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”项目竞赛规程

一、竞赛项目名称

鸡新城疫抗体水平测定

二、竞赛目的

通过竞赛,检验参赛选手在真实的工作环境与条件下进行新城疫抗体测定操作能力、以及参赛队的团队协作能力、计划组织能力等综合职业素质。引导安徽省高等职业院校动物科学与技术、动物防疫与检疫等专业的教育教学改革,促进工学结合人才培养模式改革与创新,培养可持续发展、满足企业需求的“高素质、技能型”动物疫病检测岗位技术人才。

三、竞赛方式和内容

(一)竞赛方式

1.竞赛以团队方式进行,每支代表队参赛学生限报2人,须为2017年同校在籍高职学生,不分性别,不分年级,每代表队报指导教师1-2名,在指导教师中指定领队1名。

2.竞赛不设理论考试,只对操作技能进行综合考核。实际操作由2名参赛队员共同完成。要求选手根据竞赛题目的具体要求,以现场操作的方式,按照正确的操作步骤,在规定时间内完成鸡新城疫抗体水平测定的操作。

(二)竞赛内容

竞赛项目为鸡新城疫抗体水平测定(微量法)。测定方法参考《新城疫诊断技术》(GB/T16550—2008)标准,具体分为6个部分。

(1)试验器材准备按照操作规程进行试验器材的准备,并进行标识,合理摆放。

(2)配制1%鸡红细胞悬液按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液。

(3)血凝试验按照操作规程使用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原并充分混匀和递倍稀释,添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡和感作,正确判定出1个血凝单位。

(4)配制四单位病毒根据HA试验测定的新城疫标准抗原的血凝效价,按照操作规程配制四单位病毒。

(5)血凝抑制试验按照操作规程进行被检血清的血凝抑制试验操作,并设新城疫标准阳性血清对照、阳性对照。

(6)抗体滴度报告按照操作规程正确读数,并完成报告单填写。

2)考核时间

考核时间为180分钟。

(三)竞赛成果文件

竞赛成果文件为各参赛队提交的报告单和裁判的现场记录。

四、竞赛场地要求与设施

(一)竞赛场地

竞赛场地在芜湖职业技术学院南校区实训楼一楼生物工程学院实训中心进行。(二)技能比赛设备及用具(每2人为一单元,共用1套)

1.器材或设备

2.试剂及辅料

生理盐水250ml、3.8%柠檬酸钠溶液20ml、新城疫标准抗原(批号)、被检血清(编号)、新城疫标准阳性血清(批号)、新城疫标准阴性血清(批号);75%酒精棉球若干、标签纸若干、实验报告单1张。

3.实验动物

非免疫公鸡1只。

五、竞赛规则

1.参赛学生必须持本人身份证和参赛证参加比赛。竞赛所用材料、仪器、工具均由承办单位提供,各参赛队不得带入任何参考资料进入赛场。

2.参赛选手出场顺序、位置、实验动物由抽签决定。不得擅自变更、调整。

3.参赛选手提前15分钟检录进入赛场,并按指定比赛号参加比赛。迟到15分钟者,取消比赛资格;比赛开始15分钟后,选手方可离开赛场。

4.选手就位,比赛时间到方可开始操作。选手应在竞赛试卷或实物标签上填写比赛号。试卷(或实物标签)上不得有任何暗示选手身份的记号和符号,否则取消成绩。

5.操作技能竞赛时间为180分钟,连续进行。选手在竞赛过程中不得擅自离开赛场,如有特殊情况,需经裁判同意。选手若需休息、饮水或去洗手间等,耗用时间计算在比赛时间内。

6.竞赛过程中,参赛选手须严格遵守相关操作规程,确保人身及设备安全,并接受裁判的监督和警示;若选手因个人因素造成人身安全事故或导致器材故障,裁判组有权中止比赛;若因非选手个人因素造成器材故障,由裁判组视具体情况做出裁决(暂停比赛计时或及时更换器材)。

7.参赛选手若提前结束竞赛,应向裁判员举手示意,比赛终止时间由裁判员记录,参赛队结束比赛后不得再进行任何操作。

8.竞赛在规定时间结束,参赛选手应立即停止任何操作,不得以任何理由拖延竞赛时间。

9.参赛选手操作完成后,由选手与裁判一起在抗体滴度报告单上签名确认,方可离开赛场。

10.赛题非公开部分,所有有关专家和裁判将签订保密协议,严守保密纪律。

六、竞赛时间:本项目竞赛定于2017年3月12日报到,13、14日两天比赛。

七、成绩评定方法及奖项设定

(一)成绩评定方法

操作技能考核采用百分制计分,按总分对参赛选手进行排名。操作技能由该项目裁判员统一评分,考核要点与分值如下:

(二)奖项设定

1.竞赛名次按照得分高低排序。当总分相同时,实操项目用时少者名次靠前。

2.奖项由2017年安徽省职业院校技能大赛组委会统一设置,每位获奖选手和指导教师均可获得证书。

八、申诉与仲裁

1.申诉

(1)参赛队对不符合竞赛规定的设备、工具、软件,有失公正的检测、评判、奖励,以及对工作人员的违规行为等,均可提出申诉。

(2)申诉时,应递交由参赛队队员、领队亲笔签字的书面报告,报告应对申诉事件的现象、发生的时间、涉及的人员、申诉依据与理由等进行充分、实事求是的叙述。事实依据不充分、仅凭主观臆断的申诉不予受理。

