延胡索煎液中的生物碱含量测定

延胡索煎液中的生物碱含量测定

一、实验内容

1.醋煮法制备延胡索(或用醋炒延胡索)

2.延胡索煎液总生物碱含量测定

3.延胡索煎液镇痛试验

二、目的要求

通过对延胡索炮制前后生物碱含量测定及镇痛试验，进而了解延胡索的炮制意义。

三、实验器材及药品

烧杯，电炉、分液漏斗、lOml容量瓶、回收装置、5ml刻度吸管、圆底烧瓶、碘瓶、碱式滴定管、注射器、秒表、计数器，氯仿、硫酸、氨水、无水硫酸钠、氢氧化钠、甲基红、溴甲酚绿、试纸、醋酸等。

四、实验方法

(一)炮制

1.延胡索除去杂质，洗净，打碎成颗粒状，干燥。

2.醋延胡索取净延胡索，加醋与适量水(平药面)，用文火加热，煮至透心，水干时取出，捣碎成颗粒状，干燥。

延胡索每100kg，用醋20kg。

(二)总生物碱的含量测定

1.样液制备精密称取延胡索、醋延胡索各10g，分别置于500ml烧杯中，加水(200ml、100ml)煎煮2次，每次微沸20分钟，用脱脂棉过滤，加氨水调至pHl0以上，移入250m1分液漏斗中，用氯仿萃取至无生物碱反应，合并萃取液，加20ml蒸馏水洗涤，再用5ml氯仿洗涤水层，合并氯仿。加无水硫酸钠3g脱水后，回收氯仿至小体积；转入10ml容量瓶中，加氯仿至刻度，备用。

2.含量测定精密吸取上述样品液5ml，至100ml锥形瓶中水浴挥去氯仿，加氯仿2ml溶解残渣，加0.0l(mol／L)硫酸20ml，水浴挥去氯仿，加甲基红－溴甲酚绿指示剂2滴，用0.02(mol／L)氢氧化钠液滴定，终点由红色变为绿色(或以电位测定法指示终点，等当点为pH5.1)。

计算方法：总生物碱含量以延胡索乙素计。每毫升0.01(mol／L)硫酸溶液相当于7.1084mg乙素。

(三)镇痛试验——化学刺激法

1.样品液的制备取延胡索生品及醋制品各25g，水煎煮2次(400ml，250m1)微沸25分钟，过滤，浓缩至100ml备用。

2.试验方法取小鼠30只，体重18～22g(雄性)随机分为三组，对照组给予等体积生理盐水，给药组分别灌以上述样液0.6ml／只，40分钟后，各鼠腹腔注射0.7％醋酸0.1ml／10g，观察并记录15分钟内产生扭体反应的动物数或每组扭体反应的次数，与生理盐水组比较其镇痛效果。

五、注意事项

(1)水煎液因含淀粉而不易过滤，需用少量棉花过滤。

(2)萃取时出现乳化不易分层时，可用玻棒搅拌使其分层。

六、思考题

(1)延胡索的炮制方法有哪些?醋炙的原理，目的是什么?，

(2)延胡索总生物碱的含量测定有哪几种方法?

实验九中药炮制前后煎出物的比较

一、实验内容

1.饮片不同厚度其煎出物含量的比较(甘草、黄芩)。

2.种子类炮制前后其煎出物含量的比较(王不留行、牵牛子)。

3.动物类炮制前后煎出物含量的比较(穿山甲、鸡内金)。

二、目的要求

通过对一些中药炮制前后煎出物含量比较，了解中药炮制的目的。

三、实验器材及药品

烧杯、扭力天平、分析天平、250ml三角瓶、冷凝管、吸管(25ml、lOOml)、瓷蒸发皿、布氏漏斗、抽滤瓶(300m1)、水浴锅、干燥器等。

四、实验方法

(一)供试品制备

1.饮片的切制取黄芩、甘草按规定的方法切成不同厚度的饮片。

黄芩2mm；甘草2mm。

2.种子类和动物类药物分别按规定的方法炮制。

(二)水溶物测定

分别取药材样品各约4g，称定重量(准确至0.01g)，置250ml

三角瓶中，精确加水lOOml，塞紧，称定重量(准确至0.01g)，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，移置干燥器中，冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算供试品中含水溶性浸出物的百分数。

