鸡新城疫抗体（NDV-Ab）说明书
鸡新城疫抗体（NDV-Ab）说明书
鸡新城疫抗体（NDV-Ab）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫抗体（NDV-Ab）的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体（NDV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的新城疫抗体（NDV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存
说明书1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存
样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第
一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在
第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1200ng/L，800ng/L，400ng/L，200ng/L，100ng/L。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的20倍）倍稀释后备用。。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批间应分别小于9%和11%
检测范围：
70ng/L-1500ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
Chicken NDV-Ab
FOR RESEARCH USE ONLY
Drug Names
Generic Name：Chicken NDV-Ab ELISA Kit.
Purpose
This kit allows for the determination of NDV-Ab concentrations in Chicken serum,blood plasma,and other biological fluids.
Principle of the assay
T he kit assay Chicken NDV-Ab level in the sample，use Purified antigen to coat microtiter plate wells,make solid-phase antigen,then add NDV-Ab to wells,Combined antigen which With HRP labeled,become antigen–antibody -enzyme-antigen complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm.The concentration of NDV-Ab in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.
Materials provided with the kit
Materials provided with the kit 48determinations96determinations
Stora
ge
User manual11
Closure plate
membrane
22
Sealed bags11
Microelisa stripplate112-8℃Standard：1800ng/L0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃Standard diluent 1.5ml×1bottle 1.5ml×1bottle2-8℃
HRP-Conjugate
reagent
3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample
diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution A
3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution
B
3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop
Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃
wash solution20ml×1bottle30ml×1bottle2-8℃Specimen requirements
1.serum-coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-min
at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
2.plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix10-20
mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min
at the speed of
2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared, Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a
sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.
remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated
freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components, centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared,Centrifugal again.
5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS
（PH7.2-7.4）,Rapidly frozen with liquid nitrogen,maintain samples at 2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,Homogenized by hand or Grinders, centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant.
6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the
relevant literature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t,specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.
7.Can’t detect th e sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRP
active.
Assay procedure
1.Dilute and add sample to Standard:set10Standard wells on the ELISA plates coated,add Standard100μl to the first and the second well,then add Standard dilution50μl to the first a nd the second well,mix;take out100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately.then add Standard dilution50μl to the third and the forth well,mix;then take out50μl from the third and the forth well discard,add 50μl to the fifth and the sixth well,then add Standard dilution50μl to the fifth and the sixth well,mix;take out50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well,then add Standard dilution50μl to the seventh and the eighth well,mix;take out50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well,add Standard dilution50μl to the ninth and the tenth well,mix,take out50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample50μl to each well after Diluting,(density:1200 ng/L,800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L)
2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same). testing sample well.add Sample dilution40μl to testing sam ple well,then add testing sample10μl(sample final dilution is5-fold),add sample to wells, don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.
3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30 min at37℃.
4.Configurate liquid:wash solution diluted20-fold with distilled water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing, add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50μl to each
well,except blank well.
7.incubate：Operation with3.
8.washing：Operation with5.
9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃
10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well,Stop the reaction(the blue color change to yellow color).
11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.
Important notes
1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced
15-30minutes in the room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.
2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the water
helps dissolve when dilute.Washing does not affect the result.
3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,
avoids the experimental error.add sample within5mins,if the number of sample is much,recommend to use Volley.
4.if the testing material content is excessively higher(The sample OD is
bigger than the first standard well),please dilute Sample(n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoid
cross-contamination.
6.The substrate evade the light preservation.
7.Please according to use instruction strictly,The test result determination
must take the microtiter plate reader as a standard.
8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to
infective material process.
9.Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Assay
range
Take the standard density as the horizontal,
the OD value for the vertical,draw the standard
curve on graph paper,Find out the corresponding
density according to the sample OD value by the
Sample curve,multiplied by the dilution multiple,
or calculate the straight line regression equation
of the standard curve with the standard density
and the OD value,with the sample OD value in
the equation,calculate the sample density,
This chartis for reference only
70ng/L-1500ng/L
Storage and validity 1．Storage：2-8℃. 2．validity：six months.
鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现
鸡新城疫抗体检测步骤，鸡新城疫的症状表现 1、将样本做去皮和去脂处理，并用均质器均质样本，然后称取适量的均质物至离心管内。 2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂，振荡混匀后孵育半小时。 3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂，并振荡混匀。 4、离心5分钟，取上层有机相至离心管内，再用氮气吹干。 5、用净化剂溶解干燥物，加入试剂D，离心2分钟后待检。 一、鸡新城疫抗体检测步骤 1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理，再用均质器均质样本，然后称取3±0.05克均质物至15毫升的离心管内。 2、依次加入4毫升蒸馏水、0.5毫升试剂A以及0.6毫升衍生化试剂，并振荡混匀，于65°C水浴中孵育半小时。 3、依次加入1毫升试剂B、0.4毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂，然后振荡混匀。
4、在室温下（20-25°C）以4000r/分钟的速度离心5分钟，取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内，在50-60°C水浴中用氮气（或空气吹干仪）吹干。 5、取1毫升净化剂溶解干燥物，再加入0.5毫升试剂D振荡混匀，在室温下（20-25°C）以4000r/分钟的速度离心2分钟，最后待检。 6、若使用全血标本进行检测，标本的移动速度可能较慢，必要时可在加样1分钟后，向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液，以促进标本移动。
二、鸡新城疫的症状表现 1、急性型 （1）病鸡呼吸困难，会发出“咕噜”的特殊怪声。 （2）病鸡的嘴、鼻中有大量黏液，产蛋量下降。 （3）病鸡出现下痢，其粪便的颜色为黄白色或绿色，有麻痹和神经症状。
2、最急性型 此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上，发病时通常不会表现出任何症状，但病发后小鸡会快速死亡。 3、亚急性或慢性型
新城疫抗体检测
新城疫的抗体检测 某些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的实验称血球凝集试验，以此来推断被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制，即血球凝集抑制实验（HI），通过血凝与血凝抑制试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。一目的意义 1免疫监测（1）免疫效果评价（2）免疫时机确定 2诊断疾病（根据有无抗体或抗体的高低） 3流行病学调查 二试验仪器与试剂 1试验仪器离心机、离心管两支、50ml量筒一个、V型微量反应板、微量加样器（移液器）、塑料吸头（黄色）若干、1ml吸管1支、胶头滴管两支、微量振荡器、 电热恒温培养箱、托盘天平。 2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5、H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。 三方法 1病毒的血凝试验 1.1 3.8%柠檬酸钠抗凝剂的配制：用托盘天平称取柠檬酸钠3.8克溶于100ml蒸馏水或纯净水中，摇匀使其充分溶解即可，有条件的可121℃高压蒸汽灭菌20分钟，冷却至室温后置4℃冰箱中保存备用。 1.2 1%鸡红细胞制备过程：事先用5ml（或10ml）的注射器吸入抗凝剂若干（其量为所需血量的1/5）,从健康公鸡（未经新城疫疫苗注射）的心脏或翅下静脉采取2-4毫升血液,以2000转每分钟，离心5分钟，吸去上清液（注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净）。然后用生理盐水（用量为血细胞泥的5-10倍）洗红细胞，离心5分钟，弃去上清液，如此反复洗3-5次，直至上清液透明清亮为止，最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度，然后置4℃冰箱备用（一般可保存3天）。 1.3 红细胞凝集试验（血凝试验）操作方法（见表1）： （1）取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板，用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水，每孔25微升，直至加到第十五孔（第一列12孔，第二列3孔）。 （2）取新城疫抗原液25微升加入第一孔中，充分混合后吸取25微升加入第二孔中，如此直至第14孔，混合后吸取25微升丢弃，第15孔不加病毒为对照。 （3）更换移液器前端的塑料吸头，每孔加已备的1%鸡红细胞液各25微升（注意从后往前加）。 （4）将反应板置微型震荡器上，振动混合1分钟，取下置37℃恒温箱中作用30分钟后开始观察结果，注意每五分钟观察一次，直至30分钟，判定并记录结果。 判定结果如下： ++++——红细胞全部凝集，均匀分布于孔底。 ++-------红细胞部分凝集，沉积于孔底呈小圆点状。 -——红细胞全部不凝集，沉积于孔底呈圆点状。 以使红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价。4单位病毒的确定，以上述血凝价除以4即为4单位病毒，如血凝价为1:128，则1:128的0.1ml中有一个凝集单位，4单位病毒为128/4=32，即1:32为4个凝集单位。
鸡新城疫抗体检测实验报告(一)
鸡新城疫抗体检测实验报告(一) 背景介绍 •鸡新城疫是一种常见的家禽传染病，严重影响鸡类养殖业。 •抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。 实验目的 •确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。 •提供可靠的数据支持，用于预防和控制鸡新城疫的传播。 实验设计 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •分为实验组和对照组，实验组注射疫苗，对照组不注射。 •定期进行血液检测，测量抗体水平。 实验步骤 1.收集血样。 2.提取血清。 3.使用特定抗体试剂盒进行检测。 4.测量光密度值，判断鸡新城疫抗体水平。 5.记录实验结果。
