6-磷酸葡萄糖异构酶检测在类风湿关节炎中的意义

6-磷酸葡萄糖异构酶检测在类风湿关节炎中的意义

血清中可溶性葡萄糖6-磷酸异构酶含量在类风湿性关节炎的诊断价值葡萄糖6磷酸异构酶Glucose-6-phosphateisomerase(GPI) ELISA测定试剂盒是国际首家专利产品。经五年有研究,该试剂特异性高、灵敏度与抗CCP类似。

类风湿关节炎诊断以往检测指标是类风湿因子(rheumatoid factor,RF)近来的抗胍氨酸环肽抗体(抗CCP抗体)已经使RA检测的敏感性和特异性有所提高,但是RA病人体内存在多种自身抗体和很多其他生化异常,候选的抗原还有Ⅱ型胶原、热休克蛋白60、角蛋白和软骨糖蛋白39等。最近发现葡萄糖-6-磷酸-异构酶(glucose-6-phosphate isomerase, GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)病人血清和关节液中明显增高,甚至还有报道认为抗GPI抗体与RA相关。

GPI又称为D-葡萄糖-6-磷酸-酮异构酶(D-glucose-6-phosphate ketol-isomerase),主要功能是催化6-磷酸葡萄糖和6磷酸果糖转化。最早在1968年因为非球形红细胞溶血性贫血而得到认识。近来在T 细胞受体的转基因小鼠模型(K/B X N)中,小鼠所发生的炎症性关节炎与人类RA相似,而且会持续产生抗GPI 抗体。2001年Schaller[2]等在RA血清、关节液中检测到高水平的抗GPI抗体(64%),而Lyme病相关的关节炎、SS和正常人群(3%)则很少,并认为该抗体与RF无相关性。此外,还在RA病人的关节液和血清中发现高浓度的GPI及其免疫复合物,通过共聚焦显微镜和免疫组化发现RA病人肥大滑膜或滑膜绒毛的小动脉和毛细血管有高密度的GPI表达,可能是由血管内皮生长因子(VEGF)所引起。Schaller等认为GPI是通过内皮细胞或者滑液中的可溶性蛋白递呈给免疫系统,并认为GPI抗原在RA的病理过程中起作用。

在RA病人血清和关节液中明显增高的GPI是否会对RA有帮助,或者成为RA病人病情活动的标记之一。试验结果显示RA病人组较对照组的血清中GPI浓度显著增高(P<0.001),尤其大于2ug/ml的病例数显著多,而且与关节肿胀和疼痛成正相关,而SLE、PM/DM、SS病人高于0.33ug/ml的比率分别为2%、0%和0%,而OA和AS病人的GPI浓度则在正常范围内,这说明GPI在部分RA病人中升高是有一定特异性,而且和活动有一定关系。尤其我们发现其特异性高达97.9%,阳性预计值高达93.3%,因此有理由认为GPI有可能成为RF和抗CCP抗体以外的第三种标记物。

葡萄糖6磷酸异构酶Glucose-6-phosphateisomerase(GPI) ELISA测定试剂检测在炎症、肿瘤、甲肝、乙型病毒性肝炎、自身免疫性疾病时无干扰。

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校准品(质控品)系列

国内首家获得批准文号、注册上市的ApoAⅠ及ApoB次级参考血清等脂类校准品、特种蛋白复合校准品。特种蛋白试剂系列

ApoAⅠ及ApoB单/双试剂;Pre-Alb单/双试剂;Lp(a);C3、C4;Tf;IgG、IgA、IgM;CRP;视黄醇结合蛋白;尿微量白蛋白;纤维结合蛋白;血浆纤维蛋白原;纤溶酶原;铜蓝蛋白;抗凝血酶-Ⅲ;B因子。生化试剂系列

ASTm;AST;HDL-C;LDL-C;直接胆红素;总胆红素;果糖胺;甘油三酯;血氨酶法;肌酸激酶;肌酸激酶MB型同工酶。

酶标试剂

GPI(类风湿关节炎的诊断)

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果胶酶讲解

葡萄糖异构酶 从以下六个方面来了解和认识: 1.酶的催化特性和来源 2. 酶的功能用途 3. 酶的结构和理化性质 4. 酶的生产方法和提取纯化工艺 5. 酶制剂在生产中的应用 6. 该酶制剂的发展趋势 一、酶的催化特性和来源 ?葡萄糖异构酶又称木糖异构酶,它可以催化D-木糖、D-葡萄糖,D-核糖等醛糖转化为相应的酮糖。 ?目前为止,发现的产酶菌为细菌和放线菌,还有少量的米曲霉和酵母中。 1、催化特性 由于葡萄糖异构化为果糖具有重要的经济意义,因此工业上习惯将D-木糖异构酶称为葡萄糖异构酶。 该酶一般只能催化C2与C4羟基为顺式的戊糖和己糖异构化,即只能催化D-木糖、D-核糖和D-葡萄糖异构化为对应的酮糖 大多数微生物该酶是胞内酶,可以直接利用细胞进行异构化反应,但也有一些微生物可以产生胞外酶,因菌种菌龄培养条件而异。 2、来源 细菌 ?主要是乳酸杆菌,如短乳杆菌、发酵乳杆菌、盖氏乳杆菌、李氏乳杆菌、甘露醇乳杆菌、产气气杆菌、阴沟气杆菌、果聚糖气杆菌、凝结芽孢杆菌、嗜热芽胞脂肪杆菌等。 放线菌 ?主要是链霉菌和诺卡菌,如白色链菌、包氏链霉菌、多毛链霉菌、黄微绿链霉菌、橄榄色链霉菌、秀红链霉菌、委内瑞拉链霉菌、达氏诺卡菌等。 ?还有密苏里游动放线菌 其他 ?米曲霉 ?酵母菌 密苏里游动放线菌胞内酶达95%以上,嗜热放线菌M1033的胞外异构酶达99%,我国7号淀粉酶链霉菌M1033菌株也可以产生胞外葡萄糖异构酶。 生产葡萄糖异构酶的微生物分为 诱导型需要木糖作为诱导剂 组成型不添加木糖,是工业生产发展的方向 二、酶的功能用途 1. 将葡萄糖异构化为高果糖浆,味道纯正,具有较强保温性、着色性和防腐性,营养价值较高 2. 可不经消化直接被肠胃吸收,果糖的代谢不受胰岛素调节,糖尿病人可以利

