肾活检病理组织染色
文稿归稿存档编号：［KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
一、常规染色技术（HE染色）
苏木素-伊红染色简称HE染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。（一）需要试剂
①苏木素染液；②1%盐酸乙醇液；③氨水；④1%伊红液。
（二）具体染色步骤
1.切片常规脱蜡入水。
2.苏木素染细胞核1〜2 min,水洗。
3.入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗。
4.氨水返蓝数秒。
5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。
& 1%伊红染数秒，水洗。
7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。
（三）注意事项
1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。
2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。
3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
二、特殊染色技术
（一）过碘酸-希夫氏染色（PAS染色）
PAS染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。
1.需要试剂①1%过碘酸；②schiff氏液染；③苏木素染液；④氨水。
2.具体染色步骤
（1）切片常规脱蜡入水。
（2）入1%过碘酸氧化10〜15 min,水洗。
（3）入schiff 氏液染10 ~ 30 min,水洗。
（4）苏木素染细胞核1〜2 min,水洗。
（5）入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗。
（6）氨水返蓝数秒。
（7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。
（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3.染色结果PAS阳性物质（多糖和糖原）呈红色，核呈蓝色。
4.注意事项
（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
（2）Sch辻f氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色过深，时间过短标本基底膜着色淡。
（3）入1%盐酸乙醇分化时间要短，时间长容易使标本退色。
（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
（二）六胺银-马松染色（PAM-Masson染色）
PAM-Masson染色能更清晰地显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维，免疫复合物的定位更为精确。
1.需要试剂
①1%过碘酸；②六胺银液；③苏木素染液；④氨水；⑤Masson液；
⑥1%亮绿液。
2.具体染色步骤
（1）切片常规脱蜡入水。
（2）入1%过碘酸氧化10〜15 min,水洗5 min。
（3）入六胺银液72°C染30〜50 min,以显微镜下见基底膜呈黑色即可。（4）力吆％氯化金数滴于组织，5%硫代硫酸钠洗。
（5）苏木素染细胞核1〜2 min, 1%盐酸乙醇分化，氨水返蓝。
（6）入Masson液约10 min, 1%醋酸洗。
（7）入1%亮绿5〜8 min, 1%醋酸洗。
（8）梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3.染色结果基底膜及系膜基质黑色，免疫复合物红色。
4.注意事项
（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
（2）染色时间与室温和切片厚度有关，室温低、切片厚需染色时间长，反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深，时间过短基底膜着色淡。
（3）2%氯化金分化时间要短，时间长容易使银染退色。
（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
（三）马松染色（Masson染色）
Masson染色能显示各部位的免疫复合物，肾小球硬化和肾间质纤维化程度。
1.需要试剂①苏木素染液；②氨水；③Masson液；④1%亮绿液。
2.具体染色步骤
（1）切片常规脱蜡入水。
（2）媒染剂（10%重铭酸钾、10%三氯醋酸等量混合）染10〜30 min,
水洗。
（3）苏木素染细胞核1〜2 min,水洗。
（4）入1%盐酸乙醇分化数秒，水洗，氨水返蓝数秒，水洗。
（5）入Masson液约10 min,水洗，1%醋酸洗。
（6）入2. 5%磷鹄酸约30 s,水洗，1%醋酸洗。
（7）入2%橘黄G约2 min,水洗，1%醋酸洗。
（8）入1%亮绿5〜8 min, 1%醋酸洗。
（9）入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3.染色结果细胞核红色，胶原纤维绿色，免疫复合物红色。
4.注意事项
（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
（2）入Masson液染色的时间需严格控制。时间过长着色过深，时间过短着色淡。
（3）入1%亮绿染色时间需要镜下控制，时间长容易覆盖Masson液红色。（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
（四）刚果红染色
在肾脏病理染色中，刚果红染色能够将淀粉样物质染成砖红色，是诊断淀粉样变肾
病的常用染色方法之一。
1.需要试剂①高猛酸钾一硫酸液；②苏木素染液；③氨水；④碱性刚果红液。
2.具体染色步骤
（1）切片常规脱蜡入水。