实验结果 •实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。 •实验组的鸡只无明显临床症状，对疫情具有稳定抵抗力。 •对照组鸡群出现多例感染病例，病死率较高。 结论与建议 •鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况，为预防和控制疫情提供重要依据。 •注射疫苗可以提高鸡只的免疫力，减少感染风险。 •鼓励养殖场加强抗体检测工作，及时发现病例并采取相应措施。 致所有鸡农：鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。本实验通过抗体检测方法，证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力，减少感染的风险。希望您能严格按照抗体检测规程，提高鸡只的免疫力，保障养殖业的稳定发展。 感谢您的关注与支持！ 注意：本报告仅为实验结果总结，并非具体实验报告。具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。 实验方法 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。
•对照组的鸡只不注射疫苗。 •按照一定周期，定期采集血液样本。 数据分析 •对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。 •实验组的鸡只抗体水平明显升高，且持续稳定。 •对照组的鸡只抗体水平较低，易受感染。 结果讨论 •实验结果证明，注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。 •抗体检测是一种可靠的方法，可以快速判断鸡群的感染情况。 •实验结果也表明，饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。 结论 •鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。 •注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力，降低感染风险。 •饲养场应加强防疫管理，提供良好的养殖环境，以保障鸡只的健康与安全。
鸡新城疫
鸡新城疫（New Castle disease） 由副粘病毒引起鸡新城疫的高度接触性传染病。又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。常呈急性败血症状。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、黏膜和浆膜出血。死亡率高，对养鸡业危害严重。1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，世界各国均有流行记载。有强毒株和弱毒株两类。病毒分为低毒力型（即缓发型）、中等毒力型（即中发型）、强毒力型（即速发型）3型。多数高强度毒力株常属嗜内脏型新城疫病毒。鸡科动物都可患罹本病。家鸡最易感，雏鸡比成年鸡易感性更高。珠鸡、火鸡、雉、孔雀也能感染。鸭、鹅对本病有抵抗力。哺乳动物对本病有强大抵抗力，但人偶有感染而患结膜炎。急性型病初体温升高，可达 44℃，精神萎顿，羽毛松乱，呈昏睡状。冠和肉髯暗红色或黑紫色。嗉囔内常充满液体及气体，呼吸困难，喉部发出咯咯声；粪便稀薄、恶臭，一般2～5天死亡。亚急性或慢性型症状与急性型相似，唯病情较轻，出现神经症状，腿、翅麻痹，运动失调，头向后仰或向一边弯曲等，病程可达1～2个月，多数最终死亡。尚无有效治疗药物，只能依靠严格消毒、隔离和用灭活苗和活苗疫苗接种预防。 鸡新城疫(ND)又称亚洲鸡瘟。是由禽副流感病毒型新城鸡新城疫 疫病毒(NDV) 引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性、致死性疾病。家禽发病后的主要特征是呼吸困难，下痢，伴有神经症状，成鸡严重产蛋下降，粘膜和浆膜出血，感染率和致死率高。 鸡新城疫（ND）俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性、急性、烈性传染病。常呈现败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经机能紊乱，黏膜和浆膜出血。 各种鸡和各种年龄的鸡都能感染，幼鸡和中鸡更易感染，两年以上的老鸡易感性降低。本病的主要传染源是病鸡和带毒鸡，其分泌物，粪便，以及被污染的饲料、饮水，非易感的野禽、外寄生虫、人畜等均可传播病源。传播途径主要是消化道和呼吸道，也可经损伤的皮肤、黏膜侵入体内。一年四季均可发生。在非免疫区或免疫低下的鸡群，一旦有速发型毒株侵入，可迅速传播,呈毁灭性流行鸡新城疫 ，发病率和死亡率可达90%以上。目前，在大中型养鸡场，鸡群有一定免疫力的情况下，鸡新城疫主要是以一种非典型的形式出现，应引起重视。 珠鸡、火鸡、雉、孔雀也能感染。鸭、鹅对本病有抵抗力。哺乳动物对本病有强大抵抗力，但人偶有感染而患结膜炎。急性型病初体温升高，可达44℃，精神萎顿，羽毛松乱，呈昏睡状。冠和肉髯暗红色或黑紫色。嗉囔内常充满液体及气体，呼吸困难，喉部发出咯咯声；粪便稀薄、恶臭，一般2～5天死亡。亚急性或慢性型症状与急性型相似，唯病情较轻，出现神经症状，腿、翅麻痹，运动失调，头向后仰或向一边弯曲等，病程可达1～2个月，多数最终死亡。尚无有效治疗药物，只能依靠严格消毒、隔离和用灭活苗和活苗疫苗接种预防。 编辑本段病原学鸡新城疫病毒（NDV）属于副粘病毒科，副粘病毒属，核酸为单链RNA。成熟的病毒粒子呈球形，直径为120-300nm。由螺旋形对称盘绕的核衣壳和囊膜组成。囊膜表面有鸡新城疫 放射状排列的纤突，含有刺激宿主产生血凝抑制和病毒中和抗体的抗原成分。 NDV血凝素可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。溶血素可溶解鸡、绵羊及O型人红细胞。