6- 酶磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒

6-磷酸葡萄糖脱氢酶试剂盒 产品简介: 6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的关键酶,催化6-磷酸葡萄糖氧化为6-磷酸葡萄糖酸内酯,同时将NADP还原为NADPH,以供生物合成及维持细胞内的还原状态,因此6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的高低可以从一定程度上反映出生物体的生物合成和抗氧化能力。 G6PDH能使NADP还原成NADPH,6-磷酸葡萄糖+NADP→6-磷酸葡萄糖酸内脂+NADPH;在一定反应时间内其活性高低与反应前后生成物浓度的变化呈线性关系。本测试盒通过在340nm下测定NADPH增加速率来反应G6PDH活性的大小,NADPH浓度升高越多则G6PDH 活力越大。 试验中所需的仪器和试剂: 紫外可见分光光度计、37℃恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、蒸馏水 产品内容: 提取液:60mL×1瓶,4℃保存。 试剂一:储备液50mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×2支,-20℃保存;用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用; 试剂三:粉剂×2支,-20℃保存;用时每只加275μL双蒸水充分溶解备用。 操作步骤: 一、样品测定的准备: (1)细菌、细胞或组织样品的制备: 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清,按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞。8000g离心10分钟,取上清,置冰上待测。 组织:称取100mg组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10分钟,

取上清,置冰上待测。 (2)血清(浆)样品:直接检测。 二、测定操作表: 测定管对照管试剂一(μL)750750 试剂二(μL)1010 试剂三(μL)1010 样本(μL)30 蒸馏水(μL)30 将上述试剂按顺序加入1mL石英比色皿中,加样本的同时开始计时,在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1,比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃或25℃水浴中(哺乳动物用37℃,非哺乳动物用25℃),准确反应5分钟。迅速取出比色皿并擦干,340nm下比色,记录5分20秒时的吸光度A2,计算ΔA=A2-A1。 注意事项: 1、若A2-A1大于0.5,需将酶液用提取液稀释,使A2-A1小于0.5,可提高检测灵敏度。 2、实验时,试剂二、试剂三和样本在冰上放置,以免变性和失活。试剂一37℃或25℃水浴放置。 3、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

为什么说6-磷酸葡萄糖是各个糖代谢途径的交叉点

【第五章】 4、为什么说6-磷酸葡萄糖是各个糖代谢途径的交叉点? 葡萄糖经过激酶的催化转变成葡萄糖-6-磷酸,可进入糖酵解途径氧化,也可进入磷酸戊糖途径代谢,产生核糖-5-磷酸、赤鲜糖-4-磷酸等重要中间体和生物合成所需的还原性辅酶Ⅱ;在糖的合成方面,非糖物质经过一系列的转变生成葡萄糖-6-磷酸,葡萄糖-6-磷酸在葡萄糖-6-磷酸酶作用下可生成葡萄糖,葡萄糖-6-磷还可在磷酸葡萄糖变位酶作用下生成葡萄糖-1-磷酸,进而生成糖原。由于葡萄糖-6-磷酸是各糖代谢途径的共同中间体,由它沟通了糖代谢分解与合成代谢的众多途径,因此葡萄糖-6-磷酸是各糖代谢途径的交叉点。 6、1分子葡萄糖在肝脏组织彻底氧化可生成多少分子ATP? 1molATP水解可释放30.54KJ能量,而1mol葡萄糖彻底氧化分解后可产生2870KJ能量但其中只有1161KJ能储存在ATP中,故可形成约38molATP。(效率约为40%) 10、计算由2摩尔丙酮酸转化成1摩尔葡萄糖需要提供多少摩尔的高能磷酸化合物? 首先,2摩尔丙酮酸+2CO2+2ATP→2草酰乙酸+2ADP+2Pi;2草酰乙酸+2GTP→2磷酸稀醇式丙酮酸+2GDP+2CO2;其次,2摩尔磷酸稀醇式丙酮酸沿糖酵解途径逆行至转变成2摩尔甘油醛-3-磷酸,其中在甘油酸-3-磷酸转变成甘油酸-1,3-二磷酸过程中,消耗2摩尔ATP;甘油酸-1,3-二磷酸转变成甘油醛-3-磷酸中,必须供给2摩尔的NADH?H+。最后,2摩尔的磷酸丙糖先后在醛羧酶、果糖-1,6-二磷酸酶、异构酶、葡萄糖-6-磷酸酶作用下,生成1摩尔葡萄糖,该过程无能量的产生与消耗。从上述三阶段可看出,2摩尔丙酮酸转化成1摩尔葡萄糖需要提供6摩尔高能磷酸化合物,其中4摩尔为A TP,2摩尔为GTP。 【第六章】

