人肿瘤坏死因子
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。
试剂盒组成
120倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶
2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（450ng/L）0.5ml×1瓶
3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液2ml×1瓶
4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份
5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张
6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行实验。
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准
6．底物请避光保存。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
检测范围：
20ng/L -400ng/L
规格：
96人份/盒
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
2017年肿瘤坏死因子TNF-α分析报告
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正文目录 一、单克隆抗体：生物药领域最大的子行业，2016年全球市场900亿美金4 1)单克隆抗体：生物药领域最大的子行业，占据生物药市场的43% (4) 2)肿瘤坏死因子-α（TNF-α）：细胞信号通路中重要一环，药物研发的热门靶点 (5) 二、五大TNF抑制剂的结构、适应症、价格等的比较分析 (6) 1)TNF抑制剂的结构比较：四个单克隆抗体，一个融合蛋白 (6) 2)TNF抑制剂的销量比较：修美乐连续五年位居全球药品销量冠军 (7) 3)TNF抑制剂的适应症比较：修美乐和恩利获批的适应症较多 (10) 4)生物仿制药陆续获批，修美乐、类克和恩利面临冲击 (11) 三、我国单抗行业起步较晚，TNF抑制剂潜在市场规模约125亿元 (12) 1)我国单抗药物市场规模约70亿元，在生物制药领域占比较低 (12) 2)我国TNF抑制剂市场：三家国企+三家进口 (12) 3)我国TNF抑制剂市场约15亿元，潜在市场规模125亿元 (14) 四、相关建议 (15) 五、风险提示 (15) 图目录 图1：全球生物药市场 (4) 图2：临床研发和上市的生物药靶点 (5) 图3：TNF信号通路 (6) 图4：五大TNF抑制剂的结构比较 (7) 图5：修美乐的全球销量（单位：亿美金） (8) 图6：恩利的全球销量（单位：亿美金） (8) 图7：类克的全球销量（单位：亿美金） (9)
图8：Cimzia的全球销量（单位：亿美金） (9) 图9：Simponi的全球销量（单位：亿美金） (10) 图10：中国生物药品市场规模（单位：亿元） (12) 图11：样本医院TNF抑制剂的销量占比 (13) 表目录 表1：2016年全球药品销售前十名 (7) 表2：五大TNF抑制剂的适应症和价格比较 (10) 表3：TNF抑制剂的生物类似物 (12) 表4：在申报的进口TNF抑制剂 (13) 表5：我国上市的TNF抑制剂规格和费用 (14) 表6：部分在申报的以TNF为靶点的生物药 (14)
肿瘤坏死因子与肿瘤的研究进展
肿瘤坏死因子与肿瘤的研究进展 发表时间：2018-02-09T09:45:50.713Z 来源：《医师在线》2017年11月下第22期作者：张林王哲 [导读] TNF-α表达水平的增高预示着炎症反应的发生以及进一步加重，并提示有癌变倾向，对诊断早期病变有指导性价值。 （毓璜顶医院检验科；山东烟台264000） 摘要：肿瘤坏死因子（TNF-α）是一种由单核一巨噬细胞系统分泌产生的多功能细胞因子, 具有调节机体的免疫功能和导致肿瘤细胞坏死的特性。近年来， TNF-α在抗肿瘤中的作用引起国内外学者的高度关注。本文通过对TNF-α与肿瘤的研究做一综述，为生物学和医学提供参考依据。 【关键词】肿瘤坏死因子；肿瘤坏死因子受体；肿瘤；关系 1. TNF-α的分子结构 人的TNF-α基因长约2.76kb，小鼠为2.78kb，结构非常相似，均由4个外显子和3个内含子组成，分别定位于第6对和第17对染色体短臂上。 2. TNF-α的分布 TNF-α来源非常广泛，如单核-巨噬细胞系统、淋巴细胞、内皮细胞、平滑肌细胞等。TNF-α在体内以两种形式存在：可溶性的TNF-α（sTNF-α）和膜相关的TNF-α（mTNF-α）。 3. TNF-α的生物学活性 TNF-α是一种多功能的细胞因子，具有广泛的生物学特性。TNF-α不仅对肿瘤细胞具有细胞毒性和生长抑制作用；同时在机体的细胞功能调节、免疫和炎症反应等过程中起重要作用[1]。 4. TNF-α与肿瘤 TNF-α是迄今发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子。