病毒感染一般要经过吸附、穿入、脱衣壳、生物合成、装配及释出等六个阶段。在感染发生时，病毒吸附和穿入细胞是关键的两个阶段。鸡是NDV最适合的实验动物和自然宿主。病毒存在于病鸡的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中，其中以脑、脾、肺含毒量最高，以骨髓保毒时间最长。 NDV在室温条件下可存活一周左右，在56℃存活30～90min，4℃可存活一年，-20℃可存活10年以上。一般消毒药均对NDV有杀灭作用。 鸡新城疫病毒（NDV）属于副粘病毒科，副粘病毒属，核酸为单链RNA。成熟的病毒粒子呈球形，直径为120-300 nm。由螺旋形对称盘绕的核衣壳和囊膜组成。囊膜表面有放射状排列的纤突，含有刺激宿主产生血凝抑制和病毒中和抗体的抗原成分。 NDV血凝素可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。溶血素可溶解鸡、绵羊及O型人红细胞。病毒感染一般要经过吸附、穿入、脱衣壳、生物合成、装配及释出等六个阶段。在鸡新城疫 感染发生时，病毒吸附和穿入细胞是关键的两个阶段。鸡是NDV最适合的实验动物和自然宿主。病毒存在于病鸡的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中，其中以脑、脾、肺含毒量最高，以骨髓保毒时间最长。 一般消毒药均对NDV有杀灭作用。病毒存在于病禽的所有组织器官、体液、分泌物和排泄中，以脑、
鸡新城疫抗体检测实验报告
鸡新城疫抗体检测实验报告 引言 本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测，以评估鸡群对该病毒的感染情况。通过收集血清样本并使用特定检测方法，我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。 实验设计 1. 样本采集 我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集，确保样本的代表性。采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。 2. 抗体检测方法 我们采用了酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行抗体检测。该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合，并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合，最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。 3. 阳性对照与阴性对照 为了验证实验结果的准确性，我们使用了阳性对照和阴性对照。阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本，而阴性对照为未感染的鸡样本。 实验结果 我们对100个样本进行了抗体检测，并将结果进行统计和分析。以下是实验结果的详细报告： 1. 鸡新城疫抗体检测结果 我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类：
•强阳性：抗体水平高于阈值的样本。 •弱阳性：抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。 •阴性：抗体水平低于阈值的样本。 2. 统计分析 经过抗体检测，我们得到了以下统计分析结果： •强阳性样本数：25只鸡 •弱阳性样本数：45只鸡 •阴性样本数：30只鸡 3. 结果解读 我们的实验结果表明，在100只鸡样本中，25只鸡的抗体水平高于阈值，可以确认为感染了鸡新城疫。另外，45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间，可能存在早期感染的迹象。剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值，说明它们未感染鸡新城疫。 结论与讨论 本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测，并得出了实验结果。结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高，25%的样本具有强阳性抗体水平。 我们认为，对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况，及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。此外，对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标，帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。 然而，本次实验存在一定的局限性。首先，样本数量相对较少，可能无法全面反映整个鸡群的感染情况。其次，我们仅采用了ELISA方法进行抗体检测，其他方法可能会得到不同的结果。因此，在今后的研究中，可以进一步扩大样本数量，并比较不同检测方法的准确性。 总体而言，本次实验对鸡新城疫抗体检测进行了全面的描述和分析，为鸡群健康管理提供了重要的参考和依据。鸡新城疫的预防和控制需要全面多方位的努力，希望本次实验结果能为相关工作提供一定的支持和指导。
鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感 (H9亚型)四联灭活