(3)申诉时效:本轮次竞赛结束后1小时内提出,超过时效将不予受理申诉。

(4)申诉处理:赛场专设仲裁工作组受理申诉,收到申诉报告之后,根据申诉事由进行审查,6小时内书面通知申诉方,告知申诉处理结果。申诉人不得无故拒不接受处理结果,不允许采取过激行为刁难、攻击工作人员,否则视为放弃申诉。

2.仲裁

(1)组委会下设仲裁工作组,负责受理大赛中出现的所有申诉并进行仲裁,以保证竞赛的顺利进行和竞赛结果公平、公正。

(2)仲裁工作组的裁决为最终裁决,参赛队不得因申诉或对处理意见不服而停止比赛或滋事,否则按弃权处理。

2017年安徽省职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”项目技术规范

一、竞赛要求

各参赛队在竞赛过程中,都应遵守赛场纪律,公平竞赛,杜绝舞弊。遵守操作规程,安全、文明参赛。自觉维护赛场秩序,不指责、不谩骂裁判人员和工作人员,理性申诉。着装规范整洁,爱护设备,保持工作环境清洁有序。

二、竞赛环境

竞赛场地在芜湖职业技术学院南校区实训楼一楼生物工程学院实训中心进行,要求环境条件为20~25℃。

三、竞赛技术规范

竞赛项目以国家职业标准《动物疫病防治员》(高级)规定的技能要求为基础,以中华人民共和国国家标准(GB/T16550—2008)“新城疫诊断技术”为依据,操作规范与要求参考(GB/T16550—2008)的第5(血凝试验)和第6(血凝抑制试验)两个部分。

四、竞赛技术平台

1.器材或设备

2.试剂及辅料

生理盐水250ml、3.8%柠檬酸钠溶液20ml、新城疫标准抗原(批号)、被检血清(编号)、新城疫标准阳性血清(批号)、新城疫标准阴性血清(批号);75%酒精棉球若干、标签纸若干、实验报告单1张。

3. 实验动物

非免疫公鸡1只。

2017年安徽省职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”项目竞赛须知

一、参赛队须知

1.参赛队名称:统一使用学校名称,不使用地区代表队或其他组织、团体名称。

2.参赛队组成:参赛选手为2017年同校在籍高职学生,不分性别、不分年级。每代表队参赛学生限报2人。

3.每个参赛队配1-2名指导教师。在指导教师中指定领队1名,负责本参赛队的参赛组织和与大赛组织机构的联络。

4.参赛队所有人员在竞赛期间未经组委会批准,不得接受任何与竞赛内容相关的采访,不得将竞赛的相关情况及资料私自公开。

二、指导教师须知

1.严格遵守赛场的规章制度,服从裁判,文明竞赛,禁止将通讯工具、自编资料带入赛场。

2.允许每个参赛队指导教师在规定的时段内进入赛场指定地点现场观摩,但不得授意或干扰参赛选手比赛。

3.在竞赛过程中,指导教师应严格遵守大赛的统一安排,准时进场、准时离场,不能借故拖延,须在规定的范围内活动。

三、参赛选手须知

1.参赛选手须认真填写报名表内容,提供个人身份证明,禁止将通讯工具、资料带入赛场。弄虚作假者,将取消比赛资格和竞赛成绩。

2.参赛选手凭大赛组委会颁发的参赛证和有效身份证件参加竞赛及相关活动,参赛队按照赛程安排和规定时间前往指定地点。

3.参赛选手进入赛场前抽取赛位号,并对抽签结果签字确认。

4.参赛选手按规定时间进入竞赛场地,按统一指令开始竞赛。

5.赛题以任务书的形式发放。参赛队根据任务书要求的程序和时间安排,完成竞赛任务。

6.竞赛时间到后,选手不得再进行任何与竞赛有关的操作。参赛队若提前结束比赛,应向裁判员举手示意,裁判员记录比赛完成时间。选手操作完成后,在抗体滴度报告单上签名确认。

7.参赛选手须严格遵守赛场规章制度,服从裁判,文明竞赛。有作弊行为的,该项成绩为0分;如有不服从裁判、扰乱赛场秩序等不文明行为,按照相关规定扣减分数,情节严重的取消比赛资格和竞赛成绩。

四、赛场管理须知

1. 选手凭有效证件,按时参加检录和竞赛,如不能按时参赛以自动弃权处理。开赛15分钟后不准入场,竞赛过程中未经允许不得擅自离开赛场。

2. 选手进入赛场后到指定参赛地点准备竞赛,选手在开赛信号发出后才能进行技能竞赛。

3. 竞赛过程中,选手要严格按操作规程操作,若违反操作规程,取消竞赛资格。

4. 选手提问,经允许后,可以提问不清楚的问题,裁判人员须正面回答。

5. 竞赛过程中,选手休息、饮水或去洗手间等所用时间,一律计算在操作时间内,饮用水由赛场统一准备。

6. 竞赛终了信号发出后,须听从裁判员指挥,将选手证放在指定位置后,待裁判允许后方可离开赛场。如果选手提前结束竞赛,应向裁判员示意,竞赛终止时间由裁判员记录在案。

7. 赛务人员必须统一佩戴由大赛组委会签发的相应证件,着装整齐。赛场除现场裁判、赛场配备的工作人员以外,其他人员未经允许不得进入赛场。新闻媒体等进入赛场必须经过大赛组委会允许,并且听从现场工作人员的安排和管理,不能影响竞赛进行。