它在体内、体外均对肿瘤细胞有明显的细胞毒性，能特异性杀伤或抑制肿瘤细胞，而对正常细胞无毒性作用[2]。近年来，越来越多的国内外学者开始研究肿瘤的发生机制，期望能够找到癌症作用过程的关键靶点，从而实现肿瘤的预防及治疗。 4.1 TNF-α与皮肤癌 目前，许多致癌化合物被广泛应用于建立各个靶器官的肿瘤模型，进而研究人类肿瘤发生发展过程中的关键分子机制。Masami Suganuma等学者建立了小鼠皮肤癌的模型。同时Marques CM等学者对TNF-α在皮肤黑色素瘤发生发展中的影响进行了研究[3]。他们的研究表明， TNF-α在小鼠皮肤癌的发生发展过程中起到非常关键的作用，提示TNF-α很可能在人类癌症发生过程中也起到相同的作用。 4.2 TNF-α与乳腺癌 乳腺癌是危害女性健康的常见恶性肿瘤，近年来在我国发病率呈上升趋势。有研究表明，高剂量的TNF-α处理引起肿瘤中血管退行性改变和出血性坏死，表明TNF-α可以作为抗癌物质应用。但是，也有研究表明，在体内，肿瘤细胞中内源性TNF-α的分泌并不杀伤肿瘤，反而通过诱导恶性乳腺上皮细胞等肿瘤细胞增殖，并促进血管再生、肿瘤细胞侵袭和转移等引起肿瘤发生发展[4]。因此，到目前为止TNF-α并未广泛用于乳腺癌治疗。随着对TNF-α研究的深入，对其在乳腺癌中发挥作用的了解更加清楚，可能有助于提高临床监测乳腺癌进展的水平，为治疗乳腺癌提供新的靶点。 4.3 TNF-α与肝癌 据流行病学调查显示，近年来肝癌的发病率急剧增高，尤其在患有非酒精性脂肪肝、肝纤维化、肝硬化的肥胖病人中更为突出。越来越多的研究表明，肝癌和炎症之间存在密切联系，许多分子机制被提出，它们对肝癌发展起到重要作用，包括最近报导的淋巴毒素信号肽。最近，Park等[5]证实IL6和TNF-α具有促肿瘤作用。TNF-α还能诱导依赖NF-κB基因编码的抗凋亡分子产生，促进细胞存活，从而发生致瘤作用。最后，通过对IL-6和TNF-α的研究，Park等为肝癌的预防和治疗提供了一个新的潜在靶点。 4.4 TNF-α与肺癌 在全球，肺癌的发病率和死亡率均癌症之首。近年来在我国发病率呈上升趋势，成为首位恶性肿瘤死亡原因。近年来发现炎症细胞因子在肺癌的发生、发展及转归中起重要作用。Yao LK1等[6]研究结果提示TNF-α在肺癌的发病和进展中起重要的调节作用，不仅将为肺癌的早期诊断提供可靠的理论基础，更为肺癌的治疗、药物的研制和筛查提供潜在的新靶点。 综上所述，TNF-α作为炎性因子，不仅只在炎症中表达增高，在肿瘤以及癌前病变中的表达也呈升高的趋势。TNF-α参与到全身各系统炎症与肿瘤性疾病的发生与发展之中。TNF-α在组织器官从炎症发展到癌变的过程当中，扮演了重要角色；并在恶性肿瘤的转移、浸润方面也具有关键作用。因此，TNF-α表达水平的增高预示着炎症反应的发生以及进一步加重，并提示有癌变倾向，对诊断早期病变有指导性价值。 参考文献： [1] Cosic I, Cosic D, Lazar K. Analysis of Tumor Necrosis Factor Function Using the Resonant Recognition Model. Cell Biochem Biophys. 2016 Jun;74(2):175-80. [2] Hu J, Yang T, Xu H. A novel anticancer agent icaritin inhibited proinflammatory cytokines in TRAMP mice. Int Urol Nephrol. 2016 Jun 9. [3] Marques CM, MacNeil S. Use of a Tissue Engineered Human Skin Model to Investigate the Effects of Wounding and of an Anti-Inflammatory on Melanoma Cell Invasion. PLoS One. 2016 Jun 7;11(6): [4] Yin Y, Chen X , Shu Y. Gene expression of the invasive phenotype of TNF-alpha-treated MCF-7 cells [J] . Biomed Pharmacother ,2009 ,63 (6) :421-428. [5] Eek Joong Park, Jun Hee Lee, etal. Dietary and genetic obesity promote liver inflammation and tumorigenesis by enhancing IL-6 and TNF expression. Cell, 2010, 140(2) :197-208. [6] Yao LK1, etal.Relationship between expression of HDAC2, IL-8, TNF-α in lung adenocarcinoma tissues and smoking. Zhonghua Yi Xue Za Zhi. 2016 May 17;96(18):1410-3.