（2）高镭酸钾-硫酸混合处理3 min,水洗。
（3）5%草酸处理3 min,水洗。
（4）苏木素染核2 min,水洗，蓝化。
（5）碱性刚果红液染10〜30 mine
（6）入100%乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。
3.染色结果细胞核蓝色，淀粉样物质呈砖红色（图3-12） o
4.注意事项
（1）组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色。
（2）碱性刚果红液染色时间应该镜下控制，染色液现配现用着色好。（4）染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。
不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响
不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的 影响 简介 肾活检是诊断某些肾脏疾病的重要手段。在进行肾活检时，通常需要进行免疫 荧光染色来确定肾脏病理组织的类型和程度。在进行免疫荧光染色时，免疫抗原修复是一个关键的步骤，它可以增强抗原在组织中的表达，提高染色效果。本文将探讨不同的抗原修复方法对肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色的影响。 抗原修复方法 在进行免疫荧光染色时，抗原修复的主要目的是恢复或增强组织中的抗原表达，使其更易于被抗体检测。目前常用的抗原修复方法包括化学方法、热处理法和酶消解法。下面分别介绍它们的原理和操作步骤。 化学方法 化学方法是一种使用化学物质对组织进行抗原修复的方法。化学物质一般都是酸、碱或其他特定化合物，它们可以通过改变组织中蛋白质的构象，使其易于与抗体结合。常用的化学物质包括醋酸、乙酸、甲酸、谷氨酰胺等。 操作步骤 1.将药液加入试管中。 2.离心石蜡切片，并将其放入药液中。 3.在适当的温度和时间下进行反应。 4.在 PBS 溶液中洗涤石蜡切片。 5.进行抗体染色。 热处理法 热处理法是将组织样本放入高温环境中，以改变蛋白质的构象。它可以使组织 中抗原更易于被抗体识别和结合。该法使用方便，但需要控制好时间和温度，过渡的热处理会导致组织破坏或失去抗原，而时间过短则容易影响染色效果。 操作步骤 1.将石蜡切片放到蛋白酶降解试剂中，进行蛋白酶降解。 2.将石蜡切片放入热处理缓冲液中。 3.用高压蒸气炉进行热处理，温度一般在 90-100°C，时间在 10-20 分 钟。 4.在 PBS 溶液中洗涤石蜡切片。
5.进行抗体染色。 酶消解法 酶消解法是将组织中的蛋白质通过裂解和水解等方式分解为更容易被抗体检测 的分子。酶消解法适用于形态不易被破坏的组织样本，如肝、肾等。 操作步骤 1.将石蜡切片放入酶消解缓冲液中进行反应，时间一般在 20-30 分钟。 2.在 PBS 溶液中洗涤石蜡切片。 3.进行抗体染色。 影响因素 抗原修复方法的选择需要考虑多个因素，如待测抗原类型、形态、表达水平、 抗体类型等。同样的抗原修复方法在不同的条件下也可能影响免疫染色结果。 温度和时间 化学方法和热处理法都需要在一定的时间和温度下进行反应。过度或不足的反 应时间会影响抗原的恢复效果。过渡的反应时间会破坏组织结构，使抗原丢失或减弱，不足的反应时间则可能导致胚胎抗原结构不稳定、不完整，影响抗体和抗原的特异性反应。一般情况下，化学方法需要 10-30 分钟，65-80°C 下的热处理法需要15-30 分钟。 pH 值 化学方法使用的酸和碱的 pH 值不同，pH 过高或过低会影响石蜡切片的结构和 染色效果。pH 过高会导致组织碎裂，pH 过低则会影响抗体和抗原的结合效果。一般情况下，pH 控制在 6.0-9.0。 缓冲液浓度 酶消解法和热处理法涉及到缓冲液，浓度的不同会影响反应结果。浓度过低会 使缓冲液的缓冲能力不够，使 pH 值变化，导致反应不成功。过高的浓度则会降低 抗原恢复效果。 结论 在进行肾活检标本石蜡切片免疫荧光染色时，抗原修复是一个至关重要的步骤。本文介绍了不同的抗原修复方法，包括化学方法、热处理法和酶消解法。不同的抗原修复方法在某些条件下的效果也各有不同。因此，在选择抗原修复方法时，需要根据实验要求和标本类型进行综合考虑。
实用文档之肾活检病理组织染色
实用文档之"一、常规染色技术（HE 染色）" 苏木素-伊红染色简称HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。 （一）需要试剂 ①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。 （二）具体染色步骤 1.切片常规脱蜡入水。 2.苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。 3.入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 4.氨水返蓝数秒。 5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。 6.1% 伊红染数秒，水洗。 7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。 （三）注意事项 1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否则组织无法着色，影响观察。 2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。 3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。 二、特殊染色技术 （一）过碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色） PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的基本染色。 1.需要试剂① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。 2.具体染色步骤 （1）切片常规脱蜡入水。 （2）入1% 过碘酸氧化10 ～15 min，水洗。 （3）入schiff 氏液染10 ～30 min，水洗。 （4）苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。 （5）入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 （6）氨水返蓝数秒。 （7）流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。