8. 各参赛队的领队、指导教师未经允许不得进入竞赛观摩区,经允许进入的,应遵守观摩规定和维护观摩秩序,若影响别人观摩,工作人员有权将其请出,并给予通报批评。

五、赛场纪律

1.选手不得在竞赛现场内外吸烟,不听劝阻者给予通报批评或清退比赛现场,造成严重后果的将依法处理。

2.未经允许不得使用和移动竞赛场内的任何设施设备,工具使用后放回原处。

3.选手在竞赛中必须遵守赛场的各项规章制度和操作规程,安全、合理的使用各种设施设备和工具。

4.选手参加实际操作竞赛前,应由参赛学校进行安全教育。

5.参赛选手不得触动非竞赛用仪器设备,对竞赛仪器设备造成损坏,由参赛学校承担赔偿责任。

新城疫抗体水平检测

新城疫抗体水平检测文稿归稿存档编号:[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素,用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验(HA )原理:某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝(HA ),也称直接血凝反应。 2.血凝抑制试验(HI )原理:当在病毒的悬液中加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制(HI )反应,也称血凝抑制反应。 病毒颗粒 红细胞

四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版(5块)、微量移液器(20-100微升可调)、吸液尖(若干)、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 (一)抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 (二)10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟,吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次,前两次5分钟,后一次10分钟。 4、吸弃上清液,用吸量管吸取红细胞,配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存,备用。 (三)血凝试验(HA) 1.在血凝板上第一排的1-12孔内各加入50ul 生理盐水 抗体 抗原

2023年内蒙古自治区鸡新城疫抗体水平测定赛项规程

2023年内蒙古自治区鸡新城疫抗体水平测定 赛项规程 一、赛事目的 为进一步促进内蒙古自治区鸡新城疫情防控工作,增强居民的疫情防控意识,提高疫抗体水平,特举办此次疫抗体水平测定赛项,以检测居民的疫情抗体水平,为疫情防控提供科学依据。 二、赛事时间及地点 1.时间:2023年6月1日至6月30日 2.地点:内蒙古自治区鸡新城各社区卫生服务中心及指定的医疗机构 三、参赛对象 1.内蒙古自治区鸡新城区域内的居民 2.年龄不限 四、测定项目

1.抗体测定:参赛者需前往指定的医疗机构进行疫情抗体水平测定,具体项目包括新型冠状病毒、流感病毒等抗体水平测定。 2.其他项目:参赛者还需进行身体健康状况的评估,包括血压、血糖等项目。 五、报名流程 1.报名时间:2023年5月1日至5月15日 2.报名方式:参赛者需携带有效身份证件及健康码前往指定的社区卫生服务中心进行报名。 六、比赛规则 1.测定时间:参赛者需在规定的时间内进行疫抗体水平测定。 2.测定结果:参赛者需按时到指定的医疗机构领取测定结果,结果将会在规定的时间内公布。 3.结果评定:测定结果将根据参赛者的抗体水平以及身体健康状况进行评定,最终获奖名单将由专业评审团评定。

4.奖项设置:设立优秀奖、进步奖、参与奖等奖项,并给予获奖 者相应的奖励。 七、参赛注意事项 1.参赛者需按时参加疫抗体水平测定,若无故缺席将取消参赛资格。 2.参赛者需线上预约测定时间,以免发生人群聚集情况。 3.参赛者需保持良好的体育表现,遵守比赛规则。 八、其他 1.本赛项由内蒙古自治区鸡新城卫生健康委员会主办,指定的医 疗机构协办。 2.参赛者需遵守赛项规定,若有违规行为将取消参赛资格并承担 相应后果。 3.本赛项最终解释权归内蒙古自治区鸡新城卫生健康委员会所有。 九、赛事总结

鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现

鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现 1、将样本做去皮和去脂处理,并用均质器均质样本,然后称取适量的均质物至离心管内。 2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂,振荡混匀后孵育半小时。 3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂,并振荡混匀。 4、离心5分钟,取上层有机相至离心管内,再用氮气吹干。 5、用净化剂溶解干燥物,加入试剂D,离心2分钟后待检。 一、鸡新城疫抗体检测步骤 1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理,再用均质器均质样本,然后称取3±0.05克均质物至15毫升的离心管内。 2、依次加入4毫升蒸馏水、0.5毫升试剂A以及0.6毫升衍生化试剂,并振荡混匀,于65°C水浴中孵育半小时。 3、依次加入1毫升试剂B、0.4毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂,然后振荡混匀。

4、在室温下(20-25°C)以4000r/分钟的速度离心5分钟,取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内,在50-60°C水浴中用氮气(或空气吹干仪)吹干。 5、取1毫升净化剂溶解干燥物,再加入0.5毫升试剂D振荡混匀,在室温下(20-25°C)以4000r/分钟的速度离心2分钟,最后待检。 6、若使用全血标本进行检测,标本的移动速度可能较慢,必要时可在加样1分钟后,向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液,以促进标本移动。

二、鸡新城疫的症状表现 1、急性型 (1)病鸡呼吸困难,会发出“咕噜”的特殊怪声。 (2)病鸡的嘴、鼻中有大量黏液,产蛋量下降。 (3)病鸡出现下痢,其粪便的颜色为黄白色或绿色,有麻痹和神经症状。

2、最急性型 此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上,发病时通常不会表现出任何症状,但病发后小鸡会快速死亡。 3、亚急性或慢性型