肿瘤坏死因子α
肿瘤坏死因子 摘要恶性肿瘤疾病目前仍是全世界需要共同面对的一个医学难题，其发病隐匿，早期容易被忽视，而临床患者多数已到中晚期，此时的疾病已很难治疗。肿瘤坏死因子是一种能使肿瘤出血，并能抑制、杀伤体外培养的肿瘤细胞的蛋白类物质，1984年TNF基因的克隆开辟了临床试验的时代，是第一个用于肿瘤生物疗法的细胞因子，但因其缺少靶向性且有严重的副作用，对该基因的研究和应用形成了很大的障碍，目前很多研究人员正致力于该基因改造与应用。 关键词TNF、肿瘤 1TNF的生物学特征 TNF按其结构可以分为两种：TNFα和TNFβ。TNFα是一种单核因子，主要由活化的单核细胞和巨噬细胞产生，TNFβ是一种淋巴因子，由活化的T细胞和NK细胞产生，目前研究多为TNFα。 人的TNFα位于第6号染色体短臂上，与MHC紧密连锁[1]，人的TNFα基因大小为2.76kb，由4个外显子和3个内含子组成。TNFα的蛋白质结构有多种形成，有二聚体、三聚体、五聚体，其中有生物活性的是三聚体。TNFβ位于TNF α的5’端，同样由4个外显子和3个内含子构成，其中第4个外显子与TNFα高度同源，编码80%-90%的成熟蛋白质。 2 TNFα的来源与表达 TNFα在人体内的来源途径有很多，如单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、成纤维细胞等都可以在一定的条件下产生和释放TNFα。目前认为TNFα主要的生物合成场所有心、肝、肺、肾[2]。各种外来刺激如内毒素脂多糖(LPS)、肠毒素、霉菌抗原、某些寄生虫的溶解物、病毒颗粒等，均可以引起TNFα的表达与释放。 在正常情况下，TNFα只由心肌间质的巨噬细胞产生，在某些病理状态下，如感染或内毒素的刺激下，心脏可以产生TNFα，Giroir[3]等研究证实这一点，在这些应激状态下，成熟的心肌细胞同样可以产生TNFαmRNA及其蛋白质，且产生的量同巨噬细胞产生的差不多。 Kleine等[4]证实，在生理状态下，脑内在结构和功能方面与巨噬细胞相似的细胞如神经元、小胶质细胞、血管内皮细胞均可合成分泌TNF、IL-6等细胞因子。在炎症情况下，这些细胞因子的水平明显升高，且对中性粒细胞有明显趋化作用[5]。有研究表明，有大约20%的恶性肿瘤的发生与慢性炎症有关[6]。 3 TNFα受体 通过对TNFα分子一级结构的研究表明，C-末端在TNFα的生物学活性中起决定性作用。由于C-末端参与TNFα高级结构的构成，只要切掉1个氨基酸就可使TNFα丧失生物学活性。而N-末端的变化范围较大，适当改变其长度并不影响其生物学活性，N-末端还与TNFα对受体的结合能力密切相关，可能为与受体结合的部位。 TNFα生物学效应的发挥，有赖于其与靶细胞上的TNFR相结合，并通过受
重组人肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白治疗老年类风湿关节炎26例疗效
重组人肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗老年类风湿关节炎26例疗效【关键词】重组人肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白;类风湿关节炎 注射用重组人肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白〔商品名：益赛普(Etanercept，ETA)〕是人Ⅱ型肿瘤坏死因子(TNF)受体p75的膜外区与IgG的Fc段构建的融合蛋白，可特异性地阻断TNF-α与其细胞表面受体的相互作用〔1〕。本文对照观察ETA治疗活动性老年类风湿关节炎(RA)疗效,以探讨老年RA的最佳治疗方案。 1资料与方法 1.1临床资料所有病例来自于2006年9月至2008年2月本院风湿免疫科住院患者，均符合1987年美国风湿病协会修订的RA诊断标准〔2〕。其中ETA治疗老年组20例，女11例，男9例，年龄60~79岁，平均(65±6)岁。非ETA治疗老年组26例，女16例，男10例，年龄61~76岁，平均(65±4)岁。ETA治疗非老年组32例，女24例，男8例，年龄18~58岁，平均(46±11)岁。 1.2方法ETA治疗老年组与ETA治疗非老年组每周2次应用ETA 25 mg皮下注射，连续治疗3个月，同时口服甲氨蝶呤10 mg/w 或来氟米特20 mg/d;非ETA治疗老年组口服甲氨蝶呤10 mg/w或来氟米特20 mg/d。所有患者记录治疗前与治疗3个月后的休息痛、晨僵、关节肿胀数及关节肿胀指数、关节压痛数、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)分类及抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体，并进
行DAS28与ACR20、50、70评估。ACR20〔3〕为患者压痛及肿胀关节数有20%的改善以及下列5项中至少3项有20%改善，包括休息痛、日常生活能力、医生评价、患者评价、血沉或C反应蛋白。ACR50、ACR70采用相同的标准分别定义为50%及70%的提高。 1.3记录不良反应随时记录皮疹、发热、寒战、胃肠道反应及注射部位反应等，详细记录其发生时间、程度、频率、持续时间、采取措施。定期复查肝功、血、尿常规。 1.4统计学处理采用SPSS13.0软件包，数据以x±s表示，样本均数之间比较采用t检验，率的比较采用χ2检验。 2结果 2.1ETA治疗老年RA疗效与非ETA治疗老年组相比较，ETA 治疗老年组和ETA治疗非老年组治疗后的IgM型RF、ESR、CRP水平及DAS28评分均明显低于非ETA治疗老年组;ETA治疗非老年组治疗后的IgM型RF水平明显低于ETA治疗老年组，见表1。在ACR20、50、70上，三组均有显著的改善，提示三种治疗均有效;但达到ACR50、70的患者，ETA治疗老年组(90%)和ETA治疗非老年组(9 3.7%)明显高于非ETA治疗老年组的65.4%(P<0.05)，ETA治疗老年组与ETA治疗非老年组相比无显著差异，提示ETA注射治疗RA疗效更佳，见表2。表1三组治疗前、后各项指标比较表2三组治疗疗效比较 2.2不良反应ETA治疗老年组出现胃肠道反应1例，血白细胞下降1例，肝功能异常1例;非ETA治疗老年组出现胃肠道反应2例，血白细胞下降2例，肝功能异常1例，皮疹1例;ETA治疗非老年