肾活检病理组织切片 PAM
肾活检病理组织切片 PAM —Masson染色法改良尹忠① 师锁柱① 张雪光① 谢院生① 陈香美① PAM—Masson染色能在同一切片上既显示。肾小球基底膜，又可观察免疫复合物的沉积，因此 PAM —Masson染色是肾 活检病理组织切片染色中最为重要的染色之一。然而长期以 来 PAM 染色耗时长，Masson复染着色不良，给肾活检病理诊 断带来不利影响。我们通过实践摸索，在常规的染色方法基础 上进行改良，获得较好效果，现介绍如下。 材料与方法 1 材料将临床住院患者肾活检组织经 10％福尔马林 固定，常规脱水、透明、包埋，取 8块肾活检病理诊断剩下的石 蜡块，每块连续切2tan切片 2张，分别采用常规 PAM～Mas—son染色和改良法染色。 2 染液配制六胺银染液配制：取 3％ 6次甲基四胺25n1l，5％硝酸银 2．5ml，蒸馏水 22．5ml，5％硼砂 4．5ml，混 合过滤，72℃预热 20 min以上。Masson染液配制：磷钨酸 0．8g，冰醋酸 1．0rnl，蒸馏水 100rnl，变色酸 2R0．6g，亮绿 SF 0．4g混匀溶解即成。铬化液配制：10％重铬酸钾水溶液与10％三氯醋酸水溶液等量混合。 3 染色步骤 3．1 I组常规法：(1)常规切片脱蜡入水；(2)人 1％过碘酸水溶液 l5～20min，水洗；(3)入六胺银染液(72℃)40～60rain，镜下观察；(4)入 1％氯化金水溶液 1～2min，镜下观察；(5)入 5％硫代硫酸钠水溶液 1～2min，水洗，1％醋酸水洗； (6)复染 Masson液 10min，1％醋酸水洗；(7)入 1％亮绿 1～2min，1％醋酸水洗；(8)脱水、透明、封片。 3．2 Ⅱ组改良法：(1)常规切片脱蜡入水；(2)入铬化液30rain； (3)入 1％过碘酸水溶液 15～20min，水洗；(4)入 0．5％ 氨基硫脲水溶液 5～10 min，水洗；(5)入六胺银染液(72℃)l0～20min，镜下观察；(6)人 1％氯化金水溶液 1～ 2ainr，镜下观察；(7)人 5％硫代硫酸钠水溶液 1～2min，水洗，1％醋酸水洗；(8)复染 Masson液 10min，1％醋酸水洗；(9)入1％亮绿 1-2min，1％醋酸水洗；(10)脱水、透明、封片。 结果 常规法所染的切片背景较暗，Masson着色不良；经改良法 所染的切片基底膜、网状纤维为黑色，免疫复合物红色，红细胞鲜红色，胞浆粉红色，胶原纤维绿色，背景清晰，对比鲜明。 讨论 PAM —Masson染色方法实际是六胺银和马松三色两种染 色方法的叠加染色，由于基底膜可清楚显现，所以免疫复合物的定位更为精确I】J，但常规方法仅72℃六胺银染一步就需耗 时 60min左右，组织长时间在高温条件下极易从切片脱落，基 底膜显示亦不清晰，背景灰暗，复染 Masson着色不良，给肾活检病理诊断工作造成极大影响。我们经多次实验，反复摸索， 在组织切片入六胺银染液前加染氨基硫脲水溶液 5～10min， 大大加速了银离子对基底膜等的染色力，使银染时间缩短 40min左右，即由原来的 60min减至 20min左右，同时也改善 了背景的色调，减弱了六胺银液对细胞核的着染。另外在组织切片脱蜡入水后，我们用强酸酸化的重铬酸钾水溶液铬化处理 30ainr，使组织切片能够很好的对酸性染料着色l2]，为复染Masson 液提供了有利条件，获得了组织结构清晰、对比鲜明、直 观的染色结果。 参考文献 1．邹万忠．肾活检病理学．北京：北京大学医学出版社，2006．252．2．龚志锦，詹铬洲．病理组织制片和染色技术．上海：上海科学 技术出版社，1994．9．(收稿：2008—07—18)
肾活检病理组织染色
一、常規染色技術（HE 染色） 蘇木素-伊紅染色簡稱HE 染色，是最常用的染色方法，蘇木素是一種堿性染料，可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色，伊紅是一種酸性染料，能將細胞質染成紅色或淡紅色。HE 染色可以顯示腎小球的細胞增生、炎細胞浸潤。還能很好的顯示腎小管上皮細胞的損傷和腎間質水腫情況。 （一）需要試劑 ①蘇木素染液；② 1% 鹽酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊紅液。（二）具體染色步驟 1.切片常規脫蠟入水。 2.蘇木素染細胞核1 ～ 2 min，水洗。 3.入1% 鹽酸乙醇分化數秒，水洗。 4.氨水返藍數秒。 5.流水沖洗，鏡下觀察細胞核成藍色。 6.1% 伊紅染數秒，水洗。 7.梯度乙醇脫水，二甲苯透明，樹膠封片。 染色結果：胞核呈藍色，胞漿呈紅色，紅細胞呈橘紅色，其他成分呈深淺不同紅色。 （三）注意事項 1.組織切片的脫蠟步驟應徹底，否則組織無法著色，影響觀察。 2.伊紅染色的時間需嚴格控制。過長胞漿染色紅色過深。 3.染色后的組織切片要將組織四周的污染物痕跡擦掉。 GAGGAGAGGAFFFFAFAF
二、特殊染色技術 （一）過碘酸- 希夫氏染色（PAS 染色） PAS 染色可以顯示腎小球內的細胞增生、浸潤和系膜基質等，并能很好地顯示基底膜，是顯示糖原和糖蛋白的基本染色。 1.需要試劑① 1% 過碘酸；② schiff 氏液染；③蘇木素染液；④氨水。 2.具體染色步驟 （1）切片常規脫蠟入水。 （2）入1% 過碘酸氧化10 ～ 15 min，水洗。 （3）入schiff 氏液染10 ～ 30 min，水洗。 （4）蘇木素染細胞核1 ～ 2 min，水洗。 （5）入1% 鹽酸乙醇分化數秒，水洗。 （6）氨水返藍數秒。 （7）流水沖洗，鏡下觀察細胞核成藍色，基底膜染成粉紅色。 （8）梯度乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片。 3.染色結果PAS 陽性物質（多糖和糖原）呈紅色，核呈藍色。 4.注意事項 （1）組織切片的脫蠟步驟應徹底，否則組織無法著色。（2）Schiff 氏液染色的時間需嚴格控制。時間過長標本基 GAGGAGAGGAFFFFAFAF
