油镜的使用及细菌、真菌基本形态观察实验报告

实验二油镜的使用及细菌、真菌基本形态观察

[实验目的]

1、了解光学显微镜的简单构造原理、使用方法和保护要点。熟练掌握油镜的使用方法。

2、认识细菌的基本形态和构造。通过细菌标本片观察，进一步熟悉使用光学显微镜。

3、掌握真菌的分离培养方法，认识真菌的基本形态结构。

[实验原理]

一、微生物个体微小，肉眼难以看见，必须借助显微镜才能观察到其个体形态及内部结构。因此，显微镜是微生物学研究必不可少的工具，正是显微镜的发明使人类揭开了微生物世界的奥秘。随着科学技术的进步及微生物研究的需要，显微镜从使用可见光源的普通光学显微镜发展到使用紫外线光源的荧光显微镜，进一步发展到用电子流代替照明光源的电子显微镜，使放大率和分辨率大大提高，为微生物学的发展提供了保障。此外，根据不同的用途还有暗视野、相差显微镜等。普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成。机械系统包括有：镜座、载物台、镜臂、镜筒、物镜转换器、调节器；光学部分包括有目镜、物镜、聚光器、反光镜。有些较好的显微镜自身带有照明装置。在检查细菌标本，多用油镜进行。油镜是一种放大倍数较高(95～l00倍)的物镜，一般都刻有放大倍数(如95×、100×等)和特别的标记，以便于认识。国产镜多用油字表示，国外产品则常用“Oil”(Oil Immersion)或“HI”(Homogeneous Immersion)作记号。油镜上也常漆有黑环或红环，而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长，镜片最小，这也是识别的另一个标志。

二、油镜的原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光量亦较少，其视野较高倍镜暗。当油镜头与载玻片之间为空气所隔时，因为空气的折光指数与玻璃不同，故有一部分光线被折射而不能进入镜头之内，使视野更暗；若在镜头与载玻片之间放上与玻璃的折光指数相近的油类，如柏木油等，则光线不会因折射而损失太大，可使视野充分照明，能清楚地进行观察和检查。

三、油镜的使用方法：进行油镜检查时，应先对好光线，但不可直对阳光，采取最强亮度(升高集光器，开大光圈，调好反光镜等)。然后在标本上加柏木油一滴(切勿过多)，将标本放置或移置载物台的正中。转换油镜头浸入油滴中，使其几乎与标本面接触为度(但不应接触)。用左眼由目镜注视镜内，同时慢慢转动粗螺旋，提起镜筒(此时严禁用粗螺旋降下油镜筒)，至能模糊看到物像时，再转动微螺旋，直至物像清晰为止。另一种是固定镜筒调节载物台的显微镜，调焦时，镜片先与油镜头接触，再慢慢转动粗螺旋，将载物台往下调，能模糊看到物像时，再转动细螺旋，直至物像清晰为止，随即进行检查观察。油镜用过后，应立即用擦镜纸将镜头擦拭干净。如油渍已干，则须用擦镜纸蘸少许二甲苯溶解并拭去油渍，然后再用干擦镜纸拭净镜头。

四、细菌是单细胞生物，尽管个体微小，但有其完整的形态特征和结构。细菌的基本形态可分为球状、杆状和螺旋状三种。除细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等基本结构外，尚有鞭毛、菌毛、芽孢、荚膜、质粒等附属结构。

五、真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。在自然界分布广、数量大、种类多。主要营腐生和寄生生活，且真菌体内含有丰

富的酶系统，能分解各类复杂的有机物质，所以在有机物存在的阴暗、潮湿的地方均能看见真菌的踪迹。并且在物质循环中也起着重要的作用。大部分真菌对人类有益，但有些真菌可引起人和畜禽疾病，有些霉菌还产生毒素，直接或间接地危害人类和动物健康。[实验材料]

1、标本：大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌（培养物片及组织片）、变形杆菌、魏氏梭菌、巴氏杆菌、酵母菌的染色标本。

2、仪器及其他物品：普通光学显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。

3、菌体待检霉菌。

4、培养基沙堡培养基。

5、仪器及其他物品显微镜、恒温箱、载玻片、盖玻片、染色液、湿盒、霉菌（青霉、曲霉、毛霉）标本片等。

[实验内容]

1、用低、高倍镜观察酵母菌

(1)将低倍物镜（10×）转到工作位置。上升聚光器,将光圈打开,转动反光镜采集光源,使视野明亮。

(2)将标本片放于载物台上并上升载物台到最高。

(3)转动粗调节螺旋，当目镜中看到模糊物像时再转动细螺旋直至物像清晰为止。观察酵母菌的形态特点。

(4)高倍镜观察：用手按住物镜转换器慢慢旋转将物镜转换成高倍镜（40×），转动细调将物像调至清晰，进行观察。

2、用油镜观察细菌标本片

(1)用10×镜对光，使视野明亮

(2)在标本片观察部位滴加少量香柏油后放于载物台上，转换物镜为油镜。缓慢上升载物台使油镜浸入香柏油中，并从侧面观察，使镜头上升至既非常接近玻片又不与玻片相撞的合适位置，避免压碎镜头晶片。