注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(强克)说明书(完整版)
注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白使用说明书 【药品名称】 通用名：注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白 商品名：强克 英文名：Recombinant Human TNF Receptor-Ig Fusion Protein for Injection 汉语拼音：Zhusheyong Chongzu Ren Erxing Zhongliuhuaisiyinzi Shouti －Kangti Ronghedanbai 【性状】 本品为无菌白色冻干粉针剂。 【主要成分】 每瓶含重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白25毫克，甘露醇40毫克，蔗糖10毫克，三羟甲基氨基甲烷1.2毫克。用1毫升灭菌注射用水溶解。【药理毒理】 1.药理重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白是一个二聚体的融合蛋白，包含人75KDa肿瘤坏死因子受体（TNFR）（p75）的细胞膜外配体结合部分与人IgG1的Fc片段，包含934个氨基酸，表观分子量约为150K道尔顿（KDa）。 TNF是机体自然产生的一种细胞因子，参与正常的炎症和免疫反应。在强直性脊柱炎关节病变的炎症反应中，TNF起着重要的作用。TNF存在55KDa蛋白（p55）和75KDa蛋白（p75）两类受体，它们均以单体的形式存在于细胞表面。TNF的生物学活性取决于它与细胞表面两类受体分子的结合。 重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白的作用机制是竞争性地与TNF 结合，阻止TNF与细胞表面TNF受体的结合，抑制TNF的生物学活性。 2.毒理小鼠急性毒性试验结果显示，静脉注射1.09g/kg剂量的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，未见毒性反应。猴长期毒性试验结果显示，每周2次连续皮下注射180天15.0 mg/kg剂量的重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白，未见有明显的毒性。 【药代动力学】
肿瘤坏死因子α
肿瘤坏死因子α 文章目录*一、肿瘤坏死因子α的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、肿瘤坏死因子α的 正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、肿瘤坏死因子α 的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、肿瘤坏死因子α的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、肿瘤坏死因子α的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应 肿瘤坏死因子α的基本信息 1、定义α肿瘤坏死因子(TNF α)是一种主要由巨噬细胞和 单核细胞产生的促炎细胞因子,并参与正常炎症反应和免疫反应。α肿瘤坏死因子在许多病理状态下产生增多,包括败血症、恶性 肿瘤、心脏衰竭和慢性炎性疾病。在重症类风湿关节炎患者的血液及关节中都可发现肿瘤坏死因子增多。 2、专科分类肿瘤科 3、检查分类免疫检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹空腹
肿瘤坏死因子α的正常值和临床意义 1、正常值 4.3±2.8ng/ml 2、临床意义测定血清或其他体液中TNF浓度,对原发性或继发性肾小球疾病、器官移植性排异、肿瘤、重症感染等疾病有诊断意义。 肿瘤:许多肿瘤细胞可产生TNF,因此在多种肿瘤时机体内TNF表达明显升高。TNF又可通过细胞毒作用,杀死肿瘤细胞或抑制某些肿瘤细胞增殖。 风湿性关节炎患者的滑膜中有大量TNF。 在脓毒败血症、感染性肺炎等严重炎性疾病时血清中TNF含量明显增高。许多寄生虫病患者中TNF也显著改变。艾滋病患者体液中TNF也高于正常人。疟疾抗原、病毒和细菌均可诱导TNF 产生,TNF又反过来具有抗病毒、抗细菌、抗疟疾作用。 TNF与移植排斥反应密切相关,在患者的血清或尿液中TNF 的表达与排斥反应程度呈正相关。 肿瘤坏死因子α的检查过程及注意事项 1、检查过程用双抗体夹心酶免疫分析法。将TNF α单克隆抗体包被于PVC板上,样品种的TNF α和单抗体结合后再与辣根过氧化物酶标记免抗TNFα多克隆抗体结合,过氧化物酶与TMB
人肿瘤坏死因子
人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 药品名称： 通用名：人肿瘤坏死因子α（TNF-α）酶联免疫分析试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它组织液中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肿瘤坏死因子α呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。 试剂盒组成 120倍浓缩洗涤液30ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（450ng/L）0.5ml×1瓶 3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液2ml×1瓶 4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行实验。 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 3．可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为（300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