肾活检病理诊断标准
肾活检病理诊断标准 全国肾活检病理诊断研讨会 2000年5月23日至6月2日，中华医学会肾脏病分会在北京举办了全国肾活检病理诊断研讨会及2000年国际肾脏病理继续教育课程。国内外200多位肾脏疾病临床及病理专家参加了会议，对我国肾活检病理诊断的现状和存在的问题进行了认真的讨论。为了使我国肾活检病理诊断工作进一步规范化，共同制定了这份肾活检病理诊断标准的指导意见，供大家参考。 大家一致认为，满意的肾活检标本是病理诊断的首要保证，标本中应不少于10个肾小球。免疫病理、光镜检查和透射电镜检查，是肾活检病理诊断的3种重要的手段，免疫病理和光镜检查是开展肾活检病理诊断的必备条件，电镜检查也应在独立或协作的形式下尽快开展。建立一支训练有素的技术员队伍是开展这项工作的重要保证。 光镜标本以10％的甲醛溶液或其他特殊固定液固定，室温或4℃保存。光镜标本的质量标准是：切片薄(2～3μm)而平整，染色种类(HE、PAS、PASM、Masson、Fibrin)要足够，因为每一种染色均有其特定的用途，如HE染色是病理检查必用的常规染色方法，主要观察细胞核进而辨认细胞种类、观察肾小管上皮细胞变性和萎缩，是理想的染色方法；PAS染色方法可以观察糖原物质，并可显示基底膜和系膜基质；PASM对基底膜的显示更为精细；Masson染色除显示基底膜外，尚可观察一些特殊蛋白的沉积，如免疫复合物等，此外也可显示纤维化的病灶；Fibrin染色可显示血栓和纤维素样坏死等病变。免疫病理检查包括免疫荧光或免疫组化，免疫荧光标本以生理盐水保持湿润，可在冰冻条件下较长时间保存，或在4℃条件下短时间保存，在制作优秀冰冻切片的基础上，要能进行多种抗原、抗体和补体(IgG、IgA、IgM、补体C3、Clq、C4及Fibrin、轻链蛋白、生物性抗原等)的检查，尽管该法的设备复杂而昂贵，荧光易淬灭，但因其灵敏而快速，仍广泛应用。免疫组化法可应用光镜标本的石蜡切片进行，不如免疫荧光法敏感，而且不易进行定量比较。电镜标本以2％～3％的戊二醛固定，4℃保存，电镜检查应结合免疫病理和光镜检查的结果作出诊断。 肾小球疾病 1.病变分布根据病变累及的肾小球总数，分为弥漫性和局灶性两大类。受累肾小球占标本中全部肾小球的50％以下为局灶性，50％以上为弥漫性。根据病变肾小球所累及的毛细血管襻范围，分为球性和节段性两大类。病变肾小球50％以上的毛细血管襻受累称球性病变，50％以下的毛细血管襻受累称节段性病变。 2.活动性病变和非活动性病变坏死性(主要为纤维素样坏死)、渗出性(主要为白细胞及单个核细胞浸润)和增生性病变(系膜细胞、内皮细胞或上皮细胞的增生)为活动性病变。基底膜增厚、系膜基质增多、硬化性病变为非活动性病变。 3.肾小球病变和肾小管间质病变的关系肾小球疾病经常继发相应肾小管萎缩、肾间质单个核细胞浸润和纤维化，严重者可导致小动脉管壁增厚，管腔狭窄。 (一)原发性肾小球病和肾小球肾炎 1.肾小球微小病变(glomerularminimalchange，MCD) (1)临床表现：大量蛋白尿或肾病综合征，无高血压或肾功能损伤。 (2)光镜：无明显病变。
masson 染色肾组织的描述
masson 染色肾组织的描述 （最新版） 目录 1.Masson 染色法的概述 2.Masson 染色法在肾穿刺组织中的应用 3.如何使用 Image J 分析 Masson 染色中的胶原蛋白含量 4.总结 正文 一、Masson 染色法的概述 Masson 染色法是一种用于鉴别胶原纤维与肌纤维的特殊染色方法， 由法国病理学家 Masson 在 19 世纪末发明。这种方法主要通过染色剂与组织中的胶原蛋白发生作用，使胶原纤维呈现蓝色，而肌纤维则呈红色。Masson 染色法在病理诊断、组织学研究等领域具有重要应用价值。 二、Masson 染色法在肾穿刺组织中的应用 肾穿刺活检组织常规特殊染色有 PAS、PASM、Masson、PAS 套染Masson 法等。传统的 Masson 染色法主要用于鉴别胶原纤维与肌纤维， 而应用于肾穿刺活检标本的染色效果则可以反映肾脏组织的病理变化。通过 Masson 染色，医生可以更准确地判断患者的肾脏病变情况，从而制定更有效的治疗方案。 三、如何使用 Image J 分析 Masson 染色中的胶原蛋白含量 Image J 是一款广泛应用于生物图像处理的软件，可以通过设定阈值、调整对比度等方法对 Masson 染色中的胶原蛋白含量进行定量分析。具体操作步骤如下： 1.打开 Image J 软件，导入需要分析的 Masson 染色图片。
2.选择“Image”菜单下的“Type”选项，将图片类型设置为“RGB”。 3.点击“Image”菜单下的“Adjust”选项，选择“Threshold”。 4.在弹出的“Threshold”对话框中，左右调节下方数值，使得灰色图片中的红色区域与 Masson 原图中蓝色区域一致。 5.设置好阈值后，点击“Image”菜单下的“Split”选项，将图片分为红、蓝两个通道。 6.选中蓝色通道，点击“Image”菜单下的“Measure”选项，选择“Pixel Density”。 7.软件会自动计算出图片中胶原蛋白的含量，以像素密度表示。 四、总结 Masson 染色法在肾穿刺组织中的应用，有助于医生准确判断患者的肾脏病变情况。
肾肿瘤的活检报告
肾肿瘤的活检报告 一、病人信息 病人姓名：XXX 性别：男年龄：45岁病史：无就诊日期：2022年1月1日二、临床背景 病人于近期体检中发现左肾上有一个异常结节，建议进行肾活检以确定诊断。 三、活检结果 1. 标本信息 活检标本编号：123456 活检部位：左肾肿块活检日期：2022年1月2日2. 病理报告 经过组织学和免疫组织化学染色学检查，发现如下结果： 1.肾肿瘤类型：肾腺癌（Renal cell carcinoma） 2.肿瘤大小：约 3.5cm 3.肿瘤分级：T2，侵犯肾包膜