(3)缓慢下降载物台，同时从目镜中观察，直至出现模糊的物像时再用细螺旋调至物像清晰为止。观察细菌基本形态及特殊构造。

3、显微镜用后的处理

(1)处理玻片加2-3滴二甲苯于标本片上，使香柏油溶解，再用擦镜纸擦净保存供以后使用。

(2)清洁显微镜先用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用蘸有二甲苯的擦镜纸擦掉残留的香柏油，最后用干净的擦镜纸抹去残留的二甲苯；清洁目镜和其他物镜，可直接用干净的擦镜纸擦净；用柔软的绸布擦净机械部分的尘土。最后将物镜转成“八”字式，下降载物台，聚光器降至最低位置，反光镜镜面转成垂直状。

4、待检霉菌在固体培养基上的生长表现

霉菌在固体培养基上的生长表现将不同霉菌在固体培养基上培养2～5d，可见霉菌菌落有绒毛状、絮状、绳索状等。菌落大小依种而异，有的能扩展到整个固体培养基，有的有一定局限性(直径1～2cm或更小)，很多霉菌的孢子和菌丝能产生色素，致使菌落表

面、背面甚至培养基呈现不同颜色，如黄色、绿色、黑色、橙色等。

5、霉菌标本片的观察

6、霉菌小培养(载玻片法)的制作

挑取待检霉菌孢子到盛有灭菌水的小试管中，振荡试管制成孢子悬液备用.取一张干净的载玻片,用无菌接种环勾取1-2环孢子悬液于载玻片中央,用灭菌滴管吸取灭菌后融化的沙堡弱氏培养基少许，滴于孢子悬液上,并迅速将盖玻片加在培养基上，轻轻压一下，压成直径1cm左右的圆形。将制好的片子放入到湿盒中，放在适宜温度的培养箱（28℃）3d后取出，室温再培养2-3d。

7、待检霉菌的形态观察及鉴定

将培养好的小培养片取出，镜下观察其基本形态。

[实验结果预测]

实际操作后，了解了光学显微镜的简单构造原理、使用方法和保护要点。可以熟练掌握油镜的使用方法。并分别观察到细菌、真菌的基本形态如下：

细菌基本形态真菌基本形态

[实验分析]

油镜观察过程当中，由于油镜放大倍数很高，镜片又是最小的，因此光线本身就比较暗，所以要加入和玻璃折光系数接近的香柏油，避免光线折射而产生的光线损失。

细菌是单细胞生物，尽管个体微小，但有其完整的形态特征和结构。细菌的基本形态可分为球状、杆状和螺旋状三种。除细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等基本结构外，尚有鞭毛、菌毛、芽孢、荚膜、质粒等附属结构。真菌是一大类不含叶绿素，无根、茎、叶，由单细胞或多细胞组成的真核细胞型微生物。

[实验改进意见]

（1）在标本片上滴加香柏油时要注意将香柏油滴加在经过染色后的标本颜色较深区域。

（2）实验前先明确哪个是油镜头，转换成油镜头后，首先从侧面观察（而非从目镜观察），同时上升载物台至加有香柏油的载玻片进入镜头当中，即油滴和油镜头恰好接触即可。

[思考题]

1、当物镜由低倍转到油镜时，随着放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？

当物镜由低倍转到油镜，随着放大倍数的增加，显微镜目镜立刻的视野亮度是减弱的，焦距很短的时候才用油镜。可以增加辅助光源的亮度来调整视野亮度。

2、使用油镜应注意哪些问题？

（1）在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。

（2）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。

（3）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。

（4）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍一油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸擦一遍，再用沾少许二甲苯的擦镜纸将镜头上和标本上的香柏油擦去，最后再用干擦镜纸擦干净。油镜是实验室常用的显微镜之一，清晰度略高于普通光学显微镜，用于观察衣原体，细菌，细胞器等较细微的结构。

3、要使视野明亮除调节光源外，还可采取哪些措施？

加大聚光器光圈，调节光源亮度。同样设置下低倍物镜比高倍物镜视野亮。

4、描述常见霉菌的形态特征和培养特性。

形态特征：霉菌的菌体由分枝或不分枝的菌丝构成。菌丝是真菌营养体的基本单位。菌丝是中空管状结构，直径一般3~10m，有分枝，有隔膜或无隔膜。根据菌丝有无隔膜，可以将真菌分成低等真菌（鞭毛菌亚门和接合菌亚门）和高等真菌（子囊菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门）两大类。许多菌丝分枝连接，相互交织在一起所构成的形态称菌丝体。

液体培养特性：如果是静止培养，菌丝往往在液体表面生长，液面上形成菌膜。如果是震荡培养，菌丝可相互缠绕在一起形成菌丝球，亦可形成絮片状，与震荡速度有关。