五、注意事项

(1)回流时注意控制火力，防止暴沸。

(2)吸取滤液时，不要搅拌，力求一次吸取。

六、思考题

根据中药炮制前后煎出物含量测定结果，说明中药炮制的目的和意义。

实验十煅法

一、实验内容

1.明煅法：明矾、石膏、龙骨。

2.煅淬法：自然铜、炉甘石、代赭石。

3.扣锅煅法：棕榈、血余、灯心。

4.自然铜煅制前后含铁量比较。

二、目的要求

(1)了解煅法的目的和意义。

(2)掌握三种煅制方法的操作要点及火候、注意事项和质量标准。

三、工具设备

1.煅制炉子、铁铲、锅、坩锅、烧杯、量筒、火钳、电炉、大小瓷蒸发皿，搪瓷盘、台秤、马福炉，盐泥、米醋等。

2.含铁量测定电炉、石棉网、250m1三角烧瓶、玻璃漏斗、量杯、酸式滴管、分析天平，活性炭、硫酸-磷酸混合液、0.5％二苯胺磺酸钠、0.05(mo1／L)重铬酸钾标准液等。

四实验方法

(一)明煅法

1.明矾取明矾除去杂质，筛或拭去浮灰，打碎，秤重，置于适宜的容器内，用武火加热，切勿搅拌，煅至水分完全蒸发，无气体放出，全部泡松，呈白色蜂窝状固体时，取出放凉，称重。

成品性状：本品呈洁白色，无光泽，蜂窝状块，体轻松，手捻易碎。2.石膏取净石膏块，称重，置适宜容器内或直接置火源上，用武火加热，煅至红透，取出放凉，碾细，秤重。

成品性状：本品煅后呈洁白色或粉白色条状或块状，表面松脆，易剥落，光泽消失，手捻易碎。

3.龙骨取净龙骨，敲成小块，称重，置适宜容器内，用武火加热，煅至红透，取出放凉，称重。

成品性状：本品呈灰白色或灰褐色，质酥脆，吸舌力强。

(二)煅淬法

1.自然铜取净自然铜小块，置适宜容器内，用武火加热，煅至红透，取出后立即放入醋内浸淬，如此反复煅淬数次，至黑褐色，表面光泽消失并酥松，取出，摊凉。

自然铜每100kg，用米醋30kg。

成品性状；本品为不规则碎粒，灰黑色或黑褐色，质酥脆，无金属光泽。带醋气。

2.炉甘石取净炉甘石，置适宜容器内，用武火加热，煅至红透，取出后立即倒入水中浸淬，搅拌，倾取混悬液，来透者沥干后再煅烧，反

复浸淬2～3次。合并混悬液，静置，倾去上层清水，干燥研细。

成品性状:本品呈白色或灰白色的极细粉末。

3.代赭石取净代赭石碎块，置适宜容器内或直接置火源上，用武火加热，煅至红透，取出后立即放入醋内浸淬，如此反复煅淬数次，直至酥脆，取出干燥，碾成细粉。

代赭石每lOOkg，用米醋30kg。

成品性状，本品呈暗褐色或紫褐色，光泽消失.略带醋气。

(三)扣锅煅法

1.棕榈取净棕毛段或棕板块，置适宜容器内，上扣一较小容器，两容器结合处用盐泥封固，上压重物，并贴一块白纸条或大米数粒，先用文火加热，后用武火煅至白纸或大米呈深黄色时，停火，待凉后，取出。成品性状，本品为黑褐色或黑色的块状或毛状物，有光泽。

2.血余取头发除去杂质，反复用稀碱水洗去油垢，清水漂净，晒干，下与棕榈煅法同。

成品性状,本品为不规则的小块状，乌黑光亮，呈蜂窝状，研之清脆有声。质轻易碎，有不快的臭气。

3.灯心取净灯心，扎成小把，下与棕榈煅法同。

成品性状：呈炭黑色，有光泽。质轻松，易碎。

(四)自然铜煅制前后含铁量的测定

取生、煅自然铜粉末各3g精密秤定，置250ml三角烧瓶内，加水lOOml，煮沸25分钟，加入活性炭0.1g，继续煮沸1.0分钟，过滤。滤渣加水80ml，煮沸20分钟，过滤，合并滤液，加入硫酸－磷酸混合液15ml，0.5％二苯胺磺酸钠3滴，用0.05(mol／L)重铬酸钾标准液滴定至稳定的蓝紫色，即得。每1ml重铬酸钾溶液(0.Olmol／L)相当于