4.肿瘤分期：II，未累及淋巴结或远处器官 5.组织学类型：乳头状肾细胞癌（Papillary renal cell carcinoma） 6.免疫组织化学结果：阳性表达CK7、PAX8、Vim、CD10，阴性表达P53 3. 结论与建议 根据上述活检结果，病人患有左肾乳头状肾细胞癌，肿瘤大小约为3.5cm，未 累及淋巴结或远处器官。 根据肾肿瘤的类型和分期，综合评估病情，我们建议病人进行以下治疗方案： 1.手术切除：考虑到肿瘤较大，目前主要的治疗方法是手术切除。建议进行肾部分切除或肾全切除手术，以充分清除肿瘤组织。 2.术后辅助治疗：根据术后病理分析，可考虑进行辅助治疗，如靶向药物治疗、放疗或化疗等，以预防病情复发或转移。 请注意，以上治疗方案仅供参考，具体治疗方案需要根据患者的个体情况和医生的专业意见来确定。建议病人尽早与肾脏肿瘤专科医生进行进一步的讨论和确定治疗方案。
四、注意事项 1.提前做好术前准备工作，包括相关检查和术前准备，如血液检查、心电图、胸片等。 2.术后密切观察患者的病情变化，及时记录并报告医生。 3.定期进行随访复查，包括肾功能评估、影像学检查等，以监测治疗效果和病情变化。 4.保持良好的生活习惯，包括合理饮食、适量运动、避免过度劳累等，有助于促进康复和预防病情复发。 以上是针对病人的肾肿瘤活检报告及相关治疗建议，仅供参考。如有任何疑问或进一步需要，请及时与专科医生进行沟通和讨论。
肾活检病理标本的制作方法
肾活检病理标本的制作方法 肾活检病理标本的制作方法 一光镜标本的制作与染色 肾活检组织光镜标本的制作包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片和染色等步骤，各部依次进行，前一步是后一步的基础。 （一）固定 将供光镜检查的肾穿刺组织尽快浸入固定液内，迅速凝固，防止自溶和腐败，使其尽可能地保持与生活状态相似的结构，有利于切片和观察，这是组织固定的目的。 常用固定液有甲醛和乙醇。 1.甲醛应配制成中性甲醛为好，具有穿透力强、固定均匀、被固定组织不收缩而且柔 韧的特点，常用10%的溶液。 2.乙醇具有固定和脱水的双重作用。可以保存组织内的糖类物质和尿酸结晶，但易使 组织收缩且不能保存脂类物质，常用其95%的溶液。 3.有时为保存两者的优点，可用FAA混合固定液，其中包括10%甲醛10ml、冰醋酸 5ml和95%乙醇85ml，其中冰醋酸具有渗透性强和使组织膨胀的特点，借以抵消乙 醇的缺点。 固定液内的组织可置于室温或4℃的环境中保存，绝不可冷冻结冰。 （二）脱水 脱水的目的是将经过固定的组织内的水分去除，以便使切片时的支撑物（石蜡）充分进入组织。最常用的脱水剂是乙醇，为避免脱水过程中组织收缩，必须用逐级升高浓度的乙醇依次浸泡脱水：70%乙醇-80%乙醇-90%乙醇-95%乙醇-无水乙醇。 （三）透明 透明的目的是将能与石蜡结合的媒介剂浸入组织，并将不能与石
蜡结合的脱水剂（乙醇）置换出来，并使组织透明，为包埋做准备。 1.常用的透明剂是二甲苯。组织在二甲苯中的时间不宜过长，否则可使组织松脆收缩。 2.氯仿也可用作透明剂，其透明性能较弱，但不会致使组织松脆。 （四）浸蜡 浸蜡的目的是是组织内有一定的支撑物，使之具备一定的硬度和韧度，便于切出满意的切片。常用石蜡的熔点是60-62%，有时为保存组织内的抗原，可用48-50%的低熔点石蜡。（五）包埋将浸蜡彻底的组织用石蜡包埋成规整的长方形块状物体，便于在切片机上切片。（六）切片 将石蜡包埋块置于切片机切片，厚度以2-3um为宜。 （七）染色 1.脱蜡：先将石蜡切片置于二甲苯中使石蜡溶解，在用浓度由高到低的乙醇水化： 无水乙醇—95%--90%--80%---70%乙醇 2.冲洗：再用自来水或蒸馏水冲洗即可染色。 3.染色 4.脱水和透明：用浓度递增的乙醇脱水：70%--80%--90%--95%--无水乙醇，之后用二 甲苯透明，最后滴加树胶封片。 常用染色： 1.★HE染色（hematoxylin-eosin staining）： （1）Harris苏木精染液染色7min。 （2）自来水冲洗多余染液。 （3）1%盐酸乙醇分化数秒，使细胞核显蓝紫色。 （4）自来水中充分洗涤。 （5）浸入1%氨水中数秒，至返蓝。 （6）用自来水和蒸馏水冲洗。 （7）1%伊红染色3min左右。 结果：细胞核呈紫蓝色，细胞质、基底膜、胶原纤维、肌纤维呈
肾小球基底膜改良PASM染色法
肾小球基底膜改良PASM染色法 肾活检组织的PASM染色（六氨银染色法）对于观察肾小球系膜、基底膜的各种形态改变具 有极重要的诊断价值，特别是对于观察膜性肾病基底膜的钉突形成、淀粉样变性肾病基底膜 的双轨和多轨改变等是其他特殊染色所不可替代的。新月体形成中的基底膜断裂、血管炎中 的动脉内膜和弹力纤维的变化也应用PASM染色[1]。目前PASM染色存在多种不同的方法， 我们采用的是1%过碘酸和8%重铬酸钾双重氧化法，且在染液浓度、染色时间和染色温度上 做了调整改良，取得了较好的效果，总结经验如下，供同行交流与参考。 1 材料与方法 1.1 标本本院肾内科2010-2012年送检的肾穿刺活检组织标本674例，10%中性福尔马林溶 液固定，全自动组织脱水机按活检小标本程序处理，石蜡包埋，切片厚3μm，70℃烤片30- 40min。 1.2 试剂配制 ⑴贮备液：3%六次甲基四胺液500ml和2%硝酸银液100ml储存于4℃冰箱；5%四硼酸钠溶 液100ml储存于室温。⑵六胺银工作液：取3%六次甲基四胺液（乌洛托品）50ml加入2%硝 酸银液6ml，此时溶液产生乳白色悬浊液，稍搅拌溶液变澄清，最后加入5%硼砂（四硼酸钠）4ml。⑶1%过碘酸：高碘酸1ml；蒸馏水99 ml。⑷8%重铬酸钾：重铬酸钾8g；蒸馏水 100ml。⑸0.5%偏重亚硫酸钠：偏重亚硫酸钠0.5g；蒸馏水100ml。⑹0.2%绿化金溶液：市售 氯化金1g/支，溶解于500ml蒸馏水。⑺5%硫代硫酸钠：硫代硫酸钠5g；蒸馏水100ml。 