重组改构人肿瘤坏死因子说明书--天恩福
注射用重组改构人肿瘤坏死因子说明书 【药品名称】 通用名：注射用重组改构人肿瘤坏死因子 商品名：天恩福 英文名：Recombinant Human Tumor Necrosis Factor 汉语拼音：Zhusheyong ChongzuGaigouRen Zhongliuhuaisiyinzi 【成份】主要组成成份为重组改构人肿瘤坏死因子。 【性状】白色或微黄色疏松体 【适应症】 本品与NP、MVP化疗方案联合，可试用于经其他方法治疗无效或复发的晚期非小细胞肺癌患者。 本品与BACOP化疗方案联合，可试用于经化疗或其他方法治疗无效的晚期非霍奇金氏淋巴瘤患者。 【规格】50万IU/瓶 【用法用量】 与上述化疗方案联合使用，每周的第3－7天用药，剂量为60－90万单位/m2,用生理盐水稀释至20ml，5－8分钟内恒速静脉推注。 【不良反应】 在本品的临床研究中，先后共有约500例受试者接受了本品的治疗，试验中，本品短疗程应用的近期不良反应主要表现为发热、寒战，发生率在50%左右。其他不良反应包括血压变化、乏力、头晕头痛、关节酸痛、骨骼肌痛、恶心呕吐、白细胞减少、血小板下降、血红蛋白下降、肝功能异常等。出现上述不良反应时，可采取相应的对症治疗措施。如出现严重不良反应，应及时停药。在同类产品的临床研究中，曾出现有呼吸困难的不良反应，应引起注意。天然肿瘤坏死因子为多效应细胞因子（见上述药理作用）。研究发现，TNF水平升高与许多疾病的病理过程密切相关，如类风湿性关节炎、成人呼吸窘迫综合症（ARDS）、肝肾功能紊乱等。其中ARDS的病情与支气管肺泡液中TNF水平正相关，所以不能排除过量TNF可引起ARDS并促使病情进一步恶化的可能。本品为改构的肿瘤坏死因子，改构后其性质和特点又可能会发生较复杂的变化，由此可能对造血系统、免疫系统、循环系统、呼吸系统、消化系统、神经系统等产生不良影响和长期后续效应，特别是对某些肿瘤可能具有潜在的促进作用，以及诱发与自身免疫性相关的疾病等，因此对本品可能发生的远期和潜在不良反应需给予密切关注。 【禁忌症】 1.对本品所含成份过敏者禁用。 2.严重肝肾功能、心肺功能异常者禁用。 3.患有其他严重疾患不能耐受本品不良反应者禁用。 【注意事项】 1.鉴于天然TNF对不同肿瘤细胞的作用不同（对于部分肿瘤细胞具有促进生长的作用），而本品与天然TNF具有结构和生物学功能的相似性，所以为保证本品治疗效果及避免不良后果（加速肿瘤进展），必须在上述适应症范围内谨慎应用本品，不得随意扩大适应症。 2.本品必须在三甲医院内并在有经验的临床医师指导下使用。 3.过敏体质，特别是对肽类药品或生物制品有过敏史者慎用。 4.静脉给药时及给药后2小时内，医护人员应严密观察患者，如出现不良反应，可给予对症处理. 5.由于本品的某些潜在不良反应尚无试验资料加以证实或排除，因此，在使用本品期间，应密切观察肝肾功能、血液系统、循环系统、呼吸系统等的变化，如发现异常，应及时停药。
重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性胸腔积液或腹腔积液的临床研究
目录 引言 (1) 研究对象与方法 (3) 结果 (7) 讨论 (11) 结论 (15) 参考文献 (16) 综述 (20) 附录 (29) 中英文对照缩略词表 (31) 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文 (32) 致谢 (33)
重组改构人肿瘤坏死因子治疗恶性胸腔积液或腹腔积液的临床研究引言 引言 恶性胸腔积液（malignant pleural effusion, MPE）是指由肺癌或其他部位恶性肿瘤累及胸膜或胸膜原发性肿瘤所致的胸膜腔积液[1]，是中晚期恶性肿瘤患者的常见并发症之一，常见于肺癌、乳腺癌和淋巴瘤[2]。肿瘤类型在男性和女性之间存在一定差异，男性常见为肺癌、淋巴瘤、胃肠道肿瘤；女性常见为乳腺癌、生殖道肿瘤、肺癌、淋巴瘤[3]。恶性胸腔积液的发生机制主要是肿瘤阻塞引起壁层胸膜血管和淋巴系统引流障碍，或肿瘤转移至纵隔淋巴结而导致胸腔积液吸收减少，或原发肿瘤和转移性病变直接侵犯和伴随的炎症增加毛细血管通透性所导致[4,5]。恶性胸腔积液常常进展迅速，且积液量较多，易并发肺不张和肺部反复感染[6]，影响心肺功能，造成严重的呼吸困难和循环功能障碍。恶性胸腔积液不仅严重影响患者的生活质量，而且大大降低了患者行进一步治疗的机会，甚至会促进患者死亡。及时诊断和治疗恶性胸腔积液能在很大程度上改善患者的症状及体征、提高其生活质量并且延长生存时间，对患者的后期治疗有着重要意义。目前治疗恶性胸腔积液的主要目的是缓解患者的各种严重症状、改善其生活质量[7], 并防止积液再次产生[8]。恶性腹腔积液是恶性肿瘤扩散转移至腹腔引起的腹腔内异常体液潴留[9]，它的出现往往也预示肿瘤已到晚期，据相关文献报道[10]，其一年生存率低于10%。恶性腹腔积液绝大部分是由于继发性恶性肿瘤侵犯腹膜引起的，如胃癌、卵巢癌、肠癌、胰腺癌等，极少数是由于原发的腹膜癌引起的。恶性腹腔积液的临床症状主要表现为腹胀、消化功能严重障碍、乏力消瘦，体检可发现腹围增大、移动性浊音阳性等。恶性腹腔积液具有顽固、难治、易复发的特点,不仅加快疾病进展,更严重影响患者的生存质量[11]。 关于恶性胸腔积液或恶性腹腔积液治疗的文献报道及临床研究颇多，主要涉及到外科手术治疗、全身化疗、放射治疗、胸腔穿刺和置管引流、局部腔内药物灌注治疗、中医治疗等方法[12-21]，各治疗手段均具有一定的疗效、适应症、禁忌症以及毒副反应，适用于不同的病例及肿瘤不同临床阶段。但总体上对恶性胸腔积液的治疗仍停留在姑息治疗阶段，通常是以胸腔的局部治疗为主[22]。胸腔局部用药如硬化剂、抗肿瘤药物、生物免疫制剂等，可直接抑制或杀伤肿瘤细胞以及促进胸膜粘连闭锁，从而抑制胸腔积液形成，疗效均比较好[23]。近年来， 1