新城疫抗体检测

新城疫的抗体检测 某些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力,称为病毒的血凝,利用这种特性设计的实验称血球凝集试验,以此来推断被检材料中有无病毒存在,是非特异性的,但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制,即血球凝集抑制实验(HI),通过血凝与血凝抑制试验,可用已知血清来鉴定未知病毒,也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。一目的意义 1免疫监测(1)免疫效果评价(2)免疫时机确定 2诊断疾病(根据有无抗体或抗体的高低) 3流行病学调查 二试验仪器与试剂 1试验仪器离心机、离心管两支、50ml量筒一个、V型微量反应板、微量加样器(移液器)、塑料吸头(黄色)若干、1ml吸管1支、胶头滴管两支、微量振荡器、 电热恒温培养箱、托盘天平。 2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5、H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。 三方法 1病毒的血凝试验 1.1 3.8%柠檬酸钠抗凝剂的配制:用托盘天平称取柠檬酸钠3.8克溶于100ml蒸馏水或纯净水中,摇匀使其充分溶解即可,有条件的可121℃高压蒸汽灭菌20分钟,冷却至室温后置4℃冰箱中保存备用。 1.2 1%鸡红细胞制备过程:事先用5ml(或10ml)的注射器吸入抗凝剂若干(其量为所需血量的1/5),从健康公鸡(未经新城疫疫苗注射)的心脏或翅下静脉采取2-4毫升血液,以2000转每分钟,离心5分钟,吸去上清液(注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净)。然后用生理盐水(用量为血细胞泥的5-10倍)洗红细胞,离心5分钟,弃去上清液,如此反复洗3-5次,直至上清液透明清亮为止,最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度,然后置4℃冰箱备用(一般可保存3天)。 1.3 红细胞凝集试验(血凝试验)操作方法(见表1): (1)取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板,用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水,每孔25微升,直至加到第十五孔(第一列12孔,第二列3孔)。 (2)取新城疫抗原液25微升加入第一孔中,充分混合后吸取25微升加入第二孔中,如此直至第14孔,混合后吸取25微升丢弃,第15孔不加病毒为对照。 (3)更换移液器前端的塑料吸头,每孔加已备的1%鸡红细胞液各25微升(注意从后往前加)。 (4)将反应板置微型震荡器上,振动混合1分钟,取下置37℃恒温箱中作用30分钟后开始观察结果,注意每五分钟观察一次,直至30分钟,判定并记录结果。 判定结果如下: ++++——红细胞全部凝集,均匀分布于孔底。 ++-------红细胞部分凝集,沉积于孔底呈小圆点状。 -——红细胞全部不凝集,沉积于孔底呈圆点状。 以使红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价。4单位病毒的确定,以上述血凝价除以4即为4单位病毒,如血凝价为1:128,则1:128的0.1ml中有一个凝集单位,4单位病毒为128/4=32,即1:32为4个凝集单位。

鸡新城疫抗体检测实验报告(一)

鸡新城疫抗体检测实验报告(一) 背景介绍 •鸡新城疫是一种常见的家禽传染病,严重影响鸡类养殖业。 •抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。 实验目的 •确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。 •提供可靠的数据支持,用于预防和控制鸡新城疫的传播。 实验设计 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •分为实验组和对照组,实验组注射疫苗,对照组不注射。 •定期进行血液检测,测量抗体水平。 实验步骤 1.收集血样。 2.提取血清。 3.使用特定抗体试剂盒进行检测。 4.测量光密度值,判断鸡新城疫抗体水平。 5.记录实验结果。

实验结果 •实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。 •实验组的鸡只无明显临床症状,对疫情具有稳定抵抗力。 •对照组鸡群出现多例感染病例,病死率较高。 结论与建议 •鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况,为预防和控制疫情提供重要依据。 •注射疫苗可以提高鸡只的免疫力,减少感染风险。 •鼓励养殖场加强抗体检测工作,及时发现病例并采取相应措施。 致所有鸡农:鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。本实验通过抗体检测方法,证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力,减少感染的风险。希望您能严格按照抗体检测规程,提高鸡只的免疫力,保障养殖业的稳定发展。 感谢您的关注与支持! 注意:本报告仅为实验结果总结,并非具体实验报告。具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。 实验方法 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。

•对照组的鸡只不注射疫苗。 •按照一定周期,定期采集血液样本。 数据分析 •对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。 •实验组的鸡只抗体水平明显升高,且持续稳定。 •对照组的鸡只抗体水平较低,易受感染。 结果讨论 •实验结果证明,注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。 •抗体检测是一种可靠的方法,可以快速判断鸡群的感染情况。 •实验结果也表明,饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。 结论 •鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。 •注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力,降低感染风险。 •饲养场应加强防疫管理,提供良好的养殖环境,以保障鸡只的健康与安全。

鸡新城疫抗体检测实验报告

鸡新城疫抗体检测实验报告 引言 本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测,以评估鸡群对该病毒的感染情况。通过收集血清样本并使用特定检测方法,我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。 实验设计 1. 样本采集 我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集,确保样本的代表性。采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。 2. 抗体检测方法 我们采用了酶联免疫吸附试验(ELISA)方法进行抗体检测。该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合,并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合,最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。 3. 阳性对照与阴性对照 为了验证实验结果的准确性,我们使用了阳性对照和阴性对照。阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本,而阴性对照为未感染的鸡样本。 实验结果 我们对100个样本进行了抗体检测,并将结果进行统计和分析。以下是实验结果的详细报告: 1. 鸡新城疫抗体检测结果 我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类:

•强阳性:抗体水平高于阈值的样本。 •弱阳性:抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。 •阴性:抗体水平低于阈值的样本。 2. 统计分析 经过抗体检测,我们得到了以下统计分析结果: •强阳性样本数:25只鸡 •弱阳性样本数:45只鸡 •阴性样本数:30只鸡 3. 结果解读 我们的实验结果表明,在100只鸡样本中,25只鸡的抗体水平高于阈值,可以确认为感染了鸡新城疫。另外,45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间,可能存在早期感染的迹象。剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值,说明它们未感染鸡新城疫。 结论与讨论 本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测,并得出了实验结果。结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高,25%的样本具有强阳性抗体水平。 我们认为,对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况,及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。此外,对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标,帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。 然而,本次实验存在一定的局限性。首先,样本数量相对较少,可能无法全面反映整个鸡群的感染情况。其次,我们仅采用了ELISA方法进行抗体检测,其他方法可能会得到不同的结果。因此,在今后的研究中,可以进一步扩大样本数量,并比较不同检测方法的准确性。 总体而言,本次实验对鸡新城疫抗体检测进行了全面的描述和分析,为鸡群健康管理提供了重要的参考和依据。鸡新城疫的预防和控制需要全面多方位的努力,希望本次实验结果能为相关工作提供一定的支持和指导。

鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施

鸡新城疫的流行病学临床症状检测方法与防控措施 鸡新城疫是由鸡新城疫病毒引起的一种高传染性、高致病性的家禽病。该病毒属于冠状病毒科,感染家禽后可导致急性呼吸道疾病和神经系统病变,造成严重经济损失,且可对人体健康造成威胁。 疫情流行病学 鸡新城疫最早于1930年在美国北卡罗来纳州发现,近年来全球范围内相继发生,且死亡率极高。该病毒可通过空气、食品、尿液、粪便、蛋等途径传播,且病毒在环境中可存活较长时间。受感染的鸡在短时间内就会发病,且疾病进展迅速,致病性极强。鸡新城疫的爆发对禽业产生了极大的影响,并且对人类健康存在一定威胁。 临床症状 感染过鸡新城疫病毒的鸡会出现多种症状,包括有以下几个方面: 1. 呼吸道症状:鸡在感染鸡新城疫病毒后,会表现出急性呼吸道症状,如喘息、打嗝等。 2. 消化系统症状:鸡接触到感染病毒时,很可能会出现食欲缺失、呕吐、腹泻等消化系统症状。 3. 中枢神经系统症状:该病毒亦可引起鸡的中枢神经系统损害,表现出急性麻痹、死亡等严重症状。 4. 眼部症状:感染鸡新城疫病毒后,鸡的眼睛可能会出现水肿、异样分泌物等症状。 检测方法 针对鸡新城疫的治疗方法并不多,因此必须尽早检测,以便及时采取各种防控措施。以下是常见的鸡新城疫检测方法: 1. 血清学检查:通过分离感染鸡新城疫病毒血清中的抗体或检测抗体水平变化,可以快速检测感染鸡新城疫病毒的鸡群。 2. 病灶检查:经过光学显微镜检查,可确定鸡是否感染鸡新城疫病毒。 3. 分子生物学检测:通过PCR等技术检测鸡群中病毒的核酸,可较准确的检测出感染鸡新城疫病毒的鸡只。 防控措施

为了控制鸡新城疫的传播,人们必须采取有效的防控措施,以减轻疫情带来的危害。以下是一些常见的防控措施: 1. 消毒:加强对鸡舍、设备、车辆等物品的消毒处理。 2. 隔离:对于检测到感染鸡新城疫病毒的鸡只及其周边鸡舍,必须进行隔离管理。 3. 疫苗接种:对于禽类疾病,接种疫苗是最有效的防治方法之一,可以有效地预防鸡新城疫病毒的传播。 4. 防疫检查:员工应当做好日常管理,进行扶 chicken 新城疫病检查,以及进行员工健康检查,及时发现疫情,防止病毒传播。 总结 鸡新城疫的流行病学和临床病症表现,以及其检测和防控措施,对于家禽农业的发展和人类健康的保护都具有极为重要的意义。通过加强对鸡新城疫的监测、预防和控制,我们将能够更好地保护家禽健康,维护生态平衡和人类健康。

新城疫抗体测定技能

新城疫抗体测定 (一)血凝试验(HA):取96孔板,按以下步骤操作: 1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul,第二排1-12孔加生理盐水50ul为红细胞对照(20分); 2、吸50ul病毒液于第一排第1孔,混匀后取50ul至第2孔,依次稀释至第12孔,弃去50ul,各孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1-2-12(25分)。 3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微型震荡器震荡2min混匀(25分)。 4、室温静置10-30分,观察结果(10分)。 5、结果判定:红细胞对照组红细胞完全沉降,以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数,作为病毒的血凝价,即HI效价,用2n表示。 结果判定:以出现完全凝集的抗原最大稀释度为该抗原的血凝滴度(20分)。 注意:由于新城疫病毒含有神经氨酸酶,它能破坏红细胞表面的血凝素受体,使凝集的病毒从红细胞上解脱下来,所以要及时观察结果。 (二)血凝抑制试验(HI):取一96孔板,按以下步骤操作: 1、4个单位抗原的制备:按HA试验测出的病毒血凝价乘4即为4个单位血凝素的稀释度(10分)。

2、待检血清的稀释:第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul,于第一排第1孔中加入50ul待检血清,反复吹吸3-5次混匀后,取50ul至第2孔混匀,吸取50ul至第3孔…,依次稀释至第12孔,弃去50ul,经倍比稀释,血清的稀释度为2-1-2-12(20分)。 3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul,微量震荡器震荡2min混匀(20分); 4、室温静置20min(5分); 5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul,微量震荡器震荡2min混匀混匀(15分)。 6、室温静置10--30分,观察结果(10分); 结果判定:以完全抑制红细胞凝集的最大稀释度为该血清的血凝抑制(HI)滴度(20分)。 鸡群HI滴度的高低在一定程度上反映了免疫保护水平的高低。鸡群HI滴度的高低在一定程度上反映了免疫保护水平的高低。HI滴度在1:24的鸡群保护率约为50%;在1:24以下的非免疫鸡群约为10%,免疫鸡群约为40% ;HI滴度在1:26-10的鸡群保护率达90%以上。若鸡群出现1:211或以上的HI滴度,说明鸡群已发生新城疫野毒的感染。