遗传性果糖不耐受症诊疗指南(罕见病指南)

40.遗传性果糖不耐受症 概述 遗传性果糖不耐受症(hereditary fructose intolerance,HFI)是一种罕见的常染色体隐性遗传性果糖代谢病。是由于编码果糖-1,6-二磷酸醛缩酶B(fructose-1,6-bisphosphate aldolase,醛缩酶B)ALDOB基因突变致B型醛缩酶缺乏,导致1-磷酸果糖在肝脏、肾、肠中堆积,使肝糖原分解和糖异生受抑制而致病。表现为低血糖发作,如未能及时诊治,可导致严重肝病、低血糖脑病及肾损害,有潜在致命危险。 病因和流行病学 醛缩酶由A、B、C3种同工酶组成,其主要在肝脏、肾脏和小肠表达。在正常情况下,外源性果糖在空肠吸收,通过门脉系统进入肝脏,在醛缩酶的作用下完成1-磷酸果糖裂解,1,6-二磷酸果糖裂解,生成磷酸二羟丙酮与三磷酸甘油醛。遗传性果糖不耐受因主要醛缩酶B活力降低所致,因此HFI主要临床症状及受累器官与肝、肾、肠有关。 人类醛缩酶B基因ALDOB定位于染色体9q21.3-22.3,长约14.4kb,包含9个外显子和8个内含子,调控合成醛缩酶B蛋白,醛缩酶B由364个氨基酸组成,呈一个四聚体结构。目前已报道了60种ALDOB基因突变类型,其中该基因在欧洲人群中的常见突变是p.Ala150Pro和p.Ala175Asp,c.324+1G>A剪切变异常见于印度北部人群。ALDOB基因突变后,使醛缩酶B的结构和活性均发生改变。患者摄入或输注含果糖成分的物质后,1-磷酸果糖不能转化磷酸二羟丙酮与三磷酸甘油醛,从而在肝中大量堆积。可造成如下病理生理过程:①消耗细胞内库存的无机磷酸盐,造成三磷酸腺苷(ATP)缺乏,导致肝线粒体氧化磷酸化减少,肝细胞ATP依赖性离子泵功能障碍,细胞肿胀,细胞内容物外溢,引起组织如肝脏、肾小管功能障碍,导致多种物质代谢紊乱;②抑制磷酸化酶、果糖1,6-二磷酸酶、果糖激酶活性,糖原分解和糖异生作用异常,出现低血糖及多脏器损害;③抑制磷酸甘露糖异构酶,导致蛋白-N-糖基化障碍。患者对一切来源的果糖都很敏感,包括饮食、药物中的蔗糖、山梨醇及果糖。

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)试剂盒使用说明 分光光度法货号:BC0930 规格:50管/48样 产品内容: 提取液:60mL×1瓶,4℃保存; 试剂一:液体47.5mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×1支,-20℃保存; 试剂三:粉剂×1支,-20℃保存; 试剂四:液体×1支,-20℃保存; 产品说明: 葡萄糖-6-磷酸酶((glucose6phosphatase,G6Pase,EC3.1.3.9)广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,变旋酶和葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NAD+还原生成NADH,在340nm下测定NADH生成速率,即可反映G6P活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤: 一、样本的前处理: 1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞 数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加

入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组 织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 3、血清(浆)样品:直接检测。 二、测定步骤: 1、分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。 工作液的配制:临用前将试剂二、试剂三和试剂四转移到试剂一中混合待用;用不完的试剂4℃保存一周; 2、将工作液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)预热5分钟。 3、在1mL石英比色皿中加入50μL样本和950μL工作液,立即混匀,记录340nm处 初始吸光值A1和2min后的吸光值A2,计算ΔA=A2-A1。 注意:在该试剂盒中,若ΔA大于0.3,需将样本用提取液稀释适当倍数后测定,使ΔA小于0.3可提高检测灵敏度。计算公式中乘以相应稀释倍数。 G6P活性计算: 1、血清(浆)G6P活力计算 单位定义:每毫升血清(浆)每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P(U/mL))=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中G6P活力计算 (1)按样本蛋白浓度计算 单位定义:每mg组织蛋白每分钟生成1nmol NADH定义为一个酶活力单位。 G6P(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-PGDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号:BC2100 规格:50T/48S 产品内容: 试剂一:液体100mL×1瓶,4℃保存。 试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前配制,加入5mL试剂一,混匀。 试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前配制,加入5mL试剂一,混匀。; 产品说明: 磷酸戊糖途径途径中6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶6PGDH依次催化NADPH 合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。 6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH在340nm有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定340nm吸光度增加速率,计算6PGDH活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿和蒸馏水。 操作步骤: 一、样本的处理 称约0.1g组织,加入1mL试剂一,冰上充分研磨,10000rpm4℃离心10min,取上清液,待测。 二、测定步骤 1、紫外分光光度计预热30min以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零。 2.试剂一置于37℃水浴预热30min以上。 3.加样表:在比色皿中依次加入 试剂名称(μL)测定管(μL)空白管(μL) 样本100-