1.3 染色方法 ⑴石蜡切片脱蜡至蒸馏水；⑵1%过碘酸溶液氧化20min；⑶蒸馏水洗30s；⑷8%重铬酸钾溶 液氧化20 min；⑸蒸馏水洗30s；⑹0.5%偏重亚硫酸钠1min；⑺蒸馏水洗30s；⑻切片浸入 六胺银工作液，置于62℃水浴箱内并逐渐升温至68℃，时间大约15-30min（光镜下控制染 色强度）；⑼蒸馏水洗30s；⑽0.2%氯化金溶液调色1 min；⑾蒸馏水洗30s；⑿5%硫代硫酸 钠溶液1min；⒀蒸馏水洗30s；⒁稍水洗，用Gill苏木素液淡染细胞核3-5min；⒂用自来水 洗3-5min；⒃梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 2 染色结果 肾小球基底膜呈黑色，细胞核呈蓝色（图1） 图1 肾穿刺活检组织，肾小球基底膜呈黑色，系膜弥漫性增厚， 细胞核呈蓝色 3 讨论 PASM染色过程中，染色时间和温度控制是染色成败的关键，染色10min后，需要每隔数分 钟在镜下观察染色强度，切片整体由金黄色至棕黄色，直至基底膜呈现黑色；温度过高，切 片很快变黑而难以掌握，有时还会造成组织脱片现象。1%过碘酸和8%重铬酸钾双重氧化能 将组织内的多糖化合物更好的暴露出醛基，游离醛基还原六氨银的银离子成为金属银而呈黑色。其他染色方法，一般是采用单一氧化法（1%过碘酸或8%重铬酸钾）[2]，且作用时间较 短（10min-20min左右）。偏重亚硫酸钠的作用是去除残留的铬酸。氯化金调色至组织呈灰 白色为佳，可排除组织中的黄色色调，使背景更清晰。硫代硫酸钠的作用是固定已反应的银 盐和清除未还原的银离子。
肾活检病理组织染色
一、惯例染色技能（HE 染色）之阳早格格创做 苏木素-伊黑染色简称HE 染色，是最时常使用的染色要领，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核战细胞内核糖体染成蓝紫色，伊黑是一种酸性染料，能将细胞量染成黑色或者浓黑色.HE 染色不妨隐现肾小球的细胞删死、炎细胞浸润.还能很佳的隐现肾小管上皮细胞的益伤战肾间量火肿情况. （一）需要试剂 ①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨火；④ 1% 伊黑液.（两）简直染色步调 1.切片惯例脱蜡进火. 2.苏木素染细胞核1 ～2 min，火洗. 3.进1% 盐酸乙醇瓦解数秒，火洗. 4.氨火返蓝数秒. 5.流火浑洗，镜下瞅察细胞核成蓝色. 6.1% 伊黑染数秒，火洗. 7.梯度乙醇脱火，两甲苯透明，树胶启片. 染色截止：胞核呈蓝色，胞浆呈黑色，黑细胞呈橘黑色，其余身分呈深浅分歧黑色. （三）注意事项 1.构造切片的脱蜡步调应实足，可则构造无法着色，做用瞅察. 2.伊黑染色的时间需庄重统造.过少胞浆染色黑色过深. 3.染色后的构造切片要将构造四面的传染物痕迹揩掉. 两、特殊染色技能 （一）过碘酸- 希妇氏染色（PAS 染色） PAS 染色不妨隐现肾小球内的细胞删死、浸润战系膜基量等，并能很佳天隐现基底膜，是隐现糖本战糖蛋黑的基础染色. 1.需要试剂① 1% 过碘酸；②schiff氏液染；③苏木素染液； ④氨火. （1）切片惯例脱蜡进火. （2）进1% 过碘酸氧化10 ～15 min，火洗. （3）进schiff氏液染10 ～30 min，火洗. （4）苏木素染细胞核1 ～2 min，火洗. （5）进1% 盐酸乙醇瓦解数秒，火洗. （6）氨火返蓝数秒. （7）流火浑洗，镜下瞅察细胞核成蓝色，基底膜染成粉黑色.
肾活检标本的检查方法及意义
肾活检标本的检查方法及意义 【摘要】肾活检病理是根据肾脏疾病的发病特点,在一般病理学方法的基础上,吸收了免疫病理(免疫荧光、免疫酶标),超微病理等先进手段而完成的,这些技术保证了对各类肾脏病理形态学的观察和分类的确定,治疗及其预后的估价,同时对其病因、发病机制的研究都有极大的价值。肾穿刺组织的病理检查包括HE染色、特殊染色及免疫组织化学染色(荧光法),光镜观察。 【关键词】肾活检;冰冻切片;免疫荧光;电镜检查 肾小球肾炎[1](简称肾炎)是以肾小球损害为主的变态反应性炎症,是一种比较常见的疾病。临床表现主要有蛋白尿,血尿,水肿和高血压等。肾小球肾炎根据肾组织病变范围、肾小球病变情况可进行不同的分类。诊断不同,临床的治疗亦不相同,而唯一的明确分类的诊断方法就是进行肾穿刺活检。 肾脏穿刺活检简称为肾穿[2],指应用穿刺针刺入活体的肾脏,取出少量肾组织,进行病理学分析。目前主要有2种方法,一是开放穿刺肾脏活体组织检查法,一是经皮肤穿刺肾活检法,后一种方法为国内外普遍采用的方法。经皮肾穿刺一般在B超定位下进行,一次可获取长1.0~1.5 cm,直径0.1 cm的肾组织,灰白色,在解剖显微镜下,肾小球呈针尖大小的红色点状。肾穿刺活检损伤小,获取的肾组织新鲜,不但适合常规病理检查,而且适合免疫病理学、超微病理学以及其他现代先进方法的研究,对肾脏疾病的诊断、治疗和预后判断具有无可替代的作用。肾活检组织的检查包括光镜、免疫组织化学(荧光法)和电镜观察。 1 肾活检荧光法 本方法是肾脏病理学中最重要的检查方法,应用恒冷切片机。冰冻切片的肾组织新鲜,抗原保存良好,因此要求组织应放在滴有生理盐水的小纱布垫上,连同纱垫置入干净的小瓶,再把小瓶放进冰桶内进行送检。冰冻切片要求于冷室内-25℃进行,厚度要求3~4 um。切片在固定液内固定后进行HE染色,并在光镜观察有无肾小球,如有肾小球,则视所备抗体的种类,切出相应数量的切片。一般检查项目有:常用羊抗人或兔抗人的免疫球蛋白(A、G、M、E)、抗γ和λ轻链,补体C3、C1q、C2、C4以及备解素。 检查时将所需切片在室温下用冷风吹干,用pH7.4的PBS液浸泡数分钟后甩干,将荧光素标记的羊抗人IgG、IgA、IgM、C3及C1q,分别以PH7.4 0.01 mol/L 的PBS液稀释30倍,滴于切片上的组织上,在37℃温箱内孵育8~10 min,再放于PBS液中洗去未与肾组织结合的抗体,取出轻度风干,并滴加缓冲甘油封片。荧光的观察结果分为6级:镜下未见免疫复合物荧光:(-);高倍下隐约可见:(±);低倍镜下隐约可见、高倍镜下可见:(+); 低倍镜下可见、高倍镜清晰可见:(++);低倍镜下清晰可见,高倍镜下耀眼:(+++);低倍镜下耀眼,高倍镜下刺眼:(++++)。 2 肾活检光镜检查
免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用