附件2（略） 附件3（略） 附件4 鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感 （H9亚型）四联灭活疫苗（La Sota株+M41株+K-11株+ SS/94株）等2种兽药产品说明书和标签 一、鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感（H9亚型）四联灭活疫苗（La Sota株+M41株+K-11株+SS/94株）说明书和标签 （一）鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感（H9亚型）四联灭活疫苗（La Sota株+M41株+K-11株+SS/94株）说明书 【兽药名称】 通用名鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感（H9亚型）四联灭活疫苗（La Sota株+M41株+K-11株+SS/94株） 商品名无 英文名Combined Newcastle Disease，Infectious Bronchitis，Egg Drop Syndrome and Avian Influenza（Subtype H9）Vaccine，Inactivated（Strain La Sota+Strain M41+Strain K-11 +Strain SS/94） 汉语拼音Ji Xinchengyi，Chuanranxingzhiqiguanyan，Jiandanzonghezheng，Qinliugan （H9 Yaxing）Silian Miehuoyimiao（La Sota Zhu+M41 Zhu+K-11 Zhu+SS/94 Zhu） 【主要成分与含量】疫苗中含灭活的鸡新城疫病毒La Sota株、传染性支气管炎病毒M41株、减蛋综合征病毒K-11株和禽流感H9亚型病毒SS/94株，灭活前鸡新城疫病毒含量不低于4×108.0EID50/0.1ml，传染性支气管炎病毒含量不低于4×106.0EID50/0.2ml，减蛋综合征病毒含量不低于4×108.0EID50/0.1ml，禽流感H9亚型病毒含量不低于4×107.0EID50/0.2ml。【性状】乳白色乳剂。 【作用与用途】用于预防鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征和H9亚型禽流感病毒引起的禽流感。免疫期为5个月。
略鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、呼肠孤病毒感染四联灭活疫苗产品说明书和标签
附件2(略) 鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、呼肠孤病毒感染四联灭活疫苗产品说明书和标签 一、鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、呼肠孤病毒感染四联灭活疫苗说明书 【兽药名称】 通用名鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病、呼肠孤病毒感染四联灭活疫苗商品名禽必威?大四联 英文名Newcastle Disease，Infectious Bronchitis，Infectious Bursal Disease and Reovirus Vaccine，Inactivated 汉语拼音Ji Xinchengyi、Chuanranxingzhiqiguanyan、Chuanranxingfashinangbing、Huchanggubingduganran Silian Miehuoyimiao 【主要成分与含量】含灭活的鸡新城疫病毒Clone 30株，每羽份至少含50PD50或1/50羽份至少能刺激产生4log2HI单位抗体；含灭活的传染性支气管炎病毒M41株，每羽份至少能诱导产生6.0log2HI单位抗体；含灭活的传染性法氏囊病病毒D78株，每羽份至少能刺激产生12.5log2VN单位抗体；含灭活的呼肠孤病毒1733株和2408株，每羽份至少能诱导产生5.0log2VN单位抗体。 【性状】乳白色乳剂。 【作用与用途】用于预防鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病和呼肠孤病毒感染。 【用法与用量】适用于种鸡的加强接种，肌肉或颈下部皮下注射，每只0.5ml。免疫种鸡的子代通过母源抗体获得被动免疫力。 接种的最佳时间和方法在很大程度上取决于当地的具体情况。因此，接种前应征求当地兽医的意见。 【不良反应】如按说明书正确接种健康鸡，应无严重不良反应。有时在接种部位出现微肿，可持续数周，若接种时严格执行无菌操作，则不会造成永久性的组织损害。 【注意事项】 （1）仅用于接种健康鸡。 （2）疫苗切勿冻结。 （3）使用前应将疫苗放至室温（15～25℃）。 （4）接种前应摇匀。 （5）应使用无菌注射器械进行接种。 （6）疫苗瓶开启后应在3小时内用完。
鸡新城疫抗体（NDV-Ab）说明书
鸡新城疫抗体（NDV-Ab）说明书 鸡新城疫抗体（NDV-Ab）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清，血浆及相关液体样本中新城疫抗体（NDV-Ab）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入新城疫抗体（NDV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的新城疫抗体（NDV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鸡新城疫抗体（NDV-Ab）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存 标准品：1800ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶30ml×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS （PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第 一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在
禽病学讲义-第二章 家禽的病毒性传染病(2-鸡新城疫)