蒸馏水-100 试剂一700700 试剂二100100 试剂三100100 于340nm处测定3min内吸光值变化,第0s吸光值记为A1,第180s吸光值记为A2。记△A测定=A2测定-A1测定,△A空白=A2空白-A1空白。 三、6PGDH活性计算: 1)按蛋白浓度计算 活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U(U/mg pr)。 6PGDH酶活性(U/mg prot)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(Cpr×V样)÷T =536×(△A测定-△A空白)÷Cpr (2)按样本鲜重计算 活性单位定义:每克组织每分钟催化产生1nmol NADPH的酶量为1U(U/mg prot)。 6PGDH酶活性(U/g鲜重)=[(△A测定-△A空白)÷(ε×d)×106×V反总]÷(W÷V样总×V样)÷T =536×(△A测定-△A空白)÷W ε:NADPH摩尔消光系数,6.22×103L/moL/cm;d:比色皿光径,1cm; V反总:反应体系总体积,0.001L;V样:反应体系中加入粗酶液体积,0.1mL; Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL;V样总:提取液体积,1mL; T:反应时间,3min;W:样本质量,g。 注意事项: (1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在提取当日完成酶活性测定,粗酶液避免反复冻融; (2)试剂二和试剂三须现配现用,当天未用完试剂保存在4℃,可保存1周。 (3)若样本初始(0s)读值大于0.5且△A测定小于0.1,可尝试将样本进行稀释后测定。

生物化学原理- 糖酵解

第十五章糖酵解 本章主线: 糖酵解 丙酮酸代谢命运 (乙醇发酵乳酸发酵) 糖酵解调控 巴斯德效应 3种单糖代谢 (果糖、半乳糖、甘露糖) 一、糖酵解 糖酵解概述: ●位置:细胞质 ●生物种类:动物、植物以及微生物共有 ●作用:葡萄糖分解产生能量 ●总反应:葡萄糖+2ADP+2 NAD++2Pi →2 丙酮酸+2ATP+2NADH+2H++2H2O 具体过程: 第一阶段(投入A TP阶段): 1分子葡萄糖转换为2分子甘油醛-3-磷酸;投入2分子ATP。 ○1 反应式:葡萄糖+ ATP→葡萄糖-6-磷酸+ADP 酶:己糖激酶(需Mg2+参与) 是否可逆:否 说明: ●保糖机制——磷酸化的葡萄糖被限制在细胞内,磷酸化的糖带有负电荷的磷酰基,可防 止糖分子再次通过质膜。(应用:解释输液时不直接输葡萄糖-6-磷酸的原因) ●己糖激酶以六碳糖为底物,专一性不强。 ●同功酶——葡萄糖激酶,是诱导酶。葡萄糖浓度高时才起作用。 ○2 反应式:葡萄糖-6-磷酸→果糖-6-磷酸 酶:葡萄糖-6-磷酸异构酶 是否可逆:是 说明:

●是一个醛糖-酮糖转换的同分异构化反应(开链?异构?环化) ●葡萄糖-6-磷酸异构酶表现出绝对的立体专一性 ●产物为α-D-呋喃果糖-6-磷酸 ○3 反应式:果糖-6-磷酸+ATP→果糖-1,6-二磷酸+ADP 酶:磷酸果糖激酶-I 是否可逆:否 说明: ●磷酸果糖激酶-I的底物是β-D-果糖-6-磷酸与其α异头物在水溶液中处于非酶催化的快 速平衡中。 ●是大多数细胞糖酵解中的主要调节步骤。 ○4 反应式:果糖-1,6-二磷酸→磷酸二羟丙酮+甘油醛-3-磷酸 酶:醛缩酶 是否可逆:是 说明: ●平衡有利于逆反应方向,但在生理条件下,甘油醛-3-磷酸不断地转化成丙酮酸,大大 地降低了甘油醛-3-磷酸的浓度,从而驱动反应向裂解方向进行。 ●注意断键位置:C3-C4 ○5 反应式:磷酸二羟丙酮→甘油醛-3-磷酸 酶:丙糖磷酸异构酶 是否可逆:是 说明: ●葡萄糖分子中的C-4和C-3 →甘油醛-3-磷酸的C-1; 葡萄糖分子中的C-5和C-2 →甘油醛-3-磷酸的C-2; 葡萄糖分子中的C-6和C-1 →甘油醛-3-磷酸的C-3。 ●缺少丙糖磷酸异构酶,将只有一半丙糖磷酸酵解,磷酸二羟丙酮堆积。 第二阶段(产出A TP阶段):此阶段各物质的量均加倍 2分子甘油醛-3-磷酸转换为2分子丙酮酸;产出4分子ATP ○6 反应式:甘油醛-3-磷酸+NAD++Pi→1,3-二磷酸甘油酸+NADH+H+ 酶:甘油醛-3-磷酸脱氢酶 是否可逆:是 说明: ●酵解中唯一一步氧化反应。是一步吸能反应,与第7步反应耦联有利于反应进行。 ●NAD+是甘油醛-3-磷酸脱氢酶的辅酶 ●1,3-二磷酸甘油酸中形成一个高能酸酐键。 ●无机砷酸(AsO43-)可取代无机磷酸作为甘油酸- 3-磷酸脱氢酶的底物,生成一个不稳