TNF肿瘤坏死因子的介绍
肿瘤坏死因子（TNF） 1975年carswell等发现接种bcg的小鼠注射lps后，血清中含有一种能杀伤某些肿瘤细胞或使体内肿瘤组织发生血坏死的因子，称为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,tnf)。1985年shalaby把巨噬细胞产生的tnf命名为tnf-α ，把t淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin,lt)命名为tnf-β。tnf-α又称恶质素。 1.tnf的产生 （1）tnf-α是一种单核因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，lps是较强的刺激剂。ifn-γ、m-csf、gm-csf对单核细胞/巨噬细胞产生tnf-α有刺激作用，而pge则有抑制作用。前单核细胞系u937、前髓细胞系hl-60在pma刺激下可产生较高水平的tnf-α。t淋巴细胞、t细胞杂交瘤、t淋巴样细胞系以nk细胞等在pma刺激下也可分泌tnf-α。sac、pma、抗igm可刺激正常b细胞产生tnf-α。此外，中性粒细胞、lak、星状细胞、内皮细胞、平滑肌细胞亦可产生tnf-α。 （2）tnf-β是一种淋巴因子，抗原和丝裂原均可刺激t淋巴细胞分泌tnf-β。pma刺激rpmi1788b 淋巴母细胞可分泌高水平tnf-β。 2.tnf的分子结构和基因 （1）人的tnf-α基因长约2.76kb，小鼠为2.78kb，结构非常相似，均由4个外显子和3个内含子组成，与mhc基因群密切连锁，分别定位于第6对和第17对染色体上。1984年从hl-60、u937等细胞中克隆成功rhu tnf-α cdna，并在大肠杆菌中获得高表达。人tnf-α前体由233个氨基酸残基组成，含76个氨基酸残基的信号肽，切除信号肽后成熟型tnf-α为157氨基酸残基，非糖基化，第69位和101位两个半胱氨酸形成分子内二硫键。rhu tnf-α分子量为17kda。小鼠tnf-α前体为235氨基酸残基，信号肽79氨基酸残基，成熟的小鼠tnf-α（rmutnf-α）分子量为17kda，由156个氨基酸残基组成，第69位和100位两个半胱氨酸形成分子内二硫键，有一个糖基化点，但糖基化不影响其生物学功能。rhu tnf-α与rmu tnf-α有79%氨基酸组成同源性，tnf-α的生物学作用似无明显的种属特异性。最近有人报道通过基因工程技术表达了n端少2个氨基酸（val、arg）的155氨基酸人tnf-α，具有更好的生物学活性和抗肿瘤效应。此外，还有用基因工程方法，将tnf-α分子氨基端7个氨基酸残基缺失，再将8pro、9ser和10asp改为8arg、9lys和10arg，或者再同时将157leu改为157phe，改构后的tnf-α比天比天然tnf体外杀伤l929细胞的活性增加1000倍左右，在体内肿瘤出血坏死效应也明显增加。tnf-α和β发挥生物学效应的天然形式是同源的三聚体。 （2）人和小鼠tnf-β基因分别定位于第6和第17号染色体。hutnf-β分子由205个氨基酸残基组成，含34氨基酸残基的信号肽，成熟型hu tnf-β分子为171个氨基酸残基，分子量25kda。rhu tnf-β分子由202氨基酸残基组成，包括33个氨基酸残基的信号肽，成熟分子169
肿瘤坏死因子(一)
肿瘤坏死因子(一) 作者：孙嗣国，马保安，周勇，范清宇 【关键词】,肿瘤坏死因子Osteoclastformationandboneresorptioninducedbytumornecrosisfactorα 【Abstract】AIM:Toinvestigatewhethertumornecrosisfactorα(TNFα)caninduceosteoclastformationfromperiph eralbloodmononuclearcells(PBMCs)independentofreceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand( RANKL).METHODS:PBMCswereculturedinthepresenceofmacrophagecolonystimulatingfactor （MCSF）andTNFαinvitro.RANKLblockingagentRANK:FcandneutralizingantiTNFαantibodywererespectivelya ddedtotheculture.Attheendoftheculture,PBMCsculturedoncoverslipswerefixedandstainedfortartr ateresistantacidphosphatase(TRAP),https://www.360docs.net/doc/331768624.html,cunaresorptionondentineslices,afunct ionalmarkerofosteoclast,wasalsoobservedusingscanningelectronmicroscopyandlightmicroscopy.R ESULTS:TNFαinducedtheformationofmultinucleatedcells(MNCs)whichwereTRAPpositiveandshow edevidenceoflacunaresorptionpitformationondentineslices.RANK:Fcdidnotinhibitthisprocesswhil eneutralizingantiTNFαantibodycompletelyblockedboththeformationofMNCsandlacunaresorption. CONCLUSION:InthepresenceofMCSF,TNFαcandirectlyinducemononuclearphagocyteosteoclastpre cursorstodifferentiateintoosteoclasticcellscapableoflacunaresorption. 