1-鸡新城疫抗体水平测定

附件1: 高职农林牧渔专业类鸡新城疫抗体水平测定赛项技能竞赛规程、评分标准及选手须知 一、竞赛内容 本项目为鸡新城疫抗体水平测定(微量法),测定方法按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准进行。 本赛项不设理论考试,只对技能操作进行综合考核,技能竞赛题为公开试题,见本赛项规程的主要技术规程及要求。 二、竞赛方式 本赛项为2人小组赛,以院校为单位组队参赛,不得跨校组队。 三、竞赛时量 比赛时间为3小时。比赛时由参赛队自行确定分工完成相关竞赛内容。 四、名次确定办法 本赛项满分100分,采用分项计分法。按总分由高到低排序,总分相同按完成时间先后排序,用时少者列前;若二项均相同,则按抗体滴度报告、西凝试验得分高低依次排序。 五、评分标准与评分细则 1.评分标准及分值 项目技能竞赛评分标准及分值见表1。 表1 项目技能竞赛评分标准及分值

2.评分细则 项目技能竞赛评分细则见表2。 表2 项目技能竞赛评分细则

六、赛点提供的设施设备仪器清单 仪器设备按《新城疫诊断技术》(GB/T16550-2008)标准要求配制,且均为常用仪器、设备与材料。本赛项所用的仪器、设备与材料见表3。

七、选手须知 (一)主要技术规程及要求 鸡新城疫抗体水平测定(微量法)按《新城疫抗体诊断技术》(GB/T16550-2008)标准进行,具体步骤及其分值如下:

(一)试验器材准备(占总成绩的8%) 按照操作规程进行器材准备,要求器材摆放有序,物品标识合理,桌面整洁等。 (二)配制1%鸡红细胞悬液(占总成绩的18%) 按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液,要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜等。 (三)血凝试验(占总成绩的20%) 按照操作规程,用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原,充分混匀,倍比稀释后,添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡混匀,正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果正确等。 (四)配制四单位病毒(占总成绩的10%) 根据血凝试验结果,按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确,稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 (五)血凝抑制试验(占总成绩的20%) 按照操作规程,对20个被检血清进行血凝抑制试验操作,并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照;正确读取抗体滴度结果,完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、结果判断正确等。 (六)抗体滴度报告(占总成绩的24%) 按照操作规程,正确读取抗体滴度结果,完成报告。要求抗体滴度报告方式正确、场地整洁、结果误差小等。 (二)选手注意事项 1.参赛选手必须持本人身份证或户口簿、学生证和参赛证参加比赛。 2.参赛选手不得穿戴有学校名称或有特殊标记的服装进入赛场。 3.参赛选手务必于赛前20 分钟到赛场,迟到15分钟以上按弃权处理,已检录入场的参赛选手未经允许,不得擅自离开。 4.不得携带手机等通讯工具,进入比赛现场。 5.参赛选手的工位号由抽签决定,不得擅自变更和调整。 6.到达比赛结束时间,选手应立即停止操作,提交相关比赛结果单,并完成现场清理等工作。提前结束比赛的选手应举手示意,由裁判员记录完成时间,选手在引导员的引领下到指定地点休息,不得在赛场及其附近逗留或喧哗。

鸡新城疫抗体(NDV-Ab)说明书

鸡新城疫抗体(NDV-Ab)说明书 鸡新城疫抗体(NDV-Ab)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定鸡血清,血浆及相关液体样本中新城疫抗体(NDV-Ab)的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体(NDV-Ab)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体(NDV-Ab),再与HRP标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的新城疫抗体(NDV-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体(NDV-Ab)浓度。 试剂盒组成: 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片(48)2片(96) 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存 标准品:1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求: 1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上

清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS (PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第 一、第二孔中分别加标 准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在

实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法 1.本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法,以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2.实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒,禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集,此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制,即为红细胞凝集抑制试验(HI)。 3.需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5只,被检鸡15-25只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂(1)浓缩抗原;(2)生理盐水或磷酸缓冲盐水(PBS);(3)Alsever细胞保存液;(4)红细胞悬液;(5)待检血清 4.实验步骤 (1)发现与鉴定病毒:鸡新城疫和禽流感病毒分离后,这些病毒能凝集鸡的红细胞,又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应,即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病:如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验,如抗体效价有4倍以上升高,即有诊断意义。 (3)免疫机体抗体效价的测定: 3.鸡新城疫(ND)的HA和HI (1)试验准备 ①抗原:一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原,进行试验。 ② 0.7%细胞悬浮液:由鸡翅静脉或心脏采血,放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8%灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内,迅速混匀。如当时不用,可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份,血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制:将血液注入离心管中,经3000转/分钟,离心5-10分钟,用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜,将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转/分钟离心5-10分钟,弃上清,再加稀释液洗涤,如此反复洗涤三次,将最后一次离心后的红细胞泥,按0.7%的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清:将被检鸡群编号登记,用消毒过的干燥注射器采血,注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血),在室温中静置或离心,待血清析出后使用。