6-磷酸葡萄糖异构酶检测在类风湿关节炎中的意义

血清中可溶性葡萄糖6-磷酸异构酶含量在类风湿性关节炎的诊断价值葡萄糖6磷酸异构酶Glucose-6-phosphateisomerase(GPI) ELISA测定试剂盒是国际首家专利产品。经五年有研究,该试剂特异性高、灵敏度与抗CCP类似。 类风湿关节炎诊断以往检测指标是类风湿因子(rheumatoid factor,RF)近来的抗胍氨酸环肽抗体(抗CCP抗体)已经使RA检测的敏感性和特异性有所提高,但是RA病人体内存在多种自身抗体和很多其他生化异常,候选的抗原还有Ⅱ型胶原、热休克蛋白60、角蛋白和软骨糖蛋白39等。最近发现葡萄糖-6-磷酸-异构酶(glucose-6-phosphate isomerase, GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)病人血清和关节液中明显增高,甚至还有报道认为抗GPI抗体与RA相关。 GPI又称为D-葡萄糖-6-磷酸-酮异构酶(D-glucose-6-phosphate ketol-isomerase),主要功能是催化6-磷酸葡萄糖和6磷酸果糖转化。最早在1968年因为非球形红细胞溶血性贫血而得到认识。近来在T 细胞受体的转基因小鼠模型(K/B X N)中,小鼠所发生的炎症性关节炎与人类RA相似,而且会持续产生抗GPI 抗体。2001年Schaller[2]等在RA血清、关节液中检测到高水平的抗GPI抗体(64%),而Lyme病相关的关节炎、SS和正常人群(3%)则很少,并认为该抗体与RF无相关性。此外,还在RA病人的关节液和血清中发现高浓度的GPI及其免疫复合物,通过共聚焦显微镜和免疫组化发现RA病人肥大滑膜或滑膜绒毛的小动脉和毛细血管有高密度的GPI表达,可能是由血管内皮生长因子(VEGF)所引起。Schaller等认为GPI是通过内皮细胞或者滑液中的可溶性蛋白递呈给免疫系统,并认为GPI抗原在RA的病理过程中起作用。 在RA病人血清和关节液中明显增高的GPI是否会对RA有帮助,或者成为RA病人病情活动的标记之一。试验结果显示RA病人组较对照组的血清中GPI浓度显著增高(P<0.001),尤其大于2ug/ml的病例数显著多,而且与关节肿胀和疼痛成正相关,而SLE、PM/DM、SS病人高于0.33ug/ml的比率分别为2%、0%和0%,而OA和AS病人的GPI浓度则在正常范围内,这说明GPI在部分RA病人中升高是有一定特异性,而且和活动有一定关系。尤其我们发现其特异性高达97.9%,阳性预计值高达93.3%,因此有理由认为GPI有可能成为RF和抗CCP抗体以外的第三种标记物。 葡萄糖6磷酸异构酶Glucose-6-phosphateisomerase(GPI) ELISA测定试剂检测在炎症、肿瘤、甲肝、乙型病毒性肝炎、自身免疫性疾病时无干扰。 以下产品已获得国食药监局产品注册证 校准品(质控品)系列 国内首家获得批准文号、注册上市的ApoAⅠ及ApoB次级参考血清等脂类校准品、特种蛋白复合校准品。特种蛋白试剂系列 ApoAⅠ及ApoB单/双试剂;Pre-Alb单/双试剂;Lp(a);C3、C4;Tf;IgG、IgA、IgM;CRP;视黄醇结合蛋白;尿微量白蛋白;纤维结合蛋白;血浆纤维蛋白原;纤溶酶原;铜蓝蛋白;抗凝血酶-Ⅲ;B因子。生化试剂系列 ASTm;AST;HDL-C;LDL-C;直接胆红素;总胆红素;果糖胺;甘油三酯;血氨酶法;肌酸激酶;肌酸激酶MB型同工酶。 酶标试剂 GPI(类风湿关节炎的诊断) 本公司提供多克隆CK-MM抗血清或OEM,多克隆ApoAⅠ及ApoB抗血清或OEM! 本公司诚招北京市、重庆市、贵州省、山西省、新疆、甘肃、内蒙古、宁夏、青海、河北代理商。 上海北加生化试剂有限公司电话:+86-21-62985493 邮编:200060 地址:上海市澳门路356号三维大厦19楼A座传真:+86-21-62980579 E-mail:Lybb@https://www.360docs.net/doc/1211187978.html,

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性检测试剂盒说明书 微量法

葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)活性检测试剂盒说明书微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC3325 规格:100T/48S 产品内容: 提取液:液体120mL×1瓶,4℃保存; 试剂一:液体12mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存; 试剂三:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂四:试剂×1瓶,4℃保存;临用前用4mL蒸馏水溶解备用。 试剂五:液体4mL×1瓶,4℃保存; 标准品:液体1mL×1支。10μmol/mL磷标准液。 产品说明: 葡萄糖-6-磷酸酶((glucose6phosphatase,G6Pase,EC3.1.3.9)是一种水解磷酸化合物的磷酸酶,广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中,是糖异生过程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保证血糖的动态平衡方面起着重要的作用。 G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和无机磷,利用钼蓝法测定无机磷含量的增加,即可反映G6P活性。试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、粗酶液提取: 1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取

液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 3、血清(浆)样品:直接检测。 二、测定步骤: 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。 2、将10μmol/mL标准液用蒸馏水稀释16倍至0.625μmol/mL的标准溶液备用。 3、工作液的配制:试剂二中加入5mL试剂一充分溶解备用。 O:试剂三:试剂四:试剂五=2:1:1:1的比例配制,配好的定磷剂应为浅黄色。若4、定磷试剂的配制:按H 2 无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,定磷剂现用现配。 注意:配试剂最好用新的烧杯、玻棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。 5、操作表: 测定管对照管标准管空白管样品(μL)2020 工作液(μL)80 充分混匀,37℃(哺乳动物)或者25℃(其他物种)水 浴反应10min。反应后迅速放入沸水中沸水浴10min。取出 冷却至常温 工作液(μL)-80 10000rpm常温离心10min后取上清。 上清液(μL)2525-- 标准溶液(μL)--25- 定磷试剂(μL)125125125125 蒸馏水(μL)100100100125 充分混匀,40℃反应10min。吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中,测量660nm处吸光值,测定管、对照管、空白管、标准管测定的吸光度分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。计算△A=A测定管-A对照管,△A标准=A标准管-A空白管。 三、G6P活性计算:

基因工程概论

连接产物 ●重组分子 ●未连接的载体分子 ●未连接的D N A片段 ●载体的自连 ●含有错误插入片段的重组D N A分子 1转化—细菌吸收D N A的方式 自然界中,转化并不是细菌获取遗传信息的主要方式。 细菌必须经过物理或化学处理后可提高吸收D N A的能力,经过这样处理的细菌称为感受态。 1.1大肠杆菌感受态的制备 ●感受态细胞(Competent cells): 受体细胞经过一些特殊方法的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 1.1大肠杆菌感受态的制备 ●在冷的盐溶液中转化效率提高。一般利用50m M的C a C l2,或者氯化铷。 –原理:与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构,并发生收缩,使细胞膜出现孔隙。 ●42°C热激处理。 1.2筛选转化细胞 1n g的p U C8可以产生1000-10000个转化子,意味着只吸收了0.01%的D N A分子。 1.3其他的转化方法 ●电穿孔驱动的完整细胞转化(电激转化法) ●接合转化 ●微注射法 ●λ噬菌体的转染 ●P E G介导的细菌原生质体转化 1.3其他的转化方法 ●电激转化 –受体细胞在脉冲电场作用下,细胞壁上形成一些微孔通道,使得D N A分子直接与裸露的细胞膜脂双层结构接触,并引发吸收过程。 –可以转化较大的质粒,适用于所有的细菌。 1.3其他的转化方法 ●接合转化 –是由接合型质粒完成的。 –涉及到三种菌株的混合:受体菌、含有接合质粒的辅助菌以及含有待转化重组质粒的供体菌。

–重组质粒和接合质粒必须有相容性。 1.3其他的转化方法 ●P E G介导的细菌原生质体转化 –高渗溶液中细菌培养至对数生长期 –溶菌酶的等渗液处理,形成原生质体。 –加入D N A样品和聚乙二醇等渗液 –离心除去聚乙二醇,固体培养。 ●适用于芽孢杆菌和链霉菌等革兰氏阳性菌、酵母、霉菌甚至植物。 表5-1大肠杆菌5种常用转化方法的比较 2重组子的鉴定 ●利用插入失活选择p B R322重组 ●载体:含有β-半乳糖苷酶基因l a c Z的调控序列和头146个a a的编码序列 ●宿主:缺失了l a c Z’基因,可编码β-半乳糖苷酶C端序列 ●α-互补:l a c Z基因上缺失近操纵基因区段的突变体可以与带有完整的近操纵基因区段的β- 半乳糖苷酶隐性突变体之间实现互补。 ●转染:是将纯化的噬菌体D N A通过热激的方法转化感受态大肠杆菌的过程。 ●体外装配i n v i t r o p a c k a g i n g:将重组的λ分子装配成头-尾结构的病毒粒子。 ●体外装配 –c o s位点突变的噬菌体的单品系系统 –另一种系统需要两种缺陷品系。一个是基因D的突变体,另一个是基因E的突变体。 3.1噬菌斑 ●λ形成的是真正的噬菌斑。 ●M13引起细菌生长的减慢,而使细菌的浓度低于周围细胞。 4重组噬菌体的鉴定 ●利用插入失活鉴定 ●λ噬菌体的c I基因的插入失活 ●利用S p i表型选择 ●根据λ基因组的大小筛选 4.1利用插入失活鉴定 4.2λ噬菌体的c I基因的插入失活 4.3利用S p i表型选择 4.4根据λ基因组的大小筛选 λ装配系统,只有37k b-52k b的D N A分子可以进入头部结构。 思考题

4.糖代谢

第四章糖代谢 一、A型选择题 01. 淀粉经α-淀粉酶作用后的主要产物是 A. 麦芽糖及异麦芽糖 B. 葡萄糖及麦芽糖 C. 葡萄糖 D. 麦芽糖及临界糊精 E. 异麦芽糖及临界糊精 02. 糖酵解时下列哪一对代谢物提供~P使ADP生成ATP A. 3-磷酸甘油醛及6-磷酸果糖 B. 1,3-二磷酸甘油酸及磷酸烯醇式丙酮酸 C. 3-磷酸甘油酸及6-磷酸葡萄糖 D. 1-磷酸葡萄糖及磷酸烯酸式丙酮酸 E. 1,6-双磷酸果糖及1,3-二磷酸甘油酸 03. 下列有关葡萄糖磷酸化的叙述中,错误的是 A. 已精激酶有四种同工酶 B. 己糖激酶催化葡萄糖转变成6-磷酸葡萄糖 C. 磷酸化反应受到激素的调节 D. 磷酸化后的葡萄糖能自由通过细胞膜 E. 葡萄糖激酶只存在于肝脏和胰腺p细胞 04. 下列哪个酶直接参与底物水平磷酸化 A. 3-磷酸甘油难脱氢酶 B. α-酮戊二酸脱氢酶 C. 琥珀酸脱氢酶 D. 磷酸甘油酸激酶 E. 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 05. 1分子葡萄糖酵解时可生成几分了ATP? A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 06. 1分子葡萄糖酵解时可净生成几分子ATP? A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 07. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可生成几个ATP A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 08. 糖原的1个葡萄糖基经糖酵解可净生成几个ATP? A. 1 B. 2 C. 3 D. 4 E. 5 09. 肝脏内据酵解途径的主要功能是 A. 进行糖酵解 B. 进行糖有氧氧化供能 C. 提供磷酸戊精 D. 对抗糖异生