禽病学（Avian Medicine）讲义 第二章家禽的病毒性传染病 第二节鸡新城疫（Newcastle Disease, ND） 一、概述：鸡新城疫又称亚洲鸡瘟，是由禽副粘病毒科的新城疫病毒（NDV）引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽及观赏鸟类的高度接触传染性，致死性疾病。家禽发病后的主要特征是呼吸困难（咳嗽），下痢，伴有神经症状（扭头、转圈），成鸡严重产蛋下降，黏膜和浆膜出血，感染率和致死率高。（注：AI也叫欧洲鸡瘟） 二、病原学 （1）NDV属于副粘病毒科，禽腮腺炎病毒属／副粘病毒属，核算为单股负链RNA。成熟的病毒粒子呈球形，直径为120-300nm。病毒表面有刺激宿主产生血凝抑制和病毒中和抗体的抗原成分（主要为HN蛋白和F蛋白）。（2）血清型：1个（ILTV也是只有1个血清型） （3）NDV血凝素可以凝集鸡和人等多种动物的红细胞（注：每一个红细胞表面可以结合许多病毒粒子，这些病毒粒子又可以集合旁边的红细胞，最后形成一个大网，即红细胞凝集试验；没有NDV红细胞在生理盐水中会沉淀，变成一个红点，倾斜V形板会移动，即红细胞沉淀试验；加抗体后，病毒和抗体先作用，再和红细胞加在一起后不能凝集，即血凝抑制试验）。 溶血素可溶解鸡和人等的红细胞。 在感染发生时，病毒吸附（结合较紧密，只有神经氨酸酶才能切割开）和穿入（病毒进入到宿主细胞内，才能生长繁殖，使宿主发病，最后造成死亡）时两个关键阶段。 鸡是NDV最适的试验动物和自然宿主。 （4）NDV在室温条件下可存活一周左右，在56˚C存活30～90min（即高温容易灭活），4˚C可存活一年，－20˚C可存活十年以上，（故新城疫往往在冬春季节发生，而炎热的夏天疾病相对较少）一般消毒药均对NDV有杀灭作用。 （5）病原学特征： 病毒存在于病鸡的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中，以脑、脾、肺含量最高（故可引起神经症状和呼吸道症状），以骨髓保毒时间最长。
鸡新城疫
鸡新城疫(ND) 新城疫也称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，是由病毒引起的鸡和火鸡急性高度接触性传染病，常呈败血症经过。主要特征是呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血。 自1926年首次发现于英国新城发现，故名。广泛分布于世界各地，是严重危害养鸡业的主要疾病之一。为A类传染病。 发病死亡率可达90%以上，表现呼吸困难、下痢、神经机能紊乱，消化道出血性病变是突出的病理学特征。 病原 NDV是付粘病毒科、付粘病毒属的代表病毒，120～300nm、单股负链RNA病毒，有囊膜。本病毒存在于病禽的所有器官组织、体液、分泌物及排泄物中，尤以脑、脾、肺的含毒量最高，骨髓含毒时间最长。 只有一个血清型，但毒力差异大。从不同地区和鸡群分离到的NDV，对鸡的致病性有明显差异。 培养：NDV能在鸡胚中(SPF9～11日龄尿囊腔）生长繁殖，也能在多种细胞培养上生长，可引起细胞病变。可用中和试验、蚀斑减数，血吸附抑制试验鉴定病毒。 已发现的NDV基因型有Ⅰ～Ⅸ9个，其中Ⅰ～Ⅵ是早已存在的老基因型，Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型，特别是Ⅸ为我国特有的因型。非典型ND增多，近年流行基因Ⅶ型。 毒力 根据致病性试验将NDV毒株分为强毒力、中等毒力和低毒力三个型。 NDV的毒毒株间差异的区别标准是依据鸡胚平均死亡时间(MDT)，1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉注射致病指数(IVPI)来区别的。 血清型 只有一个血清型，但毒力差异大，毒力测定很重要。 NDV致病力强弱依据指标：脑内接种致病指数（ICPI），静脉接种致病指数（IVPI）和最小致死剂量致死鸡胚平均数时间（MDT）。 NDV一个很重要的生物学特性就是能吸附于鸡、火鸡、鸭、鹅及某些哺乳动物(人、豚鼠)的红细胞表面，并引起红细胞凝集(HA)，这种特性与病毒囊膜上纤突所含血凝素和神经氨酸酶有关。这种血凝现象能被抗NDV的抗体所抑制(HI)，因此可用HA和HI来鉴定病毒和进行流行病学调查。 NDV对乙醚、氯仿敏感。病毒在60oC 30min失去活力，真空冻干病毒在30oC，可保存30d，在直射阳光下，病毒经30min死亡。病毒在冷冻的尸体可存活6个月以上。常用的消毒药如2％氢氧化钠、5％漂白粉、70％酒精，20min即可将NDV杀死。它对pH稳定，pH3～10不被破坏。 流行病学 易感动物：鸡、火鸡、珠鸡及野鸭对本病都有易感性，鸡最易感。各种年龄的鸡，易感性也有差异，幼雏和中雏易感性最高，两年以上鸡较低。水禽(鸭、鹅)对本病有抵抗力，但可从鸭、鹅中分离NDV。 哺乳动物对本病有很强的抵抗力，但人可感染，表现为结膜炎或类似流感症状。 传染源：本病的主要传染源是病鸡以及在流行间歇期的带毒鸡，但鸟类的作用也不可忽视。受感染的鸡在出现症状前24h就能排出病毒。而痊愈鸡带毒排毒的情况则不一致，多数在症状消失后5～7d就停止排毒。 传播途径：主要是呼吸道和消化道，鸡蛋也可带毒而传播本病。创伤及交配也可引起传染，非易感的野禽、外寄生虫、人畜均可机械地传播病原。 ?流行特点：一年四季均可发生，但以春秋两季较多。（1）无季节性，但冬春季节多
疫苗使用说明
常用疫苗的使用方法 一. 牛用疫苗 1.牛口蹄疫疫苗:.将疫苗原液摇均，犊牛颈部肌肉注射1毫升，成牛颈部肌肉注射2毫升。 2.牛出血性败血症：将疫苗原液摇均，（100公斤以下的）犊牛颈部肌肉注射4毫升，成牛颈部肌肉注射6毫升。 3 牛羊布鲁氏苗：用生理盐水.按说明标明的头份稀释后口服量牛是羊的5倍量。 二.猪用疫苗： 1.猪口蹄疫疫苗（100毫升）：将疫苗原液摇均，25公斤以下的仔猪颈部肌肉或皮下注射1毫升，25公斤以上的猪颈部肌肉或皮下注射2毫升。 2.猪瘟疫苗（20头份）：按瓶签标明的头份数，用20毫升生理盐水稀释，猪颈部肌肉或皮 下注射1毫升。 3猪丹毒疫苗（40头份）：按瓶签标明的头份数，用20%铝胶盐水稀释液40毫升稀释， 断奶后的猪不论大小一律颈部肌肉注射1毫升。 4.猪肺疫（猪巴氏杆菌）疫苗（40头份）：按瓶签标明的头份数，用生理盐水或凉开水40毫升稀释，每头猪不论大小一律口服1毫升。 5.仔猪副伤寒疫苗：按瓶签标明的头份数，用生理盐水或凉开水稀释，每头猪不论大小一律口服1毫升。 6.猪蓝耳病疫苗：即猪繁殖与呼吸综合症灭活疫苗（见背面说明书） 三.禽用疫苗： 1鸡新城疫II系疫苗（500羽份）：按瓶签标明的羽份数，用生理盐水25毫升稀释，对7—10日龄的雏鸡每只点眼或滴鼻一滴，30--35日龄再以同样的方法点眼或滴鼻一次。 2.鸡新城疫I系疫苗（500羽份）：按瓶签标明的羽份数，用生理盐水500毫升稀释，对 两个月龄以上（经鸡新城疫II系疫苗点眼或滴鼻过的成鸡每只鸡）.每只鸡翅根或胸部肌肉或皮下注射1毫升。 3.禽霍乱（禽巴氏杆菌B26）疫苗（500羽份）：按瓶签标明的羽份数，用20%铝胶盐 水稀释液250毫升稀释，每只鸡翅根或胸部肌肉或皮下注射0.5毫升，鸭鹅翅根或胸部肌肉或皮下注射1毫升。 4.禽流感疫苗：按瓶签标明的羽份数，每只禽胸部肌肉或皮下注射0.5毫升。 刘房子街道畜牧兽医站