免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用 罗教秀;储兵;曹晓珊;陈应智;吴师珍 【摘要】Objective:To analyze the effect of immunofluorescence and other special staining methods in the pathological diagnosis of renal biopsy.Methods: 58 patients with chronic kidney disease admitted in our hospital from September 2014 to September 2016 were included in the object of study.All patients underwent renal biopsy puncture to obtain tissue using paraffin, respectively by immunofluorescence, six staining of methanol method, Congo red staining and mucin (PAS) and three Masson dye staining, staining results in different ways.Results: The positive rates of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq in the patients with different types of nephropathy were significantly higher than those of IgA nephropathy and membranous nephropathy in patients by immunofluorescence staining.In the comparison of different staining methods, it was found that the positive rate of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq detected by immunofluorescence staining was significantly lower than that of other staining methods, P<0.05.There was no difference in the diagnostic rate of other staining methods, P>0.05.Conclusion:Comparing with other methods, the rate of pathological diagnosis of renal biopsy is lower than that of other methods.It is recommended to use other special staining methods to diagnose renal tissue.%目的:分析免疫荧光染色及其他几种特殊染色法在肾活检病理诊断中的应用效果.方法:临床纳入58例我院2014年9月至2016年9月期间收治的慢性肾脏疾病患者作为研究对象,所有患者均进行肾穿刺活检,穿刺取得组
肾活检病理组织染色
一、常规染色技术〔HE 染色〕 苏木素-伊红染色简称HE 染色，是最常用的染色方法，苏木素是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，伊红是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色。HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。 〔一〕需要试剂 ①苏木素染液；② 1% 盐酸乙醇液；③氨水；④ 1% 伊红液。 〔二〕具体染色步骤 1.切片常规脱蜡入水。 2.苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。 3.入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 4.氨水返蓝数秒。 5.流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色。 6.1% 伊红染数秒，水洗。 7.梯度乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。 染色结果：胞核呈蓝色，胞浆呈红色，红细胞呈橘红色，其他成分呈深浅不同红色。〔三〕考前须知 1.组织切片的脱蜡步骤应彻底，否那么组织无法着色，影响观察。 2.伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。 3.染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。 二、特殊染色技术 〔一〕过碘酸- 希夫氏染色〔PAS 染色〕 PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等，并能很好地显示基底膜，是显示糖原和糖蛋白的根本染色。 1.需要试剂① 1% 过碘酸；② schiff 氏液染；③苏木素染液；④氨水。 2.具体染色步骤 〔1〕切片常规脱蜡入水。 〔2〕入1% 过碘酸氧化10 ～15 min，水洗。 〔3〕入schiff 氏液染10 ～30 min，水洗。 〔4〕苏木素染细胞核1 ～2 min，水洗。 〔5〕入1% 盐酸乙醇分化数秒，水洗。 〔6〕氨水返蓝数秒。 〔7〕流水冲洗，镜下观察细胞核成蓝色，基底膜染成粉红色。 〔8〕梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。 3.染色结果PAS 阳性物质〔多糖和糖原〕呈红色，核呈蓝色。 4.考前须知 〔1〕组织切片的脱蜡步骤应彻底，否那么组织无法着色。