E. 为其他代谢提供合成原料 10. 糖酵解时丙酮酸不会堆积的原因是 A. 乳酸脱氢酶活性很强 B. 丙酮酸可氧化脱羧生成乙酰CoA C. NADH/NAD+比例太低 D. 乳酸脱氢酶对两酮酸的K m值很高 E. 丙酮酸作为3-磷酸甘油难脱氢反应中生成的NADH的氢接受者 11. 6-磷酸果糖激酶-l的最强别构激活剂是 A. AMP B. ADP C. 2,6-双磷酸果糖 D. A TP E. 1,6-双磷酸果糖 12. 与糖酵解途径无关的酶是 A. 己糖激酶 B. 烯醇化酶 C. 醛缩酶 D. 丙酮酸激酶 E. 磷酸烯酸式丙酮酸羧激酶 13. 下列有关糖有氧氧化的叙述中哪一项是错误的? A. 糖有氢氧化的产物是CO2及H2O B. 糖有氧氧化可抑制糖酵解 C. 糖有氧氧化是细胞获取能量的主要方式 D. 三羧酸循环是在糖有氧氧化时三大营养素相互转变的途径 E. 1分子葡萄糖氧化成CO2及H2O 时可生成38分子ATP 14. 丙酮酸脱氢酶复合体中不包括 A. FAD B. NAD+ C. 生物素 D. 辅酶A E. 硫辛酸 15. 不能使同酮酸脱氢酶复合体活性降低的是 A. 乙酰CoA B. A TP C. NADH D. AMP E. 依赖cAMP的蛋白激酶 16. 下列关于三羧酸循环的叙述中,正确的是 A. 循环一周可生成4分子NADH B. 循环一周可使2个ADP磷酸化成A TP C. 乙酰CoA可经草酸乙酸进行糖异生 D. 百二酸可抑制延胡索酸转变成苹果酸 E. 琥珀酸CoA是α酮戊二酸氧化脱羧的产物 17. 1分子乙酰COA经三羧酸循环氧化后的产物是 A. 草酰乙酸 B. 草酸乙酸和CO2 C. CO2+H2O D. 草酰乙酸十CO2+H2O E. 2CO2+4分子还原当量

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD) 简介(英文)

What is G6PD deficiency? Glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency, or G6PD deficiency for short, is the most common “inborn metabolic disorder” in the world. This means that from the time a baby is born, thre is already something wrong with how his body makes and breaks important substances. According to statistics, about 400 million people have G6PD deficiency, and it is most common in Africa, Southeast Asia and the Middle East.Babies with G6PD deficiency have very little or no enzyme called Glucose-6-Phosphate Dehydrogenase (G6PD). An enzyme is a kind of protein that speeds up chemical reactions in the body. The enzyme G6PD is especially important to red blood cells. If this enzyme is lacking or missing, red blood cells are easily destroyed. Another name for G6PD deficiency is favism because some people who have it, usually those living in the Meditteranean region, react very badly to fava beans. What causes G6PD deficiency? In order to understand what causes G6PD deficiency, one must first learn a bit about genes and chromosomes. Genes are like the body’s blueprints. They contain instructions on how specific parts of the body are made. For example, if the isntructions in your hair genes say your hair is black, your hair will be black. Genes are packaged into threadlike structures called chromosomes. A chromosome is very much like a beaded bracelet. The beads are the different genes that give instructions for different part of the body; the entire bracelet is the chromosome. Genes usually come and act in pairs. One member of a specific pair comes from the father, and the other member comes from the mother. The members of a pair are located on paired chromosomes. All normal human beings have 23 pairs of chromosomes. Each of the first 22 pairs contain the same number and kind of genes. The last and 23rd pair is the sex chromosomes. They are different from the first 22 pairs in that they do not have the same number and kind of genes. The sex chromosomes contain the genes that determine whether a baby will be a girl or a boy. There are 2 kinds of sex chromosomes, X and Y. All baby girls have two X chromosomes. All baby boys have one X and one Y. The gene that gives instructions on how G6PD is made is found in the X chromosome only, thus G6PD deficiency is described as X-linked. If a baby girl gets one defective G6PD gene from either of her parents, she will not have G6PD deficiency because she has another G6PD gene that can do the work (remember: a baby girl has two X chromosomes, thus two G6PD genes). But if she gets two defective G6PD genes from both her parents, she will have G6PD deficiency. On the other hand, a baby boy whose G6PD gene is defective will surely get G6PD deficiency because the Y chromosome has no G6PD gene. A defective G6PD gene will give wrong instructions on how to make the enzyme G6PD. As a result, too little or none of it is made. What are the harmful effects of G6PD deficiency? G6PD has a very small but strategic role in protecting the body from substances that can cause damage to cells or oxidative substances. Because of this important role, G6PD is normally found in all parts of the body. To be sure, most parts of the body also keep a “spare” enzyme, one that can do the w ork of G6PD in case it is lacking or missing entirely.