【Keywords】TNFα;osteoclast;boneresorption 【摘要】目的：验证肿瘤坏死因子α（TNFα）是否可以直接诱外周血单核细胞（PBMCs）分化为具有骨吸收作用的破骨细胞.方法：小白鼠PBMCs体外培养中加入TNFα和白细胞介素1α（IL1α）及巨噬细胞克隆集落刺激因子（MCSF）；同时，分别加入细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的拮抗剂RANK:Fc和抗TNFα中和抗体.对培养终末细胞作组织化学染色，检测破骨细胞特征性标志物抗酒石酸磷酸酶（TRAP）的表达；并以象牙磨片上虫蚀样骨吸收陷窝的形成为指标检测其生物学活性.结果：PBMCs体外培养形成大量TRAP阳性的多核细胞（MNCs）；象牙磨片上见到虫蚀样骨吸收陷窝，后者的面积对TNFα呈剂量依赖性.RANK:Fc 对此现象无抑制作用，而抗TNFα中和抗体可完全阻断该现象的发生.结论：TNFα能够直接诱导PBMCs分化为具有骨吸收功能的破骨细胞. 【关键词】肿瘤坏死因子α；破骨细胞；骨吸收 0引言 破骨细胞是由单核巨噬系统的破骨细胞前体细胞分化而来的多核细胞(MNCs).多种炎性及非炎性的骨与关节的病变，如骨质疏松、风湿性关节炎、无菌性松动等都与破骨细胞代谢异常有关.近年来的研究表明肿瘤坏死因子(TNFα)通过多种方式参与破骨细胞的分化及生物学活性的调控〔1,2〕.在本实验中，我们将小白鼠外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)及RAW246.7细胞体外培养，并加入TNFα及其他因子，验证TNFα是否可以直接诱导破骨细胞前体细胞分化为具有骨吸收活性的破骨细胞. 1材料和方法 1.1材料 1.1.1试剂αMEM中加入100u/mL青霉素，10mg/L链霉素和10mmolL谷氨酸及100mL/L胎牛血清(Invitrogen,UK)配制成完全培养基(MEM/FBS)；重组人巨噬细胞克隆刺激因子（MCSF）、鼠可溶性细胞核因子κB受体活化因子配体(solvablereceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,sRANKL)、RANKL拮抗剂（RANK:Fc），TNFα，IL1α，抗TNFα中和抗体均购于R&DSystems公司（UK），抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)试剂盒购于Sigma公司（UK）.
肿瘤坏死因子的研究进展
文章编号: 1007-6611(2006)03-0311-04 肿瘤坏死因子的研究进展 吕志敢, 郭 政 (山西医科大学第二临床医学院麻醉科, 太原 030001) 关键词: 肿瘤坏死因子; 肿瘤坏死因子受体; 病理学; 免疫学 中图分类号: Q71,R392,R73 文献标识码: A 1975年,Carswell发现被细菌感染后的小鼠血清中有一种蛋白类物质可致肿瘤出血,并能抑制、杀伤体外培养的肿瘤细胞,被命名为肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TN F),又叫恶病质因子(cachectin)。从此对它的研究进入了一个新的时期,至今方兴未艾,几十年来取得了巨大的进展。本文对近年来有关TN F2α的研究进展作简要的综述。 1 TNF2α的生物学特性 人类TNF2α基因大小为2.76kb,由4个外显子和3个内含子组成,与MHC紧密连锁,定位于第6对染色体短臂上,小鼠的基因为2.78kb,与人的结构非常相似,定位于第17对染色体短臂上。TNF按其结构分两型:TNF2α和TNF2β,其中由活化的巨噬细胞、单核细胞和T细胞产生的能使肿瘤坏死的因子称为TN F2α(旧称TN F),又称恶病质因子(cachectin);而把由活化的T细胞和N K细胞产生的淋巴毒素(lymphotoxin,L T)称为TN F2β,目前对其功能所知有限。目前研究较多的是TN F2α,它是一种由157个氨基酸组成、相对分子质量为17000的可溶性多肽,以二聚体、三聚体或五聚体的形式存在于溶液中,成熟型TN F2α的活性形式为三聚体。TN F2β基因位于TN F2α基因的5′端,相隔1.2kb,每个基因约有3000个碱基对,有4个外显子和3个内含子,其中第4个外显子与TN F2α高度同源,编码80%-90%的成熟蛋白质,这些均提示这两个基因来自同一个祖先。但前3个外显子和3个内含子都是不同源的,调节基因复制的5′端也有很大区别,这些说明这两个基因是不同的[1]。 2 TNF2α的来源与表达 TN F2α来源极广泛,体内的多种细胞,如单核/巨噬细胞、淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、内皮细胞、表皮细胞、角质细胞、星形细胞和成骨细胞等均具有产生和释放TN F2α的能力。目前认为心、肝、肺、肾是TN F2α的生物合成场所[2]。TN F2α的主要刺激因素是脂多糖(L PS)、病毒、真菌、过敏毒素、IL21和免疫复合物等。 在正常情况下TN F2α仅在心肌间质的巨噬细胞中产生。G iroir等[3]的研究表明,成熟的心肌细胞在某些应激状态下也具有产生TN F2αmRNA及其蛋白质的能力,此时产生的TN F2α可直接影响心功能,参与了多种心脏病的病理过程。感染和内毒素血症是心脏产生TN F2α的重要刺激因素。