3.351mg的铁。

五、注意事项

(1)煅明矾，中途不得停火，并切忌搅拌。

(2)煅淬药物火力要强，并要趁热淬之。

(3)扣锅煅的过程中如发现黄泥开裂漏气现象应及时补固。煅透后务须放冷方能打开。

(4)煅锅内药物不宜放得过多过紧，以容器的2／3为宜。

(5)煅制自然铜过程中，会产生硫的升华物或有毒的二氧化硫气体，故应

在通风处操作。

(6)自然铜煎煮时宜用小火，并需不断搅拌，防止瓶底结块与爆溅。加活性炭时，应离火，以免引起爆沸。

(7)生自然铜溶液颜色较深，滴定时显黄色，影响终点观察，可再加混合酸15ml。

六、思考题

(1)实验中各药炮制目的是什么?

(2)煅制三法各有何特点?分别适合于哪类药材?

(3)用重铬酸钾法测定2价铁离子含量时，滴定前为什么要加入硫—磷混合酸?加入混合酸后为什么要立即滴定?

实验十一中药炒炭前后止血作用的比较

一、实验内容

棕榈、地榆、槐米、大蓟等出血、凝血时间的测定。

二、目的要求

通过实验了解中药炒炭的目的和意义。

三、实验器材及药品

乳钵、电炉、剪刀，秒表、5ml注射器、小鼠灌胃器、兔开口器、导尿管，滤纸条，毛细管(Φlmm)、小砂轮、婴儿磅秤、天平；小鼠、家兔、生理盐水等。

四、实验方法

(一)药物炮制

棕榈按煅炭法锻制存性；地榆、槐米、大蓟按炒炭法炒炭存性。

(二)药液的制备

称取生药和炭药100g，分别置1000ml烧杯中，加水400ml煎煮1小时，用纱布过滤，残渣加水20ml，再煎煮30分钟，纱布过滤，合并滤液浓缩至lOOml。

(三)出血时间测定

取体重18～22g小鼠30只，随机分成3组，称重、标号。按0.8ml／20g剂量，分别将生药水煎液和炭药水煎液给两组小鼠灌胃。半小时后，剪去小鼠尾部3mm，每隔30秒，用滤纸轻轻吸去血滴，但不能挤压尾部，直至血流自然停止，用秒表记录出血时间。另以生理盐水组对照，对所得结果进行统计学处理，求得P值。

(四)凝血时间测定—毛细血管法

(1)取1.5～2.Okg的家兔，将兔左耳缘静脉用针刺破一处；待血液自行流出后，用内径为lmm的玻璃毛细管吸取血液，血液流出时开始记录时间，每隔30秒轻轻折断毛细管一段，若有血丝出现即为凝血。测定凝血时间后，家兔以20ml/g的剂量灌以药液，1小时后，再于右耳缘静脉取血，测定凝血时间，进行自身比较。

(2)取小鼠按上法分组，灌胃，30分钟后，用毛细管(Φlmm)于鼠眼球静脉取血，至管内血柱达5cm后取出，当血液进入毛细管时开始计时，每30秒轻轻折断毛细管一段，若有血丝出现即为凝血，测得凝血时间。另以生理盐水为对照组，所得结果进行统计学处理，求得P值。

五、注意事项

(1)测定出血时间时，应将小鼠固定，并尽量使之保持安静。

(2)测定凝血时间时，要轻折毛细管。

六、思考题

中药炒炭的目的是什么?在临床上常用于治疗哪些疾病?

实验十二蒸法

一、实验内容

1.蒸大黄、何首乌。

2.大黄炮制前后蒽醌类成分的含量比较。

二、目的要求

(1)了解蒸制的目的和意义，辅料的性质和作用。

(2)掌握蒸制的方法，程序、质量要求。

(3)通过大黄不同炮制品的成分含量比较，探讨大黄的炮制意义。

三、实验器材及药品

1.蒸制蒸锅、搪瓷盘、台秤、烧杯、量筒、筛子、漏斗、纱布；黄酒、黑豆等。

2.大黄含量测定分光光度计、小型索氏提取器、200ml及25ml容量瓶、250ml分液漏斗、lOOml磨口三角烧瓶、250ml三角烧瓶、冷凝器、水浴锅、刻度吸管，秤量瓶，1.8-二羟基蒽醌、15％氢氧化钠-2％氢氧化铵溶液、乙醚、氯仿、混合酸(10ml冰醋酸加2ml 25％盐酸)等。四、实验方法