鸡新城疫抗体水平测定
2018年全国职业院校技能大赛 拟设赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：GZ-2018011 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the Antibody against Chicken NewCastle Disease Virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目的 本赛项由学校、行业、企业共设，通过技能竞赛，能有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，加大行业人才队伍建设力度，提升行业产业发展水平。同时，通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量。 三、竞赛内容 本赛项为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛时间为180分钟。具体步骤及其分值如下： （一）试验器材准备（占总成绩的8%） 按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。 （二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）
按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1%鸡红细胞量适宜等。 （三）血凝试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，再次滴加稀释液，再添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，静置感作适当时间后，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩的10%） 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 （五）血凝抑制试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果，确定抗体滴度，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。 （六）抗体滴度报告（占总成绩的24%） 按照操作规程，正确判定抗体滴度，完成报告。要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生，不得跨校组队。
鸡新城疫抗体滴度的检测
鸡新城疫抗体滴度的检测 （红血球凝集抑制法） 1 红细胞血凝与血凝抑制的原理 红细胞凝集的实质是红细胞膜上的特异性抗原(凝集原，agglutinogen)和相应抗体(凝集素，agglutinin)发生抗原抗体反应。当病毒的悬液中先加入特异性抗原，且这种抗原的量足以封闭病毒颗粒或其凝集素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其凝集素直接接触，这是红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制，也称为血凝抑制反应。新城疫病毒属于副黏病毒属，是最主要的红细胞凝集性病毒，具有神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA)，可使红细胞凝集。 2 实验材料 鸡新城疫抗原(NDV，南京天邦生物科技有限公司)；生理盐水；肝素钠；96 孔V 型微量血凝板；微量移液枪 3 红细胞凝集 3.1 1%鸡红细胞悬液的制备 取无免疫过的成年公鸡，翅静脉采血10~15 mL，肝素抗凝，2000 r/min 离心10 min，弃上清，注意要将血细胞泥表面的一层薄膜洗净。然后用血细胞泥5~10 倍的PBS洗涤，2000 r/min 离心10 min，弃上清，如此反复洗涤 3 次至上清液透明，弃上清液后得到红细胞泥。再用PBS配成1%鸡红细胞悬液（红细胞泥：PBS=1ml:100ml）。4℃保存，不超过5d。 3.2 红细胞凝集(4 单位抗原的滴定)
在96 孔微量血凝板上，从左到右每空各加50 μL 生理盐水，另加一排作为重复。再向每排的第 1 孔加入50 μL 新城疫抗原，依次向后倍比稀释直至第11 孔，第12 孔作为对照，无抗原液。然后向每孔加入1%鸡红细胞悬液50 μL，将微量板振荡混匀20~30 次（于微型振荡器上震荡1 m in），置于37℃温箱感作30 min 后每5 min 观察一次，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果观察：将反应板倾斜45 度角，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动着为沉淀，表明红细胞未被凝集或不完全被病毒凝集；如果红细胞铺平孔底，凝集成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，表明红细胞被病毒所凝集。以100%凝集的抗原最大稀释孔位该抗原的血凝价，即1 个凝集单位；从该孔向前移2 孔的抗原稀释度作为4 单位抗原的稀释度。 抗原应稀释的倍数=血凝滴度÷4 (若血凝价为26，病毒抗原应稀释倍数为24（16），即16ml生理盐水+1ml抗原即为4个单位血凝单位的病毒抗原)。 4 红细胞凝集抑制 在96 孔微量血凝板上，从左到右每孔中各加50 μL 生理盐水，再向每排的第 1 孔加入50 μL 待测血清，依次向后倍比稀释直到第
鸡新城疫的合理免疫程序和正确接种方式