马松三色染色在儿童狼疮性肾炎中的应用比较
马松三色染色在儿童狼疮性肾炎中的应用比较 儿童SLE是儿童常见的肾脏病，其病理诊断及其分型对患儿的治疗，预后有着重要意义。本文通过介绍三种masson染色方法，病在肾穿标本中进行试验摸索，发现加入Bouin 后固定液可显著改善标本的染色效果，而用丽春红，酸性品红混合液染色的标本免疫复合物显示效果较好，但层次稍弱，而用变色酸2R染色的标本，颜色鲜艳，免疫复合物显示清晰，层次分明，是一种效果相对较好的方法，可能更加有助于对狼疮性肾炎的诊断。 标签：儿童肾活检；Masson三色染色；狼疮性肾炎 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种全身性自身免疫性疾病，是一种常见的结缔组织病，累及肾脏则称为狼疮性肾炎（lupus nephritis，LN）。儿童肾脏累及率明显高于成人，为40%-90%[1]。儿童SLE起病大多以肾脏症状为首发表现，临床表现以肾炎肾病为主，病理类型以Ⅳ型最多[2]。 肾穿刺活检组织常规特殊染色有3种染色：过碘酸雪夫反应（PAS）、高碘酸-乌洛托品银（PASM）、Masson染色。其中M asson三色染色主要是用来观察肾小球嗜复红蛋白沉积物（免疫复合物）及肾脏内胶原纤维增生等，对狼疮性肾炎（LN）的诊断具有重要作用。 我们意识到传统的masson三色染色法[3]操作较繁琐，时间长，对肾小球内免疫复合物显色颜色浅淡，基底膜、系膜、胶原纤维及胞质、红细胞颜色对比不鲜艳。许多学者也对Masson三色染色法进行了各种各样的探索和改良。但由于各实验室条件及操作者的水平存在差异，因此改善的方法得不到广泛的认可和推广。现收集目前常用的几种Masson染色法及改良后的效果进行比较，对各实验条件及可行性进行分析比较，摸索找出一种效果显著又适合推广的方法，希望对儿童肾活检狼疮性肾炎诊断提供更好的诊断素材。 1 材料与方法 1.1 材料收集南京市儿童医院临床住院患儿肾活检组织，经10% 福尔马林固定，常规脱水、透明、包埋，选取20例已明确诊断为Ⅲ型和Ⅳ型狼疮性肾炎的患儿肾穿刺标本病理诊断剩下的石蜡块，每块连续切2 μm 切片3张，分别采用三种不同方法进行Masson三色染色。 1.2 试剂：方法一：（1）重铬酸钾液：重铬酸钾 2.5g、蒸馏水95ml、冰乙酸5ml。（2）天青石蓝液：天青石蓝1g、硫酸铁铵10g、纯甘油28ml、蒸馏水100ml。（3）mayer氏苏木素染液配方：结晶苏木素4g，蒸馏水1000ml，碘化钾0.3g，胺明矾或钾明矾50g，枸橼酸1g，水合氯醛75g，加热是明矾溶解，再加入苏木素，溶解后再加入枸橼酸、碘化钾及水合氯醛，摇荡使之全部溶解，呈紫红色，用前过滤。（4）丽春红液：丽春红1g、蒸馏水99ml、冰乙酸1ml。（5）酸性品
肾活检组织标本的制作
第三章 第10节 肾活检组织标本的制作 前言 肾活检病理是诊断肾脏疾病的重要手段，许多疾病的命名主要源于肾活检组织学改变，如局灶节段性肾小球硬化和膜性肾病。肾活检病理诊断的正确性与肾组织标本制作质量关系密切，质量不过关（如切片不够薄，染色不清晰）将直接造成诊断错误，因此，应重视肾活检标本处理（取材、固定、包埋、切片到染色）的各个环节，以保证病理诊断的正确性。 肾脏病理包括尸检和活检标本，对于肾脏疾病而言，主要是活检标本，本章主要介绍肾活检标本的处理。 目前常规肾活检标本来源有两类：一类为切割式活检，一类为穿刺抽吸式活检，前者所取组织较多，但对肾脏损伤较大，不便在临床推广，临床常采用穿刺抽吸式活检。 一、肾组织取材 肾活检穿刺时病理技术员必须到场，以便对肾组织标本进行正确的处理，在技术员不能到场的情况下，必须按以下要求对标本处理者进行培训：①处理穿刺所获组织应轻柔，避免牵拉或用力钳夹组织；②分取组织时应在蜡板上进行，用锋利的刀片快速切割，避免用力挤压组织；③尽量用含固定液（光镜或电镜）和生理盐水的专用镊子把分割好的组织块移入固定瓶内；用镊子时避免钳夹组织过度而造成组织受挤压； ④要求穿刺者尽量取两条组织。穿刺所获第一条含皮质组织送光镜检查，第二条组织在肉眼观察下进行分割，尽量切取皮质区1mm组织送电镜检查，余下组织送免疫荧光检查。如果穿刺仅获一条组织，所取组织有三种情况（图3-10-1）：整条均为皮质，皮髓组织和皮-髓-皮质组织，髓质区血供丰富，颜色略红，皮质区组织略白，分布的红色小点是肾小球，根据穿刺获取不同组织的情况，如图3-10-1所示进行分取。也有人建议纵切后，一半送光镜检查，一半分割后分送免疫荧光和电镜检查，但存在组织太细，不易观察的缺点，临床较少使用。⑤分送免疫荧光检查的组织用无菌的TRIS或PBS溶液浸湿的沙布轻轻包裹，置于培养皿中，避免直接置于冰块上，以免局部组织因冷冻收缩，造成结构破坏[1,2]。 肾活检穿刺组织的分取 图3-10-1 肾活检穿刺组织的分取 LM：光镜；IF：免疫荧光；EM：电镜 二、光镜标本的处理 （一）固定 光镜标本的固定液有多种。目前最常用的固定液为10%的中性福尔马林。中性福尔马林固定液的配方：甲醛（40%）100 ml、蒸馏水900 ml、磷酸二氢钠4 g、磷酸氢二钠6.5 g，固定时间至少6~12 h。 （二）前期处理 1. 脱水脱水的目的是去除固定和水洗后组织 中的水分，便于后续的透明和浸蜡，常用的脱水剂是乙醇或丙酮，后者脱水能力比乙醇强，但对组织收缩较大，致使组织变脆，多用于快速脱水。为了彻底脱水，一般常规采用不同浓度梯度的乙醇进行脱水：①70%乙醇10~20 min，⨯2次；②80%乙醇10~20 min，⨯2次；③90%乙醇10~20 min，⨯2次；④95%乙醇10~20 min，⨯2次；⑤无水乙醇10~20 min，⨯2次。 2. 透明透明的目的是便于石蜡包埋，因为组织 脱水后，所用的脱水剂大多数不能和石蜡相混合，必须通过透明剂的作用才能浸蜡，所用的透明剂必须既能和脱水剂相混合，又能和石蜡相混合，起到桥梁作用，不但能提出脱水剂，又能代替脱水剂利于石蜡的浸入。当组织全部为透明剂占有时，光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，故称为透明。透明剂都是石蜡溶剂，绝大多数都不能与水混合，最常用的透明剂包括二甲苯、苯、甲苯、氯仿、香柏油、丁香油等。