(一)蒸制

1.大黄先将大黄切成小块，置于容器内，用黄酒拌匀，再装入砂锅中(或密闭容器内)，锅口密闭，隔水加热。先用武火加热至圆气后用文火，蒸至酒被药物吸尽，大黄内外均呈黑褐色时，取出放凉，出罐，干燥。

大黄每lOOkg，用黄酒30kg。

成品性状：本品内外均呈黑褐色，略有清香气。

2.何首乌取净何首片或块，置于容器内，用黑豆汁拌匀，再装入砂锅中(或密闭非铁质容器内)，锅口密闭，隔水加热。先用武火加热至圆气后用文火，蒸至汁液吸尽并呈棕褐色时，取出放凉，出罐，干燥。何首乌每lOOkg，用黑豆lOkg。

黑豆汁制法：取净黑豆加适量水，煮约2～3小时，滤汁，再加水煮2小时，滤汁，两次汁合并约是黑豆的3倍。

成品性状：本品表面呈棕黑色，质坚硬，断面角质样棕褐色或黑色。味微甘。

(二)含量测定

1.样品制备取生、制大黄饮片，粉碎，过40目筛。

2.标准曲线的绘制精密秤取25mg 1,8-二羟基蒽醌，置250ml容量

瓶中，氯仿溶解并稀释至刻度。

精密量取上述标准溶液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.OOml，分别放入25ml容量瓶中，在水浴上蒸去氯仿，加5％氢氧化钠-2％氢氧化铵混合碱液至刻度，摇匀，30分钟后在525nm处测定光密度，以混合碱液为空白对照，绘出光密度(A)-浓度(C)的曲线，并计算该曲线的回归方程。

3.大黄中游离蒽醌的测定精密秤取样品lOOmg，置索氏提取器中，以50ml 氯仿回流提取至无色，氯仿提取液移入分液漏斗中，冷至室温，以5％氢氧化钠-2％氢氧化铵混合碱液萃取至无色，合并碱液，用少量氯仿洗涤，弃去氯仿，碱液调整至一定体积(250ml)，若不澄清，可用垂熔漏斗过滤，溶液沸水浴中加热4分钟，用冷水冷却至室温(注意应补足原来体积)，30分钟后在525nm处测定光密度(以混合碱为空白)，由标准曲线所得浓度计算含量。

4.大黄中结合蒽醌的测定精密秤取样品lOOmg，加20ml混合酸(10ml冰醋酸加2m 25％盐酸)溶液于lOOml三角瓶中，回流水解1小时，冷后加入30ml氯仿，继续回流20分钟，氯仿提取液以滤纸过滤于分液漏斗中，药渣以10ml氯仿洗3次，洗液通过原滤纸过滤到分液漏斗中，用少量水洗涤氯仿，氯仿液用混合碱液同上萃取测定，测得含量为游离葸醌和结合葸醌总量。从中减去游离蒽醌含量，即得结合蒽醌含量。

计算公式

含量％=C×T/W ×100％

C：为游离葸醌的浓度(mg／ml)

F：为样品稀释度(即稀释倍数×原体积)

W：样品的干燥重量(mg)

五、注意事项

(1)蒸制时间必须从沸腾算起。蒸制过程中随时添加沸水，蒸好后要再闷一定时间。

(2)酒蒸要密闭，防止黄酒挥发。

(3)标准品与检品的发色时间应相同。

(4)萃取与比色操作应在无阳光直接照射下进行,碱萃取液应避光保存。

(5)与样品接触的仪器应干燥。

六、思考题

(1)蒸制药物应注意什么?意义何在?

(2)如要测定何首乌中的蒽醌类成分，可用何法进行?

实验十三煮法

一、实验内容

1.煮草乌(或川乌)、远志

2.草乌(或川乌)炮制前后成分比较

二、目的要求

(1)了解煮制的目的和意义，辅料的性质和作用。

(2)掌握煮制的方法、程序、质量要求。

(3)通过草乌(或川乌)不同炮制品的成分比较探讨草乌(或川乌)的炮制意义。

三、实验器材及药品

1.煮制铁锅(或小铜锅)、台秤，电炉、竹片、切药刀、量筒、瓷盘；甘草等。

2.草乌(或川乌)成分比较实验250ml碘量瓶、250ml三角烧瓶、漏斗、量筒、水浴锅、称量瓶、微量注射器、回收装置、吹风机、喷雾器、层析缸、碱式滴定管、分析天平、硅胶板，乙醚、氯仿、氨试液、乌头碱、氢氧化钠标准液、硫酸标准液、缓冲液(pH7、pH3)、改良碘化铋钾试液、