鸡新城疫的合理免疫程序和正确接种方式 新城疫是鸡的一种烈性传染病，在国际兽医界倍受关注。在我国已流行连年，但仍是危害我国养殖业较严峻的疾病之一。合理的免疫程序和科学的接种方式就显得尤其重要，下面就此病近几年来在免疫方面的注意事项向大伙儿介绍一下： ⒈新城疫免疫方式的选择 常规新城疫弱毒苗的免疫方法，主要有滴鼻点眼法、气雾免疫法和饮水免疫法三种，每种方法要求和产生的效果各不相同。 ①滴鼻点眼免疫要紧目的在于防治病毒，从眼结膜和呼吸道粘膜两道屏障进入机体内，适用于活疫苗，如新城疫Ⅱ系、Ⅳ系、克隆株的疫苗接种。滴鼻点眼法是逐只进行接种，能保证每只鸡都取得免疫，而且剂量一致，滴鼻点眼法是疫苗接种的最正确方式之一，操作时让鸡只呈侧窝姿势，一只眼朝上，然后在眼结膜和鼻孔上各滴一滴，让鸡维持这种姿势直到滴入的疫苗吸收，再免疫下一只鸡。 ②气雾免疫此法是用紧缩空气通过气雾发生器使疫苗形成直径10微米的雾化粒子，均匀的悬浮于空气当中随呼吸进入体内，适用于大群蛋鸡的二次免疫和暴发ND时的紧急免疫，成效能够与滴鼻点眼相同，不适合肉鸡的免疫，因为会继发慢性呼吸道病。 ③饮水免疫法用于二次免疫和产蛋时期的增强免疫，其爱惜率仅为%，容易造成ND的散发。 ⒉免疫程序的选择 新城疫疫苗的首次免疫应在母源抗体消失后再进行免疫，再次免疫必须依据抗体水平再次确定。首次免疫前先测定10只雏鸡的抗体水平，一般要求在25以下时进行接种，免疫后抗体水平应在26，基本可以保护强毒的危害。 如果无法测定母源抗体，首次免疫可以加大免疫剂量，以消除母源抗体的影响，如在首次免疫可以采用倍量免疫（鼻、眼各滴一滴）。 在新城疫严重危害地区，7日龄用Ⅳ系滴鼻点眼，10日龄颈部皮下注射的复合新城疫油佐剂苗，第二次免疫程序依照监测的后果再确信，一样在21日龄免疫用Co30与传支联苗进行滴鼻点眼免疫。 ⒊疫苗的种类 新城疫苗按照毒力强弱分为弱毒疫苗、中等毒力疫苗和强毒疫苗。一般弱毒疫苗主要有Ⅱ系、Ⅳ系、Co30等，可采纳滴鼻点眼免疫，作为基础免疫利用；中等毒力为Ⅰ系苗，利用较少，大多在60日龄利用，要紧作为注射利用，用于增强弱毒疫苗成效和维持抗体，利
鸡新城疫病毒
鸡新城疫病毒 鸡新城疫(ND)是极易传染的毁灭性疾病，被国际动物卫生组织（OIE）列为一类传染病，最常侵袭家鸡和珍珠鸡，也能感染其他家禽和野鸟。水禽和海鸟通常具有较强的抵抗力但可以作为带毒者。人也有易感性，常因接触病禽和病毒而感染。 本病于1926年首次发现于英国新城，故名。本病死亡率极高，强毒株引起的感染常达100%，广泛分布于世界各地。 新城疫病毒为单股RNA病毒，属于禽副粘病毒Ⅰ型。 一、形态特征 成熟的病毒粒子直径约为100～250nm，有囊膜的病毒粒子呈圆形，但常因囊膜损坏而形态不规则。囊膜上有纤突长约8nm，为脂蛋白，具有血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）活性。病毒粒子的内部有一核心，就是病毒的核衣壳，直径约17nm。 二、理化特性 新城疫病毒（NDV）在55℃经45分钟或阳光直射下经30分钟灭活，但在4℃经几周，在-20℃经几个月，在-70℃经几年感染能力不受影响，在鲜鸡蛋中经几个月、在冻鸡中经2年仍有病毒存在，NDV对低温抵抗力较强。 碳酸钠和氢氧化钠对其消毒效果不理想，大多数除垢剂能将其迅速灭活，煤酚皂、甲酚配成2%-5%浓度可以在5分钟内杀死病毒。 0.1%福尔马林37℃时6小时可以杀灭病毒。 三、生物学活性
1、血凝性：NDV能凝集人、禽、小鼠等的红细胞，是由于其HN蛋白能结合红细胞表面的受体，这一特性和抗血清的特异性抑制作用可用于本病的诊断。 2、神经氨酸酶活性：神经氨酸酶（NA）也是HN蛋白的一部分，存在于副粘病毒属的所有成员，此酶的明显作用是可以将病毒逐渐从红细胞上洗脱下来。 3、细胞融合与溶血：NDV能使感染的细胞融合，造成红细胞溶血。 四、培养特性 NDV易在10-12日龄的鸡胚绒毛尿囊膜内或尿囊腔内生长，一般接种后24-72小时可导致鸡胚死亡，鸡胚呈出血性病变和脑炎，感染的尿囊液能凝集红细胞。鹌鹑胚易感性更高，但病毒滴度没有鸡胚高。 NDV大多数毒株能在许多继代和传代动物细胞内增殖，最常用的是鸡胚成纤维细胞、鸡胚肾细胞、仓鼠肾细胞，但细胞培养物的病毒浓度常比鸡胚低一个滴度。 五、病原性 NDV不同毒株对宿主的致病力相差很大，鸡是高度敏感的，鸭和鹅可能被感染，但不表现临床症状。 NDV对鸡的致病性主要由病毒株决定，但感染剂量、感染途径、鸡的日龄和环境条件也有影响。一般越小发病越急，雏鸡感染野外强毒可能突然死亡，较大的鸡可能病程较长，并有典型的临床症状。自
说明书和标签[004]
附件2（略） 附件3 犬瘟热、腺病毒病、细小病毒病、副流感四联活疫苗-犬钩端螺旋体病（犬型、黄疸出血型）二价灭活疫苗等8种兽药 产品说明书和标签 一、犬瘟热、腺病毒病、细小病毒病、副流感四联活疫苗-犬钩端螺旋体病（犬型、黄疸出血型）二价灭活疫苗说明书和标签（一）犬瘟热、腺病毒病、细小病毒病、副流感四联活疫苗-犬钩端螺旋体病（犬型、黄疸出血型）二价灭活疫苗说明书 【兽药名称】 通用名犬瘟热、腺病毒病、细小病毒病、副流感四联活疫苗-犬钩端螺旋体病（犬型、黄疸出血型）二价灭活疫苗 商品名喜贝多 英文名Live Vaccine against Canine Distemper, Adenovirus Type 2, Parvovirosis, Parainfluenza Virus and Inactivated Vaccine against Canine Leptospirosi（Canicola + Icterohaemorrhagiae） 汉语拼音Quanwenre Xianbingdubing Xixiaobingdubing Fuliugan Silian Huoyimiao- Quangouduanluoxuantibing（Quanxing Huangdanchuxuexing）Erjia Miehuoyimiao 【主要成分与含量】每头份疫苗中含犬瘟热病毒Lederle致弱株至少104.0 TCID50；含犬腺病毒2型曼哈顿致弱株至少104.0 TCID50；含犬细小病毒C-780916致弱株至少106.0 TCID50；含副流感病毒Penn 103/70致弱株至少105.0 TCID50；黄疸出血型钩端螺旋体L-9株和犬型钩端螺旋体L-2株，灭活前菌体数量均不低于109个。 【性状】活疫苗部分为黄白色海绵状疏松团块，加灭活疫苗部分后迅速溶解；灭活疫苗部分为微带乳光的均一悬液。 【作用与用途】用于预防犬瘟热、犬腺病毒病、犬细小病毒病、犬副流感和犬钩端螺旋体病。 【用法与用量】用灭活疫苗部分溶解活疫苗部分，皮下注射。每次1头份（1ml）。对8周龄或8周龄以上犬首次免疫，推荐连续接种2次，每次间隔3周，以后每年加强接种1次。 【不良反应】接种疫苗后，个别犬可能会出现过敏反应，可使用抗组胺药治疗。 【注意事项】（1）本疫苗仅用于接种健康犬；禁止接种怀孕母犬。