Kapa2 dia等[2]证明在内毒素的刺激下心肌细胞和巨噬细胞几乎产生同样多的TN F2α。 体内TN F2α的表达具有高度的组织特异性。在生理条件下,脾、肝、肺、胸腺及肾脏的组织均有TN F2αmRNA的表达;而在脂多糖刺激后,心脏、胰腺、子宫及输卵管等多脏器均快速合成表达TN F2αmRNA及蛋白质[4]。 K leine等[5]证实,脑内多种在结构和功能方面与巨噬细胞相似的细胞如神经元、小胶质细胞、血管内皮细胞在生理状态下均可合成分泌TN F、IL26等细胞因子,在炎症情况下这些因子水平多显著升高,并对中性粒细胞有明显趋化作用。 3 TNF2α受体(TNFR)的分类及表达 3.1 TN F2α的生物学活性主要是通过细胞膜上的特异受体传递信号而实现的,TN F2α受体(TN FR)广泛存在于肝、肺、肾、肠道及肌肉组织中。TN F2α与靶细胞膜上的TN FR结合产生生物学效应,通过受体后效应将信息传递到胞核,使mRNA表达并进而合成蛋白质。Douzinas等[6]认为,TN F2α等细胞因子一方面与脏器细胞膜上的受体结合产生效应;另一方面,细胞因子与循环中的可溶性受体结合,使循环中的细胞因子减少,但在组织中的表达却增加,其在局部中的过度生成导致脏器损害。 基金项目: 国家自然科学基金资助项目(30471656)
肿瘤坏死因子简介
肿瘤坏死因子 1975年E.A. Carswell等人发现接种卡介苗的小鼠注射细菌脂多糖后，血清中出现一种能使多种肿瘤发生出血性坏死的物质，将其命名为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF)。八十年代人们发现其在消耗症中起了重要作用，又称恶液质素。TNF主要由活化的巨噬细胞，NK细胞及T淋巴细胞产生。1985年Shalaby把巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α，把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin，LT)命名为TNF-β。虽然TNF-α与TNF-β仅有约30%的同源性，但它们却拥有共同的受体。TNFα的生物学活性占TNF总活性的 70 %～95 %，因此目前常说的TNF多指TNF-α。1984年TNF基因的克隆开辟了临床试验的时代，是第一个用于肿瘤生物疗法的细胞因子，但因其缺少靶向性且有严重的副作用，目前仅用于局部治疗。 1.别名:恶液质素（Cachectin）巨噬细胞毒素（Macrophage cytotoxin）坏 死素（Necrosin ）细胞毒素(Cytotoxin) 肿瘤坏死因子α(Tumour necrosis factor-α) 出血因子(Hemorrhagic factor) 巨噬细胞毒性因子(Macrophage cytotoxic factor) 分化诱导因子(Differentiation-inducing factor) 2. 来源:巨噬细胞(Macrophages) 自然杀伤细胞(Natural killer cells) T淋巴细胞(T-lymphoblastoid Cells) B淋巴细胞(B-lymphoblastoid Cells) 肥大细胞(Mast cells) 成纤维细胞(Fibroblasts) 平滑肌细胞(Smooth muscle cells) 乳腺肿瘤细胞(Breast tumor cells) 卵巢肿瘤细胞(Ovarian tumour cells) 星形胶质细胞(Astrocytes) L-929细胞(L-929 cells) 枯氏细胞(Kupffer’s cells) 上皮细胞(Epidermal cells) 颗粒细胞（Granulosa cells）
人肿瘤坏死因子α(TNF-α)说明书
人肿瘤坏死因子人肿瘤坏死因子αα（TNF-α）酶联免疫酶联免疫分析分析分析 试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围检测范围：： 96T 20 ng/L -400 ng/L 使用目的使用目的：： 本试剂盒用于测定人血清样本中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。用纯化的人肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肿瘤坏死因子α（TNF-α），再与HRP 标记的肿瘤坏死因子α（TNF-α）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α（TNF-α）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml ×1瓶 7 终止液 6ml ×1瓶 2 酶标试剂 6ml ×1瓶 8 标准品（800ng/L ） 0.5ml ×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 4 样品稀释液 6ml ×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A 液 6ml ×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1个 标本标本要求要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 400 ng/L 5号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液 200 ng/L 4号标准品 150μl 的5号标准品加入150μl 标准品稀释液 100 ng/L 3号标准品 150μl 的4号标准品加入150μl 标准品稀释液 50 ng/L 2号标准品 150μl 的3号标准品加入150μl 标准品稀释液 25 ng/L 1号标准品 150μl 的2号标准品加入150μl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、