甲基红、中性乙醇等。

四、实验方法

(一)煮制

1.草乌(或川乌) 取净草乌，用水浸泡至内无干心(约2天，如有发霉要换水)，取出，加水煮沸至大个及实心者切开内无白心，口尝微有麻舌感时(约煮2小时以上)，取出，切成薄片，干燥，筛去碎屑。

成品性状：本品表面灰褐色或暗黄色，中心部色较浅呈灰色，周边黑褐色。味淡不麻舌或微有麻舌感。

2.远志先将甘草片置锅内，加适量清水煮2次，过滤，弃去残渣，将滤液浓缩至适量，随即将净远志片投入药汁内加热煮沸后，改用文火，保持药液微沸，并勤加翻动，煮至药透水尽，略干，干燥。筛去碎屑。远志片每100kg，用甘草6kg。

成品性状：本品味略甜，嚼之无刺喉感。

(二)草乌(或川乌)炮制前后成分比较

1.乌头碱的含量测定取生、制草乌粗粉各约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加试液5ml使湿润，加乙醚-氯仿(3:1)混合液50ml，密塞，摇匀，放置过夜，滤过，药渣加混合液50ml,连续振摇l小时，滤过，

药渣再用混合液洗涤3～4次，每次15ml，滤过，洗液与滤液合并，低温蒸干。残渣加混合液5ml使溶解并蒸千，再加乙醇5ml使溶解。精密加入硫酸液(0.01mol／L)15ml、水15ml与甲基红指示液3滴，用氢氧化钠液(0.02mol／L)滴定至黄色。每lml硫酸液(0.01mol／L)相当于12．9mg的乌头碱(C34H47N011)。制品含生物碱以乌头碱(C84H47NOll)计，不得少于0.20％。

2．草乌(或川乌)生物碱的纸层析

(1)样品液的制备：取生、制草乌粗粉各3g，精密称定，分别置碘量瓶中，加入氨试液5ml，待粉末润湿后，加乙醚80ml，振摇30分钟，放置3～4小时，用滤纸过滤于三角瓶中，药渣用15ml乙醚洗涤2次，合并醚液，低温回收乙醚，至约2～3ml，移入小玻璃瓶中，水浴蒸干，用0.5ml 氯仿溶解。

(2)层析纸条的制备：取层析滤纸裁成20×4cm的长条，自纸条一端3cm 处用铅笔划一横线(起始线)，自纸条起始线以上分别形成2cm间隔区，5cm pH7缓冲区。3cm间隔区，5cm pH3缓冲区。

(3)点样及展开：取供试液3～4μl，点于起始线，边点边吹干，生、制两样品点于同一纸条。然后在pH7和pH3缓冲区内分别涂上pH7和pH3缓冲液两次，并随即悬挂于已注入展开剂(水饱和乙醚)的层析缸中，30分钟后，以上行法展开，待前沿超过pH3缓冲区，便可取出，自然干燥，

喷改良碘化铋钾试剂显色，低毒或无毒的乌头次碱和乌头原碱等，仅仅自原点稍许移动或在涂pH7缓冲区停着，而乌头碱等毒性成分则越过pH7缓冲区，在pH3缓冲区停着。由此可比较生、制两种样品中毒性成分的多寡.

3．草乌(或川乌)中乌头碱的薄层层析

(1)样品液制备同纸层析项。

(2)草乌生物碱的薄层层析取硅胶G预制板(10×20cm)于105℃烘烤l小时，取出放干燥器中备用。

(3)取生、制草乌各5μ1，点于硅胶G板上，同时点乌头碱对照液lμl，以展开剂[环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(7.5:1.5:1)]上行展开，展距10cm，取出，挥去展开剂。喷洒改良碘化铋钾试液显色，由此比较生、制草乌样品斑点的大小，并计算Rf值。或用薄层扫描法测定含量。

五、注意事项

(1)煮药加水量以淹没药物为宜。煮至透心后，药汁要吸尽。煮制时开始用武火，沸腾后改用文火。

(2)纸层析时，涂布缓冲纸条力求均匀，不要超过规定的pH区域，且涂布时第一次吹干，第二次不吹干。