生物化学总结下 生科 第八章 糖代谢 一名词

生物化学总结下 ————By 生科2005 狐狸Z 第八章糖代谢 一、名词解释: 糖酵解途径:是指糖原或葡萄糖分子分解至生成丙酮酸的阶段。是体内糖代谢的最主要的途径。糖酵解:是指糖原或葡萄糖分子在人体组织中,经无氧分解为乳酸和少量ATP的过程,和酵母菌使葡萄生醇发酵的过程基本相同,故称为糖酵解作用。 糖的有氧氧化:指糖原或葡萄糖分子在有氧条件下彻底氧化成水和二氧化碳的过程。 巴斯德效应:指有氧氧化抑制生醇发酵的作用 糖原储积症:是一类以组织中大量糖原堆积为特征的遗传性代谢病。引起糖原堆积的原因是患者先天性缺乏与糖代谢有关的酶类。 底物循环:是指两种代谢物分别由不同的酶催化的单项互变过程。催化这种单项不平衡反应的酶多为代谢途径中的限速酶。 乳酸循环:指肌肉收缩时(尤其缺氧)产生大量乳酸,部分乳酸随尿排出,大部分经血液运到肝脏,通过糖异生作用和成肝糖原或葡萄糖补充血糖,血糖可在被肌肉利用,这样形成的循环(肌肉-肝-肌肉)称为乳酸循环。 磷酸戊糖途径:指机体某些组织(如肝,脂肪组织等)以6-磷酸葡萄糖为起始物在6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化下形成6-磷酸葡萄糖酸进而代谢生成磷酸戊糖为中间代谢物的过程,又称为己糖磷酸支路。 糖蛋白:由糖链以共价键与肽链连接形成的结合蛋白质。 蛋白聚糖:由糖氨聚糖和蛋白质共价结合形成的复合物。 别构调节:指某些调节物能与酶的调节部位以次级键结合,使酶分子的构想发生改变,从而改变酶的活性,称为酶的别构调节。 共价修饰:指一种酶在另一种酶的催化下,通过共价键结合或一曲某种集团,从而改变酶的活性,由此实现对代谢的快速调节。 底物水平磷酸化:底物水平磷酸化指底物在脱氢或脱水时分子内能量重新分布形成的高能磷酸根直接转移ADP给生成ATP的方式。 激酶:使底物磷酸化,但必须由ATP提供磷酸基团催化,这样反应的酶称为激酶。 三羧酸循环:乙辅酶A的乙酰基部分是通过三羧酸循环,在有氧条件下彻底氧化为二氧化碳和水的。这种循环也称为柠檬酸循环,它不仅是糖的有氧分解代谢的途径,也是机体内一切有机物的碳链骨架氧化成二氧化碳的必经途径。 1、什么是糖酵解?写出糖酵解过程的11步酶促反应方程式。 葡萄糖在人体组织中,经无氧分解生成乳酸的过程,和酵母菌使葡萄糖生醇发酵的过程基本相同,固称糖酵解作用。糖酵解:葡萄糖 丙酮酸。此反应过程一般在无氧条件下进行,又称为无氧分解。 (1)葡萄糖激酶作用下:葡萄糖→葡萄糖-6-磷酸; (2)己糖磷酸异构酶作用:葡萄糖-6-磷酸→果糖-6-磷酸 (3)果糖磷酸激酶作用:果糖-6-磷酸→果糖-1,6-二磷酸 (4)醛缩酶作用:果糖-1,6-二磷酸→二羟基丙酮+甘油醛-3-磷酸

生物化学试题-糖代谢

生物化学试题-糖代谢

糖代谢1 三、典型试题分析 (一)A型题 1,位于糖酵解、糖异生、磷酸戊糖途径、糖原合成及糖原分解各条代谢途径 交汇点上的化合物是(1997年生化试题) A.1-磷酸葡萄糖B.6—磷酸葡萄糖C.1,6--磷酸果糖 D.3-磷酸甘油醛E.6—磷酸果糖 [答案] B 2.糖的氧化分解、糖异生和糖原合成的交叉点是(1。999年生化试题) A.1—磷酸葡萄糖B.6—磷酸果糖C,6—磷酸葡萄糖 D.磷酸二羟丙酮E.丙酮酸 [答案) C 3. 肌糖原不能分解补充血糖,是因为缺乏 A. 丙酮酸激酶B,磷酸烯醇式丙酮酸C. 糖原磷酸化酶

D.葡萄糖6—磷酸酶 E. 脱枝酶 [答案] D 4.三羧酸循环中不提供氢和电子对的步骤是(1997年研究生考题) A.柠檬酸→异柠檬酸B,异柠檬酸→α—酮戊二酸 C.α—酮戊二酸→琥珀酸D.琥珀酸→延胡索酸 E.苹果酸→草酰乙酸 (答案] A 5.下列哪个酶在糖酵解和糖异生中都起作用(1998年研究生考题) A. 丙酮酸激酶B,3-磷酸甘油醛脱氢酶C. 果糖二磷酸酶D.己糖激酶 E,葡萄糖-6—磷酸酶 [答案] B (二)X型题 1,糖酵解的关键酶有(1996年生化试题) A. 己糖激酶B.磷酸果糖激酶

C,丙酮酸激酶D.乳酸脱氢酶 [答案] A、B、C 2,天冬氨酸、乳酸和甘油异生为糖经历的共同反应是(1997年生化试题) A. 磷酸烯醇式丙酮酸一2—磷酸甘油酸 B.3-磷酸甘油醛()磷酸二羟丙酮 C.3-磷酸甘油酸一1,3—二磷酸甘油酸D.1,6-二磷酸果糖一6—磷酸果糖 [答案] B、D 3,糖原合成途径需要 A.ATP B.UTP C.小分子糖原D.无机磷酸和激酶 (答案] A、B、C 4。三羧酸循环过程的关键酶是(2001年生化试题) A.o—酮戊二酸脱氢酶B,柠檬酸合酶,, C.异柠檬酸脱氢酶D.丙酮酸脱氢酶.[答案) A、B、C 四、测试题

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