鸡新城疫抗体水平测定

2017年安徽省职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”项目文件(2017年安徽省职业院校技能大赛高职组赛事筹备组制,2017年1月)2017年安徽省职业院校技能大赛高职组“鸡新城疫抗体水平测定”项目竞赛规程 一、竞赛项目名称 鸡新城疫抗体水平测定 二、竞赛目的 通过竞赛,检验参赛选手在真实的工作环境与条件下进行新城疫抗体测定操作能力、以及参赛队的团队协作能力、计划组织能力等综合职业素质。引导安徽省高等职业院校动物科学与技术、动物防疫与检疫等专业的教育教学改革,促进工学结合人才培养模式改革与创新,培养可持续发展、满足企业需求的“高素质、技能型”动物疫病检测岗位技术人才。 三、竞赛方式和内容 (一)竞赛方式 1.竞赛以团队方式进行,每支代表队参赛学生限报2人,须为2017年同校在籍高职学生,不分性别,不分年级,每代表队报指导教师1-2名,在指导教师中指定领队1名。 2.竞赛不设理论考试,只对操作技能进行综合考核。实际操作由2名参赛队员共同完成。要求选手根据竞赛题目的具体要求,以现场操作的方式,按照正确的操作步骤,在规定时间内完成鸡新城疫抗体水平测定的操作。 (二)竞赛内容 竞赛项目为鸡新城疫抗体水平测定(微量法)。测定方法参考《新城疫诊断技术》(GB/T16550—2008)标准,具体分为6个部分。 (1)试验器材准备按照操作规程进行试验器材的准备,并进行标识,合理摆放。 (2)配制1%鸡红细胞悬液按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液。 (3)血凝试验按照操作规程使用微量移液器在96孔V型血凝反应板滴加稀释液、新城疫标准抗原并充分混匀和递倍稀释,添加1%鸡红细胞悬液,充分振荡和感作,正确判定出1个血凝单位。 (4)配制四单位病毒根据HA试验测定的新城疫标准抗原的血凝效价,按照操作规程配制四单位病毒。 (5)血凝抑制试验按照操作规程进行被检血清的血凝抑制试验操作,并设新城疫标准阳性血清对照、阳性对照。 (6)抗体滴度报告按照操作规程正确读数,并完成报告单填写。 2)考核时间 考核时间为180分钟。 (三)竞赛成果文件

鸡新城疫抗体滴度的检测

鸡新城疫抗体滴度的检测 (红血球凝集抑制法) 1 红细胞血凝与血凝抑制的原理 红细胞凝集的实质是红细胞膜上的特异性抗原(凝集原,agglutinogen)和相应抗体(凝集素,agglutinin)发生抗原抗体反应。当病毒的悬液中先加入特异性抗原,且这种抗原的量足以封闭病毒颗粒或其凝集素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其凝集素直接接触,这是红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制,也称为血凝抑制反应。新城疫病毒属于副黏病毒属,是最主要的红细胞凝集性病毒,具有神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA),可使红细胞凝集。 2 实验材料 鸡新城疫抗原(NDV,南京天邦生物科技有限公司);生理盐水;肝素钠;96 孔V 型微量血凝板;微量移液枪 3 红细胞凝集 3.1 1%鸡红细胞悬液的制备 取无免疫过的成年公鸡,翅静脉采血10~15 mL,肝素抗凝,2000 r/min 离心10 min,弃上清,注意要将血细胞泥表面的一层薄膜洗净。然后用血细胞泥5~10 倍的PBS洗涤,2000 r/min 离心10 min,弃上清,如此反复洗涤 3 次至上清液透明,弃上清液后得到红细胞泥。再用PBS配成1%鸡红细胞悬液(红细胞泥:PBS=1ml:100ml)。4℃保存,不超过5d。 3.2 红细胞凝集(4 单位抗原的滴定)

在96 孔微量血凝板上,从左到右每空各加50 μL 生理盐水,另加一排作为重复。再向每排的第 1 孔加入50 μL 新城疫抗原,依次向后倍比稀释直至第11 孔,第12 孔作为对照,无抗原液。然后向每孔加入1%鸡红细胞悬液50 μL,将微量板振荡混匀20~30 次(于微型振荡器上震荡1 m in),置于37℃温箱感作30 min 后每5 min 观察一次,待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果观察:将反应板倾斜45 度角,沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动着为沉淀,表明红细胞未被凝集或不完全被病毒凝集;如果红细胞铺平孔底,凝集成均匀薄层,倾斜后红细胞不流动,表明红细胞被病毒所凝集。以100%凝集的抗原最大稀释孔位该抗原的血凝价,即1 个凝集单位;从该孔向前移2 孔的抗原稀释度作为4 单位抗原的稀释度。 抗原应稀释的倍数=血凝滴度÷4 (若血凝价为26,病毒抗原应稀释倍数为24(16),即16ml生理盐水+1ml抗原即为4个单位血凝单位的病毒抗原)。 4 红细胞凝集抑制 在96 孔微量血凝板上,从左到右每孔中各加50 μL 生理盐水,再向每排的第 1 孔加入50 μL 待测血清,依次向后倍比稀释直到第

新城疫抗体水平检测

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素,用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验(HA )原理:某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝(HA ),也称直接血凝反应。 2.血凝抑制试验(HI )原理:当在病毒的悬液中加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制(HI )反应,也称血凝抑制反应。 四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版(5块)、微量移液器(20-100 微升可调)、吸液尖(若干)、 抗体 病毒颗粒 红细胞

洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 (一)抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 (二)10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟,吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次,前两次5分钟,后一次10分钟。 4、吸弃上清液,用吸量管吸取红细胞,配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存,备用。 (三)血凝试验(HA) 1.在血凝板上第一排的1-12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释,在第1孔内加入50ul病毒抗原,然后依次倍比稀释至第11孔,最后弃50ul。 3.每孔加入1%鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀,后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定 血凝效价测定 结果判定标准 1、++++:红细胞呈细沙样均匀铺于孔底,即100%凝集; 2、+++:红细胞均匀铺于孔底,当边缘不整齐而稍向孔底集中,即75%凝集; 3、++:红细胞形成一个环状,四周有凝集块,即50%凝集; 4、+:红细胞于孔底形成圆团,边缘不够光滑,四周稍有凝集块,即25%凝集; 5、-:红细胞于孔底形成圆团,边缘光滑整齐,即无凝集。 血凝价的判定 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价,即为一个凝集单位。上表看出,该新城疫病毒液的血凝价为1:32,则l:32为1个血凝单位,1:16、l:8分别为2、4个血凝单位,或将32/4=8,即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。 (四)4个血凝单位抗原的配制 根据判定结果,吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释,即为4个血凝单位的标准抗原。 (五)血凝抑制试验

新城疫抗体水平检测

新城疫抗体水平检测The document was prepared on January 2, 2021

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法. 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素,用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断. 二、实验内容 1.血凝试验HA检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验HI检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验HA原理:某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集,这种凝集红细胞的现象称为血凝HA,也称直接血凝反应.

2.血凝抑制试验HI 原理:当在病毒的悬液中加入特异性抗体,且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时,则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触.这时红细胞的凝集现象就被抑制,称为红细胞凝集抑制HI 反应,也称血凝抑制反应. 四、实验材料 抗体 抗原 病 毒 颗 粒 红细胞

离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版5块、微量移液器20-100微升可调、吸液尖若干、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND 标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水. 五、实验步骤 一抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用.1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液. 二10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞毫升. 2、1500转离心5分钟,吸弃上清液. 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次,前两次5分钟,后一次10分钟. 4、吸弃上清液,用吸量管吸取红细胞,配制成10%红细胞悬液. 5、2-6摄氏度储存,备用. 三血凝试验HA 1.在血凝板上第一排的1-12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释,在第1孔内加入50ul病毒抗原,然后依次倍比稀释至第11孔,最后弃50ul. 3.每孔加入1%鸡红细胞悬液50ul

第二十一届学生职业技能竞赛节新城疫赛项理论考试测试卷及答案

附件3 第二十一届学生职业技能竞赛节理论知识考试试题(卷) 项目名称:鸡新城疫抗体水平测定 注意事项 1.考试形式为闭卷,考试时间为60分钟。 2.在试卷装订线内填写考场号、参赛序号、身份证号码、姓名、专业班级。 3.请仔细阅读答题要求,在规定位置用蓝色或黑色笔填写答案。 一、单项选择题(每小题1分,共计50分,每题有多个答案,请将你认为其中唯一的一个正确答案序号填写在()内) 列为()。 A. 一类疫病 B. 二类疫病 C. 三类疫病 D. 多种动物共患病 2. 应用血凝血凝抑制试验进行新城疫诊断中,1%红细胞悬液的配制可使用()作为抗凝剂。 A.肝素 B. 阿司匹林 C. 3.8%枸橼酸钠 D. 5%水蛭素 3.在病毒的血凝试验中,以完全凝集的病毒()为该抗原的血凝效价。 A. 最大稀释度 B. 最小稀释度C最大浓缩度 D. 最大浓缩度 4.下列具有血凝活性的病毒是()。 A.禽白血病病毒 B. 马立克病毒 C. 火鸡疱疹病毒 D. 禽流感病毒 5.下列哪种抗原能应用于直接凝集试验()。 A.布鲁氏杆菌B.内毒素 C. 外毒素D.血清

6.体液免疫再次应答产生的抗体主要是()。 A. IgG B. IgM C. IgA D. IgEA 7.下面哪种方法不能用于培养病毒()。 A. 鲜血平板培养 B. 动物接种 C. 禽胚培养 D.组织培养 8. 下列属于人工被动免疫的是()。 A. 注射卵黄抗体获得的免疫 B. 患传染病康复后获得的免疫 C. 通过胎盘获得的免疫 D. 接种疫苗获得的免疫 9.下列关于抗原的说法错误的是()。 A.抗原一定是外来物质 B.抗原分子量越大,结构越复杂,其抗原性越强 C.抗原物质与机体亲缘关系越远,抗原性越强 D.颗粒性抗原比可溶性抗原免疫原性强 10.机体抵抗病原微生物感染的功能称为()。 A.免疫监视 B. 免疫防御 C. 免疫耐受 D. 免疫稳定 11.抗感染免疫的主力抗体为() A. IgG B. IgM C. IgA D. IgE 12.第一个看见并描述微生物的科学家是()。 A. 巴斯德 B. 吕文·虎克 C.科赫 D.琴纳 13.直接产生抗体的是()。 A. B 细胞 B.浆母细胞 C.记忆细胞 D. T细胞 14. 抗原刺激机体后,最先产生的是()。 A. IgG B.IgM C.IgA D.IgE 15.下列肯定不是抗原的物质是() A.福尔马林 B.蛋白质 C.细菌 D.真菌 16. 应用血凝和血凝抑制试验诊断鸡新城疫时一般选用() A.鸡红细胞 B.兔红细胞 C. 豚鼠红细胞 D.大鼠红胞 17.可中和破伤风梭菌产生的毒素的生物制品是() A. 破伤风类毒素B.破伤风抗毒素C.抗生素D.干扰素

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